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To evaluate the presence of Toxoplasma gondii in edible farmed shellfish, 1734 shellfish specimens i.e., 109 Crassostrea gigas (6 pools), 660 Mytilus galloprovincialis (22 pools), 804 Tapes decussatus (28 pools) and 161 Tapes philippinarum (6 pools), were collected from the Varano Lagoon (Apulia, Italy). Shellfish from 62 pools were subjected to two molecular techniques: a nested-PCR assay, and a fluorescent amplicon generation (FLAG) real-time PCR assay, both based on the multi-copy B1 target, were performed. One pooled sample of gills from C. gigas and one pooled sample of haemolymphs from T. decussatus were assessed as positive for T. gondii DNA by both techniques. The results demonstrated the presence of T. gondii in edible farmed C. gigas and T. decussatus and indicate that there may be a considerable health threat involved in eating contaminated raw shellfish.

L’intensificazione delle attività di maricoltura, intese sia come produzioni d’avannotteria sia come produzioni d’ingrasso, comporta il frequente verificarsi di condizioni predisponenti l’emergenza di malattie diffusive, fra cui in primis quelle di natura batterica. Per tale motivo nelle specie ittiche allevate nel bacino del Mediterraneo, nonostante le patologie batteriche di maggior impatto economico vengano riferite ad un numero ristretto di agenti eziologici [es. Photobacterium damselae subsp. piscicida, Listonella (Vibrio) anguillarum e Tenacibaculum maritimum], si sta registrando una crescente attenzione verso quegli agenti batterici patogeni opportunisti o non usuali che possono determinare malattia sotto la spinta di fattori ambientali e gestionali predisponenti. A tale proposito si segnalano alcuni episodi di malattia osservati nel periodo 2009-2011 in spigole (Dicentrarchus labrax) ed orate (Sparus aurata) allevati in Italia, nel corso dei quali sono state isolate specie batteriche fino ad oggi ritenute di non comune riscontro nella maricoltura nazionale, quali in particolare Vibrio splendidus, V. harveyi, V. mediterranei, Shewanella putrefaciens, Aeromonas salmonicida subsp. salmonicida e A. sobria. Vengono riportate le osservazioni cliniche e anatomopatologiche correlate agli episodi morbosi presi in considerazione. Vibrio splendidus è stato isolato in una decina di casi in corso di episodi di mortalità larvale verificatisi in spigole ed orate in diverse avannotterie italiane e, sempre a livello sistemico, anche da spigole di taglia commerciale che mostravano mortalità a stillicidio in presenza di grave malattia branchiale, ascite, splenomegalia ed ectasia del tratto gastro-intestinale. Già segnalato quale agente causale di gravi episodi patologici in larve di merluzzo (Gadus morhua) e rombo (Psetta maxima) allevati rispettivamente in Norvegia ed in Spagna, V. splendidus potrebbe quindi avere un ruolo eziologico di rilievo nel determinismo di malattia anche in pesci marini mediterranei. L’isolamento di Vibrio harveyi è stato condotto a livello cutaneo e sistemico da due riproduttori di spigola che presentavano al decesso gravi lesioni cutanee quali ulcere profonde ed estese aree necrotiche, similmente a quanto già riportato in recenti segnalazioni condotte nel Mediterraneo su orate e spigole. Shewanella putrefaciens è stata isolata a livello sistemico in due casi, sia da avannotti che da soggetti adulti di spigola che presentavano concomitanti infezioni parassitarie (es. parassitosi branchiali da Ichthyobodo sp.) o batteriche. Sebbene descritto quale agente patogeno opportunista soprattutto in pesci dulciacquicoli, questo microrganismo è stato segnalato recentemente quale agente di malattia anche in pesci marini d’allevamento. Di particolare interesse appare l’isolamento di Aeromonas salmonicida subsp. salmonicida nel corso di un episodio morboso osservato in spigole adulte allevate a terra che presentavano lieve mortalità, splenomegalia e congestione cerebrale. Parallelamente, la stessa specie è stata isolata da giovanili di spigola allevati in gabbia in Croazia che presentavano splenomegalia associata a moderata mortalità. Ben descritto quale agente patogeno in salmonidi allevati sia in acqua dolce sia in mare e nel rombo allevato in areali atlantici, A. salmonicida subsp. salmonicida potrebbe rappresentare un futuro fattore di rischio sanitario per la maricoltura mediterranea. Sono poi da segnalare alcuni isolamenti di A. sobria, A. veronii biovar veronii e V. mediterranei condotti in corso di episodi morbosi registrati in situazioni di elevata densità di biomassa e/o di concomitanti fattori stressanti di natura ambientale che hanno rappresentato senz’altro importanti condizioni predisponenti l’insorgenza della malattia. Obiettivo comune dei laboratori diagnostici e di ricerca operanti nel campo dell’ittiopatologia in Italia dovrebbe essere quello di raccogliere e conservare gli isolati di questi “potenziali patogeni emergenti” al fine di condurne la caratterizzazione geno-fenotipica ai fini epidemiologici, studiarne i fattori di virulenza e patogenicità e monitorarne l’eventuale profilo di antibiotico resistenza.

