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Os objetivos desse estudo foram avaliar: o efeito do ALN no desenvolvimento de lesões periapicais (LP) induzidas em ratas ovariectomizadas (Capítulo 1); a influência da redução dos níveis de estrógeno na composição microbiana da cavidade bucal e consequentemente no desenvolvimento da lesão periapical (Capítulo 2). Para a realização do estudo do Capítulo 1, 25 ratas foram divididas em 3 grupos: sham (controle), ovariectomia (OVX), e OVX+ALN. Um dia após a realização da OVX, os animais do grupo OVX+ALN começaram a receber a medicação, via gavagem. Decorridas 9 semanas, os primeiros molares de todos os animais foram submetidos à indução de LP. Após 21 dias, foi realizada a eutanásia dos animais. Fêmures foram analisados para registro da densidade mineral óssea (BMD) e os blocos de tecido ósseo contendo os primeiros molares inferiores foram submetidos ao processamento histotécnico e à coloração com hematoxilina e eosina (HE) para análise da LP em microscopia convencional. Paralelamente, foi realizada a análise morfométrica da área das LP por imunofluorescência, histoenzimologia para a quantificação de osteoclastos e coloração de DAPI para quantificação de osteócitos apoptóticos. Além disso, os primeiros molares superiores foram utilizados para a análise da expressão gênica de citocinas pró-inflamatórias (IL-1β, IL-6 e TNF-α) e marcadores da osteoclastogênese (RANKL/OPG). Já para a realização do estudo do Capítulo 2, 36 ratas foram divididas em 4 grupos: sham (controle), ovariectomia (OVX), sham + lesão periapical (Sham+LP) e ovariectomia + lesão periapical (OVX+LP). A indução da LP também ocorreu após 9 semanas seguindo o mesmo protocolo descrito acima. Após o período experimental de 21 dias, foi realizada a colheita microbiológica da cavidade bucal dos animais, por meio de esfregaço com microbrush nas regiões de bochechas, assoalho bucal e língua e posteriormente os animais foram submetidos à eutanásia. As amostras foram analisadas pelo método Checkerboard DNA-DNA Hybridization, para verificar a presença de 40 espécies bacterianas as quais foram divididas em complexos microbianos de Socransky. A análise da área das lesões periapicais foi realizada por microscopia de flourescência. Os resultados foram submetidos aos testes ANOVA e Kruskal-Wallis e aos pós-testes de Tukey e Dunn, com nível de significância de 5%. A análise dos resultados do Capítulo 1 permitiu evidenciar que a OVX reduziu a BMD do fêmur e o tratamento com ALN foi capaz de prevenir a perda óssea (p0,05). Já a análise dos resultados do Capítulo 2 permitiu evidenciar que a microbiota bucal foi alterada em condições de deficiência de estrógeno. Os grupos OVX apresentaram maior quantidade de bactérias, em comparação ao grupo SHAM, na maioria dos complexos microbianos (p0,05). Os animais do grupo controle (com ou sem lesão), sem considerar a influência da deficiência de estrógeno, não apresentaram diferença estatisticamente significante (p>0,001) em nenhum dos complexos microbianos. As lesões periapicais nos animais OVX apresentaram-se significativamente maiores em comparação aos animais SHAM (p 0.05). The analysis of the results of Chapter 2 showed that the oral microbiota was altered under conditions of estrogen deficiency. The OVX groups had a higher amount of bacteria compared to the SHAM group in most of the microbial complexes (p 0,05). The animals in the control group (with or without lesion), disregarding the influence of estrogen deficiency, did not present a statistically significant difference (p> 0.001) in any of the microbial complexes. The periapical lesions in OVX animals were significantly higher compared to SHAM animals (p

O carcinoma espinocelular oral (CECO) corresponde a aproximadamente 95% das neoplasias malignas que acometem a cavidade oral. Os fatores de risco clássicos incluem o tabagismo e etilismo; no entanto, as disfunções do sistema imune em decorrência do envelhecimento (imunossenescência) na patogênese do CECO são muito pouco estudados. Análises comparativas vêm sendo feitas para melhor caracterização do perfil de pacientes jovens e idosos acometidos pelo CECO, o qual permanece ainda controverso. Vários estudos têm mostrado que os macrófagos associados ao tumor (MATs) no CECO de pacientes idosos exibem um fenótipo M2 (pró-tumoral), com propriedades moduladoras do estroma vascular, promovendo a angiogênese. No entanto, considerando a imunossenescência, não se sabe o perfil de MATs e seus efeitos na angiogenese no CECO afetando pacientes jovens. Assim, este estudo analisou por meio da técnica imunoistoquímica, a frequência e localização de MATs em correlação com a angiogênese, no CECO, afetando pacientes jovens e idosos. Cinquenta e sete biópsias de CECO divididos em 3 grupos (I: 65 anos [n=20]) foram selecionados para compor o estudo, sendo classificados morfologicamente seguindo às recomendações da OMS (2017). Os grupos I, II e III foram comparados quanto à imunoexpressão de CD68 e CD163 para análise de MATs e de CD34 (vasos sanguíneos) e D2-40 (vasos linfáticos) para avaliação da densidade microvascular (DMV), área microvascular (AMV) e área vascular total (AVT). A análise imunoistoquímica evidenciou similar expressão de CD68 e CD163 nos três grupos (p>0,05). A avaliação da DMV, AMV e AVT sanguínea e linfática também exibiu padrões similares, com predominância significativa (p 65 years [n=20]) and selected to compose this study, being classified morphologically following WHO (2017) recommendations. Groups I, II and III were compared for immunoexpression of CD68 and CD163 for analysis of TAMs, and CD34 (blood vessels) and D2-40 (lymphatic vessels) for evaluation of microvessel density (MVD), microvascular area (MVA) and total vascular area (TVA). Immunohistochemical analysis showed similar expression of CD68 and CD163 in the three groups (p>0.05). The evaluation of blood and lymphatic MVD, MVA and TVA also showed similar patterns, with a significant predominance (p

A reabilitação por meio de implantes osseointegrados vem tornando-se uma atividade crescente na odontologia. Hoje em dia a taxa de sucesso vem aumentando devido às novas técnicas e tecnologias, porém a perda do implante dentário decorrente das doenças periimplantares tem se tornado um problema frequente na prática clínica. Contudo não há relação direta com os fatores de risco, até o momento relatado na literatura. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a associação dos genes RANK, RANKL E OPG no desenvolvimento das doenças peri-implantares na Clínica de Especialização em Implantodontia na Faculdade do Amazonas IAES. Cento e quatorze pacientes submetidos a instalação de implantes ossointegráveis foram incluídos na pesquisa. A avaliação clínica incluiu a análise das condições de saúde do paciente e do tecido peri-implantar através de mensuração da profundidade clínica de sondagem, presença de sangramento espontâneo, fenótipo periimplantar, supuração, placa bacteriana e coloração gengival. Radiografias padronizadas avaliaram a altura do osso peri-implantar. A amostra (n=114) foi dividida em 3 grupos: A (saúde peri-implantar), B (mucosite) e C (peri-implantite). Amostras de saliva foram coletadas para avaliação da presença de polimorfismo nas regiões promotoras dos genes das osteoprotegerina (OPG), ligante do receptor ativador do fator nuclear Kappa β (RANKL) e receptor ativador do fator nuclear kappa β (RANK) por meio da técnica de PCR em tempo real. Os resultados mostraram que dos 114 indivíduos incluídos no presente estudo, 71 apresentavam uma condição periimplantar saudável e 43 uma doença (30 com mucosite e 13 com peri-implantite). Idade, biótipo peri-implantar, diabetes e presença de placa periimplantar foram associados à mucosite, enquanto idade, biótipo peri-implantar, tabagismo e etilismo, doença periodontal e placa peri-implantar foram associados à presença de periimplantite (P 0,05). Não houve associação entre a condição perimplantar e qualquer polimorfismo avaliado nos genes RANK, RANKL ou OPG (P> 0,05). Conclui-se que os genes RANK, RANKL e OPG não apresentaram relação com o desenvolvimento das doenças peri-implantares Rehabilitation through osseointegrated implants has become a growing activity in dentistry. Nowadays, a success rate due to new techniques and technologies, however, the loss of dental implants due to peri-implant diseases has become a frequent problem in clinical practice. There is no direct connection with the risk factors, until now reported. The present work makes an evaluation of the RANK, RANKL and OPG genes in the development of the periimplant clinics at the Implantology Specialization Clinic at the Faculty of Amazonas - IAES. One hundred and fourteen patients with an implant installation were included in the study. The clinical evaluation included the analysis of the peri-implant patient and non-tissue health conditions by measuring the clinical depth of survey, presence of spontaneous bleeding, periimplant phenotype, suppuration, plaque and gingival staining. Standardized radiographs assessed the height of the peri-implant bone. A sample (n = 114) was divided into 3 groups: A (peri-implant health), B (mucositis) and C (peri-implantite). Saliva samples were collected for the presence of polymorphism in the promoter regions of the osteoprotegerin (OPG) genes, the Kappa nuclear factor activator receptor (RANKL) and the nuclear kappa factor activator receptor (RANK) by the PCR technique in real time.The results showed that of the 114 individuals in the study, 71 had a healthy peri-implant condition and 43 a diseased condition (30 with mucosites and 13 with peri implantite). Age, peri-implant biotype, diabetes and presence of peri-implant plaques were associated with mucositis, while age, peri-implant biotype, smoking and alcoholism, periodontal and peri-implant plaques were associated with the presence of peri-implantitis (P 0.05). There was no association between the perimplant condition and any polymorphism evaluated in the genes: RANK, RANKL or OPG (P> 0.05). It is concluded that the RANK, RANKL and OPG genes are not related to the development of peri-implant diseases

