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O efeito do nível de desfolhação (20, 30, 40 e 50 cm acima do solo) sobre a produção de forragem e características morfogênicas e estruturais de Megathyrsus maximus cv. Zuri foi avaliado nos cerrados de Roraima. Os efeitos dos níveis de desfolhação sobre a produção de matéria seca verde, índice de área foliar e taxa de expansão de folhas foram ajustados ao modelo quadrático de regressão e os máximos valores registrados com cortes a 42,7; 42,2 e 41,1 cm acima do solo, respectivamente. A densidade populacional de perfilhos, taxa de aparecimento de folhas e número de folhas perfilho-1 foram inversamente proporcionais ao nível de desfolhação, ocorrendo o inverso quanto ao comprimento médio de folhas e taxa de senescência foliar. A eliminação de meristemas apicais foi incrementada com o aumento do nível de desfolhação. O vigor de rebrota foi direta e negativamente correlacionado com o nível de desfolhação. Pastagens de M. maximus cv. Zuri manejadas sob resíduo de 40 cm proporciona maior produtividade e eficiência de utilização da forragem, maior renovação de tecidos e estrutura do dossel mais favorável ao pastejo.

The effect of potassium levels (0, 50, 100 and 200 kg of K2O ha-1) on green dry matter (GDM) yield and morphogenetic and structural characteristics of Mesosetum chaseae (Luces) was evaluated under natural field conditions. Potassium fertilization increased significantly (P

The effect of defoliation levels (5, 10, 15, 20, 25 and 30 cm above soil level) on dry matter (DM) yield and morphogenetic and structural characteristics of Axonopus aureus was evaluated under field conditions in Roraima´s savannas. The effects of defoliation levels on the DM yields, absolute growth rate, number of leaves/plant, medium blade length, leaf area, leaf appearance and elongation rates were quadratics and maximum values recorded with cutting at 19.2; 17.5; 20.7; 27.2; 24.3; 20.5 e 25.9 cm above soil level. The population tiller density was directly proportional to the level of defoliation, while the opposite occurred for to leaf senescence rate. Apical meristem removing percentage was higher with increasing defoliation level. Aftermath regrowth showed close negative correlation with defoliation level. Pastures of A. aureus managed under residues between 15 and 25 cm above the ground provide greater productivity and efficiency of forage use, greater tissue renewal and a more favorable canopy structure for grazing. Se evaluó el efecto de los niveles de defoliación (5, 10, 15, 20, 25 y 30 cm sobre el suelo) sobre la producción de forraje y las características morfogénicas y estructurales de Axonopus aureus en condiciones naturales en la sabanas de Roraima. Los efectos de los niveles de defoliación sobre la producción de materia seca, tasa absoluta de crecimiento, número de hojas macollas-1, tamaño promedio de hoja, área foliar y tasas de aparición y expansión de hojas fueron cuadráticos y los valores máximos se registraron con cortes a 19,2; 17,5; 20,7; 27,2; 24,3; 20,5 y 25,9 cm sobre el suelo, respectivamente. La densidad de población de macollas fue directamente proporcional al nivel de defoliación, ocurriendo lo contrario con respecto a la tasa de senescencia de las hojas. La eliminación de meristemos apicales se incrementó con el aumento del nivel de defoliación. El vigor de rebrote se correlacionó directa y negativamente con el nivel de defoliación. Las pasturas de A. aureus manejadas bajo residuos entre 15 y 25 cm sobre el suelo proporciona mayor productividad y eficiencia en el uso del forraje, mayor renovación de tejidos y una estructura de dosel más favorable para el pastoreo. O efeito de níveis de desfolhação (5, 10, 15, 20, 25 e 30 cm acima do solo) sobre a produção de forragem e características morfogênicas e estruturais de Axonopus aureus foi avaliado sob condições naturais nos cerrados de Roraima. Os efeitos dos níveis de desfolhação sobre a produção de matéria seca, taxa absoluta de crescimento, número de folhas/perfilho, tamanho médio de folhas, área foliar e taxas de aparecimento e expansão de folhas foram quadráticos e os máximos valores registrados com cortes a 19,2; 17,5; 20,7; 27,2; 24,3; 20,5 e 25,9 cm acima do solo, respectivamente. A densidade populacional de perfilhos foi diretamente proporcional ao nível de desfolhação, ocorrendo o inverso quanto à taxa de senescência foliar. A eliminação de meristemas apicais foi incrementada com o aumento do nível de desfolhação. O vigor de rebrota foi direta e negativamente correlacionado com o nível de desfolhação. Pastagens de A. aureus manejadas sob resíduos entre 15 e 25 cm acima do solo proporcionam maior produtividade e eficiência de utilização da forragem, maior renovação de tecidos e estrutura do dossel mais favorável ao pastejo.

Submitted by Jashon Paulo Danelon (jashon_danelon@hotmail.com) on 2021-07-01T11:51:54Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO Jashon Paulo Danelon - Final UNESP -corrigido.pdf: 585060 bytes, checksum: b97b673be6caa17ba6e2d34649d6ac7d (MD5) Approved for entry into archive by Raiane da Silva Santos (raiane.santos@unesp.br) on 2021-07-01T16:45:27Z (GMT) No. of bitstreams: 1 danelon_jp_me_ilha.pdf: 585060 bytes, checksum: b97b673be6caa17ba6e2d34649d6ac7d (MD5) Made available in DSpace on 2021-07-01T16:45:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 danelon_jp_me_ilha.pdf: 585060 bytes, checksum: b97b673be6caa17ba6e2d34649d6ac7d (MD5) Previous issue date: 2021-05-21 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) O uso de produtos químicos, ocorre em todas as fases da cultura da cana-de-açúcar, desde o plantio até a colheita. Dentre os produtos utilizados estão inseticidas, herbicidas, fungicidas e maturadores. No entanto, com a mudança no cultivo devido a parada das queimadas e uso de colheita mecanizada houve uma intensificação na aplicação de fungicidas visando o controle de algumas doenças que começaram a atacar a cana-de-açúcar com mais intensidade. Além disso, os fungicidas sistêmicos vêm sendo estudados visando não apenas a proteção, mas ganhos fisiológicos que refletem em produtividade. Em vista disso, o presente trabalho teve por objetivo estudar o efeito de fungicidas e de um indutor de resistência na produtividade e qualidade da cana-de-açúcar cultivada. O experimento foi conduzido no campo, com delineamento em blocos casualizados com 4 repetições e 7 tratamentos, sendo eles a testemunha; trifloxistrobina 100 g ia.ha-1 + tebuconazol 200 g ia.ha-1; azoxystrobina 100 g ia.ha-1 + ciproconazol 40 g ia.ha-1; piraclostrobina 99,9 g ia.ha-1 + fluxapiroxade 50,1 g ia.ha-1; azoxystrobina 60 g ia.ha-1 + benzovindiflupir 30 g ia.ha-1; azoxystrobina 75 g ia.ha-1 + mancozeb 1.050 g ia.ha-1 e acibenzolar-s-methyl 12,5 g ia.ha-1, aplicados por meio de pulverizações em duas épocas. Para avaliação da produtividade foi realizada a estimativa de toneladas por hectare, e para qualidade de matéria prima foram avaliados os índices de açúcar total recuperável, sólidos solúveis, pureza, porcentagem de fibra e porcentagem de sacarose do suco. Concluiu-se que a aplicação de azoxystrobina + ciproconazol, piraclostrobina + fluxapiroxade, azoxystrobina + benzovindiflupir e azoxystrobina + mancozeb, aumentou a produtividade da variedade RB 86 7515 de cana-de-açúcar, mas não influenciou na qualidade da matéria-prima. The use of chemical products occurs at all stages of sugarcane cultivation, from planting to harvest. Among the products used are insecticides, herbicides, fungicides and ripeners. However, with the change in cultivation due to the stoppage of burning and the use of mechanized harvesting, it led to greater application of fungicides aimed at controlling some diseases that began to attack sugarcane with more intensity. In addition, systemic fungicides have been studied aiming not only protection, but physiological gains that reflect in productivity. In view of this, the present study aimed to study the effect of fungicides and a resistance inducer on the productivity and quality of cultivated sugarcane. The experiment was conducted in the field, with a randomized block design with 4 replications and 7 treatments, being the control; trifloxystrobin 100 g ia.ha-1 + tebuconazole 200 g ia.ha-1 ; azoxystrobin 100 g ia.ha-1 + cyproconazole 40 g ia.ha-1; pyraclostrobin 99,9 g ia.ha-1 + fluxapyroxade 50.1 g ia.ha-1 ; azoxystrobin 60 g ia.ha-1 + benzovindiflupir 30 g ia.ha-1 ; azoxystrobin 75 g ia.ha-1 + mancozeb 1,050 g ia.ha-1 and acibenzolar-s-methyl 12,5 g ia.ha-1, applied by spraying in two periods. To evaluate productivity, an estimate of tons per hectare was made, and for raw material quality, the total recoverable sugar, soluble solids, purity, fiber percentage and percentage of sucrose in the juice were evaluated. It was concluded that the application azoxystrobin + cyproconazole, pyraclostrobin + fluxpyroxade, azoxystrobin + benzovindiflupir and azoxystrobin + mancozeb, increased the productivity of the RB 86 7515 variety of sugarcane, but did not influenced the quality of the raw material. CAPES: 001

