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© The Author(s) 2021., [Background]: Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) is a highly lethal cancer, requiring novel treatments to target both cancer cells and cancer stem cells (CSCs). Altered splicing is emerging as both a novel cancer hallmark and an attractive therapeutic target. The core splicing factor SF3B1 is heavily altered in cancer and can be inhibited by Pladienolide-B, but its actionability in PDAC is unknown. We explored the presence and role of SF3B1 in PDAC and interrogated its potential as an actionable target. [Methods]: SF3B1 was analyzed in PDAC tissues, an RNA-seq dataset, and publicly available databases, examining associations with splicing alterations and key features/genes. Functional assays in PDAC cell lines and PDX-derived CSCs served to test Pladienolide-B treatment effects in vitro, and in vivo in zebrafish and mice. [Results]: SF3B1 was overexpressed in human PDAC and associated with tumor grade and lymph-node involvement. SF3B1 levels closely associated with distinct splicing event profiles and expression of key PDAC players (KRAS, TP53). In PDAC cells, Pladienolide-B increased apoptosis and decreased multiple tumor-related features, including cell proliferation, migration, and colony/sphere formation, altering AKT and JNK signaling, and favoring proapoptotic splicing variants (BCL-XS/BCL-XL, KRASa/KRAS, Δ133TP53/TP53). Importantly, Pladienolide-B similarly impaired CSCs, reducing their stemness capacity and increasing their sensitivity to chemotherapy. Pladienolide-B also reduced PDAC/CSCs xenograft tumor growth in vivo in zebrafish and in mice. [Conclusion]. SF3B1 overexpression represents a therapeutic vulnerability in PDAC, as altered splicing can be targeted with Pladienolide-B both in cancer cells and CSCs, paving the way for novel therapies for this lethal cancer., This work has been supported by Spanish Ministry of Economy [MINECO; BFU2016–80360-R (to JPC)] and Ministry of Science and Innovation [MICINN; PID2019-105201RB-I00 (to JPC), PID2019-105564RB-I00 (to RML)]. Instituto de Salud Carlos III, co-funded by European Union (ERDF/ESF, “Investing in your future”) [FIS Grants PI17/02287 and PI20/01301 (to MDG), PI18/00757 (to BS,Jr); DTS Grant DTS20/00050 (to RML)); Postdoctoral Grant Sara Borrell CD19/00255 (to AIC); Predoctoral contract FI17/00282 (to EAP)]. Coordinated grant (GC16173694BARB) from the Fundación Asociación Española Contra el Cáncer (AECC) (to BS,Jr). Spanish Ministry of Universities [Predoctoral contracts FPU14/04290 (to SPA); FPU16/06190 (to VHA); FPU18/02275 (to RBE)]. Boehringer Ingelheim Fonds travel grant (EAP). Junta de Andalucía (BIO0139). GETNE2016 and GETNE2019 Research grants (to JPC); and CIBERobn. Associazione Italiana Ricerca Cancro (AIRC 5×1000 n. 12182); Fondazione Italiana Malattie Pancreas – Ministero Salute [FIMPCUP_J38D19000690001]; Fondazione Cariverona: Oncology Biobank Project “Antonio Schiavi” (prot.203885/2017).

Until recently, postoperative periods, both in medicine and dentistry, were considered factors that prevented some patients from performing the necessary procedures. With technological and scientific advancement, it was possible to develop platelet concentrates that assist in the postoperative period, since, when used, they help to accelerate the healing and tissue regeneration processes, which reduces the discomfort time of the postoperative period. The first platelet concentrate was Plasma Rich in Platelets; this, in turn, is considered a first generation platelet concentrate that, due to certain limitations, ended up making professionals stop using it. It was only in 2001 that the second generation platelet concentrate, also known as Fibrin Rich in Platelets, was introduced to the world, which had several advantages over the first generation platelet concentrates and, since then, has received several modifications, which have given rise to other varieties of it , which have been widely used until today, together with the original Fibrin Rich in Platelets. The present work aims to carry out, in a didactic way, an aggregate of information about the PRF, in order to present it to the dental community. At the end of this study, it was concluded that the PRF was a major milestone for Dentistry, generating security for the professional and for the patient. Articles obtained through the online platforms: VHL, Pubmed and Lilacs were used as bibliographic bases. With this, after the analysis and absorption of the material used as a reference, this work was written. Hasta hace poco tiempo, los postoperatorios tanto en medicina como en odontología se consideraban factores que impedían a algunos pacientes realizar los procedimientos necesarios. Con el avance tecnológico y científico, fue posible desarrollar concentrados de plaquetas que asisten en el postoperatorio, ya que, cuando se utilizan, ayudan a acelerar los procesos de cicatrización y regeneración tisular, lo que reduce el tiempo de molestias postoperatorias. El primer concentrado de plaquetas fue plasma rico en plaquetas; este a su vez es considerado un concentrado de plaquetas de primera generación que, por ciertas limitaciones, terminó haciendo que los profesionales dejen de usarlo. Recién en el año 2001 se introdujo al mundo el concentrado de plaquetas de segunda generación, también conocido como fibrina rica en plaquetas, que tenía varias ventajas sobre los concentrados de plaquetas de primera generación y, desde entonces, ha recibido modificaciones, que han dado lugar a variedades de la misma, que han sido ampliamente utilizadas hasta hoy, junto con la original Fibrina Rica en Plaquetas. El presente trabajo tiene como objetivo hacer, de manera didáctica, un agregado de información sobre el PRF, con el fin de presentarlo a la comunidad dental. Al final de este estudio, se concluyó que el PRF fue un gran hito para la Odontología, generando seguridad para el profesional y para el paciente. Se utilizaron como base bibliográfica los artículos obtenidos a través de las plataformas online: BVS, Pubmed y Lilacs. Con esto, luego del análisis y absorción del material utilizado como referencia, se redactó este trabajo. Até pouco tempo atrás, os pós operatórios tanto na Medicina quanto na odontologia, eram considerados como fatores que faziam com que alguns pacientes deixassem de realizar procedimentos necessários. Com o avanço tecnológico e científico, foi possível o desenvolvimento de concentrados plaquetários que auxiliam no pós operatório, uma vez que, quando utilizados, ajudam a acelerar os processos de cicatrização e de regeneração tecidual, o que reduz o tempo de desconforto pós operatório. O primeiro concentrado plaquetário foi o Plasma Rico em Plaquetas; este por sua vez é considerado um concentrado plaquetário de primeira geração que, por possuir certas limitações, acabou fazendo com que os profissionais deixassem de utiliza-lo. Somente em 2001 foi apresentado ao mundo o concentrado plaquetário de segunda geração, também conhecido como Fibrina Rica em Plaquetas, o qual apresentava diversas vantagens sobre os concentrados plaquetários de primeira geração e, desde então, recebeu modificações, que deram origem a variedades dele, as quais vem sendo amplamente utilizadas até os dias de hoje, juntamente com a Fibrina Rica em Plaquetas original. O presente trabalho tem como objetivo relizar, de forma didática, um agregado de informações a respeito do PRF, a fim de apresentá-las à comunidade odontológica. Ao final deste estudo, concluiu-se que a PRF foi um grande marco para a Odontologia, gerando segurança para o profissional e para o paciente. Foram utilizados como base bibliográficas, artigos obtidos pelas plataformas on-line: BVS, Pubmed e Lilacs. Com isso, feita a análise e a absorção do material utilizado como referência, foi escrito este trabalho.