O objetivo deste estudo foi avaliar a resposta dos tecidos perirradiculares após perfuração de furca intencional e selamento com Biodentine (BD), agregado trióxido mineral (MTA) ou guta percha. Foram utilizados pré-molares de 3 cães, num total de 30 dentes, distribuídos em 3 grupos: experimental BD (n= 14), controle negativo (MTA) (n= 10) e controle positivo (guta percha) (n= 6), por um período de 120 dias. Radiograficamente foi analisada a área correspondente à perfuração de furca. Na análise histopatológica qualitativa foi avaliada a presença, ou não de tecido mineralizado no local da perfuração de furca e adjacências. Na análise histopatológica semi-quantitativa foram atribuídos escores para os parâmetros: presença ou ausência de tecido mineralizado, intensidade do processo inflamatório e reabsorção dos tecidos mineralizados. Na análise histopatológica quantitativa foi medida a espessura de tecido mineralizado na área de perfuração de furca. Foram realizados ensaios de imuno-histoquímica para os marcadores de mineralização: RANKL e osteoprotegerina (OPG). Ensaio de imunofluorescência indireta avaliou a expressão Runx-2 para a síntese de proteínas de mineralização. Os dados foram avaliados pelos testes qui-quadrado, teste exato de Fisher e teste de Mann Whitney, utilizando o programa estatístico Graph Pad Prism 6.0. Os grupos foram comparados entre sí pelo Teste de Kruskal Wallis com pós-teste de Dunn. O nível de significância adotado para todas as análises foi de 5%. Na análise radiográfica a (BD) apresentou melhor desempenho em relação ao MTA, em todos os aspectos analisados. Histologicamente, tanto o MTA quanto a BD induziram a formação de tecido mineralizado, quando comparado à guta percha, que não induziu a formação de tecido mineralizado (p

O tecido ósseo é um tipo especializado de tecido conjuntivo que desempenha funções essenciais para a sobrevivência do indivíduo, sendo composto predominantemente por osteócitos. Dentre os tecidos mineralizados do corpo, o cemento é um dos menos estudados e compreendidos. A apoptose em células do tecido ósseo têm sido relatada após o uso de Tiazolidinedionas (TZD), uma classe de medicamentos utilizada no tratamento do diabetes melitus tipo 2, representadas pela Rosiglitazona. Assim, os objetivos desse estudo foram: avaliar, in vivo, um protocolo de administração sistêmica da Rosiglitazona em camundongos a fim de estimular a apoptose de osteócitos em maxilares; o efeito da apoptose de osteócitos induzida por Rosiglitazona na formação e progressão de lesões periapicais em camundongos nos períodos experimentais de 7, 21 e 42 dias; e demonstrar a ocorrência de apoptose em cementócitos de camundongos os quais receberam ou não a Rosiglitazona. Foram utilizados camundongos wild type (C57BL/6) com 4 a 5 semanas de idade. No primeiro estudo, a etapa 1 foi realizada para definição de protocolo de administração sistêmica da Rosiglitazona para indução de apoptose em maxilares de camundongos. Os animais (n=24) receberam a Rosiglitazona via oral por 1, 2 ou 3 semanas (gavagem, dose de 10mg/kg) ou não (PBS+10%DMSO). Foram utilizadas as técnicas de TUNEL e DAPI para quantificação de células apoptóticas. Posteriormente, na etapa 2, lesões periapicais foram induzidas nos primeiros molares inferiores de camundongos wild type (C57BL/6) (n=60) após a administração ou não da Rosiglitasona. A câmara pulpar dos dentes foi exposta à microbiota da cavidade bucal pelos períodos de 7, 21 e 42 dias e os grupos foram divididos da seguinte forma: G1) veículo + lesão 7 dias; G2) veículo + lesão 21 dias; G3) veículo + lesão 42 dias; G4) TZD + lesão 7 dias; G5) TZD + lesão 21 dias; G6) TZD + lesão 42 dias. Foram realizadas avaliações em microscopia convencional para análise descritiva das lesões periapicais; microscopia de fluorescência para mensuração das lesões periapicais; histoenzimologia para a atividade da fosfatase ácida resistente ao tartarato (TRAP) e marcação de osteoclastos; absortometria radiológica de dupla energia (DXA) para avaliação da densidade mineral óssea (DMO) em osso longo e análise da expressão gênica de marcadores de osteócitos (Sost, Hyou1 e Dmp1). No segundo estudo, foram utilizadas as técnicas de TUNEL e DAPI para quantificação de cementócitos apoptóticos em dentes de camundongos wild type (n=12) que receberam ou não a Rosiglitazona. Na etapa 1 do primeiro estudo, pôde-se observar que a administração sistêmica da Rosiglitazona por 2 semanas promoveu a apoptose de osteócitos de forma mais expressiva quando comparada ao período de 1 semana, porém sem diferença significativa com o período de 3 semanas (p>0,05). Já na etapa 2, nos grupos os quais receberam a Rosiglitazona, pôde-se observar uma tendência a lesões periapicais maiores, porém sem diferença estatisticamente significante em comparação com animais que não receberam esse medicamento (p>0,05), além de promover, aos 21 dias de progressão da lesão periapical, maior número de osteoclastos e maior expressão dos genes Sost e Hyou1, sem diferença estatisticamente significante para a expressão do gene Dmp1, bem como na DMO dos fêmures. Adicionalmente, no segundo estudo, foi observado que, em camundongos que receberam a Rosiglitazona por 2 semanas, os cortes histológicos corados em TUNEL e DAPI demonstraram maior razão de cementócitos apoptóticos/cementócitos totais comparado ao grupo controle. Após as metodologias empregadas e os parâmetros analisados, pôde-se concluir que o uso sistêmico da Rosiglitazona estimulou a apoptose de osteócitos e cementócitos interferindo na formação e progressão de lesões periapicais em camundongos. The bone tissue is a specialized type of connective tissue that provides essential functions for the survival of the individual, composed predominantly of osteocytes. Among the mineralized tissues in the body, the cementum is one of the most poorly studied and understood. Apoptosis in the bone tissue have been reported after the use of Thiazolidinediones (TZD), a class of drugs used in the treatment of diabetes mellitus type 2, represented by Rosiglitazone. Thus, the aims of this study were: evaluate, in vivo, a protocol for systemic administration of Rosiglitazone in mice in order to stimulate the apoptosis of osteocytes in jaws; the effect of apoptosis of osteocytes induced by Rosiglitazone in the formation and progression of periapical lesions in mice in the experimental periods of 7, 21 and 42 days; and demonstrate the occurrence of apoptosis in cementocytes of mice which received or not the Rosiglitazone. We used mice wild type (C57BL/6) with 4 to 5 weeks of age. In the first study, the phase 1 was performed for the protocol definition of systemic administration of Rosiglitazone for induction of apoptosis in mice jaws. The animals (n=24) received the Rosiglitazone orally for 1, 2 or 3 weeks (gavage, dose of 10mg/kg) or not (PBS+10%DMSO). We used the techniques of TUNEL and DAPI for quantification of apoptotic cells. Subsequently, in phase 2, periapical lesions were induced in the first lower molars of wild type (C57BL/6) mice (n=60) after the administration or not of Rosiglitasone. The pulp chamber was exposed to the oral microbiota during 7, 21 and 42 days, and the groups were divided as follows: G1) vehicle + periapical lesions 7 days; G2) vehicle + periapical lesions 21 days; (G3) vehicle + periapical lesions 42 days; (G4) TZD + periapical lesions 7 days; G5) TZD + periapical lesions 21 days; (G6) TZD + periapical lesions 42 days. Evaluations were conducted in conventional microscopy for descriptive analysis of periapical lesions; fluorescence microscopy for measurement of periapical lesions; histoenzimology to the activity of acid phosphatase resistant tartrate (TRAP) for osteoclasts measurement; dual-energy x-ray absorptiometry (DXA) for evaluation of bone mineral density (BMD) in long bone and analysis of gene expression of osteocytes markers (Sost, Hyou1 and Dmp1). In the second study, TUNEL and DAPI techniques were used for the quantification of apoptotic cementocytes in wild type (n = 12) mice that received Rosiglitazone or not. In the phase 1 of the first study it was observed that the systemic administration of Rosiglitazone for 2 weeks showed the apoptosis of osteocytes in a more expressive manner when compared to the period of 1 week with no significant difference with the period of 3 weeks (p>0,05). On phase 2, in the groups which received the Rosiglitazone, it was observed a tendency of larger periapical lesions, but without statistically significant difference compared with animals that did not receive this drug (p>0,05), besides promoting, at 21 days of periapical lesion progression, greater number of osteoclasts and greater expression of genes Sost and Hyou1, and absence of statistically significant differences in the expression of the gene Dmp1 nor in the BMD of the femurs. In addition, in the second study, it was observed that, in mice that received the Rosiglitazone for 2 weeks, sections stained by TUNEL and DAPI showed significantly higher ratio of apoptotic cementocytes/total cementocytes compared to control group. After the methodologies used and the parameters analyzed, it can be concluded that the systemic use of Rosiglitazone stimulated the apoptosis of osteocytes and cementocytes interfering in the formation and progression of periapical lesions in mice.

