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Compostos que interagem com a molécula de DNA podem provocar alterações genotóxicas. Os testes utilizados para avaliação de genotoxicidade evoluíram ao longo dos anos, apresentando grande eficiência. Atualmente, utilizam-se várias metodologias tradicionais, como o ensaio cometa, e também algumas mais modernas, baseadas na biologia molecular. Considerando a importância de detectar os efeitos causados pela exposição a agentes potencialmente genotóxicos, essa tese apresenta três capítulos com formas de abordagem distintas, referente a essa temática. O primeiro capítulo visou a avaliação de estudos publicados acerca dos efeitos mutagênicos, genotóxicos e oxidativos causados pela exposição ocupacional a pesticidas pela realização uma revisão sistemática de artigos publicados entre os anos de 2011 a 2015. Observou-se que 44% dos estudos abordaram exclusivamente indivíduos do sexo masculino e 44% abordaram ambos os sexos, e 78% utilizaram trabalhadores rurais como população exposta. A classe de pesticida mais avaliada foi a de organofosforado. Os estudos foram separados por metodologias de análise utilizada e todos apresentaram algum tipo de alteração nas populações expostas a pesticidas no ambiente de trabalho. O segundo capítulo, publicado na revista Environmental Science and Pollution Research, considerou o cenário da dengue no estado de Goiás e as formas de combate ao mosquito, e buscou compreender os efeitos genotóxicos causados pela exposição de Agentes de combate a endemias aos pesticidas utilizados contra o mosquito, sendo o primeiro estudo publicado com esse grupo de trabalhadores na região centro-oeste. Os principais pesticidas utilizados foram inseticidas e larvicidas e foi observado um aumento no dano ao DNA na população exposta, sem influência dos fatores relacionados ao estilo de vida. No ensaio de transcritoma foi observada a expressão diferencial de genes relacionados a diversas doenças crônicas. Finalmente, o terceiro capítulo foi realizado em colaboração com o Instituto de Medicina Experimental, da Academia Tcheca de Ciências, visando a determinação de efeitos citotóxicos e genotóxicos, causados pela exposição in vitro a diferentes tipos de nanomateriais metálicos. Nos nanomateriais que apresentaram redução na viabilidade celular (citotóxicos) também foi identificado aumento na genotoxicidade. Além disso, três dos quatro nanomateriais não citotóxicos avaliados apresentaram efeitos genotóxicos. Estudos que visam detectar o potencial gentoxicológico de compostos são de extrema importância para definição de normas e regulamentações de aplicação e identificação dos riscos causados pela exposição. Nesse estudo, foram avaliados os efeitos toxicológicos e genotóxicos de diferentes compostos e misturas, com a utilização de técnicas tradicionais e modernas, in vitro ou por biomonitoramento humano, buscando compreender e determinar os riscos envolvidos na exposição a essas substâncias. The interaction of some compounds and DNA molecule can cause genotoxic changes. The tests used to evaluate genotoxicity have evolved over the years, and they have great efficiency. Currently, several traditional methodologies are used, such as the comet assay, and some more modern, based on molecular biology. Considering the importance of detecting the effects caused by exposure to potentially genotoxic agents, this thesis presents three chapters with different approaches to this topic. The first chapter aimed at evaluating published studies on the mutagenic, genotoxic and oxidative effects caused by occupational exposure to pesticides. For this, a systematic review of articles published between the years of 2011 and 2015 was carried out, focusing on these exposure conditions. The results showed that 44% of the studies addressed only men and 44% approached men and women, and 78% used rural workers as an exposed population. The most evaluated class of pesticide was organophosphorus. The studies were separated by methodologies of analysis used and all showed some type of alteration in the populations occupationally exposed to pesticides. The second chapter, published in the journal Environmental Science and Pollution Research, considered the dengue scene in the state of Goias and techniques of mosquitoes control, and sought to understand the genotoxic effects caused by exposure of endemic agents to pesticides used against Aedes aegypti, being the first study published with this group of workers. The main pesticides used were insecticides and larvicides and an increase in DNA damage was observed in the exposed population, without influence of the lifestyle factors. In the whole transcriptome assay the differential expression of genes related to various chronic diseases was observed. Finally, the third chapter was carried out in collaboration with the Institute of Experimental Medicine of the Czech Academy of Sciences, aiming the determination of cytotoxic and genotoxic effects caused by in vitro exposure to different types of metallic nanomaterials. In nanomaterials that showed cell viability reduction (cytotoxic), an increase in genotoxicity was also identified. In addition, three of the four non-cytotoxic nanomaterials evaluated showed genotoxic effects. Studies aimed at detecting the compounds genotoxic potential are extremely important for the regulatory definition and identification of risks caused by exposure. In this study, the toxicological and genotoxic effects of different compounds and mixtures were evaluated using traditional and modern techniques, in vitro or by human biomonitoring, seeking to understand and determine the risks involved in exposure to these substances. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Dissertação de Mestrado em Biotecnologia para as Ciências da Saúde O bisfenol A (BPA) atua como disruptor endócrino e é capaz de causar vários efeitos negativos no organismo, mesmo em doses reduzidas (Rosenmai et al., 2014). É de elevada produção industrial e é utilizado em todo o mundo na síntese de variados produtos poliméricos, como embalagens de alimentos, tampas de garrafas e tubos de aquecimento de água (Chapin et al., 2008; Rosenmai et al., 2014). A exposição ao BPA tem sido documentada em várias regiões do mundo e pensa-se que ocorre principalmente devido à sua presença em embalagens de alimentos e bebidas (Nachman et al., 2014). Devido à sua estrutura, este composto tem a capacidade de interagir com os recetores de estrogénio e assim desempenhar um papel importante na patogénese de várias doenças endócrinas como a infertilidade, tumores dependentes de hormonas e diversos distúrbios metabólicos (Konieczna et al., 2015; Morgan et al., 2016). A exposição, principalmente no início de vida, apresenta uma preocupação acrescida devido ao facto de poder ter um grande impacto nas principais fases de desenvolvimento e crescimento do indivíduo (Nachman et al., 2014). Durante a sua última reavaliação aos efeitos da exposição ao BPA, a Autoridade Europeia de Segurança Alimentar (EFSA) concluíu que não existem riscos para a saúde humana nos níveis de exposição atuais. No entanto, a dose diária tolerável (TDI) foi reduzida para os 4 μg/kg de peso corporal/dia (Dursun et al., 2016). O objetivo deste estudo foi avaliar in vivo o efeito do BPA na longevidade, prolificidade, comportamento e toxicidade em indivíduos da linhagem Oregon K de D. melanogaster. De forma a avaliar os efeitos biológicos e comportamentais, as moscas foram cruzadas e submetidas a diferentes concentrações de BPA (0,05 mM, 1 mM, 2 mM, 5 mM e 10 mM) em meio instantâneo para drosófila durante 3 dias e, em seguida, transferidas para um meio normal, onde continuaram a pôr ovos. Este processo foi repetido até à geração F2. Para analisar a genotoxicidade, utilizaram-se concentrações superiores de BPA (1 mM, 10 mM, 20 mM e 50 mM) e foram utilizados os ensaios SMART w/w+ e Cometa. Os resultados demonstraram que este composto causa de facto alterações, mesmo em dose baixa, na longevidade, prolificidade e no tempo de desenvolvimento larvar e que essas alterações afetam também as gerações seguintes. Mostrou-se ainda que o BPA afeta o comportamento e a interação social das drosófilas e que apresenta um potencial genotóxico real. Bisphenol A (BPA) acts as an endocrine disruptor and can cause various adverse effects in the body, even at low dose exposures. This compound is produced industrially in large quantities and is used all over the world in the synthesis of various polymeric products, some of them available in food packaging, bottle caps and water heating pipes (Chapin et al., 2008; Rosenmai et al., 2014). BPA’s widespread exposure has been documented in various regions and countries around the world and it is thought that the exposure occurs mainly due to it’s presence in food and beverage packaging (Chapin et al,. 2008; Nachman et al., 2014). Due to its structure, this compound has the ability to interact with estrogen receptors and thus play an important role in the pathogenesis of various endocrine diseases such as infertility, hormone-dependent tumors and various metabolic disorders (Konieczna et al., 2015; Morgan et al., 2016). Exposure in humans, especially early in life, is of particular concern due to the fact that it can have a big impact on the individual development and growth (Nachman et al., 2014). During its last reassessment for exposure to BPA, the European Food Safety Authority (EFSA) concluded that there is no risk to human health at current exposure levels. However, the tolerable daily dose (TDI) was reduced to 4 μg/kg of body weight/day (Dursun et al., 2016). The objective of this study was to evaluate in vivo the effect of BPA on longevity, prolificacy, behavior and toxicity in D. melanogaster, strain Oregon K. In order to evaluate the biological and behavioral effects, the flies were crossed and subjected to different concentrations of BPA (0.05 mM, 1 mM, 2 mM, 5 mM and 10 mM) in drosophila instant medium for 3 days, and then transferred to a standard medium, where they continued to lay eggs. This process was repeated until the F2 generation was obtained. To analyze the genotoxicity, higher concentrations of BPA were chosen (1 mM, 10 mM, 20 mM and 50 mM) and the SMART w/w+ and the comet assays were used. The results showed that this compound does cause changes, even at low doses, on longevity, prolificacy and larval development time and that these changes also affect subsequent generations. It also showed that BPA affects behavior and social interaction of fruit flies and present a real genotoxic potential.

Chromium-like metals are naturally occurring elements and in view of their multiple industrial, domestic, agricultural, medical and technological applications have led to their widespread distribution, raising concerns about their potential effects on human health and environment. OBJECTIVE: To evaluate the possible genotoxic and carcinogenic effects of exposure of male Rattus norvegicus to atmospheric trivalent chromium powder. METHODS: Male Rattus norvegicus were divided into acute exposure groups (250 and 500 μg/m3 for 8h, n=5/group) and subchronic (500 μg/m3, 1h30min/day for 45 days, n=8/group) to atmospheric trivalent chromium powder. As negative control group, animals were treated with dH2O 10 mL/kg (acute exposure) and exposed to filtered air (subchronic exposure); and as a positive, animals treated with cyclophosphamide 50 mg/kg, i.p. (acute exposure). At the end of the acute treatment, the comet assay was performed in peripheral blood and tests of micronuclei and chromosomal aberrations in bone marrow. At the end of the subchronic exposure period, histopathological analyzes of the pulmonary and hepatic tissues were performed. RESULTS: Acute exposure to trivalent chromium powder (250 and 500 μg/m3) induced (p

Resumo Introdução: trabalhadores de postos de combustíveis estão expostos às diversas substâncias químicas presentes no ambiente de trabalho, destacando-se entre elas o benzeno, devido às suas propriedades carcinogênicas. Objetivo: avaliar os danos genotóxicos relacionados à exposição ocupacional ao BTEX (benzeno, tolueno, etilbenzeno, xilenos) em trabalhadores de cinco postos de combustíveis do município do Rio de Janeiro, RJ. Metodologia: foram analisadas concentrações de BTEX no ar; atividades das enzimas catalase e glutationa S-transferase; e ensaio cometa em amostras de sangue total de 97 trabalhadores. Resultados: as concentrações de BTEX estavam dentro dos valores preconizados pela NR 15, incluindo Anexo 13-A. Entretanto, uma oscilação nos resultados de ensaio cometa foi observada entre os trabalhadores dos diferentes postos de combustíveis, principalmente em trabalhadores de postos com menores concentrações de benzeno. Discussão: esse resultado está de acordo com a literatura científica atual, que indica uma curva dose-resposta supralinear para o benzeno, observando-se em baixas concentrações um aumento não linear do risco de leucemia, provavelmente relacionado à maior metabolização do benzeno e à maior produção de seus metabólitos tóxicos nessas concentrações. Conclusão: os resultados deste estudo sugerem que a exposição ao BTEX, mesmo em baixas concentrações, contribui para o risco genotóxico à saúde humana.

Resumo Introdução: trabalhadores de postos de combustíveis estão expostos às diversas substâncias químicas presentes no ambiente de trabalho, destacando-se entre elas o benzeno, devido às suas propriedades carcinogênicas. Objetivo: avaliar os danos genotóxicos relacionados à exposição ocupacional ao BTEX (benzeno, tolueno, etilbenzeno, xilenos) em trabalhadores de cinco postos de combustíveis do município do Rio de Janeiro, RJ. Metodologia: foram analisadas concentrações de BTEX no ar; atividades das enzimas catalase e glutationa S-transferase; e ensaio cometa em amostras de sangue total de 97 trabalhadores. Resultados: as concentrações de BTEX estavam dentro dos valores preconizados pela NR 15, incluindo Anexo 13-A. Entretanto, uma oscilação nos resultados de ensaio cometa foi observada entre os trabalhadores dos diferentes postos de combustíveis, principalmente em trabalhadores de postos com menores concentrações de benzeno. Discussão: esse resultado está de acordo com a literatura científica atual, que indica uma curva dose-resposta supralinear para o benzeno, observando-se em baixas concentrações um aumento não linear do risco de leucemia, provavelmente relacionado à maior metabolização do benzeno e à maior produção de seus metabólitos tóxicos nessas concentrações. Conclusão: os resultados deste estudo sugerem que a exposição ao BTEX, mesmo em baixas concentrações, contribui para o risco genotóxico à saúde humana. Abstract Introduction: gas station workers are exposed to several chemicals in their workplace, highlighting benzene, due to its carcinogenic properties. Objective: to assess the genotoxic damage related to occupational exposure to BTEX (benzene, toluene, ethylbenzene, xylenes) in workers of five gas stations in Rio de Janeiro, RJ. Methods: analysis of BTEX concentrations in the air were carried out; as well as activities of catalase and glutathione S-transferase; and comet assay in whole blood samples of 97 workers. Results: BTEX levels were within the Brazilian threshold levels recommended by the NR 15, including Annex 13-A. However, an oscillation of the comet assay results was observed among workers of different gas stations, mainly in workers from gas stations with lower concentrations of benzene. Discussion: this result is in accordance with the current international scientific literature that indicates a supralinear exposure-response curve for benzene. In lower concentrations we could observe a high non-linear risk of leukemia, probably due to a greater benzene metabolism and a higher production of its toxic metabolites. Conclusion: the results of this study suggest that exposure to BTEX, even in low concentrations, contributes to genotoxic risk to human health.

Fipronil is a pesticide widely used for controlling fleas and ticks in domestic animals, and its short-term exposure can lead to serious effects on animals. However, the possible genotoxic effect of this compound has not been investigated in target animals. Based on the hypothesis that fipronil can induce genotoxicity, this study evaluated the effect of fipronil on DNA damage in peripheral blood cells. For that purpose, ten dogs of both sexes were used in the study. The product (6.7mg/kg) was applied on the dorsal neck region of each animal. Peripheral blood samples were collected immediately prior to application of the product, and at 3, 8 and 24 hours after the application. Samples were processed for comet assay. No statistically significant differences were found among the four time points. The current study suggests for the first time that a single exposure to this pesticide does not induce systemic genotoxic effect in dogs. RESUMO: O fipronil é um inseticida/herbicida amplamente utilizado para controle de pulgas e carrapatos em animais domésticos. Sua exposição a curto prazo tem acarretado efeitos deletérios em animais. Entretanto, o possível efeito genotóxico deste composto ainda não foi investigado em animais alvo. Baseando-se na hipótese de que o fipronil pode induzir genotoxicidade, o presente estudo avaliou o efeito deletério do fipronil no material genético de células de sangue periférico. Para isso, dez cães sadios, de ambos os sexos, foram utilizados neste estudo. O produto (6,7mg/kg) foi aplicado na região dorsal do pescoço de cada animal. As amostras de sangue foram coletadas imediatamente antes da aplicação do produto (controle) e após três, oito e 24 horas da aplicação. As amostras foram imediatamente processadas para condução do teste do cometa, a fim de se avaliar os danos basais no DNA. Não houve diferença significativa entre os quatro momentos de coleta em relação aos danos no material genético. O estudo sugere, pela primeira vez, que uma exposição única a este pesticida não induz efeito genotóxico sistêmico em cães.

Chronic myelogenous leukemia (CML) is a myeloproliferative disease of hematopoietic stem cells, characterized by the presence of the Philadelphia (Ph) chromosome, originating from a reciprocal translocation between the long arms of chromosomes 9 and 22, forming the gene BCR-ABL, which encodes a BCR-ABL oncoprotein with constitutive tyrosine kinase activity. The clinical course of CML is often divided into three phases: chronic, accelerated, and blast. The treatment of choice for the chronic phase is the first-generation tyrosine kinase inhibitor (TKI), imatinib mesylate, and for refractory patients, second-generation TKIs (dasatinib or nilotinib) are used. Studies have shown that residual leukemia may persist even in the best responders to TKI, since therapy is not curative. In this context, the present study aimed to evaluate the genotoxicity and mutagenicity of TKI in patients with CML followed at the hematology clinic of the Walter Cantídio University Hospital (HUWC). It is a cross-sectional study with 44 patients with clinical and molecular diagnosis of CML. Patients were stratified into three groups: diagnosis (CML D) (n = 5), use of first generation TKI (CML) (n = 31) and use of second generation TKI (CML) (n = 8). The control group (CG) consisted of apparently healthy individuals. Genotoxicity and mutagenicity were analyzed by the comet assay and micronucleus test. Statistical analysis of the data was performed using the GraphPad Prism 6.0 program using the Kruskal-Wallis or ANOVA, Mann Whitney or T-student tests, depending on the normality of the data and the level of significance was 5% (p < 0.05). Patients with CML had a statistically higher ADN damage index (DI) compared to CG (p < 0.0001). When the patients were stratified, a progressive increase of the DNA ID was verified in the groups: CML D, CML G1 and CML G2, respectively, relative to GC (p < 0.05). Patients with CML had a statistically higher micronucleus index (NMI), nucleoplasmic bridge index (NPI) and nuclear bud index (NBI) compared to the CG (p < 0.05). By stratifying patients with CML, it was found that patients in the G1 and G2 CML groups had statistically higher NMI and NPI compared to CG (p