Facultad de Ciencias Médicas y Biológicas. Maestría en Ciencias de la Salud Breast cancer ranks first in incidence of malignant neoplasms in women, accounting for 16% of all female cancers. In Mexico, medical care is based on NOM-041-SSA-2011 “For the prevention, diagnosis, treatment, control and epidemiological surveillance of breast cancer”. A known cell proliferation marker applied as a prognostic factor is Ki67, a non-histonic nuclear protein that is expressed throughout the cell cycle, except in a quiescent state. A possible adjuvant proliferation marker is the f subunit of the eIF3 protein complex, which has a regulatory role in the initiation of the translation process. Low levels of eIF3f have been linked to the malignant state of different types of cancer and it is expressed in all phases of the cell cycle, including the quiescent state. General objective: To establish the value of the joint expression of KI67 and eIF3f as markers of cell proliferation in the different stages of breast cancer and its prognostic value. Materials and methods: Retrospective, observational, descriptive and cross-sectional study. Selection of 77 patients from the General Hospital “Dr. Miguel Silva ”and the CEAO of the Ministry of Health with a confirmatory diagnosis of breast cancer during 2018. Standardization of an immunohistochemical technique with fluorescent antibody markers specific for eIF3f and Ki67. Analysis and visualization of images by confocal microscopy. El cáncer de mama ocupa el primer lugar en incidencia de las neoplasias malignas en mujeres, representando el 16% de todos los cánceres femeninos. En México, la atención médica se basa en la NOM-041-SSA-2011 “Para la prevención, diagnóstico, tratamiento, control y vigilancia epidemiológica del cáncer de mama”. Un marcador de proliferación celular conocido y aplicado como factor pronóstico es Ki67, una proteína nuclear no histónica que se expresa durante todo el ciclo celular, excepto en estado quiescente. Un posible marcador de proliferación adyuvante es la subunidad f del complejo proteico eIF3 que tiene una función reguladora en la iniciación del proceso de traducción. Los niveles bajos de eIF3f se han relacionado con el estado maligno de diferentes tipos de cáncer y se expresa en todas las fases del ciclo celular, incluyendo el estado quiescente. Objetivo general: Establecer el valor de la expresión conjunta de KI67 y eIF3f como marcadores de proliferación celular en los distintos estadios de cáncer de mama y su valor pronóstico. Materiales y métodos: Estudio retrospectivo, observacional, descriptivo y transversal. Selección de 77 pacientes del Hospital General “Dr. Miguel Silva” y el CEAO de la Secretaría de Salud con diagnóstico confirmatorio de cáncer de mama durante el 2018. Estandarización de la técnica de inmunohistoquímica con marcadores fluorescentes de anticuerpos específicos para eIF3f y Ki67. Análisis y visualización de imágenes por microscopía confocal.