Objetivo: Avaliar, in vivo, o efeito do tratamento endodôntico em sessão única utilizando a Terapia Fotodinâmica Antimicrobiana (aPDT) no reparo de lesões periapicais induzidas em dentes de cães, por meio da avaliação histopatológica e imunohistoquímica da angiogênese e de marcadores de formação óssea. O tratamento endodôntico em duas sessões com curativo de demora à base de hidróxido de cálcio (CH) foi utilizado como controle. Métodos: Lesões periapicais foram induzidas em 48 pré-molares superiores e inferiores de 6 cães, com 12 meses de idade. Após instrumentação dos canais radiculares, os dentes foram divididos, aleatoriamente, em 4 grupos: CH/120dias (d) e CH/180dias (d): canais radiculares preenchidos com curativo à base de CH; aPDT/120d e aPDT/180d: canais radiculares condicionados com fotossensibilizador à base de fenotiazina (10 mg/mL), por 1 minuto e irradiados com laser de diodo em toda a extensão dos canais, conforme as recomendações do fabricante. Em seguida, todos os canais radiculares foram obturados com cimento AH Plus e, após 120 ou 180 dias, os animais foram eutanasiados e os blocos contendo dentes e tecido ósseo foram submetidos ao processamento histotécnico e à coloração de hematoxilina e eosina (HE) para a análise descritiva da região periapical e mensuração das lesões periapicais, em microscopia convencional, e contagem de vasos sanguíneos sob luz convencional e no modo fluorescente. A análise imunohistoquímica foi realizada para avaliação dos marcadores da formação óssea osteopontina (OPN) e fosfatase alcalina (ALP). Os dados obtidos foram analisados estatisticamente utilizando os testes two-way ANOVA e qui-quadrado, com nível de significância de 5%. Resultados: Aos 120 dias, os dentes do grupo CH/120d apresentaram processo de reparo avançado, com ligamento periodontal apenas ligeiramente aumentado, presença abundante de fibras colágenas e escassas células inflamatórias. Os dentes do grupo aPDT/120d apresentaram o ligamento periodontal moderadamente aumentado e o infiltrado inflamatório era moderado. Poucas fibras colágenas foram observadas. Aos 180 dias, o mesmo padrão foi observado. As lesões periapicais nos grupos tratados com curativo à base de hidróxido de cálcio foram menores que as lesões nos grupos tratados com aPDT (p

O objetivo deste estudo foi avaliar a resposta do tecido conjuntivo subcutâneo de camundongos isogênicos após o uso da Terapia Fotodinâmica antimicrobiana (aPDT), utilizando dois fotossensibilizadores, Derivado fenotiazínico (Helbo Blue) e Curcumina, em diferentes tempos de aplicação de lasers (30 segundos, 1 minuto ou 2 minutos). Foram utilizados 141 camundongos isogênicos da linhagem BALB/c cujo tecido conjuntivo subcutâneo foi exposto aos dois fotossensibilizadores, e em seguida irradiado com laser diodo no grupo do Derivado Fenotiazínico e ao LED no grupo da Curcumina. Para cada fotossensibilizador foram utilizados três tempos de irradiação: 30 segundos, 1 minuto e 2 minutos. Ao final de cada um dos períodos experimentais (7, 21 e 63 dias), uma porção do tecido conjuntivo subcutâneo da área do centro da área em que foi aplicada a aPDT foi removida e submetida ao processamento histotécnico de rotina. Foi realizada a descrição do processo inflamatório de forma qualitativa e semi-quantitativa (por meio de escores). Adicionalmente, foi realizada a marcação imunohistoquímica para neutrófilos e macrófagos. Os dados numéricos foram analisados por meio do programa estatístico Sigma Plot 12.0®, utilizando o teste não paramétrico de Kruskal-Wallis, seguido pelo Pós-teste de Dunn, quando houve diferença significativa entre os grupos. O nível de significância adotado foi de 5%. Foi possível observar que, com relação aos parâmetros fibrosamento, espessura e infiltrado inflamatório, no período inicial de 7 dias, as alterações teciduais foram pequena magnitude. No período de 21 dias, apenas o parâmetro infiltrado inflamatório apresentou pequenas variações entre os grupos. No período final de 63 dias, a compatibilidade tecidual foi observada para os dois fotossensibilizadores (Derivado Fenotiazínico e Curcumina) que não apresentaram diferenças significativas nos parâmetros avaliados, independentemente do tempo de aplicação do laser. The aim of this study was to evaluate the response of subcutaneous connective tissue of isogenic mice after Antimicrobial Therapy (aPDT), using two photosensitizers, Phenothiazine Derivative (Helbo Blue) and Curcumin, at different laser application times (30 seconds, 1 minute or 2 minutes). One hundred and forty one (141) BALB/c isogenic mice were used, which had the subcutaneous connective tissue exposed to the two photosensitizers, followed by irradiation with laser diode to the Phenothiazine derivatives group, and LED to the Curcumin group. Three irradiation times were used to each photosensitizer: 30 seconds, 1 minute and 2 minutes. At the end of each experimental period (7, 21 and 63 days), a sample of the subcutaneous connective tissue, was collected and histotechnical processing was performed. Inflammatory process was described by qualitative and semi-quantitative analysis, using scores. Additionally, immunohistochemical technique was performed to identify neutrophils and macrophages. Data obtained was analyzed by the statistical program Sigma Plot 12.0®, using the non-parametric Kruskal-Wallis test, followed by the Dunn\'s post-test, when significant difference was found between groups. The significance level adopted was 5%. It was also possible to observe that, in relation with the parameters: fiber collagen formation, tissue thickness and inflammatory infiltrate, at the initial period of 7 days, the tissue alteration were of small significance (p

O tratamento minimamente invasivo tem sido cada vez mais empregado no tratamento das lesões de cárie dental, especialmente em crianças jovens. Com isso, a remoção do tecido cariado pelo método químico-mecânico permite uma maior conservação das estruturas dentais saudáveis. O Papacárie Duo® é um material de fácil aplicação e possui propriedades bactericidas e anti-inflamatórias. Este material é aplicado sobre a dentina cariada, a fim de promover um amolecimento desta, facilitando a sua remoção. Os efeitos celulares de Papacárie Duo® são pouco conhecidos, dessa forma esta pesquisa teve como objetivo avaliar o efeito do Papacárie Duo® em células indiferenciadas da polpa dental (Capítulo 1) e a capacidade do Papacárie Duo® induzir a ativação de macrófagos e a síntese de mediadores inflamatórios (Capítulo 2). O Papacarie Duo® foi preparado nas concentrações de 0,5 e 5% por meio de diluição seriada, a partir do gel obtido comercialmente. Células OD-21 e macrófagos J774.1 foram mantidas em cultura com os diferentes tratamentos por um período de estimulação de 24 horas para realização do teste de citotoxicidade (Ensaio LDH) e por 36 horas para avaliação da proliferação celular (Ensaio Colorimétrico MTT). A seguir foi realizada avaliação da expressão gênica relativa dos genes Ibsp, Runx2 e Spp1 em células OD-21; e dos genes Il10, Mmp9, Ptgs2 e Tnf em células J774.1, pelo método de transcrição reversa e reação em cadeia de polimerase em tempo real (qRT-PCR), utilizando o sistema TaqMan® após estimulação o período de 24 horas. O Papacárie Duo® a 5% foi citotóxico às células da polpa dental e inibiu a proliferação celular, assim como a expressão de Runx2 e Ibsp. Porém em ambas as concentrações estimulou a expressão de Spp1, a qual foi maior na concentração de 5%. Em macrófagos, o Papacárie Duo® foi citotóxico na concentração de 5%, mas não influenciou a proliferação celular em nenhuma das concentrações (0,5 e 5%). O LPS inibiu a proliferação celular na presença ou não de Papacárie Duo®, sem apresentar citotoxicidade. O Papacárie Duo® induziu a expressão de Ptgs2 e Il10, sem alterar Tnf e Mmp9. Portanto, o Papacárie Duo® foi citotóxico, dependendo da concentração, e apresentou efeito inibitório na diferenciação de células da polpa (OD-21), sem entretanto influenciar a proliferação celular. Papacárie Duo® não impediu a proliferação de macrófagos, porém foi citotóxico na concentração de 5% mas não à 0,5%. Adicionalmente, Papacárie Duo® modulou a ativação de macrófagos pela indução da expressão de Ptgs2 e Il10, sem alterar a expressão de Tnf e Mmp9. The minimally invasive treatment has been increasingly used in the treatment of dental caries, particularly in young children. Thus, the removal of carious tissue by chemical-mechanical method allows greater conservation of healthy tooth structure. The Papacárie Duo® is an easily applied material, and has bactericidal and anti-inflammatory properties. This material is applied over the carious dentin in order to promote a softening thereof, facilitating its removal. The cellular effects of Papacárie Duo® are little known, therefore this research was to evaluate the effect of Papacárie Duo® in undifferentiated cells from dental pulp (Chapter 1) and the capacity of Papacárie Duo® to induce macrophage activation and synthesis inflammatory mediators (Chapter 2). The Papacárie Duo® was prepared at concentrations of 0.5 and 5% by serial dilution from the gel obtained commercially. OD-21 cells and J774.1 macrophages were maintained in culture with the different treatments for a period of 24 hours to perform the cytotoxicity assay (LDH assay) and for 36 hours for evaluation of cell proliferation (MTT colorimetric assay). The following, was carried out the assessment of the relative gene expression of Ibsp, Runx2 and Spp1 genes in OD-21 cells, and Il10, Mmp9, Tnf and Ptgs2 in J774.1 cells by reverse transcription method and reaction in real time polymerase chain reaction (qRT-PCR) using the TaqMan system after the stimulation period of 24 hours. The 5% Papacárie Duo® was cytotoxic to cells of dental pulp and inhibited cell proliferation and the expression of Runx2 and Ibsp. However, in both concentrations stimulated the expression of Spp1, which was higher at a concentration of 5%. In macrophages, the Papacárie Duo® was cytotoxic at concentrations of 5%, but did not affect the cell proliferation in any of the concentrations (0.5 and 5%). LPS inhibited cell proliferation in the presence or absence of Papacárie Duo® without giving cytotoxicity. The Papacárie Duo® induced the expression of Ptgs2 and Il10, without changing Tnf and Mmp9. Therefore, the Papacárie Duo® was cytotoxic, depending on the concentration, and showed inhibitory effect on the differentiation of pulp cells (OD-21), but without influencing cell proliferation. Papacárie Duo® not prevent macrophage proliferation, but was cytotoxic at a concentration of 5% but not more than 0.5%. Additionally, Papacárie Duo® modulated the activation of macrophages by inducing Il10 and Ptgs2 expression without altering the expression of ,Tnf, and Mmp9.