The separation of Clinostomum complanatum Rudolphi, 1814 and Clinostomum marginatum Rudolphi, 1819 has long been unclear. Recent data confirm the validity of the junior species, C. marginatum , by ∼ 1% differences in its 18S rDNA sequences. We collected adults and metacercariae of C. complanatum and C. marginatum and found reliable morphological differences in the genital complex at both developmental stages. In addition, we identified basic morphometrics (distance between suckers, body width) in metacercariae that may be useful for discriminating the species. The morphological differences were supported by the comparison of sequences of internal transcribed spacers of ribosomal DNA and of the mitochondrial gene cytochrome c oxidase I (COI) from 39 specimens. In 36 specimens, the average divergence between the species was 7.3% in ITS and 19.4% in COI sequences. Two specimens from North America and 1 from Europe had sequences that did not allow them to be clearly allied with either species.

L’anguilla europea (Anguilla anguilla) ha sempre rappresentato una delle specie ittiche più importanti per la pesca e per l’acquacoltura a livello nazionale ed internazionale. La progressiva diminuzione degli stock naturali, conseguente agli eccessivi sforzi di pesca ed al progressivo degrado degli habitat naturali, ha spinto la Commissione Europea ad emanare nel 2007 il Regolamento N. 1100/2007 del Consiglio che istituisce misure per la ricostituzione dello stock di anguilla europea. Dal 13 marzo 2009, la specie A. anguilla è stata inoltre inclusa nell’appendice II della Convenzione di Washington e nell’Allegato B del Reg. CE n.338/97, inerenti la protezione di specie di flora e fauna selvatiche attraverso il loro controllo commerciale. Alla luce della crescente attenzione verso l’applicazione di misure volte alla protezione/tutela dell’anguilla europea, va tenuto in debita considerazione anche l’impatto che le malattie diffusive possono esercitare sullo stato sanitario e sulla capacità riproduttiva delle anguille. In particolare, le problematiche di natura parassitaria sono già state indicate in passato quale possibile concausa della progressiva diminuzione degli stock naturali di anguilla, come nel caso dell’introduzione e della rapida diffusione del nematode Anguillicola crassus nelle popolazioni europee di anguilla a partire dalla seconda metà degli anni ‘80. Al fine di valutare la composizione della parassitofauna in anguille selvatiche ed allevate in Italia, da ottobre 2010 ad aprile 2011 sono stati sottoposti ad esami parassitologici 86 soggetti, di cui 51 provenienti da un allevamento intensivo sito in provincia di Ferrara e 35 pescati in acque libere. La presenza di parassiti è stata rilevata in 82 (95,3%) delle anguille esaminate, in particolare in 48 (94,1%) dei soggetti allevati ed in 34 (97,1%) di quelli selvatici. La composizione della parassitofauna nelle due categorie prese in considerazione ha mostrato notevoli differenze di ordine qualitativo e quantitativo. Solo nelle anguille selvatiche provenienti da ambienti salmastri è stata individuata la presenza di trematodi digenei riconducibili alle specie Bucephalus anguillae (Bucephalidae) (25,7%), Brachyphallus crenatus (Hemiuridae) (8,5%) e Deropristis inflata (Deropristidae) (5,7%), di larve cistacante di acantocefali (17,4%) e di nematodi allo stadio larvale appartenenti al genere Contracaecum (Anisakidae) (11,4%). Diversamente, nel soggetto selvatico pescato nel Lago di Garda e nelle 23 ceche catturate dopo la rimonta in acque interne dalla