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Introduction: Neuropathic pain is an important condition whose treatment includes gabapentin (GABAP). The mechanism of analgesic action of GABAP is not fully elucidated. Objective: The present study investigated the contribution of peripheral (plantar) and central (spinal) cannabinoid receptors on the effect of GABAP on the partial sciatic nerve injury (PSNI) model. Methods: Swiss male mice weighing 25-35 g were housed under controlled conditions with free access to food and water and acclimated to the laboratory before testing. PSNI was induced in the anesthetized mice, followed by incision of the right hind limb for nerve exposure, followed by its ligation (1 / 3-1 / 2 of the medial portion) with 8-0 silk thread. In the control group, the nerve was exposed and not connected. The contribution of CB1 and CB2 receptors on the effect of GABAP was evaluated on day 14th after PSNI. Mice received AM281 or AM630 by i.t. (2 μg / 5 μl) or i.pl. (10 g / 20 L) and 15 min after GABAP (30 mg / kg, oral), being evaluated 1 hour after in relation to mechanical hyperalgesia. Data were evaluated by 1 or 2-way ANOVA (Tukey or Bonferroni, respectively, p

Made available in DSpace on 2018-11-05T14:43:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 5140_10314.pdf: 2440318 bytes, checksum: 731ba7ec8ddbe780dcf85fc3f6c856f6 (MD5) Previous issue date: 2016-10-31

O núcleo dorsomedial do hipotálamo (HDM) é um importante componente integrativo de respostas comportamentais, endócrinas e autonômicas. A estimulação do HDM por aminoácidos excitatórios como o glutamato desencadeia respostas defensivas relacionadas à ansiedade. Em contrapartida, o sistema endocanabinoide pode inibir tais reações. Considerando essas evidências, o presente trabalho testou a hipótese de que o sistema endocanabinoide atua com um mecanismo antiaversivo nesta estrutura. Para tal, respostas aversivas foram induzidas em ratos pela administração intra-HDM de NMDA, um agonista dos receptores NMDA glutamatérgicos. Os animais foram submetidos a cirurgia estereotáxica para implantação de uma cânula nessa estrutura. Após 7 dias, foram colocados em uma caixa de observação e o comportamento foi filmado por 5 minutos. A injeção intra-HDM de NMDA produziu reações de fuga caracterizadas porcruzamentos e de pulos. Tal efeito foi prevenido pela injeção local tanto de um agonista CB1 (ACEA), quanto CB2 (JWH133). Esse efeito foi mimetizado por um inibidor da hidrólise do endocanabinoide 2-AG (URB602), mas não do endocanabinoide anandamida (URB597). O URB602 preveniu também o aumento de pressão arterial induzido por NMDA. Nenhum tratamento alterou os níveis de corticosterona. Os efeitos comportamentais do URB602 foram revertidos tanto por antagonistas tanto do receptor CB1 (AM251), quanto do CB2 (AM630). O pré-tratamento com AM251, seguido de uma dose de NMDA que por si só não promove fuga, não foi capaz de desencadear reações aversivas. A administração de NMDA induziu aumento de expressão de c-Fosnas seguintes regiões: Hipotálamo dorsomedial (HDM), hipotálamo ventromedial (HVM), e colunas dorsomedial (SCPdm) e dorsolateral (SCPdl) da substância cinzenta periaqueductal. Já a expressão da enzima envolvida na síntese do 2-AG (DAGL) foi maior apenas no HDM e HVM. Observou-se um aumento na co-localização de células c-Fos/DAGL positivas no HDM, HVM e SCPdl. Conclui-se que o endocanabinoide 2-AG modula as respostas defensivas induzidas pela ativação de receptores NMDA no HDM, provavelmente por ativação de receptores CB1 e CB2. The dorsomedial hypothalamus (DMH) is an important integrative nucleus for behavioral, endocrine and autonomic responses. The stimulation of DMH by excitatory amino acids, such as glutamate, promotes defensive responses related to anxiety. On the other hand, the endocannabinoid system seems to inhibit these reactions. This work tested the hypothesis that the endocannabinoid system inhibit the aversive reactions in this structure. To test this hypothesis, aversive responses were induced by intra-DMH NMDA injection, an agonist of NMDA glutamatergic receptors. Animals were submitted to stereotaxic surgery for implantation of a cannula into DMH. After 7 days, theywere placed in an observation box and recorded for 5 min. The injection of NMDA intra-DMH elicited escape reactions, consisting of crossings and jumps. This effect was prevented by a CB1 agonist (ACEA) and a CB2 agonist (JWH133). The endocannabinoid 2-AG-hydrolysis inhibitor (URB602), but not anandamide-hydrolysis inhibitor (URB597) prevented defensive behavior. URB602 reverted cardiovascular response augmentation. None of the treatments changed corticosterone levels. The behavioral effects of URB602 were prevented by both CB1 (AM251) and CB2 (AM630) receptors antagonists. The pretreatment with AM251 followed by a dose of NMDA that does not produce effect by itself failed to elicit aversive reactions. NMDA administration increased c-Fos expression in the Dorsomedial Hypothalamus (DMH), ventromedial hypothalamus (VMH), and dorsomedial (dmPAG) and dorsolateral(dlPAG) columns do the periaqueductal gray. The expression of the enzyme that synthesizes 2-AG (DAGL) was increased on DMH and VMH. The colocalization of c-Fos/DAGL positive cells increased on DMH, VMH anddlPAG. It is concluded that the endocannabinoid 2-AG modulates defensive responses induced by activation of the DMH, probably through CB1 and CB2 cannabinoid receptors.

SummaryFlores MP, Castro APCR, Nascimento JS – Topical Analgesics.Background and objectivesPain treatment involves the usage of common and opioid analgesics, nonsteroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs) and adjuvant analgesics. Traditionally, these drugs are administered systemically or into the neuraxis. However, when analgesics are applied through these pathways, they are associated with significant side effects, which can hinder its use. Topical administration of analgesics is an alternative. The objective of this paper is to discuss topical analgesics, the mechanisms of action and clinical efficacy.ContentThis is a review paper addressing the usage of the topical local anesthetics: capsaicin, clonidine, tricyclic antidepressants, ketamine, opioids and cannabinoids, discussing mechanism of action and effectiveness.ConclusionsTopical analgesics are promising as a strategy for pain treatment, as they are associated with lower incidence of side effects. The benefit of local anesthetics, NSAID's and capsaicin is well established. However, the efficacy of clonidine, tricyclic antidepressants, ketamine, opioids and cannabinoids is still questionable. Studies have shown that the multimodal approach is an alternative, but studies are needed to confirm this hypothesis.

Mestrado em Biologia Molecular e Celular Cannabinoids (CBs) can be classified as: phytocannabinoids, the constituents of the Cannabis sativa plant; synthetic cannabinoids lab-synthesized and the endocannabinoids that are endogenous lipid mediators. Cannabinoid compounds activate cannabinoid receptors – CB1 and CB2. The most prevalent psychoactive phytocannabinoid is Δ9tetrahydrocannabinol (THC), but more than 60 different CBs were already identified in the plant. The best characterized endocannabinoids (eCBs) are anandamide (AEA) and 2arachidonoylglycerol (2-AG), that are involved in several physiological processes including synaptic plasticity, pain modulation, energy homeostasis and reproduction. On the other hand, some synthetic cannabinoids that were initially designed for medical research, are now used as drugs of abuse. During the period of placental development, highly dynamic processes of remodeling occur, involving proliferation, apoptosis, differentiation and invasion of trophoblasts. It is known that a tight control of eCBs levels is required for normal pregnancy progression and that eCBs are involved in trophoblast cells turnover. Therefore, by sharing activation of the same receptors, exposure to exocannabinoids either by recreational or medicinal use may lead to alterations in the eCBs levels and in the endocannabinoid system homeostasis In this work, it was studied the impact of CBs in BeWo trophoblastic cells and in primary cultures of human cytotrophoblasts. Cells were treated for 24 hours with different concentrations of THC, the synthetic cannabinoid WIN‐55,212 (WIN) and 2-AG. Treatment with THC did not affect BeWo cells viability while WIN and 2-AG caused a dose-dependent viability loss. Morphological studies together with biochemical markers indicate that 2-AG is able to induce apoptosis in cytotrophoblasts. On the other hand, morphological studies after acridine orange staining suggest that autophagy may take part in WIN-induced loss of cell viability. All cannabinoids caused a decrease in mitochondrial membrane potential (Δψm) but only 2-AG led to ROS/RNS generation, though no changes in glutathione levels were observed. In addition, ER-stress may be involved in the 2-AG induced-oxidative stress, as preliminary results point to an increase in CCAAT-enhancer-binding protein homologous protein (CHOP) expression. Besides the decrease in cell viability, alterations in cell cycle progression were observed. WIN treatment induced a cell cycle arrest in G0/G1 phase, whereas 2-AG induced a cell cycle arrest in G2/M phase. Here it is reinforced the relevance of cannabinoid signaling in fundamental processes of cell proliferation and cell death in trophoblast cells. Since cannabis-based drugs are the most consumed illicit drugs worldwide and some of the most consumed recreational drugs by pregnant women, this study may contribute to the understanding of the impact of such substances in human reproduction. Os canabinóides (CBs) podem ser classificados como: fitocanabinóides, os constituintes da planta Cannabis sativa L.; canabinóides sintéticos, sintetizados em laboratório e os endocanabinóides, que são mediadores lipídicos endógenos. Os compostos canabinóides ativam recetores canabinóides – CB1 e CB2. O composto psicoativo mais prevalente é o Δ9-tetrahidrocanabinol (THC), mas mais de 60 diferentes CBs foram já identificados a partir da planta. Os endocanabinóides (eCBs) melhor caracterizados são a anandamida (AEA) e o 2-araquidonoilglicerol (2-AG), que estão envolvidos em vários processos biológicos, incluindo plasticidade sináptica, modulação da dor, homeostasia energética e reprodução. Por outro lado, alguns canabinóides sintéticos, inicialmente projetados para investigação médica, são agora usados como drogas de abuso. Durante o período de desenvolvimento placentário ocorrem processos de remodelação que envolvem proliferação, apoptose, diferenciação e invasão dos trofoblastos. Sabe-se que um controlo rigoroso dos níveis de eCBs é necessário para uma progressão normal da gravidez e que os eCBs estão envolvidos no turnover celular dos trofoblastos. Assim sendo, ao partilharem a ativação dos mesmos recetores, a exposição a exocanabinóides, seja pelo uso recreativo ou medicinal, pode levar a alterações nos níveis de eCBs e na homeostasia do sistema endocanabinóide (ECS). Neste trabalho foi estudado o impacto dos CBs em células trofoblásticas BeWo e em culturas primárias de citotrofoblastos humanos. As células foram tratadas durante 24 horas com diferentes concentrações de THC, do canabinóide sintético WIN-55,212 (WIN) e de 2AG. O tratamento com THC não afetou a viabilidade das células BeWo, enquanto que o WIN e o 2-AG causaram uma perda de viabilidade dependente da dose. Estudos morfológicos, juntamente com marcadores bioquímicos, indicam que o 2-AG é capaz de induzir apoptose em citotrofoblastos. Por outro lado, estudos morfológicos realizados com laranja de acridina sugerem que a autofagia pode estar envolvida na perda de viabilidade induzida pelo WIN. Todos os canabinóides induziram perda de potencial de membrana mitocondrial (Δψm), mas apenas o 2-AG levou a um aumento na formação de ROS/RNS, sem terem sido observadas diferenças nos níveis de glutationa. O stress reticular pode estar envolvido no stress oxidativo induzido pelo 2-AG, visto que resultados preliminares apontam para um aumento na expressão de CCAAT-enhancer-binding protein homologous protein (CHOP). Para além da diminuição da viabilidade celular, os resultados sugerem alterações na progressão do ciclo celular. O tratamento com WIN induziu retenção do ciclo celular em fase G0/G1, enquanto que o 2-AG levou a uma retenção em fase G2/M. Neste trabalho é reforçada a importância da sinalização canabinóide em processos importantes de proliferação e morte celular de células trofoblásticas. Visto que as drogas canabinóides são as mais consumidas a nível mundial, e umas das drogas recreativas mais consumidas pelas mulheres grávidas, este estudo pode contribuir para a compreensão do impacto destas substâncias na reprodução humana.

Mestrado em Biologia Molecular e Celular Submitted by Alexandra Bastos (alexandrabastos@ua.pt) on 2016-07-20T16:22:38Z No. of bitstreams: 1 tese.pdf: 4559981 bytes, checksum: c07fb5ad5fde50b8e835262cd8f3ff68 (MD5) Made available in DSpace on 2016-07-20T16:22:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese.pdf: 4559981 bytes, checksum: c07fb5ad5fde50b8e835262cd8f3ff68 (MD5) Previous issue date: 2015-12-04

Resumo Objetivo: Este estudo objetivou identificar aspectos da epidemiologia dos traumatismos cranioencefálicos (TCEs) moderados e graves dos pacientes admitidos no Hospital de Clínicas da Universidade Federal de Uberlândia, bem como sua associação com consumo de cocaína e canabinoides. Métodos: Para isso, foram coletados dados prospectivos sobre 139 vítimas assistidas nesse hospital, todas com idade igual ou superior a 18 anos. Os acidentes de transporte responderam pelo maior número de vítimas, seguidos daquelas pessoas que sofreram quedas acidentais. Resultados: Do total de pacientes avaliados, 84 (com casos de TCE moderado, grave e mesmo leve) tiveram amostra de urina coletada para detecção de maconha e cocaína. Os exames foram positivos para maconha em 8,2% dos pacientes e em 13,9% para cocaína. Conclusão: Não foram vistas diferenças significativas no tocante ao sexo e à idade, bem como à atividade realizada no momento do trauma. A maioria dos atendimentos desses pacientes, no entanto, se deu no período noturno. A alta frequência de consumo de substâncias ilícitas associada aos TCEs evidencia a importância de se incluírem esses dados quando da realização de estudos acerca desse tipo de traumatismo, bem como aponta para um problema de saúde pública.

Avanços recentes no conhecimento sobre a função do receptor de canabinoide renovaram o interesse na associação entre cannabis e psicose. Linhas convergentes de evidências sugerem que os canabinoides podem produzir uma ampla gama de sintomas transitórios positivos, negativos e cognitivos assemelhados aos de esquizofrenia. Os canabinoides também produzem alguns déficits psicofisiológicos sabidamente presentes na esquizofrenia. É igualmente claro que em indivíduos com um transtorno psicótico estabelecido, os canabinoides podem exacerbar sintomas, desencadear recaídas e ter consequências negativas no curso da doença. Evidências crescentes sugerem que a exposição precoce e pesada à cannabis pode aumentar o risco de se desenvolver um transtorno psicótico como a esquizofrenia. A relação entre exposição à cannabis e esquizofrenia preenche alguns, mas não todos os critérios usuais de causalidade. Porém, a maioria das pessoas que utilizam cannabis não desenvolve esquizofrenia e muitas pessoas diagnosticadas com esquizofrenia nunca utilizaram cannabis. Portanto, é provável que a exposição à cannabis seja uma "causa componente" que interage com outros fatores para "causar" esquizofrenia ou outro transtorno psicótico, mas não é nem necessária nem suficiente para fazê-lo sozinha. No entanto, na ausência de causas conhecidas da esquizofrenia e com as implicações de políticas de saúde pública, se tal vínculo for estabelecido, as causas componentes, tais como a exposição a canabinoide, devem continuar sendo um foco de estudos futuros. Finalmente, são necessárias mais pesquisas para identificar os fatores subjacentes à vulnerabilidade à psicose relacionada a canabinoide e para elucidar os mecanismos biológicos subjacentes a esse risco.

