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O presente Relatório de Estágio foi desenvolvido numa escola do 1º Ciclo do Ensino Básico, no 2º ano de escolaridade, pertencente ao Agrupamento de Escolas Paulo Quintela em Bragança, turma que a professora leccionou no ano lectivo de 2009/2010. Considerando que a degradação ambiental é hoje uma das maiores preocupações dos governos e da sociedade, é necessário desenvolver acções de carácter educativo, para o desenvolvimento sustentável, garantindo, assim, a permanência dos recursos naturais em condições que assegurem às gerações futuras a sobrevivência na Terra. Foi pensando desta maneira que surgiu o tema do projecto. Num objectivo pretendia-se conhecer a realidade desta turma, no sentido de saber os seus conhecimentos sobre “Reaproveitamento de Materiais e Separação Selectiva de Resíduos”. Depois de se ter constatado que os alunos tinham poucos conhecimentos sobre este tema, levantou-se o seguinte problema: “De que modo a escola e o trabalho desenvolvido com os alunos poderia modificar a sua maneira de agir e contribuir para melhorar o ambiente em que viviam?” Era propósito deste trabalho, realizar um conjunto de actividades com os alunos da turma RO1, e compreender se as actividades propostas pela investigadora possibilitariam aos alunos a aquisição de novos saberes. A metodologia utilizada foi uma investigação com características essencialmente qualitativas, fazendo pequenas análises quantitativas quando estas se revelaram necessárias, com procedimentos que podem enquadrar-se numa investigação-acção, uma vez que se pretende contribuir para a mudança de uma determinada realidade, constatada pela professora. Este método permite que a professora se torne ao mesmo tempo investigadora, intervindo no contexto da sala de aula explorando uma acção pela prática. Foi feito um Questionário A, antes da aplicação do Relatório de Estágio (RE), com 11 questões de resposta fechada, e um Questionário B depois da aplicação do Relatório de Estágio, (versão igual ao Questionário A) para averiguar se os conhecimentos que os alunos tinham antes da aplicação do RE se alterariam com a aplicação das actividades propostas. Seguiu-se a fase da análise de todos os dados obtidos durante a pesquisa aos 10 alunos envolvidos e verificou-se que os alunos responderam de uma maneira bem diferente às iv questões que lhes foram formuladas pela 2ª vez após lhes terem sido proporcionadas actividades relacionadas com o tema “reutilização de materiais e separação selectiva de resíduos”, respondendo acertadamente a quase todas as questões, pelo que se considera que houve evolução nos conhecimentos dos alunos.This probation report was developed in a school of the 1st cycle of basic education in the 2nd grade, belonging to the Amalgamation of Schools Paulo Quintela in Bragança, class that the teacher taught this academic year 2009/2010. Considering that environmental degradation is now a major concern for governments and society, it is necessary to develop educational activities for sustainable development assuring the permanence of natural resources in conditions which ensure the survival of future generations on Earth. Was thinking in this way that arises the theme of the project. The main objective was to know the reality of this class, to learn their skills on the theme “reuse of materials, selective separation of residues." Once you have found that students had little knowledge about the environment, rose the following problem: "How do school and work with students can modify their ways and help improve the environment in which they live?” Proposed to hold a series of activities with the students in the class RO1, and understand that activities proposed by the researcher allowed the students to acquire new knowledge. The National Curriculum for Basic Education has some skills for the 1st cycle such as: "Allow the construction of an ecological conscience, to identify concrete problems relating to their environment and use some simple cases of constant research and experimentation". The methodology was a qualitative research to quantitative characteristics, with procedures that may be part of an investigation - action, since it contributes to the change of a certain reality, evidenced by the teacher. This method allows the teacher becomes a researcher at the same time, speaking in the context of the classroom exploring action in practice. Was made a questionnaire A, before the application of the probation report, with 11 closed response questions, and questionnaire B after application of the RE (version equal to the questionnaire A) to ascertain whether the knowledge that the students had before the implementation of PP change with the implementation of the proposed activities. Next came the stage of the analysis of all data collected during the survey to 10 students involved and found that students responded very differently to the questions put by the 2nd time after they had been offered related activities related to the topic " reuse of materials and selective separation of garbage," answered correctly nearly all the issues so it is considered that there was progress in the knowledge of students.

