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Para a utilização da erva-mate (Ilex paraguariensis) como planta medicinal, é necessário determinar concentrações e formas de utilização seguras e eficazes. Modelos in vitro de triagem de citotoxicidade fornecem dados preliminares para selecionar doses seguras potencialmente benéficas. O objetivo deste estudo foi avaliar a citotoxicidade aguda de diferentes concentrações de um extrato hidroetanólico de folhas de erva-mate em dois modelos de células sanguíneas humanas. Para isso, eritrócitos e células mononucleares de sangue periférico de 10 indivíduos saudáveis foram incubadas com diferentes concentrações do extrato hidroetanólico de erva-mate por 150 minutos a 37°C. Após a incubação, foram realizados testes bioquímicos de detecção de citotoxicidade. A concentração de 1000µg/mL de extrato aumentou a hemólise, a fragilidade osmótica e a peroxidação lipídica em eritrócitos, mas não teve efeito citotóxico em células mononucleares. Estes dados sugerem que altas concentrações de extrato podem ser tóxicas para alguns tipos celulares e, por isso, concentrações seguras de utilização são essenciais para a recomendação da erva-mate como planta medicinal.

Submitted by Geane Garcia Chales (geane.garcia@unesp.br) on 2022-07-27T14:21:08Z No. of bitstreams: 1 01. Dissertação-Geane - versão final - com ficha catalográfica (a enviar).pdf: 3360193 bytes, checksum: 14d2895777452559f3b0dc9df86d5b24 (MD5) Approved for entry into archive by Lucilene Cordeiro da Silva Messias null (lubiblio@bauru.unesp.br) on 2022-07-27T15:31:42Z (GMT) No. of bitstreams: 1 chales_gg_me_bauru.pdf: 3360193 bytes, checksum: 14d2895777452559f3b0dc9df86d5b24 (MD5) Made available in DSpace on 2022-07-27T15:31:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 chales_gg_me_bauru.pdf: 3360193 bytes, checksum: 14d2895777452559f3b0dc9df86d5b24 (MD5) Previous issue date: 2022-07-12 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) This study aimed to evaluate the effect of the use of M. oleifera seed as a primary coagulant, prepared after primary (flour), secondary pre-treatment (delipidation from flour) and secondary (extraction of cationic proteins in aqueous and saline medium), on the quality of the treated water in terms of turbidity removal, effect on pH, electrical conductivity, zeta potential, residual organic carbon and cytotoxicity. Well water adjusted with kaolin was used to obtain a synthetic water with average turbidity values of 200.8 unT and pH of 7.10. Six types of coagulants based on M. oleifera were prepared: seed flour (F-SMO), delipidated flour (FD-SMO), aqueous extract of flour (EAF-SMO), aqueous extract of delipidated flour (EAFD-SMO), saline extract of flour (ESF-SMO) and saline extract of delipidated flour (ESFD-SMO), in addition to the coagulant aluminum sulfate (SA), for comparison. The tests were performed in jar test. For all forms of extraction studied from M. oleifera seeds, the pH remained stable, unlike the SA that reduced the pH. Furthermore, the addition of different ways of extracting the M. oleifera seed increased the zeta potential of the suspension, a characteristic of coagulation by adsorption and charge neutralization. The aqueous extracts EAF-SMO and EAFD-SMO and the flours F-SMO and FD-SMO showed similar values of turbidity removal (on average 74%) and did not show an increase in conductivity. The saline extracts ESF-SMO and ESFD-SMO showed the highest turbidity removals after sedimentation (on average 90%), but still lower than SA (98%). The presence of salt (NaCl 1M) in the saline extracts contributed to the increase in electrical conductivity and cytotoxicity, being more expressive at higher doses. M. oleifera-based coagulants increased the residual organic load (TOC) of the treatment water and the delipidation, contrary to expectations, did not contribute to the reduction of this parameter. However, delipidation did not bring significant variation in turbidity removal compared to treatments without delipidation, in addition to being an important step to reduce the cytotoxicity of treated water, proving to be an important step in the processing of coagulants derived from M. oleifera seeds, in addition to generating a by-product with added value. Este trabalho teve como objetivo geral avaliar o efeito da forma de uso da semente de M. oleifera como coagulante primário, preparado após etapas primária (farinha), pré-tratamento secundário (extração do óleo da farinha) e secundária (extração das proteínas catiônicas em meio aquoso e salino), na qualidade da água tratada em termos de remoção de turbidez, efeito no pH, condutividade elétrica, potencial zeta, carbono orgânico residual e citotoxicidade. Foi utilizada água de poço ajustada com caulim para obtenção de uma água sintética com valores médios de turbidez de 200,8 unT e pH de 7,10. Foram preparados seis tipos de coagulantes à base de M. oleifera: farinha da semente (F-SMO), farinha delipidada (FD- SMO), extrato aquoso da farinha (EAF-SMO), extrato aquoso da farinha delipidada (EAFD- SMO), extrato salino da farinha (ESF-SMO) e extrato salino da farinha delipidada (ESFD- SMO), além do coagulante sulfato de alumínio (SA), para comparação. Os ensaios foram realizados em jar test. Para todas as formas de extração estudadas das sementes de M. oleifera o pH se manteve estável, ao contrário do SA que reduziu o pH. Além disso, a adição das diferentes formas de extração da semente de M. oleifera aumentou o potencial zeta da suspensão, característica de coagulação por adsorção e neutralização de cargas. Os extratos aquosos EAF-SMO e EAFD-SMO e as farinhas F-SMO e FD-SMO apresentaram valores semelhantes de remoção de turbidez (em média 74%) e não apresentaram aumento da condutividade. Os extratos salinos ESF-SMO e ESFD-SMO apresentaram as maiores remoções de turbidez após sedimentação (em média 90%), mas ainda inferiores ao SA (98%). A presença do sal (NaCl 1M) nos extratos salinos contribuiu para o aumento da condutividade elétrica e da citotoxicidade, sendo mais expressiva nas maiores dosagens. Os coagulantes à base de M. oleifera aumentaram a carga orgânica residual (COT) da água de tratamento e a delipidação, ao contrário do esperado, não contribuiu para a redução deste parâmetro. Assim, a delipidação não trouxe variação significativa na remoção de turbidez frente aos tratamentos sem delipidação, além de ter sido uma etapa importante para reduzir a citotoxicidade da água tratada, demonstrando ser uma etapa importante no processamento de coagulantes derivados de sementes de M. oleifera, além de gerar um subproduto com valor agregado. 88887.595682/2020-00

In this study, the toxic effects of melittin on Madin-Darby Bovine Kidney cells (MDBK) were analyzed with respect to mitochondrial functionality by reduction of MTT and flow cytometry, apoptosis potential, necrosis, oxygen reactive species (ROS) production, lipid peroxidation, and DNA fragmentation using flow cytometry and cell membrane destabilization by confocal microscopy. The toxicity presented dose-dependent characteristics and mitochondrial activity was inhibited by up to 78.24 ±3.59% (P

Among the immune system cells, macrophages have an important role. Apamin, a bee venom constituent, is important in the defense of these insects. Thus, we aimed to evaluate the metabolism of J774 1.6 macrophage cell line when exposed to isolated and purified apamin, using cytotoxicity tests by MTT reduction and analysis by flow cytometry (apoptosis / necrosis, production of reactive oxygen species (ROS), membranous lipoperoxidation (LPO), electrical potential of the mitochondrial membrane (mMP) and DNA fragmentation). None of the tested concentrations (10 to 100μg/mL) were cytotoxic according to MTT reductions. Apoptosis rates decreased at concentrations of 2.5, 5.0, and 10.0μg/mL (P0.05). Apamin did not alter ROS, LPO, or DNA fragmentation. Therefore, all analyzed concentrations (1.25 to 10μg/mL) decreased mMP. Such decrease in apoptosis might be due to a suppression of mitochondrial pro-apoptotic messengers, as this peptide causes no oxidative stress, lipid peroxidation, and DNA damage. Highly sensitive techniques are majorly important for proper interpretation of cellular toxicity mechanisms, combined with routine laboratory methods. RESUMO Das células do sistema imunológico, macrófagos desempenham um papel fundamental. Apamina, constituinte do veneno de abelhas, é importante na defesa destas. Objetivou-se avaliar o metabolismo da linhagem de macrófagos J774 1.6 expostos à apamina isolada e purificada, avaliando-se citotoxicidade por redução de MTT e análise por citometria de fluxo (apoptose / necrose, produção de espécies reativas de oxigênio (EROs), lipoperoxidação membranosa (LPO), potencial elétrico da membrana mitocondrial (MMP) e fragmentação do DNA). Nenhuma concentração testada (10 a 100μg / mL) foi citotóxica. As taxas de apoptose diminuíram nas concentrações 2,5, 5,0 e 10,0μg / mL (P0,05). A apamina não alterou as ERO, a LPO nem a fragmentação do DNA. Portanto, todas as concentrações analisadas (1,25 a 10μg / mL) diminuíram a mMP. Tal diminuição na apoptose pode ser por uma supressão de mensageiros pró-apoptóticos mitocondriais, já que este peptídeo não causa estresse oxidativo, peroxidação lipídica nem dano ao DNA. Técnicas altamente sensíveis são importantes para adequada interpretação dos mecanismos de citotoxicidade.

Tese (doutorado) — Universidade de Brasília, Instituto de Química, Programa de Pós-Graduação em Química, 2022. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) e Fundação de Apoio à Pesquisa do Distrito Federal (FAP/DF). Os íons lantanídeos (Ln3+) possuem propriedades espectroscópicas e magnéticas únicas, as quais lhes proporcionam um amplo potencial de aplicação, como por exemplo: agentes antitumorais, catálise, sondas luminescentes, entre outras. Nas sondas luminescentes, os íons Ln3+ , quando coordenados a agentes complexantes cromóforos, como o ácido picolínico, podem intensificar suas propriedades luminescentes através do efeito antena. Compostos benzimidazóis normalmente são encontrados em produtos naturais, e são amplamente conhecidos por possuírem uma gama de atividades biológicas. Assim como o benzimidazol, as bases de Schiff apresentam extensa aplicação terapêutica, destacando-se em ambos a atividade anticancerígena. Este trabalho é dividido em duas etapas: a primeira etapa consiste na síntese e caracterização de complexos de íons Ln3+ obtidos a partir do ligante ácido picolínico. A segunda etapa mostra a síntese do Cloridrato de 2-(4-metoxifenil)-1H-benzimidazol (BenzHCl) a partir da base de Schiff N,N’-bis-(4-metoxibenzilideno)-benzeno-1,2-diamina (Anisalofeno) mediado por cloreto de Ln (Gd3+, Tb3+ ou Eu3+). Na primeira etapa, foram sintetizados 3 complexos inéditos com os íons: Gd (1), Eu (2) e Tb (3). Os complexos foram caracterizados por IV, TG/DTA, DRX de monocristal e pó. Ainda, realizou-se estudos de luminescência e estudo teórico de modelagem computacional. Diante das análises realizadas, foi possível obter as estruturas moleculares dos complexos 1-3, referindo-se a três complexos poliméricos e isoestruturais, onde a unidade assimétrica consiste em um cátion Ln3+ , um cátion Na+ , quatro ligantes pic e duas moléculas e meia de água, correspondendo à fórmula molecular Na[Ln(pic)4]⸱2,5H2O. Os estudos de luminescência dos complexos 1–3 demonstraram as bandas estreitas e características dos íons Ln3+ observando o efeito antena do ligante. Os estudos teóricos mostraram correspondência com os dados estruturais e luminescentes adquiridos experimentalmente. Já na segunda etapa deste trabalho, o mecanismo de reação do composto BenzHCl foi proposto a partir de diferentes estratégias sintéticas. A estrutura cristalina de BenzHCl revela duas unidades assimétricas semelhantes estabilizadas por ligações hidrogênio em moléculas de água, íons cloreto e átomos de nitrogênio protonados. O BenzHCl e a Anisalofeno foram caracterizados por IV, TG/DTA, DRX de monocristal, RMN de 1H e RMN de 13C. A viabilidade celular frente aos compostos BenzHCl e Anisalofeno (ensaio de MTT) foi testada em linhagem de célula saudável (fibroblasto) e em células de adenocarcinoma mamário humano (endenocarcinoma metastático MCF-7 e endenocarcinoma MDA-MB-231), onde ambos os compostos apresentaram maior toxicidade contra células doentes quando comparadas à célula saudável. Lanthanide ions (Ln3+) have unique spectroscopic and magnetic properties which provide them a wide application potential, such as antitumor agents, catalysis, luminescent probes, among others. As luminescent probes, Ln3+ ions, when coordinated to chromophore complexing agents, such as picolinic acid, can intensify their luminescent properties through the antenna effect. Benzimidazole compounds are commonly found on natural products and are widely known by having a range of biological activities. Just like benzimidazole, Schiff’s bases also have an extensive therapeutic application, with anticancer activity being highlighted in both. This work is divided in two steps: the first step consists in the synthesis and characterization of Ln3+ ion coordination compounds obtained from the picolinic acid. The second step shows the synthesis of 2-(4-methoxyphenyl)-1H-benzimidazole hydrochloride (BenzHCl) from the Schiff base N,N’-bis-(4-methoxybenzylidene)-benzene-1,2-diamine (Anisalofen) mediated by the lanthanide chloride (Gd3+, Tb3+ or Eu3+). In the first step, 3 new complexes with ions Gd (1), Eu (2) and Tb (3) were synthetized. These complexes were characterized by FT-IR, thermogravimetric analysis, powder XRD, and single crystal XRD. Moreover, luminescence studies and theoretical studies of computational modeling were carried out. From the analysis results, it was possible to obtain the molecular structures of complexes 1–3, which are polymeric and isostructural complexes, where the asymmetric unit consists of 1 Ln3+ cation, 1 Na+ cation, 4 pic deprotonated ligands and 2.5 molecules of water, corresponding to the molecular formula Na[Ln(pic)4]⸱2.5H2O. Luminescence studies of complexes 1–3 demonstrated the characteristics narrow bands of Ln3+ ions and the antenna effect of the ligand. Theoretical studies showed correspondence with experimentally acquired structural and luminescent data. In the second step of this work, the reaction mechanism of BenzHCl compound was proposed from different synthetic strategies. The crystal structure of BenzHCl revealed two similar asymmetric units stabilized by hydrogen bonds in water molecules, chlorine ions and protonated nitrogen atoms. Both BenzHCl and Anisalofen were characterized by FT-IR, thermogravimetric analysis, single crystal DRX, 1H NMR, and 13C NMR. The cell viability of BenzHCl and Anisalofen was tested through the MTT cytotoxicity assay in a healthy cell line (fibroblast) and in human mammary adenocarcinoma cells (MCF-7 and MDA-MB-231), where both compounds showed greater toxicity against diseased cells when comparted to the healthy cell.