OBJETIVO: Este artigo revisa o sistema endocanabinoide e as respectivas estratégias de intervenções farmacológicas. MÉTODO: Realizou-se uma revisão da literatura sobre o sistema endocanabinoide e a sua farmacologia, considerando-se artigos originais ou de revisão escritos em inglês. DISCUSSÃO: Canabinoides são um grupo de compostos presentes na Cannabis Sativa (maconha), a exemplo do Δ9-tetraidrocanabinol e seus análogos sintéticos. Estudos sobre o seu perfil farmacológico levaram à descoberta do sistema endocanabinoide do cérebro de mamíferos. Este sistema é composto por pelo menos dois receptores acoplados a uma proteína G, CB1 e CB2, pelos seus ligantes endógenos (endocanabinoides; a exemplo da anandamida e do 2-araquidonoil glicerol) e pelas enzimas responsáveis por sintetizá-los e metabolizá-los. Os endocanabinoides representam uma classe de mensageiros neurais que são sintetizados sob demanda e liberados de neurônios pós-sinápticos para restringir a liberação de neurotransmissores clássicos de terminais pré-sinápticos. Esta sinalização retrógrada modula uma diversidade de funções cerebrais, incluindo ansiedade, medo e humor, em que a ativação de receptores CB1 pode exercer efeitos dos tipos ansiolítico e antidepressivo em estudos préclínicos. CONCLUSÃO: Experimentos com modelos animais sugerem que drogas que facilitam a ação dos endocanabinoides podem representar uma nova estratégia para o tratamento de transtornos de ansiedade e depressão. OBJECTIVE: The present review provides a brief introduction into the endocannabinoid system and discusses main strategies of pharmacological interventions. METHOD: We have reviewed the literature relating to the endocannabinoid system and its pharmacology; both original and review articles written in English were considered. DISCUSSION: Cannabinoids are a group of compounds present in Cannabis Sativa (hemp), such as Δ9-tetrahydrocannabinol, and their synthetic analogues. Research on their pharmacological profile led to the discovery of the endocannabinoid system in the mammalian brain. This system comprises at least two G-protein coupled receptors, CB1 and CB2, their endogenous ligands (endocannabinoids; e.g. the fatty acid derivatives anandamide and 2-arachydonoyl glycerol), and the enzymes responsible for endocannabinoid synthesis and catabolism. Endocannabinoids represent a class of neuromessengers, which are synthesized on demand and released from post-synaptic neurons to restrain the release of classical neurotransmitters from pre-synaptic terminals.This retrograde signalling modulates a variety of brain functions, including anxiety, fear and mood, whereby activation of CB1 receptors was shown to exert anxiolytic-and antidepressant-like effects in preclinical studies. CONCLUSION: Animal experiments suggest that drugs promoting endocannabinoid action may represent a novel strategy for the treatment of depression and anxiety disorders.

Cannabidiol (CBD) has been investigated in a wide spectrum of clinical approaches due to its psychopharmacological properties. CBD has low affinity for cannabinoid neuroreceptors and agonistic properties to 5-HT receptors. An interaction between cannabinoid and purinergic receptor systems has been proposed. The purpose of this study is to evaluate CBD properties on memory behavioral and locomotor parameters and the effects of pre-treatment of adenosine receptor blockers on CBD impacts on memory using adult zebrafish. CBD (0.1, 0.5, 5, and 10mg/kg) was tested in the avoidance inhibitory paradigm and anxiety task. We analyzed the effect of a long-term caffeine pre-treatment (~20mg/L - four months). Also, acute block of adenosine receptors was performed in co-administration with CBD exposure in the memory assessment. CBD promoted an inverted U-shaped dose-response curve in the anxiety task; in the memory assessment, CBD in the dose of 5mg/Kg promoted the strongest effects without interfering with social and aggressive behavior. Caffeine treatment was able to prevent CBD (5mg/kg) effects on memory when CBD was given after the training session. CBD effects on memory were partially prevented by co-treatment with a specific A2A adenosine receptor antagonist when given prior to or after the training session, while CBD effects after the training session were fully prevented by adenosine A1 receptor antagonist. These results indicated that zebrafish have responses to CBD anxiolytic properties that are comparable to other animal models, and high doses changed memory retention in a way dependent on adenosine.

Projeto de Pós-Graduação/Dissertação apresentado à Universidade Fernando Pessoa como parte dos requisitos para obtenção do grau de Mestre em Ciências Farmacêuticas A utilização ilícita de fármacos no desporto não é um fenómeno recente e é uma prática bem conhecida e difundida. São várias as substâncias que alteram a condição física do desportista e que podem melhorar o seu rendimento. A utilização de fármacos com finalidades não terapêuticas, além de ser eticamente reprovável, não é isenta de efeitos adversos na saúde dos atletas. A World Anti-Doping Agency (WADA) foi criada devido ao crescente número de casos de doping e de acontecimentos trágicos associados ao seu uso no desporto. A WADA é a entidade responsável pelo controlo anti-doping e pela publicação periódica de uma lista de substâncias e métodos proibidos. Esta lista tem vindo a aumentar e, neste momento, apresenta as seguintes classes de fármacos proibidas durante e fora das competições em competição: agentes anabólicos, hormonas e fatores de crescimento, agonistas, hormonas e modeladores metabólicos, diuréticos e agentes mascarantes. Estão ainda identificadas como classes de fármacos proibidas em competição os estimulantes, os narcóticos, os canabinóides e os glucocorticóides. Os -bloqueadores e o álcool estão identificados na lista, mas apenas são proibidas em desportos em particular. Segundo a literatura atual, os fármacos mais utilizados no doping são os agentes anabolizantes e os estimulantes. Este padrão de utilização do doping também tem sido observado no passado mais recente. Os dados estatísticos emitidos pela WADA desde 2003 mostram que os agentes anabolizantes são os dopantes mais frequentemente detetados e utilizados no desporto. Os atletas recorrem maioritariamente ao uso destas substâncias pelo facto destas proporcionarem um aumento do rendimento tanto nos treinos como em competição, conferindo-lhes uma evolução mais rápida e vantajosa perante os adversários. Também por estas razões, os desportos que apresentam maior taxa de utilização de agentes dopantes são o ciclismo, o atletismo e o futebol. Com este trabalho pretende-se analisar os dados mais recentes da utilização ilícita de fármacos no desporto e discutir os mecanismos de ação dos principais fármacos que podem conferir vantagem aos atletas e ainda as reações adversas decorrentes da sua utilização. The illicit use of drugs in sport is not a recent phenomenon and it is a well-known and widespread practice. There are several substances that alter the physical condition of the sportsman and can improve their performance. The use of drugs with no therapeutic purposes as well as being ethically reprehensible, isn't absent of adverse effects on the athletes' Health. The World Anti-Doping Agency (WADA) was created due to the increasing number of cases of doping and tragic events associated with its use in sport. The WADA is the entity responsible for anti-doping control and the periodic publication of an updated list of banned substances. This list has been increasing and at the moment, has the following classes of drugs: anabolic agents, hormones and growth factors, agonist’s -2, hormones and metabolic modulators, diuretics and masking agents. Still identified as classes of drugs prohibited in-competition are stimulants, narcotics, cannabinoids and glucocorticoids. Other classes such as -blockers and alcohol are identified in the list, but are only prohibited in particular sports. According to current literature, the pharmaceuticals which are more widely used in doping are anabolic and stimulant agents. This pattern of usage in doping has also been noticeable in the more recent past. The statistical data issued by WADA since 2003 shows that anabolic agents are the most frequently detected and used doping substances in sports. Athletes resort to the use of such substances mainly due to the fact that they provide a boost in performance, both in training and competition, providing them with a faster and more advantageous evolution than their opponents’. It is also because of the aforementioned reasons that the sports displaying a higher rate of usage of doping agents are cycling, athletics and football. With this project, one intends to analyse the most recent data concerning the illicit use of pharmaceuticals in sports and discuss the acting mechanisms of the main drugs which may provide athletes with an advantage, as well as the adverse effects arising from their use.

Trabalho final de mestrado integrado em Medicina, apresentado à Faculdade de Medicina da Universidade de Coimbra. A esquizofrenia é uma patologia complexa, que cursa com alterações cognitivas e comportamentais. Hoje, acredita-se que a etiologia seja multifatorial, resultando da interação de fatores genéticos e ambientais, nomeadamente o consumo de cannabis. Vários estudos revelaram que o consumo de cannabis, especialmente em faixas etárias jovens, se associou a um aumento do risco de desenvolver esquizofrenia, anos mais tarde. Os achados são consistentes com um efeito dose-resposta, sendo o risco maior em indivíduos que consumiram cannabis mais vezes. Além disso, a idade média do surgimento da esquizofrenia entre consumidores de cannabis é mais precoce do que em não consumidores. A explicação mais aceite para a associação entre a esquizofrenia e o consumo de cannabis é a hipótese da “interação” ou “vulnerabilidade”, segundo a qual, o consumo de cannabis pode desencadear esquizofrenia, mas apenas em indivíduos já predispostos a tornarem-se esquizofrénicos, nomeadamente aqueles que apresentam vulnerabilidade genética. Vários fatores parecem moderar esta associação, incluindo: a história familiar, a história de abuso na infância e a idade de início do consumo de cannabis. Os jovens são particularmente vulneráveis aos efeitos do consumo da cannabis, que parece afetar a maturação normal do cérebro e o desenvolvimento neuropsicomotor. Os esquizofrénicos consumidores de cannabis apresentam um pior prognóstico do que os não consumidores, pelo que parece ser razoável encorajar a abstinência desta droga, particularmente em grupos de risco, como os jovens e os indivíduos com predisposição genética. Schizophrenia is a complex pathology that leads to cognitive and behavioral changes. Today, it is believed that the etiology is multifactorial, resulting from the interaction between genetic and environmental factors, including use of cannabis. Several studies have shown that cannabis use, particularly among young people, was associated with an increased risk of developing schizophrenia years later. Findings were consistent with a dose-response effect, with greater risk in people who used cannabis more often. In addition, the average age of onset of schizophrenia among cannabis users was earlier than non-cannabis users. The most accepted explanation for the association between schizophrenia and cannabis use is the “interaction” or “vulnerability” hypothesis, according to which cannabis use can trigger schizophrenia, but only in individuals already predisposed to become schizophrenic, particularly those with genetic vulnerability. Several factors appear to moderate this association including: family history, history of childhood abuse and age at onset of cannabis use. Young people are particularly vulnerable to cannabis effects, which seems to affect the normal brain maturation and neurological development. Schizophrenic cannabis users have a worse prognosis than non-user, so it seems reasonable to encourage cannabis abstinence, particularly in risk groups including young people and those with genetic predispositions.

A maconha é a droga ilícita mais utilizada. Apesar disto, apenas um pequeno número de estudos investigaram as conseqüências neurotóxicas de longo prazo do uso de cannabis. As técnicas de neuroimagem se constituem em poderosos instrumentos para investigar alterações neuroanatômicas e neurofuncionais e suas correlações clínicas e neuropsicológicas. Uma revisão computadorizada da literatura foi conduzida nos indexadores MEDLINE e PsycLIT entre 1966 e novembro de 2004 com os termos 'cannabis', 'marijuana', 'neuroimaging', 'magnetic resonance', 'computed tomography', 'positron emission tomography', 'single photon emission computed tomography", 'SPET', 'MRI' e 'CT'. Estudos de neuroimagem estrutural apresentam resultados conflitantes, com a maioria dos estudos não relatando atrofia cerebral ou alterações volumétricas regionais. Contudo, há uma pequena evidência de que usuários de longo prazo que iniciaram um uso regular no início da adolescência apresentam atrofia cerebral assim como redução na substância cinzenta. Estudos de neuroimagem funcional relatam aumento na atividade neural em regiões que podem estar relacionadas com intoxicação por cannabis e alteração do humor (lobos frontais mesial e orbital) e redução na atividade de regiões relacionadas com funções cognitivas prejudicadas durante a intoxicação aguda. A questão crucial se efeitos neurotóxicos residuais ocorrem após o uso prolongado e regular de maconha permanece obscura, não existindo até então estudo endereçando esta questão diretamente. Estudos de neuroimagem com melhores desenhos, combinados com avaliação cognitiva, podem ser elucidativos neste aspecto. Cannabis is the most widely used illicit drug. Despite this, only a small number of studies have investigated the long-term neurotoxic consequences of cannabis use. Structural and functional neuroimaging techniques are powerful research tools to investigate possible cannabis-induced pathophysiological changes. A computer literature review was conducted in the MEDLINE and PsycLIT databases between 1966 and November of 2004 with the search terms 'cannabis', 'marijuana', 'neuroimaging', 'magnetic resonance', 'computed tomography', 'positron emission tomography', 'single photon emission computed tomography", 'SPET', 'MRI' and 'CT'. Structural neuroimaging studies have yielded conflicting results. Most studies report no evidence of cerebral atrophy or regional changes in tissue volumes, and one study suggested that long-term users who started regular use on early adolescence have cerebral atrophy as well as reduction in gray matter. However, several methodological shortcomings limit the interpretation of these results.Functional neuroimaging studies have reported increases in neural activity in regions that may be related with cannabis intoxication or mood-change effects (orbital and mesial frontal lobes, insula, and anterior cingulate) and decreases in activity of regions related with cognitive functions impaired during acute intoxication.The important question whether residual neurotoxic effects occur after prolonged and regular use of cannabis remains unclear, with no study addressing this question directly. Better designed neuroimaging studies, combined with cognitive evaluation, may be elucidative on this issue.

Obesity and its related pathologies are well- known health hazards. Although obesity and overweight have multifactorial causes, overeating is common in both of these conditions. According to animal models, endocannabinoids and their receptors in the brain play a key role in the genesis and development of obesity. It has been proposed that the cannabinoid receptors CB1 (RCB1) expressed in the nucleus accumbens shell (NAC) are involved in the increase of the hedonic properties of food. To test this hypothesis, this study aimed to assess the effects of activating the NACs RCB1 on standard food intake during the light phase of the light-dark cycle. The effects of activating the RCB1 with CP 55,940 and WIN 55-212-2 (0.125, 0.25 and 0.5 nmol) in the NACS on feeding behavior and the behavioral satiety sequence of rats were assessed. It was found that both agonists increased food intake and delayed expression of satiety during the light phase. These results suggest that cannabinoid agonists encourage food intake when motivation is low and palatability is normal. La obesidad y sus patologías relacionadas son riesgos de salud muy conocidos. Aunque la obesidad y el sobrepeso tienen causas multifactoriales, la sobreingesta de alimento es frecuente en estas condiciones. De acuerdo con modelos animales, los endocanabinoides y sus receptores en el cerebro juegan un papel clave en la génesis y desarrollo de la obesidad. Se ha propuesto que los receptores a canabinoides CB1 (RCB1) expresados en el núcleo accumbens shell (NAcS) están involucrados en el incremento de las propiedades hedónicas del alimento. Para probar esta hipótesis, este estudio tuvo como objetivo evaluar los efectos de la activación de los RCB1 en el NAcS sobre la ingesta de alimento estándar durante la fase de luz del ciclo luz-oscuridad. Se evaluaron los efectos de la activación de los RCB1 con WIN 55-212-2 y CP 55,940 (0.125, 0.25, y 0.5 nmol) en el NAcS sobre la conducta alimentaria y la secuencia de saciedad conductual en ratas. Se encontró que ambos agonistas aumentaron la ingesta de alimento y demoraron la expresión de la saciedad durante la fase de luz. Lo anterior sugiere que los agonistas canabinoides estimulan el consumo de alimento cuando la motivación por el mismo es baja y la palatabilidad es normal. A obesidade e suas patologias relacionadas são riscos de saúde muito conhecidos. Ainda que a obesidade e o sobrepeso possuam causas multifatoriais, a sobre ingestão de alimento é frequente nestas condições. De acordo com modelos animais, os endocanabinóides e seus receptores no cérebro jogam um papel chave na gênese e desenvolvimento da obesidade. Foi proposto que os receptores a canabinóides CB1 (RCB1) expressos no núcleo accumbens shell (NAcS) estão envolvidos no aumento das propriedades hedônicas do alimento. Para testar esta hipótese, este estudo teve como objetivo avaliar os efeitos da ativação dos RCB1 nos NAcS sobre a ingestão de alimento padrão durante a fase de luz do ciclo luz-escuridão. Avaliaram-se os efeitos da ativação dos RCB1 com WIN 55-212-2 e CP 55,940 (0.125, 0.25, e 0.5 nmol) no NAcS sobre a conduta alimentar e a sequência de saciedade condutual em ratos. Encontrou-se que ambos agonistas aumentaram a ingestão de alimento e demoraram a expressão da saciedade durante a fase de luz. Isso sugere que os agonistas canabinóides estimulam o consumo de alimento quando a motivação pelo mesmo é baixa e a palatabilidade é normal.