Resumen Introducción. Se ha demostrado que el caseinato de sodio y sus componentes (caseínas α, β y κ) inhiben la proliferación de la línea celular hematopoyética de ratón 32D clone 3 (32Dcl3) e inducen su diferenciación hacia macrófagos. Se sabe que la caseína α induce la producción de IL-1β y que esta última citocina inhibe la proliferación celular mediante la producción del factor de necrosis tumoral alfa (TNF-α), pero se desconoce si el caseinato de sodio y las caseínas inducen la producción de TNF y si este es el responsable de la inhibición de la proliferación. Objetivo. Evaluar si el caseinato de sodio y las caseínas α, β y κ inhiben la proliferación de la línea celular 32Dcl3 mediante la producción de TNF-α. Materiales y métodos. Se usaron diferentes concentraciones de caseinato de sodio y de las caseínas α, β y κ en las células 32Dcl3. Posteriormente, se evaluaron la viabilidad celular mediante una prueba con el MTT [3-(4,5-dimetiltiazol-2-ilo)-2,5-difeniltetrazol], la inducción de apoptosis con la citometría de flujo y la síntesis del TNF-α con el ELISA. Además, se hicieron pruebas de neutralización con anti-TNF-α en células 32Dcl3 tratadas con caseinato de sodio y caseína α, y se evaluó la proliferación celular. Resultados. Se encontró que el caseinato de sodio y las caseínas α, β y κ reducían la proliferación de la línea celular 32Dcl3 sin afectar la viabilidad, y que solo el caseinato y la caseína α inducían la apoptosis y la liberación al medio de TNF-α. La proliferación de células 32Dcl3 tratadas con caseinato y caseína α se restableció al usar anticuerpos anti-TNF-α. Conclusión. El TNF-α fue el principal responsable de la inhibición de la proliferación en las células 32Dcl3 tratadas con caseinato de sodio o caseína α. Abstract Introduction: Sodium caseinate (CS) and its components (alpha-casein, beta-casein, and kappa-casein) have been shown to inhibit the proliferation of the mouse hematopoietic 32D clone 3 (32Dcl3) cell line and induce its differentiation into macrophages. It is well-known that alpha-casein induces IL-1β production and that this cytokine inhibits the proliferation via the production of tumor necrosis factor alpha (TNF-alpha), but it is not known if CS and the caseins inhibit the proliferation via TNF-alpha production. Objective: To evaluate if CS and alpha-casein, beta-casein and kappa-casein inhibit the proliferation on 32Dcl3 cell line via TNF-alpha. Materials and methods: We used different concentrations of CS, alpha-casein, beta-casein and kappa-casein in 32Dcl3 cells to evaluate cell proliferation. We assessed cell viability by MTT, induction to apoptosis by flow cytometry, and TNF-alpha synthesis by ELISA. Additionally, we performed anti-TNF-alpha neutralization assays on 32Dcl3 cells treated with CS and alpha-casein and we evaluated proliferation. Results: The results showed that CS, alpha-casein, beta-casein, and kappa-casein reduced proliferation of the 32Dcl3 cell line without affecting the viability and that only CS and alpha-casein induced apoptosis and the release of TNF-alpha. The 32Dcl3 cells treated with CS and alpha-casein reestablished their proliferation by using anti-TNF-alpha antibodies. Conclusion: TNF-alpha was the main responsible for the inhibition of proliferation in 32Dcl3 cells treated with CS or alpha-casein.

La lesión central de células gigantes (LCCG) es una lesión osteolítica benigna que en algunos casos presenta un comportamiento agresivo, con recidiva y mal pronóstico. Ki-67 es una proteína nuclear cuya función general es la regulación de la proliferación celular. Este marcador es utilizado para el reconocimiento de células en proliferación y como herramienta de pronóstico en el diagnóstico de neoplasias. El objetivo de este estudio fue cuantificar la inmunoexpresión de Ki-67 en las diferentes poblaciones celulares de las LCCG y analizar su asociación con las características clínicas, demográficas y radiográficas. Se evaluó la inmunoexpresión de Ki-67 de 17 casos de LCCG en dos poblaciones celulares: células gigantes multinucleadas (CGM) y células mesenquimatosas estromales (CME). El análisis estadístico se efectuó con el programa SAS 9.0 y SPSS versión 23.0, con un nivel alfa impuesto de P

La formación de nuevas células se genera a partir de células preexistentes a través de una serie ordenada de eventos denominada ciclo celular. El control de este es fundamental para la integridad del genoma, por lo que hay múltiples proteínas regulando este proceso. Actualmente, se conoce que el complejo Mantenimiento de Minicromosoma (MCM2-7) tiene un rol esencial en la replicación del ADN, específicamente involucrado en la proliferación, durante el ciclo celular. La identificación inmunohistoquimica de las proteínas de este complejo a nivel tisular, podría ser una herramienta muy útil, para usarlos como biomarcadores y así comprender uno de los mecanismos biológicos que se ven afectados en el cáncer. Nuestro objetivo es realizar una revisión del complejo MCM2-7, ya que estas proteínas como se ha descrito, podrían comportarse como buenos marcadores biológicos de proliferación celular, y así poder realizar un buen diagnóstico, pronóstico y futuros blancos terapéuticos de aquellas lesiones principalmente neoplásicas, principalmente las que asientan a nivel de la mucosa bucal. New cells are formed from preexisting cells through an ordered series of events called cell cycle. As the control of this cycle is fundamental for genome integrity, multiple proteins regulate this process. We currently know that the Minichromosome maintenance (MCM2-7) complex has a major role in DNA replication in the cell cycle, in particular regarding proliferation. The immunohistochemical identification of the proteins in this complex on tissues may be useful, as they could be used as biomarkers and would help us understand one of the biological mechanisms affected in cancer processes. Our aim is to collect the existing evidence regarding the members of the MCM2-7 complex, since these proteins could be effective biological cell proliferation markers, which would help practitioners make accurate diagnosis, prognosis and future therapeutic targets of lesions that are mainly neoplastic, especially in the buccal mucosa.

The study of cancer metabolism is regaining center stage and becoming a hot topic in tumor biology and clinical research, after a period where such kind of experimental approaches were somehow forgotten or disregarded in favor of powerful functional genomic and proteomic studies [...]

