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This is an open-access article distributed under the terms of the Creative Commons Attribution License.-- et al., CD5 is a lymphoid-specific transmembrane glycoprotein constitutively expressed on thymocytes and mature T and B1a lymphocytes. Current data support the view that CD5 is a negative regulator of antigen-specific receptor-mediated signaling in these cells, and that this would likely be achieved through interaction with CD5 ligand/s (CD5L) of still undefined nature expressed on immune or accessory cells. To determine the functional consequence of loss of CD5/CD5L interaction in vivo, a new transgenic mouse line was generated (shCD5EμTg), expressing a circulating soluble form of human CD5 (shCD5) as a decoy to impair membrane-bound CD5 function. These shCD5EmTg mice showed an enhanced response to autologous antigens, as deduced from the presentation of more severe forms of experimentally inducible autoimmune disease (collagen-induced arthritis, CIA; and experimental autoimmune encephalitis, EAE), as well as an increased antitumoral response in non-orthotopic cancer models (B16 melanoma). This enhancement of the immune response was in agreement with the finding of significantly reduced proportions of spleen and lymph node Treg cells (CD4+CD25+FoxP3+), and of peritoneal IL-10-producing and CD5+ B cells, as well as an increased proportion of spleen NKT cells in shCD5EμTg mice. Similar changes in lymphocyte subpopulations were observed in wild-type mice following repeated administration of exogenous recombinant shCD5 protein. These data reveal the relevant role played by CD5/CD5L interactions on the homeostasis of some functionally relevant lymphocyte subpopulations and the modulation of immune responses to autologous antigens., This study was supported by grants from the Spanish Ministerio de Economía y Competitividad [Plan Nacional de I+D+i, SAF2010-19717], Generalitat de Catalunya [2009SGR1101], and Instituto de Salud Carlos III [Spanish Network for Research in Infectious Diseases, REIPI RD12/0015/0018] to FL, from Spanish Ministerio de Economía y Competitividad [SAF2011-22463], co-funded by the European Regional Development Fund, to RM, from Ministerio de Economía y Competitividad [SAF2012-34059], co-funded by the European Regional Development Fund, and the Spanish Ministerio de Economía y Competitividad (IPT2011-1527-010000) associated to Fibrostatin SL, to JM, and from NIH AI1076562 and National Multiple Sclerosis Society RG3891 to CR. MM-F and VGM are recipients of fellowships from Agència de Gestió d’Ajuts Universitaris i de Recerca (AGAUR) of the Generalitat de Catalunya [2010TEM37] and from Spanish Ministerio de Economía y Competitividad [JCI-2010-06378], respectively.

Contains fulltext : 135923.pdf (Publisher’s version ) (Open Access) BACKGROUND: The impact of immunosuppression despite virological suppression (immuno-virological discordance, ID) on the risk of developing fatal and non-fatal AIDS/non-AIDS events is unclear and remains to be elucidated. METHODS: Patients in EuroSIDA starting at least 1 new antiretroviral drug with CD4500 copies/mL were followed-up from the first day of VL< = 50 copies/ml until a new fatal/non-fatal non-AIDS/AIDS event. Considered non-AIDS events included non-AIDS malignancies, pancreatitis, severe liver disease with hepatic encephalopathy (>grade 3), cardio- and cerebrovascular events, and end-stage renal disease. Patients were classified over time according to whether current CD4 count was above (non-ID) or below (ID) baseline level. Relative rates (RR) of events were calculated for ID vs. non-ID using adjusted Poisson regression models. RESULTS: 2,913 patients contributed 11,491 person-years for the analysis of non-AIDS. 241 pre-specified non-AIDS events (including 84 deaths) and 89 AIDS events (including 10 deaths) occurred. The RR of developing pre-specified non-AIDS events for ID vs. non-ID was 1.96 (95% CI 1.37-2.81, p

Background: Interferon-beta (IFN-beta) activates the immune response through the type I IFN signaling pathway. IFN-beta is important in the response to pathogen infections and is used as a therapy for Multiple Sclerosis. The mechanisms of self-regulation and control of this pathway allow precise and environment-dependent response of the cells in different conditions. Here we analyzed type I IFN signaling in response to IFN-beta in the macrophage cell line RAW 264.7 by RT-PCR, ELISA and xMAP assays. The experimental results were interpreted by means of a theoretical model of the pathway. Results: Phosphorylation of the STAT1 protein (pSTAT1) and mRNA levels of the pSTAT1 inhibitor SOCS1 displayed an attenuated oscillatory behavior after IFN-beta activation. In turn, mRNA levels of the interferon regulatory factor IRF1 grew rapidly in the first 50–90 minutes after stimulation until a maximum value, and started to decrease slowly around 200–250 min. The analysis of our kinetic model identified a significant role of the negative feedback from SOCS1 in driving the observed damped oscillatory dynamics, and of the positive feedback from IRF1 in increasing STAT1 basal levels. Our study shows that the system works as a biological damped relaxation oscillator based on a phosphorylation-dephosphorylation network centered on STAT1. Moreover, a bifurcation analysis identified translocation of pSTAT1 dimers to the nucleus as a critical step for regulating the dynamics of type I IFN pathway in the first steps, which may be important in defining the response to IFN-beta therapy. Conclusions: The immunomodulatory effect of IFN-beta signaling in macrophages takes the form of transient oscillatory dynamics of the JAK-STAT pathway, whose specific relaxation properties determine the lifetime of the cellular response to the cytokine. This work was supported by the EU 6FP ComplexDis project (NEST-043241), the EU 7FP – Marie Curie initial training network UEPHA*MS (ITN-212877) and Fundacion Cellex to PV; by the Spanish network of excellence in MS of the Instituto de Salud Carlos III, Spain to PV and JGO (RD07/0060) and by the Fundación Mutua Madrileña to PV and JGO; by a grant of the Ministerio de Economia y Competitividad and Fondo Europeo de Desarrollo Regional (Spain, project FIS2012-37655) and by the ICREA Academia program to JGO

Poxviruses encode a large variety of proteins that mimic, block or enhance host cell signaling pathways on their own benefit. It has been reported that mitogen-activated protein kinases (MAPKs) are specifically upregulated during vaccinia virus (VACV) infection. Here, we have evaluated the role of the MAPK negative regulator dual specificity phosphatase 1 (DUSP1) in the infection of VACV. We demonstrated that DUSP1 expression is enhanced upon infection with the replicative WR virus and with the attenuated VACV viruses MVA and NYVAC. This upregulation is dependent on early viral gene expression. In the absence of DUSP1 in cultured cells, there is an increased activation of its molecular targets JNK and ERK and an enhanced WR replication. Moreover, DUSP1 knock-out (KO) mice are more susceptible to WR infection as a result of enhanced virus replication in the lungs. Significantly, MVA, which is known to produce non-permissive infections in most mammalian cell lines, is able to grow in DUSP1 KO immortalized murine embryo fibroblasts (MEFs). By confocal and electron microscopy assays, we showed that in the absence of DUSP1 MVA morphogenesis is similar as in permissive cell lines and demonstrated that DUSP1 is involved at the stage of transition between IVN and MV in VACV morphogenesis. In addition, we have observed that the secretion of pro-inflammatory cytokines at early times post-infection in KO mice infected with MVA and NYVAC is increased and that the adaptive immune response is enhanced in comparison with WT-infected mice. Altogether, these findings reveal that DUSP1 is involved in the replication and host range of VACV and in the regulation of host immune responses through the modulation of MAPKs. Thus, in this study we demonstrate that DUSP1 is actively involved in the antiviral host defense mechanism against a poxvirus infection., Author Summary Phosphorylation is a post-translational modification that is highly conserved throughout the animal kingdom. Viruses have evolved to acquire their own kinases and phosphatases and to be able to modulate host phosphorylation mechanisms on their benefit. DUSP1 is an early induced gene that belongs to the superfamily of Dual-specificity phosphatases and provides an essential negative feedback regulation of MAPKs. DUSP1 is involved in innate and adaptive immune responses against different bacteria and parasites infections. The use of Knock-out technology has allowed us to understand the role of DUSP1 in the context of VACV infection both in cultured cells and in the in vivo mouse model. Here, we have showed that DUSP1 expression is upregulated during VACV infection and that DUSP1 plays an important role in VACV replication. Interestingly, we have demonstrated that the VACV attenuated virus MVA is able to grow in immortalized murine embryo fibroblasts in the absence of DUSP1. In vivo results showed that VACV replication-competent WR pathogenesis is enhanced in the absence of DUSP1. Furthermore, we have demonstrated that DUSP1 is involved in the host innate and adaptive responses against VACV. Altogether, we have presented a novel role for DUSP1 in VACV replication and anti-VACV host immune response.

