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Heart failure (HF) is a leading cause of morbidity and mortality worldwide. A small proportion of HF cases are attributable to monogenic cardiomyopathies and existing genome-wide association studies (GWAS) have yielded only limited insights, leaving the observed heritability of HF largely unexplained. We report results from a GWAS meta-analysis of HF comprising 47,309 cases and 930,014 controls. Twelve independent variants at 11 genomic loci are associated with HF, all of which demonstrate one or more associations with coronary artery disease (CAD), atrial fibrillation, or reduced left ventricular function, suggesting shared genetic aetiology. Functional analysis of non-CAD-associated loci implicate genes involved in cardiac development (MYOZ1, SYNPO2L), protein homoeostasis (BAG3), and cellular senescence (CDKN1A). Mendelian randomisation analysis supports causal roles for several HF risk factors, and demonstrates CAD-independent effects for atrial fibrillation, body mass index, and hypertension. These findings extend our knowledge of the pathways underlying HF and may inform new therapeutic strategies.

Submitted by Maria Julia Bistaffa (maria.bistaffa@unesp.br) on 2022-03-16T13:58:22Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_Maju_16marco22.pdf: 5620601 bytes, checksum: b6e897b67751942c3b85e426eaabd2a8 (MD5) Approved for entry into archive by Lucilene Cordeiro da Silva Messias null (lubiblio@bauru.unesp.br) on 2022-03-16T17:10:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 bistaffa_mj_me_bauru.pdf: 5620601 bytes, checksum: b6e897b67751942c3b85e426eaabd2a8 (MD5) Made available in DSpace on 2022-03-16T17:10:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 bistaffa_mj_me_bauru.pdf: 5620601 bytes, checksum: b6e897b67751942c3b85e426eaabd2a8 (MD5) Previous issue date: 2022-02-07 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) A fim de desenvolver terapias mais eficientes e menos invasivas no tratamento de tumores, a terapia fotodinâmica (TFD) tem ganhado destaque. Além da elucidação dos mecanismos de ação, os mecanismos subjacentes à oxidação lipídica em sistemas complexos, como as membranas plasmáticas, são importantes para eficiência da TFD. Contudo, ambos os mecanismos permanecem elusivos. Nesta dissertação de mestrado, investigamos através de filmes de Langmuir as interações moleculares que permitem a adsorção do FS eritrosina em monocamadas lipídicas e os resultados da fotooxidação subsequentes. Além disso, a eficiência fotodinâmica e os mecanismos de morte celular induzido pelo FS fotoativado em células derivadas do carcinoma de orofaringe (HEp-2) e mamário (MCF7) foram avaliados com citometria de fluxo e marcação de fluorescência. Os filmes de Langmuir foram inicialmente construídos com os fosfolipídeos 2-dioleoil-sn-glicero-3-fosfocolina (DOPC), 1,2-dioleoil-sn-glicero-3-fosfo-L-serina (DOPS) e a mistura DOPC/DOPS, mimetizando membranas plasmáticas tumorais. Em um segundo momento, as monocamadas foram construídas com o extrato lipídico extraído das células MCF7. Os efeitos fotodinâmicos nas células MCF7 foram mais pronunciados do que nas células HEp-2. Em ambos os casos, a incubação da eritrosina não irradiada, não gera efeitos citotóxicos significativos, desencadeando apoptose no cultivo in vitro a partir de 24 h incubação. Por outro lado, a viabilidade celular é significativamente reduzida sob irradiação, desencadeando o mecanismo de morte celular por necrose. Modelos inspirados na membrana tumoral baseados em monocamadas de Langmuir mistas de DOPC e DOPS revelaram que interações eletrostáticas com a cabeça dos lipídeos são as principais forças de adsorção da eritrosina. Nas monocamadas construídas com extrato lipídico da MCF7, a adsorção da eritrosina é dirigida por interações secundárias que afetam a orientação dos grupos carbonil e a organização das cadeias lipídicas. A irradiação do FS nas monocamadas induz a hidroperoxidação lipídica, que pode ainda sofrer decomposição, resultando na clivagem da cadeia de fosfolipídeos e permeabilização da membrana. De fato, a clivagem lipídica, e os subprodutos gerados, foram detectados por espectroscopia de massa, sustentando o caminho necrótico de morte celular observadas nos ensaios in vitro. In order to develop more efficient and less invasive therapies in the treatment of tumors, photodynamic therapy (PDT) has gained prominence. In addition to elucidate the mechanism of action, the subjacent mechanism of lipid oxidation in complex systems, such as plasma membranes, are important for PDT efficiency. However, both mechanisms remain elusive. In this work, the molecular interactions allowing the adsorption of the PS erythrosine and the subsequent photooxidation reactions were investigated using Langmuir films. Besides, the photodynamic efficiency and cell death mechanism induced by the photoactivated PS in cells derived from oropharyngeal (HEp-2) and mammary (MCF7) carcinomas were evaluated by flow cytometry and fluorescence labeling. Langmuir films were first built with 2-dioleoyl-sn- glycero-3-phosphocholine (DOPC) and 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phospho-L-serine (DOPS) phospholipids and the DOPC/DOPS mixture, simulating the literature regarding tumor plasma membranes. In a second step, the monolayers were built with the lipid extract from the MCF7 cells. Photodynamic effects in MCF7 cells were more pronounced than in HEp-2 cells. In both cases, the incubation of non-irradiated erythrosine does not generate significant cytotoxic effects, triggering apoptosis on in vitro culture after 24 h of incubation. On the other