Tese de Doutoramento em Ciências da Saúde, O disco intervertebral é a unidade responsável por absorver o stress mecânico e proporcionar flexibilidade à coluna. Para isso, a composição e organização da matriz extracelular torna.se essencial para preservar o equilíbrio biomecânico deste. Contudo, esta patologia não é devidamente compreendida dada a sua complexidade e falta de modelos experimentais. A degeneração do disco compreende uma vasta apresentação clínica durante o envelhecimento tais como: fibrose, calcificação, hérnia ou apenas degeneração a nível molecular. Para além disto, a relação entre o fundo genético, o envelhecimento e o fenótipo patológico apresentado ainda não foram estabelecidos. Assim, caracterizamos o fenótipo do disco intervertebral de 3 raças de ratinhos com diferentes capacidades regenerativas na cartilagem aos 6 e 23 meses de idade: C57BL/6 (BL6), LG/J e SM/J. Cada espécie de ratinho apresentou uma progressão única de degeneração do disco a nível morfológico e do transcriptoma. Os LG/J mostraram uma grande prevalência de calcificação no disco intervertebral. Por outro lado, os SM/J apresentaram uma degeneração acelerada do compartimento, com desorganização da matriz, morte celular e aumento da deposição de tecido fibrótico em comparação com os BL6. Estes resultados, mostram que a composição genética é um fator essencial no desenvolvimento degeneração do disco e do seu fenótipo durante o envelhecimento. Estudos recentes mostraram também uma associação importante senescência, degeneração do disco e catabolismo de matiz celular, quer em modelos animais quer em humanos. De facto, a eliminação de células positivas para o marcador de senescência, p16Ink4a, diminuiu a patologia associada a diferentes doenças do envelhecimento, incluindo a degeneração do disco intervertebral. Assim, caracterizamos pela primeira vez a evolução da senescência nas células do disco intervertebral de ratinhos jovens e envelhecidos e avaliamos o fenótipo de ratinhos envelhecidos p16Ink4a “condition knockout” (cKO). Adicionalmente, exploramos o potencial terapêutico da combinação de Dasatinib (D) e Quercetina (Q), na diminuição de células senescentes no disco e na prevenção da degeneração do mesmo durante o envelhecimento. Estes resultados sugerem que a regulação da senescência é importante na promoção e manutenção da homeostasia das células do disco, e que pode ser usado com alvo terapêutico para a prevenção e tratamento da degeneração do disco durante o envelhecimento., The intervertebral disc is a critical structure of the spinal column, responsible for mechanical loads and flexibility. Importantly, disc extracellular matrix (ECM) is complex and highly contributes to the biomechanical properties of the disc. However, it is still not well understood due to its complexity and lack of experimental models. Disc degeneration presents a broad spectrum of clinically degenerative phenotypes during aging, such as fibrosis, calcification, herniation, and mild degeneration. Moreover, the interaction between genetic background and aging, degenerative outcomes has not been established. Hence, we characterized the spinalphenotype of 3 mouse strains with varying cartilage-regenerative potential at 6- and 23-months: C57BL/6 (BL6), LG/J, and SM/J. Interestingly, each strain presented an unique aging phenotype and transcriptome modulation during intervertebral disc aging. LG/J mice showed a high prevalence of dystrophic disc calcification in caudal discs, while SM/J evidenced accelerated degeneration compared to BL6, with cellular disorganization, cell loss together, and fibrosis of the NP. These studies suggested that disc aging and degeneration depends on the genetic background and involves changes in various molecular pathways, which might help to explain the diverse phenotypes seen during disc disease. Additionally, recent studies have shown that senescence may play a role in age-related disc degeneration and matrix catabolism in humans and mouse models. Clearance of p16Ink4a, one of the main markers of cell senescence, positive cells reduce the degenerative phenotype in age-associated diseases, including disc degeneration. Therefore, we first characterized the senescence status of discs in young and old mice and accessed the degeneration status of aged p16Ink4a conditional knockout mice. Additionally, we explored the potential of Dasatinib and Quercetin combination in targeting senescence in disc compartment and preventing progression of the disease with age. These results suggested that senescence plays an essential role in governing disc homeostasis during aging and can be used as a therapeutic target to treat disc disease., Financial support for this PhD work was provided by Fundação para a Ciência e a Tecnologia (FCT) fellowship (PD/BD/128077/2016) from MD/PhD Program of the University of Minho. Additionally, this study was supported by the grants from the National Institute of Arthritis and Musculoskeletal and Skin Diseases (NIAMS) R01AR055655, R01AR064733 and R01AR074813 to Makarand V. Risbud.

Resumo A espiritualidade é a busca por um significado da vida, a autoestima é o apreço em relação a si mesmo e ambas vem sendo amplamente exploradas como ferramenta terapêutica nos últimos anos. O presente estudo tem por objetivo avaliar a espiritualidade e autoestima de idosos de uma instituição de longa permanência e verificar a associação entre estas variáveis. Trata-se de um estudo transversal, quantitativo, com coleta de dados primários e amostra não probabilística. A avaliação da espiritualidade e da autoestima, foi realizada por meio da aplicação da Escala de Bem-Estar Espiritual (EBE) e da Escala de Autoestima de Rosenberg, respectivamente, em 37 idosos residentes no Condomínio do Idoso, Maringá-PR, em dezembro de 2018. Todos os idosos que participaram do estudo apresentaram escore alto para todas as variáveis estudadas: Bem- estar Religioso, Bem- estar existencial, e Autoestima. A autoestima é influenciada por aspectos que compõe a espiritualidade e ambas são capazes de aprimorar a saúde.

A mudança do perfil demográfico no mundo globalizado impulsionou a necessidade de entender o processo de envelhecimento, tornando-se este um verdadeiro desafio para o mundo contemporâneo. Este trabalho tem como objetivo analisar a prevalência de doenças crónicas não transmissíveis (DCNT) nos idosos, bem como analisar a sua associação com os fatores sociodemográficos. Em termos metodológicos, recorreu-se a uma abordagem quantitativa e a um desenho não experimental transversal e observacional, pelo que os dados foram recolhidos num único momento. A população é constituída por uma amostra não probabilística por conveniência, composta por 34 idosos, com idade igual ou superior a 60 anos, de ambos os sexos, residentes no município de São Luís, Maranhão (MA), que frequentavam o grupo de idosos do Centro Especializado em Reabilitação de Idosos. Para o levantamento do perfil sociodemográfico e análise do estilo de vida, foi aplicado um questionário semiestruturado com múltiplas questões entre as quais perguntas sobre o perfil sociodemográfico. Relativamente aos resultados, verificou-se que a maior prevalência de DCNT acon-teceu entre os idosos do sexo feminino (79,41%), que se encontravam na faixa etária entre 60 e 65 anos, enquanto os do sexo masculino, estavam entre 66 e 70 anos de idade. A média de idade dos participantes foi de 67,09 anos, tendo o mais novo 60 e o mais velho 78 anos. Foi prevalente a cor de pele não branca (52,94%), casados (61,76%), oriundos da capital (41,18%) e moravam no máximo com três pessoas no seu domicílio (32,35%). Dos idosos avaliados, 55,88% apresentaram pelo menos uma DCNT e o número médio de patologias foi de 2,0±1,4, não havendo diferenças estatisticamente significativas entre os sexos (p=0,935). Em relação às doenças crónicas não transmissíveis, a hipertensão foi a doença mais frequente na população em estudo, acometendo 51,61% dos idosos, em seguida a obesidade (29,03%) e, por último, a diabetes mellitus (19,35% %). Este estudo ressalta a necessidade de constante monitoramento da situação de saúde de pessoas acima de 60 anos, com o intuito de melhorar o estado geral de saúde e redução da incidência de comorbidades nessa faixa etária.

Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES How a cell determines a given phenotype upon damaged DNA is an open problem. Cell fate decisions happen at cell cycle checkpoints and it is becoming clearer that the p53 pathway is a major regulator of cell fate decisions involving apoptosis or senescence upon DNA damage, especially at the G1/S checkpoint. However, recent results suggest that this pathway is also involved in autophagy induction upon DNA damage. In this work, we using logical models that are well-suited to capture salient dynamical properties of regulatory networks. In this formalism, cell fates are associated with model attractors (stable states or cyclic attractors) whose identification and reachability properties are particularly relevant. Therefore, we dedicate attention to logical models on the G1/S cell cycle checkpoint regulation contemplating the role of miR-34a and miR-16 in response to DNA damage. First, we investigate whether the coordinate action between miR-34a and miR-16 can explain experimental results in multiple cell lines of (NSCLC) and (CTCL). For that, we developed a Boolean model of the G1/S checkpoint regulation contemplating the regulatory influences of both miRNAs. From the model analysis, our results suggest that miR-34a is the main controller of miR-16 activity in NSCLC and CTCL. Additionally, we also proposed the first Boolean model of the transfection of miR-16 that can induce a DNA damage response and induced G1/S checkpoint considering the decision between three phenotypes (tristability): apoptosis, senescence, and autophagy in U87 glioblastoma cells. We also predict that the positive feedback involving ATM, miR-16, and Wip1 has an influence on the tristable state. The model predictions were compared to experiments of gain and loss of function in other three different cell lines (MCF-7, A549, and U2OS) presenting outstanding agreement. For p53-deficient cell lines, our model contemplates that the alternative AMPK pathway can compensate for this deficiency. We conclude that the induction of different phenotypes is stochastic in the U87 cell line and others. This thesis provides two new aspects of miRNAs functions, namely the significance of miR-34a that regulates the miR-16 activity and triggers DNA Damage mechanism by the manipulation of miR-16 in cancer cells. Como uma célula determina um certo fenótipo sobre o DNA danificado é um problema aberto. Decisões de destino celular acontecem em pontos de verificação do ciclo celular e está se tornando mais claro que a via do p53 é um importante regulador das decisões de destino celular envolvendo apoptose ou senescência após dano ao DNA, especialmente no ponto de verificação G1 / S. No entanto, resultados recentes sugerem que esta via também está envolvida na indução de autofagia após dano ao DNA. Neste trabalho, usamos modelos lógicos que são adequados para capturar propriedades dinâmicas salientes de redes regulatórias. Nesse formalismo, os destinos das células estão associados a atratores do modelo (estados estáveis ou atratores cíclicos), cujas propriedades de identificação e acessibilidade são particularmente relevantes. Portanto, dedicamos atenção aos modelos lógicos na regulação do ponto de verificação do ciclo celular G1 / S contemplando o papel de miR-34a e miR-16 em resposta a danos no DNA. Primeiro, investigamos se a ação coordenada entre miR-34a e miR-16 pode explicar os resultados experimentais em várias linhagens celulares de NSCLC e CTCL. Para tanto, desenvolvemos um modelo booleano de regulação do checkpoint G1/S contemplando as influências regulatórias de ambos os miRNAs. A partir da análise do modelo, nossos resultados sugerem que miR-34a é o principal controlador da atividade de miR-16 em NSCLC e CTCL. Além disso, também propusemos o primeiro modelo booleano do efeito da transfecção de miR-16 que pode induzir uma resposta de dano ao DNA em G1/S. Ele contempla a decisão entre três fenótipos (triestabilidade): apoptose, senescência e autofagia na linhagem U87 de glioblastoma. Também prevemos que o feedback positivo envolvendo ATM, miR-16 e Wip1 controla o estado tristável. As previsões do modelo foram comparadas a experimentos de ganho e perda de função em outras três linhagens celulares diferentes (MCF-7, A549 e U2OS) apresentando excelente concordância. Para linhagens de células deficientes de p53, nosso modelo contempla que a via alternativa de AMPK pode compensar essa deficiência em diferentes fenótipos de forma estocástica na linhagem celular U87 e outras. Esta tese fornece dois novos aspectos das funções dos miRNAs, a saber, a importância do miR-34a que regula a atividade do miR-16 e o disparo do mecanismo de dano ao DNA pela manipulação do miR-16 em células cancerosas.