O presente estudo avaliou a composição química da dentina radicular de dentes submetidos à radioterapia por meio de Espectroscopia Raman Confocal (ERC). Vinte pré-molares inferiores humanos homólogos foram selecionados e distribuídos em dois grupos (n=10) de acordo com a irradiação: não irradiados e irradiados, submetidos à radioterapia fraccionada com raios-X de 6 MV. Os dentes foram seccionados e submetidos à análise da composição química da dentina radicular submetida à radioterapia por meio de ERC, em relação aos picos de fosfato, carbonato e amidas I, II e III. Foi utilizada objetiva de 40x (Olympus), com luz de comprimento de onda de 785 nm, compreendendo a faixa espectral de 400 - 1800 cm-1, na região de baixa frequência, com resolução espacial de 2 µm. Para a geração do espectro, a potência do laser utilizada foi de 21 mW e o tempo de exposição de 5 segundos. A intensidade dos picos fosfato - PO43- (590 cm-1) e carbonato - CO32- (1070 cm-1) no ERC são proporcionais à quantidade de conteúdo inorgânico, enquanto que a amida I (1670 cm-1), II (1453 cm-1) e III (1267 cm-1) são proporcionais ao conteúdo orgânico (colágeno). Os dados obtidos foram submetidos à análise estatística (Teste T, P

Em dentes com lesão periapical, o tratamento endodôntico em duas sessões, com aplicação de curativo de demora, apresenta maior sucesso no combate à infecção intra e extrarradicular, proporcionando reparo dos tecidos apicais e periapicais. No entanto, o tratamento em sessão única vem sendo recomendado em função de reduzir custos e sessões de tratamento, apesar da sua comprovada ineficácia na erradicação dos micro-organismos e taxa de sucesso inferior. Diante da necessidade de reduzir o tempo clínico e favorecer a reparação tecidual, a aplicação de medicação com pasta à base de hidróxido de cálcio apenas na região apical e periapical, obtida por meio de seu extravasamento via canal radicular, seguida pela obturação na mesma sessão poderia constituir uma nova opção de tratamento. Com este objetivo, um total de 60 raízes de pré-molares de cão com rizogênese completa e lesões periapicais experimentalmente induzidas, foram aleatoriamente divididos em 3 grupos submetidos a diferentes protocolos de tratamento endodôntico: 1) novo protocolo em sessão única, com aplicação de pasta à base de hidróxido de cálcio na região apical e periapical antes da obturação; 2) tratamento convencional em duas sessões, com utilização de curativo de demora com pasta à base de hidróxido de cálcio durante 14 dias; 3) tratamento convencional em sessão única. Para avaliação da resposta tecidual, os dentes foram avaliados radiograficamente e histopatologicamente, 120 dias após o tratamento endodôntico com a eutanásia dos animais. Os espécimes foram processados histotecnicamente, corados com HE e avaliados com microscopia de luz convencional e de fluorescência. Os resultados obtidos foram analisados estatisticamente utilizando os testes qui-quadrado, Fisher, Anova e pós teste de Tukey, com nível de significância de 5% em todos os testes. De acordo com os resultados radiográficos, os dentes tratados com o novo protocolo apresentaram redução na área radiolúcida periapical semelhante aos dentes tratados em duas sessões (p

O objetivo do presente estudo foi avaliar a associação entre lesões de cárie dentária e defeitos do desenvolvimento do esmalte (DDEs) com o índice de massa corporal e com polimorfismos nos genes que codificam as metaloproteinases 8, 13 e 20, em uma população de crianças amazônicas. A amostra foi constituída de 221 crianças, com idade entre 9 e 12 anos, de ambos os gêneros, matriculadas em quatro escolas públicas da cidade de Manaus - Amazonas. Durante o exame clínico foram obtidos os índices CPO-D e/ou ceo-d, dados referentes aos DDEs e dados antropométricos (peso e altura). Os responsáveis responderam a um questionário sobre hábitos de higiene bucal e dieta. Amostras de saliva foram coletadas como fonte de DNA genômico e, por meio do método Taqman, por PCR em tempo real, realizou-se a genotipagem das regiões rs17099443 e rs3765620 no gene que codifica a MMP8; rs478927 e rs2252070 no gene que codifica a MMP13; e rs1784418 no gene que codifica a MMP20. Os dados foram submetidos à análise estatística empregando os testes de Shapiro-Wilk, ANOVA, Tukey, Qui-quadrado, Exato de Fisher e a razão de chance, com nível de significância de 5%. De acordo com os resultados obtidos verificou-se que, nas crianças com baixo peso, a média de lesões de cárie dental foi 1,00 (DMP 1,00), nas eutróficas a média de lesões de cárie dental foi de 1,57 (DMP 2,00), nas com sobrepeso, a média foi de 1,44 (DMP 1,86) e nas crianças obesas foi de 3,12 (DMP 2,63). Crianças obesas apresentaram mais lesões de cárie que as crianças eutróficas e com sobrepeso (p

O presente estudo teve como objetivo avaliar as propriedades físico-químicas e citotoxicidade quatro cimentos endodônticos, com diferentes bases químicas, utilizados na rotina clínica do Cirurgião-dentista. Foram utilizados os cimentos AH Plus®, BioRoot RCS®, Endomethasone N® e Sealapex®. Foram realizados os testes físico-químicos de tempo de endurecimento, radiopacidade e escoamento, segundo a especificação nº 57 da ANSI/ADA (2012). Para o teste de citotoxicidade, foram coletadas amostras sanguíneas de seis doadores voluntários adultos, com idade entre 18 e 35 anos, de ambos os gêneros. Foi realizada a cultura de células primárias de linfócitos do sangue periférico humano em contato com o eluato dos cimentos obturadores, e a viabilidade celular foi analisada por meio do ensaio de MTT. Cada teste foi realizado em triplicata, tanto para propriedades físico-químicas como para o ensaio do MTT, sendo os resultados analisados empregando o programa GraphPad Prism 5®, por meio do teste Oneway ANOVA e pós-teste de Tukey, com nível de significância de 5%. De acordo com os resultados obtidos, tanto o AH Plus® quanto o BioRoot RCS® apresentaram tempo de endurecimento de 1450 minutos e 255 minutos, respectivamente; Endomethasone N® não tem tempo de endurecimento citado pelo fabricante, e Sealapex® não tomou presa no período do estudo (168 horas). Para o teste de radiopacidade, todos os materiais avaliados apresentaram radiopacidade acima de 3 mm alumínio, como recomendado pela especificação nº 57 da ANSI/ADA (2012). Para o teste de escoamento, segundo a ISO 6876:2012, um cimento endodôntico não deve apresentar um diâmetro inferior a 17 mm. Observamos a maior média para AH Plus® (39,68 mm), seguido em ordem decrescente por Sealapex® (35,73 mm), Endomethasone N® (34,22 mm) e BioRoot RCS® (23,81 mm). Quanto à viabilidade celular, Endomethasone N® foi citotóxico sobre os linfócitos em todas as concentrações (p0,05). Podemos concluir que todos os materiais avaliados atenderam aos parâmetros estabelecidos pela ANSI/ADA para os testes físico-químicos realizados. Além disso, o Endomethasone N® apresentou citotoxicidade sobre os linfócitos humanos, e os demais materiais analisados apresentaram viabilidade celular em níveis aceitáveis The present study had as objective to evaluate the physicochemical properties and cytotoxicity of four root canal sealers with different chemical bases, used in the clinical routine of the Dentistry. The AH Plus®, BioRoot RCS®, Endomethasone N® and Sealapex® cements were used. The physicochemical tests of setting time, radiopacity and flowability were performed according to ANSI/ADA specification (nº 57). For the cytotoxicity test, blood samples were collected from six adult voluntary donors, aged 18-35 years, of both genders. Primary human lymphocyte cell cultures were placed in contact with the eluate from the plug cements, and cell viability was analyzed by the MTT assay. Each test was performed in triplicate, both for physicochemical properties and for the MTT assay. The results were analyzed using the GraphPad Prism 5® program, using the Oneway ANOVA test and Tukey\'s post-test, with a significance level of 5%. According to the results obtained, both AH Plus® and BioRoot RCS® presented setting time of 1450 minutes and 255 minutes, respectively; Endomethasone N® does not have setting time quoted by the manufacturer, and Sealapex® did not set in the study period (168 hours). For the radiopacity test, all evaluated materials had radiopacity above 3 mm aluminum, as recommended by the ANSI/ADA specification (nº 57). For the flow test, according to ISO 6876:2012, an endodontic cement must not have a diameter of less than 17mm. We observed the highest mean for AH Plus® (39.68 mm), followed in descending order by Sealapex® (35.73 mm), Endomethasone N® (34.22 mm) and BioRoot RCS® (23.81 mm). Regarding cell viability, Endomethasone N® was cytotoxic on lymphocytes at all concentrations (p 0.05). We can conclude that all materials evaluated met the parameters established by ANSI/ADA for the physicochemical tests performed. In addition, Endomethasone N® showed cytotoxicity on human lymphocytes, and the other materials analyzed presented cell viability at acceptable levels