hand, cell viability is significantly reduced under irradiation, triggering the mechanism of cell death by necrosis. Tumor membrane models based on mixed Langmuir monolayers of DOPC and DOPS revealed that electrostatic interactions with the lipid head is the main driving forces allowing erythrosine adsorption. In monolayers built with MCF7 lipid extract, erythrosine adsorption is driven by secondary interactions that affect the orientation of carbonyl groups and the organization of lipid chains. Irradiation of FS on monolayers induces lipid hydroperoxidation, which can further undergo decomposition, resulting in phospholipid chain cleavage and membrane permeabilization. Indeed, lipid cleavage, and the by-products generated, were detected by mass spectroscopy, supporting the necrotic pathway of cell death observed in in vitro assays. CAPES-PROEX

Submitted by Mirian Feliciano da Costa (mirian.costa@unesp.br) on 2019-01-28T16:57:06Z No. of bitstreams: 1 thesis_mc280118_repositorio.pdf: 9535683 bytes, checksum: f9151cc5e8601edf956a2e97147822b5 (MD5) Approved for entry into archive by Elza Mitiko Sato null (elzasato@ibilce.unesp.br) on 2019-01-28T18:52:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 costa_mf_dr_sjrp_par.pdf: 3223444 bytes, checksum: 4f6ac8b67b4dab9d25a320f541d0c063 (MD5) Made available in DSpace on 2019-01-28T18:52:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 costa_mf_dr_sjrp_par.pdf: 3223444 bytes, checksum: 4f6ac8b67b4dab9d25a320f541d0c063 (MD5) Previous issue date: 2018-12-18 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Respirar é essencial à sobrevivência humana, tal que o trato respiratório é alvo frequente de patógenos. O Vírus Sincicial Respiratório (RSV) causa bronquiolite e pneumonia, especialmente em recém-nascidos e idosos, o que resulta em milhões de mortes e hospitalizações. Sua glicoproteína de superfície F – proteína de fusão – é responsável pela fusão do envelope viral à membrana celular. Diversos flavonoides demonstram atividade anti-RSV por meio do mecanismo virucida. Assim, os objetivos desse trabalho foram analisar a interação da proteína F modelada neste trabalho (RSVmF) com o flavonoide quercetina, seu derivado pentacetilado (Q1) e um ligante-referência (JNJ- 2408068) por docking e dinâmica molecular (DM). Ademais, elaboramos uma rede neural artificial (ANN) assessorada pelo algoritmo genético para predizer a capacidade anti- RSV de flavonoides. A modelagem da estrutura completa da proteína F, os dockings, a DM, e a ANN foram realizados, respectivamente, no servidor I-TASSER, no Auto- Dock/Vina 1.1.2., no Amber/14, e na plataforma Matlab®. Os experimentos de docking indicaram que os três ligantes preenchem a cavidade central de RSVmF e apresentam energia de interação em torno de -6,5 kcal/mol. Análises de DM revelaram tendência ao escape da cavidade para quercetina, enquanto Q1 e ligante-referência permanecem nela. Cálculos de MM-GBSA mostraram ΔG (kcal/mol) dos complexos RSVmFquercetina= -4,92, RSVmF-Q1= -14,22, e RSVmF-inibidor = -22,78. Logo, a acetilação da quercetina aumentou sua capacidade virucida por favorecer a interação com a cavidade de RSVmF. Quanto à ANN, os resultados obtidos a partir de uma amostra (n=240 dados, referentes a 70 flavonoides), indicaram três possíveis modelos de predição, dentre os quais ANN-g2 obteve uma acurácia de 90% para predição de flavonoides “ativos” e 93,3% para “inativos”. O principal ganho referente ao nosso estudo é o respaldo à relevância de um planejamento racional de procedimentos experimentais, pela exclusão preliminar de flavonoides inativos e a pré-seleção de ativos. Breathing is a basic requirement for survival of human life and the respiratory tract is therefore a frequent target for pathogens. Respiratory syncytial virus (RSV) causes bronchiolitis and pneumonia, mainly in newborns and the elderly, which results in millions of deaths and hospitalizations. Its surface glycoprotein F – fusion protein – is responsible for the fusion of the viral envelope to cell membrane. Several flavonoids were shown to exert anti-RSV activity by virucidal mechanism. Thus, the aims of this study were to analyze the interaction of the F protein modeled herein (RSVmF) in complex with flavonoid quercetin, with its pentacetylated derivative (Q1) and with a reference-ligand (JNJ-2408068), by docking and molecular dynamics (MD). Moreover, we developed an artificial neural network (ANN), assisted by the genetic algorithm to predict the anti-RSV activity of flavonoids. The modeling of the complete protein F structure, dockings, DM, and ANN were performed, respectively, on I-TASSER server, Auto-Dock/Vina 1.1.2., Amber/14, and Matlab® platform. Docking experiments indicated that the three ligands fill RSVmF central cavity and present an interaction energy of about -6.5 kcal/mol. MD analyses revealed an escaping trend from the cavity to quercetin, whereas Q1 and the reference-ligand remain in it. MM-GBSA calculations showed ΔG (kcal/mol) for the complexes RSVmF-quercetin= -4.92, RSVmF-Q1= -14.22, and RSVmF-inhibitor = - 22.78. Therefore, the acetylation of quercetin increased its virucidal activity by favoring the interaction with RSVmF cavity. ANN results were obtained from a sample (n = 240 data, regarding 70 flavonoids) and indicated three possible predictive models, among which ANN-g2 revealed an accuracy of 90% for prediction of “active” flavonoids and 93.3% for "inactive" ones. The major achievement of our study is that it has demonstrated the relevance of rational planning of experimental procedures, by the preliminary exclusion of inactive flavonoids and the pre-selection of active ones.