Submitted by Manuela Alves Vinhas (manuela.vinhas@unesp.br) on 2022-06-23T19:19:01Z No. of bitstreams: 1 Tese_Manu(completo).pdf: 3733539 bytes, checksum: 14cf3a3e93343dbedb25de71e4b74c31 (MD5) Approved for entry into archive by Ana Carolina Gonçalves Bet null (abet@iq.unesp.br) on 2022-06-24T11:52:28Z (GMT) No. of bitstreams: 1 vinhas_ma_dr_araiq_int.pdf: 3733539 bytes, checksum: 14cf3a3e93343dbedb25de71e4b74c31 (MD5) Made available in DSpace on 2022-06-24T11:52:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 vinhas_ma_dr_araiq_int.pdf: 3733539 bytes, checksum: 14cf3a3e93343dbedb25de71e4b74c31 (MD5) Previous issue date: 2022-05-06 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) O câncer é termo genérico que abrange uma variedade de doenças, seu diagnostico representa em sua maioria um prognostico ruim, pois o câncer esta associado à uma das principais causas de morte em todo o mundo. Desse modo, o desenvolvimento de novos quimioterápicos para um tratamento mais adequado é de vital importância. Nesse contexto, foi desenvolvido um novo complexo de prata contendo ligantes de interesse biológico, de formula [AgCl(VMTSC)(PPh3)2], onde PPh3 = trifenilfosfina e VMTSC=(E)-N-etil-2-(3-metoxi-4-[2-(1-morfolinil)etóxi]benzadeíldo tiossemicarbazona. Os compostos foram caracterizados através das técnicas espectroscópicas de infravermelho com transformada de Fourier, ressonância magnética nuclear de 1H, 13C e 31P. As formulas mínimas e purezas dos compostos foram determinadas através de análise elementar e os cristais obtidos do complexo foram submetidos a experimentos de difração de raios X por monocristal o qual revelou sua estrutura cristalina. A citotoxicidade in vitro dos compostos foi determinada frente as linhagens tumorais A2780cis (tumoral de ovário com resistência a cisplatina), A549 (tumoral de pulmão), HepG2 (tumoral de fígado), MDA-MB-231 (tumoral de mama triplo-negativo) e MRC5 (não tumoral de pulmão de origem fetal). O complexo foi ativo contra todas as linhagens tumorais, sendo mais ativo contra a linhagem A2780cis, IC50 = 0,428 ± 0,008 μM, linhagem com resistência a cisplatina. Ensaios de interação com o ctDNA por titulação espectroscópica, dicroísmo circular e ensaios de ligação competitiva evidenciaram que o complexo [AgCl(VMTSC)(PPh3)2] consegue interagir com ctDNA, tornando o ctDNA um possível alvo. Cancer is a generic term that covers a variety of diseases, its diagnosis represents mostly a bad prognosis, as cancer is associated with one of the main causes of death worldwide. Thus, the development of new chemotherapeutic agents for a more adequate treatment is of vital importance. In this context, a new silver complex containing ligands of biological interest was developed, with the formula [AgCl(VMTSC)(PPh3)2], where PPh3 = triphenylphosphine and VMTSC=(E)-N-ethyl-2-(3-methoxy-4-[2-(1-morpholinyl)ethoxy]benzadeyldo thiosemicarbazone. The compounds were characterized by infrared spectroscopic techniques with Fourier transform, 1H, 13C and 31P nuclear magnetic resonance. The minimum formulas and purities of the compounds were determined through elemental analysis and the crystals obtained from the complex were subjected to X-ray diffraction experiments by single crystal which revealed its crystalline structure. The in vitro cytotoxicity of the compounds was determined against the tumor lines A2780cis (cisplatin-resistant ovarian tumor), A549 (lung tumor), HepG2 (liver tumor), MDA-MB-231 (triple-negative breast tumor) and MRC5 (non-tumor lung of fetal origin). The complex was active against all tumor strains, being more active against the A2780cis strain, IC50 = 0.428 ± 0.008 μM, a strain with resistance to cisplatin. Interaction assays with ctDNA by spectroscopic titration, circular dichroism and competitive binding assays showed that the complex [AgCl(VMTSC)(PPh3)2] can interact with ctDNA, making ctDNA a possible target CAPES: 001

Fungal infections have become frequently in recent years. Dermatophytosis, sporotrichosis and candidiasis stand out. Due to the resistance to available drugs and with a view to diversifying the pharmaceutical field, the study was carried out using the bagasse of O. europaea. Studies related to olive trees do not address bagasse, which represents a potential economic alternative to its discarded tons by the industry. The objective of this work was to evaluate the in vitro sensitivity profile of fungal isolates against aqueous extracts of O. europeae bagasse. To test the cellular toxicity of the extracts and to determine the presence and amount of the main phenolic compounds. No antifungal activity of these aqueous extracts was observed against the isolates of dermatophytes and Sporothrix brasiliensis. The Candida spp. tested for in vitro susceptibility, two were sensitive to bagasse decoction extract from a concentration of 50mg/ml of DEC 10'. In the toxicity of the olive pomace decoction, concentrations from 12.5 mg/ml allowed at least 50% of the MDBK cells to remain viable. Concentrations from 3.13 to 0.78 mg/ml were safe, as 100% cell viability occurred. Of the hydroxytyrosol (HPLC) compounds, the concentration varied from 8 x10-4 to 34 x10-4 mg/ml in INF 10' and from 11 x10-4 to 81 x10-4 mg/ml in DEC 10'. For oleuropein, the DEC 10' extracts varied their concentration from 87 x10-3 to 7 x10-3 mg/ml, while for INF 10' the values ​​were from 23 x10-3 mg/ml to not detected in some varieties. Las infecciones fúngicas se han vuelto cada vez más frecuentes en los últimos años. Destacan las dermatofitosis, esporotricosis y candidiasis. Debido a la resistencia a los fármacos disponibles y con el fin de diversificar el campo farmacéutico, el estudio se realizó utilizando bagazo de O. europaea. Los estudios relacionados con el olivo no abordan el bagazo, que representa una potencial alternativa económica por sus toneladas descartadas por la industria. El objetivo de este trabajo fue evaluar el perfil de sensibilidad in vitro de aislados fúngicos frente a extractos acuosos de bagazo de O. Europeae. Testar la toxicidad celular de los extractos utilizados y determinar la presencia y cantidad de los principales compuestos fenólicos. No se observó actividad antifúngica de estos extractos acuosos frente a los aislados de dermatofitos y Sporothrix brasiliensis. De la Candida spp. probados para susceptibilidad in vitro, dos fueron sensibles al extracto de decocción de bagazo a partir de una concentración de 50 mg/ml de DEC 10'. En la toxicidad de la decocción de orujo de oliva, concentraciones a partir de 12,5 mg/ml permitieron que al menos el 50% de las células MDBK permanecieran viables. Las concentraciones de 3,13 a 0,78 mg/ml fueron seguras, ya que se produjo una viabilidad celular del 100%. De los compuestos de hidroxitirosol (HPLC), la concentración varió de 8 x10-4 a 34 x10-4 mg/ml en INF 10' y de 11 x10-4 a 81 x10-4 mg/ml en DEC 10'. Para la oleuropeína, los extractos de DEC 10' variaron su concentración de 87 x10-3 a 7 x10-3 mg/ml, mientras que para INF 10' los valores fueron de 23 x10-3 mg/ml hasta no detectarse en algunas variedades. As infecções fúngicas tem se tornado cada vez mais frequentes nos últimos anos. Destacam-se as dermatofitoses, esporotricoses e candidoses. Em função da resistência aos fármacos disponíveis e tendo em vista diversificar o âmbito farmacêutico, realizou-se o estudo a partir do bagaço de O. europaea. Estudos relacionados à oliveira não abordam o bagaço que representa potencial alternativa econômica devido a suas toneladas descartadas pela indústria. Objetivo deste trabalho foi avaliar o perfil sensibilidade in vitro de isolados fúngicos frente extratos aquosos de bagaço de O. europeae. Testar toxicidade celular dos extratos utilizados e determinar presença e quantidade dos compostos fenólicos (oleuropeína e hidroxitirosol). Não foi observado atividade antifúngica desses extratos aquosos diante dos isolados de dermatófitos e Sporothrix brasiliensis. Dos isolados de Candida spp. testados para susceptibilidade, dois foram sensíveis ao extrato de decocção do bagaço a partir da concentração 50 mg/ml de DEC 10’. Na toxicidade da decocção do bagaço de oliveira, observou-se concentrações a partir de 12,5 mg/ml permitiram que pelo menos 50% das células MDBK se mantivessem viáveis. As concentrações de 3,13 até 0,78 mg/ml foram seguras, pois ocorreu 100% de viabilidade celular. Dos compostos (CLAE) hidroxitirosol variou a concentração de 8 x10-4 a 34 x10-4 mg/ml em INF 10’ e de 11 x10-4 a 81 x10-4 mg/ml em DEC 10’. Para oleuropeína, os extratos DEC 10’ variaram sua concentração de 87 x10-3 a 7 x10-3 mg/ml, já para INF 10’ os valores foram de 23 x10-3 mg/ml a não detectado em algumas variedades.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Bladder cancer is considered one of the most frequent neoplasms in the world. Although chemotherapy, surgery, immunotherapy and therapy have been accepted and practical methods for decades, they may not respond to due to the extent of the disease and the low specificity of treatments. However, the Search for new treatment that are more specific and with less beneficial effects are of vital importance for the eradication of the disease. Nanoparticles (NPs) have been investigating against a variety of cancer types and listed as an alternative to many non-selective chemotherapeutics. NPs in the face of this problematic NP as the treatment method wick become an alternative use, to use the damage caused by cancer of alternative treatment. Thus, this objective was to investigate the cytotoxic effects and the main mechanisms of synthesis of NPs actions with the improved routes for the treatment of bladder cancer. For that, we used Silver Tungstate (Ag2WO4) irradiates in different forms, Silver Phosphate gold-doped (Ag3PO4:Au) and Titanium Dioxide coated with peroxide groups [Ti(OH)4]. The use of a treatment to work, allowed the use of an emergency treatment and the ability to treat a nanoparticle, Against cancer treatment. O câncer de bexiga é considerado uma das neoplasias mais incidentes no mundo. Embora a quimioterapia, cirurgia, imunoterapia e terapia por radiação tenham sido aceitas e praticadas por décadas, alguns pacientes podem não responder aos métodos devido à extensão da doença e a baixa especificidade dos tratamentos. No entanto, a buscas por novos tratamentos mais específicos e com menos efeitos colaterais são de vital importância para a erradicação dessa doença. Nanopartículas (NPs) foram investigadas contra uma variedade de tipos de câncer e relatadas como uma alternativa a muitos quimioterápicos não seletivos. Diante dessa problemática, a utilização de NPs como método de tratamento ao câncer de bexiga pode se tornar uma alternativa, diminuindo os danos adversos provocados pelos tratamentos convencionais. Assim, o objetivo dessa Tese de Doutorado foi investigar os efeitos citotóxicos e os principais mecanismos de ação NPs com rotas de síntese aprimoradas para o tratamento do câncer de bexiga. Para tanto, utilizamos o Tungstato de Prata (Ag2WO4) irradiado de diferentes formas, Fosfato de Prata decorado com ouro (Ag3PO4:Au) e Dióxido de Titânio recoberto com agrupamentos peróxidos [Ti(OH)4]. Nesse trabalho, observou-se que as modificações estruturais aumenta a capacidade citotóxica e seletiva das nanopartículas, possibilitando o uso para potenciais tratamentos contra o carcinoma de bexiga. Código de financiamento 001