Dissertação de Mestrado em Genética Molecular, Comparativa e Tecnológica O cancro de mama é o cancro mais comum nas mulheres, contando em 32% de todos os casos de cancros femininos. O cancro do ovário conta para 5% de todos os cancros na mulher e por não poderem ser detectados previamente no seu desenvolvimento, entram nas estatísticas desproporcionais dos cancros fatais. Progressos na biologia molecular resultaram na identificação e no conhecimento de marcadores moleculares que possam ter um prognóstico e um valor preditivo para pacientes com cancro. O HER2/neu é um dos genes mais caracterizados deste tipo de marcadores onde a sua amplificação ocorre em cerca de 30% de cancros de mama e ovário. O rápido transporte de lactato através da membrana plasmática tem uma importância fundamental para todas as células mamíferas sob condições hipóxicas quando se tornam glicolíticas. O papel fisiológico dos transportadores é primeiriamente transportar os monocarboxilatos endógenos como o piruvato e o lactato. Os transportadores de monocarboxílatos (MCTs) são importantes para a viabilidade das células tumorais sendo conhecido estas serem extremamente glicoliticas, produzindo lactato em excesso, prosperando em condições hipóxicas. Neste presente trabalho analisou-se a amplificação do gene HER2/neu por “Chromogenic in situ Hybridisation” em carcinomas de mama e ovário bem como a sobrexpressão dos MCTs 1 e 4 por imunohistoquímica nos mesmos tecidos tumorais, utilizando-se para a obtenção das amostras em causa a recente técnica de “Tissue Microarray”. Os resultados obtidos permitiram afirmar que a última técnica é suficientemente representativa para o estudo em questão. Para além disso, evidenciou-se a sobrexpressão do MCT4 em células tumorais de mama, contrariamente ao MCT1. No ovário, não se destacou qualquer sobrexpressão entre os diferentes tipos de carcinomas. Finalmente, a técnica de CISH foi provada ser uma alternativa para os exames patológicos rotineiros, sobretudo aquando resultados equívocos quer por IHC quer por “Fluorescent in situ Hybridization”. The breast cancer is the most common cancer in women counting for 32% of all female cancers. The ovary cancer counts for 5% of all women cancers and due to the lack of previous detection, it enters in the disproportional statistics of deadly cancers. Progresses in molecular biology results in the identification and knowledge of molecular markers that can have a prognostic and predictive value for patients with cancer. The HER2/neu gene is the most characterized marker where is amplification occurs in 30% of breast and ovary cancer. The rapid lactate transport through the plasma membrane has a fundamental importance to mammalian cells under hypoxic conditions when they become glycolitic. The physiologic role of transporters is primarily transport endogenous monocarboxylates like piruvate and lactate. The monocarboxylate transporters (MCTs) are important to the viability of tumors cells known has being extremely glycolitic, producing excess of lactate and prospering under hypoxic conditions. In this present work, it has been analyzed the amplification of HER2/neu gene by chromogenic in situ hybridization in breast and ovary carcinomas as well as the overexpression of MCT1 and MCT4 by immunohistochemistry in the same neoplastic tissues. For the preparation of the samples for immunohistochemistry, it has been utilized the recent technique of tissue microarray. The obtained results allowed to affirm that the last technique is representative for the present study. Besides that, it was noticed the MCT4 overexpression in breast tumor cells, contrarily to MCT1. In the ovary, it was not observed any overxpression between the different types of carcinomas. Finally, the CISH technique was proved to be an alternative for pathologic exams, particularly in equivocal results either for IHC and fluorescent in situ hybridization.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Six semi-selective media used for detection of Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis (Cmm), developed elsewhere and reported in international literature, were evaluated for their efficacy to recover 20 Cmm isolates collected in different regions of Brazil. From these, only MB1M, D2ANX, and KBT allowed the growth of Cmm isolates, thus indicating differential resistance of Brazilian isolates to the antimicrobials used in the semi-selective media. Because they restrict the pathogen, the media SCM, mSCM and DCNS cannot be used for epidemiological studies in Brazil, such as detection on seed lots. MB1M, D2ANX and KBT also proved to be suppressive to contaminants associated with three tomato seed samples and two tomato leaf samples. The morphological characterization of colonies of each isolated was performed in these semi-selective media in comparison with the 523 media (Kado & Heskett, 1970). There was variation in the size, color and necessary time for formation of the colonies in the different semi-selective media. However, the typical characteristics of the colonies, as circular form, raised surface, smooth texture and smooth edges had been same for all the isolates, in all the semi-selective media. Thus, the format of colonies is a solid characteristic for the identification of Cmm. The biochemical tests proved to be useful to detect variability among the Brazilian isolates, as well among other isolates reported in the literature. The characteristics which showed consistency could be recommended for confirmation of the identity of Cmm isolates. In a complementary study, hypersensitivity reaction (HR) of all 20 Cmm isolates were positive on Mirabilis jalapa and Phaseolus vulgaris, but not on Coffea arabica. Seis meios semi-seletivos utilizados para detecção de Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis (Cmm), desenvolvidos em outras localidades e relatados na literatura, foram avaliados quanto à sua eficácia em permitir o crescimento de 20 isolados de Cmm, provenientes de diferentes regiões do Brasil. Quando as substâncias antimicrobianas foram excluídas dos meios semi-seletivos, houve crescimento dos isolados de Cmm em todos os meios básicos. Quando da adição desses compostos, apenas os meios MB1M, D2ANX e KBT permitiram o crescimento dos isolados, indicando, que os isolados brasileiros apresentam sensibilidade a alguns compostos antimicrobianos usados nos meios semi-seletivos. Devido os meios SCM, mSCM e CNS terem reprimido o crescimento de todos os isolados de Cmm, estes não devem ser utilizados em estudos epidemiológicos no Brasil, tais como detecção em lotes de sementes. Avaliou-se a supressividade nos meios MB1M, D2ANX e KBT, sendo que todos foram mais eficientes que o meio padrão (meio 523) em suprimir o crescimento de contaminantes associados a sementes e folhas de tomateiro, em todas as amostras testadas. Realizou-se, também, a caracterização morfológica das colônias de cada isolado de Cmm nesses três meios semi- seletivos e no meio padrão. Houve variação no tamanho, cor e tempo necessário para formação das colônias nos diferentes meios. Porém, as características típicas das colônias, como forma circular, superfície elevada, textura lisa e bordos inteiros foram as mesmas para todos os isolados, em todos os meios. Assim, o formato de colônias é uma característica estável para a identificação do patógeno. Os testes diagnósticos realizados permitiram verificar a variabilidade bioquímica e fisiológica entre os isolados brasileiros, bem como em relação a outros isolados relatados na literatura. Algumas características se mostraram consistentes e devem, portanto, ser utilizadas na confirmação da identidade de isolados, após a comprovação da fitopatogenicidade. Estudos de reação de hipersensibilidade (HR) foram conduzidos em três espécies de plantas não-hospedeiras de Cmm, como: Mirabilis jalapa, Phaseolus vulgaris e Coffea arabica. Reações típicas de HR foram observadas somente em Mirabilis jalapa e Phaseolus vulgaris.

