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More than 30 years ago, it was suggested from electron microscopic and/or biochemical analyses that replication of positive-strand RNA viruses, whether in plants or in animals, takes place in association with intracellular membranes (for reviews, see references 13 and 14). The type of membranes involved in replication depends on the virus considered: tymoviruses, for instance, induce vesicular structures by invagination of chloroplast membranes in which both viral RNA and nonstructural proteins were detected (24, 25), whereas infection by tombusviruses leads to the formation of multivesicular bodies derived from mitochondria or peroxisomes (9, 56, 57). Several plant viruses belonging to different groups, such as tobamoviruses (30), bromoviruses (50), potyviruses (59), and comoviruses (11), similarly appear to strongly modify the endomembrane compartments. For Cowpea mosaic virus (CPMV), virus-induced accumulation of vesicles derived from the endomembrane system was described as early as 1974 by de Zoeten et al. (15), and in several instances fibrilar material tentatively identified as double-stranded RNA was shown to accumulate in such vesicles (20, 28). Viral proteins involved in replication were immunodetected on these vesicles in CPMV-infected cells (66). Similar information is available with animal viruses and has been described extensively in the literature, more particularly for poliovirus, the type member of picornaviridae. Evidence for the involvement of virus-induced vesicles in poliovirus replication was obtained already in the sixties (10), and the molecular mechanisms underlying the formation of virus-induced vesicles, their origin, and their role in viral replication were recently unraveled (19, 58, 62). The fact that distinct types of membranes are involved in the replication of different viruses implies the establishment of specific interactions between such host membranes and virus-encoded proteins. In some cases, the transmembrane domains responsible for their anchoring on specific membranes could be identified (18, 35, 56) allowing the formation of dedicated structures where coupled translation and synthesis of both minus- and plus-strand RNA take place (8). Such complexes probably ensure protection of the viral RNA being synthesized from degradation by cellular RNases. In the case of poliovirus, it was shown that specific viral proteins were responsible for vesicle formation (6, 7, 62) and that formation of the poliovirus replication complex is a process that requires coupled viral translation, vesicle production, and viral RNA synthesis (19). Grapevine fanleaf nepovirus (GFLV) has a bipartite RNA genome of positive polarity and, like all members of the Comoviridae, carries a small protein, VPg, covalently linked to the 5′ end of the viral genomic RNAs, which are both polyadenylated at their 3′ end. Each RNA encodes a single polyprotein, and this family of plant viruses shares therefore many common features with Picornaviridae. RNA1 encodes polyprotein P1 (253 kDa), which is processed by an embedded proteinase activity into five proteins required for replication, namely, 1A (of unknown function), 1B (probably the helicase), 1C (VPg), 1D (proteinase), and 1E (polymerase) (38, 40). These proteins are the only proteins required for RNA1 replication (65), and they function in trans to ensure RNA2 replication. RNA2 encodes polyprotein P2 (122 kDa), which is processed in trans by 1D into three proteins (39). Protein 2A is necessary for RNA2 replication, together with RNA1-encoded proteins (23). It is associated with membranous structures and is recruited by the RNA1-encoded replication machinery. We hypothesized that the 2A moiety of polyprotein P2 could mediate the transport of the nascent P2-RNA2 complexes from their initial location in the cytosol to the perinuclear replication sites where RNA2 replication and P2 cleavage take place (23). Therefore, protein 2A could play the role of a “homing protein.” Protein 2B is the movement protein (MP) forming tubules through which viral particles are delivered to uninfected adjacent cells (54). Finally, protein 2C is the coat protein (CP). Using epifluorescence microscopy, we have previously described the formation of a perinuclear complex where viral RNA was synthesized and viral proteins accumulated (23), but this could not be further analyzed due to technical limitations. In the present study, the structural preservation of cells and the intensity of immunolabelings were markedly enhanced, and image resolution was further improved by using high-resolution confocal microscopy. Moreover, the use of transgenic T-BY2 cell lines expressing green fluorescent protein (GFP) targeted to the endoplasmic reticulum (ER) and the Golgi apparatus (GA) provided a direct means to follow the virus-induced modifications of the endomembrane system and allowed us to conclude that GFLV replicates in association with specific membranes mainly derived from ER.