The seeds of Euphorbia lathyris have been used in traditional medicine to treat various medical conditions. However, neither all of their active biocompounds nor the molecular mechanisms underlying their therapeutic effects have been described. A new ethanolic extract of defatted flour from mature seeds of Euphorbia lathyris showed a high total polyphenol content and significant antioxidant activity. Chromatographic analysis showed that esculetin, euphorbetin, gaultherin, and kaempferol-3-rutinoside were the most abundant polyphenolic bioactive compounds. Antiproliferative assays showed a high and selective antitumor activity against colon cancer cell lines (T84 and HCT-15). In addition, a significant antiproliferative activity against glioblastoma multiforme cells was also demonstrated. Its mechanism of action to induce cell death was mediated by the overexpression of caspases 9, 3, and 8, and by activation of autophagy. Interestingly, a reduction in the migration capacity of colon cancer cells and a significant antiangiogenic effect on human umbilical vein endothelial cells were also demonstrated. Finally, the extract significantly reduced the subpopulations of cancer stem cells. This extract could be the basis to develop new therapeutic strategies for the treatment of colon cancer, although further experiments will be necessary to determine its in vivo effects., Granada University (project PSE/17/002), Ministerio de Ciencia e Innovación (project RTC-2017-6540-1), CTS-107 and AGR145 Groups

[Resumen] En la actualidad, el autoensamblaje de moléculas a través de interacciones covalentes se ha postulado como una herramienta de gran utilidad para la síntesis de nuevos receptores moleculares, que son de gran interés en biomedicina por su versatilidad y múltiples aplicaciones. Específicamente, los complejos host-guest resultan especialmente interesantes, ya que pueden responder a estímulos externos como cambios en el medio celular externo y ser modulados para su utilización como sistemas de liberación controlada de fármacos. Entre estos compuestos, destaca el macrociclo red box cuya capacidad aceptora puede ser modulada mediante reacciones redox y cambios de pH, con el fin de maximizar su potencial como vehículo de liberación controlada de fármacos en aplicaciones biomédicas. Como primer paso para evaluar el potencial de la red box como sistema de liberación de fármacos, en el presente estudio se evaluó su biocompatibilidad mediante la realización de ensayos biológicos basados en medidas de la viabilidad celular y citotoxicidad en una línea celular normal (HFF-1) y otra tumoral (HeLa). Además, para confirmar que el macrociclo es capaz de atravesar la membrana plasmática, se llevó a cabo un estudio de internalización celular. Los resultados mostraron que la red box afectó en mayor medida a la viabilidad y proliferación celular de la línea no tumoral, lo cual podría estar relacionado con la mayor velocidad de división de las células cancerosas y/o una mayor permeabilidad al compuesto de la línea no tumoral. Asimismo, el estudio preliminar de internalización celular en células HeLa reveló la entrada de un pequeño porcentaje de red box en el interior de las células siendo mayor a las 24 h de exposición. [Resumo] Na actualidade, a autoensamblaxe de moléculas a través de interaccións covalentes postulouse como unha ferramenta de gran utilidade para a síntese de novos receptores moleculares, que son de gran interese en biomedicina pola súa versatilidade e múltiples aplicacións. Especificamente, os complexos host-guest resultan especialmente interesantes, xa que poden responder a estímulos externos, coma cambios no medio celular externo e ser modulados para a súa utilización como sistemas de liberación controlada de fármacos. Entre estes compostos, destaca o macrociclo red box cuxa capacidade aceptora pode ser modulada mediante reaccións redox e cambios de pH, co fin de maximizar o seu potencial como vehículo de liberación controlada de fármacos en aplicacións biomédicas. Como primeiro paso para avaliar o potencial da red box como sistema de liberación de fármacos, no presente estudo avaliouse a súa biocompatibilidade mediante a realización de ensaios biolóxicos baseados en medidas da viabilidade celular e citotoxicidade nunha liña celular normal (HFF-1) e outra tumoral (HeLa). Ademais, para confirmar que o macrociclo é capaz de atravesar a membrana plasmática, levouse a cabo un estudo de internalización celular. Os resultados mostraron que a red box afectou en maior medida á viabilidade e proliferación celular da liña non tumoral, o cal podería estar relacionado coa maior velocidade de división das células cancerosas e/ou unha maior permeabilidade ao composto da liña non tumoral. Así mesmo, o estudo preliminar de internalización celular en células HeLa revelou a entrada dun pequeno porcentaxe de red box no interior das células sendo maior ás 24 h de exposición. [Abstract] Nowadays, self-assembly of molecules through covalent interactions has been postulated as a very useful tool for the synthesis of new molecular receptors, being of great interest in biomedicine due to their versatility and multiple applications. Specifically, hostguest complexes are especially interesting, since they can respond to external stimuli as those from the external cellular environment and be modulated for their use as controlled drug delivery systems. Among these compounds, the macrocycle red box, whose acceptor capacity can be modulated by redox reactions and changes in pH to maximize its potential as a vehicle for controlled drug delivery in biomedical applications, is of great interest. As a first step to evaluate its potential as a drug delivery system, in the present study the biocompatibility of red box was evaluated by conducting biological assays based on measurements of cell viability and cytotoxicity in a normal cell (HFF-1) and in a tumor cell (HeLa) lines. Furthermore, to confirm the macrocycle capability to cross the cell membrane, a cell internalization study was carried out. The results showed that the red box affected the cell viability and proliferation of the non-tumor line to a greater extent, which could be related to the higher division rate of cancer cells and/or the major permeability to the compound of the non-tumor line. Likewise, the preliminary study of cellular internalization in HeLa cells revealed the entry of a small percentage of red box inside the cells, being higher after 24 h of exposure. Traballo fin de grao (UDC.CIE). Bioloxía. Curso 2020/2021

The carotid body (CB), a neural-crest-derived organ and the main arterial chemoreceptor in mammals, is composed of clusters of cells called glomeruli. Each glomerulus contains neuron-like, O2-sensing glomus cells, which are innervated by sensory fibers of the petrosal ganglion and are located in close contact with a dense network of fenestrated capillaries. In response to hypoxia, glomus cells release transmitters to activate afferent fibers impinging on the respiratory and autonomic centers to induce hyperventilation and sympathetic activation. Glomus cells are embraced by interdigitating processes of sustentacular, glia-like, type II cells. The CB has an extraordinary structural plasticity, unusual for a neural tissue, as it can grow several folds its size in subjects exposed to sustained hypoxia (as for example in high altitude dwellers or in patients with cardiopulmonary diseases). CB growth in hypoxia is mainly due to the generation of new glomeruli and blood vessels. In recent years it has been shown that the adult CB contains a collection of quiescent multipotent stem cells, as well as immature progenitors committed to the neurogenic or the angiogenic lineages. Herein, we review the main properties of the different cell types in the CB germinal niche. We also summarize experimental data suggesting that O2-sensitive glomus cells are the master regulators of CB plasticity. Upon exposure to hypoxia, neurotransmitters and neuromodulators released by glomus cells act as paracrine signals that induce proliferation and differentiation of multipotent stem cells and progenitors, thus causing CB hypertrophy and an increased sensory output. Pharmacological modulation of glomus cell activity might constitute a useful clinical tool to fight pathologies associated with exaggerated sympathetic outflow due to CB overactivation. Yes