En los enfermos sometidos a TH, se han descrito anormalidades cardiovasculares funcionales y estructurales que carecen de impacto clínico mientras los pacientes están en reposo. Cuando se impone un estrés considerable al sistema cardiovascular, como la exclusión vascular y reperfusión del injerto, se puede hacer evidente una disfunción miocárdica latente y se pueden presentar complicaciones cardiacas graves. Estas complicaciones pueden persistir durante el postoperatorio y modificar la sobrevida del paciente. 1) Hipótesis En los pacientes cirróticos, una respuesta ventricular inadecuada al estrés hemodinámico generado por la reperfusión del injerto se correlaciona con las complicaciones cardiovasculares postoperatorias. En los pacientes con polineuropatía amiloidótica familiar (PAF), la preservación de la vena cava durante el explante hepático, permite evitar el uso de bypass veno -venoso sin provocar cambios hemodinámicos severos durante la hepatectomía. 2) Objetivos: -Evaluar la respuesta hemodinámica durante el TH y las complicaciones cardiovasculares en dos indicaciones de TH: la cirrosis hepática y la PAF. 3) Pacientes y métodos: a) Cirrosis Hepática Se analizaron 235 pacientes. Se registraron variables preoperatorias, intra y postoperatorias. Se definió la existencia de respuesta ventricular inadecuada a la reperfusión del injerto calculando el incremento en el volumen sistólico indexado. Los pacientes fueron asignados a uno de dos grupos para el análisis: respondedores y no respondedores. b) Polineuropatía Amiloidótica Familiar Se analizaron 36 pacientes. Se registraron variables preoperatorias, intra y post-operatorias. Los pacientes fueron asignados a uno de dos grupos para el análisis: clásica con bypass v-v y con preservación de vena cava. 4) Resultados: El 35,7% de los pacientes cirróticos sometidos a TH fueron no respondedores a la reperfusión del injerto. El índice de resistencia vascular sistémica (OR: 3,09, IC 95%: 1,15- 4,82, p=0,027) y el diámetro auricular izquierdo (OR:2,08, IC 95%: 1,49-2,74, p=0,044), son predictores independientes asociados con respuesta ventricular inadecuada después de la reperfusión del injerto. En el análisis univariado se evidenció que existe asociación entre ser no respondedor y la presentación de complicaciones cardiovasculares mayores en el postoperatorio inmediato (OR:2,84, IC 95%: 1,04-4,22, p=0,039). La sobrevida al año fue similar para respondedores y no respondedores. En los pacientes con PAF, el tiempo transcurrido entre el diagnóstico de la PAF y la realización del TH fue de 3,2 ± 2,7 años. La disfunción autonómica y el compromiso cardiaco estaban presentes en el 71% y el 69% respectivamente. El tiempo quirúrgico y el tiempo de isquemia total fueron mayores en el grupo de técnica clásica con soporte de bypass veno-venoso (p≤0,05). La presentación de eventos cardiovasculares menores y el tiempo de estancia en UCI fueron similares en ambos grupos. La supervivencia global uno, tres y cinco años post-TH, fue de 95%, 93% y 93% respectivamente, sin diferencias entre los grupos. 5) Conclusiones: 1. La presencia de disfunción cardiaca latente está en uno de cada tres pacientes cirróticos sometidos a TH. 2. Los pacientes cirróticos con respuesta ventricular inadecuada al estrés de la reperfusión del injerto presentan un mayor número de complicaciones cardiovasculares en el postoperatorio inmediato del TH. 3. La técnica de exclusión vascular utilizada para la realización del explante en los pacientes con PAF, no se asocia a diferencias en el comportamiento hemodinámico, ni en la hepatectomía ni en la reperfusión del injerto. 4. En los pacientes con PAF, los cambios hemodinámicos severos y el requerimiento de fármacos vasoactivos se presentan desde el inicio del procedimiento anestésico-quirúrgico, previo al clampaje de los grandes vasos. La técnica de exclusión vascular no se relaciona con la presentación de eventos cardiovasculares ni con la aparición de disfunción renal el postoperatorio inmediato., Patients who have undergone liver transplantation (LT) have structural and functional cardiovascular abnormalities which have no clinical impact while patients are at rest. When stress is placed on cardiovascular system it can result in severe cardiac complications. These complications may affect postoperative patient survival. 1) Hypothesis -Patients who undergo LT because of cirrhosis have poor cardiovascular responses to hemodynamic stress generated by graft reperfusion, which are correlated with postoperative cardiac complications. -Vena cava preservation during removal of explant from Familial Amiloidotic Polyneuropathy (FAP) patients allows surgeons to avoid use of veno-venous bypasses without causing severe hemodynamic changes during hepatectomies. 2) Objectives - Evaluate hemodynamic response and cardiovascular complications during LT, for patients with cirrhosis and patients with FAP. 3) Patients and methods -235 cirrhotic patients were analyzed. Preoperative, intraoperative and postoperative were analyzed. Patients were assigned to one of two groups for analysis: responders and non-responders. -36 FAP patients were analyzed. Preoperative, intraoperative and postoperative variables were analyzed. Patients were assigned to one of two groups for analysis: vena cava preservation technique or classic technique with bypass vv. 4) Results - 35.7% of cirrhotic patients who underwent LT were non-responders to graft reperfusion. - Systemic vascular resistance index and left atrial diameter were independent predictors of inadequate ventricular response following graft reperfusion. One-year survival rates were similar between groups. - Regarding FAP patients, time elapsed between FAP diagnoses and performance of LT was 3.2 ± 2.7 years. Overall one-year survival was 95%, three and five year survival rates were both 93%. Surgical and ischemia times were longer in the group with venovenous bypasses (p ≤ 0,05). 5) Conclusions 1. Latent cardiac dysfunction is present in one of every three cirrhotic patients with endstage liver disease who undergo LT. 2. Vascular exclusion technique used for the explant is not associated with hemodynamic differences in FAP patients during LT neither during hepatectomy nor graft reperfusion.

17 páginas, 7 tablas, 12 figuras, Background: Turbot (Scophthalmus maximus L.) is an important aquacultural resource both in Europe and Asia. However, there is little information on gene sequences available in public databases. Currently, one of the main problems affecting the culture of this flatfish is mortality due to several pathogens, especially viral diseases which are not treatable. In order to identify new genes involved in immune defense, we conducted 454-pyrosequencing of the turbot transcriptome after different immune stimulations. Methodology/Principal Findings: Turbot were injected with viral stimuli to increase the expression level of immune-related genes. High-throughput deep sequencing using 454-pyrosequencing technology yielded 915,256 high-quality reads. These sequences were assembled into 55,404 contigs that were subjected to annotation steps. Intriguingly, 55.16% of the deduced protein was not significantly similar to any sequences in the databases used for the annotation and only 0.85% of the BLASTx top-hits matched S. maximus protein sequences. This relatively low level of annotation is possibly due to the limited information for this specie and other flatfish in the database. These results suggest the identification of a large number of new genes in turbot and in fish in general. A more detailed analysis showed the presence of putative members of several innate and specific immune pathways. Conclusions/Significance: To our knowledge, this study is the first transcriptome analysis using 454-pyrosequencing for turbot. Previously, there were only 12,471 EST and less of 1,500 nucleotide sequences for S. maximus in NCBI database. Our results provide a rich source of data (55,404 contigs and 181,845 singletons) for discovering and identifying new genes, which will serve as a basis for microarray construction, gene expression characterization and for identification of genetic markers to be used in several applications. Immune stimulation in turbot was very effective, obtaining an enormous variety of sequences belonging to genes involved in the defense mechanisms.