Introduction La presence d’heterosides cardiotoxiques dans toutes les parties du laurier rose ( Nerium oleander ) et diverses anecdotes historiques conferent a cet arbrisseau tres repandu sur le pourtour mediterraneen une reputation de toxique redoutable. Dans la pratique clinique quotidienne, la majorite des expositions sont des accidents de l’enfant, benins du fait de la faible dose ingeree, et peu d’intoxications volontaires, potentiellement letales, sont rapportees. Cependant depuis quelques annees, les appels au centre antipoison de Marseille (CAPM) concernant des tentatives de suicides (TS) par cette plante semblent moins rares. Les auteurs ont voulu verifier cette hypothese en analysant les 12 dernieres annees d’activite. Materiel et methode Etude retrospective de tous les dossiers d’exposition humaine au laurier rose pris en charge au CAPM et codes dans la base Sicap entre le 1/1/2002 et le 31/12/2013. Resultats En douze ans, 1333 dossiers d’exposition au laurier rose ont ete denombres, dont 1185 (88,9 %) dans des circonstances accidentelles (836 impliquant des enfants de 10 ans ou moins), et 99 (7,4 %) lors d’une TS (57,6 % de femmes, âge median 40 ans). Mais la rarete des gestes suicidaires qui prevalait jusqu’en 2008 (2 a 4 cas/an, sauf 2003 « insolite », n = 7) a fait place a une tendance solide a la hausse depuis 5 ans (TS passees de 4 % a 11,2 % des expositions au laurier rose entre 2008 et 2013, ou n = 19 cas). Sur la meme periode 2002–2013, la part globale des TS passait a l’inverse de 15,5 % a 9,6 % de tous les cas rapportes au CAPM. Cliniquement, si 25 patients sont restes asymptomatiques, 57 ont presente des signes digestifs, et 29 des troubles cardio-vasculaires (du rythme et tensionnels). Les quelques troubles de la conscience observes etaient le plus souvent lies a des produits associes (23 poly-intoxications, dont 16 avec des medicaments psychotropes et 8 avec de l’alcool). Sauf refus de prise en charge, tous les patients ont ete orientes vers l’hopital a minima pour surveillance. L’anticorps antidigitalique a ete administre 5 fois. Un deces est malgre tout survenu. Discussion–Conclusion Si elles restent peu frequentes en comparaison des autres modes d’autolyse et des expositions accidentelles, il y a une vraie augmentation des TS par ingestion de laurier rose rapportees au CAPM. Une partie de l’explication se trouve sur internet : les seuls termes « suicide laurier rose » renvoient plus de 35 000 reponses, dont de nombreux « modes d’emploi ». Devant ce risque accru, il convient de rappeler pour la prise en charge : la necessite d’une surveillance cardiaque etroite ; la disponibilite et l’efficacite d’un antidote (anticorps antidigitalique a dose plus elevee que son indication initiale, mais sans consensus precis) ; et la facilite en routine d’une confirmation analytique (uniquement qualitative) de l’ingestion, par croisement avec la digoxine du principal heteroside de N. oleander, l’oleandrine (le dosage de celle-ci etant possible mais plus complexe et long).