"La piel es un órgano importante debido a su función protectora, cuando sufre un daño es necesaria una adecuada cicatrización para restaurar la funcionalidad del tejido. La cicatrización consta de 3 fases: inflamación, proliferación y migración, y remodelación. En la segunda fase tiene lugar la degradación de la matriz extracelular por parte de matriz metaloproteinasas, enzimas dependientes de Zn, permitiendo la movilización de células hacia la lesión. Actualmente se han reportado metales divalentes sin actividad biológica que pueden sustituir biometales en sistemas proteicos, causando efectos negativos. En el caso del Cd, son pocos los estudios relacionados con un efecto negativo sobre la cicatrización, por lo que en este trabajo se evaluó el efecto de 2 vías de administración de Cd en la cicatrización. El primer grupo, constituido por ratas macho de la cepa nude fue administrado con 0.005, 0.010 y 15 ppm de Cd por vía oral (en agua potable) durante 8 semanas. A los animales se les realizaron incisiones de 8 mm de diámetro en el dorso y posteriormente una biopsia a diferentes tiempos (6 h, 12 h, 24 h, 48 h, 7 d, 14 d y al tiempo final)."

[spa] En Ia levadura de gemación el tamaño celular en START o tamaño crítico está determinado por Ia velocidad de crecimiento en G1. Durante esta fase, Saccharomyces cerevisiae presenta una disminución de Ia relación area superficie/volumen con el tamaño. En cambio, en el memento de Ia gemación se observa Ia existencia de un pico máximo en Ia velocidad de síntesis de Ia superficie celular, necesitando un gran aumento en Ia síntesis de materiales de Ia membrana plasmática y Ia pared celular, y un óptimo transporte de esos componentes hacia Ia yema para el correcto crecimiento de ésta. Por todo ello, postulamos Ia hipótesis de que Ia determinación del tamaño celular en START tendría importantes implicaciones en el óptimo crecimiento y desarrollo de Ia yema en las fases S-G2 del ciclo celular de levaduras. Para comprobar esta idea, realizamos un cuidadoso estudio delcrecimiento en S-G2 y observamos que Ia velocidad de crecimiento de Ia yema no aumenta de manera proporcional al tamaño de Ia célula madre,especialmente a volúmenes muy grandes. Ella no sucedía durante G1, donde observamos que Ia velocidad de crecimiento es proporcional al tamaño celular, según las !eyes del crecimiento exponencial. De modo muy notable, dicho efecto tampoco fue observado en células diploides y tetraploides, donde el tamaño es progresivamente mayor, pero proporcional al DNA genómico. Estos datos sugerían que Ia baja eficiencia de crecimiento de las células madre haploides de gran tamaño podría ser causada por algún tipo de insuficiencia génica. Por ejemplo, si Ia expresión de algunos genes importantes en crecimiento no escalase con el tamaño, se producirían cantidades limitantes de las proteínas codificadas y, por tanto, Ia eficiencia de los procesos correspondientes se vería seriamente comprometida. El crecimiento de Ia yema depende del transporte de vesículas desde Ia célula madre,y observamos que dicho transporte no aumentaba proporcionalmente al volumen de Ia célula madre.Sin embargo, el transportador de vesículas Myo2 no mostró una expresión disminuida y tampoco observamos una deficiencia en el número de cables de actina en células grandes, indicando que el sistema de transporte en sí no era limitante. Por dichas razones concluimos que el problema podría residir en el contenido de las vesículas, el cargo.Por tanto,estudiamos proteínas representativas del crecimiento en G1/S,y descubrimos que su nivel disminuye con el tamaño. Como pieza central de este trabajo, comparamos los transcriptomas de células pequeñas y grandes en G1/S, y encontramos muchos genes de categorías funcionales específicas que se regulan al alza o a Ia baja en células grandes en comparación con células pequeñas.Entre ellos encontramos genes relacionados con el crecimiento apical, el transporte de vesículas,el citoesqueleto,y Ia biogénesis ribosómica, que representa un coste energético extraordinario y debe estar muy bien regulada para un crecimiento óptimo. Finalmente, para genes paradigmáticos en estas categorías,realizamos un análisis cuidadoso de Ia insuficiencia génica y confirmamos sus efectos limitantes sobre el crecimiento de Ia yema. En resumen, nuestros resultados demuestran que S. cerevisiae ha establecido un tamaño crítico para lograr el crecimiento óptimo de Ia yema. A tamaños inusualmente mayores, Ia expresión de genes relacionados con proteínas ribosómicas, así como componentes esenciales del crecimiento apical, se reduce claramente produciendo una seria limitación del crecimiento celular., [eng] In budding yeast,cell size at START or the critical size is determined by the growth rate in G.l During this phase, Saccharomyces cerevisiae shows a decrease in the surface area/volume ratio as it increases in size.When the cell shifts from isotropic growth during Gl to polarized growth from the mother cell to the bud,surface synthesis rate peaks right after budding,where a great increase in plasma membrane and cell wall synthesis,and an optimal transport of these components to the bud,is necessary to grow as efficiently as possible. Therefore, we hypothesized that cell size set at START would have important implications for the optimal growth and development of the bud in the S-G2 phases of the yeast cell cycle. To test this notion,we carefully analyzed growth kinetics in S-G2 phases and observed that the growth rate of the bud does not increase proportionally to the mother cell size, particularly at very large cell volumes.This effect did not take place during Gl,where we found that growth rate is proportional to cell size, exquisitely following the rules of exponential growth. Notably, the abovementioned effect was not observed either in diploid or tetraploid cells where mother cell size is progressively larger,but proportional to genomic DNA. These data suggested that low growing efficiencies of large haploid mother cells could be caused by some sort of gene insufficiency.For instance,if expression of some genes playing prominent roles in bud growth would not scale with size,rate-limiting amounts of the encoded proteins would be produced and,hence,the efficiency of the corresponding processes would be seriously compromised. One of the most important mechanisms for bud growth is the transport of vesicles from the mother cell. Indeed,we observed problems in transport,because it did not occur at a rate proportional to mother cell volume.However, it was not a matter of the transport machinery itself, since the Myo2 vesicle transporter did not show a decreased expression. Moreover,we did not observe either a deficiency in the number of actin cables at large cell volumes, indicating that the actin-based transport system was not limiting. For all these reasons, we concluded that the problem could reside in the vesicle contents, the cargo. Therefore, we studied representative proteins needed for active growth in the Gl/S transition and found that their cell concentration was reduced at large volumes. As a central set of experiments of this work, we compared the transcriptomes of small and large cells while performing the Gl/S transition, and found many genes belonging to specific functional categories that were upregulated or downregulated in large cells compared to small cells.Among those we found genes related to apical growth, vesicle transport, cytoskeleton, but especially to ribosomal biogenesis, which represents an extraordinary energetic cost, and must be extremely well regulated for optimal growth. Finally, for paradigmatic genes in these categories, we performed a careful analysis of gene insufficiency and confirmed their limiting effects on bud growth. In all, our results demonstrate that S.cerevisiae has established a critical size to achieve an optimal bud growth. At unusually larger sizes,the expression of ribosomal protein-related genes, as well as essential components for apical growth, is clearly reduced and, as a consequence,results in serious cell growth limitation.