Submitted by Amanda de Genova Ribeiro null (amandagenova@hotmail.com) on 2018-03-07T12:11:16Z No. of bitstreams: 1 dissertação AMANDA final.pdf: 1236993 bytes, checksum: 4839b289369f6155744ea3fa197e9d33 (MD5) Rejected by Elza Mitiko Sato null (elzasato@ibilce.unesp.br), reason: Solicitamos que realize correções na submissão seguindo as orientações abaixo: Problema 01) Falta a FOLHA DE APROVAÇÃO (Obrigatório pela ABNT NBR14724) Problema 02) Falta colocar o ano na folha de rosto. Na página da Seção de pós-graduação, em Instruções para Qualificação e Defesas de Dissertação e Tese, você pode acessar o modelo das páginas pré-textuais. Lembramos que o arquivo depositado no repositório deve ser igual ao impresso. Agradecemos a compreensão on 2018-03-08T18:11:05Z (GMT) Submitted by Amanda de Genova Ribeiro null (amandagenova@hotmail.com) on 2018-03-12T02:56:18Z No. of bitstreams: 1 dissertação AMANDA final.pdf: 1238569 bytes, checksum: a9b94d1a505e2c117db6fab029c9cb5b (MD5) Approved for entry into archive by Elza Mitiko Sato null (elzasato@ibilce.unesp.br) on 2018-03-12T18:50:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 ribeiro_ag_me_sjrp_par.pdf: 323572 bytes, checksum: c140e9b3ede0830b3c1755866f0ef102 (MD5) Made available in DSpace on 2018-03-12T18:50:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ribeiro_ag_me_sjrp_par.pdf: 323572 bytes, checksum: c140e9b3ede0830b3c1755866f0ef102 (MD5) Previous issue date: 2018-02-06 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) No mundo, estima-se que exista cerca de 12 milhões de casos graves e 3 milhões de casos muito graves de infecção do trato respiratório inferior em crianças. Dentre os agentes etiológicos destas infecções, o Vírus Sincicial Respiratório Humano (hRSV) contribui para vários casos de bronquiolite, pneumonia e infecções pulmonares obstrutivas crônicas em pessoas de todas as idades, principalmente em crianças e idosos. Atualmente não existe vacinas ou medicamentos eficazes com atividade anti-hRSV. A semi-síntese a partir de moléculas naturais tem sido uma estratégia promissora na melhora da atividade biológica de compostos naturais. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade antiviral in vitro da Quercetina Penta-acetilada (QPA) em células permissivas à infecção/replicação por hRSV (HEp-2). Os ensaios antivirais foram realizados com diferentes MOIs (0.1, 0.5 e 1.0) e analisados por adição do sal de MTT e posteriormente confirmados por ensaio de placa de lise. O composto QPA apresentou atividade anti-hRSV nos protocolos virucida e de pós-tratamento. O efeito virucida de QPA foi confirmado pelos ensaios de adsorção e tempo de adição. QPA inibiu a adsorção e os ensaios de tempo de adição confirmaram que a ação de QPA se dá principalmente nas primeiras fases do ciclo viral. Por meio do ensaio de placa de lise foi possível demonstrar e confirmar que a redução do número de focos virais nos protocolos virucida e pós-tratamento foi de 50%. Nossos dados indicam que o composto QPA apresenta um promissor papel anti-hRSV, por interagir com a partícula viral e inibir sua adesão à célula. Lower respiratory tract infections are the main cause of infections in children, reaching approximately 12 million severe cases and 3 million very serious cases around the world. The human pneumovirus Respiratory Syncytial Virus (RSV) is the major pathogen found in these cases and contributes to several cases of bronchiolitis, pneumonia and chronic obstructive pulmonary infections in people of all ages, especially in infants and the elderly. There are currently no vaccines and the therapeutic strategies in use present little efficacy or restricted use. Flavonoids are the focus of several studies that seek for effective and cost-effective antiviral drugs. Quercetin, a flavonoid commonly found in the human diet, has an inhibitory activity against several types of virus, including RSV. Chemical modification of molecules has been proven as a promising strategy to improve the biological activity of natural compounds. The aim of this work was to evaluate the antiviral activity of Quercetin Pentaacetate (QPA) against RSV in culture of HEP-2 cells in different protocols. The antiviral assays were performed with different MOIs (0.1, 0.5 and 1.0), evaluated by of MTT protocol and confirmed by plaque assay. QPA showed virucidal activity against RSV Such effect was confirmed by adsorption and addition time assays. QPA presented inhibitory activity in the adsorption and addition time assays, what confirmed that its activity occurs mainly in the early phases of the viral cycle. The plaque assay confirmed that the reduction in the number of viral foci in virucidal protocols was 50%. Our data indicate that QPA possess a promising anti-RSV activity, which is suggested to be related with the interference of RSV-F fusion activity. FAPESP-14/12298-7

Submitted by Larissa Figueiredo Alves Diniz null (laridiniz6@hotmail.com) on 2018-01-16T17:16:22Z No. of bitstreams: 1 Dissertação final - Mestrado.pdf: 3539874 bytes, checksum: b840d08e2896ee08cdcaa1c535ac8ebd (MD5) Rejected by Elza Mitiko Sato null (elzasato@ibilce.unesp.br), reason: Solicitamos que realize correções na submissão seguindo as orientações abaixo: Problema 01) Falta a folha de rosto, a ordem sequencial correta: - Capa (item obrigatório - ABNT NBR14724) - Folha de rosto (item obrigatório - ABNT NBR14724) - Ficha catalográfica (item obrigatório - ABNT NBR14724) - Folha de aprovação (item obrigatório - ABNT NBR14724) Problema 02) Página 11 em branco Agradecemos a compreensão. on 2018-01-16T18:07:31Z (GMT) Submitted by Larissa Figueiredo Alves Diniz null (laridiniz6@hotmail.com) on 2018-01-17T17:35:25Z No. of bitstreams: 1 Dissertação final - Mestrado.pdf: 3531612 bytes, checksum: 2294a8661e5009346a242e70fc341276 (MD5) Rejected by Elza Mitiko Sato null (elzasato@ibilce.unesp.br), reason: Solicitamos que realize correções na submissão seguindo as orientações conforme o modelo encaminhado via