Aging is responsible for characteristic human facial changes. The purpose of this thesis is to identify and discuss possible factors that affect facial aging, which involves bone remodelling caused by progressive resorption of craniofacial bones. During the life, muscles become weaker as a result of muscle aging and activity, which leads to atrophy. In addition, their attachment to bones changes because of a decline in bone mass. Skin elasticity reduces with age, thus wrinkles are formed, skin colour changes and blood flow is impaired. Sun exposure is one of the extrinsic factors that have a significant effect on the facial senescent changes as it daily influences human skin by decreasing skin water content and impairing structures of collagen, elastin, and vessels. Smoking causes ischemia and wrinkles. Chronic skin diseases appear due to alcohol abuse, increased stress and air pollution. Sleep deficiency and low relative humidity environment contribute to skin dehydration and dryness. Skin can be protected and maintained youthful for longer by having a healthy diet. Aside from extrinsic factors, senescent facial changes are also influenced by various genes, a hormonal change, and bone remodelling. Nowadays, people age more slowly because of medical progress, better health care, new findings, and...

A mudança do perfil demográfico no mundo globalizado impulsionou a necessidade de entender o processo de envelhecimento, tornando-se este um verdadeiro desafio para o mundo contemporâneo. Este trabalho tem como objetivo analisar a prevalência de doenças crónicas não transmissíveis (DCNT) nos idosos, bem como analisar a sua associação com os fatores sociodemográficos. Em termos metodológicos, recorreu-se a uma abordagem quantitativa e a um desenho não experimental transversal e observacional, pelo que os dados foram recolhidos num único momento. A população é constituída por uma amostra não probabilística por conveniência, composta por 34 idosos, com idade igual ou superior a 60 anos, de ambos os sexos, residentes no município de São Luís, Maranhão (MA), que frequentavam o grupo de idosos do Centro Especializado em Reabilitação de Idosos. Para o levantamento do perfil sociodemográfico e análise do estilo de vida, foi aplicado um questionário semiestruturado com múltiplas questões entre as quais perguntas sobre o perfil sociodemográfico. Relativamente aos resultados, verificou-se que a maior prevalência de DCNT aconteceu entre os idosos do sexo feminino (79,41%), que se encontravam na faixa etária entre 60 e 65 anos, enquanto os do sexo masculino, estavam entre 66 e 70 anos de idade. A média de idade dos participantes foi de 67,09 anos, tendo o mais novo 60 e o mais velho 78 anos. Foi prevalente a cor de pele não branca (52,94%), casados (61,76%), oriundos da capital (41,18%) e moravam no máximo com três pessoas no seu domicílio (32,35%). Dos idosos avaliados, 55,88% apresentaram pelo menos uma DCNT e o número médio de patologias foi de 2,0±1,4, não havendo diferenças estatisticamente significativas entre os sexos (p=0,935). Em relação às doenças crónicas não transmissíveis, a hipertensão foi a doença mais frequente na população em estudo, acometendo 51,61% dos idosos, em seguida a obesidade (29,03%) e, por último, a diabetes mellitus (19,35% %). Este estudo ressalta a necessidade de constante monitoramento da situação de saúde de pessoas acima de 60 anos, com o intuito de melhorar o estado geral de saúde e redução da incidência de comorbidades nessa faixa etária.

En el cerebro adulto de la mayoría de los mamíferos el nicho neurogénico con mayor capacidad neurogénica es la zona ventricular-subventricular (V-SVZ). Esta región se encuentra distribuida a lo largo de las paredes de los ventrículos laterales. La capacidad neurogénica que presenta esta región se debe a la presencia de las denominadas células B. Además nos encontramos con otros tipos celulares como son las células tipo C o progenitores intermedios, las tipo A o migradoras y las tipo E o células ependimarias. Las células tipo B son capaces de dar lugar a las células tipo C que finalmente generan las células tipo A. En condiciones fisiológicas, las células tipo A migran principalmente hasta los bulbos olfatorios y una vez allí dan lugar a distintos tipos de interneuronas. Este proceso de migración se produce de manera tangencial a través de la vía migratoria rostral (RMS). Sin embargo, estas células también son capaces de migrar a otras zonas como el cuerpo calloso y generar otros tipos neurales como oligodendrocitos y astrocitos. Este proceso de neurogenesis se ha observado que se encuentra disminuido en pacientes de enfermedad de Alzheimer (EA) y en distintos modelos, pero se desconoce el motivo. Esta enfermedad se ha convertido en una gran preocupación en los últimos años debido al gran aumento de su incidencia como consecuencia del envejecimiento de la población. Los principales rasgos fisiopatológicos de la enfermedad de Alzheimer son la formación de placas amiloides, generadas por la agregación del péptido Ab, y la de los ovillos neurofibrilares como consecuencia de la hiperfosforilación de la proteína Tau. En ambos casos provocan una serie de procesos patológicos que van a desembocar en neurodegeneración. Además, existe una íntima relación entre el ciclo celular tanto con la neurogénesis, como con la EA. En este trabajo se pretende abordar la relación entre la EA y el proceso de neurogénesis que se produce en la V-SVZ. Para ello se utilizó un modelo murino de EA, el doble transgénico APP/PS1. Los resultados obtenidos demostraron que las células tipo A se encuentran acumuladas en la V-SVZ. De tal manera que esta acumulación se relaciona con una disminución de este tipo de células a lo largo de la RMS y de neuronas maduras en los bulbos olfatorios. Además, se traduce en una pérdida de capacidad olfativa. Para profundizar analizamos el ciclo celular de las células de la V-SVZ y vimos que una parte significativa se encuentran paradas en la fase G1. Esto podría deberse a un aumento de los niveles de Cdh1. Cdh1 se sobreexpresa como consecuencia de la respuesta al daño del ADN. Esta parada provoca que las células tipo A entren en senescencia. En conclusión, en ratones APP/PS1 las células tipo A entran en senescencia y pierden su capacidad de migrar a lo largo de la RMS. Esto contribuye a cambios morfológicos en la V-SVZ y a un fallo en la regeneración de los bulbos olfatorio y por tanto, de la capacidad de olfacción. In the adult mammalian brain, the ventricular-subventricular zone (V-SVZ) is the area with the greatest neurogenic capacity. This region is distributed along the walls of the lateral ventricles. The neurogenic capacity of this region is due to the presence of so-called neural stem cells (NSCs) or type B cells. In addition, there are other cell types such as C cells or intermediate progenitors, A cells or migrating cells, and E cells or ependymal cells. Type B cells are capable of giving rise to type C cells, which ultimately generate type A cells. Under physiological conditions, type A cells migrate mainly to the olfactory bulbs, where they give rise to different types of interneurons. This migration process occurs tangentially via the rostral migratory pathway (RMS). However, these cells are also able to migrate to other areas such as the corpus callosum and give rise to other neural types such as oligodendrocytes and astrocytes. This process of neurogenesis is decreased in Alzheimer's disease (AD) patients and in different models, but the cause is unknown. AD has become a major concern in recent years due to the large increase in its incidence as a consequence of the aging of the population. The main pathophysiological features of AD are the formation of amyloid plaques, generated by the aggregation of A peptide, and the formation of neurofibrillary tangles as a consequence of the hyperphosphorylation of Tau protein. In both cases, they cause a series of pathological processes that lead to neurodegeneration. Moreover, there is also a close link between the cell cycle and both neurogenesis and AD. The principal aim of this doctoral thesis is to provide some insight into the link between AD and the process of neurogenesis that occurs in the V-SVZ. We show, in a murine model of AD (the APP/PS1), that type A cells accumulate in the V-SVZ. Moreover, the accumulation is related to a decrease of type A cells in the RMS and to the amount of mature neurons in the olfactory bulbs. These changes translate into an increase in the index of odor discrimination. The cell cycle analysis revealed that a significant amount of V-SVZ cells are arrested in the G1 phase which could be due to an increase in Cdh1 levels. Cdh1 overexpression may be a consequence of the DNA damage response induced by the presence of Ab and/or oxidative stress. We also observe an increase of type A cells in a senescence state. Finally, we find an increase in apoptotic astrocytes which also could contribute to the failure in the neural migration. In conclusion, in the murine model of AD, APP/PS1, type A cells enter in a senescence state and lose their ability to migrate along the RMS. This contributes to morphological and functional changes in the V-SVZ and to a failure of olfactory bulb regeneration and thus olfactory capacity.