O chá verde, obtido da Camellia sinensis, é uma das bebidas mais populares em todo o mundo e, recentemente, tem sido foco de pesquisas científicas por apresentar efeitos benéficos na saúde geral. Estudos laboratoriais e epidemiológicos sugerem que, dentre os polifenóis que compõem o chá verde, a Epigalocatequina-3-galato (EGCG) é o mais bioativo e responsável por sua ação antioxidante, anti-inflamatória, antimicrobiana, inativadora de LPS bacteriano, anticarcinogênica, antitumoral, anti-angiogênica, anti-hipertensiva e reparadora tecidual, podendo atuar na prevenção e tratamento do câncer, doenças cardiovasculares, neurodegenerativas, hepáticas e renais. Em diversas doenças ósseas, a EGCG também desempenha um importante papel protetor, atuando na indução da mineralização e inibição da osteoclastogênese. No entanto, seus possíveis efeitos na inflamação e na reabsorção óssea associadas à lesão periapical ainda não foram avaliados. Portanto, o objetivo do presente estudo foi desenvolver uma formulação para uso endodôntico à base de EGCG com propriedades físico-químicas e biológicas que permitam seu uso como curativo de demora entre sessões. As formulações testadas incluíram: EGCG diluída em água e diferentes concentrações de EGCG (1,25; 5; 10 e 20 mg/mL) veiculadas em polietilenoglicol 400 (PEG). O óxido de zinco foi utilizado como agente radiopacificador. Em função da possível degradação dos produtos fenólicos em função do ambiente e do tempo, uma solução obtida por meio do contato prolongado da EGCG com o dente também foi avaliada (produto da degradação). Inicialmente, foi realizada a caracterização físico-química da formulação de EGCG por meio de espectrofotometria em Ultravioleta/Visível (UV/Vis), em contato com soluções contendo zinco, óxido de zinco e acetato de zinco. Os estudos biológicos foram realizados para avaliar sua compatibilidade tecidual no tecido subcutâneo de camundongos, por meio da avaliação do extravasamento plasmático após 24 horas e da análise de aspectos macroscópicos e microscópicos aos 7, 21 e 63 dias após a inserção de tubos de polietileno contendo as formulações. Neste estudo, uma pasta a base de hidróxido de cálcio (Calen®) foi utilizada como controle. Na análise macroscópica, realizada por meio de fotografias, foram atribuídos escores aos parâmetros de ulceração epitelial, vascularização, necrose e edema. Na análise microscópica, realizada em microscopia de luz convencional e de fluorescência, foram avaliados os parâmetros de infiltrado inflamatório, vascularização, focos de abscessos, cápsula fibrosa, edema e necrose. Os escores dos resultados biológicos foram submetidos à análise estatística utilizando o teste do Qui-quadrado ou Exato de Fisher e para análise dos resultados quantitativos do extravasamento plasmático foi utilizada análise de variância (ANOVA), seguida pelo pós-teste de Tukey. O nível de significância adotado foi de 5%. Os estudos físico-químicos mostraram que a EGCG manteve seu comprimento de onda original em 274 nm quando associada ao óxido de zinco, tendendo à formação de uma banda de absorção em 325 nm. A associação da EGCG com acetato de zinco ocasionou diminuição da banda de absorção em 274 nm e formação de uma nova banda em 323 nm. Os estudos biológicos mostraram, nos parâmetros macroscópicos que, em todos os períodos avaliados, todas as formulações apresentaram compatibilidade tecidual, com ausência de ulceração epitelial, presença de leve necrose tecidual superficial, edema e vascularização, não havendo diferença significante entre os grupos avaliados (p>0,05). Na análise microscópica, em todos os períodos foi verificada ausência de focos de abscesso, edema e necrose e presença de suave ou moderado infiltrado inflamatório, cápsula fibrosa e neovascularização, semelhante entre todos os grupos (p>0,05). A avaliação dos espécimes corados com HE em microscopia de fluorescência favoreceu a visualização dos vasos sanguíneos e de fibras colágenas, constituindo metodologia adicional para esta finalidade. Na avaliação do extravasamento plasmático, o produto da degradação da ECGG apresentou extravasamento de corante azul de Evans por grama de tecido inferior (0,0514 ±0,0220 mg/mL) às demais formulações testadas (p 0.05). On microscopic examination, in all periods was verified absence of abscess foci, edema and necrosis and the presence of mild or moderate inflammatory infiltrate, fibrous capsule and neovascularization, similar among all groups (p> 0.05). The evaluation of the specimens stained with HE under fluorescence microscopy enhancve the visualization of the blood vessels and collagen fibers, constituting an additional methodology for this purpose. In the evaluation of plasma extravasation, the product of degradation of ECGG presented values of Evans blue dye extravasation by gram of tissue (0.0514 ± 0.0220 mg / mL) lower to the other tested formulations (p

O conhecimento dos eventos biológicos que ocorrem no periápice dos dentes com necrose pulpar se torna importante para compreender o desenvolvimento das lesões periapicais. Muitas são as moléculas e mediadores que participam na instalação da lesão periapical, a partir da infecção bacteriana que ocorre no interior dos canais radiculares. Assim, o objetivo do presente trabalho foi avaliar moléculas do sistema imune inato, da osteoclastogênese e metaloproteinases em lesões periapicais (LP) induzidas experimentalmente em camundongos knockout e wild type. Para esse objetivo, o presente estudo foi dividido em dois trabalhos distintos. O primeiro teve como objetivo avaliar a expressão de metaloproteinase 2 (MMP2) e metaloproteinase 9 (MMP9) durante a progressão da LP em camundongos knockout para TLR2 (TLR2 KO) e MyD88 (MyD88 KO), em comparação com camundongos wild type (WT). O segundo estudo avaliou a correlação da expressão gênica e imunomarcação de RANK, RANKL, OPG, TLR2 e MyD88 durante a progressão da LP em camundongos WT. No primeiro estudo lesões periapicais foram induzidas em molares inferiores de 54 camundongos TLR2 KO, MyD88 KO e WT (n=18/grupo). Após 7, 21 e 42 dias, os animais foram eutanaziados e as mandíbulas foram dissecadas e submetidas a processamento histotécnico. Os cortes histológicos foram submetidos a imunohistoquímica e posteriormente foi avaliada presença ou ausência de MMP2 e MMP9 nos diferentes grupos. No segundo estudo, 35 camundongos WT foram utilizados. As lesões periapicais foram induzidas nos primeiros molares inferiores de ambos os lados. Após 0 (G0), 7 (G7), 21 (G21) e 42 (G42) dias, os animais foram anestesiados e eutanasiados para que as mandíbulas fossem dissecadas e divididas ao meio.O lado direito das mandíbulas foi para o processamento histotécnico, para posterior marcação de RANK, RANKL, OPG, TLR2 e MyD88, por meio da imuno-histoquímica do lado esquerdo da mandíbula foi utilizado para a extração de RNA, para a determinação da expressão gênica de RANK (Tnfrsf11a), RANKL (Tnfrsf11), OPG (Tnfrsf11b), TLR2 (Tlr2) e MyD88 (Myd88) utilizando quantificação em Tempo Real da Reação da Polimerase em Cadeia (qRT-PCR). Para ambos os estudos, testes paramétricos e não paramétricos foram realizados com nível de significância de 5%. Foi possível observar, no primeiro estudo, que nos períodos iniciais da progressão da lesão periapical, houve um aumento na imunomarcação de MMP9 nos camundongos TLR2 KO e MyD88 KO, quando comparados aos WT, diferente da MMP2 que não se observou nenhum aumento na imunomarcação. No entanto, aos 42 dias observou-se uma redução da imunomarcação de MMP2 e um aumento da MMP9 nos camundongos TLR2 KO. Adicionalmente, no segundo estudo, foi possível observar um aumento da imunomarcação para RANK, RANKL, OPG, TLR2 e MyD88 durante a progressão da lesão periapical (p

O receptor NLRP12 é um receptor intracelular que está envolvido no reconhecimento de PAMPs e DAMPs durante uma infecção. Foi visto que durante a osteoclastogênese, há uma diminuição da transcrição de NLRP12, e que este receptor inibe a reabsorção óssea através da supressão da via alternativa de NF-κB, exercendo um papel protetor sobre o tecido ósseo. Além disso, foi observado que a deficiência de NLRP12 em monócitos sob o estímulo de RANKL levou a maior estabilização de NIK e maior translocação de RelB para o núcleo, aumentando a formação dos osteoclastos in vitro. Portanto, o objetivo deste estudo foi avaliar o papel de NLRP12 no desenvolvimento e progressão da lesão periapical induzida em camundongos. Para isso, foi induzida a lesão periapical dos primeiros molares inferiores dos camundongos fêmeas C57/Bl6 (WT) e camundongos deficientes para o receptor NLRP12 (Nlrp12-/-). Após 14 e 21 dias, as amostras de mandíbula foram submetidas às análises: determinação da área de lesão periapical em cortes histológicos; expressão gênica de marcadores osteoclastogênicos por qPCR; contagem de osteoclastos submetidos ao ensaio de histoenzimologia (TRAP); avaliação enzimática das MMPs por Zimografia. Os linfonodos cervicais foram submetidos à análise da expressão dos fatores de transcrição T-bet, RORγt, GATA-3 e Foxp-3 por qPCR. Aos 14 dias, na análise histomorfométrica os animais Nlrp12-/- apresentaram uma maior lesão periapical quando comparados aos animais WT, associado com o aumento da expressão de Trap, Catepsina K e MMP-9 em amostras de hemi-mandíbulas com lesão. Além disso, o número de células TRAP positivas foi significantemente maior em Nlrp12-/- com lesão quando comparado com seu controle, enquanto no grupo WT com e sem lesão foram semelhantes. Assim como foi observado o maior aumento dos osteoclastos presentes no local da lesão dos animais Nlrp12-/-, estes também se mostraram com maior atividade gelatinolítica de MMP-9 e MMP-2 em relação ao seu controle, diferente dos animais WT que não apresentaram diferença entre os grupos controle e com lesão. Ainda nesse período, foi observado nas amostras de linfonodos cervicais que, no grupo Nlrp12-/- houve uma tendência à maior expressão de RORγt, seguidos de menor expressão de T-bet quando comparados com o grupo WT. Aos 21 dias, os animais WT e Nlrp12-/- apresentaram lesões periapicais de tamanhos semelhantes. Além disso, somente o grupo Nlrp12-/- com lesão apresentou um aumento significativo da expressão de Trap em relação ao seu controle e a expressão de Catepsina K foi semelhante em ambos os grupos. Neste período houve um aumento na quantidade de células TRAP positivas em ambos os grupos com lesão quando comparados com seus respectivos controles, entretanto também não houve diferença entre os animais WT e Nlrp12-/-. A atividade de MMP-9 e MMP-2 foram semelhantes entre os animais WT e Nlrp12-/- e entre seus respectivos controles aos 21 dias. Nossos dados sugerem que a deficiência de NLRP12 levou a uma maior perda óssea aos 14 dias de lesão periapical e que isso ocorre via modulação da formação e atividade dos osteoclastos. Portanto, o NLRP12 inibe a osteoclastogênese e a atividade dos osteoclastos durante a fase inicial da lesão periapical, retardando o desenvolvimento da doença. NLRP12 is an intracellular sensor that recongnizes PAMPS and DAMPs during infeccion. It was seen that NLRP12 transcription is down-regulated during osteoclastogenesis, and NLRP12 protect bone via suppression of alternative NF-κB-induced osteoclastogenesis. It has been shown that NLRP12 deficiency in monocytes under RANKL stimuli exhibited more stabilization of NIK and nuclear translocation of RelB, increasing osteoclasts formation in vitro. Therefore, the aim of this study was to evaluate the role of NLRP12 in the development and progression of experimentally induced periapical lesions in mice. Periapical lesions were induced in first molars of WT and NLRP12 knockout (KO) mice. Samples were collected at 14 and 21 days of the lesion for the analyses. Jaw samples with lesion and control area were subjected to periapical lesions area determination by histological sections; osteoclastogenic markers expression by q-PCR; count of osteoclasts submitted to the enzyme assay for TRAP; evaluation of MMPs activity by Zymography. The expression of T cells markers´ transcription factors was evaluated in lymph nodes by q-PCR. Fourteen days after periapical lesion induction, histological analysis revealed that NLRP12KO mice exhibited higher area of periapical lesion compared to WT group, which was associated with up-regulated mRNA expression of Trap, Cathepsin K and MMP-9 in the jaw samples. Moreover, the number of multinuclear TRAP-stained cells was significantly higher in the NLRP12KO with lesion group when compared to it control, whereas in the WT the number between the lesion and control groups were similar. Still, NLRP12KO showed higher MMP-9 and -2 gelatinolytic activity than it control, unlike WT mice that showed no difference between control and lesion group. In this period, NLRP12KO mice lymph nodes showed more RORγt expression than WT mice and less T-bet expression. At 21 days, WT and NLRP12KO presented periapical lesions of similar sizes. In addition, NLRP12KO group with lesion showed a significant increase in Trap expression when compared with their control, but the increase in Trap e Cathepsin K was similar in both groups. Additionally, there was an increase of multinuclear TRAP-stained cells in both lesion groups when compared with their respective controls; however, there was also no difference between WT and NLRP12KO mice. MMP-9 and -2 activity was similar between WT and NLRP12KO and with their respective controls at 21 days. Our results suggest that NLRP12 deficiency led to increased bone loss at 14 days of periapical lesion and it occurs due to increased osteoclasts formation and activity. Therefore, NLRP12 inhibits osteoclastogenesis and osteoclasts activity during the early stages of periapical lesion, slowing the development of the disease.