e-mail. Agradecemos a compreensão. on 2018-01-18T17:15:12Z (GMT) Submitted by Larissa Figueiredo Alves Diniz null (laridiniz6@hotmail.com) on 2018-01-18T17:45:59Z No. of bitstreams: 1 Dissertação final - Mestrado.pdf: 3294202 bytes, checksum: d79848d2dedfd2458efa56b312a612c4 (MD5) Approved for entry into archive by Elza Mitiko Sato null (elzasato@ibilce.unesp.br) on 2018-01-19T12:52:28Z (GMT) No. of bitstreams: 1 diniz_lfa_me_sjrp_par.pdf: 441823 bytes, checksum: af35e461eaa46bfe31602ffe399c4947 (MD5) Made available in DSpace on 2018-01-19T12:52:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 diniz_lfa_me_sjrp_par.pdf: 441823 bytes, checksum: af35e461eaa46bfe31602ffe399c4947 (MD5) Previous issue date: 2017-12-01 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Neutrófilos são recrutados para o tecido pulmonar de pacientes acometidos por diversas doenças respiratórias. No sítio de infecção, neutrófilos secretam NETs (Neutrophil Extracellular Traps) ,fibras de DNA decoradas com proteínas nucleares, granulares e citoplasmáticas. As NETs contribuem para a captura e inativação de diversos microorganismos. Um corpo crescente de evidências tem apresentado que o acúmulo das NETs resulta em efeitos citotóxicos diretos sobre células endoteliais e epiteliais. O hRSV (human Respiratory Syncytial Virus), é a causa mais comum de doença grave do trato respiratório inferior em crianças pequenas em todo o mundo, gerando um alto número de hospitalizações e um alto custo para o sistema de saúde. Neutrófilos estimulados pela proteína F do hRSV geram NETs capazes de capturar partículas virais e assim reduzir a disseminação viral. A massiva produção de NETs causa obstrução das vias aéreas e contribui para o agravamento da doença. O presente estudo teve por objetivo avaliar os efeitos benéficos e/ou deletérios das NETs no curso da infecção pelo hRSV. Para tanto, células Hep-2 foram infectadas in vitro com diferentes inóculos de hRSV, antes ou depois de terem sido incubadas com as NETs (0.5-16 µg/mL). Células apenas infectadas apresentaram redução na taxa metabólica, intensa coloração com azul de trypan, formação de numeros e volumosos sincícios. Comparativamente, o contato das células com as NETs, antes da infeçcão viral (MOI 0.1), resultou em melhora da taxa metabólica e da viabilidade celular, acompanhadas de redução no número e dimensão dos sincícios formados. O aumento do inóculo viral (MOIs 0.5 e 1) reduziu tais efeitos benéficos. Células já infectadas e, que foram pós-tratadas com as NETs, apresentaram sincícios mais volumosos, que numericamente estavam reduzidos. O aumento na concentração das NETs (≥ 8µg/mL) agravou a mortalidade celular, o que refletiu numa redução do número e da dimensão dos sincícios formados. Análises in silico, foram favoráveis à geração de complexos proteína F/MPO e proteína F/Catapsina-G, envolvendo sítios de neutralização viral. Em resumo, nas fases precoces da infecção, onde a concentração das NETs e a carga viral estão reduzidas, há um predominante efeito benéfico das NETs, que contribui na captura do virion e na proteção de células não infectadas. A intensa geração das NETs em fases mais tardias da infecção, causa agravamento da morte celular. O detalhamento dos mecanismos envolvidos no equilibrado papel das NETs, na imunopatologia das doenças respiratórias, fornece subsídios para o desenvolvimento de estratégias terapêuticas que modulem a geração e a função das NETs no tecido pulmonar. Neutrophils are recruited into the lung tissue of patients suffering from various respiratory diseases. At the site of infection, neutrophils secrete NETs (Neutrophil Extracellular Traps), DNA fibers decorated with nuclear, granular and cytoplasmic proteins. NETs contribute to the capture and inactivation of various microorganisms. A growing body of evidence has shown that the accumulation of NETs results in direct cytotoxic effects on endothelial and epithelial cells. Human Respiratory Syncytial Virus (hRSV) is the most common cause of severe lower respiratory tract disease in young children worldwide, leading to a high number of hospitalizations and a high cost to the health system. Neutrophils stimulated by hRSV F protein generate NETs capable of capturing viral particles and thus reduce viral spread. The massive production of NETs causes obstruction of the airways and contributes to the worsening of the disease. The present study aimed to evaluate the beneficial and/or deleterious effects of NETs in the course of hRSV infection. To this end, Hep-2 cells were in vitro infected with different hRSV load, either before or after incubation with the NETs (0.5-16 μg/mL). Infected cells had a reduction in the metabolic rate, intense staining with trypan blue, number formation and large syncytia. Cell contact with NETs prior to viral infection (MOI 0.1) resulted in improved metabolic rate and cell viability, accompanied by a reduction in the number and size of the syncytia. The increase of the viral inoculum (MOIs 0.5 and 1) reduced such beneficial effects. Already infected cells, which were post-treated with the NETs, presented larger syncytia, which were numerically reduced. The increase in NET concentration (≥ 8μg/mL) worsened cellular mortality, which reflected a reduction in the number and size of the syncytia. In silico analyzes, they favored the generation of F protein/MPO and F protein/Catapsin-G complexes, involving viral neutralization sites. In summary, in the early infection stages, where NETs concentration and viral load are low, there is a predominant beneficial effect of NETs, which contributes to virion capture and protection of uninfected cells. The intense generation of NETs in later infection stages causes worsening of cell death. Detailing the mechanisms involved in the balanced role of NETs in the immunopathology of respiratory diseases provides support for the development of therapeutic strategies that modulate the generation and function of NETs in lung tissue.