costa tirrenica, i reperti parassitari erano riferibili solo a crostacei del genere Ergasilus ed al mixosporidio Myxidium giardi nel primo caso e, nelle ceche, al ciliato Ichthyophthirius multifiliis. Va evidenziato come l’origine dell’infezione da I. multifiliis possa essere ricondotta alla temporanea stabulazione delle ceche nelle vasche del centro di raccolta prima del conferimento per le analisi. Per quanto concerne M. giardi, questo mixosporidio è risultato diffuso in tutte le categorie considerate, seppure con percentuale di positività molto più elevata nelle anguille allevate (76,4% vs. 8,5%), indicando l’estrema diffusione di questo mixosporidio in tutti gli ambienti salmastri e dulciacquicoli dove sono presenti anellidi Tubificidae, ospiti alternati del parassita. Fra i reperti parassitari di maggiore rilievo nelle anguille d’allevamento va senz’altro annoverato il nematode Anguillicola crassus (74,5%), reperito solo nei soggetti allevati. Sebbene nella maggior parte dei casi siano state evidenziate intensità d’infestazione

Viral encephalopathy and retinopathy (VER), otherwise known as viral nervous necrosis (VNN), is a neuropathological condition affecting > 40 species of fish. Although VER affects mainly marine fish, the disease has also been detected in certain species reared in freshwater environments. There are relatively few reports concerning the disease in freshwater species, and there is not much information on clinical signs. Nevertheless, the most common clinical findings reported from affected freshwater species are consistent with the typical signs observed in marine species. In this paper we describe the main clinical signs and the laboratory results associated with the detection of a betanodavirus in hybrid striped bass x white bass (Morone saxatilis x Morone chrysops) and largemouth bass Micropterus salmoides, reared in a freshwater environment. We also detected the virus by real-time PCR and isolated it in cell culture from a batch of pike-perch Sander lucioperca farmed in the same system.

Results of a survey on zoonotic parasites in wild freshwater fish from Italy carried out in 2009-2011 are reported and discussed.

SUMMARYAn amendment of the family Sinuolineidae (Myxosporea) is proposed in order to include a newly described genus Latyspora n. gen. The type species Latyspora scomberomori n. gen. n. sp. is a coelozoic parasite in the kidney tubules of Scomberomorus guttatus. In addition to the morphological and molecular characterization of L. scomberomori n. gen. n. sp., we also present novel SSU rDNA data on Sphaerospora testicularis, a serious parasite of Dicentrarchus labrax. Performed phylogenetic analyses revealed that both species cluster within the marine urinary clade encompassing the representatives with a shared insertion within their V4 SSU rRNA region and grouping according to the shape of their spores’ sutural line and their similar tissue tropism in the host. Sphaerospora testicularis is the closest relative to Parvicapsula minibicornis within the Parvicapsula subclade and L. scomberomori n. gen. n. sp. is the basal species of the Zschokkella subclade. The phylogenetic position of S. testicularis, outwith the basal Sphaerospora sensu stricto clade, and its morphology suggest it being a non-typical Sphaerospora. The sequence data provided on S. testicularis can help in future revisions of the strongly polyphyletic genus Sphaerospora. We recommend re-sequencing of several sphaerosporids as an essential step before such taxonomic changes are accomplished.