El tratamiento de los crecimientos neoplásicos malignos en caninos, incluye diferentes alternativas, entre las cuales se encuentra la quimioterapia. Sin embargo, los fármacos tradicionalmente utilizados presentan altos niveles de toxicidad, debido a su baja selectividad sobre células cancerosas. Los principales efectos adversos de estos compuestos son trastornos gastrointestinales, depresión de la medula ósea, alteraciones de la conducta, alopecia y un potencial carcinogénico, entre otros. En la actualidad, diferentes grupos de investigación en el mundo han estado dedicados al desarrollo de nuevas moléculas derivadas de canabinoides y/o endocanabinoides, basados en la reconocida actividad antineoplásica del tetrahidrocanabinol y de la anandamida. Los ensayos hasta ahora reportados permiten concluir que dichos compuestos ofrecen una mayor selectividad de acción sobre las células enfermas, lo cual se traduce en un menor abanico de riesgos tóxicos. Por otra parte, se ha demostrado que los tratamientos farmacológicos en cualquier patología deberían ceñirse a los ritmos biológicos con el fin de obtener una mejor respuesta terapéutica y un menor grado de efectos colaterales. El objetivo de este artículo es dar a conocer los beneficios de un futuro tratamiento antineoplásico inspirado en el comportamiento de los canabinoides y endocanabinoides en la evolución de las enfermedades neoplásicas. There are several alternatives for treating malign neoplastic growths in dogs, including chemotherapy; however, traditionally used drugs have high levels of toxicity due to their low selectivity regarding cancer cells. These compounds' main adverse effects involve gastrointestinal disorders, bone marrow suppression (myelotoxicity), behavioral alterations, alopecia and carcinogenic potential. Research groups around the world are currently working on developing new drugs from cannabinoids and/or endocannabinoids-derived molecules, based on tetrahydrocannabinol and anandamide's known anti-neoplastic activity. Trials reported to date have led to concluding that such compounds offer greater selectivity regarding action on unhealthy cells, thereby representing a lower range of toxic risks. It has been shown that pharmacological treatment regarding any disease should adhere to biological rhythms to obtain a better therapeutic response and incur fewer collateral effects. This article was thus aimed at ascertaining the benefits of future antineoplastic treatment inspired by the behavior of cannabinoids and endocannabinoids in the evolution of neoplastic diseases. O tratamento de tumores malignos em cães, inclui diversas alternativas, entre as quais está a quimioterapia. Embora, as drogas convencionalmente usadas têm níveis elevados de toxicidade, devido à sua baixa selectividade sobre células cancerosas. Os principais efeitos adversos desses compostos são distúrbios gastrointestinais, depressão da medula óssea, distúrbios comportamentais, alopecia e um potencial carcinogénico, entre outras. Atualmente, diferentes grupos de pesquisa no mundo têm se dedicado ao desenvolvimento de novas moléculas derivadas de canabinóides e/ou endocanabinóides, baseados na conhecida atividade antineoplásica do tetrahidrocanabinol e da anandamida. Os experimentos relatados até agora levam à conclusão de que estes compostos oferecem uma maior seletividade de ação nas células doentes, o que resulta num menor intervalo de riscos tóxicos. Além disso, foi demonstrado que os tratamentos farmacológicos em qualquer doença deveríam estar em conformidade com os ritmos biológicos, a fim de obter uma melhor resposta terapêutica e um menor grau de efeitos colaterais. O objetivo deste artigo é apresentar os benefícios de um futuro tratamento antineoplásico inspirado no comportamento dos canabinóides e endocannabinoides na evolução das doenças neoplásicas.

O presente estudo teve como objetivo investigar o envolvimento do sistema endocanabinóide no efeito antihiperalgésico da inalação do óleo essencial Cedrus atlantica (OECa) em um modelo pré-clínico de dor pós-operatória. Inicialmente foram caracterizados os constituintes do OECa pela análise fitoquímica por meio de cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massa. Os experimentos comportamentais foram conduzidos após a aprovação pelo Comissão de Ética no Uso de Animais da UNISUL - CEUA/UNISUL (13.012.4.08.IV). Nestes experimentos foram utilizados camundongos Swiss machos pesando de 25 a 35 g. Para indução da dor pós-operatória os animais foram submetidos a uma cirurgia de incisão plantar (CIP) na pata traseira direita. Vinte e quatro horas após, os animais inalaram o OECa por diferentes períodos de tempos (1, 5, 30 e 60 minutos). A hiperalgesia mecânica foi avaliada utilizando o monofilamento de von Frey (0,4g) até o fim do efeito antihiperalgésico do OECa. Também foi verificado o efeito da inalação diária, durante 6 dias e o efeito per se do OECa. Para avaliar o envolvimento do sistema endocanabinóide foram utilizadas 2 abordagem diferentes: uma por meio de antagonistas para os receptores CB1 e CB2, administrados em diferentes sítios (intraperitoneal [i.p.], intraplantar [i.pl.] e intratecal [i.t.]). E outra por meio da avaliação do efeito sinérgico de inibidores da degradação de endocanabinóides. Nos resultados da análise fitoquímica identificou-se vinte e um elementos constituintes. Dentre os compostos encontrados, os hidrocarbonetos sesquiterpenos ?- himachaleno (16,6%), ?-himachaleno (10,4%) e ?-himachaleno (46,4%) foram os compostos majoritários. Nos testes comportamentais notou-se que a inalação do OECa por 30 e 60 minutos induziu efeito antihiperalgésico por até 2 horas. Em contraste, a inalação do OECa por apenas 1 minuto não induziu mudanças no limiar sensorial dos animais. A inalação diária do OECa diminuiu significativamente a hiperalgesia mecânica, até o quinto dia. Na avaliação do efeito per se, não houve alterações do limiar sensorial. Em relação a análise do envolvimento do sistema endocanabinóide verificou-se que as administrações sistêmica e central (i.t.) dos antagonistas AM281 e AM630, para os receptores canabinóides CB1 e CB2, respectivamente, preveniram o efeito antihiperalgésico do OECa; a administração de uma dose sub-efetiva dos inibidores da degradação de endocanabinóides (Amido hidrolase de ácidos graxos [FAAH] que degrada anandamida e da lipase mono acil glicerol [MAGL] que degrada o 2-araquidonil glicerol) com a subsequente inalação do OECa por 1 minuto, prolongou o efeito antihiperalgésico do OECa por até 7 horas. Assim, pôde-se concluir que o mecanismo pelo qual o OECa exerce seu efeito pode ser por modular a atividade destas enzimas e assim influenciar na sinalização endocanabinoidérgica. Estes resultados demonstram pela primeira vez na literatura, o envolvimento do sistema endocanabinóide no efeito antihiperalgésico do OECa, em um modelo pré-clínico de dor pós-operatória. The present study investigated the involvement of the endocannabinoid system in the antihyperalgesic effect induced by the inhalation of the essential oil Cedrus atlantica (OECa) in a preclinical model of postoperative pain. Initially, the constituents of the OECa were phytochemically characterized by Gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS). The behavioral experiments were conducted after approval by the Ethics Committee on Animal Use - CEUA/UNISUL (13.012.4.08.IV). In these experiments Swiss male mice weighing 25 to 35 g were used. For induction of post-operative pain the animals underwent a surgical plantar incision (CIP) in the right hind paw. Twenty-four hours later, the animals inhaled OECa for different periods of time (1, 5, 30 and 60 minutes). Mechanical hyperalgesia was assessed using a von Frey monofilament (0.4g) until the antihyperalgesic effect of OECa was over. The effect of daily inhalation (for 6 days) and the effect of OECa per se were also observed. To assess the involvement of the endocannabinoid system 2 different approaches were used: (1) by administering antagonists for the CB1 and CB2 receptors in different sites (intraperitoneal [i.p.], intraplantar [i.pl.] and intrathecal [i.t.]) and (2) by assessing the synergistic effect of the inhibitors of the degradation of endocannabinoids. The results of the phytochemical analysis identified twenty-one constituents, among which the hydrocarbons ?- himachalene (16,6%), ?-himachalene (10,4%) e ?-himachalene (46,4%) were the main components. The behavioral tests demonstrated that the inhalation of OECa for 30 and 60 minutes induced an antihyperalgesic effect that lasted for up to 2 hours. In contrast, inhalation of OECa for only 1 minute did not induce changes in the sensory threshold of the animals. Daily inhalation of OECa significantly reduced mechanical hyperalgesia until the fifth day. The administration of OECa per se did not induce any changes to the animal's sensory threshold. Regarding the involvement of the endocannabinoid system, the results demonstrated that systemic and central (i.t.) administration of the antagonists AM281 and AM630 for the cannabinoid receptors CB1 and CB2, respectively, prevented the antihyperalgesic effect of OECa; the administration of a sub-effective dose of the inhibitors of the degradation of endocannabinoids (Fatty acid amide hydrolase [FAAH] which degrades anandamide and Monoacylglycerol lipase [MAGL] which degrades 2-arachidonoyl glycerol) with subsequent inhalation of OECa for 1 minute, prolonged the antihyperalgesic effect of OECa for up to 7 hours. Thus, it was concluded that the mechanism by which OECa exerts its effect might be by modulating the activity of these enzymes and thus influencing endocannabinoid signaling. These results demonstrate for the first time the involvement of the endocannabinoid system in the antihyperalgesic effect of OECa in a preclinical model of postoperative pain.

Orientadora: Profa. Dra. Káthia Maria Honório Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Ciência & Tecnologia - Química, 2014. Polimeros de impressao molecular (MIPs) sao materiais sinteticos que possuem sitios de reconhecimento molecular especificos para determinado analito de interesse (molecula molde), e tem sido empregados para a pre-concentracao e extracao em amostras complexas, considerando a maior seletividade em relacao aos sorventes convencionais empregados na extracao em fase solida. A escolha dos reagentes utilizados na sintese de um MIP deve ser criteriosa, a fim de que sejam criados sitios de ligacoes especificos. Metodos computacionais de Quimica Teorica podem ser empregados para racionalizar o planejamento de MIPs, por intermedio do estudo de parametros fisico-quimicos das moleculas envolvidas e as interacoes que ocorrem no sistema de pre-polimerizacao. Com a utilizacao de metodos de quimica quantica, foi objetivo desse trabalho o estudo previo das interacoes entre as moleculas moldes e os possiveis reagentes empregados na sintese de MIPs, como forma de predicao das melhores interacoes que promovam um MIP de desempenho ideal. O estudo teorico foi direcionado para a molecula de ¿¢9-tetrahidrocanabinol (¿¢9-THC), substancia presente na planta Cannabis sativa e que e a substancia ilicita mais produzida e consumida mundialmente, e seu principal metabolito de excrecao urinario, o 11-nor-9-carboxi-¿¢9-THC (THC-COOH). A simulacao computacional foi realizada utilizando a Teoria do Funcional da Densidade (DFT), e a metodologia envolveu a comparacao das energias de interacao (¿¢E) dos adutos de pre-polimerizacao entre a molecula molde e os reagentes de sintese. Com os resultados das simulacoes, verificou-se que as melhores interacoes ocorrem quando o monomero utilizado tem caracteristica acida, como o acido acrilico e o acido metacrilico; e que o solvente mais adequado para a sintese sao os que apresentam baixa constante dieletrica, como o cloroformio e o tolueno, por interferirem menos na formacao do complexo de interacao entre a molecula molde e o monomero na etapa de pre-polimerizacao. Detalhes das interacoes existentes entre as moleculas do meio reacional tambem foram analisadas e forneceram informacoes sobre a possivel competicao entre as moleculas no acesso aos sitios de interacao das moleculas moldes, informacao crucial para obtencao de MIPs seletivos e de grande afinidade a molecula molde desejada. A partir das predicoes do estudo computacional, os MIPs de THC-COOH foram sintetizados com os monomeros indicados, juntamente com o polimero nao impresso (NIP), em alguns dos solventes simulados (agua, acetonitrila, metanol e agua), para avaliacao da interferencia do solvente na eficiencia do MIP obtido. Foi realizada a analise dos MIPs por espectroscopia vibracional na regiao do infravermelho, e avaliada as bandas de absorcao nas regioes dos grupos C=O e O-H, para analise da formacao de interacoes por ligacao de hidrogenio. Concluiu-se, portanto, que sem substituir os ensaios experimentais, a abordagem computacional pode ser utilizada como uma ferramenta preliminar e complementar a selecao experimental. Molecularly imprinted polymers (MIPs) are synthetic materials with specific sites of molecular recognition for a given analyte of interest (template molecule), and have been used for the extraction and pre-concentration in complex samples, considering the higher selectivity presented in relation to the sorbent employed in conventional solid phase extraction. The choice of the reagents used in the synthesis of a MIP must be chosen carefully, so that site-specific linkages are created. Computational methods in Theoretical Chemistry can be used to rationalize the planning of MIPs through the study of physico-chemical parameters of the molecules involved and the interactions that occur in the pre-polymerization system. Using quantum chemical methods, the aim of this study was a preliminary investigation of the interactions between the template molecules and the possible reagents used in the synthesis of MIPs, as a way to predict the best interactions that promote MIPs with optimal performance. The theoretical study was directed to the molecule of Ä9-tetrahydrocannabinol (Ä9-THC), present in the plant Cannabis sativa, and that is the illicit substance most widely produced and consumed globally, as well as its major metabolite urinary excretion, 11 -nor-9-carboxy-Ä9-THC (THC-COOH). The computational simulation was performed using the Density Functional Theory (DFT), and the methodology involved the comparison of the interaction energies (ÄE) of adducts in pre-polymerization between the template molecule and reagents for synthesis. From the results of the simulations, it was found that the best interactions occur when the monomer has acid characteristic, such as acrylic acid and methacrylic acid; and that the most suitable solvent for synthesis are those with low dielectric constant such as toluene and chloroform, by interfering less in the formation of complex interaction between the template molecule and monomer in the pre-polymerization step. Details of the existing interactions between the molecules of the reactional medium were analyzed and provided information about the possible competition between the molecules in the access to the interaction sites of the template molecules, which is a crucial information for obtaining selective MIPs and with high affinity to the template molecule desired. From the computational predictions obtainde in this study, the MIPs of THC-COOH was synthesized with the indicated monomers, and also a non-imprinted polymer (NIP), considering some of simulated solvents (water, acetonitrile, methanol and water) for evaluation of the interference of solvent in the efficiency of the MIP obtained. Analyses on the formed MIPs were performed by spectroscopy in the infrared region, and the absorption bands in the regions of the groups C=O and OH were evaluated with the aim of analysing the formation of hydrogen bond interactions. Therefore, it is possible to conclude that, without replacing the experimental trials, the computational approach can be used as a preliminary and complementary tool to experimental selection.

"Cannabis sativa se ha cultivado casi desde los inicios de la civilización y ha sido utilizada en la generación de una gran variedad de productos que van desde los textiles hasta los medicamentos. Se caracteriza por contener a una gran familia de compuestos denominados canabinoides, los cuales únicamente se sintetizan en este género y, recientemente, han desatado un inusitado interés debido al descubrimiento del sistema canabinoide endógeno. En México, su estatus de planta prohibida genera el desconocimiento de varios aspectos botánicos y químicos de las especies, así como de las variedades más cultivadas."