Submitted by Gabriela Sterle Pereira null (gabrielasterle@gmail.com) on 2017-04-25T14:29:29Z No. of bitstreams: 1 DEFINITIVO_DISSERTAÇÃO.pdf: 2056806 bytes, checksum: 65d4f58759c69d8d4a0f2ad17846cca3 (MD5) Rejected by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo a orientação abaixo: O arquivo submetido não contém o certificado de aprovação. Corrija esta informação e realize uma nova submissão com o arquivo correto. Agradecemos a compreensão. on 2017-04-26T16:18:22Z (GMT) Submitted by Gabriela Sterle Pereira null (gabrielasterle@gmail.com) on 2017-04-26T18:59:30Z No. of bitstreams: 1 DEFINITIVO_DISSERTAÇÃO.pdf: 2056806 bytes, checksum: 65d4f58759c69d8d4a0f2ad17846cca3 (MD5) Rejected by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo a orientação abaixo: O arquivo submetido não contém o certificado de aprovação. Corrija esta informação e realize uma nova submissão com o arquivo correto. Agradecemos a compreensão. on 2017-04-26T20:18:23Z (GMT) Submitted by Gabriela Sterle Pereira null (gabrielasterle@gmail.com) on 2017-04-28T03:09:48Z No. of bitstreams: 1 DEFINITIVO_DISSERTAÇÃO_02.pdf: 2127478 bytes, checksum: 08e99fe6c34e523a9c1b1d5dac1a8035 (MD5) Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-05-03T13:35:58Z (GMT) No. of bitstreams: 1 pereira_gs_me_assis_par.pdf: 1249336 bytes, checksum: 132a4445c5f209f807222b33d87ee0a6 (MD5) Made available in DSpace on 2017-05-03T13:35:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 pereira_gs_me_assis_par.pdf: 1249336 bytes, checksum: 132a4445c5f209f807222b33d87ee0a6 (MD5) Previous issue date: 2017-03-07 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Rutina e Quercetina são flavonoides encontrados em diversos alimentos, incluindo aqueles indicados como complemento no tratamento de doenças inflamatórias. Durante o processo inflamatório, neutrófilos são as primeiras células a serem recrutadas por estarem diretamente relacionadas à ativação e resolução destes processos. Assim, frequentemente estas células são alvos para novos compostos anti-inflamatórios. A descrição da atividade anti-inflamatória de rutina e quercetina se estende para vários ativadores das vias clássicas dos neutrófilos. O estudo quanto aos compostos forbol ésteres, como PMA (phorbol myristate acetate), que ativam de maneira específica a sinalização da proteína quinase C, ainda são escassos.O objetivo deste trabalho foi analisar a atividade anti-inflamatória de rutina e quercetina sobre neutrófilos ativados por PMA. Para tanto, foram analisadas etapas importantes do processo inflamatório mediadas pelos neutrófilos: adesão, desgranulação, e liberação das NETs (Neutrophil Extracelular Traps). Nossos resultados demonstraram que, ativação de neutrófilos por PMA: (i) rutina e quercetina não inibem a adesão dos neutrófilos, (ii) quercetina inibe a desgranulção, (iii) ambos inibem a atividade da mieloperoxidase (MPO), assim como (iv) inibem a liberação das NETs na ausência de morte celular. Análises de docking molecular sugerem que tais eventos podem estar relacionados à geração de complexos quercetina/MPO e rutina/elastase. Rutin and Quercetin are flavonoids found in several foods, including those indicated as a supplement in the inflammatory treatment diseases. During the inflammatory process, neutrophils are the first cells to be recruited. They are directly related to the activation and resolution of these processes. Thus, these cells often target new anti-inflammatory compounds. The description of the anti-inflammatory activity of rutin and quercetin extends to several activators of classical neutrophil pathways. Studies involving forbol esters compounds, as PMA ((phorbol myristate acetate), which activate in a specific manner the protein kinase signalling, it is still poor. The aim of this study was to analyze the anti-inflammatory activity of rutin and quercetin on PMA-activated neutrophils. For this, important steps of the inflammatory process mediated by neutrophils were analyzed: adhesion, degranulation, and release of NETs (Neutrophil Extracelular Traps). Our results demonstrated that neutrophil activation by PMA: (i) rutin and quercetin did not inhibit neutrophil adhesion, (ii) quercetin inhibited degranulation, (iii) both inhibited myeloperoxidase activity (MPO), as well as (iv) both Inhibit the release of NETs in the absence of cell death. Molecular docking analyzes suggest that such events may be related to the generation of quercetin/MPO and rutin/elastase complexes.