Numerosas investigaciones se han focalizado sobre la respuesta inmune celular con el objeto de definir la causa de las frecuentes recurrencias de la infección por herpes simple. El objetivo de este trabajo fue estudiar la respuesta proliferativa de los linfocitos a mitógeno PHA-M en pacientes con herpes labial recurrente. Fueron estudiados 15 pacientes adultos, de ambos sexos y 14 individuos adultos sin historia de herpes labial. Se utilizó sangre periférica de los pacientes, obtenida en forma estéril con heparina. Las células mononucleares fueron separadas sobre gradiente de Ficoll-Hypaque y para estudiar la proliferación celular (2,5 x 106 células/ml) fueron cultivadas en medio RPMI 10% de FBS, en triplicado a 37º C, 5% de CO2 estimuladas con fitohemaglutinina (PHA) por 72 horas. La proliferación celular se midió utilizando un método colorimétrico MTT [3-(4,5 dimethylthiazol -2–yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide]. Como controles se utilizaron células mononucleares no estimuladas con PHA. En los 15 pacientes estudiados, se observó una buena respuesta proliferativa con PHA-M, incluso el índice de estimulación fue superior a 1, sin embargo comparando con los individuos sin historia de herpes labial, el índice de estimulación estuvo disminuido siendo estadísticamente significativo (p

En el paciente quemado se reúnen una serie de factores que favorecen la aparición de un desbalance en su respuesta inmunitaria que incrementan la susceptibilidad de los mismos a lasinfecciones. Las personas con quemaduras, sobretodo los niños, que presentan una mayor alteración inmunológica son aquellos con peor pronóstico y con mayores posibilidades de presentar complicaciones. El objetivo del presente trabajo es evaluar la utilidad de la respuesta proliferativa con mitogenos de los linfocitos en niños con quemaduras como un marcador pronóstico. Fueron estudiados 11 niños con quemaduras desde enero a marzo del 2004, de ambos sexos, provenientes del área rural, sin complicaciones infecciosas. Como controles se estudiaron 9 niños aparentemente sanos. Todos fueron estudiados luego de obtenerse el consentimiento informado de sus padres. Se utilizó sangre periférica, obtenida en forma estéril con heparina. Las células mononucleares fueron separadas sobre gradiente de Ficoll-Hypaque. Las células mononucleares (2,5 x 106 células/ml) fueron cultivadas en medio RPMI 1640 con 10% de suero fetal bovino (FBS), en triplicado a 37ºC y 5% CO2 estimuladas con fitohemaglutinina-M (PHA-M). Como controles se utilizaron células mononucleares no estimuladas con PHA-M. La proliferación celular se midió utilizando un método colorimétrico MTT [3-(4.5 dimethylthiazol-2-yl)-2.5 diphenyl tetrazolium bromide].De nueve niños (82%) fueron masculinos y 2 ((18%) fueron femeninos. La edad media de los niños quemados fue de 4,03 ± 4,19 años y la de los niños controles 3,26 ± 5,62 años. En el grupo estudiado se observó en la proliferación celular una respuesta de los linfocitos disminuida en relación a los controles. (1,16 ± 0,31 versus 2,66 ± 0,37, p