Previous studies in young rats reported the impact of cocoa intake on healthy immune status and allow suggesting it may have a role in the prevention of some immune-mediated diseases. The aim of this study was to ascertain the effect of a cocoa diet in a model of allergy in young rats. Three-week-old Brown Norway rats were immunized by i.p. injection of ovalbumin (OVA) with alum as adjuvant and Bordetella pertussis toxin. During the next 4 weeks rats received either a cocoa diet (containing 0.2% polyphenols, w/w) or a standard diet. Animals fed a standard diet showed high concentrations of anti-OVA IgG1, IgG2a, IgG2b and high anti-OVA IgE titres, which is the antibody involved in allergic response. In contrast, animals fed a cocoa diet showed significantly lower concentrations of anti-OVA IgG1 and IgG2a antibodies. Interestingly, the cocoa diet prevented anti-OVA IgE synthesis and decreased total serum IgE concentration. Analysis of cytokine production in lymph node cells at the end of the study revealed that, in this compartment, the cocoa diet decreased the tumor necrosis factor (TNF) - alpha and the interleukin (IL) -10 secretion but not IL-4 production. In conclusion, a cocoa-enriched diet in young rats produces an immunomodulatory effect that prevents anti-allergen IgE synthesis, suggesting a potential role for cocoa flavonoids in the prevention or treatment of allergic diseases.

[cat] El concentrat de plasma assecat per polvorització (SDP) i el d’immunoglobulines (IC) són suplements dietètics que han estat àmpliament utilitzats en l’alimentació dels animals de granja i que han estat proposats com alternativa a l’ús dels antibiòtics com a promotors del creixement, especialment durant el període posterior al deslletament. Aquests suplements incrementen la taxa de creixement degut, en part, a que atenuen la resposta del sistema immunitari. Per exemple, s’ha pogut observar que la suplementació dietètica amb proteïnes plasmàtiques redueix la sobreestimulació immunitària en un model de malaltia inflamatòria intestinal. El sistema immunitari mucosal comú connecta els llocs inductors (en aquest cas la mucosa intestinal) amb els llocs efectors (com les mucoses naso- i broncoalveolar o la genito-urinària), que facilita el moviment de cèl•lules immunitàries entre teixits allunyats anatòmicament i permet que la dieta moduli la resposta associada a infeccions extraintestinals. Així doncs, ens hem plantejat si la suplementació dietètica amb proteïnes plasmàtiques podia modular la resposta immunitària en una inflamació pulmonar aguda. Primerament es va establir una pauta adequada per obtenir un model d’inflamació pulmonar robust i reproduïble. Seguidament s’han estudiat els efectes dels suplements SDP i IC sobre la resposta immunitària en aquest model d’inflamació, en ratolins acabats de deslletar. S’han analitzat cèl•lules i mediadors inflamatoris involucrats tant en la resposta innata, com en la resposta adaptativa. Finalment, també s’han estudiat els efectes dels pinsos experimentals sobre diferents elements que intervenen en la resolució de la resposta inflamatòria, com les cèl•lules reguladores i les citocines antiinflamatòries. L’administració de LPS produeix una migració de leucòcits i un alliberament massiu de citocines i quimiocines proinflamatòries, que recluten i activen monòcits i neutròfils a l’espai alveolar i al teixit pulmonar. A més estimula la immunitat adaptativa, en la que hi ha un increment considerable de limfòcits Th activats, així com una gran producció de citocines. Ambdues dietes disminueixen el reclutament de leucòcits, sobretot els neutròfils i els monòcits. Tot i que la resposta innata és més extensa, les dietes són més efectives sobre la resposta adaptativa, on redueixen les poblacions limfocitàries estimulades per l’LPS tant a pulmó com a sang. Els suplements també atenuen de forma notable l’efecte de l’LPS sobre l’expressió de citocines i quimiocines proinflamatòries a l’espai alveolar. Els efectes de l’SDP i l’IC estan mediats per canvis en l’expressió de citocines antiinflamatòries, ja que augmenten la concentració de IL-10 a pulmó i a jejú, i la del TGF-β a pulmó. Ambdues dietes redueixen el balanç entre els limfòcits Th activats i els limfòcits T reguladors, d’aquesta manera atenuen la magnitud de la resposta inflamatòria i augmenten la concentració de mediadors essencials per la reparació del teixit. Els resultats d’aquest estudi indiquen que els suplements amb proteïnes plasmàtiques poden limitar la resposta immunitària pulmonar i podrien ser útils en la prevenció i atenuació de les malalties inflamatòries extraintestinals., [eng] The concentrated spray-dried plasma (SDP) and immunoglobulin (IC) are dietary supplements that have been widely used in the diet of farm animals and proposed as an alternative to the use of antibiotics as growth promoters, especially in the subsequent weaning period. These supplements increase the growth rate, in part because they attenuate the response of the immune system. The common mucosal immune system connects the inductive sites (in this case the intestinal mucosa) with the effector sites (as nasopharyngeal and bronchoalveolar mucosa or genito-urinary), which facilitates the movement of immune cells between anatomically distant tissues and allows the diet to modulate the associated response to intestinal infections. Consequently, the aim of the present thesis was to evaluate whether the dietary supplementation with plasma proteins could modulate the immune response in an acute lung inflammation. First, a suitable pattern was established in order to obtain a robust and reproducible inflammatory lung model. Next, the effects of SDP and IC supplementation on the immune response in this inflammation model were studied in newly weaned mice. Cells and inflammatory mediators, involved either in innate response as in adaptive response, have been analyzed. Finally, the effects of experimental feed on different elements involved in the resolution of the inflammatory response, such as regulatory cells and inflammatory cytokines, have also been assessed. Both diets decreased the recruitment of leukocytes. Although the innate response is more extensive, the diets are more effective on the adaptive response. The supplements also significantly attenuated the effect of LPS on the expression of pro-inflammatory cytokines and chemokines in the alveolar space. The effects of SDP and IC are mediated by changes in the expression of anti-inflammatory cytokines. Both diets reduced the balance between activated Th cells and regulatory T cells, in such a way that, the magnitude of the inflammatory response is attenuated and the concentration of essential mediators for tissue reparation is increased. In conclusion, the results of this study indicate that plasma protein supplementation is able to limit the pulmonary immune response and could be useful in the prevention and attenuation of the extraintestinal inflammatory diseases.