Viscera and muscle of a total of 40 wild 1–2 kg European sea bass (Dicentrarchus labrax) from Northeast Atlantic (FAO area 27) were examined for Anisakidae larvae detection by digestion method. Extracted parasites were counted and mean intensity was calculated. Parasites were identified by genetic/molecular markers (allozymes and sequences analysis of the mtDNA cox2 gene) as belonging to the species Anisakis simplex (sensu stricto). In viscera, the main localisations of the larvae were under the gastric serosa, where several parasites alive and dead were found, and intestinal serosa. The visceral prevalence was 0.950 and the mean intensity was 96.39. The main localisation of A. simplex (s.s.) in edible parts was in belly muscles, with a prevalence of 0.425 and a mean intensity of 1.9. This is the first record on the prevalence and mean intensity of A. simplex (s.s.) in European sea bass muscle. This finding has an important consequence on epidemiology of anisakiasis and public health risk assessment.

Tetracapsuloides bryosalmonae (Myxozoa, Malacosporea) rappresenta l’agente eziologico della Malattia Proliferativa Renale (1-6), importante sindrome immunopatica ad eziologia parassitaria dei salmonidi (3). Sebbene questa malattia sia descritta in Italia da lungo tempo nelle trote d’allevamento, l’agente eziologico non risulta ancora segnalato nei briozoi (3-6), che rappresentano gli ospiti invertebrati necessari per il completamento del ciclo biologico e per la trasmissione del parassita all’ospite pesce (2-5). Nell’ambito di un Progetto di Ricerca Corrente finanziato dal Ministero della Salute, nel periodo dicembre 2008-ottobre 2009 sono state condotte ricerche volte a individuare la presenza di T. bryosalmonae nei briozoi e la sua attuale diffusione in troticolture storicamente infette, di Veneto e Friuli Venezia-Giulia. Sono stati campionati da 6 allevamenti intensivi un totale di 137 trote iridea (Oncorhynchus mykiss) e 1.389 colonie di briozoi. La presenza del parassita è stato studiato sia nei briozoi sia nelle trote tramite analisi parassitologiche tradizionali e molecolari.

The combined use of morphological and molecular studies allowed for the first time the recognition and description of the adult stage of Clinostomum cutaneum Paperna, 1964 from the grey heron Ardea cinerea L. in Kenya. A redescription of the metacercaria that infect Nile tilapia Oreochromis niloticus niloticus (L.) from the same aquatic environment is also presented. C. cutaneum differs from all other species of Clinostomum Leidy, 1856 in the shape of its uterus. Sequencing the rRNA confirmed the morphological similarity between adults from the grey heron and the metacercarial stage from tilapia, and a level of genetic similarity with the other previously sequenced Clinostomum spp. was observed. The need for a reorganisation of Clinostomum using both morphological and molecular methods is highlighted.

The European INCO-DEV BOMOSA Project (Integrating BOMOSA cage fish farming systems in reservoirs, ponds and temporary water bodies in Eastern Africa) intends to establish small scale fish farming in marginal water bodies in Kenya, Uganda and Ethiopia, creating rural aquaculture networks with the aim to economically integrate aquaculture with agriculture. In order to study veterinary and public health aspects in Bomosa fish farming systems, a parasitological survey on wild and cultured tilapias (Oreochromis niloticus niloticus) has been carried out from March 2007 to October 2008. A total of 982 tilapias - 685 from Kenya, 222 from Uganda and 75 from Ethiopia - were sampled and subjected to complete parasitological examination. During the survey, fish from different environments (258 from open water reservoirs, 445 from ponds and 279 from BOMOSA cages) were sampled in order to evaluate the factors which could influence the parasite diffusion and outbreak of diseases. Quantitative data, such as prevalence, intensity and abundance, and qualitative data are presented together with the main abiotic and biotic risk factors identified as relevant for veterinary and public health aspects in tilapia aquaculture.