O objetivo do presente estudo foi avaliar ossos maxilares e lesões periapicais induzidas em ratas ovariectomizadas submetidas ou não ao tratamento com bisfosfonato (Alendronato - ALD) ou com inibidor da catepsina K (Odanacatib - ODN). Foram utilizadas 45 ratas, divididas em 6 grupos: I sham (cirurgia de ovariectomia fictícia); II sham e lesão periapical (LP); III - ovariectomia (OVX) sem LP; IV OVX e LP; V OVX, LP e ALD; e Grupo VI - OVX, LP e ODN. Um dia após a realização da OVX ou da cirurgia fictícia, os animais dos grupos V e VI começaram a receber ALD ou ODN, via gavagem. Decorridas 9 semanas da realização da OVX, os primeiros molares dos grupos II, IV, V e VI foram submetidos à indução de LP por 3 semanas. Decorrido este período, foi realizada colheita microbiológica dos canais radiculares para a quantificação de micro-organismos e os animais foram submetidos à eutanásia. Fêmures foram analisados por meio de densitômetro, para registro da densidade mineral óssea (BMD). As maxilas foram analisadas por meio de microtomografia computadorizada (micro-CT) para avaliação da microarquitetura e BMD do osso interradicular e as mandíbulas para avaliação do volume das LP. Os primeiros molares inferiores foram submetidos ao processamento histotécnico, sendo os cortes corados com hematoxilina e eosina (HE) e analisados em microscopia convencional. Paralelamente, foi realizada a análise morfométrica da área das lesões periapicais, em microscopia de fluorescência e histoenzimologia para a atividade da TRAP. Os primeiros molares superiores foram submetidos à detecção da expressão gênica de citocinas, marcadores da osteoclastogênese e de metaloproteinases da matriz. Os resultados obtidos foram submetidos à análise estatística apropriada, com nível de significância de 5%. A OVX afetou a BMD do fêmur e da maxila e a microarquitetura apenas do fêmur. O ALD recuperou a BMD dos ossos avaliados. A OVX não foi capaz de influenciar nos níveis de contaminação microbiana do canal radicular. As LP dos animais do grupo IV apresentaram expressão aumentada de RANK, RANKL, IL-1β, IL-6, TNF-α, MMP-8 e 13, enquanto o tratamento com ALD (grupo V) foi capaz de reduzir a expressão de IL-6 e MMP-8, ao mesmo nível que nas LP do grupo II. Além disso, as LP do grupo IV foram maiores (área e volume), em comparação às dos grupos II e V. O ODN, na dose e frequência de administração aplicada, não foi capaz de promover alterações significantes. A OVX e os tratamentos antirreabsortivos não influenciaram no número de osteoclastos ao redor da LP. Assim, concluiu-se que a condição hipoestrogênica induzida pela OVX foi capaz de diminuir a BMD do fêmur e da maxila e alterou a microarquitetura do fêmur. Apenas o ALD foi capaz de recuperar o fenótipo da BMD, ou seja, retorno aos níveis observados nos animais saudáveis. Ainda, a OVX agravou o processo de reabsorção, a inflamação e a expressão de MMPs, provocando lesões periapicais maiores. O ALD e o ODN proporcionaram uma melhora da resposta periapical. Entretanto, apenas o tratamento com ALD recuperou o fenótipo, fazendo com que as lesões periapicais fossem similares às lesões dos animais saudáveis. The aim of this study was to evaluate maxillary bones and apical periodontitis induced in ovariectomized rats treated or not with bisphosphonate (Alendronate - ALD) or cathepsin K inhibitor (Odanacatib - ODN). Forty-five female rats were divided into 6 groups: I sham surgery; II - sham and apical periodontitis (AP); III - ovariectomy (OVX) without AP; IV - OVX and AP; V - OVX, AP and ALD; and Group VI - OVX, AP and ODN. One day after OVX or sham surgery, the animals in groups V and VI started receiving ALD or ODN, by gavage. After 9 weeks, the first molars of the rats in groups II, IV, V and VI were subjected to induction of AP for 3 weeks. Microbiological root canal sampling was collected for quantification of microorganisms and the animals were euthanized. Bone mineral density (BMD) of the femurs was analyzed by bone densitometry. The maxillas were analyzed by microcomputed tomography (micro-CT) to determine the microarchitecture and BMD of the interradicular bone while the mandibles were analyzed to determined AP volume. The mandibular first molars were subjected to histotechnical processing and hematoxylin and eosin-stained histological sections were examined with conventional microscopy. In addition, a morphometric analysis of AP area was performed using fluorescence microscopy and tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP) histoenzymology. The maxillary first molars were used to evaluate the gene expression of cytokines, osteoclastogenesis markers and matrix metalloproteinases (MMP) using RT-PCR. The results were subjected to appropriate statistical analysis with 5% significance level. OVX affected femoral and maxillary BMD and femoral microarchitecture. ALD recovered the BMD of both types of bones. OVX was not able to influence the microbial levels of the root canal. In group IV, AP showed increased expression of RANK, RANKL, IL-1β, IL-6, TNF-α, MMP-8 and MMP-13, while ALD treatment (group V) reduced IL-6 and MMP-8 expression to the same level as the AP in group II. In group IV, AP area and volume were larger than in groups II and V. ODN, in the dosage and frequency of administration applied, was not able to promote significant changes. OVX and antiresorptive treatments did not influence the number of osteoclasts around the AP region. In conclusion, the hypoestrogenic condition induced by OVX was able to decrease the BMD of femur and maxilla and only the microarchitecture of the femur. ALD was able to recover the BMD phenotype, i.e., return to the levels observed in healthy animals. Furthermore, OVX exacerbated resorption, inflammation and MMP expression, inducing larger lesions. Treatment with ALD and ODN resulted in an improvement of the periapical response. However, only ALD recovered the phenotype, with AP similar to that of healthy animals.

A proposta desse projeto de pesquisa foi analisar e caracterizar células-tronco encontradas na polpa dentária e papila apical de um mesmo doador tratadas sob as mesmas condições de cultivo utilizando abordagens que permitem analises de componentes intracelulares que nunca antes haviam sido analisados nessas células. Para tanto, populações enriquecidas pela expressão CD146, STRO-1 e CD90 foram isoladas de terceiros molares inclusos indicados para exodontia, totalizando 16 pacientes e 16 dentes. Como controles negativos, foram utilizadas as células negativas para esses marcadores. Células positivas e negativas para cada marcador foram comparadas entre si e com os resultados dos outros marcadores. Para cada um dos marcadores e respectivos controles foram realizadas analises de cinética celular, ensaios morfológicos e ensaios subcelulares utilizando microscopia de luz sincrotron. Os dados obtidos foram submetidos à teste ANOVA e teste de Tukey (a=0,05) quando pertinente e/ou a análises descritivas. As células isoladas da polpa dentária e papila apical se comportaram diferentemente uma das outras. Nos ensaios de cinética celular, as células enriquecidas (positivas) apresentaram crescimento mais lento quanto comparados com as células não enriquecidas (negativas), independente do marcador em questão. Nos ensaios morfológicos, células CD 90+ da polpa dentária exibiram a menor área e menor perímetro quando comparadas com as CD 146+ e STRO-1+. A presença de compostos iônicos vistos por luz sincrotron mostraram maior fração de massa nas células positivas da polpa dentária. Dentre os elementos traços estatisticamente mais prevalentes foram o fósforo, cobre, zinco, potássio, estrôncio, cálcio e cloro, sendo este último presente na polpa e papila nos 3 marcadores estudados. Concluímos que tanto da polpa dentária quanto na papila apical de dentes humanos, há presença de células tronco multipotentes expressados pelos três marcadores e que apesar de serem obtidos do mesmo dente e doador e cultivados de forma iguais ela tem comportamentos diferentes. As alterações bioquímicas celulares estudadas pelos elementos traços em células separadas por diferentes marcadores foi o primeiro passo para possibilitar os conhecimentos mecanicistas vitais celulares que não são observadas em microscopia padrão. Porém, novos estudos como permitir a visualização da localização espacial de biomarcadores espectrais caracterizados, pode ajudar a consolidar os resultados aqui encontrados. Assim, a análise e classificação desse método de estudo pode ser refinado em pesquisas futuras, incluindo no uso de outros tipos de tecidos dentais para caracterizar as células tronco dentais. The purpose of this research project was to analyze and characterize stem cells found in dental pulp and apical papilla from the same donor treated under the same culture conditions using approaches that allow analysis of intracellular components that had never before been analyzed in these cells. Therefore, populations enriched for CD146 expression, STRO-1 and CD90 were isolated from third molars indicated for extraction, totaling 16 patients and 16 teeth. As negative controls, cells negative for these markers were used. Positive and negative cells for each marker were compared and the results of other markers. For each of the markers and their controls were carried out analysis of cell kinetics, morphological tests and subcellular assays using synchrotron light microscopy. The data were submitted to ANOVA and Tukey\'s test (a = 0.05) where relevant and / or descriptive analyzes. Cells isolated from the apical papilla and dental pulp behaved differently from each other. In cell kinetics assays, enriched cells (positive) showed slower growth as compared with non-enriched cells (negative), regardless of the marker in question. In morphological studies, CD 90+ cells in the dental pulp exhibited a smaller area and lower perimeter compared to CD 146+ and STRO-1 +. The presence of ionic compounds seen by synchrotron light showed higher mass fraction of positive cells in the dental pulp. Among the most prevalent statistical trace elements are phosphorous, copper, zinc, potassium, strontium, calcium and chlorine, the latter being present in the pulp, and the papilla 3 markers studied. We conclude that both the dental pulp as the apical papilla of human teeth, there is presence of multipotent stem cells expressed the three markers and that although they are obtained from the same tooth and donor and grown in the same way it has different behaviors. The biochemical cellular changes studied by trace elements in separate cells with different markers was the first step to allow mechanistic cellular vital knowledge that is not observed in standard microscopy. However, new studies as to visualize the spatial location characterized spectral biomarkers can help consolidate the present results. Thus, the analysis and classification of the study method can be refined in future research including the use of other types of dental tissues to characterize the dental stem cell.