Determinades situacions patològiques en el cervell així com estímuls inflamatoris provoquen un augment en l’expressió de la COX-2. En el context de la isquèmia cerebral, l’augment en l’expressió de la COX-2 està relacionada amb efectes perjudicials. Les cèl•lules del sistema nerviós central (SNC) disposen de sistemes de reconeixement que els permeten detectar i reconèixer agents infecciosos i iniciar una resposta immune per a fer front a una intrusió. Els astròcits expressen receptors tipus Toll-Like, responen als agonistes d’aquests receptors amb l'alliberació de molècules, i són capaços de modular la resposta immune innata. Els astròcits tenen una ubicació estratègica a la interfase entre els vasos sanguinis i el parènquima cerebral, participant així en la funció de la BHE, en la regulació del flux sanguini cerebral, mitjançant l'alliberament de mediadors vasoactius i expressant molècules implicades en la patogènesi d'algunes malalties autoimmunes que afecten la permeabilitat de la BHE. A més, els astròcits formen una intricada xarxa intercomunicativa amb altres cèl•lules nervioses. La senyalització iniciada en els astròcits pot afectar la funció sinàptica cerebral, i tenir un gran impacte en la unitat neurovascular. En aquesta tesi ens hem plantejat l’ objectiu d’esbrinar les vies de senyalització intracel•lular i els mediadors inflamatoris que participen en la resposta dels astròcits a l’activació dels receptors d’immunitat innata, concretament TLR-4, i determinar el paper de la Cox-2 astroglial en la resposta inflamatòria induïda per aquest receptor. L’activació de TLR-4 indueix en els astròcits senyalització a través de NFκB, les vies MAPK i JAK1/STAT1, que al seu torn regulen l'expressió d'una àmplia gamma de molècules proinflamatòries. Malgrat que el LPS no sembla induir IFN-β en els astròcits, sí que promou l'activació JAK1/STAT1 de manera independent de MyD88, i STAT1 pot regular negativament l'expressió de gens que s'indueixen a través de la via MyD88. Aquests resultats mostren l’activació d’una complexa xarxa de senyalització iniciada per l’activació del receptor TLR-4 en astròcits. Les cèl•lules astroglials són sensibles a la immunitat innata, desencadenant una resposta específica del tipus cel•lular i generant un ambient pro-inflamatòri que podria afectar la resposta o viabilitat de les cèl•lules circumdants. El LPS augmenta l’expressió de la COX-2 en astròcits, i també provoca un augment en la producció i alliberació de prostanoïds dependent de l'expressió de la COX-2. El paper clau de la Cox-2 en la producció de prostanoids després de LPS i l'evidència que la manca de l’enzim Cox-2 exacerba l'expressió de diversos mediadors inflamatoris. Aquest efecte es deu, almenys en part, a la manca de mecanismes naturals de regulació negativa induïts per la PGE2. Els mecanismes de retroalimentació d'aquest tipus podrien estar implicats en la resolució natural del procés inflamatori., Brain pathological conditions and pro-inflammatory stimuli induce cyclooxygenase-2 (Cox-2). Cox-2 is regarded as an inflammatory mediator but Cox-2 deficiency exaggerates the cerebral inflammatory response to lipopolysaccharide (LPS). Here we investigate the role of Cox-2 in LPS-induced prostanoids and inflammation in glia. Intracerebral administration of LPS in rodents induced Cox-2 mainly in astroglia and microglia, while Cox-1 expression was constitutive and predominant in microglia, and it did not increase after LPS. In cultured astrocytes, LPS induced Cox-2 and microsomal prostaglandin-E2 (PGE2) synthase-1 expression. Cox-2 fully mediated LPS-induced production of PGE2 and other prostanoids, as demonstrated in Cox-2-deficient cells and using Cox inhibitors. However, Cox-2-deficient astrocytes produced more TNF-alpha and other inflammatory mediators after LPS than the corresponding wild-type cells. Treatment with PGE2 prevented the exacerbated production of TNF-alpha after LPS in Cox-2 KO cells, and an EP4 agonist also attenuated LPS-induced TNF-alpha, supporting that PGE2/EP4 exerted selective feedback regulatory functions. However, Cox-2 inhibitor NS-398 only caused a very mild increase in LPS-induced TNF-alpha in wild-type astrocytes. This difference might be due to certain Cox-2-independent actions of NS-398 since it decreased TNF-alpha in Cox-2 KO cells, and enhanced the reduction of TNFalpha induced by treatment with PGE2. Therefore, Cox-2 deficiency exacerbates LPS-induced TNF-alpha by preventing a natural negative feedback regulation mediated by the Cox-2/PGE2/EP4 axis. In addition to this effect, NS-398 exerts Cox-2-independent actions becoming apparent in the absence of Cox-2 or in the presence of PGE2. The balance between these different effects determines how Cox-2 inhibition modulates inflammatory responses in astrocytes.

La infecció pel virus de la immunodeficiència humana (VIH) es caracteritza per un descens progressiu en la funció i el nombre de limfòcits T CD4+, amb la conseqüent aparició d'infeccions oportunistes. El tractament antiretroviral de gran activitat (TARGA) ha disminuit significativament la morbilitat i mortalitat associades a la infecció pel VIH, però tot i així no permet l'eradicació de la infecció. Aquest és el principal motiu pel qual es busquen teràpies alternatives com les teràpies immunomediades (en la present tesi han estat les interrupcions estructurades del tractament i una vacuna terapèutica de cèl·lules dendrítiques pulsades amb el virus autòleg inactivat per calor), encaminades a estimular el sistema immunològic, principalment la recuperació de la resposta específica cel·lular contra el VIH. Els principals objectius d'aquesta tesi han estat els següents: (1) analitzar les conseqüències de les interupcions estructurades del tractament sobre la dinàmica de la resposta de les cèl·lules T CD4+ i T CD8+ VIH-1-específiques, sobre les subpoblacions de cèl·lules T, i sobre la resposta limfoproliferativa a antígens policlonals i de record en pacients crònics infectats pel VIH-1 amb un sitema immunològic preservat; (2) estudiar l'eficàcia d'una vacuna terapèutica de cèl·lules dendrítiques pulsades amb virus autòleg inactivat per calor en pacients crònics infectats pel VIH-1 amb un sitema immunològic preservat; (3) estudiar les característiques fenotípiques i funcionals de les cèl·lules T CD4+ i T CD8+ VIH-1-específiques en aquests pacients després del calendari d'immunitzacions amb la vacuna de cèl·lules dendrítiques; i per últim (4) analitzar els epítops immunodominants de les regions p17 i p24 del gen gag dels esmentats pacients per analitzar la influència de la variabilitat d'aquests epítops sobre la resposta immune anti-VIH-1 observada., The main objectives of this thesis were: (1) To analyze the dynamics of T cells subsets and lymphoproliferative responses during structured treatment interruption cycles and after definitive interruption of HAART in early chronic HIV-1-infected patients; (2) to assess the differentiation and maturation markers as well as functional characteristics of HIV-1-specific CD8+ T lymphocytes in chronic HIV-1-infected patients during dendritic cells therapeutic vaccine; (3) To analyze autologous HIV Gag p17 and p24 sequence variability to know if any mutation in immunodominant peptides occurred after vaccination.

Memòria presentada per optar al grau de Doctor per la Universitat de Barcelona.-- Tesis elaborada en el Institut d'Investigacions Biomèdiques de Barcelona, Consejo Superior de Investigaciones Científicas, Institut d'Investigacions Biomèdiques August Pi i Sunyer.

Background Interventions during primary HIV infection (PHI) can modify the clinical course during the chronic phase. The long-term effect of structured treatment interruptions (STI) followed by low doses of interleukin-2 (IL-2) in treated PHI patients is unknown. Methods Twelve PHI patients with viral load (VL) 500 cells/mm3, and CD4/CD8 ratio >1, on antiretroviral therapy (ART) initiated within the first 90 days of infection and continued for at least 12 months were included. They underwent four STI and were then allocated (week 0 of the study) to ART alone or ART plus low doses of IL-2. ART was stopped once VL 500 cells/mm3 at 48 weeks; secondary endpoints were immune activation, inflammatory markers until 48 weeks and the time before resuming ART (CD4 500 cells/mm3 without ART at 48 weeks. All other virological and immunological parameters were comparable between groups at week 0, 'final stop' and week 48. However, the proportion of CD8-CD38+ cells, tumor necrosis factor and srIL-2 were higher in the IL-2 group at 'final stop' and week 24. All these differences vanished during follow-up. At 5 years after the final stop 3 out of 6 patients in the IL-2 group and 6 out of 6 patients in the STI group have resumed ART (P = 0.19). Conclusions STI and IL-2 failed to achieve virological control after ART interruption. STI were not deleterious in long-term follow-up, an important issue for eradication and functional cure trials. Trial Registration ClinicalTrials.gov NCT02300623

La meningitis pneumocòcica és una malaltia associada a una elevada mortalitat (20-40) i a l'aparició de seqüeles neurològiques en un 30% dels pacients, nens i adults, que sobreviuen. Des del punt de vista farmacològic, és una malaltia complicada:- La penetració dels antibiòtics a través de la barrera hematoencefàlica és reduïda.- Es genera una resposta inflamatòria greu en l'espai subaracnoidal, responsable del dany cerebral associat.- L'aparició de soques de "S.pneumoniae" multiresistents no garanteix l'eficàcia del tractament empíric.En els darrers anys s'han detectat soques amb un elevat nivell de resistència a cefalosporines de tercera generació (C3G). La baixa prevalença d'aquests aïllaments dificulta per una banda, el coneixement del seu comportament in vivo i per l'altra, la valoració de l'eficàcia dels tractaments estàndard.En aquesta tesi s'ha demostrat la capacitat d'una soca de "S.pneumoniae" amb un elevat nivell de resistència a C3G a l'hora d'induir meningitis i provocar una resposta inflamatòria greu en el LCR en el model animal. Els nostres experiments demostren que l'adquisició de resistència antibiòtica no ha alterat ni la patogenicitat ni la virulència d'aquestes soques. Les combinacions ceftriaxona més vancomicina, ceftriaxona més rifampicina i rifampicina més vancomicina es van revelar eficaces en la meningitis pneumocòcica per una soca amb un elevat grau de resistència a C3G, tant per la millora de l'eficàcia com per l'atenuació de la resposta inflamatòria respecte a les monoteràpies. Aquests resultats reforcen les recomanacions dels experts i proporcionen una base experimental per a que siguin aplicables en meningitis causades per "S. pneumoniae" sigui quin sigui el seu nivell de resistència a beta-lactàmics. La fosfomicina ha demostrat una elevada penetració a través de la barrera hematoencefàlica en el model animal en conill. No obstant, el desenvolupament de resistència antibiòtica en el model experimental descarta el seu ús en monoteràpia. A més a més, en base als fracassos terapèutics observats proposem revisar els punts de tall de la sensibilitat de "S. pneumoniae" a fosfomicina en la infecció meníngia.Les combinacions de fosfomicina estudiades han demostrat una excel·lent activitat envers dues soques de pneumococ resistent a beta-lactàmics, així com un efecte protector davant el desenvolupament de mutants resistents. A partir dels nostres resultats, recomanaríem com alternatives terapèutiques la combinació fosfomicina més ceftriaxona en pacients amb intolerància a glicopèptids o amb insuficiència renal; i la combinació fosfomicina més vancomicina en pacients al·lèrgics a beta-lactàmics.