Aparelhos soldados s?o utilizados amplamente em Ortodontia e Odontopediatria. A citotoxicidade e a genotoxicidade da solda a prata e da soldagem a laser j? foram testadas em Odontologia. No entanto, pouco se sabe sobre a t?cnica de soldagem Tungsten Inert Gas (TIG), que utiliza um arco el?trico entre um eletrodo e a pe?a a ser soldada. Os objetivos deste estudo foram avaliar a citotoxicidade e a genotoxicidade de uni?es soldadas a prata (silver soldered band - SSB), soldadas a laser (laser welded band - LWB), soldadas a TIG (TIG welded band ? TWB) e de an?is n?o soldados (no soldered or welded bands ? NS / WB) in vitro e in vivo. Para isso, o ensaio de redu??o de MTT foi realizado nas linhagens celulares HGF, HaCat, Vero e MRC-5. A genotoxicidade dos eluatos met?licos das ?reas soldadas foi determinada atrav?s do ensaio de cometas em c?lulas HGF ap?s tratamento de 3 horas. A quantifica??o de Ni, Fe, Cr, Cu, Ag, Zn, Cd e Sn nos elu?dos met?licos foi realizada com espectrometria de massa por plasma indutivamente acoplado (ICP-MS). Cu, Zn e Ag foram os ?ons mais detectados nas amostras de meio de bandas soldadas a prata, e Fe, Cr e Ni, nas amostras soldadas a laser e nas soldadas a TIG. O grupo SSB induziu forte citotoxicidade em todas as linhagens celulares. NS / WB, LWB e TWB apresentaram indu??o citot?xica fraca. No ensaio Cometa, o grupo SSB apresentou maior ?ndice de danos e mais cometas com classes de dano 3 e 4, em rela??o aos outros grupos. As uni?es soldadas a TIG, bem como uni?es soldadas a laser mostraram melhor biocompatibilidade. No estudo in vivo, genotoxicidade sobre as c?lulas da mucosa bucal dessas crian?as com arcos linguais contendo uni?es soldadas a prata, uni?es soldadas a laser, e sem qualquer aparelho foram avaliadas pelo ensaio de cometa bucal (BCA) e pelo ensaio de citometria bucal do micron?cleo (BMCyt). Os n?veis urin?rios de Ni, Cr, Fe, Zn, Cu, Ag, Cd e Sn foram investigados atrav?s de amostras de urina analisadas por ICP-MS. Os resultados do estudo indicam que a solda a prata e a soldagem a laser n?o causaram genotoxicidade na mucosa bucal durante o per?odo avaliado. As altera??es dos ?ons no conte?do urin?rio n?o puderam ser unicamente atribu?das aos aparelhos. A soldagem TIG parece ser t?cnica promissora a ser aplicada em ortodontia e merece ser mais investigada, uma vez que apresentou nos testes in vitro e in vivo um baixo potencial citot?xico e genot?xico. Soldered appliances are widely used in orthodontics and pediatric dentistry. The cytotoxicity and genotoxicity of silver solder and laser welding has already been tested in dentistry. However, little is known about the Tungsten Inert Gas (TIG) welding technique, which uses an electric arc between an electrode and the part to be welded. The aims of this study were to evaluate the cytotoxicity and genotoxicity of silver soldered (silver soldered bands - SSB), laser welded (laser welded bands - LWB), TIG welded (TIG welded bands ? TWB) joints and no soldered/welded bands (NS /WB) in vitro and in vivo. For that, MTT reduction assay was performed in HGF, HaCat, Vero and MRC-5 cell lines. The genotoxicity of the metallic eluates of the joints was determined by comet assay in HGF cells after 3-h treatment. The quantification of Ni, Fe, Cr, Cu, Ag, Zn Cd and Sn in the metallic eluates was performed with inductively coupled plasma mass spectrometry (ICP-MS). Cu, Zn and Ag were the most detected ions in SSB medium samples, and Fe, Cr and Ni in the samples of LWB and TWB. The SSB group induced strong cytotoxicity in all cell lines. NS/WB, LWB and TWB presented a weak cytotoxic induction. In comet assay, SSB group showed a higher damage index and more comets with damage class 3 and 4, compared to the other groups. In the in vivo study, the genotoxic effects on the buccal mucosa cells of children with lingual arches containing silver soldered joints, laser welded joints and without any appliance were accessed by buccal comet assay (BCA) and the buccal micronucleus cytome (BMCyt) assay. The urinary levels of Ni, Cr, Fe, Zn, Cu, Ag, Cd and Sn were investigated through urine samples analyzed by ICP-MS. The results of the study indicate that silver solder and laser welding did not cause genotoxicity in buccal mucosa cell during the period evaluated. The changes of the ions in the urinary contents cannot only be attributed to the appliances. TIG welding may be a promising technique to be applied in orthodontics and deserve be further investigated, as it presented in the in vitro and in vivo tests a low cytotoxic and genotoxic potential. Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico - CNPq

Este estudo teve o objetivo de avaliar a biocompatibilidade do cimento de ion?mero de vidro (CIV) convencional modificado por carbonato de c?lcio de conchas marinhas por meio dos testes de citotoxicidade e genotoxicidade celular. O carbonato de c?lcio (CC), nas propor??es de 1%, 5% e 10%, foi adicionado ao p? do CIV. Utilizando uma matriz de politetrafluoretileno (10 mm de di?metro e 3 mm de altura), foram confeccionadas as amostras, sendo obtidos quatro grupos (n=4): G1 ? apenas CIV (controle); G2 ? CIV com 1% de CC; G3 ? CIV com 5% de CC; G4 ? CIV com 10% de CC. A prepara??o das amostras foi realizada de acordo com a norma ISO 10993-12. O ensaio MTT foi utilizado para avaliar a citotoxicidade celular, e os ensaios de micron?cleo e cometa foram realizados para avaliar a genotoxicidade, por meio da utiliza??o de uma cultura celular de fibroblastos de camundongo da linhagem NIH/3T3. De acordo com o ensaio MTT, as amostras contendo a adi??o de 1% e 5% de CC apresentaram um maior potencial citot?xico, e as amostras com 10% de CC apresentaram um ?ndice de viabilidade celular compar?vel ao do CIV. O ensaio do micron?cleo evidenciou que o CIV com 10% de CC produziu uma melhora no potencial proliferativo celular (IPBC). CIV com 5% de CC apresentou uma redu??o no IPBC que n?o compromete o material do ponto de vista genot?xico. No ensaio cometa, os grupos com adi??o de CC mostraram um pequeno aumento do potencial genot?xico em compara??o ao CIV. Concluiu-se que a adi??o de 10% de CC ao CIV apresentou um baixo potencial citot?xico, sendo vi?vel para utiliza??o em ambiente celular, e a adi??o de 1%, 5% e 10% de CC ao CIV n?o induziu a um dano gen?tico. The aim of this study was to evaluate the biocompatibility of conventional glass ionomer cement (GIC) modified by calcium carbonate by means of cytotoxicity and genotoxicity tests. The calcium carbonate (CC), in proportions of 1%, 5% and 10%, was added to the GIC powder. A polytetrafluoroethylene matrix (10 mm diameter and 3 mm height) was used to make the samples, and four groups were obtained (n = 4): G1 ? only GIC (control); G2 ? GIC with 1% CC; G3 ? GIC with 5% CC; G4 ? GIC with 10% CC. The preparation of the samples was carried out in accordance with ISO 10993-12. The MTT test was used to evaluate the cell cytotoxicity, and the micronucleus and comet tests were performed to evaluate the genotoxicity, by using a mouse fibroblast cell culture of the NIH/3T3 lineage. According to MTT test, the samples with 1% and 5% CC showed a higher cytotoxic potential, and the samples with 10% CC presented a cellular viability index comparable to the GIC. The micronucleus test showed that GIC with 10% CC produced an improvement in cell proliferative potential (IPBC).CIV with 5% CC had a reduction in IPBC that did not compromise the material from the genotoxic point of view. In the comet test, groups with the addition of CC had a small increase in genotoxic potential compared with GIC. It was concluded that the addition of 10% CC to the GIC had a low cytotoxic potential and it is feasible for use in the cellular environment, and the addition of 1%, 5% and 10% CC to the GIC did not induce genetic damage. Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES

Submitted by ANA PAULA OLIVEIRA DE QUADROS null (ana_paula1909@hotmail.com) on 2016-09-13T02:29:06Z No. of bitstreams: 1 Dissertação mestrado Ana Paula 2016 versão final.pdf: 1111550 bytes, checksum: a2b50534f774d5f5a0270e9c3fbadbe1 (MD5) Approved for entry into archive by Felipe Augusto Arakaki (arakaki@reitoria.unesp.br) on 2016-09-14T20:46:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 quadros_apo_me_bot_par.pdf: 666719 bytes, checksum: 490ffa1e85d88d84d829c7966d9db1c2 (MD5) Made available in DSpace on 2016-09-14T20:46:15Z (GMT). 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A importância da C. oxyacantha se dá pela presença comprovada de flavonóides, que são conhecidos por sua ação antioxidante. Devido a inexistência na literatura de estudos investigando a toxicidade genética de C. oxyacantha para os seres humanos, o presente estudo foi elaborado visando avaliar se o extrato de frutos desta planta apresenta efeitos citotóxico, genotóxico e clastogênico/aneugênico em leucócitos humanos e células HepG2 em cultura, e mutagênico em cepas de Salmonella typhimurium (teste de Ames). Os resultados da análise de genotoxicidade mostraram que o extrato não apresentou efeitos genotóxicos nas concentrações de 2,5 e 5,0 µg/ml em ambos os tipos celulares analisados, no entanto, em concentrações acima de 10 µg/ml verificou-se a ocorrência de danos significativos ao DNA. Os resultados do teste do micronúcleo também mostraram que nas concentrações de 10µg/ml e superiores foram observados efeitos mutagênicos nas células estudadas. No teste de Ames, somente na cepa TA98 de S. typhimurium, com ativação metabólica, o extrato se mostrou mutagênico. Os dados obtidos no presente estudo nos permitem concluir que, nas condições do experimento, o extrato de frutos de C. oxyacantha apresenta efeito genotóxico e clastogênico/aneugênico em concentrações acima de 10 µg/ml; e pelo teste de Ames, o extrato, após metabolização, apresenta efeitos mutagênicos. Devido ao potencial medicinal desta planta e ao fato de algumas formulações com extratos da mesma já estarem sendo comercializados, os resultados de genotoxicidade positiva obtidos neste trabalho indicam cautela no uso desse extrato, e apontam para a necessidade de mais estudos, tanto in vitro quanto in vivo, que avaliem a toxicidade genética do extrato de frutos e de outras partes desta planta. About 11% of medicines considered essential by WHO are derived from medicinal plants, being important to develop scientific tests on these plants, evaluating several aspects as its pharmacological potential, genotoxicity, mutagenicity, antigenotoxicity, cytotoxicity, among others, to clarify if the use of such plants is safe for humans. Crataegus oxyacantha is a plant originally found in Europe and due to its medicinal potential, was at long time introduced in the South American continent. Belonging to the Rosaceae family, the tree form in the spring, large bunches of white flowers and pleasant fragrance of roses, which in autumn turn into small red fruits. The importance of C. oxyacantha is attributed to the presence of flavonoids as constituents, which are known for their antioxidant activity. Considering the absence in the literature of studies investigating the genetic toxicity of C. oxyacantha to humans, this study was designed to evaluate if the fruits extract of this plant present a cytotoxic, genotoxic and clastogenic/aneugenic effects in cultured human HepG2 and leukocytes cells, and mutagenicity in Salmonella typhimurium strains (Ames test). The results of genotoxicity analysis evidenced that the extract showed no genotoxic effects at 2.5 and 5.0 ug/ml concentrations, in both cell types tested, however, at concentrations above of 10 ug/ml significant DNA damage was observed. The micronucleus test results showed that the concentrations above of 10 ug/ml also produced clastogenic/aneugenic effects on the cells studied. The Ames test showed that in the S. typhimurium TA98 strain, with metabolic activation of the extract, was observed mutagenic effects. The data obtained in this study allow us to conclude that, under the experimental conditions employed, the fruits extract of C. oxyacantha has genotoxic and clastogenic/aneugenic effects at concentrations above of 10 ug/ml; and by the Ames test, the extract after metabolization, has mutagenic effects. Due to the medical potential of this plant and the fact that some formulations with extracts of it are already being marketed, the genetic toxicity observed in this study indicate caution in the use of this extract, and point to the necessity of further studies, both in vitro and in vivo, to better evaluate the genotoxicity of the fruit extract and other parts of this plant.

Philodryas patagoniensis é uma serpente opistóglifa comum no Rio Grande do Sul. Sua peçonha, produzida na glândula Duvernoy, constitui-se basicamente por metaloproteinases. Compostos biologicamente ativos que, assim como outros extratos naturais, são alvos de pesquisas na busca por agentes farmacológicos. No entanto, em conjunto, os mesmos devem passar por testes para caracterizar seus efeitos toxicológicos. Estes exames permitem definir se o composto analisado é capaz de causar danos à saúde humana, diagnosticar seus possíveis locais de ação, além de apontar tratamentos em casos de intoxicações e envenenamentos. Assim, a presente dissertação visa avaliar os potenciais toxicológicos da peçonha de P. patagoniensis: citotoxicologia e genotoxicologia. Para tanto, espécimes de P. patagoniensis foram capturados para a extração da zootoxina, a qual teve sua concentração proteica determinada por método colorimétrico de Bradford. A determinação da toxicidade aguda foi realizada em Artemia salina. Para avaliar a citotoxicidade e a genotoxicidade utilizou-se o teste de exclusão de azul de Tripan e ensaio Cometa em leucócitos mononucleares humanos, respectivamente. Ao final, testou-se a presença de atividade DNase na peçonha via difusão radial em agarose, e sua capacidade de gerar estresse oxidativo em náuplios de A. salina. Os resultados indicaram uma concentração proteica média de 115,7 mg/mL nos pools de veneno extraídos, os quais apresentaram uma DL50 de 461 μg/mL em A. salina, dose que o caracteriza como tóxico para este modelo experimental. Ao testar a toxina nas concentrações de 55, 110, 220, 575 e 1150 μg/mL, sua capacidade citotoxicológica e genotoxicológica foi significativa nas duas maiores concentrações. A atividade DNase foi ausente, no entanto, o estresse oxidativo foi detectado pela presença de biomarcadores. Foi possível estabelecer uma relação direta entre a toxicidade aguda em A. salina, a citotoxicidade e a genotoxicidade apurada, pois as doses letais para as artêmias causaram danos significativos, enquanto que as subletais não obtiveram diferença expressiva. Entre as possíveis razões para esta toxicidade, o estresse oxidativo desencadeado pela zootoxina demonstra estar relacionado aos danos encontrados. Philodryas patagoniensis is a common opisthoglyphous serpent in Rio Grande do Sul State. Its venom produced in Duvernoy’s gland consists mainly of metalloproteinases. Compounds biologically active which, like other natural extracts, are research targets in pursuit of pharmacological agents. However, together, should go through tests to characterize their toxicological effects. These tests allow you to define whether the analysed compound is able to cause damage to human health, diagnose its possible sites of action, in addition to point treatments in cases of intoxications and poisonings. Thus, the dissertation aims to evaluate the potential toxicity of P. patagoniensis venom: cytotoxicology and genotoxicology. Therefore, P. patagoniensis specimens were captured for the extraction of the zootoxin, which had its protein concentration determined by Bradford colorimetric method. Determination of acute toxicity was conducted in Artemia salina. To assess the cytotoxicity and genotoxicity used the exclusion of Trypan blue test and Comet assay in human mononuclear leukocytes, respectively. Finally, tested the presence of DNase activity in the venom via radial diffusion in agarose, and venom’s ability to generate oxidative stress in nauplii of A. salina. The results indicated a mean protein concentration of 115.7 mg/mL in pools of venom extracted, which showed an LD50 of 461 μg/mL in A. salina, dose that characterizes as toxic to this experimental model. When the toxin was tested at concentrations of 55, 110, 220, 575 and 1150 μg/ml, its cytotoxicology and genotoxicology capacity were significant in two largest concentrations. The DNase activity was absent, however, oxidative stress was detected by the presence of biomarkers. It was possible to establish a direct relationship between the acute toxicity in A. salina, cytotoxicity and genotoxicity found, because the lethal doses for brine shrimp caused significant damage, while sublethal did not obtain significant difference. Among the possible reasons for this toxicity, oxidative stress triggered by zootoxin shown to be related to the damage found.

A avaliação do dano ao DNA em morcegos foi realizada com o ensaio cometa, a partir de amostras sanguíneas coletadas de 3 espécies capturadas em parques municipais de Goiânia e remanescentes de Cerrado situados na zona rural dos municípios de Bela Vista e Urutaí, ambos no Estado de Goiás. As espécies amostradas na área urbana de Goiânia foram Artibeus lituratus, Artibeus planirostris e Platyrrhinus lineatus. Nas áreas não urbanas, apenas Artibeus planirostris foi amostrado. Estas espécies frugívoras são abundantes e bem adaptadas a diversos ambientes, incluindo o meio urbano e regiões destinadas a agricultura. Os fragmentos vegetais remanescentes amostrados no ambiente urbano estão bastante impactados e inseridos na região mais urbanizada da cidade, com tráfego intenso de veículos, grande concentração de edifícios e densidade populacional elevada. As amostragens em ambiente não urbano foram realizadas em fragmentos de Cerrado na área rural, cercados por pastagem e atividades agrícolas. Dessa forma, foi comparado o dano encontrado no DNA dos morcegos para verificar se no ambiente urbano o dano varia significativamente entre os locais, entre as espécies e se o peso teria influência nessa variação. O dano ao DNA da espécie A. planirostris foi comparado entre os ambientes urbano e não urbano, para identificar em qual dos ambientes havia maiores índices de dano. Os resultados demonstraram que no ambiente não urbano, o dano ao DNA foi mais elevado que no ambiente urbano, sendo estatisticamente significativo. Além disso, no ambiente urbano, o aumento no dano ao DNA está relacionado à redução na área dos parques. Dessa forma, no ambiente urbano, o dano ao DNA parece estar associado ao efeito de borda e outros fatores estressores típicos desse ambiente, enquanto no ambiente não urbano, os valores mais elevados de dano ao DNA podem estar relacionados aos agrotóxicos e pesticidas utilizados nas atividades agrícolas. The evaluation of DNA damage was carried out with the comet assay from blood samples of three bat species sampled at municipal parks of Goiania and Cerrado remnants, located in rural areas of the municipalities of Bela Vista and Urutaí, Goias state. The species sampled in the urban area were Artibeus lituratus, Artibeus planirostris and Platyrrhinus lineatus. In non-urban areas, only Artibeus planirostris was sampled. These frugivorous species are abundant and well adapted to different environments, including urban and agricultural areas. The remaining vegetation of the urban environment was very impacted and it was included in the most urbanized area of the city, with heavy traffic of vehicles, large concentration of buildings and high population density. Sampling in non-urban environments were held in Cerrado fragments in a rural area surrounded by pasture and agricultural activities. Thus, the DNA damage found in the urban environment bats were compared to verify whether there was significant variation among the parks, between species and if weight influenced the variation of the DNA damage. The DNA damage obtained for A. planirostris allowed to compare the urban and non-urban environment to identify in which of the environments this species presented higher DNA damages. The results showed that in the nonurban environment, the DNA damage was higher than in the urban environment being statistically significant. Moreover, in the urban environment, the increased DNA damage was associated with a reduction in area of the parks. In general, in the urban environment, the DNA damage may be linked indirectly to the edge effect and other environmental stressors, while in non-urban environment, higher levels of DNA damage may be related to pesticides used in the agricultural activities. Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG

CAPES Os agrotóxicos foram utilizados primeiramente na saúde pública, a fim de combater vetores que causam doenças. Posteriormente seu uso tornou-se intensivo na agricultura, com intenção de melhorar a produção e a aparência dos produtos. Atualmente o Brasil é o maior consumidor de defensivos agrícolas do mundo, e isto é um fato preocupante, visto que a exposição a esses agentes tóxicos pode trazer sérios riscos à saúde humana e meio ambiente. A Cipermetrina (Cp) e Metomil (Mt) são agrotóxicos largamente utilizados na agricultura brasileira. Conquanto a Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA) tenha estabelecido a Ingestão Diária Aceitável (IDA) de ambos isoladamente, é sabido que o consumidor está exposto a misturas de praguicidas por meio de sua dieta. No entanto, a maioria das pesquisas estudam os efeitos dos agrotóxicos isoladamente, sendo limitado o número de trabalhos que analisam as combinações desses compostos. Diante disso, avaliamos o potencial genotóxico, pelo ensaio cometa, e mutagênico, pelo teste do micronúcleo, de misturas de formulações comerciais de Mt e Cp em doses baixas. Setenta camundongos foram distribuídos em sete grupos. O grupo controle negativo (CN) recebeu água destilada (veículo de diluição). O controle positivo (CP) recebeu ciclofosfamida (20 mg/kg). Três grupos receberam misturas: A (0,05mg Mt + 0,0625 mg Cp), B (0,005mg Mt + 0,0125mg Cp) e C (0,0005mg Mt + 0,00125mg Cp). O grupo D recebeu apenas Mt (0,05mg) e o E apenas Cp (0,0625 mg). Os resultados de cada grupo foram comparados entre si pelo teste de Kruskal-Wallis com análise a posteriori, usando a estratégia de testes t par-a-par com correção de Bonferroni (p< 0,05). Todas as misturas apresentaram efeito genotóxico e apenas a mistura na maior concentração (A) foi mutagênica. Quando isolados, apenas a Cp apresentou atividade genotóxica significativa; entretanto, a média do dano de E foi menor que a encontrada nas três misturas estudadas. Desta forma, conclui-se que os efeitos do Mt e Cp são potencializados quando estes estão associados, mesmo em doses baixas, podendo causar danos à saúde. Pesticides were firstly used in public health in order to tackle disease vectors. Afterwards,in order to improve agricultural production and products good appearance,their use in crops became intensive. Currently, Brazil is the largest consumer of pesticides in the world; the exposure to these toxic agents can pose serious risks to human health and to the environment. Cypermethrin (Cp) and Methomyl (Mt) are pesticides widely used in Brazilian agriculture. While the National Health Surveillance Agency (ANVISA) has established their Acceptable Daily Intake (ADI), consumers are exposed to mixtures of pesticides through food. Nonetheless, most of studies consider the effects of isolated pesticides, when few studies analyze the combinations of compounds. Here, we evaluated the genotoxic and mutagenic effects of low doses of Mt and Cp mixtures obtained from commercial formulations. To do that, seventy mice, divided in seven groups,were used to perform comet assay and micronucleus test. The negative control group received distilled water (dilution vehicle of pesticides),while positive control group received cyclophosphamide (20 mg / kg). Three groups received mixtures of Mt and Cp: A (0.05 mg Mt + 0.0625 mg Cp), B (0.005 mg Mt + 0,0125mg Cp) and C (0,0005mg Mt + 0,00125mg Cp). The D group received only Mt (0.05 mg) and E group received only Cp (0.0625 mg). Kruskal-Wallis test was performed for statistical analysis; subsequently, a multiple comparison was performedusing t tests and Bonferroni correction (α = 0.05). All mixtures presented genotoxic effect and only the mixture at the highest concentration (A) has presented mutagenic effect. The mixtures presented higher genotoxic and mutagenic effects than isolated pesticides at same concentrations (p < 0,05); only Cp showed significant genotoxic activity. Thus, the effects of Mt and Cp are enhanced when they are associated, even at low doses. Results presented here suggest that mixtures of Mt and Cp have different effects in health than that shown by then whenisolated. Therefore, the relationship pesticides-health must be investigated with basis in real exposure patterns.