Tese de mestrado em Ciências da Documentação e Informação apresentada à Faculdade de Letras da Universidade de Lisboa, 2008 Nível de preservação: critical, Criado em: 2009-09-29 15:47:37, Criado por: super:ULB53, Alterado em: 2009-09-29 16:04:16, Modificado por: super:ULB53 Made available in DSpace on 2010-06-22T09:21:59Z (GMT). No. of bitstreams: 2 19241_ulfl061120_tm.pdf: 1474633 bytes, checksum: 32308b923ac6a16817d0af112ea55450 (MD5) 19241.xml: 9732 bytes, checksum: 95a0c2eaf7e76cc9fa03ca1d2aa8b524 (MD5) Previous issue date: 2008

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico The eucalypt bacterial wilt caused by Ralstonia solanacearum is important disease, because of systemic infection, of the loss caused, and of the pathosystem characteristics with difficult control. The aims of the work for the pathosystem R. solanacearum-eucalypt were: i) symtomatology descriptions, and loss quantification caused by disease; ii) transmition proof of pathogen for the clonal cuttings, and determinate the effect of the disease for the mini-garden production; and iii) protocols development and evaluated interespecificic resistance of the eucalypti bacterial wilt. In clonal mini-hedges, the disease is characterized by foliar necrosis, annular or complete wood darkening, wilt and death of rooted-cuttings, was as was rending of leaf blade veins and cuttings rot of mini-cuttings. The disease etiology was confirmed through exudates tests, scanning electron microscopy, bacterial isolation, PCR/RFLP analyses, hypersensitive reactions (HR) in tobacco seedlings, pathogenicity tests in eucalypt and tomato plantlets and re-isolation of inoculated bacteria. The incidence of disease in eucalypt nursery, from April to September 2005 resulted in total loss estimated at six million reais. The inoculum font was contaminated shoots and substrate, and the pathogen was transmitted for eucalypt clonal mini-cuttings, causing loss four times in production index. Development method for evaluated of the resistance, with conditions for the plant infect similar to clonal mini-hedge. For the species evaluated, E. tereticornis and E. grandis were, respectively, the species with minor (33.3%) and higher (91.7%) susceptibility genotypes. A murcha bacteriana do eucalipto, causada por Ralstonia solanacearum é uma importante doença, em virtude da natureza sistêmica das infecções, dos danos causados e das várias características do patossistema que dificultam o controle. Objetivou-se neste trabalho estudar o patossistema R. solanacearum-eucalipto: i) descrever a sintomatologia da doença em viveiro e quantificar as perdas causadas em minijardim clonal; ii) comprovar a transmissão do patógeno por mudas clonais e avaliar o efeito da doença sobre a produtividade de minijardins clonais; e iii) desenvolver um protocolo e avaliar a resistência interespecífica do eucalipto à murcha bacteriana. Os sintomas da doença em minijardim clonal caracterizaram-se por necrose foliar, escurecimento anelar ou completo do lenho, pela murcha e morte de minicepas, bem como arroxeamento das nervuras do limbo foliar e podridão de miniestacas. A etiologia da murcha bacteriana do eucalipto em minijardim clonal foi confirmada por meio de testes de exsudação, microscopia de varredura, isolamento da bactéria, análises de PCR/RFLP, reação de hipersensibilidade (HR) em mudas de tabaco, testes de patogenicidade em plântulas de eucalipto e tomate e re-isolamento da bactéria inoculada. A incidência da doença em viveiros clonais, no período de abril a setembro de 2005, resultou em um prejuízo estimado de seis milhões de reais. Considerando brotações ou substrato contaminados como fonte de inóculo, o patógeno se dissemina por mudas clonais de eucalipto, sendo que a doença causa perdas de até quatro vezes no índice de produtividade de minijardim. Desenvolveu-se um método de avaliação da resistência empregando-se um infectário que simula as condições de minijardim clonal. Entre as espécies avaliadas, E. tereticornis e E. grandis apresentaram, respectivamente, o menor (33,3%) e o maior (91,7%) percentual de genótipos suscetíveis.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-04-20Bitstream added on 2014-06-13T18:41:14Z : No. of bitstreams: 1 junqueira_mep_dr_botfm.pdf: 683998 bytes, checksum: e97592029abff7e2b2e4961aed2d337c (MD5) Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Universidade Estadual Paulista (UNESP) Gap Nossos estudos objetivaram caracterizar as respostas imune inata e específica induzidas pelas peçonhas do muco e do ferrão do bagre Cathorops agassizii . A coleta dos espécimes foi realizada no complexo Baía-Estuário de Santos e São Vicente, localizado no litoral sul do Estado de São Paulo. As peçonhas (do Muco e do Ferrão) apresentaram perfil eletroforético similar entre si. Induzida a inflamação aguda em um modelo experimental murino, as peçonhas apresentaram igualmente a capacidade de induzir aumento da permeabilidade vascular e também edema de pata. A detecção de Leucotrieno B4 e Prostaglandina E2 no lavado da cavidade peritoneal dos camundongos injetados, com ambas as peçonhas, corroboram esta hipótese. Nossos resultados através da microscopia intravital mostraram que as peçonhas induzem um grande número de leucócitos rolantes nas vênulas pós-capilares com focos de extravasamento leucocitário, principalmente de neutrófilos seguido pelo influxo de macrófagos. Além disso, a peçonha do Ferrão induziu uma resolução mais rápida do influxo leucocitário ao contrário da peçonha do Muco que manteve o infiltrado macrofágico por até 7 dias. De maneira interessante, somente a citocina IL-6 foi detectada no lavado peritoneal induzida principalmente pela peçonha do Muco e as quimiocinas KC e MCP-1, por ambas as peçonhas, expressando naquele momento, a participação destes mediadores no recrutamento de neutrófilos e macrófagos para o sítio da lesão. As peçonhas foram eficazes ao induzir uma produção primária e secundária de anticorpos