O objetivo deste estudo foi avaliar a prevalência de cárie dentária e sua associação com índice de massa corpórea (IMC), bem como seus fatores de risco demográficos (sexo e idade), socioeconômicos, familiares (escolaridade dos pais, número de filhos) e comportamentais (dieta e práticas de higiene bucal) de crianças e adolescentes. Duzentos e trinta e sete crianças e adolescentes foram inseridos neste estudo. Após a autorização de participação, aplicou-se um questionário, realizou-se exame clínico intrabucal das crianças e a coleta dos dados antropométricos. Os parâmetros analisados neste estudo foram peso, altura, IMC-para-idade e número de dentes cariados, extraídos e obturados para posterior cálculo do ceo-d ou CPO-D para dentes decíduos e permanentes, respectivamente. Teste do Qui-quadrado e o teste T foram usados para analisar a associação entre as variáveis (idade, etnia, gênero, hábitos de higiene bucal e alimentar) e alterações do IMC. A média e desvio padrão do índice ceo-d nos grupos de baixo peso, peso normal, grupos de sobrepeso e obesidade, foram de 9.5 (± 0.70), 5.06 (± 4.54), 7.66 (± 4.41), e 6 (± 5.19), respectivamente (p>0,05). A porcentagem de indivíduos que estavam com a dentição hígida foi de 13,5%. Houve uma associação entre prevalência de cárie e etnia (p0,05). Em relação aos hábitos alimentares na primeira infância, o tempo de aleitamento materno não influenciou na experiência de cárie (p>0,05), por outro lado, o açúcar acrescido na mamadeira esteve associado à doença cáries (p 0.05). The percentage of subjects who were healthy female with the teeth was 13.5%. There was an association between caries prevalence and ethnicity (p 0.05). With regard to eating habits in early childhood, the duration of breastfeeding did not affect the caries experience (p> 0.05), on the other hand, sugar plus the bottle was associated with caries disease (p

O agregado de trióxido mineral (MTA) tem-se demonstrado aplicável em diversas situações que exigem reparação dos tecidos dentais e periapicais. Contudo, desvantagens relacionadas ao seu elevado custo, propriedades físico-químicas e dificuldade de manuseio têm limitado sua utilização. Neste sentido, um novo cimento de aluminato de cálcio e aditivos (CAC+) foi desenvolvido para superar algumas características negativas do MTA, mantendo, no entanto, suas propriedades satisfatórias. O objetivo deste estudo foi avaliar a progressão de culturas de células osteogênicas e de células indiferenciadas da polpa dental (linhagem OD-21) expostas ao CAC+, utilizando MTA como controle, ou a preparações alternativas do CAC+, com maior conteúdo de cloreto de cálcio (CaCl2) e/ou com substituição do óxido de zinco por óxido de bismuto como radiopacificador. Para isso, células osteogênicas derivadas de calvárias de ratos ou células da linhagem OD-21 foram crescidas sobre Thermanox® por 24 h e expostas, por períodos de até 14 dias, a amostras dos diferentes materiais, posicionadas sobre Transwell®. Em células osteogênicas, apesar de a proximidade com as amostras de CAC+ e MTA inibir o crescimento celular, nas áreas periféricas das lamínulas, foram observados proliferação, viabilidade celular e expressão de marcadores-chave da diferenciação osteoblástica, que precederam a mineralização da matriz extracelular. Culturas expostas ao CAC+, comparativamente ao MTA, exibiram aumentos na viabilidade celular, atividade de fosfatase alcalina e na expressão de marcadores de diferenciação, o que não se repetiu para células OD-21. Além disso, demonstrou-se que os efeitos destes cimentos sobre a osteogênese in vitro variaram de acordo com o período de exposição das culturas, sendo mais favoráveis durante sua fase proliferativa. Entre as preparações de CAC+, verificou-se que o aumento no teor de CaCl2 promoveu maior disponibilização de Ca2+ no meio de cultura, o que correspondeu a maior diferenciação celular e formação de matriz mineralizada em culturas de células osteogênicas e OD-21, e à redução de efeitos negativos da adição de óxido de bismuto sobre osteoblastos. Conclui-se que o CAC+ favorece o desenvolvimento do fenótipo osteogênico, atuando principalmente em células em estágios iniciais de diferenciação e que a adição de CaCl2, independentemente do agente radiopacificador, potencializa os efeitos benéficos sobre células osteogênicas e favorece o desenvolvimento e diferenciação de células indiferenciadas derivadas do tecido pulpar, podendo ser considerado como material alternativo ao MTA. Mineral trioxide aggregate (MTA) has been successfully applied in endodontic procedures in which dental and periapical tissue repair are required. However, some drawbacks of MTA as high cost, physicochemical properties and difficulty in handling have limited its use. In this context, a novel calcium aluminate cement plus additives (CAC+) has been developed to overcome some negative features of MTA. The aim of this study was to evaluate the progression of either osteogenic cell cultures or undifferentiated dental pulp-derived ones (OD-21 cell line) exposed to CAC+ or to alternative formulations of CAC+ with a higher content of calcium chloride (CaCl2) and/or replacement of zinc oxide by bismuth oxide as radiopacifier agent. Rat calvaria-derived cells or OD-21 cells were grown on Thermanox® coverslips for 24 h and exposed to samples of CAC+ or MTA (control) placed on Transwell® for periods of up to 14 days. In osteogenic cell cultures, the proximity to MTA or CAC+ samples inhibited cell growth, whereas at distance it was observed cell proliferation, cell viability and expression of differentition markers prior to mineralization of the extracellular matrix. Comparatively to MTA, osteogenic cell cultures exposed to CAC+ exhibited higher cell viability, alkaline phosphatase activity and expression of key osteoblast markers, contrary to what was observed for OD-21 cells. Furthermore, it was demonstrated that the effects of these cements on in vitro osteogenesis varied according to the timing of exposure, with a more favorable impact during the proliferative phase of cultures. Among the diverse formulations of CAC+, it was found that the increase in the CaCl2 content promoted greater availability of Ca2+ in the culture medium, which corresponded to higher cell differentiation and mineralized matrix formation in osteoblastic cell cultures and OD-21 cells, while reducing the negative effects of bismuth oxide on osteoblasts. In conclusion, CAC+ supported the acquisition of the osteogenic cell phenotype, mostly for cells in early stages of differentiation. Additionaly, the increase in the CaCl2 content, regardless of the radiopacifier agent, potentiates the beneficial effects on osteogenic cells and promotes the growth and differentiation of OD-21 cells, rendering CAC+ a potential alternative material to replace MTA in endodontic procedures.

Introdução: O objetivo deste trabalho foi caracterizar a composição da microbiota bucal e a formação e progressão de lesões periapicais induzidas experimentalmente em dentes de camundongos knockout para IL-22 (IL-22 KO) comparados com animais wild-type (WT). Material e Métodos: Inicialmente, foi realizada a avaliação do perfil microbiano da cavidade bucal dos animais (40 espécies de micro-organismos), no dia das exposições pulpares, por meio de técnica de biologia molecular (Checkerboard DNA-DNA hybridization). Em seguida, lesões periapicais foram induzidas nos primeiros molares inferiores dos camundongos e, decorridos os períodos de 7, 21 e 42 dias, os animais foram submetidos à eutanásia em câmara de CO2. As mandíbulas foram então removidas e submetidas ao processamento histotécnico. A seguir, cortes representativos de cada dente foram corados com hematoxilina e eosina (HE), para descrição do tecido pulpar e das regiões apical e periapical, em microscopia óptica convencional e mensuração da área das lesões periapicais em microscopia de fluorescência. Além disso, cortes sequenciais foram avaliados por meio de: histoenzimologia para a marcação de osteoclastos (TRAP), coloração de Brown & Brenn (para identificação de bactérias) e imunohistoquímica (para identificação de RANK, RANKL e OPG). Os escores da quantidade de células bacterianas, para cada uma das 40 espécies avaliadas, foram submetidos à analise estatística empregando o teste não-paramétrico de Mann-Whitney para amostras independentes, para comparação entre os grupos. Os resultados numéricos obtidos na análise morfométrica da área das lesões periapicais e do número de osteoclastos foram submetidos à análise estatística \"one-way\" ANOVA e pós-teste de Bonferroni. Para todas as análises foi adotado o nível de significância de 5%. Resultados: Em relação ao perfil microbiano encontrado na cavidade bucal dos animais, foi possível observar diferença estatisticamente siginificante entre os dois grupos de animais para 6 espécies bacterianas (p