A síntese de compostos orgânicos tem seu papel fundamental na pesquisa de novos fármacos para várias patologias, uma vez que diferentes classes de compostos orgânicos têm demonstrado promissores efeitos biológicos, ressaltando-se, dentre esses compostos, os heterociclos, por possuírem versatilidade biológica. Destaca-se neste trabalho os oxadiazóis, que apresentam atividade promissora quando comparada à atividade de medicamentos já utilizados no tratamento quimioterápico.Este trabalho consistiu na síntese e avaliação da atividade citotóxica de derivados 1,3,4-oxadiazólicos fenilsubstituídos nas posições 2 e 5, variando-se o padrão de substituição halogênica. Foram obtidos onze oxadiazóis partindo de uma rota sintética iniciada pela oxidação de aldeídos para a obtenção dos ácidos carboxílicos correspondentes, seguida de esterificação e hidrozinólise para formação das hidrazidas. Uma vez obtidas as hidrazidas, elas foram submetidas a reação com os respectivos aldeídos comerciais para a formação do intermediário N-acilidrazona. Por último, o intermediário Nacilidrazona é submetido a uma desidratação em meio básico, com I2 e DMSO para a formação dos oxadiazóis. Todos os compostos sintetizados tiveram suas estruturas elucidadas através de espectros de infravermelho e de RMN de 1H e 13C.Todos os compostos foram avaliados com relação a atividade antitumoral através do ensaio de citotoxicidade frente as linhagens 4T1, CT26-WT e BHK-21 e determinação do CI50 e apresentaram valores que variaram entre 19-94 µM. De um modo geral, os oxadiazóis com anéis aromáticos para-substituídos foram os mais ativos, entretanto, ao comparar os oxadiazóis com anéis possuindo apenas o cloro como substituintes, a posição meta em ambos os anéis mostrou favorecer a ação citotóxica. Neste trabalho, os resultados da ação citotóxica dos oxadiazóis avaliados foram relevantes para traçar um perfil de estrutura-atividade, comparando também com resultados já obtidos pelo grupo de pesquisa. The synthesis of organic compounds plays a fundamental role in the research of new drugs for various pathologies, since different classes of organic compounds have shown promising biological effects, specially, among these compounds, heterocycles, for their biological versatility. The oxadiazoles are highlighted in this work, which show promising activity when compared to the activity of drugs already used in chemotherapy treatment. This work consisted of the synthesis and evaluation of the cytotoxic activity of phenylsubstituted 1,3,4-oxadiazole derivatives at positions 2 and 5, varying the halogen substitution pattern. Eleven oxadiazoles were obtained starting from a synthetic route initiated by the oxidation of aldehydes to obtain the corresponding carboxylic acids, followed by esterification and hydrozinolysis to form the hydrazides. Once the hydrazides were obtained, they were subjected to reaction with the respective commercial aldehydes to form the N-acylhydrazone intermediate. Finally, the N-acylhydrazone intermediate is subjected to dehydration in a basic medium, with I2 and DMSO for the formation of oxadiazoles. All synthesized compounds had their structures elucidated through infrared and 1H and 13C NMR spectra. All compounds were evaluated for antitumor activity through the cytotoxicity assay against 4T1, CT26-WT and BHK-21 cell lines and IC50 determination. The presented values IC50 ranging from 19-94 µM. In general, the oxadiazoles with para-substituted aromatic rings were the most active, however, when comparing the oxadiazoles with rings having only chlorine as substituents, the meta position in both rings was shown to favor the cytotoxic action. In this work, the results of the cytotoxic action of the evaluated oxadiazoles were relevant to draw a structure-activity profile, also comparing with results already obtained by the research group.

Made available in DSpace on 2021-01-01T09:01:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ART20124.pdf: 184715 bytes, checksum: 497ad82eb2acac960ef51ec183dd24de (MD5) Previous issue date: 2020 Título em inglês: Infrared And Cytotoxicity Analysis Of Microparticles Of Essential Oils Of Ocimum Gratissimum L. And Cymbopogon Citratus (D.C.) Stapf.

Tese (doutorado) — Universidade de Brasília, Instituto de Química, Programa de Pós-Graduação em Tecnologias Química e Biológica, 2022. O objetivo deste trabalho foi o de desenvolver um novo tipo de material polimérico, com propriedades magnéticas, visando aplicações biomédicas. As nanopartículas de magnetita sintetizadas foram modificadas com ácidos carboxílicos, como o ácido acrílico ou metacrílico, a fim de melhorar o encapsulamento individual durante a etapa de polimerização, o que provoca uma melhoria na resposta magnética dos nanocompósitos. As nanopartículas foram dispersas em uma matriz termoplástica de poli(pivalato de vinila) através de um processo de polimerização em emulsão, cujos produtos também apresentam propriedades magnéticas. As amostras foram analisadas por FTIR, DTG, DSC, DRX, VSM, MET. A partir dos dados obtidos na difratometria de raios X determinou-se que o tamanho de cristalito das nanopartículas de magnetita pura é de aproximadamente 8 nm. Os resultados da microscopia de transmissão eletrônica mostraram que as nanopartículas possuem morfologia esférica. Nanopartículas puras ou funcionalizadas apresentaram tamanho de cerca de 6 nm, enquanto os nanocompósitos apresentam tamanho de cerca de 7 nm. Medidas de saturação magnética mostraram valores de aproximadamente 75 emu/g, indicando presença de superparamagnetismo no material em temperatura ambiente. Os nanocompósitos mostraram uma temperatura de transição vítrea (Tg) de 65 °C, o que é apropriada para possíveis usos em aplicações biológicas. Os compostos sintetizados foram caracterizados e testados em diferentes linhagens celulares, como queratinócitos (HaCaT), fibroblastos e melanomas (A431), em diferentes tempos de exposição e concentrações a fim de verificar a citotoxicidade. Os resultados obtidos nos testes de citotoxicidade mostraram viabilidades celulares superiores a 70% quando comparados ao grupo de controle sugerindo possíveis aplicações em terapias biomédicas como a hipertermia e a emboloterapia. The objective of this work was to develop a new type of polymeric material, with magnetic properties, aiming biomedical applications. The synthesized magnetite nanoparticles were modified with carboxylic acids, such as acrylic or methacrylic acid, in order to improve individual encapsulation during the polymerization step, which improves the magnetic response of the nanocomposites. The nanoparticles were dispersed in a thermoplastic matrix of poly(vinyl pivalate) through an emulsion polymerization process, whose products also have magnetic properties. Samples were analyzed by FTIR, DTG, DSC, XRD, VSM, MET. From the data obtained in X-ray diffractometry, it was determined that the crystallite size of the pure magnetite nanoparticles is approximately 8 nm. The results of transmission electron microscopy showed that the nanoparticles have spherical morphology. Pure or functionalized nanoparticles have a size of about 6 nm, while nanocomposites have a size of about 7 nm. Magnetic saturation measurements showed values of approximately 75 emu/g, indicating the presence of superparamagnetism in the material at room temperature. The nanocomposites showed a glass transition temperature (Tg) of 65 °C, which is suitable for possible uses in biological applications. The synthesized compounds were characterized and tested in different cell lines, such as keratinocytes (HaCaT), fibroblasts and melanomas (A431), at different exposure times and concentrations in order to verify cytotoxicity. The results obtained in the cytotoxicity tests showed cell viability higher than 70% when compared to the control group, suggesting possible applications in biomedical therapies such as hyperthermia and embolotherapy.