FACEPE A perda da diversidade biológica pode ser um reflexo da degradação ambiental, principalmente em locais com grandes contingentes demográficos. No Nordeste do Brasil, a maioria das regiões metropolitanas estão concentradas em zonas costeiras, ocasionando a liberação de uma grande quantidade de poluentes e ameaçando a sobrevivência de inúmeras espécies, como os peixes. Neste estudo, tentamos avaliar possíveis danos no DNA em um dos recursos pesqueiros mais consumidos pelas comunidades ribeirinhas nesta região, a tainha (Mugil curema). Metodologias de Ensaio Cometa (EC) e Teste do Micronúcleo (MN) foram utilizadas em populações desta espécie, provenientes de cinco estuários Pernambucanos (rios Goiana e Jaguaribe no litoral Norte), (rios Sirinhaém e Formoso no litoral Sul) e (rio Capibaribe na região metropolitana). Para fins de comparação, uma amostra controle foi coletada no estuário do Rio Una (local de preservação ambiental), litoral sul do estado de São Paulo. Nossos resultados mostram que o estuário mais afastado da região metropolitana, o Rio Formoso, quando comparado ao grupo controle, foi quem apresentou os menores níveis de danificação genômica (P >0,05). Já os demais estuários apresentaram níveis elevados de danificação quando comparados ao controle (P < 0,05). Em especial, o estuário do rio Capibaribe, localizado na capital Pernambucana, foi aquele que apresentou um dos maiores níveis de dano genômico (P = 0,0001). Tais dados caracterizam-no como o mais impactado entre os cinco avaliados. Estes dados também apontam para uma forte associação entre níveis elevados de danificação genômica (macro e microlesões no DNA) em locais próximos a grandes contingentes demográficos e industriais. Consequentemente, este cenário de impactação pode também estar afetando a comunidade biótica como um todo, incluindo as comunidades humanas ribeirinhas que tem este recurso como forma de subsistência. Estes resultados demonstram a efetividade do uso de metodologias de EC e MN como protocolos rápidos e precisos na avaliação de ecossistemas marinhos, principalmente em regiões fortemente impactadas pelas atividades antrópicas. The loss of biological diversity may be a reflection of environmental degradation, especially in places with large demographic contingents. In northeastern Brazil, most metropolitan regions are concentrated in coastal areas, causing the release of large amounts of pollutants and threatening the survival of many species, such as fish. In this study, we attempt to assess possible damage to the DNA in one of the most consumed fish resources by coastal communities in this region, mullet (Mugil curema). Methodologies comet assay (EC) and micronucleus test (MN) were used in populations of this species, from five Pernambucanos estuaries (Goiana and Jaguaribe rivers in the northern coast), (Sirinhaém and Formoso rivers in the south coast) and (Capibariberiver in Metropolitan region). For comparison purposes, a control sample was collected in the estuary of the Una River (local environmental preservation), southern coast of São Paulo. Our results show that the far estuary in the metropolitan area, the Formoso River, when compared to the control group, was the one who had the lowest levels of genomic damage (P> 0.05). None of the other estuaries showed elevated levels of damage compared to the control (P

Submitted by Boris INFORMAT (boris@uerj.br) on 2021-04-26T01:16:21Z No. of bitstreams: 1 Luiz Philippe da Silva Sergio Dissertacao completa.pdf: 3872735 bytes, checksum: 093b472b403e6fe307bc58e947e2ff3d (MD5) Made available in DSpace on 2021-04-26T01:16:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Luiz Philippe da Silva Sergio Dissertacao completa.pdf: 3872735 bytes, checksum: 093b472b403e6fe307bc58e947e2ff3d (MD5) Previous issue date: 2016-01-22 Fundação Carlos Chagas Filho de Amparo a Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro In regenerative medicine there is an increasing use of low level lasers in therapeutic protocols for treatment of diseases in soft tissues and the bone tissue. Lasers emit light beams with special properties, in which the wavelength, frequency, power and emission mode are properties which determine ther photophysical, photochemical and photobiological responses. However, it is suggested that low level lasers induced the generation of free radicals which could react with important biomolecules, such as DNA. These reactions can result in damage and induce DNA repair mechanisms preserving the genetic code integrity and cell homeostasis. Therefore, the purpose of this study was to evaluate DNA damage in peripheral blood cells from Wistar rats and expression of ERCC1 and ERCC2 genes in biological tissues exposed to low level lasers at wavelengths, fluences, powers and emission modes used in therapeutic protocols. In order to achieve the aims, peripheral blood samples were exposed to red laser (660 nm) and infrared (808 nm) at different fluences, power and emission modes, and the induction of DNA damage was evaluated by comet assay. In other experiments, DNA damage was assessed by a modified comet assay utilizing the repair enzymes: formamidopyrimidine DNA glycosylase (FPG) and endonuclease III. Skin and muscle from Wistar rats were exposed to lasers and samples from tissues were collected to RNA extraction, cDNA synthesis and gene expression evaluation by real-time PCR. Data from this study showed that exposure to lasers induces DNA damage depending on the fluence, power and emission mode, and that these damages are targeted by FPG and endonuclease III. ERCC1 and ERCC2 RNAm relative expression in exposed tissues was changed depending on the wavelength and fluences used. Results suggest that oxidative DNA damage could be considered for patient safety and therapeutic efficacy, as well as changes in the expression of DNA repair genes participate in effects of biostimulation justifying the therapeutic applications of low level lasers. Na medicina regenerativa há uma crescente utilização de lasers de baixa intensidade em protocolos terapêuticos para tratamento de doenças em tecidos moles e no tecido ósseo. Lasers emitem feixes de luz com características específicas, nas quais o comprimento de onda, a frequência, potência e modo de missão são propriedades determinantes para as respostas fotofísica, fotoquímica e fotobiológica. Entretanto, sugere-se que lasers de baixa potência induzem a produção de radicais livres, que podem reagir com biomoléculas importantes, como o DNA. Essas reações podem causar lesões e induzir mecanismos de reparo do DNA para preservar a integridade do código genético e homeostase celular. Portanto, o objetivo deste trabalho foi avaliar lesões no DNA de células do sangue periférico de ratos Wistar e a expressão dos genes ERCC1 e ERCC2 em tecidos biológicos expostos a lasers de baixa intensidade em comprimentos de onda, fluências, potências e modos de emissão utilizados em protocolos terapêuticos. Para tal, amostras de sangue periférico foram expostas ao laser vermelho (660 nm) e infravermelho (808 nm) em diferentes fluências, potências e modos de emissão, e a indução de lesões no DNA foi avaliada através do ensaio cometa. Em outros experimentos, lesões no DNA foram analisadas através do ensaio cometa modificado, utilizando as enzimas de reparo: formamidopirimidina DNA glicosilase (FPG) e endonuclease III. Pele e músculo de ratos Wistar foram expostos aos lasers e amostras desses tecidos foram retiradas para extração de RNA, síntese de cDNA e avaliação da expressão dos genes por PCR quantitativo em tempo real. Os dados obtidos neste estudo sugeriram que a exposição aos lasers induz lesões no DNA dependendo da fluência, potência e modo de emissão, e que essas lesões são alvos da FPG e endonuclease III. A expressão relativa do RNAm de ERCC1 e de ERCC2 foi alterada nos tecidos expostos dependendo do comprimento de onda e fluência utilizada. Os resultados obtidos neste estudo sugerem que danos oxidativos no DNA poderiam ser considerados para segurança do paciente e eficácia terapêutica, bem como alterações na expressão dos genes de reparo do DNA participariam dos efeitos de bioestimulação que justificam as aplicações terapêutica de lasers de baixa potência.

Há evidências do declínio da abundância de polinizadores e consequentemente dos seus serviços em algumas regiões do mundo, com possíveis impactos negativos para o funcionamento dos ecossistemas. Entre as principais ameaças aos polinizadores estão a perda de habitat devido a fragmentação e destruição da vegetação nativa, o uso de inseticidas na agricultura e as mudanças climáticas. O objetivo desta tese foi verificar como as abelhas nativas polinizadoras do tomateiro respondem a esses fatores de risco ambiental. O capítulo I apresenta a influência do contexto da paisagem na abundância de abelhas nativas polinizadoras do tomateiro. Para verificar a influência do contexto da paisagem amostrou-se a abundância de visitas de abelhas às flores do tomateiro em 10 cultivos de tomate convencional estaqueado em campo aberto em 2010 e 14 cultivos de tomate em 2011 e mensuraram-se as variáveis preditoras: proporção de vegetação nativa, tamanho relativo do maior fragmento e a distância entre o cultivo e a vegetação nativa mais próxima. As espécies amostradas foram incluídas em cinco grupos de acordo com a similaridade morfológica e ecológica. Abelhas de tamanho corporal menor responderam em escalas menores enquanto abelhas de tamanho corporal maior responderam em escalas maiores. A abundância de todos polinizadores juntos (buzzers), do grupo Exomalopsis e Centris aumentaram com a cobertura de vegetação nativa. A maioria dos grupos apresentaram maiores abundâncias em paisagens mais fragmentadas. Não houve relação entre a distância dos fragmentos de vegetação nativa e a abundância para nenhum dos grupos. O capítulo II apresenta a avaliação da genotoxicidade (danos ao DNA) dos inseticidas imidacloprid (neonicotinóide) e deltametrina (piretróide) usando o ensaio cometa para detectar danos ao DNA em células da hemolinfa, hemócitos, de indivíduos da espécie de abelha nativa Melipona quadrifasciata Lepeletier, 1836 (Hymenoptera, Apidae, Meliponini) em condições de e deltametrina, as abelhas operárias adultas foram expostas a solução de sacarose 50% acrescida de inseticida e o grupo controle foi alimentado apenas com solução de 50% de sacarose. O ensaio cometa e posteriormente a captura das imagens para verificação de possíveis danos ao DNA foi realizada 72 horas após a exposição aos inseticidas. Um aumento significativo de danos ao DNA (conforme indicado pelo momento da cauda de Olive) foi detectado em hemócitos de abelhas expostas a duas concentrações subletais do inseticida deltametrina quando comparados ao inseticida imidacloprid e com o controle negativo. O inseticida imidacloprid não apresentou danos ao DNA em hemócitos das abelhas expostas a duas concentrações subletais quando comparado ao controle negativo. O capítulo III apresenta a avaliação das potenciais consequências das mudanças climáticas na distribuição geográfica de cinco espécies de abelhas nativas polinizadoras do tomateiro e as alterações nas distribuições dessas espécies na área plantada de tomate no Brasil. Para avaliar as potenciais consequências das mudanças climáticas as projeções foram realizadas para o ano de 2100 em dois cenários de emissão de carbono, sendo um cenário considerado otimista, caminhos representativos de concentração (RCP) 2,6 e o outro pessimista, RCP 8,5. Projeções conjuntas foram implementadas para simular alterações na distribuição das cinco espécies de abelhas através de cinco algoritmos. A área total do cultivo foi computada em células com pelo menos 50% de adequabilidade para cada espécie e para cada cenário climático. Os resultados mostram uma redução na área de habitat adequado para as cinco espécies em ambos os cenários, sendo mais intensa no cenário pessimista. Em relação aos cultivos de tomate, em ambos os cenários, também haverá uma redução de habitat adequado para todas as espécies em áreas de plantio de tomate no Brasil. Os resultados do presente estudo sugerem que o desmatamento, os inseticidas e as mudanças climáticas podem afetar negativamente a abundância, a permanência e a distribuição espacial futura de abelhas nativas polinizadoras associadas aos cultivos de tomate. Tese (Doutorado em Ecologia) - Instituto de Ciências Biológicas, Universidade de Brasília, Brasília, DF. Orientador: Edison Ryoiti Sujii, Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia; co-orientadora: Edivani Villaron Franceschinelli.

Agricultural workers involved in the harvest of tobacco crops are regularly exposed to large quantities of pesticides. In order to determine how this exposure to pesticides induces genetic alterations in these workers, blood samples were obtained from 77 exposed individuals, as well as from 60 unexposed subjects. DNA damage was analyzed by the Comet assay and by the micronucleus (MN) test. The antioxidant profi le was evaluated by activity of superoxide dismutase (SOD), and the polymorphism of gene PON1 was used as a susceptibility biomarker. The content of inorganic elements in the blood samples was determined by PIXE analysis. Our results demonstrated that the damage frequency, damage index, the MN frequency, and the SOD activity were signifi cantly elevated in the exposed relative to the unexposed group. A modulation of the MN results for the PON1 gene was observed in the exposed group. The concentrations of inorganic elements in the exposed group were higher compared to those of the unexposed group. In this study, we observed that genetic damage, and change in oxidative balance were induced by the exposure of workers to complex mixtures of pesticides in the presence of inorganic compounds, whereby an infl uence of the genotype was evident.

O câncer é a primeira causa de mortes por doença, após 1 ano de idade, até o final da adolescência, excetuando aquelas relacionadas aos acidentes e à violência. A Leucemia Linfoide Aguda (LLA) afeta células linfoides e agrava-se rapidamente. São os tumores mais frequentes na infância e representam um terço de todas as neoplasias malignas nesta faixa etária. Em média, a taxa de cura excede 70%, todavia, apesar dos avanços das últimas décadas, os índices de crianças que apresentam recidiva da doença continua significativo. Danos endógenos ao DNA ocorrem numa frequência altíssima, além dos danos causados por terapias antitumorais. Alteração no reparo ao dano do DNA pode induzir mecanismos de resistência ao tratamento quimioterápico, resultando em aumento do reparo de lesões do DNA. Reparo por Excisão de Nucleotídeos (NER) é a via de reparo de DNA mais versátil e flexível nas células. Seus componentes estão sendo estudados como biomarcadores de prognóstico e terapias-alvo. No entanto, alguns relatórios têm abordado danos de DNA em Leucemia Linfoide Aguda (LLA) pediátrica. Neste estudo, realizamos um estudo de acompanhamento observacional em pacientes pediátricos para avaliar os danos do DNA pelo Ensaio Cometa Alcalino e expressão gênica da via de NER durante a indução da quimioterapia. Amostras de medula óssea (MO) ao diagnóstico, dia 15 (D15) e 30 (D30) do tratamento foram coletadas de 28 pacientes com LLA. Não houve aumento no índice de dano. No entanto, houve uma redução de células com baixo danos na comparação do D35 com o diagnóstico. Este resultado se confirmou em pacientes que apresentaram doença residual mínima positiva. A via de NER permaneceu constante, no entanto, em um único paciente, foi observada uma diminuição significativa da expressão dos genes, talvez devido ao silenciamento ou a regulação negativa das vias de reparo. Níveis de danos e reparação do DNA podem influenciar o resultado clínico, estar envolvidos na resistência aos fármacos e potencializar o risco de recidiva. Este é o primeiro estudo que avalia o dano ao DNA em amostras de MO de pacientes pediátricos com LLA. Apesar do pequeno número de pacientes alocados para o estudo, a partir dos achados é possível concluir que complexos de reparo merecem ser investigados a curto e a longo prazo. Acompanhamento dos resultados do paciente vai ajudar a elucidar a implicação dos nossos achados em taxas de cura e de recidiva. Cancer is the leading cause of death by disease after 1 year old until the end of adolescence, except those related to accidents and violence. Acute Lymphoid Leukemia (ALL) affects lymphoid cells and worsens quickly. They are the most frequent tumors in childhood and account for a third of all malignancies in this age group. On average, the cure rate exceeds 70%, however, despite the progress of recent decades, rates of children with disease recurrence remains significant. Endogenous DNA damage occurs at a very high frequency, in addition to the damage caused by anti-tumor therapies. Change in the repair of DNA damage can induce resistance mechanisms to chemotherapy, resulting in increased repair of DNA lesions. Nucleotide Excision Repair (NER) pathway is the more versatile and flexible DNA repair in cells. Its components are being studied as prognostic biomarkers and targeted therapies. However, there are some reports of DNA damage in pediatric Acute Lymphoid Leukemia (ALL). In this study, we conducted an observational follow-up study in pediatric patients to assess DNA damage by alkaline comet assay and gene expression of NER pathway during induction chemotherapy. Bone marrow (BM) samples at diagnosis, 15th (D15) and 30th (D30) of treatment were collected from 28 patients with ALL. There was no increase in damage index. However, there was a reduction of cells with low damage in comparison to the D35 diagnosis. This result was confirmed in patients with positive minimal residual disease. The NER pathway remained constant, however, in one patient, a significant decrease of gene expression was observed perhaps due to the silencing or down-regulation of repair pathways. Damage levels and DNA repair can influence the clinical result and may be involved in drug resistance and enhance the risk of recurrence. This is the first study to assess DNA damage in BM samples of pediatric patients with ALL. Despite the small number of patients allocated to the study, from the findings we conclude that repair complex deserves to be investigated in the short and long term. Monitoring patient’s outcomes will help to access the implication of our findings in cure and relapse rates.