Introduction L’hypervitaminose A aigue, se traduit par un tableau clinique compose notamment de cephalees, de nausees, de vomissements, de myalgies, d’une erythrose voire d’une hypertension intracrânienne. Dans les jours qui suivent, apparait une desquamation cutaneo-muqueuse qui peut persister plusieurs semaines. Differentes causes de surdosage aigu existent, dont l’ingestion d’une quantite importante de foie de poisson comme l’illustre notre cas clinique. Observation Un homme de 62 ans, aux antecedents d’hypercholesterolemie traitee par atorvastatine peche un thon d’environ 75 kg dans les Bouches du Rhone puis partage avec 2 convives, au dejeuner, le foie de ce thon qui pese environ 1 kg, poele en persillade. Deux heures apres le repas, les 3 convives developpent nausees, hepatalgie, erytheme facial et cephalees intenses. Le patient se presente aux urgences le lendemain matin devant la persistance des signes. Un scombrotoxisme est d’abord evoque mais le CAP-TV de Marseille, interroge dans les heures suivantes, evoque le diagnostic d’une hypervitaminose A par ingestion d’une grande quantite de foie. Le patient recoit un traitement symptomatique. A J2 les cephalees et nausees regressent mais l’erytheme persiste et la peau du patient commence a peler. Les 2 autres convives ayant partage le foie desquament egalement alors que les convives n’ayant mange que la chair du thon sont restes asymptomatiques. Au total, la peau du patient a pele progressivement du cuir chevelu (j3) aux membres inferieurs (a j19) en passant par les epaules et les membres superieurs. Discussion L’ingestion d’une grande quantite de foie de gros poissons carnivores tels que les requins, thons, ou bars peut induire un vrai tableau d’hypervitaminose A. Ce mode d’intoxication est tres rare en Europe. Il ne faut pas le confondre avec le scombrotoxisme qui est du a une veritable intoxication a l’histamine suite a l’ingestion de chair de poisson bleu mal conservee. Un cas d’hypervitaminose A dans un contexte similaire a ete relate par le CAP-TV de Marseille en 2010, il s’agissait de l’ingestion d’un foie de seriole pechee en Mediterranee. Le traitement est principalement symptomatique avec antalgique, hydratation et surveillance medicale car une hypertension intracrânienne peut se developper. Conclusion L’hypervitaminose A par ingestion de foie de poisson bleu etant tres rare, il est important que les cliniciens identifient precisement les circonstances de toute intoxication par poisson afin de traiter les patients de facon appropriee.

Introduction L’intoxication au paracetamol est parmi les intoxications medicamenteuses volontaires (IMV) l’une des plus frequemment rencontree. Le nombre d’appels pour ce motif aux centres antipoison ne cesse de croitre au cours des dernieres annees. Si le risque de toxicite hepatique est connu de tous les praticiens, celui de la toxicite renale l’est beaucoup moins. Nous rapportons ici le cas d’une adolescente de 16 ans hospitalisee pour la prise en charge d’une IMV au paracetamol compliquee d’une insuffisance hepatocellulaire aigue et d’une insuffisance renale aigue. Observation Une adolescente de 16 ans consulte le service des urgences pour un tableau de vomissements et d’intolerance alimentaire, avec notion d’oligurie. Ce tableau evolue depuis 3 jours, suite a une IMV au paracetamol (16 g, prise etalee sur plusieurs heures). Le bilan initial a j3 met en evidence une insuffisance hepatocellulaire (ASAT = 2835 UI/mL ; ALAT = 5076 UI/mL ; TP = 45 %) associee a une insuffisance renale aigue (creatinemie = 531 μmol/L). La paracetamolemie est a 6,45 mg/L. Un traitement empirique par N-Acetylcysteine est instaure. Parallelement a une amelioration rapide de la fonction hepatique, s’installait une insuffisance renale anurique necessitant plusieurs seances d’hemodialyse iteratives (l’hemodialyse n’a pas d’interet dans l’elimination du paracetamol). Devant une proteinurie a 15 g/L avec des ionogrammes urinaires en faveur d’une insuffisance renale aigue organique, une ponction biopsie renale au 6 e jour de l’intoxication est effectuee : aucun argument pour une glomerulopathie mais multiples signes de souffrance tubulaire aigue L’evolution est ensuite favorable avec une reprise progressive de la diurese, ainsi qu’une normalisation de la fonction hepatique. A 5 semaines de l’IMV, la patiente ne garde aucune sequelle apparente, la fonction renale est normale (creatinemie a 64 μmol/L, proteinurie negative) ainsi que la fonction hepatique. Discussion L’atteinte renale, lors de l’intoxication aigue au paracetamol, est rarement constatee, mais egalement peu recherchee. Les lesions histologiques constatees sont de type necrose tubulaire aigue. Si la physiopathologie hepatique est bien connue, celle renale l’est beaucoup moins ; il semblerait pourtant qu’ils aient une mecanique commune, a savoir une production de metabolites toxiques, conduisant a une mort cellulaire apoptotique par liaisons cellulaires covalentes directes. Les dernieres hypotheses, la plupart basees sur des modeles murins, impliquent le cytochrome P450, mais aussi la prostaglandine endoperoxydase synthetase, enzyme responsable egalement d’une production de metabolites toxiques (essentiellement le NAPQI) a partir de paracetamol. Le processus exact reste pourtant inconnu, comme le suggerent certains cas de toxicite renale sans toxicite hepatique associee. Conclusion Bien que peu connu et de mecanisme encore mal compris, le potentiel nephrotoxique du paracetamol est pourtant bien reel et peut amener dans les cas extremes a l’emploi de l’hemodialyse ; a l’heure actuelle, aucun traitement preventif n’a fait ses preuves.