Hepatocellular carcinoma (HCC) represents 80% of the primary hepatic neoplasms. It is the sixth most frequent neoplasm, the fourth cause of cancer-related death, and 7% of registered malignancies. Sorafenib is the first line molecular targeted therapy for patients in advanced stage of HCC. The present study shows that Sorafenib exerts free radical scavenging properties associated with the downregulation of nuclear factor E2-related factor 2 (Nrf2)-regulated thioredoxin 1 (Trx1) expression in liver cancer cells. The experimental downregulation and/or overexpression strategies showed that Trx1 induced activation of nitric oxide synthase (NOS) type 3 (NOS3) and S-nitrosation (SNO) of CD95 receptor leading to an increase of caspase-8 activity and cell proliferation, as well as reduction of caspase-3 activity in liver cancer cells. In addition, Sorafenib transiently increased mRNA expression and activity of S-nitrosoglutathione reductase (GSNOR) in HepG2 cells. Different experimental models of hepatocarcinogenesis based on the subcutaneous implantation of HepG2 cells in nude mice, as well as the induction of HCC by diethylnitrosamine (DEN) confirmed the relevance of Trx1 downregulation during the proapoptotic and antiproliferative properties induced by Sorafenib. In conclusion, the induction of apoptosis and antiproliferative properties by Sorafenib were related to Trx1 downregulation that appeared to play a relevant role on SNO of NOS3 and CD95 in HepG2 cells. The transient increase of GSNOR might also participate in the deactivation of CD95-dependent proliferative signaling in liver cancer cells., Graphical abstract Graphical Abstract. Sorafenib reduced ROS/RNS cytoplasmic concentrations which were associated with decreased Nrf2 nuclear translocation, Trx1 expression/activity, and SNO–NOS3 expression and NO intracellular generation in HepG2. The reduction of SNO–NOS3 expression and NO generation might also be influenced by the induction of transient GSNOR expression/activity and reduced NOS3 expression by Sorafenib. The diminution of SNO-CD95 expression by Sorafenib involved reduction of caspase-8 activity and cell proliferation, and increased downstream caspase-3 activity in liver cancer cells.Image 1, Highlights • Sorafenib induces mitochondrial ROS generation, but also acts as nucleophilic scavenger. • Sorafenib reduces Nrf2-depenent Trx1 expression, and SNO–NOS3 and SNO-CD95 ratios. • Sorafenib-related antitumoral in vivo activity involves diminution of Trx1 and SNO-CD95.

Resumen Objetivo: Reportar un caso sobre el uso de la terapia de presión negativa como tratamiento alternativo en el manejo de una úlcera vascular arterial de miembros inferiores. Métodos: Por medio de la historia clínica, se revisó los registros previos de una paciente en un centro de atención médica de tercer nivel en Popayán, Colombia. Posteriormente, se realizó una revisión sistemática bibliográfica a través de las bases de datos de Pubmed, ScienceDirect y Scielo. Resultados: La terapia de presión negativa favoreció el proceso de cicatrización, permitiendo el cierre de la herida. Conclusiones: Actualmente, este sistema se considera un apoyo fundamental en el tratamiento de las heridas complejas, las cuales suponen un reto terapéutico importante. Abstract Objective: To report a case about the use of the Negative-pressure wound therapy as an alternative treatment for arterial vascular ulcers presented in the lower limbs. Methods: The patient’s records were reviewed based on her medical history in a tertiary referral care center in Popayan, Colombia. Subsequently, a systematic literature review was conducted through the Pubmed database, ScienceDirect, and Scielo. Results: The use of Negative-pressure wound therapy favored the lesion healing process. Conclusions: Nowadays, this system is considered as an essential treatment for complex wounds, which represent a major therapeutic challenge.

This article belongs to the Special Issue Trends in Molecular Research for Transplantation Immunology., Regulatory T cells (Tregs) are essential for the maintenance of tolerance to self and non-self through cell-intrinsic and cell-extrinsic mechanisms. Peripheral Tregs survival and clonal expansion largely depend on IL-2 and access to co-stimulatory signals such as CD28. Engagement of tumor necrosis factor receptor (TNFR) superfamily members, in particular TNFR2 and DR3, contribute to promote peripheral Tregs expansion and sustain their survival. This property can be leveraged to enhance tolerance to allogeneic transplants by tipping the balance of Tregs over conventional T cells during the course of immune reconstitution. This is of particular interest in peri-transplant tolerance induction protocols in which T cell depletion is applied to reduce the frequency of alloreactive T cells or in conditioning regimens that allow allogeneic bone marrow transplantation. These conditioning regimens are being implemented to limit long-term side effects of continuous immunosuppression and facilitate the establishment of a state of donor-specific tolerance. Lymphopenia-induced homeostatic proliferation in response to cytoreductive conditioning is a window of opportunity to enhance preferential expansion of Tregs during homeostatic proliferation that can be potentiated by agonist stimulation of TNFR., This work has been supported by grant FIS PI13/00029 (Fondo de Investigaciones Sanitarias, Ministry of Health, Spanish Government and co-funded by European Union ERDF/ESF, “Investing in your future”), LE093U13 and Unit of Excellence Research UIC #012 (Department of Education of the Regional Government, Junta de Castilla y Leon), and Gerencia Regional de Salud (BIO/01/15) to JIRB. It was also funded by FIS PI16/00002 (Instituto de Salud Carlos III and co-funded by European Union ERDF/ESF, “Investing in your future”) and Gerencia Regional de Salud GRS963/A/2014, GRS1142/A/2015 and GRS 1505/A/2017 to M.L.R.G. This work has been supported with funding from the Spanish National Network CIBER-ONC (oncology research) CB16/12/00480 to JAPS. PS is supported by the Swiss National Science Foundation (grant 31003A-176526).