A fosfatidilcolina é o principal fosfolipídio presente nas membranas celulares e nas lipoproteínas e por isso é capaz de interferir em diversos processos biológicos. Esse mesmo lipídio também possui atividade antioxidante o que o indica para a proteção de danos causados por radicais livres em condições de isquemia/reperfusão. O objetivo da presente pesquisa foi avaliar os danos toxicogenéticos causados pela torção do cordão espermático, na isquemia/reperfusão, bem como os efeitos da fosfatidilcolina nessa condição urológica em ensaio pré-clínico. Os resultados indicam que a torção do cordão espermático não causa danos genotóxicos e nem mutagênicos. A fosfatidilcolina na dose de 300mg/kg é tóxica e causa mortalidade o que contraindica a sua utilização. Já a dose de 150mg/kg não causa danos toxicogenéticos e não previne, de forma estatisticamente significativa, os danos teciduais causados de falta de nutrição e oxigenação das células testiculares, apesar de ocorrer uma tendência à redução dos mesmos. Diante disso a presente pesquisa sugere que novos estudos devem ser conduzidos para esclarecer essa tendência e os efeitos terapêuticos da fosfatidilcolina na citoproteção de células germinativas em testículos submetidos à isquemia/reperfusão visto que esse composto possui características que sugerem eficiência terapêutica. ABSTRACT - Phosphatidylcholine is the main phospholipid present in cell membranes and in lipoproteins and thus is able to interfere in various biological processes. This lipid also has antioxidant activity, indicating protection from damage caused by free radicals under conditions of ischemia/reperfusion. Given the above, the present study aimed to evaluate toxicogenetic damage caused by twisting of the spermatic cord in ischemia/reperfusion and also if phosphatidylcholine plays a hole in ischemia/reperfusion condition in preclinical trials. The results indicate that the spermatic cord torsion does not cause genotoxic damage nor mutagenic. The phosphatidylcholine at the dose of 300mg / kg is toxic and thus it’s not recommended to use. However, the dose of 150mg / kg does not promote toxicogenetic damage and does not statistically prevent tissue damage occoured from lack of oxygenation and nutrition of testicular cells, although there was a tendency to reduce them. Therefore this research suggests that further studies should be conducted to clarify this tendency and also, to provide a better explanation on the possible therapeutic effects of phosphatidylcholine in cytoprotection of germ cells submitted to to ischemia/reperfusion.

The use of plants as a source of palliative or cure for pathological conditions is quite common worldwide. Xanthium spinosum (Asteraceae), popularly known in Brazil as 'espinho de carneiro', is an annual weed from South America, which has been used by empiric medicine to treat neoplasias. Owing to the extensive use of the above-mentioned plant and to the lack of reports about the real effects of its infusion, current study evaluated the genotoxic potential of its aqueous extract at concentrations 0.02 g L-1, 0.1 g L-1 and 0.2 g L-1 by fish micronucleus test and by comet human leukocytes assay. The micronucleus test featured at least 50 cells with micronuclei to every 2,000 cells scored, as a mutagenic parameter. The comet assay was used as a parameter for assessing the level of cell damage and the damage index. Since no significant changes in strain cells exposed to the aqueous extract in the comet and micronucleus assays were reported, it seems that no genotoxicity evidence is extant at the concentrations and in the assays performed.Em diversos lugares do mundo a utilização de plantas como fonte paliativa ou de cura para determinadas condições patológicas é bastante comum. No Brasil, essa prática não se torna diferente devido à ampla biodiversidade da fauna e flora presentes no País. Nesse contexto, surge a Xanthium spinosum (Asteraceae), conhecida popularmente como "espinho-de-carneiro", um arbusto anual introduzido na América do Sul, o qual tem sido utilizado empiricamente no tratamento de neoplasias. Sabendo do extensivo uso dessa planta em contrapartida com nenhum estudo reportando os reais efeitos de sua infusão, o objetivo do estudo foi avaliar a genotoxicidade do extrato aquoso nas concentrações de 0,02 g L-1, 0,1 g L-1 e 0,2 g L-1, através do ensaio do micronúcleo písceo e do ensaio cometa em leucócitos de sangue humano. O ensaio do micronúcleo tem como parâmetro mutagênico a presença de no mínimo 50 células com micronúcleo em uma contagem de 2.000 células por amostra, enquanto o ensaio cometa utiliza como parâmetro o nível de dano e o índice de dano. Os resultados mostram que não foi possível observar mudanças significativas nas células expostas ao extrato aquoso, em ambos os testes, o que sugere não existir evidência de genotoxicidade nas concentrações utilizadas no ensaio.

O rio dos Sinos, no sul do Brasil, é poluído tanto por descargas industriais como por resíduos urbanos não tratados. Os biomarcadores de genotoxicidade em peixes são parâmetros valiosos para a determinação de risco ambiental. Neste estudo, utilizamos o ensaio cometa em sangue periférico de um peixe nativo (Hyphessobrycon luetkenii) para detectar a genotoxicidade devido a múltiplas fontes de poluição. Além disso, analisamos a possível influência da contaminação por alumínio, chumbo, cromo, cobre, níquel, ferro e zinco sobre o dano de DNA. Amostras de água foram coletadas sazonalmente em três pontos de coleta e os peixes foram expostos sob condições de laboratório. A análise química da água mostrou níveis elevados de alumínio e ferro na maioria das amostras dos pontos 2 e 3, localizados nos cursos médio e inferior do rio, respectivamente. O índice de dano de DNA estimado pelo ensaio cometa não demonstrou diferenças significativas tanto entre estações como entre pontos de coleta, enquanto que a frequência de células com dano de DNA apresentou valores superiores nas amostras de água coletadas durante a primavera nos pontos 1 e 2. Nenhum dos metais estudados parece estar associado com o aumento na frequência de células com dano de DNA observado durante a primavera. Os resultados deste estudo indicam que o rio dos Sinos está contaminado com substâncias genotóxicas para os peixes, incluindo as águas próximas à nascente do rio. The Sinos River, in southern Brazil, is polluted by industrial discharges and untreated urban wastes. Fish genotoxicity biomarkers are valuable parameters for environmental risk assessment. In this study, we used the comet assay to detect genotoxicity due to multiple sources of pollution in the peripheral blood of a native fish species (Hyphessobrycon luetkenii). In addition, we analysed possible DNA damage from aluminum, lead, chromium, copper, nickel, iron and zinc contamination. Water samples were collected seasonally from three sampling sites and the fish were assessed under laboratory conditions. Water chemical analysis showed an increased level of aluminum and iron in most of the samples at sites 2 and 3, located in the middle and lower river course, respectively. The index of DNA damage assessed by the comet assay demonstrated no significant differences in different seasons or at the different sampling sites, while the frequency of cells with DNA damage was higher in water samples collected at sites 1 and 2 during the spring season. None of the metals studied seems to be associated with the increase in the frequency of cells with DNA damage observed during the spring season. The results of this study indicate that the Sinos River is contaminated with substances that are genotoxic to fish, including the waters near the river spring.

Submitted by Guilherme Lemeszenski (guilherme@nead.unesp.br) on 2013-08-22T19:05:03Z No. of bitstreams: 1 S1415-47572009000100024.pdf: 81043 bytes, checksum: 04d9c31a7cba9d5aa733af9fb52b9ad1 (MD5) Made available in DSpace on 2013-08-22T19:05:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 S1415-47572009000100024.pdf: 81043 bytes, checksum: 04d9c31a7cba9d5aa733af9fb52b9ad1 (MD5) Previous issue date: 2009-01-01 Made available in DSpace on 2013-09-30T20:08:42Z (GMT). No. of bitstreams: 2 S1415-47572009000100024.pdf: 81043 bytes, checksum: 04d9c31a7cba9d5aa733af9fb52b9ad1 (MD5) S1415-47572009000100024.pdf.txt: 21127 bytes, checksum: 98afd83ff92a8a77363ba5b1fb75f38b (MD5) Previous issue date: 2009-01-01 Submitted by Vitor Silverio Rodrigues (vitorsrodrigues@reitoria.unesp.br) on 2014-05-20T13:54:50Z No. of bitstreams: 2 S1415-47572009000100024.pdf: 81043 bytes, checksum: 04d9c31a7cba9d5aa733af9fb52b9ad1 (MD5) S1415-47572009000100024.pdf.txt: 21127 bytes, checksum: 98afd83ff92a8a77363ba5b1fb75f38b (MD5) Made available in DSpace on 2014-05-20T13:54:50Z (GMT). No. of bitstreams: 2 S1415-47572009000100024.pdf: 81043 bytes, checksum: 04d9c31a7cba9d5aa733af9fb52b9ad1 (MD5) S1415-47572009000100024.pdf.txt: 21127 bytes, checksum: 98afd83ff92a8a77363ba5b1fb75f38b (MD5) Previous issue date: 2009-01-01 Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) Fundação para o Desenvolvimento da UNESP (FUNDUNESP) The present study applied the comet assay to erythrocytes of Oreochromis niloticus with the aim of improving protocols to detect DNA damage in these cells, by using two distinct pHs (pH = 12.1 and pH > 13) and evaluating whether there is a correspondence between silver and ethidium bromide staining. Comets were visually examined and, the frequency of cells with and without damage was obtained, as well as the distribution of classes and scores. By using the Kruskal-Wallis test, our results revealed that pH 12.1 is more effective, although both pHs can be used. Our findings also suggest that silver staining can substitute ethidium bromide, an expensive and highly toxic stain that requires specific equipment for examination. Universidade Estadual Paulista Júlio de Mesquita Filho Instituto de Biociências Departamento de Biologia Universidade Federal do Pará (UFPA) Instituto de Biociências Departamento de Genética Universidade Estadual Paulista Júlio de Mesquita Filho Instituto de Biociências Departamento de Biologia

Made available in DSpace on 2016-05-17T16:51:48Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-11-11. Added 1 bitstream(s) on 2016-05-17T16:55:42Z : No. of bitstreams: 1 000864394.pdf: 1398611 bytes, checksum: 1d53902014d0da0cad94053a5326233a (MD5)

O ensaio cometa é um dos ensaios de avaliação de genotoxicidade mais promissores de avaliação do risco humano, sendo recomendado para a monitorização de populações com exposição crónica a agentes genotóxicos. Os laboratórios são ambientes profissionais em que os trabalhadores podem encontrar-se expostos a agentes químicos. As drogas antineoplásicas são agentes químicos que são considerados carcinogénicos e, desta forma, medidas de protecção especiais devem ser adoptadas. O objectivo desta comunicação é contribuir para o desenvolvimento de um programa de biomonitorização que inclui a avaliação de genotoxicidade relacionada com biomarcadores de susceptibilidade genética.

Made available in DSpace on 2016-06-07T17:12:20Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-08-21. Added 1 bitstream(s) on 2016-06-07T17:16:59Z : No. of bitstreams: 1 000863929.pdf: 203027 bytes, checksum: 220c4264c28c1c6311dcf10433c1c3d3 (MD5) Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Made available in DSpace on 2016-01-13T13:27:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-07-31. Added 1 bitstream(s) on 2016-01-13T13:32:29Z : No. of bitstreams: 1 000856013.pdf: 1820037 bytes, checksum: e81bdc11a8a2cf1bd10aa727667c0182 (MD5) Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) A vinhaça, um dos principais resíduos gerados na transformação da cana-de-açúcar em etanol, possui potencial poluidor, frente ao alto volume subproduzido e por suas características físicoquímicas. A contaminação de lagos e rios, por infiltração de resíduos dispostos no solo, como a vinhaça e fertilizantes, por exemplo, merece destaque. Com o intuito de amenizar tais efeitos, o tratamento prévio desses resíduos constitui uma alternativa viável para diminuir os impactos ao meio ambiente. Portanto, este estudo teve por objetivo verificar a efetividade na redução da toxicidade da vinhaça de cana-de-açúcar por meio da correção de seu pH para um valor neutro (7,0), pela adição de cal (CaO), avaliando o seu potencial tóxico em peixes (Oreochromis niloticus). As análises foram realizadas por meio do ensaio do cometa e teste do micronúcleo para avaliação do potencial genotóxico, e análise histopatológica das brânquias, órgão de contato direto com o meio aquático. Após exposição das tilápias às diluições de vinhaça quimicamente tratada com cal, houve mortalidade de 30% dos peixes na diluição de 10%; em ensaios anteriores com vinhaça não tratada, a mortalidade na mesma diluição foi de 100%. O pH neutro (7,0) não permaneceu estável ao longo do bioensaio. Em relação ao ensaio do cometa, foram obtidos valores de escore de danos e cometas classe 3 com diferenças significativas em relação ao controle negativo para todas as diluições, com exceção da diluição de 1%. Não houve diferenças significativas entre os valores de micronúcleo e anormalidades nucleares entre as diluições e o controle negativo; comparando esses resultados com os de ensaios anteriores com diluições de vinhaça não tratada, foi observada uma diminuição da quantidade de micronúcleos. Por meio de analise histopatológica de brânquias, foi observado um aumento nas células clorídricas, principalmente na diluição de 5% The vinasse, a major waste generated in the processing of sugarcane into etanol, has a polluter potential in front off the volume generated and its physiochemical features. Contamination of lakes and rivers by infiltration of waste disposed in the soil, such as vinasse and fertilizers, deserves atention. In order to mitigate these effects, the pretreatment of this waste is a viable alternative to reduce the environmental impacts. Despite many studies about vinasse, only a few investigates their toxic potential. Therefore, this study aimed to verify the effectiveness in reducing sugarcane vinasse toxicity by pH correction to a neutral value (7.0), by adding lime (CaO), assessing their potential toxicity in fish (Oreochromis niloticus). Analyses were performed using the comet assay and micronucleus test to assess the genotoxic potential, and histopathological analysis of gills, organ that has direct contact with water. After exposure of tilapia to vinasse dilutions chemically treated with lime, 30% of fish in the dilution of 10% died; in earlier bioassays with untreated vinasse, at the same dilution the mortality was 100%. The neutral pH (7.0) has not remained stable during the bioassay. Regarding the comet assay, score damage and class 3 comets had significant differences when compared to the negative control for all dilutions, except for the dilution of 1%. There were no significant differences on the values of micronuclei and nuclear abnormalities between dilutions and negative control; comparing these results with those obtained in previous bioassays, with untreated vinasse dilutions, a decrease was observed in the number of micronuclei. For histopathologic analysis in gills, a slight increase was observed in clorídricas cells number, especially in the dilution of 5%, possibly in response to the presence of zinc in the vinasse samples. Diferents types of histologic changes were observed. The epithelial detachment, the epithelium ... FAPESP: 13/13228-0

Some water bodies in the Sinos River Basin (SRB) have been suffering the effects of pollution by residential, industrial and agroindustrial wastewater. The presence of cytotoxic and genotoxic compounds could compromise the water quality and the balance of these ecosystems. In this context, the research aimed to evaluate the genotoxicity and cytotoxicity of the water at four sites along the SRB (in the cities of Santo Antônio da Patrulha, Parobé, Campo Bom and Esteio), using bioassays in fish and cell culture. Samples of surface water were collected and evaluated in vitro using the Astyanax jacuhiensis fish species (micronucleus test and comet assay) and the Vero lineage of cells (comet assay and cytotoxicity tests, neutral red - NR and tetrazolium MTT). The micronucleus test in fish showed no significant differences between the sampling sites, and neither did the comet assay and the MTT and NR tests in Vero cells. The comet assay showed an increase in genetic damage in the fish exposed to water samples collected in the middle and lower sections of the basin (Parobé, Campo Bom and Esteio) when compared to the upper section of the basin (Santo Antônio da Patrulha). The results indicate contamination by genotoxic substances starting in the middle section of the SRB. Alguns corpos d’água da Bacia Hidrográfica do Rio dos Sinos (BHRS) vêm sofrendo os efeitos da poluição por efluentes domésticos, industriais e agroindustriais. A presença de compostos citotóxicos e genotóxicos pode comprometer a qualidade da água e o equilíbrio desses ecossistemas. Neste contexto, o objetivo do trabalho foi avaliar a genotoxicidade e a citotoxicidade da água em quatro pontos ao longo da BHRS (Santo Antônio da Patrulha, Parobé, Campo Bom e Esteio), utilizando bioensaios em peixes e em cultura celular. As amostras de água de superfície foram coletadas e avaliadas in vitro utilizando a espécie de peixe Astyanax jacuhiensis (teste de micronúcleo e ensaio cometa) e a linhagem celular tipo Vero (ensaio cometa e os testes de citotoxicidade vermelho neutro - VN e tetrazólio MTT). O teste de micronúcleos em peixes não apresentou diferenças significativas entre os pontos de coleta, assim como o ensaio cometa e os testes VN e MTT nas células Vero. O ensaio cometa demonstrou aumento nos danos genéticos em peixes expostos às amostras de água coletadas nos trechos médio e inferior da bacia (Parobé, Campo Bom e Esteio) em relação ao trecho superior da bacia (Santo Antônio da Patrulha). Os resultados indicam contaminação por substâncias genotóxicas a partir do trecho médio da BHRS.

Uranium is represented in the periodic table by the letter U, being the fourth element of the actinide group. Brazil, according to INB official data, has one of the largest reserves of uranium in the world. Uranium ionizing radiation can interfere with cellular functions at all levels of cell organization, inducing chemical and radiological toxicities. Its effect on the body is cumulative, and the radiation thus exposed can affect the DNA, inducing the development of neoplasias, such as leukemias. Therefore, biomonitoring of individuals exposed to radiation is reported in the literature as essential for human monitoring. Ceará has one of the largest uranium reserves in Brazil; The Uranium deposit of Santa Quitéria. The objective of the present work is to evaluate the possible genotoxic and mutagenic effects of human exposure to uranium in the Municipality of Santa Quiteria, using Alkaline Comet Assay techniques in human lymphocytes, Micronuclei in lymphocytes, oral mucosa and human reticulocytes, Chromosomal Aberrations In human lymphocytes and protein oxidation measurement. The samples collected totaled 161 individuals, of whom 91 were residents and 70 were non-residents. The mean age of the resident population was 41.24 ± 15.00; With an exposure time of 34.93 ± 16.06. In the alkaline comet analysis, there was a statistically significant difference between the Residual and Non Resident Population Damage Indices (IDs) of 10.63 ± 0.61 and 6.34 ± 0.31, respectively. Significant differences were found when the enzymes FPG, ENDO III, hOGG1 were used in the comet test. The highest rates were found among smokers and / or alcohol users. The results of the mutagenic evaluation, with the MN test on lymphocytes, MN on reticulocytes and MN on buccal mucosa revealed that there were no significant differences between the resident and non-resident groups. However, significant differences were found among smokers and / or alcohol users. The results of chromosomal aberrations of the resident population reveal that the frequencies of chromosomal aberrations (chromosomal and chromic breaks) of the resident population groups were significantly different when compared to the non-resident population groups. There were no differences in the results of numerical aberrations and mitotic index. Residual protein oxidation measurements showed that the dosage of carbonylated protein was significantly higher when compared to the non-resident group with the resident. The highest dosages were found among smokers and / or alcohol users. It is concluded that the uranium present in the geographic region is not enough to induce breaks in the DNA molecule, interfere with the assembly of the spindle fibers and impede the progression of the cell cycle, which should reflect the low doses of radiation to which they are exposed. Lesions in DNA as well as chromosomal changes observed in exposed smokers may be due to the effect of smoking. O Urânio é representado na tabela periódica pela letra U, sendo o quarto elemento do grupo dos actinídeos. O Brasil, segundo dados oficiais da INB, possui uma das maiores reservas mundiais de urânio. A radiação ionizante do urânio pode interferir nas funções celulares em todos os níveis de organização da célula, induzindo toxicidades química e radiológica. Seu efeito no organismo é cumulativo, e a radiação assim exposta pode afetar o DNA, induzindo o desenvolvimento de neoplasias, como as leucemias. Diante disso, o biomonitoramento de indivíduos expostos à radiação é relatado na literatura como essencial para monitorização humana. O Ceará possui uma das maiores reservas de urânio do Brasil; o depósito de Urânio de Santa Quitéria. O objetivo do presente trabalho tem como finalidade avaliar os possíveis efeitos genotóxicos e mutagênicos da exposição humana ao urânio no Município de Santa Quitéria, utilizando as técnicas de Ensaio do Cometa Alcalino em linfócitos humanos, Micronúcleos em linfócitos, mucosa oral e reticulócitos humanos, Aberrações Cromossômicas em linfócitos humanos e mensuração de oxidação protéica. As amostras coletadas totalizaram 161 indivíduos, sendo 91 residentes e 70 não residentes. A média de idade da população residente foi de 41,24 ± 15,00; com um tempo de exposição, de 34,93 ± 16,06. Na análise do cometa alcalino, houve diferença estatisticamente significante entre os Índices de Dano (IDs) das populações residentes e não residentes de 10,63±0,61 e 6,34±0,31, respectivamente. Diferenças significativas foram encontradas quando se utilizou no teste do cometa as enzimas FPG, ENDO III, hOGG1. Os maiores índices foram encontradas entre os fumantes e/ou etilistas. Os resultados da avaliação mutagênica, com o teste de MN em linfócitos, MN em reticulócitos e MN em mucosa bucal revelam que não houve diferenças significativas entre os grupos residentes e não residentes. Porém, diferenças significativas foram encontradas entre os fumantes e/ou etilistas. Os resultados de aberrações cromossômicas da população residente revelam que as frequências de aberrações cromossômicas (quebras cromossômicas e cromatídicas) dos grupos da população residente foram significativamente diferentes, quando comparado com aos grupos da população não residente. Não houve diferenças nos resultados de aberrações numéricas e índice mitótico. As mensurações de oxidação protéica de residentes revelam que a dosagem de proteína carbonilada foi significativamente maior, quando comparado o grupo não residente com o residente. As maiores dosagens foram encontradas entre os fumantes e/ou etilistas. Conclui-se que o urânio presente na região geográfica não é suficiente para induzir quebras na molécula de DNA, interferir na montagem das fibras do fuso e impedir a progressão do ciclo celular, o que deve refletir as baixas doses de radiação a que são expostas. As lesões no DNA, bem como alterações cromossômicas observadas nos fumantes expostos pode ser devido ao efeito do tabagismo.