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Tem sido demonstrado que a administração sistêmica de canabinóides em ratas lactantes prejudica o comportamento materno. Portanto, objetivou-se determinar quais são, especificamente, as alterações provocadas neste cuidado materno mediante infusão crônica central de agonista do receptor CB1 (WIN 55,212-2) nas doses de 10 e 100nmol. As análises do comportamento materno foram realizadas em 4 sessões diárias (3 durante a fase clara e 1 durante a fase escura) de 72 minutos cada, sendo registradas de 3 em 3 minutos totalizando 25 observações por sessão (portanto, 100 observações diárias). O resultado das análises, durante a infusão da droga, indicou diminuição do tempo de lambida e consequente aumento no tempo que as ratas passam alimentando-se. Mesmo após o período de infusão da droga (7 dias), o comportamento materno total permaneceu diminuído. Como interferências sofridas durante o período neonatal que provoquem variações no cuidado materno podem persistir e influenciar o fenótipo dos filhotes, foram verificadas possíveis alterações comportamentais em respostas de ansiedade e medo na prole quando em idade adulta. Para tanto, os filhotes machos e fêmeas (quando completaram 8 semanas de vida), foram submetidos aos testes de campo aberto, labirinto em cruz elevado e medo condicionado ao contexto. Os resultados encontrados mostram que os filhotes machos apresentam menor latência para exibição do primeiro freezing no teste de medo. Por outro lado, as fêmeas apresentaram somente elevação da pressão arterial quando submetidas ao mesmo teste. Em conjunto, os resultados sugerem que canabinóides diminuem o cuidado materno em ratas lactantes, principalmente a lambida, e mesmo após a suspensão da infusão da droga, a redução do comportamento materno total permanece. Essa diminuição do cuidado materno refletiu principalmente nos filhotes machos, aumentando respostas relacionadas ao medo. It has been demonstrated that systemic administration of cannabinoids in lactating rodents affect maternal behavior. Therefore, the objective was to determine what changes, specifically, in maternal care caused by chronic infusion of central CB1 receptor agonist (WIN 55,212-2) at doses of 10 and 100nmol. Analyses of maternal behavior were performed in 4 sessions daily (3 during the light phase and 1 during the dark phase) of 72 minutes each, being recorded from 3 in 3 minutes totaling 25 observations per session (so 100 daily observations) . The result of the analysis, during infusion of the drug, indicated decreased time to licking and consequent increase in the time that the rat is feeding. Even after the period of drug infusion (7 days), the total maternal behavior remained decreased. How interference occurred during the neonatal period that cause variations in maternal care may persist and influence the phenotype of the offspring, were evaluated possible changes in anxiety and fear responses in the offspring when in adulthood. Therefore, males and females puppies (when completed 8 weeks of life), were tested in the open-field, elevated plus maze and fear conditioning to context. The results show that male offspring have lower latency to display the first freezing in this fear test. Moreover, the females showed only elevated blood pressure when subjected to the same test. Together, the results suggest that cannabinoids decrease maternal care in lactating rats, mainly licking, and even after cessation of drug infusion, the reduction of total maternal behavior remains. This decrease in maternal care reflected mainly in male offspring, increasing responses related to fear. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2011 O presente estudo revela que o tratamento oral com os triterpenos pentacíclicos betulina (30 mg/mg), ácido ursólico (50 mg/kg) e ácido oleanólico (30 mg/kg) reduziu a hiperalgesia mecânica induzida pela injeção intraplantar (i.pl.) de Adjuvante Completo de Freund (CFA) e pela ligação parcial do nervo ciático (LPNC). De maneira similar, o tratamento oral com a mistura de isômeros , -amirina (30 mg/kg) significativamente reduziu a hiperalgesia mecânica e térmica induzida pelo CFA ou pelo procedimento de LPNC. Demonstrou-se também que a propriedade analgésica da mistura de isômeros , -amirina em modelos experimentais de dor persistente é mediada pela ativação direta dos receptores canabinóides CB1 e CB2. O tratamento oral com , -amirina foi tão efetivo quanto o tratamento realizado com os agonistas seletivos ACEA (CB1, 10 mg/kg; intra-peritoneal [i.p.]) ou JWH-133 (CB2, 10 mg/kg; i.p.) em reduzir a hiperalgesia mecânica induzida pela injeção i.pl. de CFA. O pré-tratamento com o antagonista seletivo do receptor CB1, AM251 (1 mg/kg; i.p.) ou do receptor CB2, AM630 (3 mg/kg; i.p.), bem como o bloqueio da expressão desses receptores através do tratamento com oligonucleotídeo anti-sense (ODN-AS), foi igualmente eficaz em reverter o efeito anti-hiperalgésico demonstrado pela , -amirina. O ensaio de ligação específica demonstrou que , -amirina pode atuar como um agonista de receptores canabinóides. Em condições fisiológicas, o composto demonstrou uma grande afinidade pelo receptor CB1 (Ki = 0,133 nM) e uma menor afinidade pelo receptor CB2 (Ki = 1.989 nM). O tratamento com , -amirina, ACEA ou JWH-133, em doses efetivas contra a hiperalgesia, não causou qualquer distúrbio de comportamento quando avaliado no ensaio da tétrade. Além disso, , -amirina demonstrou uma potente ação antiinflamatória, ao inibir a produção/liberação das citocinas interleucina-1 (IL-1 ), fator de necrose tumoral- (TNF- ), interleucina-6 (IL-6) e da quimiocina derivada de queratinócitos (KC), bem como a atividade da mieloperoxidase, tanto na pata quanto na medula espinhal de camundongos. O tratamento com , -amirina também foi efetivo em prevenir a ativação do fator de necrose kappa B (NF-kB) e da proteína de ligação ao elemento responsivo AMP cíclico (CREB) e diminuir a expressão da ciclooxigenase-2 (COX-2) na pata de camundongos submetidos à injeção i.pl. de CFA ou na medula espinhal de camundongos submetidos ao procedimento de LPNC. Os resultados do presente trabalho demonstram, portanto que a , -amirina exibe propriedades anti-hiperalgésicas e antiinflamatórias quando avaliadas em dois modelos de dor persistente, via ativação dos receptores canabinóides e pela inibição da produção/liberação de citocinas pró-inflamatórias e inibição da expressão de NF-kB, CREB e COX-2.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2010 O transtorno de déficit de atenção e hiperatividade (TDAH) é uma das doenças psiquiátricas mais prevalentes na infância, afetando aproximadamente 5% das crianças em idade escolar. O TDAH está caracterizado pelos sintomas de desatenção, hiperatividade e impulsividade, os quais parecem resultar de desequilíbrios dopaminérgicos nos circuitos do estriado (EST) e córtex pré-frontal (CPF). Além disso, a associação entre o TDAH e o abuso de drogas na adolescência e idade adulta está bem estabelecida. Notavelmente, a maconha (Cannabis sativa) é a droga ilícita mais usada em indivíduos com TDAH. O metilfenidato (MFD) é um psicoestimulante utilizado como tratamento de escolha no TDAH, podendo causar conseqüências duradouras no desenvolvimento neurobiológico e aumentar o risco para o abuso de drogas. Os ratos espontaneamente hipertensos (SHR) são considerados como um modelo genético adequado para o estudo do TDAH, uma vez que esta linhagem apresenta características comportamentais e neuroquímicas observadas no transtorno. Visto que as interações entre dopamina e adenosina no sistema nervoso central (SNC) têm sido amplamente estudadas, o objetivo do presente estudo foi investigar se a cafeína (antagonista não seletivo dos receptores de adenosina) previne as modificações comportamentais e neuroquímicas exibidas pelos ratos SHR. Primeiro, ratos SHR e Wistar-Kyoto (WKY) foram tratados com cafeína durante a adolescência e testados na idade adulta nos testes attentional set-shifting, campo aberto e labirinto em "Y" antes de serem sacrificados para as análises neuroquímicas de captação de dopamina em terminais nervosos, níveis do transportador de dopamina (DAT) e de receptores D1, D2, A2A, e CB1 no EST e CPF. Além disso, outros alvos também foram investigados em ambas as áreas cerebrais: tirosina hidroxilase (TH), sinaptofisina, (SNAP-25), transportador vesicular de glutamato (VGlut), transportador vesicular de GABA (VGAT) e a co-localização dos receptores A2A com DAT, VGlut ou VGAT. Segundo, investigar o papel de antagonistas adenosinérgicos, incluindo a cafeína, sobre os efeitos impulsivos e motivacionais do agonista canabinóide WIN55,212-2 (WIN) em SHR. Os ratos SHR exibiram hiperatividade e baixo desempenho no attentional set-shifting e no labirinto em "Y" comparados aos WKY; o tratamento com cafeína melhorou os prejuízos de atenção e de memória em SHR. Os ratos SHR apresentaram níveis elevados de DAT e de captação de dopamina em terminais do EST e do CPF; o tratamento crônico com cafeína eliminou as diferenças entre linhagens para os níveis de DAT e para a captação de dopamina. Uma maior densidade dos receptores A2A, CB1, D1 e D2 foi observada em terminais do CPF de SHR. Além disso, a co-localização de A2A-DAT no EST de SHR estava significantemente menor do que em WKY. O WIN prejudicou a tolerância ao atraso da recompensa e produziu preferência condicionada ao lugar (PCL) em ratos SHR, esses efeitos foram prevenidos pelo pré-tratamento com cafeína. Os efeitos comportamentais do WIN mediados pelos receptores CB não estavam relacionados com pressão arterial. Esses achados indicam o potencial terapêutico da cafeína em tratar os prejuízos de atenção e de memória típicos do TDAH e na relação deste transtorno com abuso de drogas. Os resultados do presente estudo encorajam estudos adicionais para investigar o valor terapêutico da cafeína em pacientes com TDAH, tanto do ponto de vista cognitivo quanto da modulação do controle executivo sobre os comportamentos relacionados ao abuso de drogas.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciênicas Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2010 Lipoxinas e endocanabinóides são eicosanóides endógenos que são liberados sob demanda em resposta à estimulação neuronal ou injúria tecidual. A lipoxina A4 (LXA4) ativa receptores ALX e exerce importante papel na resolução de processos inflamatórios, mas informações a respeito dos seus efeitos no sistema nervoso central são escassas. As evidências disponíveis até o momento sugerem que a LXA4 pode influenciar a atividade cerebral de uma maneira similar aos canabinóides. Endocanabinóides como a anandamida (AEA) e o 2-araquidonilglicerol (2-AG) exercem diversos efeitos centrais por ativação dos receptores canabinóides CB1. Apesar dos endocanabinóides e lipoxinas compartilharem similaridades estruturais e funcionais, ainda não há descrição de sua relação farmacológica. Desta maneira, o objetivo deste trabalho foi investigar a participação do sistema endocanabinóide nos efeitos centrais da LXA4. Camundongos Swiss albinos foram injetados i.c.v. com LXA4 (0,01-1 pmol / 5l) ou controle e 5 min depois avaliados no teste da tétrade canabinóide (catalepsia, locomoção, analgesia e temperatura retal), considerado preditivo para atividade canabimimética. A investigação destas respostas prosseguiu com a injeção do antagonista canabinóide CB1 SR141716A (1 mg/kg, i.p.) ou do antagonista de receptores ALX BOC-2 (10 g/kg, i.p.) 50 min antes da injeção i.c.v. de LXA4 (1 pmol / 5 l). A participação dos receptores CB1 nos efeitos da LXA4 foi confirmada em camundongos knockout para receptores CB1. A interação farmacológica entre LXA4 e os endocanabinóides foi abordada pela co-injeção de doses sub-efetivas de AEA (10 pmol/ 2 l) ou 2-AG (1 pmol/ 2 l) e LXA4 (0,01 pmol/ 2 l). A ligação da LXA4 (1 nM # 10 M) nos receptores canabinóides CB1 receptores foi avaliada no ensaio competitivo de ligação contra o [3H]SR141716A em membranas de cérebro de camundongos, na presença e ausência de AEA (1 nM # 10 M). Possíveis efeitos da LXA4 na degradação dos endocanabinóides foram testados em ensaios in vitro das respectivas enzimas de degradação para a AEA e o 2-AG. Além do mais, nós testamos se a 15-epi-LXA4, uma lipoxina liberada por ação da aspirina, também exerce atividade canabimimética como a LXA4 de ocorrência natural. LXA4 (0,1 - 1 pmol) induziu catalepsia, hipolocomoção, analgesia e hipotermia nos camundongos. Estes efeitos foram antagonizados pelo antagonista dos receptores canabinóides CB1 SR141716A, mas não pelo antagonista dos receptores ALX BOC-2, além de não ocorreram em camundongos knockout para os receptores XV CB1. A LXA4 potencializou a catalepsia induzida pela AEA, mas não pelo 2-AG. A LXA4 praticamente não inibiu a ligação do [3H]SR141716A às membranas de cérebro de camundongos, mas aumentou a inibição causada pela AEA. Não houve efeito da LXA4 sobre a atividade das enzimas de degradação de endocanabinóides FAAH e MAGL (até 10 M). A aspirina potencializou os efeitos da AEA de uma maneira dependente da enzima 5-LOX e dos receptores CB1, provavelmente porque a 15-epi-LXA4 também influencia a afinidade da AEA pelos receptores CB1. Os presentes resultados sugerem que a LXA4 exerce efeitos centrais via receptores CB1 interagindo positivamente com o endocanabinóide AEA. Apesar da LXA4 não influenciar o metabolismo de endocanabinóides, este trabalho traz evidências de que a LXA4 aumenta a afinidade da AEA pelos receptores CB1 por um mecanismo de modulação alostérica positiva. Esta é certamente uma descoberta pioneira na farmacologia do sistema endocabinóide.

O presente estudo teve como objetivo avaliar o efeito antinociceptivo do cafestol e do caveol e investigar a participação de opióides e canabinóides endógenos, do óxido nítrico (NO), do segundo mensageiro GMPc e de canais para potássio na antinocicepção periférica induzida por esses diterpenos. Para tal, foi utilizado o teste de compressão da pata de ratos e a hiperalgesia foi induzida pela administração intraplantar de prostaglandina E2 (PGE2). A administração intraplantar de cafestol ou caveol induziu antinocicepção periférica dose-dependente frente ao efeito hiperalgésico da PGE2. Esse efeito, mesmo para a maior dose foi local, uma vez que não produziu efeito na pata contralateral, sendo essa a dose adotada nos experimentos subsequentes. O pré-tratamento com o antagonista de receptores opióides reverteu o efeito antinociceptivo do cafestol e do caveol e o inibidor de aminopeptidases aumentou o efeito antinociceptivo desses diterpenos na dose intermediária. Além disso, o ensaio imuno-histoquímico para -endorfina mostrou uma maior intensidade de imunorreatividade para -endorfina no epitélio da superfície plantar da pata de ratos tratados com cafestol e caveol. O efeito antinociceptivo periférico do cafestol e do caveol foi revertido pelo antagonista de receptores canabinóides CB1, mas não pelo antagonista de receptores canabinóides CB2. Adicionalmente, o inibidor da hidrolase de amida de ácido graxo e o inibidor da recaptação de anandamida, mas não o inibidor da monoacilglicerol lipase, intensificaram o efeito antinociceptivo periférico do cafestol e do caveol na dose intermediária. Além disso, o caveol aumentou os níveis de anandamida, mas não de 2-AG, no tecido da superfície plantar da pata de ratos. O efeito antinociceptivo periférico do cafestol e do caveol foi antagonizado pelo inibidor não seletivo da NO sintase (NOS) e pelo inibidor seletivo da NOS neuronal. Todavia, inibidores da NOS endotelial e induzível não modificaram o efeito antinociceptivo desses diterpenos. O inibidor da guanilato ciclase solúvel bloqueou a ação do cafestol e do caveol e o inibidor de fosfodiesterase de GMPc aumentou o efeito antinociceptivo da dose intermediária desses diterpenos. Adicionalmente, o cafestol e o caveol aumentaram os níveis de nitrito no tecido da superfície plantar da pata de ratos, indicando que esses diterpenos são capazes de induzir a liberação de NO. O bloqueador específico de canais para K+ sensíveis ao ATP antagonizou o efeito antinociceptivo do cafestol e do caveol. Entretanto, o bloqueador de canais para K+ dependentes de voltagem e os bloqueadores de canais para K+ ativados por Ca2+ de baixa e de alta condutância não se mostraram efetivos em reverter tal efeito. Os resultados do presente trabalho demonstram, pela primeira vez, o efeito antinociceptivo do cafestol e do caveol e, além disso, fornecem evidências de que esse efeito é resultante da liberação de opióides e canabinóides endógenos e da ativação da via NO/GMPc/canais para K+ sensíveis ao ATP.

A antinocicepção induzida pelo exercício físico tem sido amplamente investigada na literatura desde o final da década de 70. A maioria dos estudos tem demonstrado o sistema de opióides endógenos como os principais envolvidos nesse efeito. Desse modo, sabendo que existem outras vias endógenas responsáveis por modular tanto o impulso quanto a resposta nociceptiva, o presente estudo objetivou investigar a participação do sistema de canabin óides endógenos, da via NO/cGMP/K+ATP e do sistema noradrenérgico no efeito antinociceptivo induzido pelo exercício. Para o estudo foram utilizados ratos Wistar machos submetidos a um protocolo agudo de exercício aeróbico e a um protocolo agudo de exercício de força. Além desses animais foram também utilizados camundongos com duplo knockout para os receptores 2A e 2C e seus selvagens submetidos ao exercício aeróbico. Os protocolos de exercício foram realizados em uma esteira elétrica adaptada para ratos e camundongos e em um aparato de agachamento adaptado para ratos. Para a medida do limiar nociceptivo foram utilizados os testes de retirada da pata ao estímulo mecânico, retirada da cauda e retirada da face ao estímulo térmico. Desse modo, foi então verificado um significante aumento (p