Submitted by Jonathan Sousa de Almeida (jonathan.sousa@ufma.br) on 2022-12-20T14:05:25Z No. of bitstreams: 1 GopalNiraula.pdf: 11981535 bytes, checksum: f6e3c19e752dba4ed12d601df49804c3 (MD5) Made available in DSpace on 2022-12-20T14:05:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 GopalNiraula.pdf: 11981535 bytes, checksum: f6e3c19e752dba4ed12d601df49804c3 (MD5) Previous issue date: 2022-02-18 The targeted therapy-based approach such as magnetic fluid hyperthermia (MFH) as thermal therapy and magneto-mechanical as a mechanical force therapy (MFT) have been clinically launched as an alternative treatment of cancer tumors. In both approaches magnetic nanoparticles (MNPs) are at the center; are used as ‘heat generators’ in MFH whereas the same is used as ‘mechanotransducers’ in MFT when they are subjected to an alternating magnetic field. Utilizing the MNPs, mainly superparamagnetic iron oxide nanoparticles (SPIONs), both therapeutic techniques are emerging as a cornerstone approach in view of impractical scenarios and are becoming a topic of great interest in the cancer therapies because of their several advantages to the effectual antitumor therapy for instance high biosafety, deep tissue penetration, and targeted selective tumor killing. However, the SPIONs display weak magnetic responses, i.e., low magnetization, due to which a large dosage of SPIONs need to be injected inside the body for complete destruction of the tumors; this is a kind of challenge for surrounding healthy cells that need to be overcome. Thus, a new generation of magnetic nanoparticles with excellent properties is immediately needed to face the therapeutic challenges in advancing cancer therapies and subsequent treatment. The engineering of topological iron oxide nanoparticles (NPs) with novel vortex-domain structures offers an exciting avenue for probing their efficacy in targeted therapy in cancer treatment overcoming the limitation of conventional superparamagnetic iron oxide NPs. The main reasons for the appropriateness of these NPs in cancer therapy are high dispersion ability, colloidal stability biocompatibility, and easy manipulation in the application of magnetic fields. Thus, the design of such magnetic nanomaterials with vortex-domain structure may serve as versatile candidates in therapeutic-based cancer treatments. The present work aims to design the iron oxide-based vortex NPs for targeted therapeutic applications. This thesis is divided into two main parts: (a) control synthesis and characterization of iron oxide magnetic vortex nanoparticles and (b) their utilization in magnetic hyperthermia and mechanotransduction for cancer cell destruction, under biologically safe conditions using experimental, theoretically and micromagnetic simulations. The interest in the magnetic vortex nanoparticles over simple single-domain in the biological applications is due to negligible dipole- dipole interactions and thus low/zero magnetic remanence, allowing the magnetic nanosystems to remain well dispersed in colloidal formulations in the absence of an external magnetic field. The spin structures are produced in NPs due to the confinement of spins imposed by geometrical restrictions; thus it is challenging to control the geometry of nanoparticles to preserve the vortex configuration. In the first part, we have successfully synthesized magnetic vortex nanorings (NRs), nanodisks (NDs), nanospheres (NSs), nanorods (NRDs), and nanotubes (NTs) via microwave- assisted hydrothermal (MAH) route and characterized as-obtained NPs thoroughly by X-ray diffraction (XRD), Fourier transforms infrared spectroscopy (FTIR), electron microscopy (EM), Mossbauer spectroscopy (MS), X-ray photoelectron spectroscopy (XPS), cryostat-based resistivity measurement, magnetometry, and calorimetry-based MFH to examine their structural, morphological, magnetic properties and MFH efficacy. In addition, theoretical analysis and micromagnetic simulation were performed as supportive tools to confirm the experimental outcomes specially to provide evidence of geometry-based vortex-domain structure in iron oxide NPs. In the second part, we have performed the MFH experiment to evaluate the thermal efficiency and in vitro cytotoxicity test in different cell lines: (i) 4T1 cells (murine mammary adenocarcinoma cell line), (ii) CT26 (murine colorectal carcinoma cell line), and (iii) J774A.1 (a murine X monocyte/macrophage). Through the complete characterization, we revealed that stoichiometry does not need to be preserved for the existence of magnetic vortex-domain structure in NPs. Further, the key findings on MFH of NDs is that the heating efficiency is better for stoichiometry magnetite (Fe3O4) NDs as compared with the nonstoichiometric one owing to charge ordering between Fe2+ and Fe3+, which is further tuned by controlling the switching field-mediated shape, size, and orientation of nanodiscs in the direction of applied field in a controlled way revealing that the existence of magnetic vortex configuration is not only a factor to enhance heating capability but switching field mediated by shape, size, and orientation are also key factors to be considered. The specific absorption rate (SAR) and intrinsic loss power (ILP) in NRs and NTs at maximum clinical field 450 Oe and under the frequency of 107 kHz were evaluated. The NTs exhibited the highest SAR value among those reported so far in the hollow iron-oxide family accounting for the importance of magnetic shape anisotropy. The reported SAR values and their excellent cell viability tests strongly suggest NRs and NTs as potential candidates in targeted therapy-based cancer treatments. Further, we moved towards the magneto-mechanical approach for MFT-based cancer treatments. Taking in-depth analysis by means of theoretical and micromagnetic simulation, we proposed the iron oxide NRs as a mechanotransducer providing evidence on the magnetic stability of the curling ground states in NRs and opens the possibility of applying these systems to magneto-mechanical actuation on single cells for therapeutics in biomedicine, such as cancer cell destruction by low-frequency torque transduction. A abordagem baseada em terapia direcionada, como a hipertermia do fluido magnético (HFM) como terapia térmica e a abordagem magneto-mecânica como terapia de força mecânica (TFM) foram lançadas clinicamente como um tratamento alternativo de tumores cancerígenos. Em ambas as abordagens, as nanopartículas magnéticas estão no centro, essas nanopartículas magnéticas são usadas como 'geradores de calor' em HFM enquanto os mesmos são usados como 'mecanotransdutores' em TFM quando são submetidos à um campo magnético alternado. Utilizando as nanopartículas magnéticas, principalmente nanopartículas de óxido de ferro superparamagnéticas, ambas as técnicas terapêuticas estão surgindo como uma abordagem fundamental diante de cenários impraticáveis e estão se tornando um tópico de grande interesse nas terapias contra o câncer devido às suas várias vantagens para a terapia antitumoral eficaz, por exemplo, alta biossegurança, penetração tecidual profunda e morte seletiva direcionada de tumores. No entanto, os óxido de ferro superparamagnéticas apresentam respostas magnéticas fracas, ou seja, baixa magnetização devido a uma grande dose de óxido de ferro superparamagnéticas que precisa ser injetada dentro do corpo para destruição completa dos tumores, este é um tipo de desafio para as células saudáveis circundantes que precisam ser superados. Assim, uma nova geração de nanopartículas magnéticas com excelentes propriedades é imediatamente necessária para enfrentar os desafios terapêuticos no avanço das terapias contra o câncer e no tratamento subsequente. A engenharia de nanopartículas topológicas de óxido de ferro com novas estruturas de domínio de vórtice oferece um caminho interessante para testar sua eficácia na terapia direcionada no tratamento do câncer, superando a limitação das nanopartículas superparamagnéticas de óxido de ferro convencionais. As principais razões para a adequação desses nanopartículas na terapia do câncer são a alta capacidade de dispersão, biocompatibilidade de estabilidade coloidal e fácil manipulação na aplicação de campos magnéticos. Assim, o modelo de tais nanomateriais magnéticos com estrutura de domínio de vórtice pode servir como candidatos versáteis em tratamentos de câncer de base terapêutica. O presente trabalho tem como objetivo projetar as nanopartículas de vórtice à base de óxido de ferro para aplicação terapêutica direcionada. Esta tese está dividida em duas partes principais: (a) controle da síntese e caracterização de nanopartículas de vórtice magnético de óxido de ferro e (b) sua utilização em hipertermia magnética e mecanotransdução para destruição de células cancerígenas, sob condições biologicamente seguras usando simulações experimentais, teóricas e micromagnéticas. O interesse nas nanopartículas de vórtice magnético sobre simples domínio único na aplicação biológica é devido às interações dipolo-dipolo desprezíveis e, portanto, à remanência magnética baixa/zero, permitindo que os nanosistemas magnéticos permaneçam bem dispersos em formulações coloidais na ausência de um campo magnético externo. As estruturas de spin são produzidas em NPS devido ao confinamento de spins imposto por restrições geométricas, assim, é um desafio controlar a geometria das nanopartículas para preservar a configuração do vórtice. Na primeira parte, sintetizamos com sucesso nanoanéis de vórtice magnético (NRs), nanodiscos (NDs), nanoesferas (NSs), nanobastões (NRDs) e nanotubos (NTs) via rota hidrotermal assistida por micro-ondas (HAM) e caracterizados como obtidos NPs completamente por difração de raios-X (DRX), espectroscopia infravermelha por transformadas de Fourier (FTIR), microscopia eletrônica de transmissão (MET), espectroscopia Mössbauer (EM), espectroscopia de fotoelétrons de raios-X (EFX), medição de resistividade baseada em criostato, magnetometria e calorimetria baseado em HFM para examinar suas propriedades estruturais, morfológicas, XII magnéticas e eficácia de HFM. Além disso, análises teóricas e simulação micromagnética foram realizadas como ferramentas de suporte para confirmar os resultados experimentais, especialmente para fornecer evidências de estrutura de domínio de vórtice baseada em geometria de NPs de óxido de ferro. Na segunda parte, realizamos o experimento HFM para avaliar a eficiência térmica e o teste de citotoxicidade in vitro em diferentes linhagens celulares: (i) células 4T1 (linhagem celular de adenocarcinoma mamário murino), (ii) CT26 (linhagem celular de carcinoma colorretal murino) e (iii) J774A.1 (um monócito/macrófago murino). Através da caracterização completa, revelamos que a estequiometria não precisa ser preservada para a existência de estrutura de domínio de vórtice magnético em nanopartículas. Além disso, as principais descobertas sobre HFM de NDs é que a eficiência de aquecimento é melhor para NDs de magnetita estequiométrica (Fe3O4) em comparação com a não estequiométrica devido à ordenação de carga entre Fe2+ e Fe3+ , que é ajustada ainda mais controlando a forma mediada por campo de comutação , tamanho e orientação dos nanodiscos na direção do campo aplicado de forma controlada, revelando que a existência de configuração de vórtices magnéticos não é apenas um fator para aumentar a capacidade de aquecimento, mas o campo de comutação mediado por forma, tamanho e orientação também são fatores-chave para ser considerados. A taxa de absorção específica e a perda de potência intrínseca em NRs e NTs no campo clínico máximo de 450 Oe e na frequência de 107 kHz foram avaliadas. Os NTs exibiram o maior valor de taxa de absorção específica entre os relatados até agora na família de óxido de ferro oco, explicando a importância da anisotropia de forma magnética. Os valores de taxa de absorção específica relatados e seus excelentes testes de viabilidade celular sugerem fortemente NRs e NTs como potenciais candidatos em tratamentos de câncer baseados em terapia direcionada. Além disso, avançamos para a abordagem magneto- mecânica para tratamentos de câncer baseados em TFM. Aprofundando a análise por meio de simulação teórica e micromagnética, propusemos o óxido de ferro NRs como um mecanotransdutor fornecendo evidências sobre a estabilidade magnética dos estados fundamentais de curling em NRs e abrindo a possibilidade de aplicação desses sistemas para atuação magneto- mecânica em células únicas para terapia em biomedicina, como destruição de células cancerosas por transdução de torque de baixa frequência.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES Efforts are currently being invested in discovering more effective, selective and innovative antineoplastic and antimicrobial therapies. An alternative, faster process may arise through repositioning, also called drug redirection. Defined as the process of investigating new uses for drugs that have already been clinically approved, it has shown advantages over the traditional search for active substances, such as cost reduction and time to market. Additionally, there is a possibility of the occurrence of synergism of action between combined drugs, which may improve the drug's efficacy, reduces toxicity and provide a broader spectrum of activity compared to monotherapeutic regimens. Thus, this study presents candidate drugs for redirection in oncology, invasive fungal infections and when faced with a pandemic caused by the new coronavirus (SARS-CoV-2). We report the in vitro biological activity of disulfiram and ebselen. The antibacterial activity was determined by evaluating the minimal inhibitory concentration (MIC), minimal bactericidal concentration (CBM) and interaction with standard antibacterials from the checkerboard assay and determination of the Fractional Inhibition Index (FIC). Strains from the American Type Culture Collection and multi-drug resistant clinical isolates (MDR) were used. Cytotoxicity was investigated using cell lines (tumor: murine melanoma - B16F10, human hepatocarcinoma - HepG2, and non-cancer -RAW 264.7) through the assay with 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-bromide 2,5-diphenyltetrazolium (MTT). The concentration of dsDNA and production of reactive oxygen species (ROS) in tumor lines after exposure to treatments were evaluated. In the repositioning of drugs in oncology, pharmacological classes such as antibiotics, psychotropic drugs, and antidepressants were indicated for repositioning, mainly for treating glioblastoma, leukemia, breast cancer and multiple myeloma. In terms of repositioning for fungal diseases, among the pharmacological classes, antidepressants, proton pump inhibitors and antivirals stood out, showing activity mainly against Candida, Cryptococcus and Aspergillus genera. In SARS-CoV, SARS-CoV-2 and HCoV-OC43, 22 drugs from different classes showed potential antiviral activity, where repositioning proved to be a promising alternative for treating COVID-19. Disulfiram showed potential antibacterial activity against standard strains and clinical isolates of Enterococcus spp. resistant to vancomycin, showing synergy with the standard antibacterial vancomycin against all strains tested (FICI