Submitted by pryca_potter@hotmail.com (pryca_potter@hotmail.com) on 2017-04-05T20:00:28Z No. of bitstreams: 1 DissertaçãoMestradoPriscilaVersãoDefinitiva.pdf: 3764264 bytes, checksum: 951a47d85b80676e426a40b6155e9fdc (MD5) Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-04-12T18:13:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 souza_psp_me_sjrp_par.pdf: 773455 bytes, checksum: 28ab6b007f698fd16b35788070f11e95 (MD5) Made available in DSpace on 2017-04-12T18:13:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 souza_psp_me_sjrp_par.pdf: 773455 bytes, checksum: 28ab6b007f698fd16b35788070f11e95 (MD5) Previous issue date: 2017-03-03 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) O Vírus Sincicial Respiratório Humano (hRSV) atua como um dos principais agentes etiológicos das mais de 15 milhões de infecções do trato respiratório inferior em crianças e idosos anualmente. A despeito de décadas de inúmeras pesquisas em busca de compostos anti-hRSV, atualmente não existem vacinas ou medicamentos eficazes contra esta infecção viral. Dentre os leucócitos presentes nas vias aéreas de indivíduos acometidos por hRSV, os neutrófilos são predominantes e se mostram em estado de ativação, incluindo a indução da liberação das NETs. As NETs, compostas por DNA e proteínas granulares/nucleares tem sido descritas como eficientes na captura e eliminação de diversos microrganismos. Em relação ao hRSV, o vírus induz a liberação das NETs no tecido pulmonar de indivíduos infectados, mas as consequências desse evento ainda não foram elucidadas. O objetivo deste trabalho foi investigar se as NETs possuem algum efeito anti-hRSV. Para tanto, foram realizados ensaios in vitro e in silico. NETs geradas a partir do estímulo com PMA e avaliadas por eletroforese apresentaram longos fragmentos de DNA e proteínas de peso molecular próximos daqueles determinados para elastase, catepsina G, mieloperoxidase e histonas. As NETs apresentaram índices de citotoxicidade celular abaixo de 50%, com uma CC50 >67μg/mL. Ensaio virucida realizado com diferentes MOIs (0.1, 0.5 e 1.0), mostraram eficiência das NETs (CE50 ≅ 1 e IS ≅ 66). As interações obtidas in silico demonstram forte interação entre as proteínas elastase e histonas com a proteína F-hRSV, pré e pós-fusão, em regiões importantes para a infecção/replicação do vírus. Os dados obtidos indicam que as NETs tem um promissor papel antiviral e este efeito pode estar relacionado à sua ação direta na captura de partículas virais e/ou na interferência da atividade de fusão da proteína F. Em conclusão, nossos resultados associados a dados prévios da literatura, apontam que o contato do hRSV com os neutrófilos induz a liberação das NETs e que estas agem na neutralização do vírus. Annualy the Human Respiratory Syncytial Virus (hRSV) acts as one of the main etiological agents of more than 15 million infections in the lower respiratory tract of children and elderly. Despite decades of extensive research in search of anti-hRSV compounds, there are currently no vaccines or effective drugs against this viral infection. Among the present leukocytes in the airways of individuals affected by hRSV, the neutrophils are predominant and are shown in activation state, including the induction of the release of NETs. NETs, composed by DNA and glanular/nuclear proteins have been described as efficient in capturing and eliminating several microorganisms. Regarding hRSV, the virus induces the release of NETs in the lung tissue of infected individuals, but the consequences of this event have not yet been elucidated. The goal of this study was to investigate whether the NETs have some anti-hRSV effect. For that purpose, assays were performed in vitro and in silico. NETs generated from the stimulation with PMA and evaluated by electrophoresis showed long DNA fragments and proteins of molecular weight close to those determined for elastase, cathepsin G, myeloperoxidase, and histones. The NETs presented cellular cytotoxicity indices below 50%, with CC50 >67μg/mL. Virucide assay performed with different MOIs (0.1, 0.5 and 1.0), showed efficiency of the NETs (CE50 ≅ 1 and IS ≅ 66). The interactions obtained in silico demonstrate strong interaction between elastase and histone proteins with the F-hRSV protein, pre and postfusion, in important regions for the infection/replication of the virus. The data obtained up to date indicate that the NETs have a promising antiviral role and this effect may be related to its direct action in the capture of viral particles and/or interference of the fusion activity of F protein. In conclusion, our results associated with previous literature data, indicate that the contact of the hRSV with neutrophils induces the release of NETs and that these act in the neutralization of the virus.