T-cell mediated immune response (CMI) has been widely studied in relation to individual and fitness components in birds. However, few studies have simultaneously examined individual and social factors and habitat-mediated variance in the immunity of chicks and adults from the same population and in the same breeding season. We investigated ecological and physiological variance in CMI of male and female nestlings and adults in a breeding population of Cory's Shearwaters (Calonectris diomedea) in the Mediterranean Sea. Explanatory variables included individual traits (body condition, carbon and nitrogen stable isotope ratios, plasma total proteins, triglycerides, uric acid, osmolarity, β-hydroxy-butyrate, erythrocyte mean corpuscular diameter, hematocrit, and hemoglobin) and burrow traits (temperature, isolation, and physical structure). During incubation, immune response of adult males was significantly greater than that of females. Nestlings exhibited a lower immune response than adults. Ecological and physiological factors affecting immune response differed between adults and nestlings. General linear models showed that immune response in adult males was positively associated with burrow isolation, suggesting that males breeding at higher densities suffer immune system suppression. In contrast, immune response in chicks was positively associated with body condition and plasma triglyceride levels. Therefore, adult immune response appears to be associated with social stress, whereas a trade-off between immune function and fasting capability may exist for nestlings. Our results, and those from previous studies, provide support for an asymmetrical influence of ecological and physiological factors on the health of different age and sex groups within a population, and for the importance of simultaneously considering individual and population characteristics in intraspecific studies of immune response. © The Cooper Ornithological Society 2006.

L'activació de les plaquetes en resposta a la lesió vascular o la inflamació porta a la secreció de gran nombre de mediadors els quals són capaços de modular les funcions de les cèl·lules implicades en la Inflamació.El F4P (Factor 4 Plaquetar) és una proteïna específica de les plaquetes i membre de la superfamilia de proteïnes anomenades quemoquines. Encara que estan força establertes l'activitat del F4P com a efector antiangiogènic i procoagulant, es coneix poc sobre la seva implicació en la regulació de la Inflamació. En aquest estudi es demostra la capacitat del F4P per estimular les anomenades cèl·lules "Natural Killer" a sintetitzar citoquines proinflamatòries com són la IL-8, IL-1beta, IL-6, INF-gamma, TNF-alfa i GM-CSF. Assaigs de cinètica i de dosi resposta (10-200 ng/ml) es demostren que el F4P incrementa els nivells de mRNA i proteïna de totes les citoquines estudiades.Es va determinar la capacitat del F4P per induir aquest efecte unit a heparansulfats, ja que en condicions fisiològiques el F4P es troba unit als glicosaminoglicans de la paret vascular. Els resultats obtinguts posen de manifest que el F4P, en aquestes condicions, manté la capacitat d'activar les cèl·lules NK. L'estimulació d'aquestes cèl·lules a través del receptor Fc-gamma-RIIIA (CD16) provoca un efecte d'increment sinèrgic amb el F4P en el lliurament de citoquines.En canvi no vàrem observar cap efecte del F4P sobre cèl·lules NK primàries en repòs en aquelles activitats regulades per la IL-2 com son les activitats citotòxiques "Natural Killer" NK, "Lymphokine-Activated Killer" LAK ó l'expressió del receptor IL-2R (CD25). En canvi el F4P es capaç d'induir un increment dosi-resposta en la "antibody-dependent cellular cytotoxicity" ADCC, activitat citotóxica no regulada, en aquestes condicions, per la IL-2. A més a més, el F4P incrementa l'expressió de CD69, demostrant la inducció d'un estat d'activació.Les cèl·lules NK estimulades amb F4P lliuren citoquines amb capacitat per desencadenar el quimiotactisme dels neutròfils. El 70% d'aquest potencial quimiotàctic induït pels factors lliurats per les cèl·lules NK estimulades amb F4P, es deu a la IL-8 lliurada per aquestes cèl·lules.Es va iniciar l'estudi del possible mecanisme de transducció de senyal desencadenat pel F4P en les cèl·lules NK. Per això es va tenir en compte que el F4P pertany a la família de proteïnes anomenada quemoquines. La major part de les proteïnes d'aquesta família interaccionen amb receptors de 7 segments de domini transmembrana acoblats a proteïnes G i amb el Ca2+ com a missatger secundari. Per poder valorar la possible implicació d'un receptor d'aquestes característiques pel F4P, es va determinar per un costat l'augment transitori de Ca2+ així com la implicació de les proteïnes G. Els resultats que vàrem obtenir ens demostren que l'activitat del F4P sobre aquestes cèl·lules no s'associa a un increment transitori de Ca2+ i cap dels inhibidors de proteïnes G testats va revertir l'efecte del F4P. En canvi, vàrem poder associar l'estímul del F4P a l'activació d'enzims fosfo-tirosinquinasa i més concretament a la fosforilació en residus tyr de l'enzim PI3-K. Per altre banda, els resultats obtinguts amb inhibidors de la transcripció, per una banda, i de la traducció per l'altre apunten que el F4P indueix la síntesi de citoquines estimulant la seva transcripció génica.Finalment, els resultats suggereixen l'existència en les cèl·lules NK de dues vies complementàries i contraposades que semblen bloquejar-se mútuament dirigint l'activitat d'aquestes cèl·lules vers un comportament citolític ó pro-inflamatori.Amb aquests resultats evidenciem, per tant, una nova capacitat pel F4P en potenciar la resposta pro-inflamatòria a través de les cèl·lules Natural Killer. Una de les funcions menys conegudes d'aquestes cèl·lules., The activation of platelets in response to vascular injury or inflammation leads to the secretion of a variety of mediators, which modulate the functions of inflammatory cells. Platelet Factor 4 (PF4) is a platelet-specific protein member of the chemokine superfamily. Although the capacity of PF4 as an antiangiogenic factor or its procoagulant activity are well established, little is known about its proinflammatory functions. In the present study, we demonstrate the ability of PF4 to activate resting Natural Killer cells, to synthesize proinflammatory cytokines, such as IL-8, IL-1-beta, IL-6, IFN-gamma, TNF-alpha and granulocyte/macrophage colony-stimulatory factor (GM-CSF). Dose-response curves (10-200 ng/ml) and time-course assays show that PF4 increases mRNA levels and protein release for all cytokines studied. This ability was retained even while PF4 was bound to heparin, the physiological conditions must to greate affinity to glycosaminoglycans of the endotelial cells surface. Stimulation of Natural Killer cells through the Fc receptor for immunoglobulin gamma-IIIAwas found to synergistically increase the effect of PF4 on cytokines production.Conversely, PF4 does not have any effect in resting primary NK cells on the biological activities regulated by IL-2, such as Natural Killer (NK) and Lymphokine-Activated Killer (LAK) cytotoxic activities or high affinity IL-2 receptor (CD25) expression. However, PF4 was able to induce a dose-response increase in antibody-dependent cellular cytotoxicity (ADCC), an activity not regulated by IL-2 under these conditions. PF4 also increases CD69 expression, demonstrating the induction of a cellular activation state. The biological effects of PF4 are not Ca2+ mobilization dependent. Pertussis toxin did not block the PF4-derived cytokines production, which demonstrates that response to PF4 is not coupled to a pertussis toxin-sensitive Gi and G0 class of G proteins. Different evidences implicating a role of phosphatidilinositol 3-kinase in the intracellular signalling pathway triggered by platelet factor 4. Finally these results characterize a new capacity for PF4 and provide further evidence for the pivotal role of Natural Killer cells in the environment of inflammation.