Introduction La rilmenidine est un antihypertenseur commercialise depuis 1988. Elle agit essentiellement sur les recepteurs I1-imidazolines mais aussi sur les α2 centraux. Observation Nous decrivons le cas d’une fillette de 3 ans, 15 kg, ayant probablement ingere 2 comprimes de rilmenidine soit 2 mg. Une heure apres l’ingestion, dans le service d’accueil des urgences, l’examen neurologique relevait une agitation, une somnolence et un myosis serre peu reactif. Par ailleurs, l’enfant etait bradycarde et bradypneique (FR = 8–10 cycles/min) avec des pauses respiratoires. La perfusion intraveineuse de naloxone proposee par le medecin du CAP sollicite etait partiellement efficace. La guerison complete etait observee en 24 heures. Entre 2002 et 2014, 99 cas relatifs a la rilmenidine ont ete enregistres au CAPTV de Marseille dont 28 concernaient des enfants en moyenne âges de 1,7 an (1,3–7) et pesant 14 kg (10–22). Dans 26 % des cas pediatriques, la rilmenidine avait ete ingeree a la dose moyenne de 1,25 mg (0,25–6) et dans 65 % des cas aucun signe d’intoxication n’etait rapporte. Parmi les 9 patients symptomatiques, 5 presentaient, dans les 30 a 60 min suivant l’ingestion, une somnolence dont 3 une bradycardie et 2 une hypotension arterielle. Enfin, chez 2 patients, une symptomatologie « opiacee » associant bradypnee et myosis etait observee. Discussion Ce recensement illustre la diversite des manifestations cliniques lors d’une intoxication impliquant la rilmenidine. Le syndrome opiace, lorsqu’il est present, pourrait justifier l’utilisation de naloxone. Ces essais therapeutiques seraient motives par le lien entre les recepteurs α2 centraux et opiaces. Ainsi, plusieurs etudes, chez l’animal, ont montre, que les effets cardiovasculaires de la clonidine impliquaient la stimulation des recepteurs opiaces. En effet, par son effet α2-agoniste, la clonidine provoque la liberation de β-endorphine, agoniste opiace endogene. Neanmoins, l’efficacite de la naloxone, dans les intoxications a la clonidine, est inconstante. Conclusion Hormis le cadre du diagnostic differentiel de l’intoxication vraie aux opiaces, l’interet de la naloxone dans le traitement des intoxications a la rilmenidine ou a la clonidine n’est pas scientifiquement etabli.