das classes IgM e IgG anti-venenos. Observamos ainda, uma especificidade dos anticorpos produzidos para os componentes das próprias peçonhas e também uma reatividade antigênica cruzada entre elas. Our studies aimed to characterize the innate and specific immune responses induced by poisons of the mucus and sting of the catfish Cathorops agassizii. The collection of specimens was accomplished in the complex Bay-Estuary System of Santos and São Vicente located in the south coast of the São Paulo State. Poisons of the Mucus and Sting presented similarities in their electrophorectical profiles. In basis of an Induced process of inflammation throughout an experimental murine model, both poisons equally showed the capacity to increase the vascular permeability and also paw edema. The Leucotrien B4'S and Prostaglandine E2 detection in washings of mice peritoneal cavity injected with both poisons corroborates this hypothesis. Our results through an intravital microscopy procedure also showed that the poisons induced a great number of rolling leukocytes in the post-capillary venules with focus on the leukocyte overflow mainly neutrophiles followed by macrophage influx. Besides, the sting poison Sting induced a faster resolution of the leukocyte influx, as well as, the Mucus poison unlike maintained a macrophage infiltrated for up to 7 days. In an interesting way, only the cytokine IL-6 was detected in peritoneal washings induced mainly by the Mucus poison although Quimiokinins KC and MCP-1 were for both poisons, expressing on that moment the participation of these mediators in the neutrophile and macrophage recruitment for the lesion site. The poisons were also effective in the induction of a primary and secondary production of IgM and IgG classes of antibodies. In this research we still observed a specificity of the antibodies produced for the components of the own poisons and also a crossed antigenic reactivity among them.

Tese de Doutoramento em Ciências Veterinárias A revisão bibliográfica desta tese de doutoramento descreve os aspectos gerais da carcinogénese química e enumera os diversos modelos experimentais, com roedores, que se podem utilizar no estudo da carcinogénese química do urotélio. Na parte experimental são apresentados quatro trabalhos experimentais diferentes. No primeiro trabalho caracterizámos as lesões histopatológicas identificadas em ratos Fisher 344 após a exposição oral durante 20 semanas à N-butil-N-(4-hidroxibutil) nitrosamina e instiladas intravesicalmente com a mitomicina C e o Bacillus de Calmette-Guérin. Estudámos o conteúdo em ADN destas lesões e verificámos que os animais instilados com a mitomicina C e o Bacillus de Calmette-Guérin apresentaram menor frequência de aneuploidia de ADN. Nos carcinomas papilares de baixo e de alto grau tratados com a mitomicina C ou o Bacillus de Calmette-Guérin o índice de proliferação diminuiu e o índice de apoptose aumentou. Observámos correlações positivas entre o índice de proliferação e o índice de apoptose (r=0,438, p

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, 2005. Cultivares e clones de batata (Solanum tuberosum L.) foram avaliados de 2002 a 2004 na Embrapa Hortaliças, Brasília-DF, para resistência à murcha bacteriana em campo naturalmente infestado com a raça 1, biovar 1 de Ralstonia solanacearum. Os testes de avaliação foram conduzidos com as cultivares atualmente mais plantadas no Brasil e com conjuntos de clones relatados como resistentes no Brasil e em outras partes do mundo. Em todos os experimentos, a doença foi avaliada pela incidência de plantas murchas em intervalos que permitiram a construção de curvas de progresso da doença para cada genótipo. A partir dessas, foram calculadas as áreas abaixo das curvas de progresso da doença (AACPD), valores usados para a realização das análises estatísticas por meio do programa SAS, que permitiram a comparação da resistência dos genótipos. Os genótipos mais resistentes nos ensaios foram os clones ‘MB 03’ e ‘MB 9846-01’, selecionados na Embrapa Hortaliças, e ‘Cruza 148’, padrão internacional de resistência originário do México. Nesses clones a incidência da doença ficou abaixo de 10%, 100 dias após o plantio. Dentre as cultivares, destacou-se ‘Achat’, com cerca de 30% de plantas murchas, valor significativamente superior ao dos clones acima mencionados, porém inferior ao das cultivares Monalisa, Atlantic, Bintje e Ágata, amplamente cultivadas no Brasil, e que apresentaram acima de 80% das plantas murchas. Observou-se que menores valores de AACPD correspondiam a um atraso no início do aparecimento dos sintomas da doença. Somente os clones ‘MB 03’ e ‘Cruza 148’ e a cultivar Achat apresentaram produção satisfatória devido à alta infestação do solo com o patógeno. Em outro experimento, 28 genótipos tidos como resistentes à murcha bacteriana e mantidos na Lista de Patógenos Testados (Pathogen Tested List) do Centro Internacional de la Papa (CIP), foram introduzidos in vitro, multiplicados em vasos em casa de vegetação e então avaliados em campo infestado com a biovar 1 de R. solanacearum. Os genótipos ‘Mabondo’ e ‘BW 8’ se destacaram nas condições avaliadas e poderão, juntamente com os clones MB-03, Cruza 148 e MB 9846-01, ser incluídos em programas de melhoramento com a finalidade de transferir genes de resistência para cultivares de batata. Os clones MB 03, 384515-1, MB 9721-01 e Cruza 148, anteriormente selecionados como resistentes na Embrapa Hortaliças, foram cruzados com as cultivares Monalisa, Baraka e Asterix para gerar genótipos que combinassem resistência e boas características agronômicas. Dos 200 clones selecionados para tipo de tubérculos em campo comercial em Cristalina - GO, somente dois apresentaram bom desempenho quando cultivados em campo infestado na Embrapa Hortaliças, indicando que essa metodologia não é adequada para seleção de genótipos resistentes. Este resultado levou à recomendação da seleção para resistência como fase anterior à seleção para tipo de tubérculo de modo que não se eliminem genótipos com níveis satisfatórios de resistência. Adicionalmente foi avaliada a resistência à murcha bacteriana em 128 acessos da coleção mundial de Solanum chacoense, procedentes do Inter-Regional Potato Introduction, Sturgeon Bay, Madison, EUA. De 1.792 clones avaliados, seis foram selecionados como apresentando resistência à biovar 1 de R. solanacearum. Posteriormente, esses clones foram testados para outros isolados das biovares 1 e 2, procedentes de diferentes regiões do Brasil. Reação diferencial entre isolados e clones foram verificadas, mostrando que a resistência em S. chacoense é específica para diferentes estirpes do patógeno. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT Selected potato (Solanum tuberosum L.) clones and cultivars were screened from 2002 to 2004 in Brasilia, DF, for resistance to bacterial wilt in a field naturally infested with race 1, biovar 1 or Ralstonia solanacearum. The objective of the experiment was to screen the most important cultivars grown in Brazil in comparison with clones previously selected as resistant at Embrapa Vegetables Experiment Station or elsewhere. In the field experiments, disease incidence was assessed in intervals which allowed the construction of disease progress curves for each genopype. The genotypes were statistically compared using the means of the values of the areas under the disease progress curves (AUDPC) calculated using a SAS program. The most resistant genotypes were clones MB-03 and MB 9846-01, previously selected at Embrapa Vegetables, and Clone 148, an international resistant reference from Mexico. All of them showed less than 10% wilt incidence 100 days after planting. Confirming previous results, ‘Achat’ was the most resistant cultivar, with 30% of disease incidence, a value statistically higher than those of the resistant clones. However, bacterial wilt incidence of ‘Achat’ at the end of the plant cycle was significantly lower than those of cultivars Monalisa, Atlantic, Bintje and Agata, with values always above 80%. It was observed that genotypes with lower values of the AUDPC presented symptoms later in the season as compared to susceptible genotypes. Because inoculum density was high in the experimental condition, yields were obtained only for ‘Achat’ and for the resistant clones. In another experiment, 28 genotypes indicated as resistant to bacterial wilt in CIP’s Pathogen Tested List were introduced as in vitro plantlets, multiplied in pots in a screenhouse and then evaluated for resistance upon planting in the same naturally infested field in Brasilia (race 1, biovar 1). Bacterial wilt incidence varied substantially among the genotypes, confirming the idea that screening for bacterial wilt resistance should be done locally. In this trial, only ‘Mabondo’ and ‘BW 8’ were comparable in terms of resistance to the clones selected at Embrapa Vegetables and can be also considered as important sources of resistance in breeding programs. In another experiment, clones MB 03, 384515-1, MB 9721- 01 and Cruza 148, previously selected as resistant at Embrapa Vegetables, were crossed with cultivars Monalisa, Baraka and Asterix in order to combine resistance with acceptable tuber characteristics. From 200 clones selected for tuber characteristics in a disease-free commercial field at Cristalina, GO, only two survived when planted in the infested field in Brasilia. This result indicated that screening to bacterial wilt should be done previously to for commercial characteristics in order to prevent loss of highly resistant clones that do not have good tuber appearance. Additionally, 128 accessions of the world collection of Solanum chacoense, originated from the the Inter-Regional Potato Introduction, Sturgeon Bay, Madison, WI, USA, were evaluated for bacterial wilt resistance (race 1, biovar 1) under screenhouse at Embrapa Vegetables. From 1,792 clones screened, only six were selected. These were later challenged with isolates of biovars 1 and 2 from distinct regions of Brazil. An interaction between isolates and clones indicated that resistance in S. chacoense is specific to different strains of R. solanacearum.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2004Bitstream added on 2014-06-13T19:01:37Z : No. of bitstreams: 1 nogueira_mf_dr_botfmvz.pdf: 3832737 bytes, checksum: d7fb9761e67373f1ac33a3563a947c18 (MD5) Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) Serpentes Crotalus durissus terrificus foram avaliadas em três ocasiões: assim que retiradas da natureza e entregues ao Centro de Estudos de Venenos e Animais Peçonhentos (CEVAP) da UNESP, Campus de Botucatu, após um período de quarentena e depois da permanência por aproximadamente 90 dias em uma baia externa. Foram colhidas amostras de sangue para realização de hemograma e sorologia para Paramyxovirus Ofídico (OPMV), swab de glote e lavado traqueopulmonar, para avaliação citológica e pesquisa de OPMV, Mycoplasma e bacilos Gram-negativos. Nos animais que foram a óbito realizaram-se necropsias e pesquisas dos microrganismos citados em traquéia e pulmão. Cepas de Salmonella, Pseudomonas e Aeromonas isoladas foram submetidas a testes de susceptibilidade a drogas. Na primeira colheita (n = 51), os títulos ao teste de inibição da hemaglutinação foram considerados inespecíficos e duas serpentes foram positivas para o OPMV, ao nested PCR. Na quarentena, nove exemplares vieram a óbito, duas das quais mostraram-se positivas para o OPMV. Na segunda colheita (n = 42), os títulos mantiveram-se, porém nove serpentes foram positivas para o OPMV, duas das quais ao teste de hemaglutinação da cultura de células VERO, tornando-se este o primeiro relato do isolamento do OPMV a partir de um animal vivo. Na baia externa, 24 animais foram a óbito, dos quais 23 foram positivos para o OPMV. Na terceira colheita (n = 18), os títulos variaram de 160 a 5.120, e amostras de todas as serpentes foram positivas