Derivados de chalcona sulfonamida tem apresentado importantes atividades biológicas, incluindo atividade antitumoral. No presente estudo, investigou-se os efeitos biológicos da chalcona sulfonamida N-{4-[3-(4-nitrofenil)prop-2-enoil]fenil}-benzenosulfonamida (CPN) mediante a análise de bioindicadores de danos genéticos em sistemas-teste bacteriano, animal e humano. No Teste de Mutagenicidade de Ames, CPN não aumentou significativamente o número de revertentes prototróficas de Salmonella typhimurium, em nenhuma das cepas testadas, TA98 e TA100, em nenhuma das doses (p > 0,05). Entretanto, CPN apresentou um perfil moderado de um composto mutagênico e tóxico, devido à relação dose-resposta observada em todas as doses testadas, para as cepas TA98 e TA100. Na avaliação antimutagênica do Teste de Ames, CPN apresentou atividade antimutagênica para todas as doses testadas na cepa TA98 (p < 0,05). Na cepa TA100, CPN mostrou atividade antimutagênica nas doses acima de 50 μg/placa (p < 0,05). Os resultados do Teste do Micronúcleo demonstraram que CPN aumentou a frequência de eritrócitos policromáticos micronucleados (EPCMN) no tempo de 24 e 48 h, em todas as doses testadas, demonstrando efeito mutagênico deste composto. Uma diminuição na razão de eritrócitos policromáticos/normocromáticos (EPC/ENC) foi observada no tempo de 24 e 48 h, indicando ação citotóxica de CPN. CPN co-administrado com mitomicina C (MMC) diminuiu significativamente a freqüência de EPCMN em todas as doses testadas no tempo de 24 h, demonstrando ação antimutagênica (p < 0,05). Houve também uma diminuição na frequência de EPCMN em todas as doses testadas, no tempo de 48 h, mas a diminuição não foi significativa (p > 0,05). Além disso, CPN co-administrado com MMC aumentou a razão de EPC/ENC em todas as doses testadas, nos tempos de 24 e 48 h, demonstrando efeito anticitotóxico. No Ensaio Cometa, CPN aumentou significativamente a porcentagem de danos no DNA em todas as doses testadas (p < 0,05), demonstrando atividade genotóxica. Na análise da Cinética do Ciclo Celular, CPN não induziu alteração significativa nas fases G0/G1, S e G2/M do ciclo celular de células mononucleares do sangue periférico (PBMC) (p > 0,05). Entretanto, as doses de 256 e 512 μmol/L de CPN apresentaram um aumento significativo na porcentagem de células em sub-G1 (p < 0,05), o qual é um indicativo de apoptose, demonstrando ação citotóxica. Na detecção de apoptose e necrose por coloração com Anexina V/Iodeto de Propídeo, CPN mostrou um efeito citotóxico, pela indução de apoptose tardia e necrose. Assim, de acordo com os ensaios realizados CPN apresentou atividades genotóxica, citotóxica, antigenotóxica e anticitotóxica. Sulfonamide chalcone derivatives have shown important biological applications, including antitumor activity. In the present study, we investigated the biological effects of the sulfonamide chalcone N-{4-[3-(4-nitrophenyl)prop-2-enoyl]phenyl} benzenesulfonamide (CPN) through bioindicators of genetic damage in bacteria, animal and human. In the Ames Mutagenicity Test, CPN did not significantly increase the number of His+ revertants in Salmonella typhimurium tester strains TA98 and TA100 at all doses tested (p > 0.05). However, CPN presented a moderate mutagenic and toxic profile, due to dose-response relationship observed at all doses tested for TA98 and TA100 strains. In the antimutagenic evaluation of Ames Test, CPN presented antimutagenic activity at all doses tested in TA98 strain (p < 0.05). In the TA100 strain, CPN showed antimutagenic activity in doses over 50 μg/plate. In the Micronucleus Test, the results demonstrated that CPN increased the frequency of micronucleated polychromatic erythrocytes (MNPCE) at 24 h and 48 h, at all doses tested, demonstrating mutagenic effect of this compound. A decrease in polychromatic/normochromatic erythrocyte ratio (PCE/NCE) was observed at 24 h and 48 h, indicating the cytotoxic action of CPN. CPN co-administered with mitomycin C (MMC) significantly decreased the frequency of MNPCE at all doses tested in 24 h, demonstrating antimutagenic action (p < 0.05). Also, there was a decrease in the frequency of MNPCE at all tested doses in 48 h, but this decrease was not significant (p > 0.05). Additionally, CPN co-administered with MMC increased PCE/NCE ratio at all doses tested, in both times, demonstrating its anticytotoxic effect. In the Comet Assay, CPN significantly increased the percentage of DNA damages at all doses tested (p < 0.05), demonstrating genotoxic activity. In the analysis of cell cycle kinetics, CPN did not induce significant changes in the cell cycle phases G0/G1, S and G2/M of peripheral blood mononuclear cells (PBMC) (p > 0.05). However, doses of 256 and 512 μmol/L of the CPN presented a significant increase in the percentage of cells in sub-G1 (p < 0.05), which is indicative of apoptosis, indicating cytotoxic action. For apoptosis and necrosis detection using Annexin V/Propidium Iodide stain, CPN showed a cytotoxic effect by inducing late apoptosis and necrosis. Thus, according to tests performed CPN presented genotoxic, cytotoxic, antigenotoxic, and anticytotoxic activities. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Agricultural workers involved in the harvest of tobacco crops are regularly exposed to large quantities of pesticides. In order to determine how this exposure to pesticides induces genetic alterations in these workers, blood samples were obtained from 77 exposed individuals, as well as from 60 unexposed subjects. DNA damage was analyzed by the Comet assay and by the micronucleus (MN) test. The antioxidant profile was evaluated by activity of superoxide dismutase (SOD), and the polymorphism of gene PON1 was used as a susceptibility biomarker. The content of inorganic elements in the blood samples was determined by PIXE analysis. Our results demonstrated that the damage frequency, damage index, the MN frequency, and the SOD activity were significantly elevated in the exposed relative to the unexposed group. A modulation of the MN results for the PON1 gene was observed in the exposed group. The concentrations of inorganic elements in the exposed group were higher compared to those of the unexposed group. In this study, we observed that genetic damage, and change in oxidative balance were induced by the exposure of workers to complex mixtures of pesticides in the presence of inorganic compounds, whereby an influence of the genotype was evident. RESUMO Os agricultores envolvidos na colheita do tabaco estão regularmente expostos a grande quantidade de agroquímicos. Para determinar como esta exposição a pesticidas induz alterações genéticas nestes agricultores, amostras de sangue foram obtidas de 77 indivíduos expostos e de 60 indivíduos não expostos. O dano ao DNA foi analisado pelo Ensaio Cometa e pelo Teste de Micronúcleos (MN). A capacidade antioxidante foi avaliada pela atividade da enzima superóxido dismutase (SOD), e a influência do polimorfismo do gene PON1 foi usada como um biomarcador de susceptibilidade. O teor de elementos inorgânicos foi determinado nas amostras de sangue pela análise PIXE. Nossos resultados mostraram que a freqüência de danos, índice de danos, freqüência de MN e a atividade da SOD foram significativamente mais elevados no grupo exposto em relação ao não exposto. O gene PON1 demonstrou influenciar a frequência de MN observada no grupo exposto. As concentrações de elementos inorgânicos foram maiores no grupo exposto em relação ao não exposto. Neste estudo observamos que danos genéticos e alterações no balanço oxidativo foram induzidos pela exposição dos agricultores a misturas complexas de pesticidas na presença de componentes inorgânicos, e pelas quais a influência do genótipo foi evidente.

FACEPE A incidência de casos de câncer vem crescendo em ritmo acelerado em todo o mundo, o que tem despertado o interesse na busca de tratamentos mais eficazes. Geralmente, as drogas utilizadas nessas terapias, causam algum tipo de efeito colateral podendo também, em certas circunstâncias, ser carcinogênicos. Desta forma ensaios para avaliar a atividade genotóxica desses fármacos são necessários para promover uma segurança na utilização desses terapêuticos. As substâncias liquênicas apresentam várias atividades biológicas, podendo ser candidatas promissoras a drogas antineoplásicas. O objetivo deste estudo foi verificar a atividade citotóxica de extratos orgânicos e ácido úsnico obtido de Cladonia substellata bem como efeitos genotóxicos deste metabólito liquênico e seus derivados pirazólicos sintéticos. Os extratos orgânicos foram obtidos a partir da extração por esgotamento a quente em aparelho de Soxhlet do talo de C. substellata. O ácido úsnico foi obtido por purificação do extrato etéreo, seguido por sucessivas cristalizações até obtenção de alto grau de pureza da substância. Os derivados pirazólicos foram sintetizados através da reação do ácido úsnico purificado com as fenil-hidrazinas substituídas e quantidade equivalentes de bicarbonato de sódio (NaHCO3). Análises cromatográficas em camada delgada (CCD) e liquida de alta eficiência (CLAE), ressonância magnética nuclear de prótons (RMN-H1) e Carbono 13 (RMN-C13), bem como infravermelho (IV) foram realizadas para confirmação estrutural da molécula do ácido úsnico purificado e dos derivados pirazólicos. O ensaio de citotoxicidade foi realizado pelo método do brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazólio (MTT), avaliado os extratos orgânicos e o ácido úsnico purificado de C. substellata frente às linhagens de células tumorais NCI-H292 (carcinoma mucoepidermoide de pulmão humano), HEp-2 (carcinoma de laringe humana) e HL-60 (leucemia promielocitica aguda). Os testes de genotoxicidade in vivo, foram feitos pelo ensaio cometa e teste do micronúcleo. Os extratos orgânicos e o ácido úsnico purificado apresentaram porcentagem de inibição celular muito significativa (>70%), de modo que o extrato etéreo (100%) e o composto 3e (90,3%) apresentaram os melhores resultados para a linhagem celular MCF-7. O ácido úsnico purificado apresentou CI50 de 4, 97 μg/mL e 2,19 μg/mL às células NCI-H292 e HEp-2 respectivamente, enquanto que o extrato clorofórmico foi o que apresentou maior atividade frente à linhagem celular HL-60 com CI50 de 3,34 μg/mL. A análise estatística do ensaio cometa e teste do micronúcleo demonstrou que o ácido úsnico e todos os compostos derivados (3a-3f) não apresentaram valores significativos (p ≥ 0,05) quando comparados com o controle negativo. Desta forma, os compostos testados não foram genotóxicos e mutagênicos. Assim, os dados apresentados são animadores e ampliam os horizontes para realização de novos ensaios com o intuito de se aprofundar o conhecimento acerca destas novas moléculas. The incidence of cancer is increasing at a rapid pace worldwide, which has raised interest in the search for more effective treatments. Generally, the drugs used in these therapies cause some kind of side effect may also in certain circumstances be carcinogenic. Thus assays for evaluating the genotoxic activity of these agents are needed to promote safety in using these therapeutics. The liquenicas substances have various biological activities and may be promising candidates for anticancer drugs. The objective of this study was to determine the cytotoxic activity of organic extracts and usnic acid obtained from Cladonia substellata and genotoxic effects of this lichen metabolite and their synthetic pyrazole derivatives. The organic extracts were obtained from hot extraction in a Soxhlet apparatus depletion of stem C. substellata. The usnic acid was obtained by purification of the ether extract, followed by repeated crystallisations to achieve high purity of substance. The pyrazole derivatives were synthesized by the reaction of purified usnic acid with the substituted phenylhydrazines and equivalent amount of sodium bicarbonate (NaHCO3). Thin layer chromatographic analysis (TLC) and high performance liquid (HPLC), nuclear magnetic resonance of protons (H1-NMR) and carbon 13 (C13-NMR) and infrared (IR) were performed to confirm the structure of the molecule purified usnic acid and pyrazole derivatives. The cytotoxicity assay was performed by the method of 3- [4,5-dimethylthiazol-2,5-diphenyltetrazolium bromide] (MTT assay), rated the organic extracts and the purified usnic acid of C. substellata front of tumor cell lines NCI-H292 (human pulmonary mucoepidermoid carcinoma), HEp-2 (human laryngeal carcinoma) and HL-60 (acute promyelocytic leukemia). The in vivo genotoxicity tests were made by the comet assay and micronucleus test. The organic extracts and purified usnic acid showed very significant percentage of cellular inhibition (> 70%), so that the ethereal extract (100%) and Compound 3e (90,3%) showed the best results for cell line MCF-7. The purified usnic acid showed IC50 4, 97 mg / mL and 2.19 mg / mL to NCI-H292 cells and Hep-2 respectively, while the chloroform extract showed the most activity against the HL-60 cell line with IC50 3.34 mg / mL. Statistical analysis of the comet assay and micronucleus test showed that the usnic acid and its derivative compounds (3a-3f) showed no significant differences (p ≥ 0.05) when compared to the negative control. Thus, the compounds tested were not genotoxic and mutagenic. Thus, the data presented are encouraging and broaden the horizons for new tests in order to increase knowledge about these new molecules.

Dissertação de Mestrado em Genética Molecular Comparativa e Tecnológica A contaminação dos ecossistemas com metais pesados (MP) é uma preocupação mundial. Dentre os vários MP poluentes, o chumbo (Pb) é um dos mais tóxicos, colocando em risco a saúde humana e dos animais. Este elemento não-essencial encontra-se difundido de forma generalizada no ambiente e é altamente fito e genotóxico. A alface (Lactuca sativa L.) é uma hortícola muito importante na alimentação humana e encontra-se referenciada como espécie standard para testes de toxicidade e genotoxicidade. Neste estudo, avaliou-se a ação do Pb em concentrações legais para águas de rega em plantas de alface, ao nível da germinação, crescimento e integridade do DNA. Expondo sementes de duas cultivares de alface, “Reine de Mai” (acumuladora de cádmio) e “Bola de Manteiga” (considerada sensível a MP), durante 7 dias às concentrações de 0, 0,05, 0,5, 5, 10 e 20 mg/L de Pb, verificou-se que a maioria das doses utilizadas não afetou de forma significativa a germinação, os comprimentos das partes radiculares e aéreas, e os pesos frescos das plântulas, levando, em certos casos, a um estímulo destes parâmetros, possivelmente devido a um papel como micronutriente do Pb. A velocidade de germinação e o vigor das sementes foram afetados tanto de forma positiva (normalmente, nas concentrações mais baixas) como negativa (nas concentrações mais elevadas). Estes resultados foram obtidos para ambas as cultivares, sendo que a “Bola de Manteiga” não se demonstrou sensível para estas concentrações de Pb, mas menos tolerante que a “Reine de Mai”. Realizou-se também um ensaio de exposição ao Pb em hidroponia com plantas da cultivar “Reine de Mai”, com cerca de duas semanas, usando as concentrações de 0, 0,05, 0,5, 5 mg/L de Pb. Ao fim de 14 e 28 dias de exposição foram avaliados os comprimentos, e respetivos pesos frescos, das partes aéreas e radiculares. Os resultados apontam para um efeito hormético das concentrações de Pb testadas, e para uma possível ativação/ desenvolvimento de mecanismos de defesa contra o Pb. Através do ensaio do cometa em células dos ápices radiculares de plantas expostas durante 28 dias ao Pb, verificou-se que com o aumento da concentração deste metal, maior é a quantidade de danos nos núcleos destas células. A concentração de 0,05 mg/L não se demonstrou tão tóxica como as restantes utilizadas. De modo a avaliar melhor a genotoxicidade do Pb, aplicaram-se os marcadores moleculares ISSRs e EST-SSRs a amostras de folhas e raízes expostas a ambos os tempos de exposição. Os ISSRs demonstraram que com o aumento da concentração de Pb maior é a instabilidade genómica das amostras. Permitiram ainda verificar que nas raízes há uma maior instabilidade comparativamente às folhas, e que com o aumento do tempo de exposição a estabilidade genómica aumenta. Estes resultados confirmam os obtidos no ensaio de exposição, para um possível processo de tolerância/adaptação. Os EST-SSRs não demonstraram qualquer instabilidade entre as diversas amostras testadas. Com este trabalho verificou-se que a alface é uma cultura apropriada para estudos de fito e genotoxicidade, e que os parâmetros avaliados são bons biomarcadores/bioindicadores da toxicidade do Pb. The contamination of the ecosystems with heavy metals (HM) is a global concern. Among the various HM pollutants, lead (Pb) is one of the most toxic, presenting a big risk for human and animal health. This non-essential element, widely distributed in the environment, is highly phyto- and genotoxic. The lettuce (Lactuca sativa L.) constitutes an important vegetable for human nutrition and is referred as a standard species for toxicity and genotoxicity tests. The current study, reports on the effect of legal Pb concentrations on germination, growth and DNA integrity in this species. Seeds of two lettuce cultivars, namely “Reine de Mai” (cadmium accumulator) and “Bola de Manteiga” (considered HM sensitive), were exposed to a range of Pb concentrations (0, 0.05, 0.5, 5, 10 and 20 mg/L) for 7 days and the effect on several parameters (germination, roots and shoots length and fresh weights of the seedlings) were evaluated. The results demonstrate that most of the doses did not negatively affect these characteristics, and in some cases, it was even possible to observe a positive relation between the measured parameters and the Pb concentrations, possibily related with a role of Pb as micronutrient. Furthermore, the germination speed and seed vigour were affected both positively (usually at lower concentrations) and negatively (at higher concentrations). These results were obtained for both cultivars and the “Bola de Manteiga” demonstrated to not be a sensitive cultivar to these concentrations of Pb, but was less tolerant than “Reine de Mai”. Also, the present study reports a test for Pb exposure in hydroponic conditions with “Reine de Mai” plants, (with approximately two weeks old), using the following Pb concentration range: 0, 0.05, 0.5 and 5 mg/L. After 14 and 28 days of exposure, roots and shoots lengths, as well as fresh weights, were evaluated. The results point to a hormetic effect of the Pb concentrations, and a possible activation/development of defence mechanisms against Pb. Through a comet assay in apical root cells Pb-exposed for 28 days, it is shown an increase in DNA fragmentation correlates with increasing Pb concentrations. The concentration of 0.05 mg/L demonstrated that it is not as toxic as the others. In order to more closely assess the genotoxicity of Pb, a molecular markers-based analysis (ISSRs and EST-SSRs) was applied to leaves and roots samples previously exposed to both exposure times. The ISSRs demonstrated that an increasing in Pb concentration leads to a greater genomic instability. Furthermore, this analysis also allowed to verify that there is a higher instability in roots compared to leaves, and with increasing time of exposure there is an improvement of the genomic stability. These results are in accordance with those obtained in the exposure test for a possible process of tolerance/ adaptation. The EST-SSRs did not reveal instability between the various samples tested. This work presents the lettuce as a suitable crop for phyto- and genotoxic studies, as well as several parameters as reliable biomarkers / bioindicators of Pb toxicity.

CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico O objetivo do presente trabalho foi realizar estudos fitoquímicos de E. plicata, bem como avaliar a citotoxicidade, o papel do estresse oxidativo e a genotoxicidade. O pó dos bulbos de E. plicata foi submetido à maceração com etanol, a solução concentrada até resíduo em rotaevaporador. O extrato etanólico foi submetido ao fracionamento em coluna cromatográfica aberta de sílica gel, sendo utilizado como fase móvel solventes de polaridade crescente. A fração diclorometano foi submetida ao refracionamento em cromatografia em camada preparativa, utilizando como fase móvel o diclorometano, sendo obtidas 3 subfrações. O extrato etanólico, suas frações e subfrações foram submetidos a análises cromatográficas e espectrofotométricas. Todas as amostras foram submetidas aos ensaios: viabilidade celular (MTT), da capacidade antioxidante (DPPH), cometa e micronúcleo. A partir do extrato etanólico obteve-se uma fração rica em naftoquinona (Fração diclorometano). O fracionamento desta levou ao isolamento da isoeleuterina (fração S2 e majoritária), sendo a fração S3 minoritária (não identificada e não testadas). Estudos cromatográficos e espectrofotométricos permitiram a identificação de S2 (isoeleuterina). O fracionamento contribuiu positivamente para citotoxicidade em células VERO, sendo a amostra mais citotóxica a S1. Para células HepG2, a citotoxicidade foi concentração dependente, sendo que o fracionamento não contribuiu positivamente para esta. Também, em relação ao tempo, quanto maior o tempo de exposição, menor foi a citotoxicidade para as células HepG2. A capacidade antioxidante máxima foi observada para subfração S1, sendo que esta possuiu baixa genotoxicidade em ambos os métodos e foi a mais citotóxica. A fração diclorometano possui uma capacidade antioxidante intermediaria, porém apresentou uma elevada genotoxicidade no ensaio do micronúcleo. A isoeleuterina (S2) mostrou-se menor capacidade antioxidante, menor citotoxicidade e resultados conflitantes na genotoxicidade. O extrato etanólico possuiu a menor capacidade antioxidante, genotoxicidade moderada e menor citotoxicidade. Ao se analisar os resultados verifica-se que: a subfração S1 é a mais promissora como candidato a 9 fármaco antimalárico, visto possuir taxas de citotoxicidade e genotoxicidade em níveis aceitáveis. A isoeleuterina necessita de investigações complementares sobre a genotoxicidade. Em relação à fração diclorometano desaconselha-se seu uso para o desenvolvimento do medicamento antimalárico, visto ser a mais genotóxica. The purpose of this study was phytochemical studies of E. plicata, and to evaluate the cytotoxicity, the role of oxidative stress and genotoxicity. The powder of E. plicata bulbs underwent maceration with ethanol, the solution concentrated to residue in rotaevaporator. The ethanol extract was subjected to fractionation by open column chromatography over silica gel, being used as the mobile phase solvents of increasing polarity. The dichloromethane fraction was subjected to fractionation by preparative layer chromatography using dichloromethane as mobile phase, and 3 subfractions obtained. The ethanol extract, fractions and subfractions were subjected to chromatographic and spectrophotometric analysis. All samples were subjected to the tests: cellular viability (MTT), the antioxidant capacity (DPPH), comet and micronucleus assays. From the ethanol extract obtained a rich fraction naphthoquinone (dichloromethane fraction). Fractionation of this led to the isolation of: S1, S2 (major fraction), and fraction of minority S3 (unidentified, not tested). Chromatographic studies and spectrophotometric allowed the identification of S2 (isoeleuterin). Fractionation contributed positively to cytotoxicity on VERO cells, the sample being more cytotoxic to S1. The cytotoxicity in HepG2 cells was concentration dependent, being the fractionation did not contribute positively to this. Also, over time, the longer the exposure time, the lower the cytotoxicity to HepG2 cells. The maximum antioxidant activity was observed for subfraction S1, and this low genotoxicity possessed by both methods and it was the most cytotoxic. The dichloromethane fraction has an intermediate antioxidant capacity, but had a high genotoxicity in micronucleus assay. The isoeleuterin (S2) was lower antioxidant capacity, lower cytotoxicity and genotoxicity conflicting results. The ethanol extract possessed the lowest antioxidant capacity, moderate genotoxicity and lower cytotoxicity. When analyzing the results occur that: a subfraction S1 is the most promising candidate as the antimalarial drug, as have cytotoxicity and genotoxicity rates at acceptable levels. The isoeleuterin needs additional research on 11 genotoxicity. Regarding the dichloromethane fraction was not advisable to use for the development of an antimalarial drug, since it is more genotoxic.

Aquatic environments are ecosystems that most affected impacts caused by anthropogenic action, since it is the final compartments of various products produced by human activity. This study evaluated the fish specie Serrasalmus brandtii (pirambeba), collected at two sites in the Itaparica reservoir (Brazil) during March/12 to January/2013 through biochemical and genotoxic biomarkers. Around the reservoir resettlement areas exist with agricultural practices using agrochemicals. Thus, the study aimed to use S. brandtii as specie sentinel for this region of the Sao Francisco river. There was no significant difference in the physicochemical parameters measured such as temperature and dissolved oxygen over the sample period. Among the morphological parameters, the masses of the specimens varied between sampling period. Acetylcholinesterase (AChE) and butyrylcholinesterase (BChE) activities were quantify on the brain and muscle specimens collected from the two sites. Brain AChE from pirambeba collected at site 1 showed a significant decay in specific activity over the study period, however protein content did not show the same profile. Brain BChE specific activity had significant variation during the sampling period. On the contrary, pirambeba collected at site 2 showed no significant difference in the brain AChE specific activity and protein content. Brain BChE of these specimens showed significant variation on the specific activity values. On muscle tissue, pirambeba collected at site 1 showed significant variation in the values of AChE specific activity as well as on the protein content during the sample period. BChE specific activity on the muscle also had significant variation. Pirambeba collected at site 2 showed significant variation on muscle AChE specific activity and protein content values over the analyzed period. For muscle BChE activity,values, the results showed pattern similar to the one observed on site 1. Genotoxicity assays were performed on pirambeba erythrocyte cells collected at two sites. The results showed frequency of micronuclei (MN) and significant variation between the mean frequencies of MN over the study period was observed. Nuclear abnormalities (NA) were also analyzed and the results indicated that pirambeba the site 1 had higher nuclear abnormalities frequencies than the pirambeba from site 2. The Comet assay indicated that majority of erythrocyte nuclei analyzed from both sites shown class 1damage indicating slight DNA damage. In vitro studies were also performed for the characterization of brain AChE from pirambeba and kinetic assays showed values of 0.324 ± 0.04 mmol /L and 0.709 ± 0.014 mmol / min-1.mg protein for the apparent kinetic constants Kmapp and Vmáxapp respectively. Brain AChE inhibitory assays showed that muscle AChE (0.362±0.2 μM) was more sensitive to carbamate eserine that brain AChE (0.887 ± 0.1 μM) AChE and when compared brain AChE between eserine (0.887 ± 0,1μM) and glyphosate (2,276 ± 0,02μM), there was a greater sensitivity for brain AChE with eserine. We conclude that among the biomarkers genotoxic tested, the results showed that the MN test was considered the most sensitive; S. brandtii specie can be a specie sentinel for the submedium San Francisco region, since was present in all samples of the river, even during the most severe period of drought and low water level, but also by having a direct relationship with the AChE activity and forming MN. Ambientes aquáticos são ecossistemas que mais sofrem impactos causados pela ação antropogênica, uma vez que constitui compartimentos finais de vários produtos gerados pela atividade humana. O presente trabalho avaliou a espécie de peixe Serrasalmus brandtii (pirambeba), coletada em dois sítios no reservatório Itaparica (Brasil) durante o período de março/12 a janeiro de 2013 através de biomarcadores bioquímicos e genotóxicos. No entorno do reservatório existem reassentamentos com práticas agrícolas empregando agroquímicos. Desta forma, o trabalho visou a utilização de S. brandtii como sentinela no rio Sao Francisco. Não houve diferença marcante nos parâmetros físico-químicos temperatura e oxigênio dissolvido mensurados ao longo do período amostral. Entre os parâmetros morfológicos, as massas dos espécimes variaram entre os meses de amostragem. Foi realizada quantificação de atividade acetilcolinesterase (AChE) e butirilcolinesterase (BChE) cerebral e muscular de espécimes coletados nos dois sítios. AChE cerebral de pirambeba coletada no sítio 1 apresentou decaimento significativo na atividade específica ao longo do período estudado, no entanto o conteúdo protéico não mostrou o mesmo perfil. A atividade específica BChE cerebral mostrou variação significativa durante o período de amostragem. Todavia, pirambeba coletada no sítio 2 não mostrou diferença significativa na atividade específica de AChE cerebral e conteúdo protéico. BChE cerebral nesses espécimes apresentou variação significativa nos valores de atividade específica. No tecido muscular, pirambeba coletada no sítio 1 apresentou variação significativa nos valores de atividade específica AChE, bem como conteúdo protéico durante período amostrado. A atividade específica de BChE muscular também teve variação significativa. Espécimes coletadas no sítio 2 apresentaram variação significativa na atividade específica da AChE muscular e no conteúdo protéico ao longo do período estudado. Para valores de atividade de BChE muscular, os resultados apresentaram um padrão semelhante ao observado no sítio 1. Os ensaios genotóxicos foram realizados em eritrócitos de pirambeba coletadas nos dois sítios. Os resultados mostraram frequência de micronúcleos (MN) e variação significativa entre as freqüências de MN foi observada ao longo do período estudado. Anormalidades nucleares (AN) também foram analisadas e resultados indicaram que espécimes do sítio 1 tiveram maiores freqüências de AN do que espécimes do sítio 2. O ensaio Cometa indicou que a maioria dos núcleos de eritrócitos analisados nos dois sítios apresentou dano na classe1, indicando danos leves no DNA das células. Estudos in vitro foram também realizados para caracterização de AChE cerebral de pirambeba e ensaios cinéticos mostraram valores de 0,324±0,04 mmol/L e 0,709±0,014 mmol/min-1.mg de proteína para constantes cinéticas aparentes Kmapp e Vmáxapp, respectivamente. Ensaios inibitórios de AChE mostraram que AChE muscular (0,362±0,2) foi mais sensível ao carbamato de eserina que a AChE cerebral (0,887±0,1) e quando comparados AChE cerebral entre a eserina (0.887±0,1μM) e o glifosato (2,276±0,02μM), verificou-se uma maior sensibilidade para a AChE cerebral com eserina. Concluímos que dentre os biomarcadores genotóxicos testados, os resultados mostraram que teste de MN foi considerado o mais sensível; a espécie S. brandtii pode ser a espécie sentinela para a região do submédio São Francisco, visto que esteve presente no rio em todas as coletas, mesmo durante o período mais rigoroso de estiagem e baixo nível da água, como também por apresentar relação direta com a atividade de AChE e a formação de MN.

Submitted by Boris Flegr (boris@uerj.br) on 2021-01-06T20:54:36Z No. of bitstreams: 1 TESE_FINAL_PUBLICADA_Marcos_Massao_Murata.pdf: 1372527 bytes, checksum: c4c801ec3698313fbb970ae5f4321fcd (MD5) Made available in DSpace on 2021-01-06T20:54:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TESE_FINAL_PUBLICADA_Marcos_Massao_Murata.pdf: 1372527 bytes, checksum: c4c801ec3698313fbb970ae5f4321fcd (MD5) Previous issue date: 2014-04-30 Silicosis is caused by the inhalation of crystalline silicon dioxide (SiO2 or silica) and is one of the most important occupational diseases as, although prevention efforts have been made for many decades, this disease is a worldwide problem. As silicosis is not curable, it is of great interest and practical consequence of the possibility of using these physiological responses as prospective biomarkers, which may indicate initial exposure to crystalline silica or early. Biomarkers are cellular, biochemical or molecular alterations that are measurable in biological media, which can provide an early warning system for risk of future adverse health outcomes. Thus, this study sought to establish biomarkers of effect on cellular and molecular levels, which may point, as early as possible, silica exposure, and also the emergence of silicosis within a context of toxicological risk assessment. Comet assay, activities evaluation of the enzymes catalase and GPX, and evaluation of the expression of TGF-β, IFN, IL-4, IL-5, IL-12 and CCL-5 genes were assayed in biological matrices (blood or lung) in mice between 1 and 7 days after silica exposure. Significant difference was observed between control and exposed animals with respect to the rate of DNA damage throughout the study period. There was no difference in catalase activity between exposed and control samples. GPX seems to show a peak of activity after 4 days of exposure differed significantly from all times. The TGF-β gene expression was increased after 1 day. IFN, IL-4, IL-12 showed higher expression in the intermediate period, between 3 and 5 days after exposure. The CCL-5 gene also showed increased expression in 3 to 5 days after exposure to a lesser extent presented on day 7. IFN, IL-4, IL-12 showed no expression at day 7. It was not observed the IL-5 gene expression in the evaluated period. The results showed a stronger inflammatory process in the intermediate period of time between 3 and 5 days. A silicose é causada pela inalação de dióxido de silício cristalino (SiO2 ou sílica) e é uma das mais importantes doenças ocupacionais uma vez que, apesar de esforços para prevenção terem sido feitos por muitas décadas, essa doença continua sendo um problema mundial. Como a silicose não é uma doença curável, é de grande interesse e consequência prática a possibilidade de usar respostas fisiológicas como biomarcadores prospectivos, que poderiam indicar exposição inicial à sílica cristalina ou início da silicose. Biomarcadores são alterações celulares, bioquímicas ou moleculares, mensuráveis em meio biológico que podem promover um sistema de alerta para um risco futuro de eventos adversos à saúde. O presente estudo buscou estabelecer biomarcadores, em nível celular e molecular, que possam apontar a exposição à sílica, e também o surgimento da silicose dentro de um contexto de avaliação de risco toxicológico. Ensaio cometa, avaliação das atividades das enzimas catalase e GPX, e avaliação da expressão dos genes TGF-β, IFN, IL-4, IL-5, IL-12 e CCL-5 foram realizados em matrizes biológicas (sangue ou pulmão) de camundongos Swiss-Webster, entre 1 a 7 dias após a exposição à sílica. Diferença significativa foi observada entre animais controle e expostos com relação à taxa de dano ao DNA em todo o período avaliado. Não houve diferença significativa na atividade da catalase entre os grupos exposto e controle, enquanto que a GPX apresentou um pico de atividade após 4 dias da exposição diferindo significativamente dos demais tempos. Não houve expressão do gene IL-5 no período avaliado. O gene TGF-β teve uma maior expressão após 1 dia da exposição, enquanto que os genes IFN, IL-4, IL-12 e CCL-5 apresentaram maior expressão no período entre 3 e 5 dias após a exposição. O gene CCL-5 teve a expressão diminuída no dia 7, enquanto IFN, IL-4, IL-12 não apresentaram expressão no dia 7. Os resultados evidenciam um processo inflamatório mais intenso no período intermediário de tempo, entre 3 e 5 dias.

Made available in DSpace on 2015-05-14T16:53:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-20Bitstream added on 2015-05-14T16:59:34Z : No. of bitstreams: 1 000828685_20180220.pdf: 84586 bytes, checksum: d84934c54c4c7bf16f944037a7e4f907 (MD5) Bitstreams deleted on 2018-02-23T13:06:31Z: 000828685_20180220.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2018-02-23T13:07:23Z : No. of bitstreams: 1 000828685.pdf: 508291 bytes, checksum: 0e40447e1566f7e0b0193e5b7f93a678 (MD5) Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) As indústrias têxteis têm contribuído para a contaminação dos corpos d’água, por descartar seus efluentes no meio ambiente. Essas indústrias utilizam uma grande diversidade de corantes em seus processos de tingimento, dentre eles, os azocorantes. Estes corantes azóicos, pela sua característica molecular de difícil remoção ou degradação, somado ao seu amplo uso, são considerados altamente detrimentais ao ambiente. O corante Acid Red 114, pertencente a classe dos azocorantes, é o agente químico alvo deste trabalho. Este estudo tem como proposta, investigar a possibilidade de degradação por microrganismos isolados do lodo de uma indústria têxtil e avaliar as toxicidades do corante Acid Red 114 e dos subprodutos gerados na sua biodegradação. Para avaliação da toxicidade deste corante, foram considerados os parâmetros de genotoxicidade e mutagenicidade. Para análise da genotoxicidade, foram utilizados o ensaio do cometa em cultura de hepatoma humano (HepG2). Para avaliar o potencial mutagênico, foram realizados os testes do micronúcleo (MN) em cultura de células HepG2 e o teste de Salmonella/microssoma. A comprovação da biodegradação foi feita por meio do método físico-químico de Espetrofotometria UV-Vis e FTIR. De acordo com os resultados obtidos, o corante Acid Red 114 mostrou-se genotóxico e também mutagênico para as células HepG2, mas não mutagênico para Salmonella typhimurium. O biodegradado gerado pelas bactérias Enterococcus faecalis e Alcaligenes faecalis foi genotóxico e mutagênico para a cultura celular HepG2, mas não foi mutagênico no teste com Salmonella/microssoma. O biodegradado gerado pela bactéria Achromobacter nitridificans apresentou, em células HepG2, potencial genotóxico, mas não foi mutagênico para HepG2 nem para o teste de Salmonella/microssoma. Estes resultados de toxicidade mostraram que o uso deste corante requer bastante cautela, pois ele pode ter ação adversa nos... Textile industries have contributed to the contamination of water bodies by disposing their effluents into the environment. These industries use a wide variety of dyes in dyeing processes, among them, the azo dyes. These azo dyes due to their molecular characteristics of difficult removal or degradation and their extensive use, are considered highly detrimental to the environment. The dye Acid Red 114, is included in the class of azo dyes, and it is the chemical agent target of this study. This study is proposed to investigate the possibility of degradation by microorganisms isolated from the sludge of a textile industry and evaluate the toxicity of the Acid Red 114 dye and by-products generated in its biodegradation. To evaluate the toxicity of this dye parameters of genotoxicity and mutagenicity were considered. For the genotoxicity analysis, the comet assay in cultured human hepatoma (HepG2) was used. To evaluate the mutagenic potential, the micronucleus test (MN) in HepG2 cultured cells and Salmonella/microsome test were performed. Evidence of biodegradation was taken by physicochemical method of spectrophotometry UV-Vis and FTIR. According to the results, the Acid Red 114 dye showed to be genotoxic and mutagenic to HepG2 cells but not mutagenic to Salmonella typhimurium. The biodegraded generated by the bacteria Enterococcus faecalis and Alcaligenes faecalis was genotoxic and mutagenic to HepG2 cells, but not mutagenic to Salmonella/microsome test. The biodegraded generated by the bacterium Achromobacter nitridificans showed in HepG2 cells, genotoxic potential, but was not mutagenic to HepG2 or Salmonella/microsome test. These toxicity results showed that the use of this dye requires great caution, as it can have adverse action in living beings, including humans, either by direct contact to the dye (e.g. occupational via or use of confectioned products) or by the inadequate treatment of textile effluents or water treatments that use... FAPESP: 2012/01616-2