265 p. This research project was designed to acquire a deeper knowledge on how physiological changes during aging mayaffect the pharmacokinetics (PK) and pharmacodynamics (PD). Elderly adults are a vulnerable population due to thephysiological changes associated with age and the additional problems of polypharmacy and comorbidity diseases.Therefore, a better understanding of the clinical pharmacology of old age is important in the development ofpharmacometric strategies that could support dose selection in this special population. In order to establish if the useof predictive PK/PD models that include changes in the ADME processes as a function of age, already applied topediatrics, will also be also predictive in the geriatric population, the antihistamine drug bilastine was employed as aprobe drug. On the one hand due to the wide knowledge of the research team on this drug, and on the other hand as aPK/PD data package was available in geriatric patients to inform the model building and to validate the predictions.As a first step in this research project, a database was created using data from the public domain used to develop theequations that relate ADME processes with physiological metrics as a function of aging. These equations were thenused to develop the Senescence model. The mechanistic approach proposed in this research project integrated theavailable drug PK knowledge in adults as well as the impact of the physiological changes in elderly affecting the PKand/or PD of bilastine followed by the application of modelling and simulation techniques. The underlyingmechanisms affecting the PK of bilastine were elucidated by combining a compartmental model structure togetherwith principles of physiology related to distribution and elimination processes in order to determine the impact of keyphysiological parameters that were predictive of PK behavior of bilastine in adults and also in the geriatricpopulation. Moreover, considering that the proposed predictive model was built on a physiological basis, it was usedto predict PK in elderly patients with renal impairment with the aim of exploring the impact of this pathophysiological condition on bilastine PK. Overall, in both scenarios, the model's predictive performance wassatisfactory evaluated using available geriatric PK data indicating that the main assumptions concerning the agedependentprocesses determining the pharmacokinetics of bilastine, are overall well described. DK Dynakim; FAES FARMA: UF University of Florida

[Resumen]: El factor de transcripción NF-kβ es una familia de proteínas relacionada con multitud de eventos celulares, entre los que destacan la inflamación, el cáncer y la senescencia celular, por lo que la descripción de los mecanismos de activación y silenciamiento de esta ruta es esencial para el conocimiento acerca de estos procesos. El principal componente de NF-kβ es p65, el cual, es un activador de SASP. Este SASP está estrechamente relacionado con los procesos de la senescencia celular e inflamación, por lo que en este trabajo nos planteamos, mediante un desarrollo experimental basado en estudios moleculares, entender el papel de p65 en dichos procesos mediante su inducción en MSCs y la inhibición del la misma. Además, mediante la inhibición de p65 (usando MG-132, curcumina y JSH-23), no solo hemos podido validar su relación con la senescencia y la inflamación, si no, que la acción de estos inhibidores pone de relevancia su uso como senomórficos, con el fin de influir en futuras terapias celulares asociadas a paliar los efectos de la senescencia celular e inflamación. [Resumo]: O factor de transcripción NF-kβ é unha familia de proteínas relacionadas cunha multitude de eventos celulares, entre os que destaca a inflamación, o cancro e a senescencia celular, polo que a descripción dos mecanismos de activación e silenciamento desta ruta é esencial para o coñecemento de ditos procesos. O compoñent principal de NF-kβ é p65, o cal, é un activador de SASP. Iste SASP está estreitamente relacionado cos procesos de senescencia celular e inflamacuón, polo qué niste traballo planteamonos, mediante un desenvolvemento experimental basado en estudos moleculares, entender o papel de p65 en ditos procesos mediante a inhibición de p65 (MG-132, curcumina e JSH-23), non só puidemos validar a súa releción coa senescencia e a inflamación, se non, que a acción destes inhibidores pon de relieve o seu uso como senomórficos, có fin de influir en furturas terapias celulares asociadas a paliar os efectos da senescencia celular e a inflamación. [Abstract]: The transcription factor NF-β is a family of proteins related to a multitude of cellular events, including inflammation, cancer and cellular senescence, so the description of the mechanisms of activation and silencing of this pathway is essential for the understanding of these processes. The main component of NF-β is p65, which is an activator of SASP. This SASP is closely related to the processes of cellular senescence and inflammation, so in this work we aimed to know the role of p65 in these processes by means of an experimental development based on molecular studies and its induction in MSCs and its inhibition. Furthermore, by inhibiting p65 (MG-132, curcumin and JSH-23), we have not only been able to validate its relationship with senescence and inflammation, but the action of these inhibitors highlights its use as a senomorphic, in order to influence future cell therapies associated with alleviating the effects of cellular senescence and inflammation. Traballo fin de mestrado (UDC.CIE). Bioloxía molecular, celular e xenética. Curso 2020/2021

En maíz, el mejoramiento genético ha estado acompañado de cambios en el manejo, entre los que se destaca un aumento en la densidad de plantas a un ritmo de aproximadamente 1000 pl ha-1 año-1 (Duvick, 2005). Además, los híbridos modernos presentan una demora en la senescencia foliar o carácter staygreen (SG) (Rajcan & Tollenaar, 1999; Duvick, 2005) y entre ellos existe variabilidad para este rasgo (Kosgey et al., 2013; Acciaresi et al., 2014; Antonietta et al., 2014, 2016). Dado que el aumento de la densidad implica un estrés que acelera la senescencia foliar (Borrás et al., 2003; Antonietta et al., 2014) cabe preguntarse en qué medida la demora en la senescencia foliar del canopeo puede representar una ventaja en términos de rendimiento en contextos de alta densidad de siembra. A fin de analizar las posibles ventajas del carácter SG, trabajos previos han intentado cuantificar este rasgo de distintas maneras. Para este fin, la caída del área foliar durante el período reproductivo puede ajus¬tarse a una relación bilineal, con una fase inicial más lenta seguida de otra fase de caída del área foliar más rápida (Borrás et al., 2003). Así, entre otros parámetros relacionados al carácter SG se ha utilizado el momento en que cambia la tasa de senescencia (en sorgo, Borrell et al., 2000), y la velocidad de senescencia relativa durante la fase rápida (Borrás et al., 2003). Sin embargo, estos parámetros podrían no ser suficientes para reflejar situaciones donde el índice de área foliar (IAF) máximo es superior al IAF crítico. En este sentido, incluso a las densi¬dades recomendadas (i.e., 8 pl m-2 para zona núcleo en Buenos Aires) una demora en la senescencia foliar no se traduce en aumentos en la intercepción de luz sino a partir de estadios tardíos del llenado (Accia¬resi et al., 2014) debido a que el IAF máximo supera ampliamente al IAF por debajo del cual se afecta la intercepción de luz. Los objetivos de este trabajo son (i) detectar la presencia de variación genotípica en el perfil de intercepción de luz y senescencia foliar frente al aumento de la densidad de plantas; (ii) desarrollar una metodología para cuantificar la variación genotípica detectada en la senescencia del canopeo y (iii) establecer si la demora en la senescencia representa una ventaja de rendimiento en altas densidades. Estación Experimental Agropecuaria General Villegas Fil: Antonietta, Mariana. Universidad Nacional de La Plata. Instituto de Fisiología Vegetal; Argentina Fil: Antonietta, Mariana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Fisiología Vegetal; Argentina Fil: Girón Paula. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria General Villegas; Argentina Fil: Guiamet, Juan José. Universidad Nacional de La Plata. Instituto de Fisiología Vegetal; Argentina Fil: Guiamet, Juan José. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Fisiología Vegetal; Argentina

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico Durante seu ciclo de vida, plantas são constantemente expostas a mudanças ambientais que comprometem a produção de carboidratos. A depleção de energia resulta em acentuada reprogramação transcricional que sustenta a manutenção da homeostase energética. Dessa forma, vias catabólicas são geralmente ativadas levando a degradação de proteínas, lipideos e clorofila. Embora nossa compreensão atual acerca dos mecanismos que compõem a resposta de plantas ao déficit de energia tenha melhorado significativamente, ainda há muitas questões a serem abordadas. Portanto, essa tese é amplamente focada na compreensão (i) da autofagia como mecanismo de reciclagem de lipídeos e cloroplastos, (ii) da regulação transcricional das vias respiratórias alternativas durante condições de déficit de energia. Evidências tem demonstrado que a autofagia e o catabolismo de aminoácidos são peças- chaves na resposta de plantas à privação de energia. Apesar disso, pouco se sabe acerca do papel da autofagia na remobilização de substratos lipídicos para sustentar a produção de energia. Assim, primeiramente, sumarizamos estudos recentes que demonstram as múltiplas funções da autofagia no metabolismo lipídico. Em seguida, fornecemos evidências experimentais da importância da autofagia para a homeostase lipídica durante condições de déficit de energia. Nossos resultados demonstram que a ausência da autofagia afeta a mobilização de lipídeos de membrana e ativa degradação de lipídeos do cloroplasto, ao mesmo tempo que a produção de corpos lipídicos no citosol é comprometida. A degradação de cloroplastos é uma característica marcante da senescência natural e induzida por estresse, e o papel central da autofagia nesse processo foi amplamente caracterizado. Notavelmente, a degradação acentuada de componentes do cloroplasto em mutantes da autofagia (mutantes atg) reportada em vários estudos anteriores, sugere que outras vias de degradação do cloroplasto também atuem na remobilização dos componentes do cloroplasto. Dessa forma, foi observado anteriormente que a via de vesiculação do cloroplasto (CV) é altamente induzida em mutantes atg, contribuindo para seu fenótipo de senescência precoce durante condições de déficit de energia. Portanto, na segunda parte desta tese investigou-se a importância da via CV e sua coordenação com a autofagia durante condições de escuro prolongado. Assim, usando linhas mutantes RNAi para o gene CV, foi demonstrado que essa via desempenha um papel minoritário na resposta ao déficit de energia em Arabidopsis. A caracterização adicional de duplos mutantes para as vias CV e autofagia revelou a importância de CV na remodelação estrutural do cloroplasto de mutantes atg no escuro prolongado. No último capítulo, novas informações sobre componentes regulatórios que modulam a sobrevivência das plantas em condições de baixa energia foram revelados. Nesse contexto, o fator de transcrição WRKY45 foi identificado como um potencial componente da reprogramação metabólica sob escuro prolongado, atuando nos níveis de aminoácidos e ácidos orgânicos por meio de vias relacionadas ao estresse mitocondrial. Coletivamente, os dados obtidos descrevem novos mecanismos inerentes às respostas de plantas a condições de baixa energia. Os resultados são discutidos no contexto do conhecimento atual acerca metabolismo energético, autofagia e senescência em plantas. Palavras-chave: Autofagia. Estresse energético. Lipídeos. Metabolismo. Senescência. Throughout their life, plants are constantly challenged with environmental changes that compromises carbohydrate production. Energy deprivation triggers massive reprogramming of transcription, which further supports cellular energetic homeostasis. Therefore, catabolic pathways are generally activated leading to the catabolism of protein, lipid, and chlorophyll. Although our current understanding of plant mechanisms to overcome low energy conditions has significantly enhanced, there are still many open questions to be addressed. This thesis is therefore largely focused on understanding (i) the importance of autophagy as a mechanism of lipids and chloroplast recycling; and (ii) the transcriptional regulation of respiratory alternative pathways during low energy stress. Compelling evidence demonstrated that autophagy and amino acid catabolism are important factors of plant response to energy deprivation. This fact aside, the importance of autophagy on the remobilization of lipid substrates to sustain energy production remains unclear. Thus, we first summarized and discussed novel findings demonstrating the multifaceted roles of autophagy in lipid metabolism. Next, we provided experimental evidence of autophagy requirement to ensure lipid homeostasis during energy starvation conditions. Our findings revealed that autophagy disruption affects proper membrane mobilization and activates a general chloroplast lipid degradation program while failing to produce cytosolic lipid droplets. The degradation of chloroplasts is a hallmark of natural and stress-induced senescence, and a key role of autophagy in this process has been demonstrated elsewhere. Notably, the marked degradation of chloroplast components in mutants with disruption of autophagy (atg mutants) reported by several previous studies, raised the question whether other pathways of chloroplast degradation may also have a role in the remobilization of chloroplast components. It has been previously reported that the chloroplast vesiculation (CV) pathway is highly induced in atg mutants contributing with their early senescence phenotype during energy starvation. Thus, in the second part of this thesis the importance of CV and its coordination with autophagy under extended darkness was investigated. By using CV RNAi lines it was demonstrated that CV pathway plays a relatively minor role on Arabidopsis starvation response. However, further characterization of double mutants for CV and autophagy pathways highlighted the requirement of CV for chloroplast remodeling of atg mutants under darkness. Within the last chapter novel insights concerning the regulatory components that modulates plant survival under low energetic conditions are shown. To this end, the WRKY45 transcription factor was identified as a potential regulator of metabolic reprogramming, by precisely adjusting amino acid and organic acid response via a possible regulation of mitochondrial stress signaling components. Collectively, the results obtained here describe novel mechanisms underlying plant responses to low energy conditions. These findings are discussed in the context of our current knowledge concerning energetic metabolism, autophagy, and senescence in plants. Keywords: Autophagy. Energetic stress. Lipids. Metabolism. Senescence.