para o OPMV. Na avaliação citológica, estes lavados apresentaram elevada celularidade com características de processo inflamatório de misto a macrofágico. Salmonella e Pseudomonas foram isoladas a partir de todas as colheitas, porém Aeromonas apenas de amostras de órgãos. Dentre as drogas testadas, os três gêneros de interesse... . Crotalus durissus terrificus snakes were evaluated in three occasions: as soon as they were captured from nature and delivered at the Centro de Estudos de Venenos e Animais Peçonhentos (CEVAP) - UNESP, Botucatu, SP, Brazil; after quarantine; and after spent nearly 90 days in an outside enclosure. Blood samples were collected for hematology and Ophidian Paramyxovirus (OPMV) serology, and glottis swabs and tracheal washings for cytological evaluation, OPMV, Mycoplasma and Gramnegative bacilli search. Dead animals were necropsied and the abovementioned microorganisms investigated in trachea and lung. Salmonella, Pseudomonas and Aeromonas isolated strains were submitted to antimicrobial susceptibility tests. In the first sampling (n = 51), the titles to the hemagglutination inhibition test were considered negative and two snakes were nested PCR positives to OPMV. During quarantine, nine specimens died, and two of them were positives to OPMV. In the second sampling (n = 42), titles had no change, but nine snakes turned positive to OPMV, two of them in the hemagglutination test of the VERO cells culture, what is the first report of the OPMV isolation from a live animal. In the external enclosure, 24 animals died, with 23 revealing to be OPMV positive. In the third sampling (n = 18), serological titles ranged from 160 to 5,120, and samples from all snakes were OPMV positives. In the cytological evaluation, these washings showed to be highly cellular with features of mixed cell to macrophagic inflammation. Salmonella and Pseudomonas strains were isolated in all three samplings, but Aeromonas only from trachea and lung samples. Among all the tested drugs, the three bacterial genera were susceptible to amikacin, gentamicin and enrofloxacin. The isolation of Mycoplasma was not obtained. Nematodes of the genus Rhabdias were observed in the tracheal washings. OPMV was the microorganism isolated in... (Complete abstract, click electronic address below).

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2003Bitstream added on 2014-06-13T21:02:25Z : No. of bitstreams: 1 oliveira_aaf_dr_botfmvz.pdf: 1077014 bytes, checksum: bf5f3764c923f7bb7ef20e6c934ad4a5 (MD5) Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) Estudou-se a viabilidade da utilização da citologia aspirativa por agulha fina (CAAF) e Citologia de Expressão (CE) em 137 búfalas, procedentes de sete propriedades leiteiras, localizadas nos municípios de Jaú, Botucatu e Sorocaba, estado de São Paulo, como novo recurso no diagnóstico precoce da mastite, além da frequência de mastite subclínica, as características dos agentes etiológicos envolvidos, a relação entre a Contagem de Células Somáticas (CCS) pelo método automático, reação ao “California Mastitis Test” (CMT), reação ao “Whiteside” modificado WSM contagem de bactérias aeróbias mesófilas e exame microbiológico, avaliou-se, ainda, a sensibilidade bacteriana frente a antimicrobianos, produção de beta-lactamase para E. coli e S. aureus, além da caracterização pela Reação em Cadeia de Polimerase das amostras de Escherichia coli isoladas e pesquisa da produção de toxinas estafilocócicas. Dos 548 quartos mamários estudados, obteve-se uma freqüência para mastite subclínica de 16,8%. O Staphylococcus epidermidis o agente mais freqüente (21,43%). A média da CCS obtida nas amostras analisadas foi de 170, 26 x 103 cél./mL de leite. As cepas de S. aureus apresentaram maior sensibilidade para Meticilina (100%), Amoxilina + Ácido clavulônico (100%), Cefalotina (84%) e Gentamicina (67%) e as E. coli para Enrofloxacina (100%), Gentamicina (100%) e Cefoperazone (100%). Das seis (06) cepas de S. aureus isoladas cinco (05) foram produtoras de TSST-1 e uma (01) para EEA. A produção de beta-lactamase foi de 83% para as cepas de S. aureus e 57% para E. coli. A CAAF apresentou ótima especificidade (96%) da mesma forma que a CE por análise comparativa, quando comparada com outras técnicas para diagnóstico da mastite, verificando-se a predominância de neutrófilos nas amostras com reação inflamatória, deste modo conclui-se que a CAAF... . The viability of Fine Needle Aspiration Cytology (FNAC) and Expression Cytology (EC) in 137 buffalos, proceeding of seven farms in Jaú, Botucatu and Sorocaba municipal districts in São Paulo State were studied. Frequency of subclinical mastitis, feature of etiological agents, production of toxins in Staphylococcus aureus and beta-lactamase by S. aureus and Escherichia coli were studied too. Total of 548 udder quarters, the frequency was 16,8%. Staphylococcus epidermidis was the pathogen found in 21,43% of samples and was the highest rate. The Somatic Cell Count (SCC) media was 170,26 x 103 cell/mL of milk. Sensibility to antimicrobial drugs demonstrate S. aureus was more susceptible methicilin, Amoxilin + Clavunonic acid, cephalothin and gentamicin and E. coli to enrofloxacin, gentamicin and cefoperazone. Five (05) samples S. aureus tested were producers TSST-1 and one (01) enterotoxin A (EEA). The beta-lactamase production was 83% in S. aureus samples and 57% to E. coli samples. A excellent specificity (96%) was observed to FNAC and EC when compared to others techniques to mastitis diagnostic. Neutrophils were the most prevalent cellular type in the analyzed samples. The FNAC and EC can be used for determination of inflammation grade in the buffaloes mammary gland.