O vírus Herpes simplex do tipo 1 (HSV-1) é conhecido por causar lesões cutâneas recorrentes, estabelecendo um estado de latência entre as manifestações, porém a mais grave consequência da infecção por HSV-1 é a encefalite (HSE), que pode acometer pacientes imunocomprometidos e neonatos. Uma vez que a infecção atinge o tecido cerebral, diversos mecanismos inflamatórios são elaborados em resposta ao vírus. O objetivo deste trabalho foi investigar o papel modulador do agonista canabinoide WIN55,212-2 no desenvolvimento de respostas inflamatórias e comportamentais em animais portadores de HSE. Foram utilizados camundongos machos da linhagem C57BL/6, com idade entre 8 e 12 semanas. Estes animais foram inoculados intracranialmente com 102 unidades formadoras de placa (PFU) de vírus HSV-1, enquanto que o grupo controle não infectado recebeu apenas PBS pela mesma via. Os camundongos também foram tratados com WIN55,212-2 (1 mg/kg) ou veículo pela via intraperitoneal (i.p), sendo que o tratamento teve início no dia anterior à infecção e continuou até a eutanásia. Na primeira etapa do projeto, foram utilizados camundongos infectados não tratados (HSV+VEH) e infectados tratados (HSV+WIN) para construir uma curva de letalidade e para avaliar por meio da bateria SHIRPA o aparecimento de sinais clínicos durante 10 dias após a infecção (10 dpi). Na segunda etapa foram obtidos dados acerca dos níveis cerebrais de citocinas e análise histopatológica do hipocampo, referentes ao 4º dpi. Para isso foram utilizados quatro grupos experimentais (camundongos não infectados não tratados - CTRL+VEH; camundongos não infectados tratados - CTRL+WIN; camundongos infectados não tratados - HSV+VEH, e camundongos infectados tratados - HSV+WIN). Na última etapa do trabalho, três grupos tiveram seu desempenho comparado (CTRL+VEH, HSV+VEH e HSV+WIN) em modelos animais preditivos de comportamento. Foram avaliadas alterações comportamentais específicas de memória e ansiedade nos modelos animais de Esquiva Inibitória, Labirinto em Cruz Elevado e Teste de Reconhecimento Social, realizados entre os dias 1 e 2 dpi. Os animais desta etapa foram eutanasiados no 3º dpi para a análise microscópica da morte neuronal no hipocampo. Surpreendentemente, os resultados indicam que sinais clínicos como perda acentuada de massa corporal, alterações nos reflexos, na função sensorial e rebaixamento no estado neuropsiquiátrico aparecem primeiro em camundongos HSV+WIN e só depois nos animais HSV+VEH. A sobrevivência dos camundongos HSV+WIN também foi menor (100% de mortalidade no 6º dpi) em comparação ao grupo HSV+VEH (100% de mortalidade em 10 dpi). A memória social de curto prazo também estava prejudicada em camundongos HSV+WIN enquanto que camundongos HSV+VEH apresentaram apenas prejuízos leves. Contudo, não houve diferenças entre grupos quanto à aquisição, consolidação e recuperação de memória aversiva no teste da Esquiva Inibitória. No LCE, camundongos HSV+VEH exibiram menor índice de comportamento do tipo ansioso que os animais HSV+WIN. Os níveis das citocinas IL-1 e TNF- se mostraram elevados em camundongos infectados, independente do tratamento. A morte neuronal no hipocampo e os dados da análise histopatológica também não apresentaram diferença significativa entre os grupos HSV+VEH e HSV+WIN. Dessa forma conclui-se que o tratamento com o agonista canabinoide WIN55,212-2 exerceu efeito deletério sobre o curso da HSE em camundongos da linhagem C57BL/6, acelerando a mortalidade e promovendo sintomas mais proeminentes da doença, embora não tenha influenciado diretamente os níveis de citocinas nem a perda celular e tecidual no cérebro dos animais. The Herpes simplex virus type 1 (HSV-1) is a pathogen known to cause recurrent skin lesions and to establish a latent state between manifestations. However, the most serious consequence of HSV-1 infection is herpes encephalitis (HSE), affecting mainly immunocompromised patients and neonates. Once the infection reaches the cerebral tissue, several inflammatory mechanisms are triggered to defend the host against the virus. The aim of this research was to investigate the modulatory role of the cannabinoid agonist WIN55,212-2 on the development of inflammatory and behavioral changes in mice with HSE. Male C57BL/6 mice, aged 8 to 12 weeks, were used in this study. These animals were intracranially inoculated with 102 plaque forming units (PFU) of HSV-1, while the uninfected control group received only PBS by the same route. Mice were also treated with WIN55,212-2 (1 mg/kg) or vehicle intraperitoneally (i.p), and the treatment started the day before infection and continued until euthanasia. In the first stage of the project, we used untreated infected mice (HSV+VEH) and treated infected mice (HSV + WIN) to build a lethality curve and to assess the onset of clinical signs, for 10 days post infection (10 dpi) using the SHIRPA battery. Thereafter, another data set was obtained on the 4 dpi, regarding the brain levels of cytokines and histopathology of the hippocampus. For this we used four experimental groups (uninfected untreated mice - CTRL + VEH; uninfected treated mice - CTRL + WIN; untreated infected mice - HSV + VEH, and infected treated mice - HSV + WIN). At last, we assessed specific behavioral changes in animal models of anxiety and memory, i.e, Inhibitory Avoidance paradigm, the Elevated Plus Maze and Social Recognition Test, all held between 1 and 2 dpi. Three groups had their results compared (CTRL+VEH, HSV+VEH and HSV+WIN). Animals from this experiment were euthanized on 3 dpi for microscopic analysis of neuronal loss in the hippocampus. Surprisingly, the results indicate that clinical signs (such as marked loss of body weight, changes in reflexes, sensory function and lowering in the neuropsychiatric status) first appeared in HSV+WIN mice and then in HSV+VEH animals. The survival rate of HSV+WIN mice was also lower (100% mortality on 6 dpi) compared to HSV+VEH group (100% mortality on 10 dpi). Short-term social memory was also impaired in HSV+WIN mice, whereas HSV+VEH mice showed only mild damage. However, no differences were found between groups concerning the acquisition, consolidation and retrieval of aversive memory in the Inhibitory Avoidance paradigm. In the EPM, HSV+VEH mice exhibited lower rates of anxiety-like behavior than HSV+WIN animals. The levels of IL-1 and TNF- were increased in infected mice, regardless of treatment. Data from histopathological analysis and quantification of neuronal death in the hippocampus also did not differ significantly between HSV+VEH and HSV+WIN groups. Therefore, it is concluded that treatment with the cannabinoid agonist WIN55,212-2 had a deleterious effect on the course of HSE in C57BL/6 mice, accelerating mortality and promoting more prominent symptoms of the disease, although it did not directly influenced the levels of cytokines or cellular/tissue loss in mice brain.

Trabalho final de mestrado integrado em Medicina área científica de Medicina Legal, apresentado à Faculdade de Medicina da Universidade de Coimbra Os canabinóides fazem parte do grupo de substâncias ilícitas mais usado em todo o mundo (Hall W. et al, 2007). Apesar do seu consumo ter estabilizado ou até mesmo diminuído ligeiramente nos últimos anos, este continua a ser, ainda, muito elevado (King L.A. et al, 2010). Os indivíduos toxicodependentes apresentam taxas de mortalidade bem mais elevadas do que os que não apresentam dependências, sendo que, nestes indivíduos, independentemente da substância em questão, a taxa de mortalidade por causas não naturais ultrapassa, em larga escala, as taxas de mortalidade por causa natural (Harris E.C. et al, 1997). Na grande maioria das mortes relacionadas com consumo de drogas é realizada uma autópsia médico-legal. No entanto, a simples detecção de uma droga no organismo do indivíduo não indica que essa substância tenha sido, efectivamente, a responsável por uma determinada morte. Isto é particularmente verdade e importante no que diz respeito aos canabinóides, onde raramente lhes é atribuída unicamente a causa directa da morte, sendo mesmo raros os casos onde tal é admitido (King L.A. et al, 2010). O objectivo deste trabalho consistiu em determinar a prevalência do consumo de canabinóides em indivíduos autopsiados no Serviço de Patologia Forense (SPF) da Delegação do Centro do Instituto Nacional de Medicina Legal, I.P., e a sua possível relação com a etiologia da morte. O material usado neste estudo incluiu todos os relatórios de autópsias realizados entre Janeiro de 2002 e Dezembro de 2009, pelo SPF da Delegação do Centro do Instituto Nacional de Medicina Legal, I.P. Os dados foram recolhidos pela informação contida nos processos de autópsia. O grupo caracterizou-se de acordo com o sexo, idade, data da morte, causa e etiologia da morte, pedidos de análise químico-toxicológica para determinação de canabinóides e outras substâncias Das 2885 autópsias realizadas pelo SPF da Delegação do Centro do INML, I.P., entre 2002 e 2009, 540 incluíram pedidos de exames complementares toxicológicos para a determinação de canabinóides. Assim, deste número, 17 (3.1%) casos foram positivos e todos eles em homens. Três causas de morte tiveram a mesma taxa de pedidos positivos para canabinóides (indeterminada/desconhecida, acidente de viação e suicídios), com 4 casos cada. As mortes acidentais e as mortes naturais foram responsáveis, cada uma delas, por 2 casos, e a etiologia com menor número de casos positivos foi a correspondente aos homicídios, com apenas 1 caso. Sabe-se que os canabinóides são, e tudo indicia que continuarão a ser, das substâncias ilícitas com maior prevalência de consumo em Portugal. Apesar de algumas limitações, este estudo permite-nos concluir que, ainda há poucos pedidos de análises de canabinóides e que se deviam fazer os esforços necessários para que se tornasse uma análise de rotina dado a sua prevalência na sociedade actual Cannabis is the most commonly used illicit drug worldwide (Hall W. et al, 2009). Despite stabilizing or even decreasing trend in cannabis use, its use still remains high (King L. et al, 2010). Drug addict individuals have substantially high rates of mortality than matched peers. It is important to note that, across all substances, excess mortality rates due to unnatural causes far exceed those from natural causes (Harris E.C. et al, 1997). In most drug-related deaths an medico-legal autopsy is performed. The presence of a drug on the toxicological report does not necessarily indicate that this substance was responsible for the death (direct cause). This is particularly evident for cannabis, where only in a few reports it is indicated as the direct cause of death (King L.A. et al, 2010). The main aim of this study was to determine the prevalence of cannabinoids and its possible relationship with the cause of death, among different medico-legal etiologies, from autopsies performed between 2002 and 2009 in the forensic pathology department of the Centre Branch of the National Institute of Legal Medicine of Portugal (INML, I.P.). As data material of the present study, 2885 autopsies (performed between 2002 and 2009) were checked out for cannabis requests (involving all the present medico-legal etiologies). The target population consisted on people whose samples were tested for cannabis and its metabolites, with the main objective of determining the prevalence and, the possible, relationship to death cause with cannabinoids use. The group was characterized according to age, gender, month and year of death, cause of death, aetiology of death, cannabis and other substances requests. From the 2885 autopsies performed by the Centre Branch of the National Institute of Legal Medicine (INML, I.P.), 540 (18.7%) were subject of cannabinoids analysis. Only 17 (3.1%) were positive for cannabinoids, all men, mainly in their fifth life decade, with 6 cases. Three death etiologies had the same cannabis positive requests (undetermined/unknown, road crashes and suicides), with 4 cases. Natural and accidental deaths were responsible, both, for 2 positive cases. Homicides presented the lowest number of positive results (just one case). Cannabis is and still will be the illicit drug with higher prevalence in Portugal. Despite having some limitations, this study concluded that there are few requests for cannabinoids analysis and efforts should be made to make cannabinoids requests as routine as an ethanol analysis, once the high prevalence of cannabinoids on our society.

El propósito del trabajo es estudiar el posible papel regulador del sistema canabinoide sobre la secreción de insulina y los cambios endocrino-metabólicos inducidos en ratas normales por una dieta rica en fructosa (DRF)., Facultad de Ciencias Médicas (FCM)

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior A method to obtain fourteen enones [EtO2CC(O)C(R2)=C(R1)OR, where R = H, Me; R1 = Pr, Ph, 4-MeOC6H4, 4-MeC6H4, 4-FC6H4, 4-ClC6H4, 4-BrC6H4, 4-NO2C6H4, Fur- 2-yl; R2 = H; R1,R2 = -(CH2)3-, -(CH2)4-, -(CH2)5-, -(CH2)6-, 3,4-dihydronaphthalen-2-yl] from acylation of acetals with ethyl oxalyl chloride is reported. The cyclocondensation reaction of these substrates with 2,4-dichlorophenyl hydrazine hydrochloride under ultrasound irradiation furnished a series of 1-(2,4-dichlorophenyl)-3-ethylcarboxylate-1Hpyrazoles in 71-92% yields. The pyrazole ester derivatives with R1,R2 = -(CH2)3-, - (CH2)4-, -(CH2)5-, and (CH2)6- suffered hidrolysis reaction in basic media supplied the carboxylic acids (94-97%) which were converted to the corresponding acid chlorides after reaction with thionyl chloride. The reaction of acid chlorides with primary amines (piperidin-1-ylamine, propylamine, 2-morpholino-4-yl-ethylamine, aniline, 4-metoxiphenylamina, 4-nitrophenylamina) led to respective 3-carboxyamide-1-(2,4-dichlorophenyl)-1H-pyrazoles in 85-97% yields. In addition to spectroscopic data the structure of the compounds was studied by X-ray diffraction experiments. Since, the 3-carboxyamide-1-(2,4-dichlorophenyl)-1H-pyrazoles are structurally similar to Rimonabant, a known antagonist of CB1 receptors, binding assays were performed to the cannabinoid receptor CB1. The most promising ligand and candidate to become prototype was the 1-(2,4-dichlorophenyl)-4,5,6,7,8,9-hexahydro-1Hcycloocta[c]pyrazole-3-carboxylicacid-piperidin-1-ylamide which shifted approximately 100% of [3H]Rimonabant in the tests. Este trabalho descreve um método para obter catorze enonas [EtO2CC(O)C(R2)=C(R1)OR, onde R = H, Me; R1 = Pr, Ph, 4-MeOC6H4, 4-MeC6H4, 4-FC6H4, 4-ClC6H4, 4-BrC6H4, 4-NO2C6H4, Fur-2-il; R2 = H; R1,R2 = -(CH2)3-, -(CH2)4-, - (CH2)5-, -(CH2)6-, 3,4-diidronaftalen-2-il] a partir da acilação de acetais com cloreto de etil oxalila. A reação de ciclocondensação desses substratos com cloridrato de 2,4- diclorofenil hidrazina utilizando irradiação de ultrassom forneceu uma série de 1-(2,4-diclorofenil)-3-etilcarboxilato-1H-pirazóis em 71-92% de rendimento. Os pirazóis sintetizados (R1,R2 = -(CH2)3-, -(CH2)4-, -(CH2)5-, -(CH2)6-) sofreram hidrólise em meio básico conduzindo aos respectivos ácidos carboxílicos (94-97%) os quais foram convertidos aos cloretos de ácido correspondentes após reação com cloreto de tionila. A reação desses cloretos de ácido com aminas primárias (piperidin-1-ilamina, propilamina, 2-morfolin-4-il-etilamina, anilina, 4-metoxifenilamina, 4-nitrofenilamina) conduziram aos respectivos 3-carboxiamida-1-(2,4-diclorofenil)-1H-pirazóis em 85-97% de rendimento. Adicionalmente aos dados espectroscópicos, a estrutura dos compostos foi estudada por experimentos de difração raios-X. Uma vez que os 3-carboxiamida-1- (2,4-diclorofenil)-1H-pirazóis são estruturalmente análogos ao Rimonabanto, um conhecido antagonista dos receptores CB1, foram realizados ensaios de ligação específica desses compostos para o receptor canabinóide CB1. O ligante mais promissor, candidato a protótipo, foi o 3-carboxiamida-1-(2,4-diclorofenil)-N-(piperidin-1-il)-4,5,6,7,8,9-hexaidro-1H-ciclocta[c]pirazol o qual deslocou, aproximadamente, 100% do [3H]Rimonabanto nos ensaio realizados.

La Esclerosis Múltiple (EM) es una enfermedad neurodesmielinizante de origen inmunológico que afecta a personas entre los 16 a los 35 años de edad y en la cual del 36% al 82% de los pacientes manifiestan dolor como síntoma común. La EM tiene una prevalencia mundial de 4,41 por cada 100.000 habitantes, afectando alrededor de 2,5 millones de personas en todo el mundo y cerca de 400.000 en Estados Unidos; en Colombia es de 4,3 por cada 100.000 habitantes, presentándose la mayoría de los casos en Risaralda seguido por Bogotá. Los síndromes de dolor neuropático de tipo central se presentan por lesión o disfunción del sistema nervioso central, causando discapacidad y deterioro de la calidad de vida de los pacientes. En este artículo se hace una revisión sobre la efectividad analgésica y efectos secundarios de los canabinoides en el tratamiento de dolor neuropático de tipo central en pacientes con EM. Se realizó una estrategia de búsqueda identificando ensayos clínicos aleatorizados sobre tratamientos de dolor neuropático de tipo central en EM con canabinoides y se seleccionaron seis estudios que compararon canabinoides vs placebo. Basados en los artículos revisados se puede concluir, que hay una disminución significativa del dolor neuropático de tipo central en pacientes que padecen EM con la administración de canabinoides y los efectos secundarios son leves, siendo los más frecuentes vértigo, xerostomía, somnolencia y alteraciones en el equilibrio los cuales no alteran la calidad de vida del paciente. Multiple Sclerosis (MS) is an immunological neuro-demyelinating disease that affects population between 16 to 35 years. Pain is the most common symptom with 36% to 82% of patients reporting pain. MS has a worldwide prevalence of 4.41 per 100,000 people, affecting about 2.5 million people around the world and 400,000 in the United States; in Colombia 4.3 per 100,000 inhabitants suffer from this disease where most of the cases have been reported in the region of Risaralda and the capital city Bogotá. Central neuropathic pain syndrome is due to injury and dysfunction of the central nervous system, causing disability and impairing quality of life of patients. In this article, a review of the analgesic effectiveness and side effects of cannabinoids in the treatment of central neuropathic pain in patients with MS is conducted. A search strategy was performed to identify randomized clinical trials on the treatment of central neuropathic pain in MS with cannabinoids; six selected studies comparing cannabinoids versus placebo were selected and after analyzing them, it was found a significant decrease in pain with dronabinol (cannabinoid) treatment and low side effects. The most common side effects were drowsiness, dry mouth, dizziness and impaired balance, which did not compromise the quality of life of patients. Based on the review of articles it is concluded that there is a significant reduction in central neuropathic pain in patients with MS in therapy with cannabinoids and that side effects of treatment are very low. Esclerose Múltipla (EM) éumadoençaneurodesmielinizante de origemimune que afetapessoas entre 16 e 35 anos, onde 36% a 82% dos pacientes relatamdor como umsintomacomum. MS temumaprevalência mundial de 4,41 por 100.000 pessoas, afetando cerca de 2,5 milhões de pessoas no mundo e cerca de 400.000 nos Estados Unidos; naColômbia é de 4,3 por 100.000 habitantes, apresentando-se a maioria dos casos em Risaralda seguida por Bogotá. Síndromes de dorneuropática do tipo central sãoapresentadas por umalesãooudisfunção do sistema nervoso central, causando incapacidade e redução da qualidade de vida dos pacientes. Nestetrabalho, umaanálise da eficácia analgésica e efeitoscolaterais dos canabinóides no tratamento do tipo de dorneuropática central em pacientes com EM. Realizamos umaestratégia de pesquisa para identificar estudos clínicos randomizados sobre o tratamento da dorneuropáticaem MS tipo central comcanabinóides, furam seis estudosselecionados comparando canabinóides versus placebo. Com base nos artigosconcluem que háumaredução significativa da dorneuropática da tipo central em pacientes com EM com a administração de canabinóides e os efeitoscolateraissão leves, os maiscomunssão tontura, sonolência, xerostomia e distúrbios do equilíbrio que nãoalterou a qualidade de vida dos pacientes.