Submitted by Raquel Vasconcelos Guimarães de Castro (raquel.castro@unesp.br) on 2020-09-10T23:38:12Z No. of bitstreams: 1 Raquel V G de Castro - Tese Doutorado - FCAV - UNESP - 2020.pdf: 4503058 bytes, checksum: aea5b868322b1143cfc32c46de8a81b8 (MD5) Approved for entry into archive by Laudicélia Martins Arantes (lm.arantes@unesp.br) on 2020-09-11T16:43:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 castro_rvg_dr_jabo.pdf: 4503058 bytes, checksum: aea5b868322b1143cfc32c46de8a81b8 (MD5) Made available in DSpace on 2020-09-11T16:43:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 castro_rvg_dr_jabo.pdf: 4503058 bytes, checksum: aea5b868322b1143cfc32c46de8a81b8 (MD5) Previous issue date: 2020-07-15 Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) Células tronco pluripotentes induzidas (iPSC) são uma ferramenta promissora para o tratamento de doenças, seja através de seu uso na medicina regenerativa, com estudos clínicos in vitro, ou ainda em estudos na área básica para desvendar mecanismos fisiológicos e patológicos. No entanto, algumas limitações, como a idade avançada do doador, o estado de senescência celular ou até mesmo as condições da atmosfera gasosa utilizadas no cultivo in vitro podem diminuir a eficiência da reprogramação à pluripotência. Dessa forma, a presente tese teve como objetivo estudar os efeitos do oxigênio no cultivo de células iPSC de equino (eiPSC), sendo na reprogramação à pluripotência ou nas iPSC originadas. No capítulo 1 uma revisão de literatura foi realizada a fim de sustentar a hipótese e justificar o estudo. No capítulo 2, o efeito das diferentes tensões de oxigênio (tensão de oxigênio atmosférica – aproximadamente 20% O2; tensão de oxigênio reduzida - 5% O2; ou a mudanças da atmosfera gasosa de aproximadamente 20% O2 para 5% O2) foi estudado durante o processo de reprogramação celular à pluripotência. Para tanto, a eficiência de reprogramação em cada grupo foi considerada, e uma avaliação seriada, a cada 3 dias, da expressão de genes chave de pluripotência (OCT4, SOX2, REX-1 e NANOG), genes relacionados ao metabolismo da glicose (GAPDH, e PFKM), genes relacionados aos processos de fusão e fissão mitocondriais (MFN1 e DNM1L), e genes relacionados a resposta da célula à baixa tensão de oxigênio (HIF1α, HIF2α, e VEGFA), foram realizadas, através de uma análise descritiva. A eficiência de reprogramação encontrada foi maior para o grupo cultivado em baixo oxigênio (grupo B). A alta eficiência de reprogramação do grupo B teve aparente correlação com uma maior expressão de OCT4 e NANOG e menor expressão de MFN1. Por outro lado, os resultados encontrados para o GAPDH sugeriram uma correlação negativa com a eficiência de reprogramação, e os genes HIF1α e HIF2α apresentaram expressão com menores valores no grupo B do que nos demais. Os resultados encontrados comprovam a hipótese de que a tensão de oxigênio influenciou na reprogramação das células eiPSC, já que observamos mudanças na expressão gênica entre os grupos ao longo da reprogramação. Além disso, a eficiência de formação de colônias eiPSC em baixo oxigênio foi maior que em alto oxigênio. No capítulo 3, eiPSC de um animal de mais de 20 anos de idade foram obtidas e o efeito das mesmas diferentes tensões de oxigênio propostas no capítulo 2 foi estudado nessas células. A reprogramação das células do animal idoso foi possível, como demonstrado pela coloração positiva para fosfatase alcalina; expressão endógena de mRNA de genes relacionados à pluripotência (OCT4, SOX2, REX-1 e NANOG) em todas as colônias avaliadas; coloração positiva no ensaio de imunofluorescência para OCT4 e NANOG (todos os grupos), SOX2 (grupo 5% O2 e 20% para 5% O2) e TRA-1-60, TRA-1-81 e SSEA-1 (somente em 20% O2), demonstrando diferenças entre os grupos; a formação de corpos embrióides; e diferenciação celular espontânea nas três camadas germinativas embrionárias mesoderme, endoderme e ectoderme. Diferenças na morfologia das colônias de eiPSC geradas foram observadas, sendo que as células do grupo cultivado em 20% O2 apresentaram maior similaridade com células “naïve” e as células dos grupos cultivados em 5% O2 e 20% para 5% O2 maior similaridade com a morfologia de células “primed”. Diferenças significativas foram também observadas na expressão dos genes GAPDH, GLUT3, MFN1, HIF1α e HIF2α, relacionados ao metabolismo da glicose, fissão mitocondrial, e hipóxia, respectivamente, após a reprogramação. Nossos resultados demonstram que a derivação de eiPSC não foi prejudicada pela idade avançada do animal. Além disso, esse estudo é o primeiro a comparar o cultivo de iPSC de equino em alto e baixo oxigênio e a demonstrar que o oxigênio influencia no processo de reprogramação nesses animais, como indicado pela geração de células pluripotentes com diferentes perfis; nas condições testadas, a tensão de oxigênio mais baixa foi responsável por uma maior eficiência de reprogramação, em acordo com o demonstrado no capítulo 2, mas não favoreceu a pluripotência das eiPSC. Induced pluripotent stem cells (iPSC) are a promising tool for treating diseases, through their use in regenerative medicine, clinical trials, and studies in the basic area for unveiling physiological and pathological mechanisms. However, there still are some barriers for the obtention of these cells by reprogramming them to pluripotency. Limiting factors for the reprogramming process may come from the cells itself, as the advanced cellular donor age, high passage number in culture and the cellular senescence state; or they can be due to the culture conditions in vitro, as the gas atmosphere in which the cells are being cultured. Thus, the present thesis has the objective of studying the oxygen effects in the iPSC culture, in reprogramming to pluripotency and in the maintenance of the equine iPSC (eiPSC) obtained. In chapter 1 a literature review was made to give support to the hypothesis and justify this work. In chapter 2, the effect of different oxygen tensions (atmospheric oxygen tension – 20% O2 approximately; reduced oxygen tension – 5% O2; or the change of gas atmosphere from 20% O2 to 5% O2) was studied during reprogramming to pluripotency process. Therefore, the reprogramming efficiency was determined, and a serial evaluation, each 3 days, of the expression of key pluripotency genes (OCT4, SOX2, REX-1 and NANOG), genes related to cellular metabolism (GAPDH and PFKM), genes related to mitochondrial fusion and fission processes (MFN1 and DNM1L), and genes related to cellular response to low oxygen tension (HIF1α, HIF2α, and VEGFA), were performed. The reprogramming efficiency was higher in group cultured in low oxygen tension (group B). The high reprogramming efficiency in group B correlates with higher expression of OCT4 and NANOG in this group and lower expression of MFN1. On the other hand, GAPDH showed a negative correlation with the reprogramming efficiency and HIF1α and HIF2α genes presented a lower expression in group B compared to the other groups. Based on these results it is possible to confirm the hypothesis that the oxygen tension influenced reprogramming of eiPSC, and the efficiency of reprogramming in low oxygen is higher than in high oxygen. In chapter 3 we aimed to generate and maintain eiPSC derived from fibroblasts of a horse older than 20 years and to evaluate the effect of the same oxygen conditions, already proposed in chapter 2, on these cells. Reprogramming of the aged animal cells was possible, as shown by positive alkaline phosphatase staining; endogenous expression of mRNA of pluripotency-related genes (OCT4, SOX2, REX-1 and NANOG) in all evaluated colonies; immunofluorescence positive staining for OCT4 and NANOG (all groups), SOX2 (groups 5% O2 and 20%-to-5% O2) and TRA-1-60, TRA-1-81 and SSEA-1 (only in 20% O2), showing differences between the groups; the formation of embryoid bodies; and spontaneous cell differentiation in mesoderm, endoderm and ectoderm embryonic germ layers. The eiPSC colonies generated at 20% O2 presented with a more naïve-like morphology, while groups cultured in 5% O2 or 20% to 5% O2 presented a more primed morphology. Significant differences were also observed in the expression of GAPDH, GLUT3, MFN1, HIF1α and HIF2α, genes related to glucose metabolism, mitochondrial fission, and hypoxia, respectively, after reprogramming. Moreover, fibroblasts of the old animal proliferated slowly, as detected by the population doubling time assay, and TERT expression was only increased after reprogramming, suggesting the fibroblasts were senescent before reprogramming and a reversion of this state occurred. Our results show that the derivation of iPSC from an adult equine was not impaired by aging. Additionally, this study is the first to compare high- and low-oxygen cultures of equine iPSC and to demonstrate that oxygen influences the reprogramming process, as indicated by the generation of pluripotent cells with different profiles; under the tested conditions, the lower oxygen tension was responsible for a higher reprogramming efficiency rate, according to the results described in chapter 2, but did not favor the pluripotency of eiPSC. 2018/04009-6 2015/26818-5 2013/08135-2 (CEPID-CTC)