We investigate the oligochaetes populations in the Nera River systems (central Italy) in order to highlight the occurrence of actinosporean stages in this natural environment. The survey was carried out during 2 years of monitoring 24 stations upstream and downstream the 12 trout farm along the rivers. In four of the 24 sites, oligochaetes releasing Echinactinomyxon and Aurantiactinomyxon types spore were collected. The actinospores observed were described morphologically, by transmission electron microscopy and by molecular analysis. Histological observations of the infected oligochaetes were carried out. A single morphotype of the collective group Echinactinomyxon were detected showing the presence of branches at the distal end of the caudal processes. The morphological and morphometrical characters showed that the Echinactinomyxon type herein described is a novel phenotype. This data has to be confirmed by the molecular comparison with sequences not yet available in GenBank. The molecular analysis of the Aurantiactinomyxon type, showed high genetic similarity (99.8%) with the two alternate stages of Chloromyxum truttae even if our type showed some differences in morphology stressing the importance of combining the two methods to avoid misidentifications. This is the first survey carried out in natural environment in Italy. Further analyses on fish population are required in order to detect myxosporean stage in the vertebrate hosts and confirm the molecular data.

After the preliminary study of prevalence of Anisakidae larvae in European sea bass (Dicentrarchus labrax)and the high prevalence found, a sample of 25 fresh specimens of European sea bass was examined for specie identification of anisakid nematodes by carefully research in viscera and whole body cavity. All larvae recovered were identified by light microscopy and molecular biology as belonging to the specie Anisakis simplex sensu stricto. The high prevalence (> 60 %) of Anisakis simplex s.str. is a serious danger for the consumer. Professional control of fish, immediate evisceration and destruction of viscera can be the way to limit this problem.

I molluschi bivalvi costituiscono in tutto il mondo, Italia compresa, una delle principali risorse alimentari. La capacità dei molluschi di filtrare elevati volumi di acqua rende tali organismi in grado di accumulare microrganismi potenzialmente patogeni per l'uomo. Questa abilità costituisce motivo di notevole preoccupazione soprattutto quando i molluschi sono ingeriti crudi o poco cotti. L'attuale normativa italiana prevede la ricerca di tossine algali, Escherichia coli, Salmonella spp. e metalli pesanti. Tuttavia, un'enorme quantità di deiezioni contenenti anche protozoi parassiti di interesse zoonosico viene riversata, attraverso reflui zootecnici e urbani o tramite le acque di dilavamento, nei fiumi. Questi, confluendo verso le acque costiere possono contaminare il mare e quindi i molluschi bivalvi. Tra le diverse specie di microrganismi parassitari, Giardia, Cryptosporidium e Toxoplasma assumono oggi notevole interesse in considerazione del loro possibile ruolo zoonosico; sulla base delle più recenti acquisizioni è stato, infatti, dimostrato che alcuni genotipi di questi parassiti possono essere condivisi dagli animali e dall'uomo. Isolati di Giardia e Cryptosporidium, anche zoonosici, sono stati evidenziati in alcuni esemplari di molluschi bivalvi (ostriche, cozze, vongole, noci di mare, ecc) in diverse zone costiere del mondo, mentre Toxoplasma, seppur ben descritto in mammiferi marini, risulta segnalato in un’unica occasione in mitili negli USA. In Italia, preliminari segnalazioni di cisti di Giardia e oocisti di Cryptosporidium in vongole della costa abruzzese e di coccidi riferibili a Toxoplasma in molluschi dell'alto Adriatico, hanno rappresentato il punto di partenza per l'avvio di indagini finalizzate a monitorare, in maniera approfondita, la diffusione di Giardia, Cryptosporidium e Toxoplasma in diverse specie di molluschi bivalvi autoctoni marini e lagunari allevati in banchi naturali e/o artificiali lungo le coste italiane. Tali indagini sono state condotte nell’ambito del progetto biennale “Protozoi di interesse zoonosico in molluschi bivalvi marini e lagunari: studio molecolare per una valutazione dell'inquinamento ambientale e del rischio per il consumatore” finanziato dal Ministero dell’Università e Ricerca (PRIN 2005). Questo opuscolo ha lo scopo di presentare i risultati di tutte le ricerche, condotte in Italia sull’argomento, illustrando nel contempo le attuali conoscenze su Cryptosporidium, Giardia e Toxoplasma, in modo da fare il punto della situazione sul potenziale ruolo dei molluschi bivalvi nella trasmissione di questi protozoi zoonosici al consumatore