The drug abuse has created several problems, moral, social and economical, and does not have borders of social class, educational and religious. The chemicaltoxicological analysis is an indispensable resource to confirm the exposure of humans to these drugs. Depending on the purpose of analysis, various biological matrices can be used. Nowadays, hair is being recognized as a third fundamental biological sample for drug testing besides urine and blood. The collection of hair samples is simple, noninvasive being difficult its adulteration. The techniques based on the miniaturization of extraction have gained an important role on the world stage in relation to conventional techniques. Among these techniques, stand out to solid phase microextraction (SPME) and liquid phase microextraction (LPME). In this work, a analytical method was developed for determination of 9- tetrahydrocannabinol (9-THC), cannabidiol (CBD) and cannabinol (CBN) in human hair by headspace solid-phase microextraction (SPME) and hollow fiber liquid-phase microextraction (HF-LPME) using gas chromatography coupled to mass spectrometry, operating in tandem mode (GC-MS/MS). Initially, in step sample preparation, a small mass of hair (10 mg) was decontaminated with petroleum ether (2 mL) for 10 minutes of ultrasound application (3 times) followed by alkaline digestion (NaOH 1 M). A univariate design was used for the determination the better condictions of the parameters of HS-SPME: pH (10), temperature (90 °C), mass of hair (10 mg), extraction time (40 min), desorption time (10 min), ionic strength (Na2CO3), saturation time (10 min) and fiber (PDMS). For HF-LPME a fractional factorial design was used in the screening of some variables of this technique followed by central composite design in the evaluation of optimal values of variables. The variables assessed and the optimum values of these were: extraction solvent (butyl acetate), donor phase pH (14), agitation speed (600 rpm), extraction time (20 min), ionic strength (6.8 % m/v) and acceptor phase volume (20 μL). The methods were submitted to the validation process showed good linearity with coefficient of determination (R2) above 0.994. Precision was determined using two different concentrations (upper and lower limits of the linear range) and RSD values were between 6.6 and 16.4 % for HS-SPME and 4.4-13.7% for HF-LPME. Absolute recoveries were in the range 1.1 to 8.7 % (HS-SPME) and 4.4 to 8.9 % (HF-LPME). The limits of detection and quantification ranged between 7-62 pg mg-1 and from 0.0005-0.020 ng mg-1 to HS-LPME and HF-LPME, respectively. The 9-THC showed values of limits of quantification for both methods below the cut-off (LQ ≤ 100 pg mg-1). Finally, the methods developed and validated were applied in determining CBD, 9-THC and CBN in hair samples of patients from a center of rehabilitation for drug addicts. The concentrations were in the range of LD-0.018 ng mg-1 for CBD, LD-232 pg mg-1 for 9-THC and 9-300 pg mg-1 for CBN show the applicability of the method in monitoring studies. The concentration of cannabinoids in the samples ranged from limit of detection to 18 pg mg-1 for CBD, limit of detection to 232 pg mg -1 for 9-THC and 9 to 300 pg mg-1 to CBN demonstrate the applicability of the method in monitoring studies. O consumo de drogas de abuso tem criado diversos problemas de ordem moral, social e econômica, além de não possuir fronteiras de classes sociais, educacionais e religiosas. A análise químico-toxicológica é um recurso indispensável para confirmar a exposição de pessoas a essas drogas. Dependendo da finalidade da análise, diversas matrizes biológicas podem ser utilizadas. Atualmente, o cabelo é reconhecido como uma das principais amostras biológicas para determinação de drogas, ao lado da urina e do sangue. A coleta de amostras de cabelo é um processo simples, não invasivo, sendo difícil sua adulteração. As técnicas baseadas na minituarização de extração têm ganhado um papel importante no cenário mundial frente às técnicas convencionais. Entre essas técnicas destacam-se a microextração em fase sólida (SPME) e a microextração em fase líquida (LPME). No presente trabalho, um método analítico foi desenvolvido para determinação de 9-tetraidrocanabinol (9- THC), canabidiol (CBD) e canabinol (CBN) em cabelo humano por microextração em fase sólida no modo headspace (HS-SPME) e microextração em fase líquida por fibra oca (HF-LPME) por cromatografia em fase gasosa e espectrometria de massas operando no modo tandem (GC-MS/MS). Na etapa de preparação da amostra, uma pequena massa de cabelo (10 mg) foi descontaminada com éter de petróleo (2 mL) por 10 minutos em ultra-som (3X), seguida de digestão alcalina (NaOH 1 mol L-1). Um planejamento univariado foi utilizado para o estudo das condições ótimas dos parâmetros de HS-SPME, tendo sido deferidos: pH (10), temperatura (90 ºC); massa de cabelo (10 mg); tempo de extração (40 min); tempo de dessorção (10 min); força iônica (Na2CO3); tempo de saturação (10 min) e fibra (PDMS). Para HF-LPME um planejamento fatorial fracionário foi empregado na triagem de algumas variáveis desta técnica seguido pelo planejamento composto central na avaliação dos valores ótimos das variáveis escolhidas: solvente de extração (acetato de butila), pH da fase doadora (14), velocidade de agitação (600 rpm), tempo de extração (20 min), força iônica (6,8 % m/v) e volume da fase aceptora (20 μL). Os métodos foram submetidos ao processo de validação demonstrando boa linearidade, com coeficientes de determinação (R2) acima de 0,994. A precisão foi determinada a partir dos limites inferior e superior da faixa linear apresentando valores de RSD entre 6,6 e 16,4% para HS-SPME e 4,4-13,7 % para HF-LPME. Recuperações absolutas foram de 1,1 a 8,7 % (HS-SPME) e 4,4 a 8,9 % (HF-LPME). Os limites de detecção (LD) e quantificação (LQ) foram de 7 a 62 pg mg-1 e 0,5 a 20 pg mg-1 para HS-SPME e HFLPME, respectivamente. O 9-THC apresentou valores de limites de quantificação para os dois métodos abaixo do valor de cut-off (LQ ≤ 100 pg mg-1). Finalmente, os métodos desenvolvidos e validados foram aplicados na determinação de CBD, 9- THC e CBN em amostras de cabelo de pacientes de centro de reabilitação de dependentes químicos. As concentrações dos canabinóides nas amostras variaram do limite de detecção a 18 pg mg-1 para CBD, do limite de detecção a 232 pg mg-1 para 9-THC e 9-300 pg mg-1 para CBN, demonstram a aplicabilidade do método em estudos de monitorização.

OBJETIVO: Revisar os principais avanços no potencial uso terapêutico de alguns compostos canabinoides em psiquiatria. MÉTODO: Foi realizada busca nos bancos de dado PubMed, SciELO e Lilacs e identificados estudos e revisões da literatura sobre o uso terapêutico dos canabinoides em psiquiatria, em particular canabidiol, rimonabanto, Δ9-tetraidrocanabinol e seus análogos. RESULTADOS: O canabidiol demonstrou apresentar potencial terapêutico como antipsicótico, ansiolítico, antidepressivo e em diversas outras condições. O Δ9-tetraidrocanabinol e seus análogos demonstraram efeitos ansiolíticos, na dependência de cannabis, bem como adjuvantes no tratamento de esquizofrenia, apesar de ainda carecerem de mais estudos. O rimonabanto demonstrou eficácia no tratamento de sintomas subjetivos e fisiológicos da intoxicação pela cannabis e como adjuvante no tratamento do tabagismo. Os potenciais efeitos colaterais, de induzir depressão e ansiedade limitaram o uso clínico deste antagonista CB1. CONCLUSÃO: Os canabinoides têm demonstrado que podem ter amplo interesse terapêutico em psiquiatria, porém mais estudos controlados são necessários para confirmar estes achados e determinar a segurança destes compostos. OBJECTIVE: To review the main advances related to the potential therapeutic use of cannabinoid compounds in psychiatry. METHOD: A search was performed in the online databases PubMed, ScieELO, and Lilacs for studies and literature reviews concerning therapeutic applications of cannabinoids in psychiatry, especially cannabidiol, rimonabant, Δ9-tetrahydrocannabinol, and their analogues. RESULTS: Cannabidiol was found to have therapeutic potential with antipsychotic, anxiolytic, and antidepressant properties, in addition to being effective in other conditions. Δ9-tetrahydrocannabinol and its analogues were shown to have anxiolytic effects in the treatment of cannabis dependence and to function as an adjuvant in the treatment of schizophrenia, although additional studies are necessary to support this finding. Rimonabant was effective in the treatment of the subjective and physiological symptoms of cannabis intoxication and functioned as an adjuvant in the treatment of tobacco addiction. The potential to induce adverse reactions such as depression and anxiety restrained the clinical use of this CB1 antagonist. CONCLUSION: Cannabinoids may be of great therapeutic interest to psychiatry; however, further controlled trials are necessary to confirm the existing findings and to establish the safety of such compounds.

O uso de derivados da Cannabis sativa L. para finalidades terapêuticas tem sido foco de muitas pesquisas científicas. Apesar de serem usados em alguns países para alívio de dor na esclerose múltipla e como antiemético para pacientes HIV positivos ou com câncer, pesquisas apontam sua possível eficácia também no tratamento de câncer de próstata ou de pele, artrite e outras doenças. Devido a estas novas propriedades terapêuticas, baseadas no uso de canabinóides, várias pesquisas vêm sendo realizadas com a finalidade de mostrar os problemas de saúde relacionados a seu uso: físicos, mentais e sociais.

"El sistema de los endocanabinoides participa de manera importante en la modulación de la ingesta de alimento, principalmente vía receptores a canabinoides CB1 (CB1R). Los CB1R se expresan en el núcleo paraventricular hipotalámico (NPH) y se ha propuesto que éstos participan en la modulación canabinoide de la alimentación, aunque el mecanismo conductual asociado no ha sido plenamente dilucidado. El objetivo del presente estudio consistió en evaluar el papel que juegan los CB1R del NPH en la expresión de la saciedad alimentaria mediante el análisis de la secuencia de saciedad conductual (SSC). Ratas macho Wistar fueron canuladas unilateralmente en el NPH del lado derecho y recibieron una inyección intrahipotálamica del agonista de los CB1R, ACEA (0.25 micro g); inmediatamente después de la inyección, se evaluó la SSC durante 2 horas. El análisis de la SSC mostró que la inyección de ACEA previno la expresión de la saciedad y el efecto fue bloqueado por el antagonista de los receptores CB1, AM 251 (0.1 micro g). Los resultados del presente estudio indican que los receptores CB1 del NPH tienen un papel inhibitorio del proceso de saciedad, lo que permite sugerir que el mecanismo conductual asociado a los efectos de los canabinoides sobre la alimentación involucra a la inhibición de la expresión de la saciedad."

"La mariguana es la droga más usada en todo el mundo. El presente estudio analiza los efectos de los fitocanabinoides (contenidos en la mariguana) y de los canabinoides endógenos (producidos en el organismo). Se evalúan las posibilidades terapéuticas destacando el efecto antiemético (único uso aceptado). Al final se emite una opinión sobre la legalización basada en los efectos permanentes que produce y que están asociados al uso en edad temprana."

Universidade Federal de Sao Carlos In innate or learned threatening situations, animals display a set of defensive behaviors specie-specific such as autonomic alterations, flight, fight and antinociception. Exposure of mice to open elevated plus-maze (oEPM: four open arms), an aversive situation, elicits antinociception of high magnitude. However, mechanisms involved in this kind of antinociception are not clear yet. This study investigated whether antinociception induced by exposure to an oEPM shows cross-tolerance with morphine (Exp. I and II); is attenuated by repetead exposure to the oEPM (Exp. III); is blocked by systemic treatment with naltrexone (Exp. IV); is prevented by adrenalectomy (Exp. V); persists after animal removal from the oEPM and if there are sex-related differences in this factor (Exp. VI); is mediated by CB1 cannabinoid receptor (Exp. VII). Rats were daily treated with morphine (M, 5 mg/kg, i.p.) or distilled water (DW) for 5 consecutive days (antinociceptive tolerance assessed by the tailflick test). Next day, rats received formalin 2.5% injection (50 μL) into the right hind paw and, after first phase of formalin test, they were treated with M or DW. 25 minutes after formalin injection into the paw, time spent licking the injected paw was recorded for 10 minutes (Exp. 1). Similar procedure was followed in the Experiment II, except that time spent licking the paw was recorded during exposure to the oEPM or enclosed EPM (eEPM: four arms enclosed) in undrugged rats. In Experiment III, nociception was evaluated in rats submitted to 1, 2, 3, 4 or 6 exposures to either eEPM or oEPM (formalin was injected only during the last exposure). Experiment IV investigated the effects of naltrexone (0 and 2.5 mg/kg; s.c.) on nociception during eEPM or oEPM exposure. Nociception was also assessed during the eEPM or oEPM exposure in sham and adrenalectomized rats (exp. V). In experiment VII, rats were treated with vehicle (DMSO 60%) or AM251 (1 mg/kg, i.p., CB1 receptor antagonist). Fifteen minutes later, animals received formalin injection into the paw and, 25 minutes after, they were exposed to the eEPM or oEPM. In experiment VI, male and female rats were exposed to eEPM or oEPM (with no noxious stimulus during exposure) and imediately after they were tested on the hot plate test (52.4 °C). Results showed that antinociception induced by oEPM does not display cross-tolerance to morphine; was not altered for at least 6 exposures to the maze; failed to be reversed by naltrexone; was not prevented by adrenalectomy and was not blocked by AM251. In addition, this antinociception does not persist after animal removal of the apparatus, by contrast, it occurs a hyperalgesia (as assessed by hot plate test), a response that does not depend on sex-related differences. Results suggest that antinociception induced by oEPM: is not mediated by opioid system or CB1 cannabinoid receptors and it is not sensitive to corticosterone. Furthermore, animal removal of aversive environment alters nociceptive response from antinociception to hyperalgesia, a phenomenon that is independent of the gender. Em situações ameaçadoras de natureza inata ou aprendida, animais exibem um conjunto de comportamentos defensivos espécie-específicos, tais como alterações autonômicas, fuga, luta e antinocicepção. A exposição de camundongos ao labirinto em cruz elevado aberto (LCEa: quatro braços abertos), uma situação aversiva, induz antinocicepção de alta magnitude. Todavia, os mecansimos envolvidos em tal antinocicepção ainda não estão elucidados. O presente estudo investigou se a antinocicepção induzida por exposição ao LCEa: mostra tolerância cruzada a morfina (experimentos I e II); é atenuada por exposição repetida ao LCEa (experimento III); é revertida por tratamento sistêmico com naltrexona (experimento IV); é impedida por adrenalectomia (experimento V); persiste após remoção do animal do LCEa e se há diferenças relacionadas ao sexo neste fator (experimento VI); é mediada pelo receptor canabinóide, CB1 (experimento VII). Ratos foram diariamente tratados com morfina (M, 5 mg/Kg, i.p.) ou água destilada (AD) por 5 dias consecutivos (tolerância antinociceptiva avaliada pelo teste de retirada da cauda). No dia seguinte, os ratos receberam injeção de formalina 2,5% (50L) na pata traseira direita e, após a primeira fase do teste de formalina, foram tratados com M ou AD. Vinte e cinco minutos após injeção de formalina na pata, o tempo de lambidas na pata foi registrado por 10 minutos (experimento I). Procedimento semelhante foi utilizado no experimento II, exceto que o tempo de lambidas na pata foi registrado durante exposição ao LCEa ou LCE fechado (LCEf: quatro braços fechados). No experimento III, nocicepção foi avaliada em ratos submetidos a 1, 2, 3, 4 ou 6 exposições ao LCEf ou LCEa (formalina injetada somente durante a última exposição). O experimento IV investigou os efeitos de naltrexona (2,5 mg/kg; s.c.) sobre a nocicepção durante exposição ao LCEf ou LCEa. A nocicepção também foi avaliada durante exposição ao LCEf ou LCEa em ratos sham operados e adrenalectomizados (experimento V). No experimento VII, os ratos foram tratados com veículo (DMSO 60%) ou AM251 (1 mg/kg, i.p., antagonista CB1). Quinze minutos após, os animais receberam formalina na pata e, após 25 minutos, foram expostos ao LCEf ou LCEa. Já no experimento VI, ratos machos e fêmeas foram expostos ao LCEf ou LCEa, sem nenhum estímulo nociceptivo aplicado durante exposição e, imediatamente após, foram testados no teste da placa quente (52,4 °C). Os resultados mostraram que a antinocicepção induzida pelo LCEa não exibe tolerância cruzada a morfina; não foi alterada por ao menos 6 exposições ao labirinto; mostrou-se insensível à naltrexona; não foi impedida por adrenalectomia e não foi bloqueada por AM251. Ainda, tal antinocicepção não perdura após remoção dos animais do aparelho, pelo contrário, ocorre uma hiperalgesia (conforme avaliado pelo teste de placa quente), uma resposta que independe de diferenças relacionadas ao sexo. Os resultados sugerem que a antinocicepção induzida pelo LCEa: não é mediada por sistema opióide ou receptores canabinóides CB1 e não é sensível a corticosterona. Além disso, a retirada dos animais do ambiente aversivo altera a resposta nociceptiva de antinocicepção para hiperalgesia, um fenômeno que independe do gênero.