[ES] Los últimos avances acerca de la senescencia celular ponen en evidencia su relación con un amplio rango de enfermedades entre las que se incluye el cáncer, colocando a este proceso como una potencial diana terapéutica. De hecho, en los tejidos afectados por determinadas enfermedades se han encontrado acúmulos de células senescentes. Aunque la senescencia es un proceso biológico cotidiano en el organismo que estimula la remodelación tisular, su alteración de forma continuada puede provocar una inflamación crónica, que continua con fibrosis y acaba en tumor. Por ello, tanto su inducción controlada para alertar al sistema inmune como la eliminación de los acúmulos anormales de células senescentes son novedosas estrategias para combatir diferentes patologías. En la actualidad, los nanosistemas están destacando en medicina debido a las características intrínsecas de estos materiales que los hacen idóneos para sistemas de liberación de fármacos. Estos sistemas son capaces de dirigir fármacos potencialmente tóxicos para células sanas a regiones localizadas del organismo donde se manifiesta la patología para poder tratarla con una alta eficacia y así evitar la aparición de efectos secundarios. Este targeting se puede lograr funcionalizando las nanopartículas con diferentes moléculas señal que son reconocidas por los receptores de las células diana y utilizando puertas moleculares con el fin de liberar el fármaco encapsulado únicamente cuando la nanopartícula llegue a dicho objetivo. Por otro lado, la utilización de sistemas de comunicación entre nanopartículas es un campo inexplorado, pero con gran potencial debido al aumento de la eficacia por el aumento de la dosis en el objetivo, del control de la liberación y del diferente espectro de acción de cada fármaco. Un ejemplo de ello son los sistemas stigmergy donde las nanopartículas se comunican de manera indirecta. Este proyecto se basa en el desarrollo de un sistema stigmergy compuesto por dos nanopartículas mesoporosas de sílice. La primera nanopartícula posee una puerta molecular de PEG con el áptamero MUC-1 anclado covalentemente para dirigir esta nanopartícula específicamente a las células de cáncer de mama. Cuando esta nanopartícula está en presencia de este tipo de células se libera el fármaco encapsulado, el palbociclib, induciendo senescencia. Tras la senogénesis, se introduce una segunda nanopartícula con una puerta molecular de galactán que permite liberar su contenido, el navitoclax, únicamente en presencia de las células senescentes. Este segundo fármaco induce la senolisis de las células senescentes con el fin de eliminar completamente el tumor., [EN] The latest advances in cellular senescence show its relationship with a wide range of diseases, including cancer, making this process a potential therapeutic target. In fact, senescent cell clusters have been found in tissues affected by certain diseases. Although senescence is a daily biological process in the body that stimulates tissue remodeling, its alteration continuously can cause chronic inflammation, which continues with fibrosis and ends in tumor. Therefore, both its controlled induction to alert the immune system and the elimination of abnormal accumulations of senescent cells are novel strategies to combat different pathologies. Currently, nanosystems are standing out in medicine due to the intrinsic characteristics of these materials that make them ideal for drug delivery systems. These systems are capable of directing potentially toxic drugs for healthy cells to localized regions of the organism where the pathology manifests so that it can be treated with high efficiency and thus avoid the occurrence of side effects. This targeting can be achieved by functionalizing the nanoparticles with different signal molecules that are recognized by the target cell receptors and using molecular gates in order to release the encapsulated drug only when the nanoparticle reaches that target. On the other hand, the use of communication systems between nanoparticles is an unexplored field, but with great potential due to the increase in effectiveness due to the increase in the dose in the target, the control of the release and the different spectrum of action of each drug. An example of this is stigmergy systems where nanoparticles communicate indirectly. This project is based on the development of a stigmergy system composed of two silica mesoporous nanoparticles. The first nanoparticle has a PEG molecular gate with the MUC-1 aptamer covalently anchored to direct this nanoparticle specifically to breast cancer cells. When this nanoparticle is in the presence of this type of cells, the encapsulated drug, palbociclib, is released, inducing senescence. After senogenesis, a second nanoparticle is introduced with a molecular galactan gate that allows its content, the navitoclax, to be released only in the presence of senescent cells. This second drug induces senolysis of senescent cells in order to completely eliminate the tumor.

In order to evaluate the forage productivity and the morphogenic and structural characteristics of Megathyrsus maximus cultivars (Massai, Mombasa, Kenya, Tamani, Tanzania and Zuri), an experiment was conduct under natural environmental conditions in the savannahs of Roraima. The highest yields of green dry matter (GDM) were found with cultivars Zuri (4,317 kg ha-1) and Mombasa (4,115 kg ha-1), followed by Kenya (3,868 kg ha-1) and Tamani (3,755 kg ha-1), while Massai (3,341 kg ha-1) and Tanzania (3,225 kg ha-1) were the least productive. GDM yield was directly correlated with LAI and inversely proportional to tiller population density (TPD). The cultivars Tanzania and Kenya had the highest number of tiller leaves and leaf appearance rates, while the highest leaf expansion rates were estimate in cultivars Zuri and Kenya. The highest average length of tiller leaves was estimate in the cultivars Zuri and Mombasa. Leaf senescence rates were inversely proportional to TPD and the highest recorded with the cultivars Mombasa and Tamani. The six cultivars of M. maximus showed satisfactory forage yields and can be recommend for cultivation in the edaphoclimatic conditions of the of Roraima’s savannas. The determination of morphogenic and structural characteristics can contribute to the establishment of appropriate and specific management practices for each cultivar, aiming to optimize its productivity and reduce losses due to leaf senescence. Para evaluar la productividad del forraje y las características morfogénicas y estructurales de los cultivares de Megathyrsus maximus (Massai, Mombasa, Kenia, Tamani, Tanzania y Zuri), se realizó un experimento en condiciones ambientales naturales en la sabana de Roraima. Los mayores rendimientos de materia seca verde (MSV) se encontraron con los cultivares Zuri (4.317 kg ha-1) y Mombasa (4.115 kg ha-1), seguidos de Kenia (3.868 kg ha-1) y Tamani (3.755 kg ha-1), mientras que Massai (3.341 kg ha-1) y Tanzania (3.225 kg ha-1) fueron los menos productivos. El rendimiento de MSV se correlacionó directamente con el índice de área foliar y fue inversamente proporcional a la densidad de población de macolla (DPM). Los cultivares Tanzania y Kenia tuvieron el mayor número de hojas por macolla y tasas de aparición de hojas, mientras que las tasas de expansión de hojas más altas se estimaron en los cultivares Zuri y Kenia. La mayor longitud promedio de las hojas de la macolla se registró en los cultivares Zuri y Mombasa. Las tasas de senescencia de las hojas fueron inversamente proporcionales a DPM y las más altas registradas con los cultivares Mombasa y Tamani. Los seis cultivares de M. maximus presentaron rendimientos de forraje satisfactorios y pueden recomendarse para el cultivo en las condiciones edafoclimáticas de la sabana de Roraima. La determinación de las características morfogénicas y estructurales puede contribuir al establecimiento de prácticas de manejo apropiadas y específicas para cada cultivar, con el objetivo de optimizar su productividad y reducir las pérdidas debido a la senescencia de las hojas. Com o objetivo de avaliar a produtividade de forragem e as características morfogênicas e estruturais de cultivares de Megathyrsus maximus (Massai, Mombasa, Kenya, Tamani, Tanzânia and Zuri) conduziu-se um experimento sob condições ambientais naturais nos cerrados de Roraima. Os maiores rendimentos de matéria seca verde (MSV) foram constatados com as cultivares Zuri (4.317 kg ha-1) e Mombasa (4.115 kg ha-1), seguindo-se a Kenya (3.868 kg ha-1) e Tamani (3.755 kg ha-1), enquanto que a Massai (3.341 kg ha-1) e a Tanzânia (3.225 kg ha-1) foram as menos produtivas. O rendimento de MSV foi diretamente correlacionado com o índice de área foliar e inversamente proporcional a densidade populacional de perfilhos (DPP). As cultivares Tanzânia e Kenya apresentaram maior número de folhas perfilho e taxas de aparecimento de folhas, enquanto que as maiores taxas de expansão de folhas foram estimadas nas cultivares Zuri e Kenya. O maior comprimento médio de folhas perfilho-1 foi registrado nas cultivares Zuri e Mombasa. As taxas de senescência foliar foram inversamente proporcionais a DPP e as maiores foram registradas com as cultivares Mombasa e Tamani. As seis cultivares de M. maximus apresentaram satisfatórios rendimentos de forragem e podem ser recomendadas para cultivo nas condições edafoclimáticas dos cerrados de Roraima. A determinação das características morfogênicas e estruturais pode contribuir para o estabelecimento de práticas de manejo adequadas e específicas para cada cultivar, visando otimizar sua produtividade e reduzir as perdas por senescência foliar.