Submitted by BRUNO RAFAEL PEREIRA LOPES null (brunorpl@hotmail.com) on 2016-05-11T19:53:59Z No. of bitstreams: 1 Dissertação versão repositório.pdf: 7264895 bytes, checksum: 0ac82b804ba7471cb20cb92afa6c4d3f (MD5) Rejected by Felipe Augusto Arakaki (arakaki@reitoria.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: O arquivo submetido está sem a folha de aprovações providenciada pela Pós-graduação. Lembramos que a versão submetida por você é considerada a versão final da dissertação/tese, portanto não poderá ocorrer qualquer alteração em seu conteúdo após a aprovação. Corrija esta informação e realize uma nova submissão contendo o arquivo correto. Agradecemos a compreensão. on 2016-05-13T16:24:02Z (GMT) Submitted by BRUNO RAFAEL PEREIRA LOPES null (brunorpl@hotmail.com) on 2016-05-16T19:16:16Z No. of bitstreams: 1 Dissertação numerado FINAL Capa Dura versão folha de aprovação.pdf: 7936969 bytes, checksum: b93b6e0c25c357b92f65cec6ffb9e789 (MD5) Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2016-05-18T13:48:58Z (GMT) No. of bitstreams: 1 lopes_brp_me_assis.pdf: 7936969 bytes, checksum: b93b6e0c25c357b92f65cec6ffb9e789 (MD5) Made available in DSpace on 2016-05-18T13:48:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 lopes_brp_me_assis.pdf: 7936969 bytes, checksum: b93b6e0c25c357b92f65cec6ffb9e789 (MD5) Previous issue date: 2016-03-16 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) No mundo, estima-se que exista cerca de 12 milhões de casos graves e 3 milhões de casos muito graves de infecção do trato respiratório inferior em crianças anualmente. Dentre os agentes etiológicos destas infecções, o vírus sincicial respiratório humano (hRSV) é a principal causa de internações infantis em países desenvolvidos, agravando os casos de bronquiolite, pneumonia e infecções pulmonares obstrutivas crônicas em pessoas de todas as idades, principalmente crianças e idosos. Estudos preliminares demonstraram que a Quercetina possui ação virucida sobre hRSV, além de inibir sua replicação. Entretanto, não se tem conhecimento do quão promissora é a atividade antiviral de Quercetina sobre o vírus hRSV ou mesmo se esta atividade poderia ser melhorada através de mudanças químicas em sua estrutura molecular. Assim, o objetivo deste trabalho foi estabelecer o índice de seletividade (IS) para Quercetina e seus derivados acetilados durante a infeção por hRSV através de ensaios in vitro. A análise de viabilidade celular através da adição do sal de MTT determinou os valores de CC50 para Quercetina na presença/ausência do vermelho de fenol (85 e 11,4 µM, respectivamente). Dentre as condições testadas, Quercetina apresentou atividade virucida (16-30% de proteção celular) sem apresentar efeitos no pré ou pós-tratamentos. Os valores de CC50 dos compostos derivados Q1 e Q2 foram 37,1 µM e 53,15 µM, respectivamente. O composto Q1 apresentou atividade anti-hRSV nos protocolos virucida e pós-tratamento (60-90%; 4-8 µM). O composto Q2 não apresentou atividade anti-hRSV relevante em nenhuma das condições testadas. A proteção celular apresentada pela Quercetina não possibilitou o cálculo de IS (CC50/CE50) o que nos sugere que este composto não seja um promissor agente anti-hRSV. Os índices de Seletividade calculados para o composto Q1 nos protocolos virucida e pós-tratamento foi de 9,27. O conjunto de resultados obtidos neste trabalho apresenta menor citotoxicidade e melhor performance anti-hRSV do composto Q1 em relação à Quercetina comercial. Estes dados nos estimulam a dar continuidade aos estudos do composto Q1 com o intuito de melhorarmos sua atividade antiviral e assim propormos um novo composto que seja efetivos na prevenção e/ou tratamento das infecções por hRSV. Worldwide, is estimated that there are about 12 million serious cases and 3 million severe cases of lower respiratory tract infection in children every year. Among the etiological agents of these infections, respiratory syncytial virus (hRSV) is the leading cause of children's hospitalizations in developed countries, aggravating cases of bronchiolitis, pneumonia and chronic obstructive pulmonary infections in people of all ages, especially children and the elderly. Preliminary studies demonstrated that Quercetin has virucidal action on hRSV, and inhibits replication. However, we do not know how promising is the antiviral activity of Quercetin on the hRSV. The objectives of this work is to understand the action of Quercetin and some of its derivatives acetylated on the steps of the replicative cycle of hRSV, determining the selectivity index for each compound. The development of this project will assist in the search for effective compounds in the prevention and/or treatment of hRSV infections. In the cytotoxicity assays, Quercetin showed CC50 values variable depending on the presence/absence of phenol red (11.4 and 85 μM respectively). Among the concentrations tested Quercetin only showed a slight virucidal activity (16-30% concentration 5-10 μM). The CC50 values were derived compounds 37.1 μM for Q1 and Q2 to 53.15 μM. Compound Q1 showed anti-hRSV activity in virucidal and post-treatment protocol (60-90% at 4-8 μM). The Q2 compound showed no anti-hRSV relevant activity. The presence or absence of phenol red had great influence in determining the CC50 values of Quercetin (11.4 μM and 85 μM with phenol red). In addition, Quercetin showed little (virucidal protocol without phenol) or no anti-hRSV activity. Thus it has not been possible to establish the EC50 of Quercetin and determine its selectivity index (SI). The Q1 compound showed a greater CC50 value (37.1 μM) and relevant anti-hRSV activity in post-treatment and virucidal protocols (SI 9.27). Among the compounds tested, Q2 showed the highest value of CC50 (53.15 μM without phenol) however, had little or no anti-hRSV activity, making it impossible to determine their SI.