A produção de radicais livres é uma consequência normal do metabolismo celular. O equilíbrio entre a produção destas espécies e o sistema de defesa antioxidante é fundamental na manutenção das funções fisiológicas, uma vez que um excesso de oxidantes leva a uma situação de stress oxidativo. Devido a este fenómeno, a procura por antioxidantes exógenos tem-se intensificado. As tiossemicarbazonas têm sido estudadas em Química Medicinal devido às suas inúmeras propriedades biológicas, destacando-se as promissoras atividades antioxidante e anticancerígena. Neste trabalho construiu-se uma pequena biblioteca de quinze derivados de tiossemicarbazonas (4.a - 4.o), dez dos quais novos (4.a – 4.e, 4.h, 4.l, 4.m – 4.o). Os compostos foram caracterizados por RMN (1H, 13C-APT, COSY, HSQC, HMBC e, no caso de 4.b, 4.h, 4.m e 4.o por NOESY), IV e ESI-HRMS. Avaliou-se a atividade antioxidante de todos os compostos segundo o método de sequestro do radical livre DPPH. Sete compostos (4.a, 4.d, 4.f, 4.g, 4.m - 4.o) revelaram uma capacidade antioxidante boa a moderada, com valores de EC50 compreendidos entre 51,34 ± 1,93 μM e 252,16 ± 3,61 μM. O composto mais promissor foi a (E)-2-((3-metil-1H-indole-2-il)metileno)-N-fenil-hidrazinacarbotioamida (4.o) com um EC50 de 51,34 ± 1,93 μM, comparável ao da rutina 11,36 ± 0,38 μM e ácido ascórbico 23,66 ± 0,82 μM. A citotoxicidade in vitro dos compostos (4.b e 4.f – 4.o), foi avaliada em células de hepatocarcinoma humano Hep-G2, para uma indicação preliminar do potencial hepatotóxico e, células de cancro da mama hormono-dependente MCF-7, segundo o método colorimétrico do MTT. Os resultados demonstraram que, em ambas as linhas celulares, para uma concentração de 100 μM, não se obteve uma percentagem de morte celular significativa, portanto nenhum dos compostos testados é citotóxico. Em suma, com os resultados obtidos foi possível concluir que as tiossemicarbazonas sintetizadas não apresentam citotoxicidade, nem para as células Hep-G2 nem para as MCF-7. Contudo, sustentam que alguns dos compostos apresentam um promissor potencial antioxidante, com destaque para o 4.o, que poderá representar uma lead para o desenvolvimento de novos antioxidantes. The production of free radicals is a common consequence of cellular metabolism. The balance between these species and the antioxidant defense system is essential in maintaining physiological functions since an excess of oxidants, leads to a situation of oxidative stress. Due to this phenomenon, the search for exogenous antioxidants has intensified. Thiosemicarbazones have been the subject of studies in medicinal chemistry due to their numerous biological properties, highlighting their promising antioxidant and anticancer activity. In this project, a small library of fifteen thiosemicarbazones derivatives (4.a - 4.o) was built, ten of which were new (4.a – 4.e, 4.h, 4.l, 4.m – 4.o). All compounds were characterized by NMR (1H, 13C-APT, COSY, HSQC, HMBC, and in the case of 4.b, 4.h, 4.m and 4.o NOESY was used), IV and ESI-HRMS. The antioxidant activity of all compounds was evaluated according to the DPPH free radical scavenging method. Seven compounds (4.a, 4.d, 4.f, 4.g, 4.m - 4.o) showed an antioxidant capacity from good to moderate, with EC50 values between 51,34 ± 1,93 μM and 252,16 ± 3,61 μM. Compound (E)-2-((3-methyl-1H-indole-2-yl)methylene)-N-phenyl-hydrazinecarbothioamide (4.o) was the most promising with an EC50 of 51,34 ± 1,93 μM, comparable to the rutin 11,36 ± 0,38 μM and ascorbic acid 23,66 ± 0,82 μM. The in vitro cytotoxicity of the compounds (4.b and 4.f – 4.o) was evaluated in Hep-G2 human hepatocarcinoma cells, for a preliminary indication of hepatotoxic potential and, hormone-dependent breast cancer cells MCF-7, according to the MTT colorimetric assay. The results demonstrated that, in both cell lines, at a 100 μM concentration, a significant percentage of cell death wasn’t obtained, therefore none of the tested compounds is cytotoxic. In summary, with the results obtained it was possible to conclude that the synthesized thiosemicarbazones don’t show cytotoxicity, either for Hep-G2 cells or for MCF-7. Nonetheless, they support that some of the compounds have promising antioxidant potential, with emphasis on the 4.o, which may represent a lead for developing new antioxidants.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES Cancer is the second most fatal disease in the world, followed only to cardiovascular diseases and becoming a serious public health problem. The main form of treatment for cancer patients is chemotherapy, with the use of anticancer drugs. However, despite being effective, conventional antineoplastics causes adverse effects in patients, since they do not have selectivity for tumor cells. In this context, given the limitations of conventional chemotherapy treatments, cancer patients all over the world have looking for complementary therapies, such as the use of natural products derived from plants. The objective of this work was to carry out the chemistry characterization and evaluate the in vitro antitumor effect of the essential oil from the leaves of the species Myrcia splendens (OEMS), in different tumor lines. For this, the hydrodistillation of the leaves and the analysis of the OEMS by GC-MS were performed, and identified the bicyclogermacrene, the e-caryophyllene and the germacrene D, all sesquiterpenes, as major constituents. The in vitro cytotoxicity of OEMS was evaluated in three tumor cell lines: lung adenocarcinoma (A549), melanoma (B16-F10) and acute monocytic leukemia (THP-1), using the MTT assay. OEMS showed cytotoxicity in all strains tested, with IC50 ranging between 5.37 and 20.14 µg / mL. In view of this result, the A549 lung cancer strain was used, due to the high incidence and mortality rates of this cancer, to continue the trials to evaluate the antitumor activity of the OEMS. The ability of OEMS to inhibit the formation of clones of the A549 cell line was evaluated by clonogenic assay. The results available show that OEMS was able to significantly inhibit the formation of clones at all concentrations tested (10, 20 and 40 µg / mL). In addition, in assay with DAPI and Phalloidin / FITC, used to verify morphological changes in cells, it was possible to observe that OEMS induced cell death by apoptosis in A549 cells in the tested concentrations (10, 20 and 40 µg / mL), evidenced by the characteristics of reduced cytoplasmic volume and DNA fragmentation. Furthermore, cell shrinkage was observed at the concentration of 40 µg / mL of the OEMS. OEMS was also able to reduce the migratory capacity of A549 cells at a concentration of 40 µg/mL. Given the results, it is suggested that OEMS has antitumor activity in vitro, showing promise for future cancer treatments. O câncer é a segunda doença que mais causa óbitos no mundo, ficando atrás em números apenas para as doenças cardiovasculares e tornando-se um grave problema de saúde pública. A principal forma de tratamento dos pacientes com câncer é a quimioterapia, com o uso de fármacos antineoplásicos. No entanto, apesar de efetivos, os antineoplásicos convencionais desencadeiam inúmeros efeitos adversos nos pacientes, uma vez que não apresentam seletividade para as células tumorais. Nesse contexto, diante das limitações dos tratamentos quimioterápicos convencionais, pacientes com câncer, em todo o mundo, têm recorrido a terapias complementares, como o uso de produtos naturais derivados de plantas. O objetivo deste trabalho foi realizar a caracterização química e avaliar o efeito antitumoral in vitro do óleo essencial das folhas da espécie Myrcia splendens (OEMS), em diferentes linhagens tumorais. Para isso, foram realizadas a hidrodestilação das folhas e a análise do OEMS por CGEM, que identificou como constituintes majoritários o biciclogermacreno, o e-cariofileno e o germacreno D, todos sesquiterpenos. A citotoxicidade in vitro do OEMS foi avaliada em três linhagens de células tumorais: adenocarcinoma de pulmão (A549), melanoma (B16-F10) e leucemia monocítica aguda (THP-1), através do ensaio de MTT. O OEMS apresentou citotoxicidade em todas as linhagens testadas, com IC50 variando entre 5,37 e 20,14 µg/mL. Diante desse resultado, utilizou-se a linhagem de câncer de pulmão A549, devido às altas taxas de incidência e mortalidade desse câncer, para dar continuidade aos ensaios de avaliação da atividade antitumoral do OEMS. Foi avaliada a capacidade do OEMS de inibir a formação de clones da linhagem de células A549 por meio do ensaio clonogênico. Os resultados mostraram que o OEMS foi capaz de inibir significativamente a formação de clones em todas as concentrações testadas (10, 20 e 40 µg/mL). Além disso, no ensaio com DAPI e Faloidina/FITC, utilizado para verificar alterações morfológicas nas células, foi possível observar que o OEMS induziu morte celular por apoptose nas células A549 nas concentrações testadas (10, 20 e 40 µg/mL), evidenciada pelas características de redução do volume citoplasmático e fragmentação de DNA. Ademais, foi observado o encolhimento celular na concentração de 40 µg/mL do OEMS. O OEMS também foi capaz de reduzir significativamente a capacidade migratória das células A549 na concentração de 40 µg/mL. Diante dos resultados, sugere-se que o OEMS possui atividade antitumoral in vitro, mostrando-se promissor para futuros tratamentos contra o câncer. São Cristóvão

Dissertação de mestrado em Bioquímica Aplicada à Biomedicina, Desde sempre que o Homem usou a Natureza como fonte para o tratamento de diversas doenças. Atualmente, a procura de novas drogas que sejam muito próximas ao que é natural tem aumentado. Nos últimos anos, os óleos essenciais tornaram-se uma fonte importante de compostos bioativos. O eugenol, é um composto fenólico da classe dos fenilpropanoides que pode ser encontrado no óleo essencial de diversas plantas, como o cravinho-da-índia. O eugenol é um composto bioativo com relevância comercial nas indústrias alimentar e de cosmética e possui propriedades como ser antioxidante, anti-inflamatório, anti-tumoral, antimicrobiano e citotóxico. Atendendo todas as características do eugenol o objetivo deste projeto passou por estudar a atividade citotóxica de diversos derivados do eugenol. Quatorze derivados do eugenol, de duas classes β-amino álcoois e β-alcóxi álcoois foram previamente sintetizados e as suas propriedades citotóxicas e pró apoptóticas foram estudadas em duas linhas celulares AGS (cancro do estômago) e em A549 (cancro do pulmão), bem como a sua seletividade para linhas cancerígenas. Os resultados obtidos mostraram que alterações na estrutura do eugenol levaram ao melhoramento da sua atividade citotóxica e que alguns compostos, principalmente β-amino álcoois, possuem efeitos pró apoptóticos. Algumas relações estrutura/atividade foram inferidas e por isso, foi possível perceber que derivados com um anel benzeno ligado à cadeia de três carbonos têm melhor interação com as células A549, relevando que as interações entre as moléculas e as linhas celulares (AGS e A549) se processam de forma diferente. Atendendo a todas estas conclusões e com mais estudos direcionados à forma como as estas moléculas interagem com as células, no futuro podem ser sintetizados novas moléculas anti-tumorais mais potentes., Humanity has always relied on Nature as source for the treatment of various diseases. Currently, the demand for new drugs that are similar to natural compounds has increased. In recent years, essential oils have become an important source of bioactive compounds. Eugenol is a phenolic compound from the class of phenylpropanoids that can be found in numerous EOs from plants, such as clove oil. Eugenol has commercial relevance in the food and cosmetics industries, and also had shown biological properties such as anti-inflammatory, anti-oxidant, anti-tumorigenic, anti-microbial and cytotoxic activity. The interest in this molecule has been increasing also because of its structure, which is interesting for a starting molecule. Given all the characteristics of eugenol, the aim of this project was to study the cytotoxic activity of several eugenol derivatives. Fourteen eugenol derivatives, sorted as β-amino alcohols and β-alkoxy alcohols were previously synthesized and their cytotoxic and pro-apoptotic properties were studied in two cell lines AGS (gastric cancer) and A549 (lung cancer), as well as their selectivity for cancerous cells. Regarding the results it was possible to conclude that alteration on eugenol structure lead enhanced of cytotoxic activity and some compounds, mainly β-amino alcohols, have and pro-apoptotic effects. Certain structure/activity relationship were drawn and for that reason it was possible to understand that derivatives with benzene ring attached to the three-carbon chain interact better with A549 cells, revealing that molecules interact in a different way with the two types of cells (AGS and A549). Considering all these conclusions and with more studies about structure/relationship new molecules can be made resulting in improvements for new anticancer agents., Um agradecimento à Fundação para a Ciência e Tecnologia (FCT) pelo financiamento fornecido no âmbito do Projeto FCT (PTDC / ASP-AGR / 30154/2017).

Flavoring additives are of great technological importance for the food industry. However, there is little information regarding the toxicological properties of these micro-ingredients, especially at the cellular level. The present study used meristematic root cells of Allium cepa L. to evaluate the toxicity of a liquid, aroma and flavor synthetic chocolate additive, manufactured and widely marketed throughout Brazil and exported to other countries in South America. The flavoring concentrations evaluated were 100.00; 50.00; 25.00; 1.00; 0.50 and 0.25 µL/L, where the highest concentration established was one-hundred times lower than that commercially suggested for use. The concentration 100 µL/L substantially reduced cell division of meristems within 24- and 48-hours exposure. Concentrations from 100.00 to 0.50 µL/L resulted in a significant number of prophases to the detriment of the other phases of cell division, indicating an aneugenic activity, and induced a significant number of cellular changes, with emphasis on micronuclei, nuclear buds and chromosomal breaks. Under the established analysis conditions, with the exception of concentration 0.25 µL/L, the flavoring of chocolate caused cytotoxicity, genotoxicity and mutagenicity to root meristems. Resumo Os aditivos aromatizantes têm grande importância tecnológica para a indústria de alimentos. Contudo, poucas são as informações quanto as propriedades toxicológicas desses microingredientes, especialmente, em nível celular. No presente estudo avaliou-se, sobre as células meristemáticas de raízes de Allium cepa L., a toxicidade de um aditivo sintético líquido de aroma e sabor de chocolate, fabricado e amplamente comercializado em todo Brasil, e exportado para outros países da América do Sul. As concentrações de aromatizante avaliadas foram 100,00; 50,00; 25,00; 1,00; 0,50 e 0,25 µL/L, onde a maior concentração estabelecida foi cem vezes menor que a sugerida comercialmente para uso. Com base na interpretação dos resultados, a concentração 100 µL/L reduziu substancialmente a divisão celular dos meristemas nas 24 e 48 horas de exposição. As concentrações 100,00 a 0,50 µL/L demonstraram número significativo de prófases em detrimento as outras fases da divisão celular, indicando ação aneugênica, e induziram número significativo de alterações celulares, com ênfase a micronúcleos, broto nucleares e quebras cromossômicas. Nas condições de análises estabelecidas, com exceção a concentração 0,25 µL/L, o aromatizante de chocolate causou citotoxicidade, genotoxicidade e mutagenicidade aos meristemas radiculares.