El objetivo de esta Tesis ha consistido en estudiar diversos aspectos de la biología de los macrófagos, células clave en el desarrollo de la respuesta inmunitaria. Los macrófagos se caracterizan por ser células que en los tejidos se encuentran proliferando y manteniendo su viabilidad gracias a la presencia de factores de crecimiento. Sin embargo, cuando reciben un estímulo activador, ya sea el IFN-gamma, principal activador endógeno de los macrófagos o bien el LPS, componente de las bacterias Gram negativas, dejan de proliferar y pasan a activarse y a desarrollar sus funciones características, como son la expresión de citocinas proinflamatorias (como el TNF-alfa Il-1beta, IL-6), la producción de NO o bien la expresión de las moléculas del MHC II. En algunos casos, por ejemplo en ausencia de factores de crecimiento o bien estimulados con LPS, los macrófagos experimentan apoptosis o muerte celular. Este trabajo se ha centrado en estudiar las diferentes vías de señalización que participan en las distintas respuestas de los macrófagos (como proliferación, activación, supervivencia y apoptosis). En este sentido se ha demostrado que la vía de señalización de MEK/ERK es esencial para los procesos de proliferación y activación, aunque lo hace con una cinética distinta. Mientras que estímulos proliferativos generan un pico corto y rápido de activación, estímulos que inducen la activación de los macrófagos como por ejemplo el LPS, la cinética de activación de estas quinasas es más tardía. Esta cinética de activación de ERK diferencial nos permite discernir entre estímulos proliferativos y activadores. Además se ha demostrado que el IFN-gamma, aunque no activa a las quinasas ERK, induce un alargamiento en el tiempo de la activación de estas quinasas a través de la inhibición de la expresión de MKP-1 inducida por factores de crecimiento. El alargamiento de actividad de ERK, inhibe la expresión de c-myc, proteína indispensable para la progresión del ciclo celular y por tanto inhibe la proliferación de los macrófagos. Por otro lado, hemos demostrado que la vía de señalización de PI-3K/AKT es la responsable de la expresión de p21Waf1 y responsable de la respuesta de supervivencia de los macrófagos debida a factores de crecimiento y otros agentes. También hemos visto que la ciclosporina, un inmunosupresor ampliamente utilizado para evitar el rechazo de los transplantes, inhibe la actividad de ERK inducida por el M-CSF lo que produce un bloqueo de la proliferación. Este efecto es independiente de la fosfatasa Calcineurina, principal diana de la ciclosporina.Además, también se ha analizado como el entorno celular puede afectar a las respuestas de proliferación y activación de los macrófagos. Se ha demostrado que un aumento de adhesión producido por la decorina y fibronectina inhibe la proliferación de los macrófagos a través de la expresión de p27Kip1 y la prolongación de la actividad ERK. La decorina aumenta la activación de los macrófagos a través del secuestro del TGF-beta? producido de forma endógena por estas células. Por ultimo el LPS, aunque es un buen activador de los macrófagos, induce apoptosis en determinadas situaciones, por ejemplo cuando dicha estimulación se produce de forma incorrecta, es decir, en ausencia de IFN-gamma o bien debido a dosis elevadas de LPS, responsables del shock séptico. La apoptosis inducida por el LPS se produce a través de dos vías de señalización independientes. Una primera vía mas temprana debida a la secreción autocrina de TNF-alfa y una segunda vía mas tardía, basada en la producción de NO. La apoptosis de los macrófagos inducida por el LPS se da principalmente a través de la producción de TNF-alfa que esta regulada mayoritariamente por PKC-epsilon a través de la modulación de la actividad JNK.

Los protozoos pertenecientes al género "Perkinsus" son parásitos de numerosas especies de bivalvos y gasterópodos marinos. Los efectos deletéreos de esta parasitosis son dependientes de las condiciones medioambientales, habiéndose constatado que temperaturas y salinidades elevadas aumentan la prevalencia y la intensidad de la infección. El ciclo vital conocido de estos protozoos lo componen trofozoitos, hipnosporas y zoosporas, siendo los trofozoitos el estadio vegetativo que prolifera en el tejido conjuntivo del huésped. El parasitismo de "Perkinsus" induce diferentes respuestas defensivas según el huésped y la especie. Las almejas venéridas "Tapes semidecussatus" y "T. decussatus" desarrollan frente a la infección de "P. atlanticus" una reacción inflamatoria, mediada por hemocitos granulares, que causa la encapsulación de este parásito. Si bien la encapsulación es una estrategia defensiva habitual tanto en moluscos como en otros grupos de invertebrados, la desarrollada por estas almejas contra los trofozoitos de "P. atlanticus" exhibe características singulares. Así, mientras las cápsulas de moluscos suelen estar compuestas por hemocitos, células semejantes a fibroblastos y fibras del tejido conjuntivo, en estas almejas venéridas, los trofozoitos de "P. atlanticus" son encapsulados por un material de naturaleza no fibrilar secretado por los hemocitos infiltrados en la vecindad de los parásitos.El componente mayoritario de la cápsula es un polipéptido (p225) de un peso molecular aproximado de 225 kDa. Los ensayos de deglucosilación revelan que p225 no está glucosilado, dado que ni la incubación con Endo II ni la fi-eliminación alcalina mostraron un efecto detectable en su peso molecular. La imnunolocalización de este polipéptido indica que "p225" es almacenado en los gránulos de los granulocitos infiltrados, siendo secretado y organizado como una cápsula alrededor de los trofozoitos. Asimismo, la ausencia de este polipéptido, demostrado por "Western-blot" e inmunolocalización, en los animales no parasitados, indica que "p225" es un producto de nueva expresión asociado con esta parasitosis.Los hemocitos granulares son las células implicadas en la respuesta inflamatoria que "Tapes" spp. desarrolla contra los trofozoitos de "P. atlanticus", coincidiendo, de este modo, con el principal tipo hemocitario identificado en las cápsulas de moluscos. Sin embargo, los granulocitos que componen esta reacción celular exhiben características diferenciales respecto a los circulantes. Así, mientras los granulocitos circulantes de "T. semidecussatus" muestran gránulos de contenido flocular con un halo lúcido periférico, los granulocitos localizados en las proximidades de los trofozoitos se caracterizan por la presencia de numerosos gránulos de contenido homogéneo con abundantes membranas internas. Estas observaciones estructurales y los resultados obtenidos mediante el suero contra "p225" indican que una vez que los hemocitos granulares han accedido al tejido conjuntivo de los órganos parasitados sufren un proceso de rediferenciación dando lugar a un nuevo tipo celular de carácter secretor. La secreción ocurre en la estricta inmediación de los trofozoitos e implica la muerte de los granulocitos.Aunque tanto la respuesta defensiva elaborada por "T. semidecussatus", como la desarrollada por "T. decussatus" conllevan la encapsulación de los trofozoitos de "P. atlanticus", estas respuestas exhiben características diferenciales. Así, mientras la reacción celular de "T. semidecussatus" está organizada en áreas individualizadas, separadas por elementos del tejido conjuntivo aquélla de "T. decussatus" está compuesta por una única masa hemocitaria, sin fibras ni células de origen conjuntivo. Asimismo, los gránulos de los granulocitos rediferenciados de "T. decussatus" muestran menos membranas internas y, además, sin la típica ordenación en paralelo de "T. semidecussatus". Por último, aunque mediante el suero contra "p225" se observó inmunoreactividad en "T. decussatus" en los mismos compartimentos intra y extracelulares relacionados con la síntesis secreción y depósito de "p225" que lo fueron en "T. Semidecussatus", las estimaciones de la densidad de marca, para cada uno de los compartimentos, señalan una disminución relativa de ésta en "T. decussatus".Por otra parte, los resultados obtenidos tras la inoculación de cuerpos extraños en "T. semidecussatus" demuestran que el parasitismo de "P. atlanticus" induce específicamente la rediferenciación de los granulocitos infiltrados y la subsiguiente expresión de "p225"; ni heridas experimentales, ni la inoculación de material biológico de diferente tamaño, como bacterias, algas o hipnosporas no viables de "P. atlanticus", induce esta reacción celular específica. Así, aunque los hemocitos granulares asociados a las áreas inoculadas exhibieron actividad fagocítica, en ningún punto del experimento se observaron procesos de secreción por parte de estas células. En cualquier caso, estos hemocitos granulares no expresaron "p225", el componente mayoritario de la cápsula secretado por los granulocitos de la reacción celular.Tras la administración de 5'-bromodeoxiuridina, tan sólo un pequeño número de granulocitos de la reacción celular mostraron reactividad. Sin embargo, en el tejido conjuntivo epicárdico se observaron diferencias significativas entre los animales parasitados y aquéllos libres de la infección. Estos resultados evidencian que esta respuesta defensiva, basada en una reacción inflamatoria, es consecuencia del reclutamiento de hemocitos y de su rediferenciación, siendo repuestos los niveles hemocitarios mediante la actividad proliferativa de este tejido especializado., Protozoa of the genus "Perkinsus" (Apicomplexa. Perkinsea) are major disease agents in marine molluscs and they have been associated with large-scale mortality in bivalves and gastropods worldwide. The life cycle of those protozoa consists of trophozoiles, hipnospores and zoospores, trophozoites being the vegetative stage observed in the connective tissue of the hosts.The venerid clams "Tapes semidecussatus" and "T. decussates" develop an inflammatory response, based on a cellular reaction, against "Perkinsus atlanticus" infection. This reaction involves the infiltration of granule-containing haemocytes. The holocrine secretion by the granulocytes gives rise la the encapsulation of the trophozoites. The main component of the capsule is a polypeptide (p225) of about 225 kDa, which is slightly glycosylated. The immunolocalization of this polypeptide shows that p225 is stored in the granules of the granulocytes, and is secreted, in a polarized way, around the trophozoites, leading lo their encapsulation. Moreover, the absence of this polypeptide in non-parasitized specimens, confirmed by Western-blot and immunolocatization, indicates that p225 is produced "de novo" in response to the parasitosis. On the other hand, ultrastructural observations and the results obtained by means of the serum against p225 indicate that under parasite induction these infiltrated granular haemacytes redifferentiate, giving rise to secretory granulocytes.After 5'-bromodeoxyuridine administration, only a few granulocytes of the cellular reaction were labelled. However, significant differences between parasitized and non-parasitized specimens were observed in the epicardic connective tissue. These results show that this defensive reaction involves the infiltration and redifferentiation of granular haemocytes without cell division, and that haemocyte levels are recovered by means of the proliferative activity of this specialized tissue.