Made available in DSpace on 2015-07-13T12:10:18Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-27. Added 1 bitstream(s) on 2015-07-13T12:25:27Z : No. of bitstreams: 1 000834664_20170227.pdf: 320546 bytes, checksum: 4725e11d30032eb48947da17b2712fbb (MD5) Bitstreams deleted on 2017-03-03T11:01:30Z: 000834664_20170227.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2017-03-03T11:02:39Z : No. of bitstreams: 1 000834664.pdf: 2824361 bytes, checksum: e197c8e5e072c3f2488fffcf302fda2d (MD5) O látex natural (NRL) extraído da árvore seringueira Hevea brasiliensis é um sistema coloidal composto pelo polímero cis-1,4-poliisopreno. Quando centrifugado ocorre a separação das proteínas relacionadas às reações alérgicas, porém permanecem as proteínas relacionadas à atividade angiogênica que este material tem apresentado. Suas aplicações biológicas têm crescido devido à atividade angiogênica e por apresentar baixo custo e fácil processamento. Dentre suas aplicações pode-se citar a liberação de compostos ativos (fármacos, extratos, nanopartículas, entre outros), uso como emplasto (acelerando a cicatrização de úlceras crônicas), prótese vascular, etc. Também tem sido utilizada como barreira mecânica na regeneração óssea guiada (GBR), mostrando-se eficiente e acelerando a cicatrização óssea. Desta forma, este trabalho se baseou em testar a citotoxicidade das membranas de látex natural; produzir membranas com diferentes porosidades; avaliar a adesão de pré-osteoblastos; testar a mineralização celular na membrana com maior porosidade. A citotoxicidade foi avaliada segundo a norma técnica ISO 10993-5 (pelo teste de extração do material); as membranas foram elaboradas segundo a técnica de separação de fases induzida termicamente (TIPS) a fim de proporcionar porosidade nas membranas e caracterizadas por microscópio eletrônico de varredura com energia dispersiva de raio-X (MEV-EDS), espectroscopia no infravermelho (FTIR-ATR) e resistência a tração; a adesão e morfologia celular da célula MC3T3-E1 subclone 14 foi avaliada pelo MEV e microscopia óptica; a mineralização foi avaliada por MTT, MEV-EDS, FTIR-ATR, vermelho de alizarina S, von Kossa e fosfatase alcalina. A membrana foi tóxica para o extrato na concentração de 100%, porém nas concentrações abaixo de 80% já não apresentava toxicidade. Todas as membranas continham irregularidades em sua... The natural rubber latex (NRL) extracted from the rubber tree Hevea brasiliensis is a colloidal system composed of cis-14-polyisoprene polymer. The centrifugation separates the proteins related to allergic reactions, preserving the proteins related to angiogenic activity presented by this material. Their biological applications have grown due to the angiogenic activity and due to its low cost and easy handling. Among its applications, one can mention the release of active compounds (drugs, extracts, nanoparticles, etc.), use as a wound dressing (accelerating the healing of chronic ulcers), vascular prosthesis, etc. It has also been used as a mechanical barrier in guided bone regeneration (GBR), being efficient and accelerating bone healing. Thus, this work aimed a cytotoxicity test of natural rubber latex membrane; producing membranes with different porosities; and assess the adherence of pre-osteoblasts; a mineralization test in the membrane with higher porosity. Cytotoxicity was tested according to the standard ISO 10993-5; the membranes were produced by thermally induced phase separation (TIPS) to provide porosity in the membranes and characterized by scanning electron microscopy with energy dispersive X-ray (SEM-EDS), infrared spectroscopy (FTIR-ATR ) and tensile strength; cell adhesion and morphology of MC3T3-E1 cell subclone 14 was evaluated by SEM-EDS and optical microscopy; mineralization was assessed by MTT, SEM-EDS, FTIR-ATR, alizarin red S, von Kossa staining, and alkaline phosphatase. The membrane was toxic to extract at concentration of100%, but at concentration lower than 80% no longer showed toxicity. All membranes presented irregularities on its surface, with porosity only in those produced at -10°C to -20°C, the latter with higher pores and was tested for mineralization. FTIR-ATR showed no change in the functional groups due to processing and the tensile test showed a typical...

Made available in DSpace on 2015-07-13T12:10:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-19. Added 1 bitstream(s) on 2015-07-13T12:25:41Z : No. of bitstreams: 1 000837500.pdf: 577898 bytes, checksum: 89b9ba7b17de0ecc58ba5c8cb232754d (MD5) A família Myrtaceae vem sendo estudada quanto ao seu potencial na regulação da menstruação, dor, desordens intestinais, infertilidade, nas suas atividades antifúngica, purgativa e anticâncer, no tratamento de resfriados, tosse e em outras afecções do trato respiratório. Em meio a seus membros, as espécies de Eugenia spp., ricas em compostos fenólicos, parecem apresentar efeitos pró e anti-inflamatórios quando testados in vivo e in vitro. Dentre as células atuantes de forma pioneira na inflamação, estão os neutrófilos. Eles são um alvo de estudo no controle de processos inflamatórios agudos e crônicos, por meio da elucidação de como substâncias agem, por exemplo, nas diferentes etapas de seu recrutamento. Assim, o objetivo principal deste trabalho foi avaliar o potencial efeito anti-inflamatório do extrato hidroetanólico de folhas de Eugenia aurata - EA e Eugenia punicifolia - EP, sobre atividades neutrofílicas. Foram avaliados os processos de adesão e desgranulação celular e a geração das armadilhas extracelulares neutrofílicas (NETs- Neutrophil Extracellular Traps) em neutrófilos humanos. Os resultados mostram que o EA inibe o processo de adesão, enquanto que o EP, a desgranulação, e, ademais, ambos inibem a liberação de DNA (NET), na ausência de efeito citotóxico. Tais resultados corroboram o uso desses extratos na medicina popular. Além disso, sugerem seu potencial no desenvolvimento de medicamentos fitoterápicos com propriedades anti-inflamatórias Myrtaceae family has been studied for its potential in regulating menstruation, pain and intestinal disorders, infertility, as well as antifungal, purgative and anticancer agent, and in addition to treat colds, cough and other respiratory ailments. Amid its members, Eugenia spp species appear to have pro and anti-inflammatory effect once examined in vivo and in vitro. Among the first cells which act on inflammation site, there are the neutrophils. They are a matter of study in the controlling of acute and chronic inflammatory processes, through elucidation of how substances act, for example, in different steps of their recruitment. Therefore, the main aim of this study was to evaluate the potential anti-inflammatory effect of hydroethanolic extract of Eugenia aurata leaves - EA and Eugenia punicifolia - EP, on neutrophil activities. We evaluated the adhesion process and cell degranulation, as well NETs (Neutrophil Extracellular Traps NETs) generation in human neutrophils. The results show that EA inhibits adhesion, while EP degranulation, and further, both inhibit the release of DNA (NET), in the absence of cytotoxic effect. These results give support to the use of these extracts in the popular medicine. Furthermore, they demonstrate a potential of both extracts for the development of phytomedicines with anti-inflammatory properties