This work presents the results obtained from the unpublished study of two plants of the genus Chamaecrista, native to the Brazilian flora and which present rare studies on chemical composition and biological potential. Chemical documentation of the metabolic profile of Chamaecrista duckeana I&B and Chamaecrista ensiformis I&B extracts was performed using the UHPLC-MS technique (ultra performance liquid chromatography coupled to mass spectrometry). The chemical profiles are dominated by flavonoids, but with the presence of anthraquinones, chalcones, coumarins, chromones, phenylpropanoids and sesquiterpenes. Thirty-four (34) compounds were identified that are being reported for the first time in both species. The antioxidant activity of the extracts of leaves, stems and fruits of C. duckeana was performed using an in vitro assay, by scavenging the free radical DPPH and in the evaluation of the cytotoxic activity of the extracts, the MTT assay was used, and IC50 values ​​were determined against the cell lines HL60 and RAJI cell lines. The extracts showed antioxidant potential, and the activity of the stem extract was superior to the standard BHT. In the cytotoxic assay, only the HL60 cell line (leukemia) showed growth inhibition greater than 80%. The stem extract showed the most expressive cytotoxicity with IC50 of 137.3 (104.6-180.1) and 106.8 (96.52-118.3) μmol L-1 for HL60 and RAJI, respectively. Extracts from leaves and flowers of C. ensiformis were investigated for their toxicity against adult Zebrafish (Danio rerio). Antioxidant activity was performed using the DPPH and ABTS assays and the antiacetylcholinesterase potential was performed using the Ellman method. Cytotoxicity was tested using the MTT method. The data obtained revealed that the extracts were not toxic against adult Zebrafish (Danio rerio) up to 96 h of analysis. The leaf extracts showed good antioxidant activity with an IC50 value of 5.516 ± 0.027 µg mL-1 in the ABTS method. The extract of C. ensiformis flowers inhibited the enzyme acetycholinesterase (AChE), with an inhibition halo of 0.8 cm in diameter and showed a significant cytotoxic effect against cell lines HL60 and RAJI with IC50 of 88.76 and 90.23 µg mL-1, respectively. The present work presents a comprehensive and unprecedented knowledge about the species C. duckeana and C. ensiformis, rich in bioactive secondary metabolites with cytotoxic activity. Este trabalho apresenta os resultados obtidos pelo estudo inédito de duas plantas do gênero Chamaecrista, nativas da flora brasileira e que apresentam raros estudos sobre composição química e potencial biológico. A documentação química do perfil metabólico dos extratos de Chamaecrista duckeana I&B e Chamaecrista ensiformis I&B foi realizada empregando-se a técnica de UHPLC-MS (cromatografia líquida de ultra eficiência acoplada a espectrometria de massas). Os perfis químicos são dominados por flavonoides, mas com a presença de antraquinonas, chalconas, cumarinas, cromonas, fenilpropanoides e sesquiterpenos. Foram identificados trinta e quatro (34) compostos que estão sendo relatados pela primeira vez nas duas espécies. A atividade antioxidante dos extratos de folhas, caules e frutos de C. duckeana foi realizada utilizando ensaio in vitro, pelo sequestro do radical livre DPPH e na avaliação da atividade citotóxica dos extratos, foi utilizado ensaio MTT, sendo determinados valores de IC50 contra as linhagens celulares HL60 e RAJI. Os extratos apresentaram potencial antioxidante, e a atividade do extrato do caule foi superior ao padrão BHT. No ensaio citotóxico, apenas a linhagem HL60 (leucemia) apresentou inibição de crescimento superior a 80%. O extrato do caule apresentou citotoxicidade mais expressiva com IC50 de 137,3 (104,6-180,1) e 106,8 (96,52-118,3) μmol L-1 para HL60 e RAJI, respectivamente. Extratos das folhas e flores de C. ensiformis foram investigados quanto a sua toxicidade frente a Zebrafish (Danio rerio) adulto. A atividade antioxidante foi realizada utilizando os ensaios com DPPH e ABTS e o potencial antiacetilcolinesterase foi realizado pelo método de Ellman. A citotoxicidade foi testada usando o método MTT. Os dados obtidos revelaram que os extratos não foram tóxicos frente ao Zebrafish (Danio rerio) adulto até 96 h de análise. Os extratos das folhas apresentaram boa atividade antioxidante com valor de IC50 5,516 ± 0,027 µg mL-1 no método ABTS. O extrato das flores de C. ensiformis inibiu a enzima aceticolinesterase (AChE), com halo de inibição de 0,8 cm de diâmetro e apresentou efeito citotóxico significativo contra as linhagens celulares HL60 e RAJI com IC50 de 88,76 e 90,23 µg mL-1, respectivamente. O presente trabalho apresenta um conhecimento abrangente e inédito sobre as espécies C. duckeana e C. ensiformis, ricas em metabólitos secundários bioativos com atividade citotóxica.

Dissertação de mestrado em Biofísica e Bionanossitemas, Nanotechnology combined with medicine provide new approaches to target drugs and mitigate the side effects of current cancer treatments. Plasmon magnetoliposomes are promising nanosystems for dual hyperthermia (magneto-photothermal) and local chemotherapy. The combination of magnetic and gold nanoparticles in a single nanosystem (multifunctional liposomes) enables greater efficiency, allowing reaching deep tumors and using hyperthermia as a therapeutic approach. In addition, it allows targeted and controlled release of encapsulated drugs. Lactoferrin (Lf) is a milk-derived protein that exhibits a powerful anticancer activity against several types of cancer. Since this molecule is susceptible to degradation in the gastrointestinal tract and since its properties depend on its tertiary structure, which is compromised during digestion, the encapsulation of Lf provides an added value to potentiate its effects. In this work, aqueous magnetoliposomes (AMLs) containing manganese ferrite nanoparticles (MnFe2O4) and Lf in the inner volume and gold nanoparticles functionalized with 11-mercaptoundecanoic acid (MUA) or octadecanethiol (ODT) inserted in the membrane, were synthesized. The AMLs were characterized by Dynamic Light Scattering (DLS) and Electrophoretic Light Scattering (ELS); encapsulation of the nanoparticles in the AMLS was proved, as well as their fusion ability with model membranes. Fluorescence anisotropy measurements were used to study the effect of gold nanoparticles on membrane fluidity. Lf encapsulation efficiency, Lf release profile from magnetoliposomes, as well as photothermal capacity of the gold nanoparticles were also determined. Finally, biological studies were performed using the yeast Saccharomyces cerevisiae, which is considered a model organism to study the anticancer effect of Lf as several chances triggered by Lf in cancer cells are also observed in yeast cells. The cytotoxicity and the mechanism of entry of AMLs, with and without Lf, into yeast cells was assessed by counting of colony forming units and fluorescence microscopy, respectively. The results obtained demonstrate that AMLs are successfully internalized by yeast cells, and their potential application for Lf transport in cancer therapy, since only AMLs with Lf have a cytotoxic effect., A nanotecnologia, aliada à medicina, apresenta novas abordagens para direcionar os fármacos e mitigar os efeitos secundários dos tratamentos atuais contra o cancro. Os magnetolipossomas plasmónicos são nanossistemas promissores para hipertermia dual (magneto-fototérmica) e quimioterapia local. A combinação de nanopartículas magnéticas e de ouro num nanossistema (lipossomas multifuncionais) possibilita maior eficiência, permitindo atingir tumores profundos e utilizar a hipertermia como abordagem terapêutica. Além disso, permite o direcionamento e libertação controlada de fármacos encapsulados. A lactoferrina (Lf) é uma proteína derivada do leite, com forte atividade anticancerígena contra diversos tipos de cancros. Uma vez que as propriedades da Lf dependem da sua estrutura terciária, a qual é comprometida durante a digestão, o seu encapsulamento constitui uma mais-valia para potencializar o seu efeito quando administrada oralmente. Neste trabalho, sintetizaram-se magnetolipossomas aquosos (AMLs) contendo no seu interior nanopartículas de ferrite de manganês (MnFe2O4) e Lf e ainda nanopartículas de ouro funcionalizadas com ácido 11-mercaptoundecanóico (MUA) ou octadecaneotiol (ODT) localizadas na membrana. As propriedades estruturais, magnéticas e óticas das nanopartículas foram investigadas. Os AMLs foram caracterizados por Difusão Dinâmica de Luz (DLS) e Difusão Eletroforética da Luz (ELS), tendo-se provado o encapsulamento das nanopartículas nos AMLs e a capacidade de fusão com membranas modelo. Medidas de anisotropia de fluorescência permitiram avaliar o efeito das nanopartículas de ouro na fluidez da membrana. Foi ainda avaliada a eficiência de encapsulamento da Lf, o perfil de libertação da Lf dos magnetolipossomas e a capacidade fototérmica das nanopartículas de ouro. Por fim, estudos biológicos foram realizados utilizando células de levedura Saccharomyces cerevisiae, que são considerados organismos modelo, uma vez que diversas alterações desencadeadas pela Lf em células cancerígenas também são observadas em células de levedura. A citotoxicidade dos AMLs, com e sem Lf, bem como o mecanismo de entrada foram avaliados através da contagem de unidades formadoras de colónias e microscopia de fluorescência, respetivamente. Os resultados obtidos comprovam a internalização dos AMLs e demonstram sua potencial aplicação para transporte de Lf na terapia do cancro, uma vez que apenas os AMLs com Lf encapsulada apresentaram efeito tóxico.

Cancer reached more than 17 million new cases in the world in 2018, leading to the death of almost 9.5 million people. When it comes to melanoma, a more aggressive type of skin cancer, there has been an increase in the number of cases in the 21st century. Although surgical treatment remains the "gold standard", recent advances in immunotherapy and targeted molecular therapy for metastatic diseases have showed very promising results. It emphasizes the importance of studying new molecular structures and building new substances that can be used in the therapy of this disease. In this study, evaluation and screening of five compounds that combine the maleimide and 1,4-dioxo-2-butenyl group, containing sulfur in its structure, in B16F10 tumor cells in relation to cytotoxicity, through the MTT assay, emerged with more significant results in cell proliferation inhibition, called Compound 3 and Compound 5. The cells were subjected to 24 hours of treatment and evaluated in a flow cytometer for membrane integrity and cell count, demonstrating a significant reduction in the number of cells in treatment with both compounds, at all concentrations tested, without significant change in membrane integrity. Then, a cell cycle profile was evaluated, showing marked retention in the G1 phase, mainly in Compound 3, in addition to the appearance of a sub-G1 population, providing evidence of cell death, confirmed by the induction of initial apoptosis in both compounds and concentrations tested. An increase in ROS is observed from the concentration of 125 μM in both compounds, after 3 hours of treatment. The genotoxicity study identifies expressive results in both molecules. Compound 5 proved to be more efficient in genotoxic damage than Compound 3, increasing both the length of the comet and the amount of DNA in the tail. The study is concluded with gene expression, obtaining a considerable increase in GADD45a, a marker of generalized damage, increase in ATR, TP53, CDKN1a, CHK2, COX2 and CASP3, in both compounds, at concentrations of 125 μM and 500 μM. Activation of GADD45a indicates that damage caused by both compounds is signaled by activation of the p38/JNK pathway, in this case, possibly independent of P53 activation. These results, added together, indicate a future therapeutic possibility for them to fight melanoma. A incidência de câncer atingiu mais de 17 milhões de novos casos no mundo em 2018, levando a óbito quase 9,5 milhões de pessoas. Quando se fala em melanoma, um tipo de câncer de pele mais agressivo, houve aumento no número de casos no século 21. Embora o tratamento cirúrgico permaneça como "padrão ouro", avanços recentes em imunoterapia e terapia molecular alvo, para doenças metastáticas, têm mostrado resultados bastante promissores. Enfatiza-se a importância do estudo de novas estruturas moleculares e construção de substâncias inéditas que poderão ser utilizadas na terapia desta doença. Neste estudo foi realizada avaliação e triagem de cinco compostos que combinam o grupo maleimida e 1,4-dioxo-2-butenil, contendo enxofre em sua estrutura, em células tumorais B16F10 com relação à citotoxicidade, através do ensaio do MTT, surgindo dois compostos com resultados mais significativos em inibição de proliferação celular, denominados Composto 3 e Composto 5. As células foram submetidas a 24h de tratamento com os compostos e avaliados em citômetro de fluxo quanto à integridade de membranas e contagem celular, demonstrando redução significativa do número de células no tratamento com ambos os compostos, em todas as concentrações testadas, sem alteração significativa em integridade de membranas. Em seguida, avaliou-se perfil de ciclo celular, evidenciando acentuada retenção na fase G1, principalmente no Composto 3, além do aparecimento de população sub-G1, fornecendo indícios de morte celular, confirmados pela indução de apoptose inicial em ambos os compostos e concentrações testadas. Observa-se aumento de EROs a partir da concentração de 125 μM em ambos os compostos, após 3 horas de tratamento. O estudo de genotoxicidade identifica resultados expressivos em ambas moléculas. O Composto 5 mostrou-se mais eficiente em danos genotóxicos que o Composto 3, aumentando tanto o comprimento do cometa, quanto a quantidade de DNA na cauda. Finaliza-se o estudo com a expressão gênica, obtendo-se aumento considerável de GADD45a, marcador de danos generalizados, aumento de ATR, TP53, CDKN1a, CHK2, COX2 e CASP3, em ambos os compostos, nas concentrações de 125 μM e 500 μM. A ativação de GADD45a indica que os danos causados por ambos compostos são sinalizados por ativação da via p38/JNK, sendo neste caso, possivelmente independente de ativação de P53. Estes resultados, somados, indicam possibilidade terapêutica futura dos mesmos no enfrentamento do melanoma.

Paraquat (PQ) é um herbicida altamente tóxico que tem como principal mecanismo de toxicidade a geração de estresse oxidativo intracelular. A erva-mate (EM), planta nativa da América do Sul, tem sido estudada devido a uma ampla variedade de propriedades benéficas à saúde, incluindo suas propriedades antioxidantes e anti-inflamatórias. Considerando que o PQ é utilizado na agricultura em vários países e que a erva-mate tem potencial terapêutico, este estudo avaliou os efeitos citotóxicos e oxidativos do PQ nas células mononucleares do sangue periférico (PBMC) e o possível papel protetor da EM. Amostras de PBMC (n = 8) foram pré-expostas a 100 e 250 μg/mL de extrato hidroetanólico de erva-mate por 30 minutos e, posteriormente, a 1mM de PQ por mais 2 horas. Os testes de viabilidade celular e estresse oxidativo foram realizados após o protocolo de exposição. Diminuição significativa na viabilidade celular induzida por PQ foi detectada no teste de incorporação de vermelho neutro, mas não nos testes de MTT e LDH. Não foram encontradas diferenças significativas na peroxidação lipídica e nos níveis de grupos tiólicos celulares no grupo exposto a PQ. O extrato hidroetanólico de erva-mate não reverte a citotoxicidade induzida pelo PQ detectada pelo teste do vermelho neutro. Nossos dados preliminares sugerem que a erva-mate não tem potencial terapêutico na prevenção de danos causados pelo herbicida PQ.