Actualmente se han generado valiosísimas fuentes de información que correlacionan la especie botánica Cannabis sativa L y sus metabolitos secundarios con la medicina (tratamiento terapéutico), farmacología (modelos experimentales) y química sintética (diseño y generación de nuevas estructuras y análogos bioisósteres), que avalan la significación del estudio de esta planta, sus extractos, metabolitos, precursores y análogos naturales y sintéticos como fuente de agentes terapéuticos. Por tal motivo se presenta una revisión de la información existente sobre las potenciales implicaciones terapéuticas de sistemas moleculares canabinoidales (endógenos, naturales y sintéticos) en el tratamiento de diversas afecciones del sistema nervioso central, que incluye: conceptos de tipos de canabinoides; sistemas de receptores canabinoides CB1 y CB2 y sus ligandos así como evidencias preclínicas de los efectos terapéuticos de canabinoides desde 1970 hasta el 2006.At present, a great amount of valuable information and experimental data has been generated that correlate Cannabis sativa and its secondary metabolites with medicine (therapeutic treatment), pharmacology (experimental animal models) and synthetic chemistry (design and generation of new structures and biososteric analogues), showing the importance of the study about this plant, its extracts, metabolite precursors and natural and synthetic analogues as therapeutic agents. Taking theses points into consideration, this article reviews the therapeutic implications of cannabinoid systems (endogenous, natural, and synthetic) on several pathologies of central nervous system, including: cannabinoid type concepts, cannabinoid receptor systems CB1 and CB2 and preclinical studies devoted to therapeutic effects of the cannabinoids since 1970 until 2006

OBJECTIVE: The aim of this review is to describe the historical development of research on cannabidiol. METHOD: This review was carried out on reports drawn from Medline, Web of Science and SciELO. DISCUSSION: After the elucidation of the chemical structure of cannabidiol in 1963, the initial studies showed that cannabidiol was unable to mimic the effects of Cannabis. In the 1970's the number of publications on cannabidiol reached a first peak, having the research focused mainly on the interaction with delta9-THC and its antiepileptic and sedative effects. The following two decades showed lower degree of interest, and the potential therapeutic properties of cannabidiol investigated were mainly the anxiolytic, antipsychotic and on motor diseases effects. The last five years have shown a remarkable increase in publications on cannabidiol mainly stimulated by the discovery of its anti-inflammatory, anti-oxidative and neuroprotective effects. These studies have suggested a wide range of possible therapeutic effects of cannabidiol on several conditions, including Parkinson's disease, Alzheimer's disease, cerebral ischemia, diabetes, rheumatoid arthritis, other inflammatory diseases, nausea and cancer. CONCLUSION: In the last 45 years it has been possible to demonstrate that CBD has a wide range of pharmacological effects, many of which being of great therapeutic interest, but still waiting to be confirmed by clinical trials. OBJETIVO: O objetivo desta revisão é descrever a evolução histórica das pesquisas sobre o canabidiol. MÉTODO: Esta revisão foi conduzida utilizando-se bases de dados eletrônicas (Medline, Web of Science e SciELO). DISCUSSÃO: Após a elucidação de sua estrutura química, em 1963, os estudos iniciais do canabidiol demonstraram que ele não foi capaz de mimetizar os efeitos da maconha. Na década de 70, o número de publicações sobre o canabidiol atingiu um primeiro pico, com as investigações centrando-se principalmente na sua interação com o delta9-THC e nos seus efeitos antiepiléptico e sedativo. As duas décadas seguintes apresentaram um menor nível de interesse e as propriedades terapêuticas potenciais do canabidiol investigadas foram, principalmente, as ansiolíticas, antipsicóticas e seus efeitos sobre as doenças motoras. Os últimos cinco anos têm demonstrado um notável aumento de publicações sobre o canabidiol, principalmente estimulado pela descoberta dos seus efeitos anti-inflamatório, anti-oxidativo e neuroprotetor. Estes estudos têm sugerido uma vasta gama de possíveis efeitos terapêuticos da canabidiol em várias condições, incluindo doença de Parkinson, doença de Alzheimer, isquemia cerebral, diabetes, náusea, câncer, artrite reumatóide e outras doenças inflamatórias. CONCLUSÃO: Nos últimos 45 anos, foi possível demonstrar uma vasta gama de efeitos farmacológicos do canabidiol, muitos dos quais são de grande interesse terapêutico, que ainda necessitam ser confirmados por estudos clínicos.

Tese de doutoramento em Ciências Biomédicas apresentada à Faculdade de Medicina de Coimbra A marijuana, o haxixe e outros produtos psicoactivos obtidos da Cannabis sativa, são as drogas ilícitas mais produzidas e traficadas em todo o mundo. Por outro lado, paralelamente a um aumento do seu consumo na comunidade em geral, tem-se assistido a um acréscimo de casos de condução sob a sua influência. Tem sido demonstrado que a intoxicação provocada por este tipo de compostos está principalmente relacionada com a concentração do seu principio activo, o Δ9-Tetrahidrocanabinol (Δ9-THC), sendo frequentemente administrados com outras substâncias, tais como o alcool, exacerbando os seus efeitos psicoactivos e aumentando a possibilidade de ocorrência de acidentes de viação. Ao longo dos últimos anos, a comunidade cientifica, em parceria com algumas empresas envolvidas na produção de meios de detecção destas drogas, tem desenvolvido testes rápidos para a detecção de Δ 9-THC-COOH na urina, o metabolito ai mais abundante, quer para aplicação a nível do controlo laboral, quer na avaliação de programas de desintoxicação ou no controlo rodoviário. Contudo, sendo a detecção daquele metabolito apenas indicativo de consumo, a determinação de Δ9-THC em saliva fornecera uma melhor indicação de consumo recente, podendo ate ser considerada como uma melhor alternativa ao sangue para documentar esse uso recente. Apesar disso, os toxicologistas forenses continuam a ser solicitados para determinar o Δ9-THC e os seus metabolitos (Δ9- THC-OH e Δ9-THC-COOH) em amostras de sangue ou urina, aquando da sua positividade nos testes de triagem, quer em saliva quer em urina, bem como para a avaliação do estado de influenciado, em amostras de sangue. A rapidez com que ocorrem os processos de biotransformação daquelas substancias condiciona a interpretação dos resultados em qualquer estudo toxicocinético. Todavia, os estudos de carácter toxicocinético em consumidores (fumadores) de Cannabis são ainda insuficientes, seja porque não testam todas as amostras biológicas com importância para aquela avaliação, seja porque os métodos analíticos ai utilizados ainda não estão validados em simultâneo para o Δ9-THC e seus metabolitos, na saliva, sangue e urina. Por outro lado, uma vez que a detecção de Δ9-THC-COOH em urina não indica necessariamente estado de influenciado, torna-se importante o estudo da amostra de saliva, de forma a predizer a sua capacidade como indicador de consumo recente de Cannabis. Tais dados ajudariam a interpretação dos resultados, realcando o valor das avaliações do estado de influenciado atraves de amostras de saliva ou, melhor ainda, a utilização desta amostra biológica como matriz de triagem na fiscalização do eventual consumo de substancias psicotropicas, no âmbito da condução rodoviaria. Entre as diferentes metodologias utilizadas para a triagem de canabinóides em amostras biológicas, seja no âmbito do controlo laboral, no controlo rodoviário ou na generalidade dos casos forenses e consequente confirmação dos resultados positivos dessa triagem inicial, tem sido dada importância as tecnicas de cromatografia gasosa (GC) e, mais recentemente, as de cromatografia liquida de alta resolução com espectrometria de massa (LC-MS). Com estas, tem-se procurado alcancar cada vez mais baixos limites de detecção e, ao mesmo tempo, ultrapassar algumas das limitações observadas com outras metodologias existentes. Na Parte I da presente dissertação, faz-se uma introdução geral do assunto, pretendendo-se que a mesma seja uma revisão da literatura relativamente a origem dos canabinóides, seu mecanismo de acção, suas propriedades farmacodinamicas e farmacocinéticas, sua prevalencia e influência a nível da condução rodoviaria e métodos analíticos para a sua determinação em distintas amostras biológicas. Na Parte II, define-se o objectivo geral do presente trabalho, justificando a sua pertinencia: o desenvolvimento e validação de uma metodologia analitica que determine simultaneamente, com sensibilidade, exactidão e precisão, o Δ9-THC e os seus metabolitos, Δ9-THC-OH e Δ9-THC-COOH, em distintas amostras biológicas (saliva, sangue e urina), utilizando um sistema de cromatografia liquida de alta resolução (LC) acoplado a um detector de espectrometria de massa (MS), e sua posterior aplicação a fluidos reais, para a avaliação do consumo e presença de canabinóides nas diferentes amostras biológicas. A parte III divide-se em seis capítulos e descreve, na sequencia do atrás mencionado, os trabalhos experimentais realizados, os resultados obtidos e as conclusões inerentes, constituindo, desta forma, a nossa contribuição pessoal para o esclarecimento do assunto em estudo. O método desenvolvido e validado, por LC-MS, para a detecção, identificação, confirmação e quantificação de Δ9-THC em saliva provou ser especifico e sensivel, com elevados valores de precisão e exactidão e muito bons limites de detecção e de quantificação (1 e 2 ng/ml, respectivamente). Este método poderá ser uma excelente opção em alternativa a utilização da cromatografia gasosa com espectrometria de massa (GC-MS) para a confirmação de resultados de triagem positivos, uma vez que, para alem de permitir quantificar, com exactidão e precisão, concentrações muito reduzidas de Δ9-THC, esta metodologia é menos morosa, ultrapassando algumas desvantagens da metodologia existente por GC-MS. Acresce ainda que o método provou ser selectivo e sensível para um reduzido volume de amostra (500 Ml), o que constitui uma vantagem inequívoca para a realização de analises toxicológicas em saliva. Quando se aplicou a metodologia validada a amostras de saliva de voluntários consumidores de Cannabis e se avaliaram duas formas distintas de colheita de saliva, directamente (expectoração) e por intermédio de dispositivos SalivetteR, concluiu-se que os dispositivos SalivetteR constituem um bom método de colheita de saliva, particularmente porque são uma forma de colheita mais fácil e rápida quando comparada com a expectoração. Contudo, constatou-se que o Δ9-THC se liga fortemente ao algodão do dispositivo, pelo que a sua extracção requer metodologia melhorada. Dado o seu elevado desempenho, este método poderá ser uma clara mais-valia em toxicologia forense quando estiverem em causa estudos apenas em saliva, como acontece no Estudo Europeu em curso e em que Portugal participa (DRUID): determinação de substancias psicotrópicas (incluindo canabinóides) em saliva, no âmbito do controlo rodoviário. Numa segunda fase, foi desenvolvido e validado um método para a detecção, identificação e quantificação simultânea de Δ9-THC, Δ9-THC-OH e Δ9- THC-COOH em amostras de saliva, sangue e urina, e realizado um estudo para estabelecer alguns parâmetros e relações toxicocinéticas entre as três amostras biológicas. A metodologia desenvolvida mostrou elevada especificidade, sensibilidade, precisão e exactidão, podendo ser considerada como uma excelente alternativa ao GC-MS para a detecção, identificação, confirmação e quantificação simultânea de Δ9-THC e Δ9-THC-COOH em amostras de saliva, sangue e urina. Contudo, os elevados limites de detecção alcançados para o Δ9-THC-OH (20 ng/ml), bem como a sua insatisfatória reprodutibilidade e precisão, recomendam a utilização desta metodologia apenas para a detecção, identificação e confirmação deste metabolito em sangue e urina, mas nunca para a sua quantificação. A presença de Δ9-THC ou de Δ9-THC-OH em sangue serão determinantes para a afirmação de consumo recente e de estado de influenciado, uma vez que estes são os compostos activos. O rápido aparecimento do Δ9-THC em sangue durante a sua administração (na experiência, ao fim de 10 minutos), reflectiu uma rápida absorção do Δ9-THC pelas vias aéreas e consequente entrada na circulação geral. No entanto, as concentrações inicialmente obtidas em sangue reduzem-se muito significativamente meia hora a uma hora e meia após fumar, pelo que a correcta determinação de Δ9-THC (única determinante de um estado de influenciado) estará dependente de colheitas rápidas e sequenciais de sangue no período critico do processo de fumar. Também a Cmax sanguínea de Δ9-THC-COOH é atingida muito rapidamente. Todavia, os seus níveis foram já mensuráveis ainda antes do consumo propriamente dito (por ter havido consumo horas antes), ou mesmo elevados nos consumidores habituais que haviam fumado 1 a 3 horas antes da experiência propriamente dita. Tal virá depois a ser analisado em termos toxicocinéticos, permitindo-se a afirmação de que o Δ9-THC-COOH tem uma t1/2 muito elevada e, por isso, poderá vir a ser detectado no sangue até mais de 24 horas depois. Em saliva, apenas foi detectado o Δ9-THC, tendo-se atingido a Cmax imediatamente após fumar, com valores muito elevados mas que diminuem rapidamente (à meia hora), sugerindo a existência de uma contaminação directa da saliva durante o consumo. Esta amostra biológica (aferida a possibilidade de contaminação por consumo passivo) pode ser de grande utilidade para documentar o consumo recente de canabinóides e, a partir dela, eventualmente deduzir sobre o consequente estado de influenciado (em sangue). Com efeito, há semelhanças entre a toxicocinética do Δ9-THC em saliva (marcador de consumo recente) e em sangue (indicador de estado de influenciado), e a forma como se relacionam. Isto é, são semelhantes as respectivas semi-vidas, o que conferira ainda maior valor interpretativo aos resultados positivos obtidos em amostras de saliva. A colheita in situ de saliva, para além de mais fácil na prática, poderá ser um bom método de triagem do consumo de canabinóides, indicativo de consumo recente em face da concentração encontrada, ou inclusivamente preditivo da positividade das amostras sanguíneas. Em urina, apenas foi detectado o metabolito Δ9-THC-COOH durante todo o estudo, e sem correlação com a concentração sanguínea, indicativo de que este metabolito inactivo apenas pode ser utilizado como marcador de consumo de Cannabis, mas nada prediz quanto à existência de um estado de influenciado ou serve para a caracterização temporal em relação ao momento do consumo. Em conclusão, a metodologia aqui desenvolvida e validada permitirá a determinação, em simultâneo e com uma única metodologia cromatográfica, dos diversos canabinóides (Δ9-THC, Δ9-THC-OH e Δ9-THC-COOH) nas distintas amostras biológicas (saliva, sangue e urina). Como técnica de elevado potencial em toxicologia forense, está já hoje a ser aplicada no Serviço de Toxicologia Forense da Delegação do Centro do Instituto Nacional de Medicina Legal, I.P. Marijuana, hashish and other psychoactive products of the Cannabis sativa, are the most produced and trafficked illicit drugs in the world. Parallel to an increase in Cannabis consumption in the community, an increase in driving under its influence has also been observed. It has been demonstrated that the intoxication produced by these compounds is strongly related to the concentration of its active component, Δ9- THC, this drug being frequently administered with other substances, such as alcohol, thus enhancing the psychoactive effect and the magnitude of the influence on driving abilities. During the last few years, the scientific community, in partnership with some companies involved in the manufacture of drug detection devices, has undertaken to use rapid screening tests on urine for the detection of Δ9-THCCOOH, the major metabolite, in workplace assessments, in drug addiction treatment programs and in road traffic surveillance. However, the detection of Δ9- THC in saliva constitutes a better indication of recent use than urine, being considered possibly the best alternative to blood for registering a recent drug use. Despite this, forensic toxicologists are still requested to determine Δ9- THC, and its metabolites (Δ9-THC-OH and Δ9-THC-COOH) in blood or urine samples, after a given positive in the screening for cannabinoids carried out in saliva or urine, as well as to evaluate the state of impairment obtained by the analysis of blood. The speed of the biotransformation process of these substances to the corresponding metabolites may affect the interpretation of results in any toxicokinetic study. Toxicokinetic studies in Cannabis users (smokers) are still inadequate, either because the studies do not include all the important biological samples, or because there are still no analytical methods able to determine, simultaneously, Δ9-THC and its metabolites in saliva, blood and urine samples. Moreover, given that Δ9-THC-COOH detection in urine does not necessarily indicate impairment, the detection and interpretation of a positive result in saliva is important, in order to predict recent consumption of Cannabis. Such data would help the interpretation of results, enhancing the value of evaluations of impairment through saliva sample analysis, and consequently, the use of this biological sample for onsite drug screening, in roadside traffic control. Forensic toxicology applies different methodologies to cannabinoid screening in different biological matrices. However, for workplace drug controls and control of driving under the influence of drugs, as well as for all forensic cases, it is necessary to perform a confirmation analysis of the positive results obtained, using complex techniques. Nowadays, liquid chromatography techniques with mass spectrometry (LC-MS) are being increasingly introduced in forensic toxicology, as it is becoming more necessary to reach lower detection limits, and to overcome some of the limitations observed with other existing methodologies. In Part I of this thesis, a general introduction of the subject is presented, including a bibliographic review of the origin of cannabinoids, their mechanism of action and consequent pharmacodynamic and pharmacokinetic properties, their prevalence and influence in driving and methods for their determination in distinct biological samples. In Part II, the general aims of the present study are defined, justifying its relevance: the development and validation of an analytical methodology for the simultaneous determination, with specificity, accuracy and precision, of the active compound of Cannabis, Δ9-THC, and its metabolites, Δ9-THC-OH and Δ9-THCCOOH, in different biological samples (saliva, blood and urine), using a high performance liquid chromatography system (LC) coupled with a mass spectrometry detector (MS) and its application to real samples, for the evaluation of cannabinoid consumption and presence in different biological samples, with a consequent toxicokinetic study. Part III is divided in to six chapters and describes, in the sequence mentioned above, the experimental studies performed, the results and the conclusions achieved, constituting our personal contribution to the clarification of the subject under study. The developed and validated method, with LC-MS for the detection, identification, confirmation and quantification of Δ9-THC in saliva proved to be specific and sensitive, with high values of precision and accuracy and very good limits of detection and quantification (1 and 2 ng/ml, respectively). This method can be an excellent alternative to gas chromatography with mass spectrometry (GC-MS) for the confirmation of a positive screening result since, besides allowing the quantification with accuracy and precision of very low Δ9-THC concentrations, this methodology is less laborious, overcoming some disadvantages of the existing methodology for GC-MS. The method also proved to be selective and sensitive for a reduced sample volume (500Ml), which is a distinct advantage for the accomplishment of toxicological analyses in saliva. When the validated methodology was applied to the saliva samples of Cannabis user volunteers, and two distinct saliva collection procedures (directly through expectoration and through SalivetteR devices) were evaluated, we concluded that the SalivetteR device constitutes a good method for saliva collection, particularly due to its easy collection procedure and efficiency when compared with expectoration. However, we observed that Δ9-THC remains strongly bound to the cotton of the device, which requires an improved methodology. Given its high performance, this method could be of great value in forensic toxicology for saliva studies, as in the current European Study, DRUID, in which Portugal participates: for psychotropic substance determination (including cannabinoids) in saliva, in roadside control assays. The method consecutively developed and validated showed high specificity and selectivity, precision, and accuracy, allowing it to be considered as an excellent alternative to GC-MS for the detection, identification, confirmation and simultaneous quantification of Δ9-THC and Δ9-THC-COOH in saliva, blood and urine samples. However, the high detection limits obtained for Δ9-THC-OH, as well as its unsatisfactory reproducibility, accuracy and precision means that the use of this methodology is only recommended for the detection, identification and confirmation of Δ9-THC-OH in blood and urine, but never for its quantification. The presence of Δ9-THC or Δ9-THC-OH in blood can determine recent consumption and state of impairment, since they are the active compounds. The rapid appearance of Δ9-THC in blood during its administration (during smoking), is a reflection of its efficient and fast absorption through the lungs and consequent entry into the general circulation. However, the initial concentrations in blood are significantly reduced half an hour to one hour after smoking and thus, the correct determination of Δ9-THC (the only way capable of defining the impairment) will depend on sequential and rapid collections of blood during the critical smoking period. Δ9-THC-COOH achieves its maximum concentration (Cmax) in blood very quickly, the concentration before smoking being already measurable, in regular users, and higher than in sporadic consumers, indicative of an additive effect between repeated smoking sessions. In saliva, only the active compound (Δ9-THC) was detected, reaching Cmax immediately after smoking, with very high values that decrease very quickly (in half an hour), suggesting an oral fluid contamination during consumption. This biological sample (taking into account the possibility of contamination by passive consumption) can be of great value for the estimation of recent use of cannabinoids (Δ9-THC) and assessment of a possible state of impairment (in blood). The similarity between Δ9-THC toxicokinetics in saliva (marker of recent use) and in blood (indicative of impairment), and the corresponding correlation, confers a higher interpretive value to the positive results obtained in saliva samples. "In situ" saliva collection, besides being technically easier, can be a good way to screen for cannabinoids, indicative of recent use based on the concentrations found, or even indicative of a positive result in blood. In urine, only the metabolite Δ9-THC-COOH was detected during the study, without a blood correlation, indicating that this inactive metabolite can only be used as a marker of Cannabis use and cannot predict the existence of impairment or determine when consumption occurred. With the developed and validated methodology, excellent results can be obtained to determine, simultaneously, these cannabinoids using a single chromatographic methodology, and in three different biological samples (saliva, blood and urine). This technique has great potential in forensic toxicology, and is already being applied in the Forensic Toxicology Laboratory of the Centre Delegation of the National Institute of Legal Medicine.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. Recentemente, estudos têm demonstrado a capacidade do sistema endocanabinóide (eCB) em modular estados emocionais e a extinção de memórias aversivas em animais. Em um estudo pioneiro foi demonstrada a liberação de eCB no cérebro de camundongos durante a extinção do condicionamento aversivo (CA), destacando a influência que manipulações farmacológicas do sistema eCB poderiam exercer sobre as memórias aversivas. Sendo assim, o aumento da transmissão eCB, por inibição da sua recaptação e/ou metabolismo, parece ser uma alternativa farmacológica bastante interessante. Além do mais, acredita-se que o canabidiol (CBD), um fitocanabinóide não-psicotomimético, possa agir inibindo a recaptação e degradação de anandamida, aumentando seus níveis endógenos em áreas específicas do cérebro. Portanto, o objetivo deste trabalho foi comparar os efeitos da administração intracerebroventricular (i.c.v.) de AM 404, um inibidor da recaptação de anandamida, e CBD, na extinção do CA. Ratos Wistar machos adultos foram condicionados e 24 h após o condicionamento foram injetados i.c.v. com AM404 (0,2; 1,0; 2,0 g/ l) ou CBD (0,2; 1,0; 2,0 g/ l) e submetidos a três sessões de extinção. Cada sessão constituiu de uma exposição de 9 min à gaiola de condicionamento (total de 3 exposições com intervalo de 24 h). Um teste adicional de 3 min, na ausência de drogas, foi realizado 24 h após a última sessão de extinção no intuito de verificar a persistência de um possível efeito das drogas sobre a extinção do CA. A administração i.c.v. de AM404 (1,0 µg/µl) e CBD (2,0 µg/µl) facilitou a extinção do CA contextual, sendo que estes efeitos prevaleceram mesmo nos testes sem droga realizados após a última sessão de extinção. Estes efeitos foram revertidos pela administração prévia do antagonista dos receptores CB1, SR141716A (0.2 mg/kg, i.p.), mas não pelo antagonista dos receptores VR1, capsazepina (CPZ) (5,0 µg/µl, i.c.v.), sugerindo então o envolvimento dos receptores canabinóides CB1 nos efeitos facilitatórios destas drogas sobre a extinção do CA contextual. Efeitos do tipo ansiolítico não parecem ter contribuído de forma direta para os efeitos facilitatórios do AM404 e do CBD sobre a extinção do CA contextual, visto a ausência de efeitos nos animais "naïve" expostos ao LCE, porém, podem ter contribuído de uma forma indireta, como sugerida pelos efeitos anti-ansiogênicos destas drogas observados no teste do LCE potencializado pelo medo. Visto que o CBD e AM404 podem estar interferindo com a recaptação de eCB, este trabalho sugere que o aumento dos níveis de endocanabinóides por inibidores da recaptação pode constituir uma estratégia original para o tratamento de transtornos emocionais relacionados à recordação de eventos traumáticos.