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:24:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2002Bitstream added on 2014-06-13T20:51:49Z : No. of bitstreams: 1 weckwerth_ph_me_botfm.pdf: 886368 bytes, checksum: d32499aa7e3a53d555dc67c5514625a9 (MD5) Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) A otite média crônica supurativa (OMCS) é uma condição comum em pacientes portadores de fissura palatal e lábio-palatal não reparada. Devido a uma anormalidade muscular, existe disfunção da tuba auditiva que, por sua vez, não equilibra a pressão diferencial do ar entre o ouvido médio e a nasofaringe, ocasionando acúmulo de fluidos na cavidade do ouvido médio. Amostras efusivas de OMCS de 40 pacientes portadores de fissura lábiopalatal matriculados no Hospital de Reabilitação de Anomalias Craniofaciais (HRAC) – USP – Bauru - SP, foram analisadas através de culturas bacteriológicas, e as bactérias isoladas submetidas ao padrão de susceptibilidade in vitro frente a drogas de uso clínico. Culturas positivas foram obtidas em 100% dos casos estudados. Das 57 linhagens obtidas, foram isoladas com maior freqüência as bactérias Pseudomonas aeruginosa (35%), Staphylococcus aureus (15,5%), Enterococcus faecalis (14%) e Proteus mirabilis (12%). A freqüência de bacilos Gram negativos (enterobactérias e não fermentadores da glicose) isolados foi de 67%. Frente à ciprofloxacina, a Pseudomonas aeruginosa apresentou melhor sensibilidade. Frente à gentamicina, as enterobactérias apresentaram melhor sensibilidade. As linhagens de Staphylococcus aureus e de Enterococcus faecalis mostraram melhor sensibilidade frente ao imipenem e sulfazotrim, respectivamente. Acreditamos que nossos dados possam contribuir para a escolha apropriada de antibióticos quando for considerado o tratamento não cirúrgico da OMCS em pacientes portadores de fissura lábio palatal. Chronic suppurative otitis media (CSOM) is a common condition in patients with unrepaired cleft palate and cleft lip palate. The muscular abnormality leads to auditive tube malfunction which it will not equilibrate the differential air pressure between the middle ear and the nasopharynx. Consequently, it increases the fluid in the middle ear cavity. Effusive samples of CSOM from 40 patients with clef palate and cleft lippalate of the HRAC-USP-Bauru-SP, were studied. After bacterial cultures, the bacteria were isolated and submitted, “in vitro”, at standard susceptibility to drugs of clinical use. Positive cultures were obtained in 100% of studied cases. Pseudomonas aeruginosa (35%), Staphylococcus aureus (15,5%), Enterococcus faecalis (14%) e Proteus mirabilis (12%) were the most frequent bacteria in 57 strains. Gram negative bacilli (enteric Gram negative bacilli and nonfermentative bacilli) were observed in 67% of the samples. Pseudomonas aeruginosa shown better sensitivity to ciprofloxacin, and the enteric Gram negative baciili to gentamicin. Moreover, the S. aureus and also the E. faecalis shown hight sensitivity to imipenem and trimethoprim/sulfamethoxazole, respectively. This data will contribute to the correct choice of the antibiotic in CSOM patients with cleft palate or clef lip-palate, which the nonsurgical management is the main therapy.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:02Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2002Bitstream added on 2014-06-13T19:49:31Z : No. of bitstreams: 1 genaro_a_me_botfm.pdf: 377043 bytes, checksum: 72c1832d7ec88dfecbd5ba14344427c1 (MD5) O Enterococcus faecalis é considerado, atualmente, um dos grandes agentes responsáveis pelas infecções hospitalares, onde sua resistência a diversas drogas tem sido motivo de preocupação das autoridades. Neste contexto, o trabalho teve como objetivo determinar a suscetibilidade antimicrobiana e a presença de linhagens mutantes em E. faecalis. Foram obtidas 74 linhagens provenientes de hemoculturas e de secreções purulentas de pacientes internados no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu, UNESP, no período de 1995 a 2001. Foram analisadas “in vitro”, quanto à sua suscetibilidade, a vancomicina e a ciprofloxacina através da determinação da concentração inibitória mínima (CIM), da concentração bactericida mínima (CBM) e a presença de linhagens mutantes através da determinação da taxa de mutação espontânea à ciprofloxacina. Os resultados demonstraram uma maior efetividade da vancomicina, que inibiu 98,6% das linhagens de E. faecalis (CIM 0,06 a 1mg/ml). Entretanto, quando da análise bactericida, o perfil de sensibilidade desta droga apresentou-se elevado, onde 73% das linhagens tiveram a CBM igual ou maior que 64mg/ml. Para a ciprofloxacina, o perfil de sensibilidade ficou distribuído entre as classes de CIM e CBM. Nesse estudo, não foi encontrada a presença de linhagens mutantes. Há probabilidade de algumas linhagens serem tolerantes à vancomicina, sendo necessário então, a realização de testes mais apurados, no sentido de confirmar esta característica. Enterococcus faecalis has been considered one of the major agents of nosocomial infection; its resistance to several drugs has been the concern of health authorities. The objective of this study was to determine antimicrobial susceptibility and the presence of mutant strains in E. faecalis. Seventy-four strains were obtained from hemocultures and purulent secretions of patients hospitalized at the Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu – UNESP between 1995 and 2001. They were analyzed in vitro for their susceptibility to vancomycin and ciprofloxacin by determining the minimum inhibitory concentration (MIC), minimum bactericidal concentration (MBC), and the presence of mutant strains through determination of the spontaneous mutation rate to ciprofloxacin. Our results showed vancomycin higher efficacy, inhibiting 98.6% of E. faecalis strains (MIC 0.06 1μg/ml). The bactericidal analysis, however, showed vancomycin high susceptibility profile, with 73% of strains, presenting MBC equal or higher than 64μ/ml. Ciprofloxacin sensitivity profile was found in MIC and MBC classes. No mutant strains were found in this study. It is probable that some strains are resistant to vancomycin, which requires that further tests be performed.