Introduction De nombreuses especes de chenilles peuvent induire des tableaux cliniques locoregionaux des le moindre contact. C’est ainsi le cas des especes du genre Megalopyge, notamment l’espece M. opercularis , bien connue aux Etats-Unis. En Guyane francaise, quelques rares cas d’envenimations induites par des chenilles d’especes du meme genre ont deja ete rapportes. Les auteurs decrivent ici trois nouvelles observations apres contact cutane avec des chenilles du genre Megalopyge et probablement de l’espece M. albicollis . Observations Entre juin 2011 et mai 2014, trois patientes adultes dans la commune de Mana ont eu un contact cutane accidentel avec une chenille du genre Megalopyge. Immediatement elles ont presente des douleurs intenses necessitant une consultation medicale en urgence. L’examen clinique etait sans particularite hormis un œdeme generalise chez une patiente. Le traitement instaure a comporte antalgiques, corticoides, antihistaminiques, et deux patientes ont necessite une injection d’anesthesique local. L’evolution a ete favorable pour toutes en quelques heures sans aucune sequelle. Discussion Malgre le nombre eleve d’especes du genre Megalopyge, on ne retrouve dans la litterature medicale que des references rapportant des envenimations induites par l’espece M. opercularis . Le tableau clinique classique d’un tel accident comprend une atteinte cutanee peu douloureuse avec lesions erythemateuses bien visibles, pouvant s’associer a des manifestations systemiques (cephalee, tachycardie…). Les 3 cas guyanais rapportes ici concernent egalement une chenille du genre Megalopyge mais d’une espece autre qu’ opercularis (l’espece en cause serait M. albicollis ). Le tableau clinique presente par nos 3 patientes a ete atypique, avec une douleur plus intense qu’habituellement sans aucune lesion cutanee visible. Deux tableaux cliniques distincts semblent donc se retrouver apres un contact avec une chenille du genre Megalopyge en Amerique du sud.

The nepovirus Grapevine fanleaf virus (GFLV) is specifically transmitted by the nematode Xiphinema index. To identify the RNA2-encoded proteins involved in X. index -mediated spread of GFLV, chimeric RNA2 constructs were engineered by replacing the 2A, 2B MP , and/or 2C CP sequences of GFLV with their counterparts in Arabis mosaic virus (ArMV), a closely related nepovirus which is transmitted by Xiphinema diversicaudatum but not by X. index. Among the recombinant viruses obtained from transcripts of GFLV RNA1 and chimeric RNA2, only those which contained the 2C CP gene (504 aa) and 2B MP contiguous 9 C-terminal residues of GFLV were transmitted by X. index as efficiently as natural and synthetic wild-type GFLV, regardless of the origin of the 2A and 2B MP genes. As expected, ArMV was not transmitted probably because it is not retained by X. index. These results indicate that the determinants responsible for the specific spread of GFLV by X. index are located within the 513 C-terminal residues of the polyprotein encoded by RNA2.

RNA 2 of the multipartite genome of beet necrotic yellow vein virus carries the cistron for 21-kDa viral coat protein at its 5' extremity. The amber termination codon of the coat protein cistron undergoes suppression approximately 10% of the time so that translation continues into an adjacent 54-kDa open reading frame, yielding a 75-kDa readthrough protein. The roles of coat protein and the readthrough protein in infection were investigated with biologically active transcripts of RNA 2. Much of the coat protein cistron of the RNA 2 transcript could be deleted without interfering with viral replication and local lesion formation on leaves, although formation of the rod-shaped virions did not occur. Mutants in which the amber coat protein termination codon was replaced with an ochre codon or a tyrosine codon were also viable. The ochre codon was suppressed both in vitro and in planta. The mutant containing the tyrosine substitution produced only the 75-kDa read-through protein and was deficient in viral assembly. Deletions in the 54-kDa readthrough domain were also viable in planta but had different effects on virus assembly. A deletion in the C-terminal portion of the readthrough domain did not interfere with RNA packaging but, unexpectedly, deletions in the N-terminal portion were assembly deficient, although 21-kDa coat protein was produced in planta. Thus, the 75-kDa protein can apparently intervene in virion assembly even though it has not been detected in purified virions.