This integrative review aims to present botanical, phytochemical and cytotoxic information about plant species commonly used. As a strategy to search for articles, the databases of Latin American and Caribbean Literature in Health Sciences (LILACS), Scientific Electronic Library Online (SCIELO), Science Direct, and Google Scholar were used. selected works in Portuguese, English and Spanish. After reading the abstract, studies that met the requirements of the topic addressed were included. Works that, after reading in full, did not directly address the proposed theme were excluded. Records of the use of medicinal plants dating back to 1500 BC were observed. Associated with this, the "Green Pharmacopoeia", from 1926, was the first official Brazilian document with botanical descriptions of some medicinal plants. Concerning the families Moraceae, Asteraceae, Theaceae, Malvaceae, Junglandaceae, Celastraceae and Illiciaceae, the most abundant worldwide was the Asteraceae with about 1,600 genera and 23,000 species, while Theaceae, with about 10 genera and 195 species, was the least found . It was observed that the cytotoxicity assays, in vitro, both by direct and indirect methods, are configured as a tool to assess the toxicity of medicinal plants and some biological activities. In this context, in vitro cytotoxicity assays are a preliminary tool to assess the toxicity and biological activity of a medicinal plant. Esta revisión integradora tiene como objetivo presentar información botánica, fitoquímica y citotóxica sobre las especies de plantas de uso común. Como estrategia de búsqueda de artículos se utilizaron las bases de datos de Literatura Latinoamericana y Caribeña en Ciencias de la Salud (LILACS), Scientific Electronic Library Online (SCIELO), Science Direct y Google Scholar, trabajos seleccionados en portugués, inglés y español. Luego de la lectura del resumen, se incluyeron los estudios que cumplieron con los requisitos del tema abordado. Se excluyeron los trabajos que, después de leerlos íntegramente, no abordaran directamente el tema propuesto. Se observaron registros de uso de plantas medicinales que datan del 1500 aC Asociado a esto, la "Farmacopea Verde", de 1926, fue el primer documento oficial brasileño con descripciones botánicas de algunas plantas medicinales. En cuanto a las familias Moraceae, Asteraceae, Theaceae, Malvaceae, Junglandaceae, Celastraceae e Illiciaceae, la más abundante a nivel mundial fue la Asteraceae con cerca de 1.600 géneros y 23.000 especies, mientras que Theaceae, con cerca de 10 géneros y 195 especies, fue la menos encontrada. Se observó que los ensayos de citotoxicidad, in vitro, tanto por métodos directos como indirectos, se configuran como una herramienta para evaluar la toxicidad de plantas medicinales y algunas actividades biológicas. En este contexto, los ensayos de citotoxicidad in vitro son una herramienta preliminar para evaluar la toxicidad y la actividad biológica de una planta medicinal. A presente revisão integrativa tem por objetivo apresentar informações botânicas, fitoquímicas e citotóxicas sobre espécies vegetais usadas popularmente. Como estratégia para busca de artigos, utilizaram-se as bases de dados de Literatura Latino-americana e do Caribe em Ciências da Saúde (LILACS), a Scientific Electronic Library Online (SCIELO), a Science Direct, e o Google Scholar, e, foram selecionados trabalhos nos idiomas português, inglês e espanhol. Após a leitura do resumo, foram incluídos estudos que atendiam aos requisitos do tema abordado. Foram excluídos os trabalhos que, após leitura na íntegra não abordaram diretamente a temática proposta. Observaram-se registros do uso de plantas medicinais datados desde 1500 A.C, associado a isso, a "Farmacopeia Verde", de 1926, foi o primeiro documento oficial brasileiro com descrições botânicas de algumas plantas medicinais. Referente às famílias Moraceae, Asteraceae, Theaceae, Malvaceae, Junglandaceae, Celastraceae e Illiciaceae, a mais abundante mundialmente foi a Asteraceae com cerca de 1.600 gêneros e 23.000 espécies, enquanto a Theaceae, com cerca de 10 gêneros e 195 espécies, foi a menos encontrada. Observou-se que os ensaios de citotoxicidade, in vitro, tanto por métodos direto quanto indiretos, configuram-se como uma ferramenta para avaliar toxicidade das plantas medicinais e algumas atividades biológicas. Nesse contexto, os ensaios de citotoxicidade in vitro é uma ferramenta preliminar para avaliar a toxicidade e atividade biológica de uma planta medicinal.

Halophytes are salt-tolerant plants, enriched in metabolic compounds with several industrial applications. Batis maritima is a halophyte with occurrence in tropical and subtropical zones and the present work aimed to investigate B. maritima leaves extract for biotechnology and bioprospecting approaches. The present study evaluated the phytochemical profile, the role of acetylcholinesterase, and protective activities from B. maritima. The phytochemical screening highlighted the presence of phenolic compounds, anthracenes, and saponins. The metal content analysis revealed sodium (Na) as the most abundant salt (1 g/kg), followed by Al (0.35 g/kg), and several other elements in lower concentrations. Further, DPPH and TAC methodologies showed an significant antioxidant activity (IC50 5.17 ± 0.05 μg/mL and 0.45 ± 0.08 mg.AAEm, respectively). A metal chelating activity was also observed, with IC50 25.76 ± 0.3 μg/mL. Additionally, B. maritima aqueous extract disclosed an anticholinesterase inhibitory effect in a dose-dependent manner (IC50 = 0.0023 mg/mL). Haemolysis assay did not reveal any toxic effects. On the other hand, the cytotoxicity assay, using murine fibroblasts cells (NIH-3T3), showed a decrease in cell viability at high concentrations. Los halófitos son plantas tolerantes a la sal, enriquecidas en compuestos metabólicos con varias aplicaciones industriales. Batis maritima es un halófito con presencia en zonas tropicales y subtropicales y el presente trabajo tuvo como objetivo investigar el extracto de hojas de B. maritima para enfoques de biotecnología y bioprospección. El presente estudio evaluó el perfil fitoquímico, el papel frente a la acetilcolinesterasa y las actividades protectoras de B. maritima. El cribado fitoquímico destacó la presencia de compuestos fenólicos, antracenos y saponinas. El análisis del contenido de metales reveló que el sodio (Na) es la sal más abundante (1 g/kg), seguida del Al (0,35 g/kg) y varios otros elementos en menor concentración. Además, las metodologías DPPH y TAC mostraron una actividad antioxidante significativa (IC50 5.17 ± 0.05 μg/mL y 0.45 ± 0.08 mg.AAEm, respectivamente). También se observó una actividad quelante de metales, con IC50 = 25,760 ± 0,3 μg / mL. Además, el extracto acuoso de B. maritima reveló un efecto anticolinesterasa de una manera dependiente de la dosis (IC50 = 0,0023 mg / ml). El ensayo de hemólisis no reveló ningún efecto tóxico. Por otro lado, el ensayo de citotoxicidad, utilizando células de fibroblastos murinos (NIH-3T3), mostró una disminución de la viabilidad celular. Halófitas são plantas tolerantes a salinidade, ricas em metabolitos com aplicação em diversas indústrias. Batis maritima é uma halófita com ocorrência em zonas tropicais e subtropicais, o presente trabalho objetivou investigar o extrato das folhas de B. maritima em uma abordagem de bioprospecção e biotecnológica. O presente estudo avaliou o perfil fitoquímico, o potencial efeito sobre a enzima acetilcolinesterase, além de propriedades protetivas de B. maritima. A análise fitoquímica evidenciou a presença de compostos fenólicos, antracenos e saponinas. O conteúdo de metal revelou o Sódio (Na) como o sal mais abundante (1g/Kg), seguido pelo alumínio (Al;0,35 g/Kg), e diversos outros elementos em concentrações menores. As metodologias de DPPH e Capacidade Antioxidante Total indicou efeito antioxidante significativo (IC50 5,17 ± 0,05 μg/mL e 0,45 ± 0,08 mg.AAEm, respectivamente). A atividade quelante de metal também foi observada, com um IC50­ de 25,76 ± 0,3 μg/mL. Além disso, o extrato aquoso de B. maritima apresentou efeito inibitório sobre a acetilcolinesterase de forma dose-dependente com IC50 de 0,0023 mg/mL. O ensaio de hemólise não revelou efeitos tóxicos, por outro lado, o ensaio de citotoxicidade, utilizando células da linhagem NIH-3T3, evidenciou uma diminuição da viabilidade celular em concentrações elevadas do extrato.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Cancer is one of the most dreaded diseases of the 20th century, and its prevalence and incidence are increasing in the 21st century. The situation is so serious that one in four people can develop cancer in their lifetime. Several components influence tumor growth, indicating multiple pathways for developing new chemotherapeutic compounds with different modes of action. The enzyme cathepsin B, for example, is related to the formation of new blood vessels that will support the tumor and tumor progression. This enzyme is overexpressed in many types of cancer, including prostate, lung, and breast cancer. In this sense, the search for compounds capable of inhibiting the action of this enzyme is extremely desirable. Palladium (II) complexes may be a promising alternative for obtaining molecules with strong cytotoxicity and the capacity to block the activity of Cathepsin B. Once they can effectively bind to the active site of the target enzyme. Hence, a thiosemicarbazone ligand and triphenylphosphine are incorporated into the molecular framework, generating compounds of the type [Pd(TSC)XPPh3] [(X = Cl-; SCN-; DMSO), PPh3 = Triphenylphosphine, TSC = 1-methyl- 3-phenylprop-2-en-1-ylidene hydrazine carbothioamide). After complete characterization of the complexes by different techniques, cytotoxicity assays were performed against three cell lines [PNT2 (non-tumor prostate cells), A2780 Cis (ovarian tumor lines), and MRC5 (non-tumor lung cells)]. The results indicate high cytotoxicity of all complexes, surpassing the value of the standard drug cisplatin by up to 1400 times. However, a preference between tumor and non-tumor cells was not noticeable. Furthermore, spectrophotometric DNA titration assays were carried out to investigate any interaction between them. The results showed weak or no interaction. Therefore, DNA was ruled out as a possible cytotoxic target. Nevertheless, from the topoisomerase inhibition assay, it was possible to observe the ability to prevent DNA relaxation caused by the topoisomerase I beta enzyme, indicating that this may be one of the pharmacological targets of these complexes. Additionally, the compounds were shown to irreversibly inhibit the action of cathepsin B at concentrations lower than 100 uM. Therefore, it is concluded that this type of compound can present interesting structural characteristics to provide metallic compounds that inhibit cancer progression. O câncer é uma das doenças mais temidas do século XX, e sua prevalência e incidência estão aumentando no século XXI. A situação é tão grave que uma em cada quatro pessoas pode desenvolver câncer durante a vida. Existem vários componentes que influenciam o crescimento do tumor, indicando múltiplas vias para o desenvolvimento de novos compostos quimioterápicos com diferentes modos de ação. A enzima catepsina B, por exemplo, está relacionada a formação de novos vasos sanguíneos que nutrirão o tumor e a progressão tumoral. Esta enzima é superexpressa em vários tipos de câncer, incluindo câncer de próstata, pulmão e mama. Nesse sentido, a busca por compostos capazes te inibirem a ação desta enzima é extremamente desejável. Os complexos de Paládio (II) podem ser uma alternativa promissora para a obtenção de moléculas com forte citotoxicidade e capacidade de bloquear a atividade da Catepsina B, uma vez que podem se ligar de forma efetiva ao sítio ativo da enzima alvo. Para tal, incorpora-se ao arcabouço molecular um ligante tiossemicarbazona e a trifenilfosfina, gerando compostos do tipo [Pd(TSC)XPPh3] [(X = Cl-; SCN-; DMSO), PPh3 = Trifenilfosfina, TSC = 1- metil-3-fenilprop-2-en-1-ilideno hidrazina carbotioamida). Após a completa caracterização dos complexos por diferentes técnicas, ensaios de citotoxicidade foram realizados frente a três linhagens celulares [PNT2 (células não tumorais da próstata), A2780 Cis (linhagens tumorais de ovário) e MRC5 (células pulmonares não tumorais)], os resultados indicam uma elevada citotoxicidade dos complexos, superando o valor do fármaco padrão cisplatina em até 1400 vezes, no entanto, não foi perceptível uma preferência entre células tumorais e não tumorais. Além disso, ensaios de titulação espectrofotométrica com o DNA foram realizados para investigar se existe alguma interação entre eles. Os resultados mostraram uma fraca ou nenhuma interação entre eles, portanto, o DNA foi descartado como um possível alvo citotóxico. No entanto, a partir dos dados de ensaio de inibição das enzimas topoisomerases, foi possível observar a capacidade de impedir o relaxamento do DNA causado pela enzima topoisomerase I beta, indicando que este pode ser um dos alvos farmacológicos destes complexos. Adicionalmente, os compostos mostraram serem capazes de inibir de forma irreversível a ação da catepsina B em concentrações menores que 100 uM. Diante disso, conclui-se que este tipo de composto pode apresentar características estruturais interessantes para fornecer compostos metálicos que inibem a progressão do câncer. CAPES: Código de Financiamento 001