CAPES; CNPq Os agrotóxicos são largamente utilizados no mundo para proteger as plantações contra pragas e doenças, e na saúde pública no controle de vetores que causam doenças ao homem. Contudo, a exposição a esses produtos pode representar graves riscos à saúde humana e ao meio ambiente. Relatos da literatura sobre ação genotóxica das formulações comerciais isoladas de agrotóxicos é bastante escaça, uma vez que a maioria das pesquisas se preocupa em estudar o efeito das misturas desses compostos. Desta forma, o presente trabalho realizou um biomonitoramento in vivo, utilizando camundongos Mus musculus, para avaliar a ação genotóxica aguda, através da ingestão isolada dos agrotóxicos Ciromazina (Trigard 700 WP) e Maconzeb (Dithame NT) em baixas doses. Foram realizados os testes do micronúcleo e do ensaio cometa, para avaliar respectivamente a mutagenicidade e a genotoxicidade desses pesticidas. Sendo utilizados 80 camundongos, divididos em oito grupos contendo 10 animais (cinco machos e cinco fêmeas). As administrações foram feitas por gavagem e cada animal recebeu 1 mL da solução, de acordo com o grupo a que pertencia: o grupo controle negativo recebeu apenas o veículo de diluição (água destilada); para a Ciromazina foram usados três grupos experimentais: C1 com a concentração de 2,5.10−4 mg/Kg, o C2 com a concentração de 5.10−4 mg/Kg, e C3 com a concentração de 5.10-3 mg/Kg; para o Mancozeb foram usados também três grupos experimentais: C1 com a concentração de 3,76.10−4 mg/Kg, C2 com a concentração de 7,52.10−4 mg/Kg, e C3 com a concentração de 7,52.10-3 mg/Kg; para o grupo controle positivo foi administrado via injeção intraperitonial 20 mg/kg p.c. de ciclofosfamida. Na análise estatística, foram realizados dois testes: uma ANOVA multifatorial (Análise de variância), para comparar a ação genotóxica entre os grupos experimentais; e o teste de Mann-Whitney para verificar a influência do sexo no aparecimento do dano genético dentro de um mesmo grupo tratado. O agrotóxico Ciromazina demonstrou ser mutagênico e altamente genotóxico na concentração do grupo C2, além de apresentar uma diferença significativa entre os sexos no grupo C1. Já o pesticida Mancozeb mostrou ser genotóxico na concentração do grupo C2, e foi constatado também que houve diferença significativa entre os sexos dos individuos do grupo C3. Através desta pesquisar evidenciamos que mesmo em baixas concentrações estes pesticidas oferecem grandes riscos à saúde humana e ao meio ambiente.

Introdução: As radiações ionizantes produzem efeitos na molécula do DNA e o biomonitoramento in vivo pode ser utilizado para melhor avaliar o nível de exposição interna à radiação. Os agentes genotóxicos em populações expostas geram diferentes danos ao DNA e por existir uma variabilidade genética isso acarreta sensibilidades diferentes a estes agentes. Essa variação pode ser explicada pela existência de polimorfismos genéticos envolvidos no processo de reparo, entre eles o XRCC1 e XRCC3, responsáveis por manter a integridade do genoma das células frente a danos causados pelos agentes mutagênicos, como a radiação ionizante. Objetivo: Avaliar os efeitos mutagênicos da exposição à radiação x e gama em pacientes que realizam cintilografia miocárdica e angioplastia miocárdica e relacionar os possíveis resultados positivos com os polimorfismos dos genes de reparo, XRCC1 e XRCC3. Materiais e Métodos: Foram selecionados 57 pacientes expostos à radiação gama, e 57 expostos à radiação X. A análise da instabilidade genômica foi realizada através dos testes do micronúcleo e cometa, e a genotipagem através de sonda de TaqMan, para os polimorfismos do gene de reparo XRCC1 e XRCC3. Resultados e Conclusões: Em nosso estudo, os dados encontrados demonstram que ocorre dano ao DNA, após a exposição à radiação gama (ƿ=0,026). No entanto, não observamos ocorrer influência dos diferentes genótipos em ambos polimorfismos estudados, Arg399Gln e Thr241 Met, embora a presença do genótipo mutado Met/Met, parece ter indicado menor radiossensibilidade. Apesar desta diferença não ter alcançado os níveis de significância esperados, este resultado está de acordo com dados da literatura que indicam que este genótipo poderia estar associado à capacidade de reparação do DNA. Neste mesmo grupo, não encontramos diferenças estatisticamente significativas para aberrações cromossômicas (MN e NBUDs) após a exposição, para ambos polimorfismos, exceto para o genótipo normal Arg/Arg (ƿ=0,012), que parece ter indicado maior radiossensibilidade à exposição, estando de acordo com trabalhos da literatura, os quais demostram que, este genótipo pode ser associado com a diminuição da capacidade de reparo do DNA, apresentando níveis mais altos de quebras induzidas. As evidências de radiossensibilidade celular também podem ser explicadas pela alteração da proteína resultante do polimorfismo que não corrige os danos ao DNA, podendo aumentar o acúmulo de lesões no material genético, possivelmente pelo efeito da dose, tempo e tipo de exposição da radiação. Já no grupo de pacientes expostos à radiação X, observamos que não ocorre aumento nos níveis de danos ao DNA após a exposição (ƿ=0,004) e que não existe efeito de ambos polimorfismos estudados, exceto para o genótipo mutado Met/Met que parece determinar maior radiossensibilidade (ƿ=0,041). Para este grupo, observamos que ocorre aumento nas frequências de MN (ƿ

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:38Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-12-12Bitstream added on 2014-08-13T18:01:36Z : No. of bitstreams: 1 000741724_20141201.pdf: 197926 bytes, checksum: ac91e5d8eb4d509b8ea2984eab3e732a (MD5) Bitstreams deleted on 2014-12-02T13:27:21Z: 000741724_20141201.pdf,Bitstream added on 2014-12-02T13:27:59Z : No. of bitstreams: 1 000741724.pdf: 972060 bytes, checksum: 9c1d21f7846078e519f3d9100e012d54 (MD5) Nas últimas décadas, a incidência de indivíduos com sobrepeso ou obesos vem aumentando exponencialmente. Hoje, a obesidade é considerada pela Organização Mundial da Saúde como uma epidemia mundial, com graves consequências que podem levar à morte. A obesidade é uma desordem multifatorial que envolve fatores hereditários, ambiente e estilo de vida, e suas consequências não são apenas sociais ou psicológicas, mas estão principalmente relacionadas à presença de co-morbidades como a hipertensão arterial, diabetes tipo II, doenças cardiovasculares e vários tipos de câncer. Portanto, o controle da obesidade é um desafio para a manutenção da saúde humana, atraindo o interesse de inúmeros pesquisadores que buscam o entendimento dos mecanismos associados ao seu desenvolvimento, bem como novos métodos terapêuticos e de prevenção. Com base nessas premissas, o presente estudo objetivou avaliar a associação entre alterações genéticas e a obesidade, com especial foco para a presença de danos no DNA e para o perfil de expressão e polimorfismos gênicos. A casuística do estudo incluiu 300 mulheres cadastradas na lista de espera para a realização de cirurgia bariátrica e 300 mulheres saudáveis, eutróficas, pareadas por idade. O teste do cometa foi utilizado para avaliação de danos primários no DNA de células sanguíneas; os polimorfismos dos genes da grelina (GHRL)e leptina (LEP)e dos seus receptores (GHSR e LEPR), da interleucina 6(IL-6) e da serotonina (5-HT2C) foram analisados pela técnica de RT-PCR; o perfil de expressão gênica em linfócitos foi avaliado pela metodologia do DNA microarray e a expressão dos genes adiponectina (ADIPOQ) e leptina (LEP) em adipócitos foi avaliada pela técnica de qRT-PCR. Os resultados mostraram que a frequência dos polimorfismos dos genes GHRL(rs26802), GHRS(rs572169), LEP(rs7799039), LEPR(rs 1137101), IL-6 (rs1800796) e 5-HT2C ... In the last decades, the incidence of overweight and obesity has increased worldwide. Nowadays, obesity is considered by the World Health Organization as a global epidemic with severe consequences that can lead to death. Obesity is a multifactorial disorder which involves different factors such as genetic, environment and life style, and its consequences are not only social or psychological, but are also related to the presence of comorbidities such as hyperthension, type 2 diabetes, heart diseases and many types of cancer. Therefore, obesity control has become a challenge for the human health maintenance, catching the attention of researchers that are trying to understand the mechanisms associated to its development, as well as therapeutical and preventive methods. Based on the information above, the present study aimed to evaluate the association between genetic alterations and obesity, with special focus on the presence of DNA damage, gene expression profiling and genetic polymorphisms. Our study included 300 morbid obese women registered for the bariatric surgery and 300 healthy eutrophic women, matched by age. The comet assay was used to assess primary DNA damage in blood cells; the genetic polymorphisms of ghrelin (GHRL), leptin (LEP) and their receptors (GHSR and LEPR), interleukin-6 (IL-6) and serotonin receptor (5-HT2C) were evaluated by the RT-PCR; gene expression profiling in lymphocytes was assessed by DNA microarrays; and adiponectin (ADIPOQ) and leptin (LEP) gene expression in adipocytes were evaluated by qRT-PCR. Our results showed that the frequencies of GHRL (rs26802), GHRS (rs572169), LEP (rs7799039), LEPR (rs 1137101), IL-6 (rs1800796) and 5-HT2C (rs 3813929) polymorphisms were not different between obese and control groups. However, obese presented higher levels of primary DNA damage (single and double strand breaks, alkali-labile sites and oxidative damage) than eutrophic women, indepedent on ...

O ambiente aquático é um dos ambientes que mais vem sofrendo impactos causados pela ação humana. A atividade agrícola, fortemente dependente do uso de agrotóxicos, tem se mostrado uma importante fonte de contaminação desse meio. O uso de peixes como espécie sentinela tem sido um procedimento comum para investigação dos efeitos genotóxicos de poluentes aquáticos. Neste trabalho foi analisado o efeito tóxico dos herbicidas imazetapir e glifosato em alevinos de tambaquis, Colossoma macropomum, através do teste de toxicidade aguada (CL50-96hs). O valor da (CL50-96hs) determinado para o imazetapir foi de 185 m.L-1, enquanto para glifosato foi de 92,90 mg.L-1. O potencial mutagênico e genotóxico do glifosato foi avaliado em juvenis de tambaqui expostos a três concentrações sub-letais do glifosato: C1 (1/50 CL50 = 1,86 mg.L-1), C2 (1/100 CL50 = 0,93 mg.L-1) e C3 (1/1000 CL50 = 0,093 mg.L-1). O tratamento C1 mostrou aumento das células micronucleadas após 7 dias de exposição e aumento nos danos ao DNA após 5 e 7 dias do inicio do experimento. Ambos os herbicidas foram classificados como pouco tóxicos, mas apresentam risco potencial a vida aquática. The aquatic environment is one the most impacted environment due to human pressure. The agriculture practice, strongly dependent of agrotoxic compounds, has shown as important source of environmental contamination. The use of fishes as sentinel species is a common procedure for investigation of genotoxic potential of aquatic pollutants. In the present study we analyze the mutagenic and genotoxic potential of the herbicides Imazetapir and Glifosato on blood cells of tambaqui, Colossoma macropomum. Juvenile tambaqui were exposed to three sub lethal concentrations of Glifosato: C1 (1/50 CL50 = 1,86 mg.L-1), C2 (1/100 CL50 = 0,93 mg.L-1) e C3 (1/1000 CL50 = 0,093 mg.L-1). The toxic effects of these molecules had been availed based on acute toxicity test (CL50-96hs) and micronucleus and comet assays. The CL50-96hs of Imazetapir was observed at concentration of 185 mg.L-1, while Glifosato was 92,90 mg.L-1. The treatment C1 showed increasing of micronucleated cells after seven days exposure and DNA damage after five to seven days from the experiment starting. Both herbicides were classified as little toxic but presents potential risk to aquatic life.

Submitted by Leticia Schettini (leticia@ufrrj.br) on 2022-03-14T14:21:46Z No. of bitstreams: 1 2013 - Micheli de Moraes Ferreira.pdf: 1455175 bytes, checksum: 5c2f286e2f1aada2fb86e881eab57e01 (MD5) Made available in DSpace on 2022-03-14T14:21:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013 - Micheli de Moraes Ferreira.pdf: 1455175 bytes, checksum: 5c2f286e2f1aada2fb86e881eab57e01 (MD5) Previous issue date: 2013-07-30 CAPES The color and appearance of food are the first fundamental attributes, if not more important, to be evaluated by consumers at the time of its acquisition. The food can be more nutritious, safer and more economical, however, if not attractive, its acquisition will not occur. The salmon is basically a white fish that becomes pink by eating shrimp. The stored red pigment present in muscle or shrimp in the shell and accumulates in adipose tissue is acquired through ingestion algae and unicellular organisms by the shrimps from the sea. Carotenoids used in food, pharmaceutical, cosmetics and food are natural colorants responsible for yellow, orange and red. The raised salmon aquaculture has no access to the bodies mentioned above, however, it is added to their feed astaxanthin (ATX), a substance that gives a pinkish color to your meat. ATX (3,3 '-dihydroxy-beta, beta-carotene-4, 4'-dione) is a oxygenated carotenoid pigment that confers the characteristic reddish-pink coloration of certain fish, crustaceans, birds and microorganisms. The ATX has potent activity in scavenging free radicals and protecting against lipid peroxidation and the damage caused by oxidation of cell membranes and tissues. In this study we investigated in human blood cells in vitro genotoxicity and protective effect or antigenotoxicity ATX induction of oxidative DNA damage caused by hydrogen peroxide (H2O2). ATX (0.1 to 5 ?M) was not cytotoxic in human blood cells are cytotoxic in the range 10-1000 ?M inducing 1 to 10% mortality when compared to control cell-solvent dimethylsulfoxide (DMSO 5%). The ATX Comet assays performed did not induce DNA damage (p> 0.1) on human blood cells tested in the range 0.1 to 500 ?M compared to the 5% DMSO. H2O2 (12.5 to 2000 ?M) was not cytotoxic and did not cause cell lethality in human blood cells but was genotoxic (p 0,1) em c?lulas sangu?neas humanas na faixa testada de 0,1 a 500 ?M quando comparado ao DMSO 5%.. O H2O2 (12,5 a 2000 ?M) n?o foi citot?xico n?o causando letalidade celular em c?lulas sangu?neas humanas, por?m foi genot?xico (p