La planta Cannabis sativa L. o cáñamo ha captado desde tiempos antiquísimos la atención del hombre en el campo de la salud y terapéutica humanas y todavía, a inicios del siglo XXI, continúa despertando polémicas en la comunidad científica como fuente natural y en el estudio y aplicación de sus derivados. Desde el punto de vista fitoquímico se han descrito más de 70 derivados de tipo canabinoide farmacológicamente activos sobre el sistema nervioso central. En la actualidad se han generado valiosísimas fuentes de información que relacionan la especie botánica Cannabis sativa L. y sus metabolitos secundarios con la medicina (tratamiento terapéutico), farmacología (modelos experimentales) y química sintética (diseño y generación de nuevas estructuras), las cuales avalan la importancia del estudio de esta planta, sus extractos, metabolitos y precursores como fuente de agentes terapéuticos. Por tal motivo se presenta una revisión de la información existente sobre las potenciales implicaciones terapéuticas de sistemas moleculares canabinoidales (endógenos, naturales y sintéticos) en el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas del sistema nervioso central, que incluye: conceptos de tipos de canabinoides, sistemas de receptores canabinoides CB1 y CB2 y evidencias preclínicas de los efectos neuroprotectores de canabinoides desde 1970 hasta el 2005Cannabis sativa L. or cáñamo has focused man's attention for its therapeutical and medical application since ancient times, and yet, at the beginning of XXI century, this plant continues being polemic for the scientific community as a natural source and in the study and application of its derivatives. More than 70 cannabinoid compounds with pharmacological action on the central nervous system have been phytochemically described. At present, a great amount of valuable information and experimental data have been generated that correlate Cannabis sativa and its secondary metabolites with medicine (therapeutic treatment), pharmacology (experimental animal models) and synthetic chemistry (design and generation of new structures), showing the importance of the study about this plant, its extracts, metabolites and bio-precursors of therapeutic agents. Taking these points into consideration, this article reviews the therapeutic implications of cannabinoid systems (endogenous, natural, and synthetic) on the neurodegenerative diseases of the central nervous system, including concepts of cannabinoid types, cannabinoid CB1 and CB2 receptor systems and preclinical studies devoted to the neuroprotective effects of the cannabinoids from 1970 to 2005

A angiogênese é controlada por uma complexa rede de células e mediadores. A ativação ou bloqueio de receptores canabinóides demonstram ser uma interessante estratégia farmacológica para atenuar a resposta angiogênica e/ou inflamatória em vários modelos experimentais. Aqui investigamos como esta estratégia pode interferir na angiogênese inflamatória. Esponjas de polyester-poliuretana foram implantadas em camundongos C57BL/6. Os animais receberam doses diárias (10 mg/Kg, s.c.) dos antagonistas canabinóides SR141716A (CB1) and SR144528 (CB2), separadamente, ou 3 e 10 mg/Kg (30 ou 100 g/animal, para o tratamento local) (s.c.) do agonista CB1/CB2 WIN 55,212-2, por 7 ou 14 dias. Os implantes foram coletados para análises por ELISA, hemoglobina, mieloperoxidase e N-acetilglicosaminidase, utilizadas, respectivamente, como index para mediadores protéicos, angiogênese e acúmulo de neutrófilos e macrófagos, respectivamente. O tratamento com os antagonistas CB1 ou CB2 levou à redução do influxo celular para a matriz esponjosa nos dias 7 e 14, com padrões distintos para macrófagos e neutrófilos. O agonista CB1/CB2 também reduziu o influxo celular. Ambos os tratamentos interferiram na angiogênese. Estas alterações foram acompanhadas por mudanças nos níveis de TNF-, VEGF, CXCL1-3/KC, CCL2/JE e RANTES, dependendo do tratamento. Todas as mudanças apresentam padrões similares na análise histológica. A ativação ou bloqueio de receptores canabinóides parece ser efetivo em reduzir as respostas angiogênica e inflamatória. Embora agindo de forma similar, níveis de citocinas, quimiocinas e endocanabinóides podem explicar esta resposta paradoxal. Desensibilização dos receptores e atividade agonista parcial / agonista inverso são outras explicações plausíveis para estas respostas. Angiogenesis depends on a complex network of cells and mediators. The activation or blockade of cannabinoid receptors showed to be an interesting pharmacological strategy to attenuate the angiogenic and/or inflammatory response in many experimental models. Here we investigated how this strategy may interfere in inflammatory angiogenesis. Polyester-polyurethane sponges were implanted in C57BL/6 mice. Animals received daily doses (10 mg/kg, s.c.) of the cannabinoid antagonists SR141716A (CB1) and SR144528 (CB2), separately, or 3 and 10 mg/Kg (30 or 100 ìg/mice, for the local treatment) (s.c.) of the cannabinoid CB1/CB2 agonist WIN 55212-2, for 7 or 14 days. The implants were then collected for ELISA, hemoglobin, myeloperoxidase and N-acetylglucosaminidase measurements, used as indexes for angiogenesis, neutrophil and macrophage accumulation, respectively. Histological analysis was also conducted. CB1 or CB2 receptor antagonist treatment was able to reduce cellular influx to the sponge at 7 and 14 days, with distinctive pattern for macrophages and neutrophils. The CB1/CB2 agonist also reduced cellular influx. Both treatments affected angiogenesis. These alterations were accompanied by changes in the levels of TNF-á, VEGF, CXCL1-3/KC, CCL2/JE and RANTES, depending on the treatment. All changes correspond to a similar pattern in the histological analysis. The blockade or activation of cannabinoid receptors showed to be effective in reducing inflammatory and angiogenic responses. Altough acting in a similar way, levels of cytokines, chemokines and endocannabinoids may help explain this paradoxal response. Partial agonism / inverse agonism activity and receptor desensitization is another explanation for these responses.Keywords: angiogenesis, inflammation, cannabinoid receptors, cytokines

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. Várias evidências apontam para a adolescência como um período crítico para o início de uma ampla escala de transtornos neuropsiquiátricos, incluindo o transtorno do déficit de atenção e hiperatividade (TDAH) e o abuso de drogas. Os ratos espontaneamente hipertensos (SHR) são geralmente considerados um modelo genético apropriado para o estudo do TDAH, uma vez que esses animais apresentam características comportamentais do transtorno, tais como hiperatividade, impulsividade, prejuízos na atenção sustentada, déficits cognitivos e aumento da busca pela novidade. Apesar da alta prevalência do TDAH em adolescentes, os estudos que utilizam a linhagem SHR foram realizados principalmente em animais adultos. O foco do presente estudo foi investigar a participação do sistema canabinóide, através da administração aguda intraperitoneal (i.p.) do agonista dos receptores canabinóide WIN 55.212-2 (WIN: 0,125; 0,25; 1,25; ou 2,5 mg/kg), na atividade locomotora, em comportamentos relacionados à ansiedade e nas propriedades reforçadoras em ratos machos adolescentes e adultos, das linhagens Wistar e SHR. Para esse propósito foi utilizado o teste do campo aberto (CA), labirinto em cruz elevado (LCE) e da preferência condicionada de lugar (PCL). A administração de WIN nas doses de 0,25 e 1,25 mg/kg (i.p.) promoveu seletivamente estimulação locomotora em SHR adolescentes, mas não em animais adultos SHR ou em ratos Wistar (independentemente da idade). Ainda que as doses testadas de WIN não tenham causado efeitos em comportamentos relacionados à ansiedade quando avaliadas no CA (locomoção central) ou no LCE (tempo nos braços abertos), a maior dose WIN testada (2.5 mg/kg, i.p.) diminuiu significantemente o número de entradas nos braços fechados (um índice indicativo de redução da atividade locomotora) de ratos adolescentes das duas linhagens no LCE. Além disso, os resultados do presente estudo mostram que o tratamento com WIN induz respostas contraditórias nos efeitos reforçadores na PCL. Na linhagem Wistar, a faixa de dose entre 0,25 e 2,5 mg/kg produziu claramente aversão em ratos adultos, enquanto que em ratos adolescentes não produziu quaisquer efeitos. Na linhagem SHR, a administração de WIN induziu efeitos reforçadores em ambas as idades, em baixa dose (0,25 mg/kg, i.p.) para ratos adultos e em alta dose (2,5 mg/kg, i.p.) para ratos adolescentes. Os efeitos do WIN na locomoção e nas propriedades reforçadoras foram bloqueados pelo prétratamento com o AM 251, um antagonista seletivo dos receptores canabinóides do subtipo CB1. Os resultados do presente estudo indicam efeitos de um agonista canabinóide dependentes da linhagem e da idade, na atividade locomotora e nas propriedades reforçadoras, estendendo a noção de que a adolescência e os comportamentos observados em ratos SHR representam fatores de risco para a sensibilidade aumentada aos efeitos de drogas.