Algunas personas se recuperan con cierta rapidez de las mismas enfermedades y trastornos que a otras causan largos períodos de convalecencia y/o inconveniencias familiares y laborales. Tampoco es extraño encontrar personas que a lo largo de su vida manifiestan una sorprendente predisposición a padecer enfermedades víricas como la gripe, sinusitis, hepatitis o el herpes, mientras que otras, aún estando expuestas a esos mismos virus, no sucumben a tales infecciones, permaneciendo completamente sanas. Tales hechos ponen de manifiesto la existencia de ostensibles diferencias individuales en la susceptibilidad a la enfermedad, en la respuesta a la misma y en la posibilidad de recuperación. Puede parecer obvio que tales diferencias individuales se deban fundamentalmente a la dotación genética del individuo y por tanto muchas enfermedades parecen tener su peculiar "marcador genético", de tal modo que un individuo puede estar "programado" desde su concepción para desarrollar alguna de tales enfermedades si así aparece especificado en su dotación genética. Sin embargo, aunque dicho marcador parece predisponer a esa persona para desarrollar una enfermedad, por sí solo no es determinante de la misma.Por lo antedicho cobra una especial relevancia hallar la respuesta a cuestiones tales como "¿De qué depende que de entre todas aquellas personas que poseen el marcador genético de determinada enfermedad sólo algunas de ellas desarrollen la enfermedad y otras no?" o "¿Qué factores biopsicosociales predisponen o interactúan con la fisiología del organismo para poner en marcha el proceso desencadenante de la enfermedad?". En este sentido adquiere relevancia la cuestión sobre el papel que juega la personalidad del individuo en la predisposición y posterior desarrollo del trastorno, así como en la evolución del mismo y en el modo en cómo éste lo afronta.Esta relación entre la personalidad del individuo y la enfermedad, entre lo psicológico y lo fisiológico, es una cuestión compleja y, si bien ha estado presente en el ámbito de la Psicología desde la antigüedad, permanece aún irresoluta en su sentido más amplio. En la Grecia clásica esta interacción fue abordada por Hipócrates y su biotipología humoral-temperamental, en la que proponía una explicación fisiológica de las diferencias individuales en la conducta, relacionando asimismo las disposiciones biopsicológicas de la personalidad con la susceptibilidad a padecer determinadas enfermedades.Para estudiar esta cuestión es preciso clarificar los tres aspectos que se hallan implicados en la misma, a saber: qué se entiende por personalidad, qué se entiende por salud o enfermedad y, quizás lo más importante de esta cuestión, averiguar y profundizar en los mecanismos que intervienen en esta interacción. Precisamente esta tesis se centra sobre todo en este último aspecto. En definitiva, la tesis que presentamos intenta estudiar la posible relación entre los aspectos psicológicos del individuo y el sistema fisiológico que, en cierta medida, regula la susceptibilidad a padecer una enfermedad, esto es, el sistema inmune. Todo ello abordado desde la perspectiva de la Psiconeuroinmunologia, disciplina que estudia la interacción entre cerebro, conducta y sistema inmune, y que en los últimos años ha adquirido especial relevancia en el estudio de las relaciones entre Psicología y salud.

El hecho de que las alteraciones inmunitarias están implicadas en la enfermedad periodontal está ampliamente recogido en la literatura. No obstante la naturaleza exacta y la implicación de las mismas no está clara. Por otro lado el empleo de la citometría de flujo ha posibilitado un avance importante en las técnicas de investigación biomédica y en el caso concreto que nos ocupa la posibilidad de determinar diferentes marcadores monoclonales en la línea celular linfocítica. Estudiamos los marcadores monoclonales (CD4, CDB, CD3 y CD19) en 15 pacientes afectados de enfermedad periodontal avanzada. Los resultados obtenidos se encuentran dentro de los límites de normalidad. Si bien no hemos obtenido datos significativos creemos que la muestra es pequeña y sería útil realizar estudios más amplios y a ser posible a nivel local. No obstante pensamos que lo novedoso es el estudio de anticuerpos monoclonales en relacióncon la enfermedad periodontal, datos que no hemos encontrado en la literatura.

[spa] La presente tesis es un estudio detallado de la respuesta antígena in vivo a través de la respuesta humoral sérica y celular esplénica y ganglionar; al estudio de la dinámica de las distintas poblaciones inmunocompetentes para poner de manifiesto la T-dependencia o independencia de los antígenos tumorales y finalmente el potencial efecto antitumoral es un modelo murino de terapia con E- antígeno. Se han estudiado los distintos “carriers” necesarios para una correcta presentación del antígeno como pueden ser polímeros sintéticos, liposomas, partículas inorgánicas, etc.

El objetivo de este trabajo es hallar, en la rata, una asociación entre la respuesta inmune en anticuerpos y ciertas conductas estables (el temperamento). Se han usado ratas adultas, machos, de la cepa Sprague-Dawley. Se ha medido la deambulación , defecación, e inmovilidad en dos campos abiertos de diferente intensidad luminosa, y los cambios e incorporaciones en la caja de vaivén. Se ha usado como antígeno eritrocitos de ratón, y se ha medido el nivel sérico de anticuerpos específicos (IgM e IgG) mediante la técnica ELISA. La respuesta primaria en IgM se agrupa con la defecación en el campo abierto menos estimulante, y la respuesta en IgG lo hace con la actividad en el campo abierto más estimulante; la respuesta secundaria (en IgG) no se asocia con ninguna variable conductual.

Acute-on-chronic liver failure (ACLF) is a complex syndrome that develops in patients with acutely decompensated cirrhosis. In this condition, dysbalanced immune function and excessive systemic inflammation are closely associated with organ failure and high short-term mortality. In this review, we describe how omic technologies have contributed to the characterization of the hyperinflammatory state in patients with acutely decompensated cirrhosis developing ACLF, with special emphasis on the role of metabolomics, lipidomics and transcriptomics in profiling the triggers (pathogen- and damage-associated molecular patterns [PAMPs and DAMPs]) and effector molecules (cytokines, chemokines, growth factors and bioactive lipid mediators) that lead to activation of the innate immune system. This review also describes how omic approaches can be invaluable tools to accelerate the identification of novel biomarkers that could guide the implementation of novel therapies/interventions aimed at protecting these patients from excessive systemic inflammation and organ failure.