[ES] La piel humana está continuamente expuesta a la radiación ultravioleta (UVR) solar. Esta exposición de la piel a la UVR genera gran variedad de respuestas biológicas que se van acumulando con el tiempo, incluyendo inflamación, daño del ADN, melanogénesis y generación de estrés oxidativo. Cuando la exposición es excesiva estos cambios pueden causar diferentes patologías, como eritema, envejecimiento degenerativo o cáncer de piel. Actualmente, la influencia de la radiación UV-B y UV-A en la fisiología de la piel humana es un área de investigación muy activa. Para entender mejor las bases moleculares que ocurren después de la exposición a la UVR, se estudiaron las respuestas de los queratinocitos y fibroblastos de la piel humana tras someterse a diferentes dosis de UV-B y UV-A. Estos datos pueden ser empleados en la industria como base para la caracterización de compuestos protectores o reparadores de los daños generados por la UVR., [EN] Human skin is continuously exposed to solar ultraviolet radiation (UVR). This exposure of the skin to UVR generates a variety of biological responses that accumulate over time, including inflammation, DNA damage, melanogenesis, and generation of oxidative stress. When exposure is excessive, these changes can cause different pathologies, such as erythema, degenerative aging or skin cancer. Currently, the influence of UV-B and UV-A radiation on the physiology of human skin is a very active area of research. To better understand the molecular bases that occur after exposure to UVR, the responses of human skin keratinocytes and fibroblasts after undergoing different doses of UV-B and UV-A were studied. This data can be used in industry as a basis for the characterization of protective or repair compounds from UVR damage.

El brócoli es una hortaliza ampliamente consumida y cuya producción se halla en continuo crecimiento a nivel mundial. Se trata de un vegetal que tiene un buen aporte nutricional debido a su contenido de proteínas y vitaminas, además de tener un bajo valor calórico y alto aporte de fibra. El brócoli contiene compuestos de elevado valor nutracéutico, como son los flavonoides y los glucosinolatos, los cuales presentan numerosos beneficios a la salud humana, como propiedades antioxidantes, antiinflamatorias, antimicrobianas y anticancerígenas. La parte comestible de la planta de brócoli es su inflorescencia, se trata de un órgano que, al momento de la cosecha, se encuentra en pleno desarrollo y, por lo tanto, la demanda de agua, hormonas y nutrientes, es alta. Es debido a esto último que la cosecha le ocasiona un importante estrés y una senescencia acelerada. Este proceso de senescencia provoca el amarillamiento del órgano junto con la pérdida de proteínas, azúcares, compuestos antioxidantes, como el ácido ascórbico, y glucosinolatos. Nuestro grupo de trabajo ha estudiado a lo largo de varios años diversos tratamientos poscosecha, buscando prolongar la vida del brócoli. Los tratamientos analizados fueron: radiación UV-C, tratamientos térmicos, atmósferas modificadas y luz visible. Y también se realizaron estudios fisiológicos con hormonas vegetales vinculadas al proceso de senescencia, como citoquininas y etileno. Estos estudios brindaron herramientas para la manipulación poscosecha de brócoli. También se ha comprobado que estos tratamientos producen cambios a nivel de expresión génica en brócoli, tanto en la vía de degradación de clorofilas como en la vía de biosíntesis de compuestos flavonoides. El objetivo del presente trabajo fue analizar la expresión de los genes BoNYC1, BoNOL y BoHCAR, codificantes de las primeras enzimas de la vía de degradación de clorofilas; y analizar la expresión de los genes BoCHS y BoCHI, que codifican para las primeras enzimas en actuar en la formación del esqueleto primario de los flavonoides, en los distintos tratamientos analizados en brócoli. Los resultados del presente trabajo señalan que BoNYC1 sería un gen altamente regulado, a diferencia de BoNOL y BoHCAR de menor respuesta frente a los distintos estímulos. Se observó que en muchos de los tratamientos la expresión de estos genes se reprimió, correlacionando con una retención en el contenido de clorofilas ocasionada por los tratamientos poscosecha. Mientras que, en otros ensayos, se observó que estos genes presentaron comportamientos diversos, señalando participación en otras vías metabólicas u otra forma de regulación. Por otro lado, la expresión de BoCHS y BoCHI fue bastante afectada por los tratamientos, indicando que es una vía de rápida respuesta frente a los agentes externos como la luz solar y la temperatura. Se observó un comportamiento compatible con un ciclo circadiano en ambos genes. Los ensayos de luz visible y radiación UV-C verificaron, además, un incremento en el contenido de flavonoides., Facultad de Ciencias Exactas

Independientemente de su origen, el melanoma comparte similitudes biológicas en todas las especies. El melanoma espontáneo canino es un tumor altamente maligno, metastásico y letal que se caracteriza por su rápido crecimiento, invasión local y metástasis temprana. Como estudio preclínico dirigido a mejorar los efectos locales de los genes suicidas en pacientes veterinarios oncológicos, exploramos las respuestas de diferentes líneas celulares de melanoma espontáneo canino a la proteína de fusión de la levadura Saccharomyces cereviseae citosina desaminasa/uracil fosforribosil transferasa (Ycd::Yuprt) en combinación con 5-fluorocitosina (5-FC), mediante transferencia génica no viral. Ycd cataliza el paso 5-FC a 5-fluorouracilo (5-FU) que interfiere con la replicación del ADN, mientras que Yuprt conduce a la síntesis de 5-FUTP que inhibe el procesamiento de ARNr y ARNm. En el presente estudio, encontramos que tanto cultivos en 2D como 3D resultaron sensibles al tratamiento, incluso en aquellas líneas que previamente habían manifestado cierta resistencia a otros genes suicidas ya aplicados en la clínica veterinaria. Exploramos los mecanismos subyacentes a la acción de Ycd::Yuprt/5-FC relacionados con muerte celular, arresto del ciclo celular, estrés oxidativo, capacidad clonogénica y efecto bystander, entre otros. Encontramos muerte celular inducida tanto por apoptosis como necrosis, un gran aumento de la fracción subGo y de células en un estadio de senescencia e inhibición de la formación de colonias frente a una alta concentración de 5-FC. Además, demostramos que la citotoxicidad producida dentro de las células fue capaz de difundirse al entorno extracelular, afectando también a las células que no estuvieron expuestas a la transferencia génica, poniendo en evidencia a un fuerte efecto bystander. Estos resultados fundamentan sólidamente el potencial clínico del sistema suicida Ycd::Yuprt/5-FC como adyuvante de cirugía en pacientes veterinarios oncológicos. Regardless of its origin, melanoma shares biological similarities in all species. Canine spontaneous melanoma is a highly malignant, metastatic and lethal tumor characterized by rapid growth, local invasion and early metastasis. As a pre-clinical study aimed to improve the local effects of suicide genes on oncologic veterinary patients, we explored the responses of different spontaneous canine melanoma cell lines to yeast Saccharomyces cereviseae cytosine deaminase/uracil phosphoribosyl transferase fusion protein (Ycd::Yuprt) non-viral gene transfer in combination with 5-fluorocytosine (5-FC). Ycd catalizes the passage of 5-FC to 5-fluorouracil (5-FU) that interferes with DNA replication, while Yuprt drives to the synthesis of 5-FUTP that inhibits rRNA and mRNA processing. In the present study, we found that 2D and 3D cultures were sensitive to this treatment, even in cell lines that had previously shown some resistance to other suicide genes already applied in the veterinary clinic. We explored the underlying mechanisms of Ycd::Yuprt/5-FC related to cell death, cell cycle arrest, oxidative stress, colony formation, and bystander effect, among others. This treatment drove cells to death through apoptosis and necrosis. Furthermore, strongly increased the subGo fraction and the proportion of senescent cells while completely inhibiting colony formation at high concentrations of 5-FC. In addition, we demonstrated that the cytotoxicity produced inside the cells was able to diffuse to the extracellular environment also affecting the cells that were not exposed to gene transfer, evidencing a strong bystander effect. These results strongly support the clinical potential of Ycd::Yuprt/5-FC suicide system as surgery adjuvant treatment in oncologic veterinary patients. Fil: Allende, Jesica Beatriz. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Geociências, Programa de Pós-Graduação em Geociências Aplicadas e Geodinâmica, 2020. O Cerrado brasileiro é detentor de notória biodiversidade, sendo reconhecido como a savana mais rica do mundo. Apresenta também elevado potencial aquífero, pois possui as nascentes das três maiores bacias hidrográficas da América do Sul em seu território. Porém, o contexto climático ao qual está inserido, aliado à menor proporção de áreas sob proteção integral em relação aos biomas brasileiros, fazem com que o Cerrado sofra constante degradação devido a queimadas. A presente dissertação objetivou avaliar a influência das características de verdor, umidade e senescência da vegetação, medidas por meio de imagens multiespectrais, para a ocorrência de incêndios florestais no Parque Nacional de Brasília. Para tanto, utilizou-se os dados do sensor MSI – MultiSpectral Instrument, abordo dos satélites Sentinel-2. O MSI possui resoluções espectral e espacial de 13 bandas e 20 metros, respectivamente. Optou-se pelo produto Level-1C por apresentar medições radiométricas do tipo reflectância do topo da atmosfera. Foram escolhidas imagens das datas 25 de agosto (pré-fogo) e 10 de setembro de 2017 (pós-fogo) e 23 de janeiro de 2018 (rebrota da vegetação) devido à ocorrência de um incêndio florestal de grande escala. Visando a automação da metodologia, o processamento das imagens foi realizado por linhas de programação em JavaScript. Nesse intuito, foi utilizada a plataforma de processamento em nuvem Google Earth Engine. A imagem pós-fogo foi classificada em queimado (CQ) e não queimado (CNQ) pelo índice espectral RdNBR (Índice Relativo Diferenciado de Queimada Por Razão Normalizada). Em seguida, foram selecionados 50 pontos aleatórios para cada classe. Coletou-se os valores de NDVI (Índice de Vegetação por Diferença Normalizada), NDII (Índice do Infravermelho por Diferença Normalizada) e PSRI (Índice de Reflectância de Senescência de Plantas) de cada ponto nas imagens pré-fogo, pós-fogo e rebrota e realizou-se a análise discriminante. Na imagem pré-fogo, a CQ apresentou menor verdor (μ = 0, 292 ± 0,055), menos umidade (μ = -0,146 ± 0,048) e maior senescência (μ = 0,063 ± 0,051) em relação a CNQ. Na imagem pós-fogo, o comportamento em relação ao verdor e à umidade se manteve (μ = 0,119 ± 0,049 e μ = -0,255 ± 0,043, respectivamente). Por outro lado, a senescência apresentou valores inferiores (μ = -0,084 ± 0,124) em relação à CNQ. Na imagem rebrota, o comportamento das características de verdor, umidade e senescência da CQ foi o mesmo medido na imagem pré-fogo (μ = 0,471 ± 0,104; μ = 0,076 ± 0,087 e μ = -0,032 ± 0,071, respectivamente). O resultado da análise discriminante da imagem pré-fogo obteve proporção de acerto de 0,62 para a CQ e 0,76 para a CNQ. A imagem pós-fogo obteve a melhor discriminação entre as classes, com proporção de acerto de 0,84 e 0,98 para CQ e CNQ respectivamente. A proporção de acerto da discriminação entre as classes da imagem rebrota foi de 0,80 (CQ) e 0,86 (CNQ). Os índices NDVI, NDII e PSRI se mostraram como bons parâmetros para a avaliação das condições favoráveis a incêndios florestais e novos estudos visando a quantificação do grau de influência desses parâmetros devem ser incentivados. Brazilian Cerrado has a remarkable biodiversity, being known as the richest savanna throughout the world. It also has high aquifer potential, since springs of the three largest hydrographic basins in South America are in its territory. However, the climatic context in which it is inserted, combined with lower proportion of areas under full protection in relation to other Brazilian biomes, make Cerrado suffer constant degradation due to fires. This dissertation aimed to evaluate the influence of characteristics such as greenness, humidity and senescence of the vegetation, measured by means of multispectral images, on the occurrence of bushfires in the Brasília National Park. In order to do that, we used data from the MSI sensor – MultiSpectral Instrument, on board of the Sentinel-2 satellite. The MSI has spectral and spatial resolutions of 13 bands and 20 meters, respectively. The Level-1C product was chosen because it presents reflectance from the top of the atmosphere measurements. Images from August 25th (pre-fire) and September 10th, 2017 (post-fire) and January 23th, 2018 (vegetation regrowth) were chosen due to the presence of a large burned area. In order to automate the methodology, the image processing was carried out using JavaScript programming lines. For that purpose, the Google Earth Engine cloud processing platform was used. The post-fire image was classified as burned (BA) and unburned (UBA) using the spectral index RdNBR (Relative Differenced Normalized Burn Ratio) and 50 random points were then selected for each class. The values of NDVI (Normalized Difference Vegetation Index), NDII (Normalized Difference Infrared Index) and PSRI (Plant Senescence Reflectance Index) were collected for each point in the pre-fire, post-fire and regrowth images and the discriminant analysis was carried out. In the pre-fire image, the BA showed lower greenness (μ = 0.292 ± 0.055), less moisture (μ = -0.146 ± 0.048) and greater senescence (μ = 0.063 ± 0.051) compared to the UBA. In the post-fire image, the behavior in relation to greenness and moisture was maintained (μ = 0.119 ± 0.049 and μ = -0.255 ± 0.043, respectively). On the other hand, senescence showed lower values (μ = -0.084 ± 0.124) in relation to the UBA. In the image regrowth, the behavior of the characteristics of greenness, humidity and senescence of the BA was the same as the one measured in the pre-fire image (μ = 0.471 ± 0.104; μ = 0.076 ± 0.087 and μ = -0.032 ± 0.071, respectively). The result of the discriminant analysis of the pre-fire image obtained an estimated probability of 0.62 for BA and 0.76 for UBA. The post-fire image obtained the best discrimination between the classes, with an estimated probability of 0.84 and 0.98 for BA and UBA, respectively. The estimated probability between the classes of the regrowth image was 0.80 (burned) and 0.86 (unburned). The NDVI, NDII and PSRI indices proved to be good parameters for the evaluation of conditions favorable to bushfires and further studies aiming at quantifying the degree of influence of these parameters should be encouraged.