La capacità dei molluschi bivalvi di filtrare elevati volumi di acqua li rende in grado di accumulare microrganismi potenzialmente patogeni per l’uomo. Tra questi Giardia spp. e Cryptosporidium spp. assumono oggi notevole interesse in relazione al possibile ruolo zoonosico. I protozoi flagellati appartenenti al genere Giardia (Metamonadida, famiglia Hexamitidae), sono parassiti che possono vivere nell’acqua e possono causare problemi di salute sia nell’ospite uomo che in diverse specie animali. Causa una zoonosi che si trasmette per via oro-fecale, causando nell’organismo ospite diarrea e disidratazione (4). Le spore dei parassiti appartenenti al genere Cryptosporidium (Apicomplexa, Coccidia) causano un’infezione parassitaria sia di importanza medica, sia veterinaria, che colpisce le cellule epiteliali del tratto gastro-intestinale, l’epitelio dei dotti biliari e del tratto respiratorio sia dell’uomo che di altri vertebrati. Anche in questo caso si tratta di una zoonosi trasmissibile per via oro-fecale, causando diarrea profusa (3, 4). A tal proposito 2340 molluschi bivalvi allevati e/o pescati in Emilia-Romagna (comprensorio Alto Adriatico), sono stati sottoposti ad indagini parassitologiche al fine di stabilirne il possibile ruolo nella trasmissione all’uomo di questi parassiti. Di questi soggetti, 780 sono stati inoltre sottoposti alla ricerca di metalli pesanti, quali cadmio, piombo e mercurio per i quali esiste un limite massimo indicato dal Regolamento CE 1881/2006 (7). È stata inoltre valutata anche la presenza del cromo, in quanto molto diffuso nell’ambiente e per il quale non esiste ad oggi una normativa specifica che ne sancisca i limiti.

Background: Non-tuberculous mycobacteria responsible for piscine mycobacteriosis usually produce visceral granulomas in both freshwater and marine species. In this study, the first occurrence of Mycobacterium chelonae associated with tumor-like lesions in the Russian sturgeon (Acipenser gueldenstaedtii) is reported. Fifteen sturgeons from an Italian fish farm showing skin and oral cauliflower-like masses were investigated by histopathology, bacterial culture and molecular analyses. Results: A total of 20 masses different in size located in the mouth and in pectoral and caudal fins (characterized by abundant calcium deposits and by mild to moderate granulomatous inflammation) were observed with a significant different degree of histological severity. All internal organs of the fish were negative for mycobacteria, Ziehl-Neelsen was positive in only one of the oral masses, whereas bacterial and PCR analyses detected the presence of M. chelonae for almost all the skin and oral masses. Based on these results, a calcinosis of dystrophic origin associated with a chronic granulomatous inflammation was considered as a primary diagnosis consequent to tissue injury in areas susceptible to trauma. Conclusions: We hypothesized that the occurrence of M. chelonae in farmed sturgeons was only a secondary event related to its presence in a stressful rearing environment and subsequent to a dystrophic calcinosis occurred in previously damaged tissues.