Submitted by Amjad Abu Hasna (amjad.hasna@unesp.br) on 2022-01-31T19:27:36Z No. of bitstreams: 1 Tese Repositório.pdf: 3593592 bytes, checksum: bb219e28aea1e620d8c8ec8c1e837de7 (MD5) Approved for entry into archive by Silvana Alvarez null (silvana@ict.unesp.br) on 2022-02-01T12:52:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 hasna_aa_dr_sjc.pdf: 3593592 bytes, checksum: bb219e28aea1e620d8c8ec8c1e837de7 (MD5) Made available in DSpace on 2022-02-01T12:52:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 hasna_aa_dr_sjc.pdf: 3593592 bytes, checksum: bb219e28aea1e620d8c8ec8c1e837de7 (MD5) Previous issue date: 2021-12-06 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Os cimentos biocerâmicos possuem diversas aplicações clinicas na área de endodontia. Este estudo teve como objetivo avaliar a ação antimicrobiana do cimento de cinco óxidos minerais “5MO”, do agregado trióxido mineral “MTA” que já é um material consagrado, como também do agregado trióxido mineral reparador de alta plasticidade “MTA HP”, e comparar a capacidade dos mesmos na eliminação de microrganismos anaeróbios, comumente encontrados em infecções endodônticas primárias por meio de teste de MTT; avaliar e comparar também a biocompatibilidade dos mesmos através testes de citotoxicidade de MTT sobre cultura de macrófagos de camundongos (RAW 264.7) e osteoblastos (MG-63); avaliar a composição química dos mesmos através da microscopia eletrônica de varredura “MEV” acoplada a espectroscopia de raios X por dispersão em energia “EDS ou EDAX” e avaliar a fase por difração de raios-X “DRX”; além de avaliar a sua radiopacidade. Neste estudo, foi observada a atividade antibiofilme efetiva dos grupos experimentais sobre alguns microrganismos anaeróbios incluindo Porphyromonas gingivalis, Porphyromonas endodontalis, Parvimonas micra, Fusobacterium nucleatum e Prevotella intermedia, por outro lado, os mesmos foram biocompatíveis sobre os macrófagos e osteoblastos após 5 min de contato. Além disso, foram encontrados principais componentes químicos em que a presença de titânio, enxofre e potássio e a ausência de tungstênio no 5MO o torna diferente do MTA e do MTA HP, e a presença de estrôncio no MTA HP o torna diferente do 5MO e do MTA. Todos os biocerâmicos avaliados apresentaram uma radiopacidade adequada para serem utilizados clínicamente de acordo com o protocolo para radiopacidade de materiais dentários, publicado pela International Standards Organization (ISO). Sendo assim, os cimentos biocerâmicos 5MO, MTA HP, e MTA possuem ação antimicrobiana efetiva contra todos os microrganismos anaeróbios analisados, são biocompatíveis, possuem componentes químicos em comum, e possuem radiopacidade adequada para o uso clínico de material dentário. Bioceramic cements have several clinical applications in endodontics. This study aimed to evaluate the antimicrobial action of the cement of five mineral oxides "5MO", mineral trioxide aggregate "MTA" which is already an established material, as well as the mineral trioxide aggregate repair high plasticity "MTA HP", and to compare their ability to eliminate anaerobic microorganisms, commonly found in primary endodontic infections by means of MTT test; to evaluate and compare their biocompatibility through MTT cytotoxicity tests on mouse macrophage cultures (RAW 264.7) and osteoblasts (MG-63); evaluate their chemical composition through scanning electron microscopy “SEM” coupled with energy dispersion X-ray spectroscopy “EDS or EDAX” and evaluate the phase by X-ray diffraction “XRD”; in addition to evaluating its radiopacity. In this study, all tested bioceramic cements were effective over some anaerobic microorganisms including Porphyromonas gingivalis, Porphyromonas endodontalis, Parvimonas micra, Fusobacterium nucleatum and Prevotella intermedia, on the other hand, they were biocompatible on macrophages and osteoblasts after 5 minutes of contact. In addition, main chemical components were found in which the presence of titanium, sulfur and potassium and the absence of tungsten in 5MO makes it different from MTA and MTA HP, and the presence of strontium in MTA HP makes it different from 5MO and MTA. All evaluated bioceramic cements presented adequate radiopacity to be used clinically according to the protocol for radiopacity of dental materials, published by the International Standards Organization (ISO). Thus, 5MO, MTA HP, and MTA bioceramic cements have effective antimicrobial action against all tested anaerobic microorganisms, are biocompatible, have chemical components in common, and have adequate radiopacity for the clinical use of dental material. 2018/13930-0

Submitted by Renorbio (renorbioba@ufba.br) on 2022-05-02T13:22:19Z No. of bitstreams: 1 Tese - versão final - João Henrique.pdf: 16697792 bytes, checksum: efbd1edeb74ba6511bed534bea594bc5 (MD5) Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2022-05-10T23:39:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese - versão final - João Henrique.pdf: 16697792 bytes, checksum: efbd1edeb74ba6511bed534bea594bc5 (MD5) Made available in DSpace on 2022-05-10T23:39:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese - versão final - João Henrique.pdf: 16697792 bytes, checksum: efbd1edeb74ba6511bed534bea594bc5 (MD5) Previous issue date: 2021-12-03 CAPES A própolis é um composto natural de grande aplicação nas áreas alimentícia, farmacêutica e cosmética sendo uma resina complexa produzida pelas abelhas através da mistura de exsudatos de diferentes plantas, cera e secreções salivares. As variações na composição química, e consequentemente, na atividade biológica de extratos de própolis, estão associadas a muito fatores, como tipo, origem geográfica, sazonalidade, entre outros. Dentro desse contexto, o objetivo desse estudo foi avaliar a influência de diferentes métodos de extração na composição química e biológica de extratos de própolis vermelha de diferentes origens geográficas, bem como determinar as condições de processo para a obtenção de extratos de própolis vermelha utilizando a tecnologia de extração com fluído supercrítico (SFE). Inicialmente, os métodos de extração convencional (etanólica) e assistida por ultrassom foram empregados para extrair compostos ativos de própolis de diferentes regiões do Nordeste do Brasil (Sergipe, Alagoas, Bahia, e Rio Grande do Norte). Teores de compostos fenólicos, flavonoides, atividade antioxidante in vitro, concentração de marcadores (formononetin e kaempferol) e a citotoxidade para linhagens de células tumorais humanas (HCT116 – human colon, HL60 – leukemia, PC3 – carcinoma of prostate e SNB19 – glioblastoma) foram avaliados comparativamente para os doze extratos obtidos a partir de seis diferentes amostras. Adicionalmente, foram obtidos extratos de própolis vermelha por SFE de uma amostra de Alagoas empregando diferentes condições de processo. Para a determinação dos parâmetros de processo aplicando a SFE, foram estudados e obtidos a Curva Global de Extração (OEC - Overall Extraction Curves), o S/F (massa de CO2/massa de própolis), o percentual de co-solvente (etanol – 0, 1, 2 e 4%) e as isotermas de rendimento global (GYI - Global Yield Isotherms) em função das diferentes pressões (250, 350 e 450 bar) e temperaturas (31,7, 40 e 50°C). Foram investigados os compostos fenólicos totais, atividade antioxidante e o teor de formononetina, naringenina e kaempferol nos extratos obtidos nas diferentes condições empregadas (SFE). Como resultados deste estudo, foram identificadas variações significativas (p>0,05) no teor dos compostos investigados nos extratos de própolis vermelha, confirmando que a composição química varia de acordo com a região de coleta das amostras. A maior concentração dos compostos de interesse e a maior atividade antioxidante in vitro foram exibidas pelos extratos obtidos em amostras do estado de Alagoas (A1, A2, B1 e B2), que atualmente é a única no Brasil que apresenta certificação de origem. Os biomarcadores formononetina e kaempferol foram identificados em todas as amostras, independente da origem ou do método de extração empregado. As maiores concentrações de formononetina foram identificadas nos extratos obtidos por ultrassom, indicando uma maior seletividade para a extração desse composto por este método. Em relação à atividade citotóxica, para a linhagem HCT-116, todos os extratos apresentaram inibição superior a 90%, enquanto para as linhagens HL-60 e PC3 a menor inibição identificada foi de 80%. Em geral, não houve diferença significativa (p>0,05) no potencial antiproliferativo quando comparados os métodos de extração. Os resultados mostraram que a composição da própolis vermelha brasileira varia significativamente dependendo da origem geográfica e que o método utilizado influencia os compostos resultantes que estão presentes na própolis. No que se refere a aplicação da SFE como método extrativo, dentro dos parâmetros investigados, as melhores condições encontradas foram um S/F de 131 e o uso de etanol na maior concentração (4%), o que resultou em maiores rendimentos de extrato e maior teor de compostos antioxidantes. A formononetina, principal biomarcador da própolis vermelha, foi o composto encontrado em maiores quantidades nos extratos obtidos por SFE em todas as condições empregadas. Como esperado, as condições de temperatura e pressão também influenciaram no rendimento do processo, sendo 350 bar e 40°C as melhores condições para a obtenção de compostos bioativos a partir de uma amostra de própolis vermelha. Os novos resultados para a própolis vermelha encontrados neste estudo mostram que é possível obter extratos com alto potencial antioxidante utilizando tecnologias alternativas, bem como que a origem geográfica, o tipo de método empregado e as condições de processo influenciam na qualidade do extrato obtido. Propolis is a natural compound of wide application in the food, pharmaceutical and cosmetic areas, being a complex resin produced by bees through the mixture of exudates from different plants, wax and salivary secretions. Variations in the chemical composition, and consequently, in the biological activity of propolis extracts, are associated with many factors, such as type, geographic origin, seasonality, among others. Within this context, the objective of this study was to evaluate the influence of different extraction methods on the chemical and biological composition of red propolis extracts from different geographic origins, as well as to determine the process conditions for obtaining red propolis extracts using the technology extraction with supercritical fluid (SFE). Initially, conventional (ethanolic) and ultrasound-assisted extraction methods were used to extract active compounds from propolis from different regions of Northeastern Brazil (Sergipe, Alagoas, Bahia, and Rio Grande do Norte). Contents of phenolic compounds, flavonoids, in vitro antioxidant activity, concentration of markers (formononetin and kaempferol) and cytotoxicity to human tumor cell lines (HCT116 - human colon, HL60 - leukemia, PC3 - carcinoma of prostate and SNB19 - glioblastoma) were evaluated comparatively for the twelve extracts obtained from six different samples. Additionally, red propolis extracts were obtained by SFE from a sample from Alagoas using different process conditions. To determine the process parameters applying SFE, the Overall Extraction Curves (OEC - Overall Extraction Curves), the S/F (CO2 mass/propolis mass), the percentage of co-solvent (ethanol – 0, 1, 2 and 4%) and the global yield isotherms (GYI - Global Yield Isotherms) as a function of different pressures (250, 350 and 450 bar) and temperatures (31.7, 40 and 50°C). The total phenolic compounds, antioxidant activity and the content of formononetin, naringenin and kaempferol in the extracts obtained under different conditions (SFE) were investigated. As a result of this study, significant variations (p>0.05) were identified in the content of the compounds investigated in red propolis extracts, confirming that the chemical composition varies according to the region where the samples were collected. The highest concentration of the compounds of interest and the highest in vitro antioxidant activity were shown by extracts obtained from samples from the state of Alagoas (A1, A2, B1 and B2), which is currently the only one in Brazil that has certification of origin. The biomarkers formononetin and kaempferol were identified in all samples, regardless of origin or extraction method used. The highest concentrations of formononetin were identified in the extracts obtained by ultrasound, indicating a greater selectivity for the extraction of this compound by this method. Regarding cytotoxic activity, for the HCT-116 strain, all extracts showed inhibition greater than 90%, while for the HL-60 and PC3 strains, the lowest inhibition identified was 80%. In general, there was no significant difference (p>0.05) in the antiproliferative potential when comparing the extraction methods. The results showed that the composition of Brazilian red propolis varies significantly depending on the geographic origin and that the method used influences the resulting compounds that are present in the propolis. Regarding the application of SFE as an extractive method, within the parameters investigated, the best conditions found were a S/F of 131 and the use of ethanol in the highest concentration (4%), which resulted in higher yields of extract and higher content of antioxidant compounds. Formononetin, the main biomarker of red propolis, was the compound found in greater amounts in the extracts obtained by SFE under all conditions used. As expected, the temperature and pressure conditions also influenced the process yield, with 350 bar and 40°C being the best conditions for obtaining bioactive compounds from a red propolis sample. The new results for red propolis found in this study show that it is possible to obtain extracts with high antioxidant potential using alternative technologies, as well as that the geographic origin, the type of method used and the process conditions influence the quality of the extract obtained.