With the objective to evaluate the effects of nitrogen levels (0, 40, 80, 120 and 160 kg of N ha-1) on green dry matter (GDM) yield and morphogenetic and structural characteristics and nitrogen nutrition index (NNI) of Brachiaria brizantha cv. Piatã, was installed an experiment under field conditions in Roraima´s savannas. Nitrogen fertilization increased significantly (P

Resumen Introducción: La artrosis (OA) es una enfermedad musculoesquelética degenerativa que afecta aproximadamente al 13% de la población occidental. A día de hoy no existe un tratamiento eficaz que evite el progreso de la misma o facilite la regeneración del cartílago articular. La conexina43 (Cx43) es una proteína transmembrana que se encuentra en niveles elevados en el cartílago y en la membrana sinovial de pacientes con OA. Esta proteína forma canales que permiten el intercambio de moléculas e iones entre dos células en contacto o entre la célula y su entorno, denominados uniones comunicantes (UCs) y hemicanales, respectivamente. En este estudio se investigó la función de la Cx43 y de las UCs en la degradación del cartílago articular de pacientes con OA. Material y métodos: Se han aislado condrocitos primarios del cartílago de donantes OA y sanos. Se evaluaron los niveles proteicos mediante Western blot, inmunofluorescencia y citometría de flujo. La expresión génica se ha evaluado mediante RT-qPCR, mientras que la comunicación celular se estudió mediante el ensayo scrape loading/dye transfer. La senescencia celular se evaluó midiendo la actividad de la βgalactosidasa mediante citometría celular o microscopía. Resultados: Los resultados obtenidos indican que la sobreactividad de la Cx43 y de la comunicación intercelular a través de UCs detectadas en OA están implicadas con el progreso de la enfermedad al activar procesos de desdiferenciación celular hacia un estado inmaduro y senescencia celular. Utilizando condrocitos en cultivo aislados del cartílago de donantes con OA hemos demostrado que el incremento de la Cx43 activa factores implicados en la transición epitelio-mesénquima (TEM), como el factor de transcripción Twist-1. El incremento en el número de células desdiferenciadas y con altos índices de proliferación celular desencadena en senescencia celular vía p53/p16INK4a, activando el fenotipo secretor asociado a senescencia (SASP, del inglés Senescence-Associated Secretory Phenotype) que incluye la síntesis y liberación de factores inflamatorios como la interleuquina 6 (IL-6). La disminución de los niveles de la Cx43 utilizando pequeñas moléculas como la oleuropeína o técnicas de edición genética como CRISPR/Cas9 revirtió el proceso dando lugar a rediferenciación celular, mejorando el fenotipo celular con incremento en proteínas implicadas en formación del tejido y diminuyendo la síntesis de MMPs y del componente inflamatorio y senescencia. Conclusiones: La disminución de la Cx43 en condrocitos artrósicos restaura regeneración tisular, por activación de rediferenciación celular y disminución de senescencia. Estos resultados corroboran el uso de la Cx43 como una diana terapéutica eficaz para restaurar regeneración del cartílago en pacientes con OA y evitar la progresión de la enfermedad. Summary Introduction: Osteoarthritis (OA) is a degenerative musculoskeletal disease, which affects approximately the 13% of western population. Nowadays, there is no effective treatment for OA to avoid disease progression or to promote cartilage regeneration. Connexin43 (Cx43) is a transmembrane protein increased in cartilage and synovium from OA patients. Cx43 forms membrane channels that allow the exchange of molecules and ions between two adjacent cells through gap junctions (GJs), or between a cell and its environment through hemichannels. In this study we investigated the involvement of Cx43 and GJ intercellular communication in the degradation of articular cartilage in chondrocytes from patients with OA. Material and methods: Primary chondrocytes were obtained from cartilage from OA and healthy donors. Protein levels were evaluated by western-blot, immunofluorescence and flow cytometry. RNA expression was evaluated by RT-qPCR. A scrape loading/dye transfer assay was used to evaluate cell communication. Cell senescence was analysed by flow cytometry or by light microscopy using βgalactosidase assay. Results: Cx43 and GJs overactivities were correlated with the progression of OA, by promoting chronic cell dedifferentiation and senescence in vitro assays. We found that Cx43 overexpression activates factors involved in epithelial-to-mesenchymal transition, such as Twist-1. Increased levels of dedifferentiated cells, with high rates of cell proliferation, led to cell senescence via p53/p16INK4a, activating the senescence-associated secretory phenotype (SASP) and promoting the synthesis and liberation of inflammatory factors, including the interleukin-6 (IL-6). Cx43 downregulation by using small molecules, such as oleuropein, or by genetic edition with CRISPR technology, led to the chondrocyte redifferentiation and an improved phenotype, with increased synthesis of extracellular matrix proteins such as Col2A1 and downregulating the synthesis of MMPs, inflammation and senescence. Conclusions: Downregulation of Cx43 in OA chondrocytes restores regeneration by activating chondrocyte re-differentiation and decreasing cellular senescence. These results corroborate the use of Cx43 as an effective therapeutic target in order to restore cartilage regeneration and avoid OA progression.

With the objective to evaluate the effect of nitrogen levels (0, 60, 120, 180 and 240 kg of N ha-1) on green dry matter (GDM) yield and morphogenetic and structural characteristics and nitrogen nutrition index (NNI) of Brachiaria ruziziensis, was carried out an experiment under field conditions in Roraima´s savannas. Nitrogen fertilization increased significantly (P