O efeito protetor da caseína fosfopeptídea fosfato de cálcio amorfo (CPP-ACP) contra a erosão dentária é controverso. Este estudo in situ teve como objetivo investigar a capacidade de uma goma de mascar com CPP-ACP em prevenir uma única desmineralização erosiva. Blocos de esmalte bovino (120) selecionados pela dureza superficial inicial foram divididos aleatoriamente entre os grupos: GI - goma de mascar com CPP-ACP, GII - goma de mascar sem CPP-ACP e GIII - controle negativo para avaliação do efeito protetor sem estimulação salivar (sem goma de mascar). Dezenove voluntários participaram do estudo durante três fases cruzadas de 2 h cada. Nas fases de GI e GII os voluntários usaram dispositivos intrabucais palatinos contendo 2 blocos de esmalte, durante 120 minutos e mascaram uma unidade da goma de mascar correspondente ao grupo nos últimos 30 minutos. No grupo controle os voluntários usaram o dispositivo intrabucal por 2h, sem uso de goma de mascar. Em cada fase, imediatamente após a utilização, os dispositivos intrabucais foram imersos em refrigerante tipo cola durante 5 minutos para promover a desmineralização erosiva. A dureza superficial final foi mensurada e os valores foram utilizados para o cálculo do percentual de perda de dureza. Os dados foram analisados por ANOVA de medidas repetidas e teste Tukey (α = 5%). Menor perda de dureza do esmalte foi encontrada após a utilização de goma de mascar com (GI - 32,7%) e sem (GII - 33,5%) CPP-ACP relação ao efeito salivar sem estimulação (GIII - 39,8%) (p 0,05). Os resultados sugerem que a utilização de goma de mascar imediatamente antes de uma desmineralização erosiva é capaz de diminuir a perda de dureza do esmalte. No entanto, a presença de CPP-ACP na goma de mascar não foi capaz de melhorar este efeito. The erosion-protective effect of CPP-ACP is controversial. This in situ study aimed to investigate the ability of CPP-ACP chewing gum to prevent a single event of erosive demineralization. Bovine enamel blocks (120), after selection (initial surface hardness) were randomly assigned to groups: GI-chewing gum with CPP-ACP, GIIchewing gum without CPP-ACP and Control group-salivary effect without stimulation (no gum). Nineteen volunteers participated on this study during 3 crossover phases of 2 h. On GI and GII, the volunteers wore intraoral palatal devices for 120 min and chewed a unit of the corresponding chewing gum on the last 30 min. On Control group the volunteer wore the appliance for 2 h, without chewing gum. On each phase immediately after the intraoral use, devices were extra orally immersed in cola drink for 5 minutes to promote erosive demineralization. The percentage of surface hardness loss was calculated. The data were analyzed by Repeated Measures ANOVA and Turkeys test. Less enamel hardness loss was found after the use of chewing gum with (GI-32.7 %) and without (GII-33.5%) CPP-ACP when compared to salivary effect without stimulation (control- 39.8%) (p0.05). The results suggest that the use of chewing gum immediately before an erosive demineralization is able to diminish the enamel hardness loss. However, the presence of CPP-ACP in the chewing gum cannot enhance this protective effect.

O fundamento do sucesso da terapia endodôntica é baseado no controle da contaminação microbiana presente no sistema de canais radiculares. Com essa finalidade, novos sistemas de irrigação têm sido desenvolvidos, demonstrando maior eficácia e segurança, destacando-se a irrigação por Pressão Apical Negativa (ANP) e a Irrigação Ultrassônica Passiva (PUI). O presente estudo in vivo teve como objetivo comparar a ANP e a PUI no reparo apical e periapical de dentes de cães com lesão periapical crônica, tendo como controle a irrigação convencional por Pressão Positiva (PP). Um total de 60 canais radiculares de pré-molares, com lesões periapicais experimentalmente induzidas, foram submetidos ao tratamento endodôntico em sessão única. Radiografias periapicais foram realizadas após a indução das lesões periapicais. Os dentes foram aleatoriamente divididos em 3 grupos: Grupo I - Irrigação por Pressão Apical Negativa (n=20 canais radiculares); Grupo II - Irrigação Ultrassônica Passiva (n=20 canais radiculares) e Grupo III - Irrigação por Pressão Positiva (controle) (n=20 canais radiculares). Após 180 dias, os animais foram eutanasiados, as peças removidas e submetidas ao processamento histotécnico para a análise histopatológica morfológica e morfométrica, em cortes corados com HE, sob microscopia convencional e de fluorescência. A análise radiográfica do tamanho das lesões periapicais foi realizada através da comparação das medidas das áreas das lesões antes e 180 dias após o tratamento endodôntico. Também foi realizada a histoenzimologia para a Fosfatase Ácida Resistente ao Tartarato (TRAP), para a marcação de osteoclastos, e a coloração de Brown e Brenn, para avaliar a presença de bactérias e sua localização. Os resultados obtidos foram submetidos à análise estatística por meio do teste de Kruskal-Wallis. O nível de significância adotado foi de 5%. Observou-se que não houve diferença estatisticamente significante entre os grupos com relação à resposta radiográfica (p=0,91). Na comparação dos parâmetros histopatológicos, o grupo I apresentou resultados mais homogêneos. Houve diferença estatisticamente significante entre os grupos I e III, com infiltrado inflamatório mais suave no grupo I (p=0,02), enquanto o grupo II foi semelhante aos grupos I e III. Na comparação das variáveis numéricas (morfometria em microscopia de fluorescência e TRAP), não foi possível observar diferença significativa entre os grupos (p>0,05). Os resultados deste estudo in vivo demonstraram que a irrigação por ANP resultou em resposta inflamatória mais suave, em comparação ao grupo controle, porém, semelhante à PUI. Nos demais aspectos, a resposta dos tecidos apicais e periapicais, após irrigação por ANP ou PUI, foi semelhante à irrigação convencional por PP. A successful endodontic therapy relies on the control of microbial contamination of the root canal system. For this purpose, new irrigation systems with greater efficacy and safety have been developed, standing out the apical negative pressure (ANP) and the passive ultrasonic (PUI) irrigation systems. The aim of this in vivo study was to compare apical positive pressure irrigation (PP - conventional irrigation), ANP and PUI in the apical and periapical repair of dogs teeth with chronic periapical lesion. Sixty root canals of premolars with experimentally induced periapical lesions were subjected to a single-session endodontic treatment. Periapical radiographs were taken after inducing the periapical lesions. The teeth were randomly assigned to three groups: Group I: ANP with EndoVac (n=20 root canals); Group II: PUI (n=20 root canals) and Group III: apical positive pressure irrigation (PP - conventional irrigation - control) (n=20 root canals). After 180 days, the animals were euthanized, and the anatomic pieces were removed and subjected to histotechnical processing for histopathological, morphological and morphometric analyses of HE-stained sections under conventional and fluorescence microscopy. The radiographic analysis of the size of periapical lesions was performed by measuring the lesions before and 180 days after the endodontic treatment. Tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP) histoenzymology for identification of osteoclasts and Brown and Brenn staining for identification and localization of bacteria were also performed. Data were analyzed statistically by the Kruskal-Wallis test a significance level of 5%. There were no statistically significant differences among the groups regarding the radiographic response (p=0.91). In the comparison of histopathological parameters, Group I presented more homogeneous results. There was a statistically significant difference between Groups I and III, with milder infiltrate inflammatory in Group I (p=0.02). Group II was similar to Groups I and III. Comparing the numerical variables (morphometric analysis under fluorescence microscopy and TRAP), no statistically significant difference could be found among the groups (p>0.05). The results of this in vivo study revealed that ANP caused milder inflammatory response than PP (control group), but similar to PUI. In the other aspects, the response of apical and periapical to ANP and PUI was similar to tissue response to PP.

A molécula adaptadora myeloid differentiation primary response gene 88 (MyD88) está envolvida na ativação de receptores Toll-like (TLRs), os quais são responsáveis pelo reconhecimento precoce pelas células do hospedeiro de patógenos invasores e pelo desencadeamento da resposta imunológica. O objetivo do presente estudo foi caracterizar o desenvolvimento e a progressão de lesões periapicais induzidas experimentalmente em dentes de camundongos knockout (KO) para a molécula MyD88 (MyD88 KO), comparados a animais wild-type (WT). Lesões periapicais foram induzidas nos primeiros molares inferiores de 30 camundongos WT e de 30 camundongos MyD88 KO. Decorridos 7, 21 e 42 dias, os animais foram submetidos à eutanásia em câmara de CO2 e as mandíbulas foram removidas e submetidas ao processamento histotécnico. A seguir, cortes representativos foram corados com hematoxilina e eosina (HE), para descrição das características do canal radicular e das regiões apical e periapical e para contagem do número de células inflamatórias (neutrófilos), em microscopia de luz, e para mensuração da área das lesões periapicais, em microscopia de fluorescência. Espécimes sequenciais foram analisados por meio de: histoenzimologia para a atividade da TRAP, para contagem de osteoclastos; coloração de Brown & Brenn, para localização de bactérias; e imunohistoquímica, para identificação de marcadores da osteoclastogênese (RANK, RANKL e OPG). Os dados foram submetidos à análise estatística por meio dos testes não-paramétricos de Mann-Whitney, Kruskal-Wallis e pós-teste de Dunn, utilizando o programa SPSS (Statistical Package for the Social Sciences) versão 17.O, com nível de significância de 5%. As demais análises foram expressas de maneira qualitativa. Com relação à extensão das lesões periapicais, o grupo MyD88 KO apresentou valores significantemente maiores do que o grupo WT nos períodos de 7 (p=0,001) e 21 dias (p=0,05), sendo que após 42 dias foi observada tendência de maiores valores, porém sem diferença significante (p=0,09). Foi observada maior quantidade de neutrófilos no grupo MyD88 KO, em comparação aos animais WT (p=0,01 em 7 dias; p=0,004 em 21 dias; e p