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-19Bitstream added on 2014-08-13T18:00:52Z : No. of bitstreams: 1 000753046.pdf: 1011046 bytes, checksum: 0e27bed9fbd866a00fb519db604313c6 (MD5) Garcinia achachairu (GAC) é uma planta de origem boliviana que vem sendo utilizada na medicina popular para o tratamento de distúrbios gástricos, reumatismo, inflamações e como cicatrizante. A caracterização fitoquímica do extrato desta planta revelou que, uma benzofenona, a Gutiferona A (GA), é um dos seus compostos majoritários, que segundo estudos recentes, apresenta importante atividade antioxidante e antimicrobiana. Considerando o interesse em se aprofundar as análises do potencial farmacológico da GA e a inexistência de estudos que avaliem a sua toxicidade genética, o presente estudo foi elaborado visando investigar o potencial genotóxico e mutagênico da GA em diferentes células de camundongos in vivo, utilizando alguns dos testes tradicionais na área de mutagênese, como o Ensaio Cometa (EC) para a verificação da genotoxicidade e o Teste do Micronúcleo (TM) para a verificação da mutagenicidade. O experimento foi conduzido com camundongos Suíços albinos machos (Mus musculus) de 12 semanas, divididos em cinco grupos, constituídos cada um por seis animais. O grupo controle negativo recebeu, via gavagem, 0,3 mL de DMSO 1%. O grupo controle positivo, recebeu intraperitonealmente, 80 mg/kg de doxorrubicina. Os grupos tratados receberam, via gavagem, 0,3 mL da GA nas doses de 15, 30 e 60 mg/kg. Para a avaliação da genotoxicidade foi coletado sangue da veia caudal dos camundongos (4 e 24 horas após o tratamento), células do fígado, medula óssea, cérebro e testículos (coletadas 24 horas após o tratamento). Para a avaliação da mutagenicidade, foram coletadas células da medula óssea 24 horas após o tratamento. A citotoxicidade foi avaliada pela contagem de 200 eritrócitos policromáticos (PCE) e normocromáticos (NCE) e determinação de sua razão (PCE/NCE). Na amostra de sangue de 4h, analisadas pelo EC, os resultados obtidos mostraram que nas doses de 30 mg/kg e 60 mg/Kg. A análise ... Garcinia achachairu (GAC) is a native plant from Bolivia that has been used in folk medicine for the treatment of gastric disorders, rheumatism, inflammation and as a healing. The phytochemical characterization of this plant extract revealed that the benzophenone guttiferone A (GA) is one of its major compounds, which according to recent studies, has important antioxidant and antimicrobial activity. Considering the interest in deepening the analysis of the pharmacological potential of GA and the lack of studies assessing its genetic toxicity, the present study was designed in order to investigate the genotoxic and mutagenic effects of GA in different cells of mice in vivo, using some of the traditional tests in the mutagenesis area, the Comet Assay (CA) for genotoxicity evaluation and the Micronucleus Test (MT) for the mutagenicity assessment. The experiment was conducted in Swiss albino male mice (Mus musculus) with 12 weeks, divided into five groups with six animals each. The negative control group received, by oral gavage, 0.3 mL of 1% DMSO. The positive control group received, intraperitoneally, 80 mg/Kg of doxorubicin. The treated groups received 0.3 ml of GA at 15, 30 and 60 mg/kg, by gavage. For the genotoxicity evaluation, blood was collected from the tail vein of the mice (4 and 24 hours after treatment), and liver, bone marrow, brain and testicular cells were collected 24 hours after treatment. For the mutagenicity assessment, bone marrow cells were collected 24 hours after treatment. Cytotoxicity was assessed by scoring 200 consecutive polychromatic (PCE) and normochromatic (NCE) erythrocytes and their ratio (PCE/NCE) determined. For the 4 h blood sample, the results with GA at doses of 30 and 60 mg/kg showed that was a statistically significant increase in DNA damage in comparison to the negative control. For the 24 h blood sample, only 60 mg/kg dose showed significant genotoxicity. The analysis of ther ...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:58Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-04-29Bitstream added on 2014-06-13T19:49:24Z : No. of bitstreams: 1 silva_mtp_me_rcla_parcial.pdf: 116883 bytes, checksum: 61778c76199cfbad5330e0aa6a61f5d0 (MD5) Bitstreams deleted on 2014-08-22T14:57:08Z: silva_mtp_me_rcla_parcial.pdf,Bitstream added on 2014-08-22T15:02:10Z : No. of bitstreams: 1 000728772.pdf: 562519 bytes, checksum: d2e60974d6cd959b15f3b431318de958 (MD5) A industrialização apresenta inúmeros benefícios, mas também está associada à emissão constante de substâncias tóxicas no meio ambiente. As atividades industriais lançam diversos produtos químicos que contaminam os vários meios físicos como o solo, o ar e a água. A indústria de refino de petróleo representa um importante setor da economia, mas, em contra partida, produz efluentes que podem ser ricos em metais pesados e outros compostos inorgânicos perigosos, além de uma infinidade de substâncias orgânicas com potencialidade de interagir com os organismos vivos. Dentre os contaminantes orgânicos derivados do petróleo, os mais importantes são os Hidrocarbonetos Policíclicos Aromáticos (HPA). Os HPAs são reconhecidamente estrogênicos, ou seja, possuem potenciais de ação no sistema endócrino. Dentre os efeitos causados pelas substâncias com ação semelhante à endócrina estão a diminuição da capacidade reprodutiva, inversão sexual, problemas no desenvolvimento embrionário e câncer. Devido a estes fatores, tem havido um incentivo ao desenvolvimento e aplicação de novas técnicas que possam avaliar, de maneira eficiente, os contaminantes ambientais, decorrentes das atividades humanas. Sendo assim, o presente trabalho teve por objetivo avaliar a genotoxicidade, mutagenicidade de amostras de águas dos rios Jaquari, Atibaia e Piracicaba, que estão em uma região sob a influência da atividade da refinaria de Paulínia – SP. Para a avaliação das águas destes rios (realizadas com os extratos obtidos por extração de fase sólida - EFS), foram aplicadas técnicas desenvolvidas células de hepatoma humano (HepG2) mantidas em cultura. Foram desenvolvidos com este sistema teste o ensaio do cometa e o teste de micronúcleo. As análises químicas realizadas por HPLC indicaram a presença de naftaleno nas amostras... Industrialization presents countless benefits, but is also associated to the constant emission of toxic substances into the environment. Industrial activities release several chemical products that contaminate the several physical media such as soil, air and water. Petroleum refinery industry represents an important sector of the economy, however, in counterpart, produces effluents that can be rich in heavy metals and other hazardous inorganic compounds, besides infinitude of organic substances with the potential to interact with living organisms. Among the organic contaminants derived from petroleum, the most important are the Polycyclic Aromatic Hydrocarbons (PHA). PHAs are known to be estrogenic, i.e., have the potential to act in the endocrine systems. Among the effects caused by endocrine substances are the decrease in the reproductive capacity, sex inversion, problems in the embryonic development and cancer. Due to these factors, there has been an incentive to the development and application of new techniques that can evaluate, efficiently, the environmental components resulted from human activities. Thus, the present study aimed to assess the genotoxicity and mutagenicity of water samples from Jaguari, Atibaia and Piracicaba rivers, which are in a region under the influence of the activity of a refinery of Paulínia – SP. For the evaluation of the waters of these rivers (performed with extracts obtained by solid phase extractions – SPE), it was applied techniques with human hepatoma cells (HepG2) maintained in culture. The comet assay and micronucleus test were developed with this test system. The chemical analyses showed the presence of naphthalene in the water samples of these rivers, as well as other compounds capable of inducing damages, even when at low concentrations. It was also possible... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:44Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-15Bitstream added on 2014-06-13T19:50:53Z : No. of bitstreams: 1 souza_fo_me_arafcf.pdf: 544783 bytes, checksum: b3fed971745dc3f334fa44491c3bbfe9 (MD5) Atualmente, o câncer cervical é considerado a segunda causa mais comum entre as mulheres e encontra-se associado ao Papilomavírus Humano (HPV), que infecta células epiteliais escamosas, dando origem a grandes lesões. Em face da necessidade de se encontrar novos fármacos com atividade antineoplásica, têm-se procurado identificar substâncias isoladas de plantas brasileiras capazes de impedir a proliferação de células neoplásicas infectadas por HPV. A nitensidina B é um alcalóide guanidínico isolado de Pterogyne nitens Tul. (Fabaceae), que possui atividade citotóxica e antifúngica. O presente estudo teve por objetivo, verificar a atividade citotóxica, pró-apoptótica, genotóxica e mutagênica de nitensidina B, por meio de experimentos in vitro, utilizando células de carcinoma cervical infectadas por HPV-16 (SiHa) e não infectadas pelo vírus (C-33A). Para avaliar a citotoxicidade da nitensidina B o teste MTT foi realizado, sendo possível observar um efeito concentração-resposta nas duas linhagens testadas SiHa e C-33A, CI50 = 28,95 µM e 25,78 µM, respectivamente por 24 horas de tratamento e SiHa e C-33A, CI50 = 20,77 µM e 20,96 µM, respectivamente por 48 horas de exposição a nitensidina B. Com o intuito de avaliar a ação pró-apoptótica, foi realizado o ensaio de anexina V por citometria de fluxo e o ensaio do Hoechst-Iodeto de propídio, na qual pode-se verificar que a nitensidina B apresentou morte celular por apoptose tardia na linhagem de células infectadas por HPV-16 (SiHa) e baixa porcentagem de células apoptóticas nas células não infectadas pelo HPV-16 (C-33A), tanto por apoptose precoce, quanto na apoptose tardia/necrose, em todas as concentrações. Para o ensaio de genotoxicidade foi realizado o ensaio do... Nowadays, cervical cancer is considered the second most common among women, and have been associated with human papillomavirus (HPV), which infects squamous epithelial cells resulting in major injuries. Given the need to find new drugs with antineoplastic activity, have sought to identify compounds antineoplastic from plants, wich are capable of preventing the proliferation of neoplastic cells infected by HPV. Nitensidine B is a guanidine alkaloid isolated from Pterogyne nitens Tul. (Fabaceae), which has cytotoxic and antifungical activies. This study aimed verify by cytotoxic, pro-apoptotic, genotoxic and mutagenic of nitensidine B through in vitro experiments, using cervical carcinoma cells infected by HPV-16 (SiHa) and not infected (C -33A). To evaluate the cytotoxicity of nitensidine B, by MTT assay, it being possible to observe an effect concentration response in both strains tested SiHa and C-33A, IC50 = 28.95 µM and 25.78 µM, respectively, by 24 hours of treatment and SiHa and C-33A, IC50 = 20.77 µM and 20.96 µM, respectively, by 48 hours. In order, to investigate pro-apoptotic activity, it was carried out annexin V flow cytometric and Hoechst-propidium iodide assay, which it could be seen that the nitensidine B showed apoptotic cell death late in the lineage of cells infected by HPV-16 (SiHa) and lower percentages of apoptotic cells in the cells not infected by HPV-16 (C-33A), both early apoptotic, late apoptotic and in necrosis at all concentrations used. For the genotoxicity assay was performed comet assay, where there was a high percentage of DNA in the tail of the cells studied. In SiHa cell line was observed significant genotoxicity at all concentrations tested in treatment for 6 hours and the concentration of DNA in the tail at 5.00 µM to 16.0 µM on exposing cells for 24 hours with nitensidine B. For the line... (Complete abstract click electronic access below)

CAPES O uso de pesticidas, em plantações, aumenta a cada ano e o Brasil é um dos maiores consumidores destes produtos. Seu uso contribuiu historicamente para a maior produção de alimentos. Porém, a utilização de agrotóxicos tem gerado muitas questões quanto aos seus efeitos na saúde dos consumidores expostos. Dentre os efeitos possíveis, pode-se destacar o genotóxico e mutagênicos. Com isso, há um grande número de pesquisas utilizando testes como o micronúcleo e o ensaio cometa, para quantificar danos causados pelos praguicidas. Nesse contexto, este trabalho apresenta testes para avaliar efeitos genotóxicos e mutagênicos pela ingestão dos pesticidas metomil e cipermetrina. Para isso foi utilizado 80 camundongos (swiss albino), que foram divididos oito grupos com 10 animais por grupo (cinco machos, cinco fêmeas). Os grupos foram classificados em: um controle negativo; um controle positivo e seis grupos tratados. Os grupos tratados receberam a concentração do pesticida baseado na ingestão diária aceitável (IDA) de cada um, sendo escolhidas as concentrações para o metomil (0,005 mg/kg; 0,0005 mg/kg e 0,00025 mg/kg) e para cipermetrina (0,05 mg/kg; 0,005 mg/kg e 0,0025 mg/kg). Todos os grupos tratados receberam, por gavagem, sua dose determinada. O metomil apresentou danos genéticos quando foi avaliado pelo teste de micronúcleo nas doses: 0,005 e 0,0005. Pelo ensaio cometa a dose 0,005 teve efeito genotóxico. A cipermetrina não apresentou danos pelo ensaio cometa, porém com micronúcleo houve diferença significativa em todas as concentrações estudas. Assim, estes pesticidas isolados mostraram ser mutagênicos, sendo necessário um olhar mais critico, por parte dos órgãos responsáveis, para controlar, ou proibir, se necessário, o uso destes pesticidas ou uma redefinição da IDA referente a tais praguicidas.

Dissertação de Mestrado em Biotecnologia para as Ciências da Saúde Mais de 90% dos tumores uroteliais surgem na bexiga, em que a forma mais comum é o carcinoma de células transicionais da bexiga (TCC). Apesar da sua natureza relativamente “benigna”, os TCCs superficiais possuem uma taxa de recaída até 70% dos casos, 10 a 15% dos quais, progridem para a forma músculo-invasiva da doença. O estudo in vitro com recurso a linhas celulares de cancro de bexiga apresenta-se assim como um modelo clínico valioso para a compreensão da doença, bem como, a investigação de fármacos antineoplásicos. Existem actualmente cerca de cinquenta linhas celulares de cancro de bexiga disponíveis, das quais fazem parte as linhas 5637 e MCR, respectivamente, de origem superficial e metastática. A cisplatina (cis-diaminodicloroplatina(II)), um composto platinado de acção alquilante, é um fármaco de ampla utilização no tratamento de diversos tipos de cancro, como é o caso do cancro da bexiga. As lesões predominantes são as ligações cruzadas do tipo intra-cadeia 1,2-d(GpG), que levam ao bloqueio da transcrição, replicação e reparação do DNA. O objectivo do presente trabalho centrou-se, numa primeira fase, na utilização de várias técnicas de citogenética clássica e molecular no estudo das principais alterações cromossómicas associadas às linhas celulares 5637 e MCR. E, numa segunda fase, na avaliação do efeito da cisplatina sobre estas mesmas linhas ao nível das lesões no DNA e da actividade proliferativa, integrando a citogenética, o ensaio do cometa e a quantificação morfométrica das proteínas AgNOR. Foi possível identificar várias alterações cromossómicas, em ambas as linhas celulares, que foram descritas pela primeira vez, assim como, esclarecer algumas que apenas haviam sido parcialmente descritas na literatura. A exposição à cisplatina deu origem a várias aberrações cromossómicas como quebras de cromátides, formação de cromossomas radiais, cromossomas pulverizados, placas metafásicas condensadas e cromossomas minute e double minute. Foi ainda possível verificar, com o ensaio do cometa, um efeito significativo das ligações cruzadas induzidas pela cisplatina na linha celular 5637 (p < 0,01), para além de uma redução altamente significativa da actividade proliferativa em ambas as linhas (p < 0,001), caracterizada essencialmente pela drástica diminuição da marcação AgNOR. Através da combinação das várias técnicas utilizadas foi possível concluir que a linha celular mais afectada pelos efeitos genotóxicos da cisplatina foi a linha superficial 5637. More than 90% of all urothelial tumors originate on the bladder, being the bladder transitional cell carcinoma (TCC) the most common form. Despite of its relative “benign” nature, superficial TCCs have a relapsing rate up to 70%, 10 to 15% of which progress to the muscle-invasive form of the disease. The in vitro study using bladder cancer cell lines presents itself as a valuable clinical model to understand the disease, as well in the research of antineoplastic drugs. There are presently around fifty bladder cancer cell lines available, such as the 5637 and MCR cell lines, respectively of superficial and metastatic origin. Cisplatin (cis-diamminedichloroplatinum(II)), a platinated compound of alkylating action, is a drug of wide application on the treatment of several types of cancer, such as the bladder cancer. The predominant lesions are the intrastrand crosslinks 1,2-d(GpG), which leads to the arrest of DNA transcription, replication and repair. The objective of the present work focused, in an initial stage, on the study of the main chromosomal alterations found in 5637 and MCR cell lines by application of several classic and molecular cytogenetic techniques. And after this, on the evaluation of the cisplatin effect over these cell lines, at the level of DNA lesions and proliferative activity, integrating cytogenetics, the comet assay, and the morphometric quantification of AgNOR proteins. It was possible to identify several chromosomal alterations on both cell lines, some of which were described for the first time, as well to clarify some alterations that had already been partially described in the literature. Cisplatin exposure gave rise to several chromosomal aberrations such as chromatid breaks, radial chromosome formation, pulverized chromosomes, condensed metaphase plates and minute and double minute chromosomes. It was also possible to verify a significant effect of the cisplatin-induced crosslinks in 5637 cell line with the comet assay (p < 0,01), in addition to an extremely significant decrease of the proliferative activity in both cell lines (p < 0,001), mainly characterized by a drastic reduction of the AgNOR staining. Through the combination of the several employed techniques, it was possible to conclude that the 5637 superficial cell line was the most affected by the genotoxic effects of cisplatin.

Dissertação de Mestrado em Biotecnologia para as Ciências da Saúde A cisplatina é um dos agentes quimioterapêuticos mais eficazes no tratamento de cancro de ovários, cabeça, pescoço, bexiga, pulmão e colorrectal. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da cisplatina em duas linhas celulares tumorais de bexiga, avaliando os danos do DNA e a quantificação morfométrica das linhas celulares. As células foram expostas à cisplatina (2,5 μg/ml) durante vários períodos de tempo (1h, 6h, 12h, 24h, 48h e 72h) e foi analisado o dano no DNA pela técnica dos cometas e análise citogenética. Para alguns dos tempos (24h, 48h e 72h), após a remoção do fármaco, foi analisada a capacidade de recuperação das células pelo ensaio do cometa. Após a incubação das células com cisplatina verificou-se, pelo ensaio do cometa, uma diminuição, em geral, da cauda dos cometas relativamente aos controlos, exceto na linha celular T24 nas 48h e na HT1376 às 72h. As células que estiveram em cultura após a remoção da cisplatina, apresentaram um aumento na cauda dos cometas e respetivo aumento dos danos do DNA. Este aumento deve-se aos mecanismos de reparação do DNA, que remove as ligações cruzadas e permite assim a deteção dos danos pelo ensaio do cometa. Apenas no grupo de recuperação das 48h para a linha celular T24 isto não foi observado. Na análise citogenética das linhas após o tratamento com cisplatina observou-se um aumento de anomalias cromossómicas, como metafases pulverizadas e double minutes, e a presença de rearranjos complexos impossibilitando na grande maioria das vezes a sua identificação. Observou-se um aumento da área dos núcleos das células expostas à cisplatina, bem como um ligeiro aumento da área ocupada pelas AgNOR significativo de uma desregulação do genoma. Estes resultados sugerem que a cisplatina é genotóxica para as células, induzindo ligações cruzadas e provocando uma instabilidade cromossómica. Cisplatin is one of the most effective chemotherapeutic agents in the treatment of ovarian, head and neck, bladder, lung and colorectal cancer. The aim of this study was to evaluate the effect of cisplatin in two bladder cancer cell lines, evaluating DNA damage and proliferative activity of the cell lines. The cells were exposed to cisplatin (2,5 μg/ml) for various times (1h, 6h, 12h, 24h, 48h and 72h). For some times (24h, 48h and 72h), it was also tested the ability of the recovery of cells after the drug removal by the comet assay. After incubation of the cells with cisplatin was verified by comet assay, a decrease, in general, of the comet tail relative to controls, except in the T24 cell line at 48h and HT1376 at 72h. Cells that have been cultured following removal of cisplatin showed an increase in comet tail and the respective increase in DNA damage. This increase is due to the mechanisms of DNA repair, which removes the crosslinks and thus enables the detection of damage by the comet assay. Only in the recovery group of 48h in T24cell line was not observed. In cytogenetic analysis lines after treatment with cisplatin was observed an increase of chromosomal abnormalities such as pulverized metaphases and double minutes, and the presence of complex rearrangements impossible in most cases to be identified. We observed an increase in the area of the nuclei of cells exposed to cisplatin, as well as a slight increase in the area occupied by AgNOR due to a genome desregulation. These results suggest that cisplatin is genotoxic to cells, inducing crosslinking and causing a chromosomal instability.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:56Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-12-17Bitstream added on 2014-06-13T18:41:12Z : No. of bitstreams: 1 ambrosio_jb_dr_rcla.pdf: 849914 bytes, checksum: 8eebea30948cfc32353c99fa5c95f4e0 (MD5) Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) O Brasil é o maior produtor de cana-de-açúcar no mundo. Dentre os Estados brasileiros, São Paulo representa 60% de todo o açúcar produzido e 70% das exportações. Pela alta produção de cana-de-açúcar no Estado de São Paulo e o consequente consumo elevado de agrotóxicos, este trabalho teve como objetivo investigar os efeitos citotóxicos, genotóxicos e mutagênicos de baixas concentrações de dois agrotóxicos utilizados nesta cultura, o herbicida sulfentrazona e o inseticida imidaclopride, tanto em testes individuais quanto associados entre si. As avaliações foram feitas pelos testes de aberrações cromossômicas (AC) e de micronúcleos (MN) em Allium cepa; teste do MN e ensaio do cometa em células HepG2; e teste de Ames com Salmonella typhimurium. Para melhor avaliar o modo de ação dos agrotóxicos, a técnica de hibridização in situ fluorescente (FISH) com sonda pan-centromérica foi associada ao teste do MN realizado com células HepG2. Os testes com A. cepa indicaram genotoxicidade para todas as concentrações de imidaclopride, após um período de recuperação de 48 horas. A maior indução de pontes e aderências cromossômicas sugeriu uma ação clastogênica para o inseticida. Esta hipótese foi confirmada nos testes com HepG2, pela técnica de FISH, uma vez que a maioria dos MN (76,6%) não apresentou sinal fluorescente, indicando presença de fragmentos cromossômicos. Para o herbicida sulfentrazona, foram observadas AC para todas as concentrações, considerando os diferentes tempos de tratamento. A indução de MN foi observada para a menor concentração, para todos os tempos de tratamento, sugerindo que os danos induzidos por essa concentração persistem ao longo do ciclo celular. A maior concentração testada do herbicida causou uma diminuição no índice mitótico... Brazil is the largest producer of sugarcane in the world. Among the Brazilian states, São Paulo represents 60% of all sugar produced and 70% of exports. Due to the high production of sugarcane in São Paulo state and the great pesticide consumption, this work investigated the cytotoxic, genotoxic and mutagenic effects of low concentrations of two pesticides utilized in sugarcane culture: the herbicide sulfentrazone and the insecticide imidacloprid, both individually and combined. The evaluations were made by chromosome aberrations (CA) and micronucleus (MN) tests in Allium cepa, MN and comet assay in HepG2 cells and Ames test with Salmonella typhimurium. Associated to the MN test in HepG2 cells, the fluorescent in situ hybridization (FISH) technique with pan-centromeric probe was applied in order to better evaluate the mode of action of the agrochemicals. The tests with A. cepa indicated genotoxicity for all concentrations of imidacloprid, after a recovery period of 48 hours. The higher induction of bridges and chromosome stickiness suggests a clastogenic action for the insecticide. This hypothesis was confirmed in the tests with HepG2, by FISH, since most of the MN (76.6%) did not present fluorescent signal, indicating presence of chromosomal fragments. For the herbicide sulfentrazone, CA were observed in all concentrations, in the different treatment times. The induction of MN was observed for the lowest concentration for all the treatment times, suggesting that the damages induced by this concentration persist throughout the cell cycles. The highest concentration tested of the herbicide caused a decrease in the mitotic index of the cells after 72 hours recovery period. This effect may be associated with the high amount of induced chromosome stickiness. The mixture of pesticides induced cytotoxicity, genotoxicity... (Complete abstract click electronic access below)