DE LA TESIS:Durante mucho tiempo se había sospechado la naturaleza inmunológica de los fenómenos patogénicos de la glomerulonefritis humana; aún antes de que la Inmunología tomase cuerpo como una rama amplia e independiente, en la cual sólo los agentes bacterianos eran capaces de influir en los procesos inmunológicos, Bright sugirió que la "inflamación" del riñón en la nefritis era debida a la "acción" mórbida que afectaba directamente al órgano, a consecuencia de dicha acción mórbida en otra parte del organismo.Es Schick quien aportó nueva luz al observar que la nefritis asociada a la escarlatina o a la amigdalitis no aparece en el estado agudo de la infección, cuando se espera que el estreptococo o sus productos estén en mayor abundancia, sino tras un período de latencia; sugiere entonces que el lapso de tiempo transcurrido entre la infección sintomática y el inicio de la nefritis podría representar el periodo requerido para el desarrollo de una hipersensibilidad del huésped frente a los organismos todavía existentes. Von Pirquet llama la atención sobre la similitud entre el periodo de latencia en el desarrollo de la nefritis postestreptocócica y el de la enfermedad del suero producida al inyectar suero de caballo; evidencia además el aspecto similar de la glomerulonefritis en ambas situaciones, permitiéndole sostener la hipótesis de que la glomerulonefritis era el resultado de la interacción de los microorganismos con los anticuerpos producidos en el periodo de latencia de la enfermedad. La disminución del complemento sérico apoya más estos supuestos. Finalmente Seegal, Andres, Hsu, y Zabriskie demuestran la presencia de 7S-alfa globulina, beta-1 C y antígeno estreptocócico en los glomérulos de pacientes con glomerulonefritis aguda. Los últimos 50 años de inmunología experimental no han hecho otra cosa que apoyar en todos los aspectos la implicación inmunológica en la glomerulonefritis humana.Los fenómenos inmunitarios se presentan para el nefrólogo como una ciencia paradójica, pues si bien por un lado van a permitir conocer la etiopatogenia de ciertas nefropatías que faciliten un adecuado abordaje terapéutico, por otro lado impiden un acto terapéutico esencial en nefrología, el trasplante.La microscopía óptica convencional ha renovado la patología renal permitiendo reconocer y clasificar sobre bases morfológicas, las principales glomerulopatías. Esta vía habría resultado medio ciega en ausencia de otras técnicas. Así, la microscopía óptico, indescirnibles anteriormente, resolución naturaleza de los depósitos gracias a la "periodicidad" característica, como es el caso de la amiloide o de la fibrina, que se tiñen con el ácido ósmico o las sales de plata, por ejemplo. El examen por Inmunofluorescencia llena en parte la laguna dejada por la microscopía electrónica, nos revela los íntimos componentes de un fenómeno inmunológico, nos aumenta la resolución de nuestros microscopios no en unidades ópticas sino en acercamiento patogénico; en resumen, plasma "in vitro" un aspecto de la reacción inmunológica vital que en sus primeros experimentos vislumbró Masugui.La inmunofluorescencia es un procedimiento utilizado tanto en inmunología como en histología para evidenciar la fijación de anticuerpos sobre el antígeno, del que gracias a la especificidad del anticuerpo se puede determinar su naturaleza y localización, todo ello gracias al marcado previo del anticuerpo con una sustancia fluorescente que no altera su especificidad. La reacción antígeno-anticuerpo es entonces fácilmente visible gracias al microscopio de fluorescencia.El presente trabajo ha estudiado 100 biopsias renales utilizando la técnica de inmunofluorescencia mediante inmunosueros marcados con fluoresceína anti-C3, anti-lgA, anti-lgG, anti IgM y anti-fibrinógeno; componentes éstos que al detectarse implican en principio un mecanismo inmunológico de lesión. Los pacientes pertenecen al Servicio de Nefrología (Clínica Médica B) del Hospital Clínico y Provincial de Barcelona. Las biopsias se efectuaron quirúrgicamente por lumbotomía y con anestesia general. De cada pieza biópsica se efectuaron sendas partes para el estudio por microscopía óptica, inmunofluorescencia y microscopía electrónica.

Se evidencia en los últimos años un interés en dilucidar el papel que pueden desempeñar las reacciones inmunológicas en la patogenia de la patología pulpo-periapical, ya que tanto las bacterias como los tejidos pulpo-periapicales alterados pueden actuar como antígenos. Una reacción inmunológica es un fenómeno biológico de protección del organismo frente a una sustancia extraña, reaccionando ante ella de una forma específica consistente en la formación por parte del or­ganismo de unos elementos capaces de neutralizar la sustancia extraña una vez ésta ha sido identificada...

Currently, immunosuppressive therapy in kidney transplant recipients is generally performed by protocols and adjusted according to functional or histological evaluation of the allograft and/or signs of drug toxicity or infection. As a result, a large fraction of patients are likely to receive too much or too little immunosuppression, exposing them to higher rates of infection, malignancy and drug toxicity, or increased risk of acute and chronic graft injury from rejection, respectively. Developing reliable biomarkers is crucial for individualizing therapy aimed at extending allograft survival. Emerging data indicate that many assays, likely used in panels rather than single assays, have potential to be diagnostic and predictive of short and also long-term outcome. While numerous cross-sectional studies have found associations between the results of these assays and the presence of clinically relevant post-transplantation outcomes, data from prospective studies are still scanty, thereby preventing widespread implementation in the clinic. Of note, some prospective, randomized, multicenter biomarker-driven studies are currently on-going aiming at confirming such preliminary data. These works as well as other future studies are highly warranted to test the hypothesis that tailoring immunosuppression on the basis of results offered by these biomarkers leads to better outcomes than current standard clinical practice.

En el transcurso del tratamiento endodóncico se utilizan una serie de sustancias químicas, con distinta finalidad. Por un lado, soluciones irrigadoras que favorezcan la remoción de residuos orgánicos y virutas dentinarias del interior de los conductos radiculares, durante la prepa­ración biomecánica. Por otro, antisépticos diversos para favorecer la obtención de unos conductos libres de gérmenes y toxinas. Por último, pastas y cementos de obturación de conductos, de composición variada, utilizados solos o con conos, para rellenar la luz de los conductos radicu­lares y bloquear su comunicación con el periápice.

16 páginas, 9 figuras, 3 tablas, Background: The Manila clam (Ruditapes philippinarum) is a worldwide cultured bivalve species with important commercial value. Diseases affecting this species can result in large economic losses. Because knowledge of the molecular mechanisms of the immune response in bivalves, especially clams, is scarce and fragmentary, we sequenced RNA from immunestimulated R. philippinarum hemocytes by 454-pyrosequencing to identify genes involved in their immune defense against infectious diseases. Methodology and Principal Findings: High-throughput deep sequencing of R. philippinarum using 454 pyrosequencing technology yielded 974,976 high-quality reads with an average read length of 250 bp. The reads were assembled into 51,265 contigs and the 44.7% of the translated nucleotide sequences into protein were annotated successfully. The 35 most frequently found contigs included a large number of immune-related genes, and a more detailed analysis showed the presence of putative members of several immune pathways and processes like the apoptosis, the toll like signaling pathway and the complement cascade. We have found sequences from molecules never described in bivalves before, especially in the complement pathway where almost all the components are present. Conclusions: This study represents the first transcriptome analysis using 454-pyrosequencing conducted on R. philippinarum focused on its immune system. Our results will provide a rich source of data to discover and identify new genes, which will serve as a basis for microarray construction and the study of gene expression as well as for the identification of genetic markers. The discovery of new immune sequences was very productive and resulted in a large variety of contigs that may play a role in the defense mechanisms of Ruditapes philippinarum, This work has been funded by the Spanish Ministerio de Ciencia e Innovación (MICINN) (AGL2008-05111) and by the EU Project REPROSEED (245119). R.M. wishes to acknowledge additional funding from the Spanish MICINN through a Formación de Personal Investigador Spanish research grant (BES-2009- 029765