Objectifs : l’objectif de cette étude est d’évaluer la fréquence et la gravité des intoxications accidentelles par cannabis chez l’enfant signalées au Centre antipoison de Marseille (CAPM) du 1ier janvier 2008 au 31 décembre 2017, soit 10 ans. Une première étude a été effectuée par Spadari et al. entre 1993 et 2007 sur les données du CAPM. L’objectif est de faire un nouveau bilan des cas d’intoxications et de les confronter aux résultats de la précédente étude. Méthode : il s’agit d’une étude rétrospective des cas d’intoxications accidentelles par cannabis chez des enfants d’âge ≤ à 10 ans notifiés au CAPM de 2008 à 2017 inclus. Il a été exclu de cette étude, les prises infirmées certaines, les cas d’inhalations de fumée de cannabis ainsi que la prise concomitante d’autres substances. Résultats : le CAPM a recensé 238 cas d’intoxications cannabiques chez des enfants d’âge ≤ 10 ans durant la période 2008 - 2017. 67 % de ces intoxications concernaient des enfants âgés de 12 à 24 mois avec une prédominance pour le sexe féminin. De manière générale, ces intoxications se déroulaient au domicile parental (92,9 %). 58 % étaient dues à la résine de cannabis. La majorité des appels reçus au CAPM provenait d’un médecin hospitalier. Parmi ces 238 intoxications, nous avons eu 184 cas symptomatiques. Les signes cliniques retrouvés essentiellement étaient la somnolence (68 %), la mydriase (42 %), l’hypotonie (22 %) et l’agitation (16 %). La majorité des cas a reçu une prise en charge hospitalière durant 24 à 48 heures (59 %). Sur les 83 enfants qui ont bénéficié d’une recherche urinaire, 93,5 % étaient positifs. A partir de 2014, nous avons pu constater une augmentation de cas ayant une forte gravité ainsi que le nombre d’enfants hospitalisés en réanimation. Tout nos cas ont évolué favorablement. Aucun décès n’a été rapporté. Conclusions : notre étude ainsi que les différentes recherches citées confirment la hausse de la fréquence et de la gravité des intoxications cannabiques chez l’enfant en région PACA et même en France. La banalisation et la diffusion large du cannabis malgré son interdiction sont probablement responsables de l’augmentation de ces cas. De même, l’augmentation de la gravité est surement en lien également avec la hausse de la concentration de THC dans les produits à base de cannabis.

Grapevine fanleaf virus (genus Nepovirus) the causative agent of fanleaf degeneration, induces variable symptoms. This manuscript presents a mechanistic study of GFLV symptomatology on both an herbaceous model plant and an agronomically important crop plant.On N. occidentalis, I demonstrated that GFLV-F13 induces a reaction exhibiting hallmarks of a hypersensitive response (HR), partially restricting virus spread. Using reassortants, recombinants and natural variants of the virus, I could identify and map the viral determinant of this HR. On grapevine, I took advantage of a unique experimental set-up and used RNA-Seq to compare the transcriptoms of Gewurztraminer plants infected with two different GFLV strains, one of which induced stunting symptoms and the other mild symptoms. 1,023 genes among which genes involved in the regulation of HR, were specifically regulated by the more severe strain This is the first hint of a HR taking place in grapevine in response to a virus infection., Le Grapevine fanleaf virus (genre Nepovirus) est l'agent principal du court-noué de la vigne. Il induit des symptômes très variables. Ce travail présente une étude mécanistique de la symptomatologie du GFLV sur un hôte herbacé et sur l'hôte d’intérêt agronomique. Par détection de marqueurs biochimiques et moléculaires j'ai montré que le GFLV-F13 induit une réponse hypersensible (HR) sur N. occidentalis et une restriction partielle du virus. J'ai identifié puis cartographié le déterminant viral de cette HR en utilisant des réassortants, des recombinants et des variants naturels du virus. Sur vigne, sur un dispositif expérimental unique en son genre, j'ai mené une approche sans a priori d’étude transcriptomique par RNA-Seq. J'ai comparé des vignes du cépage gewurztraminer mono-infectées par une souche sévère induisant des symptômes de rabougrissement et par une souche plus modérée. 1 023 gènes sont spécifiquement dérégulés par la souche sévère parmi lesquels des gènes impliqués dans la régulation de la HR. Ce résultat permet de proposer pour la première fois qu'une HR pourrait être mise en place dans la vigne en réponse à une infection virale.