Orientador: Jose Luiz Pereira Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Resumo: Nesta pesquisa investigou-se a capacidade enterotoxigênica de cepas produtoras e baixo produtoras de enterotoxinas estafilocócicas isoladas em amostras de leite cru de bovino , fornecidas por uma cooperativa de produtores de leite da região de Campinas-SP. Através da análise de 140 amostras de leite foram isoladas 574 colônias com características presuntivas de estafilococos enterotoxigênicos de acordo com o método proposto por Tatini et al. (1984). Tanto as cepas positivas quanto as negativas aos testes de presença das enzimas coagulase e desoxirribonuclease termorresistente (TNase) foram testadas para avaliar a capacidade de produção de enterotoxinas estafilocócicas. A técnica utilizada para a produção de enterotoxinas estafilocócicas foi a de cultura em papel celofane sobre o meio 3% de triptona, 1% extrato de levedura e 1,5% de ágar, e a detecção foi realizada através do método de imunodifusão dupla em lâmina. Do total de cepas isoladas, 54,7% foram enterotoxigênicas. A enterotoxina estafilocócica D (EED) foi produzida por 95,2% das culturas; 0,3% produziram EEA; 1,0% produziu EEB. Algumas cepas produziram 2 tipos de enterotoxinas, 0,3% produziram EEA - EEB; 1,6% EEA - EED e 1,6% EEB - EED. Para a detecção de cepas baixo produtoras de enterotoxinas, os sobrenadantes das culturas negativas foram liofilizados e ressuspendidos a um volume 10 vezes menor que o inicial. Assim, detectou-se, entre estas culturas, mais 19,0% de linhagens de estafilococos enterotoxigênicos. Sendo produzidas as EED, EEA, EEB e EEC nos valores de 68,8%, 12,8%, 7,3% e 2,8%, respectivamente. Antes da concentração dos sobrenadantes não havia sido detectada EEC. As EEA - EEB foram produzidas por 3,7% das cepas e, EEB - EED por 4,6%. Os dados obtidos evidenciam a contaminação do leite por cepas coagulase e desoxirribonuclease termorresistente positivas e negativas e produtoras de algum tipo de enterotoxina, o que expõe a população consumidora ao risco de intoxicação alimentar, uma vez que, a pesquisa de enterotoxigenicidade de estafilococos coagulase negativa não é uma técnica de rotina realizada nos laboratórios de análise microbiológica de alimentos Abstract: This work investigated the enterotoxigenic of producing and low producing staphylococcal enterotoxins strains in cow's raw milk samples supplied by the Campinas Cooperativa, Campinas-SP. The 140 milk samples were presumptively tested for the presence of enterotoxigenic staphylococci, according to the method of Tatini et al. (1984). Coagulase and termonuclease positive and negative strains were tested for the capacity of producing staphylococcal enterotoxins. Production of staphylococcal enterotoxins was evaluated by the cellophane-over-agar method described by Robins et al. (1974). All strains were examined for enterotoxins A, B, C and D. For the detection it was used the immunodimsion method, applying the optimal sensitivity plate. The percentage of enterotoxigenic staphylococci isolates was 54,7%. The staphylococcal enterotoxins (SE) types most frequently detected was SED (95,2%), followed by SEB (1,0%) and by SEA (0,3%). Some strains produced 2 types of enterotoxins, SEA/SEB (0,3%); SEA/SED (1,6%) and SEB/SED (1,6%). The low enterotoxin producing staphylococcal strains were detected after ten fold concentration of initial volume of supernadant of negatives cultures. Thus, it was detected 19,0% of staphylococcal enterotoxigenic strains. SEC was only detected in concentrated supernatant. The SEA/SEB and SEB/SED were produced for 3,7% and 4,6% of the tests strains, respectively. The results showed the contamination of milk for coagulase and termonuclease positives and negatives strains which produced some type of staphylococcal enterotoxins. The risk of food poisoning is relatively high because the study of enterotoxigenic negative coagulase staphylococci is not a rotine procedure utilized in the food microbiology laboratories Mestrado Mestre em Ciência de Alimentos