La endometriosis (EDT) es una de las enfermedades ginecológicas benignas más comunes en mujeres en edad reproductiva y se define por la presencia de tejido endometrial fuera de la cavidad uterina. Debido a la cuestionada eficiencia de la terapéutica actual y basándonos en trabajos previos de nuestro grupo, orientamos la búsqueda de terapias alternativas hacia compuestos naturales que puedan administrarse por períodos prolongados sin causar efectos adversos. El objetivo general de esta tesis consistió en evaluar el efecto del ácido elágico y dos de sus metabolitos, urolitina A y B; sobre el crecimiento de lesiones endometriósicas en un modelo murino de EDT. Asimismo, se evaluaron sus efectos sobre el crecimiento y comportamiento de células epiteliales y estromales endometriales in vitro. Los resultados obtenidos resultan prometedores ya que todos los tratamientos, especialmente con los metabolitos, provocaron efectos inhibitorios sobre el comportamiento celular y el desarrollo de la EDT, in vitro; así como las urolitinas demostraron tener efectos antiproliferativos y proapoptóticos in vivo. Estos resultados avalan continuar investigando los mecanismos de acción de estos compuestos, ya que podrían representar una nueva estrategia terapéutica potencial para el tratamiento de la EDT. Endometriosis (EDT) is one of the most common benign gynecological diseases in women of reproductive age and is defined by the presence of endometrial tissue outside the uterine cavity. Due to the questioned efficiency of the current therapeutics, and based on previous work made by our research group, we focused our searching of alternative therapies towards natural compounds that can be administered for prolonged periods without causing adverse effects. The general objective of this thesis was to evaluate the effect of ellagic acid and two of its metabolites, urolithin A and B, on the growth of endometriotic lesions in a murine EDT model. Its effects on the growth and behavior of endometrial stromal and epithelial cells were also evaluated in vitro. The results obtained are promising because all treatments, especially metabolites, caused inhibitory effects on cell behavior and the development of EDT in vitro; Urolithins also showed antiproliferative and proapoptotic effects in vivo. These results support further research into the mechanisms of action of these compounds, as they could represent a potential new therapeutic strategy for the treatment of EDT. Fil: Mc Cormack, Bárbara Andrea. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Los tumores de células de Leydig (TCL) son tumores endócrinos que se originan principalmente en el intersticio testicular, y en menor proporción en ovario, glándula adrenal y cordón espermático. Según reportes recientes asociados a una mejora en las técnicas de diagnóstico, la incidencia de los TCL testiculares se halla en aumento. Estos tumores se asocian a un 48% de infertilidad masculina, y si bien suelen ser benignos, cuando malignizan no responden a las terapias disponibles actualmente, dando como resultado una sobrevida promedio de solamente dos años. Más aun, múltiples trabajos reportan la reaparición de TCL hasta diez años después de su remoción, sugiriendo así la presencia de células remanentes en otros órganos al momento del tratamiento. Los TCL se caracterizan por una sobreproducción de esteroides, cuyo resultado es la pseudo-pubertad precoz en niños y la disfunción eréctil o ginecomastia, en adultos. En conjunto, lo expuesto evidencia la necesidad de establecer nuevos enfoques terapéuticos. La histamina (HA), amina biogénica sintetizada únicamente por la enzima histidina decarboxilasa (HDC), ha sido descripta en múltiples patologías como factor de crecimiento autócrino, además de su conocido rol como neurotransmisor y modulador de la inflamación. A su vez, ha sido relacionada con el síndrome carcinoide, en donde en forma secundaria a la patología de origen, como ser los tumores secretores de HA, el paciente experimenta diarrea, hipotensión, taquicardia, vasoconstricción, disnea, fibrosis retroperitoneal e incluso falla cardíaca. En nuestro laboratorio hemos descripto la sobreexpresión de HDC en células de Leydig (CL) tumorales MA-10, las cuales también presentan un aumento significativo en la actividad de la enzima en comparación con las CL normales. A su ez, observamos que en dichas células la HA es capaz de estimular la proliferación celular, y que ejerce un efecto modulador sobre la esteroidogénesis. En base a las consideraciones descriptas, el objetivo de este trabajo fue investigar el papel de la HA en la progresión de los TCL, su efecto sobre la neoangiogénesis tumoral, y la inhibición de HDC como potencial estrategia terapéutica, tanto para disminuir el tamaño tumoral como para evitar las complicaciones asociadas al tumor y a los tratamientos actuales. En este sentido, la orquiectomía radical y/o la quimioterapia utilizadas de rutina en la clínica conllevan efectos secundarios físicos y psicológicos, que afectan la calidad de vida de los pacientes. En primer término, realizamos ensayos in vitro en dos líneas celulares de TCL con diferente fenotipo (las CL de ratón MA-10, que secretan como esteroide mayoritario progesterona ante la estimulación con LH, y las CL de rata R2C, que secretan estradiol de forma constitutiva), y observamos que la HA incrementó la proliferación celular, la neoangiogénesis y la síntesis de esteroides. Además, las CL R2C presentaron elevada expresión de HDC, al igual que habíamos reportado previamente para las CL MA-10. En concordancia con estos resultados, observamos intensa marcación positiva para HDC en cortes de testículo de pacientes portadores de TCL, no así en controles normales de la misma edad. A su vez, la inhibición de HDC utilizando dos inhibidores, α-MHD y EGCG (sintético y natural, respectivamente) resultó en una disminución de la proliferación celular y la síntesis de esteroides, así como también disminuyó la producción de factores pro-angiogénicos por parte de las CL tumorales. Para los estudios in vivo se establecieron dos modelos de TCL murinos a partir de las líneas de CL tumorales citadas. En ambos modelos se evaluó el efecto de α-MHD y EGCG, solos o en combinación con Carboplatino (CP). En el caso de los TCL generados a partir de las CL MA-10, α-MHD fue capaz de disminuir el tamaño tumoral, solo y en combinación con CP, a diferencia de EGCG que no mostró efecto sobre el crecimiento del tumor en los tiempos y esquema de dosis estudiados. Por su parte, el crecimiento de los TCL generados a partir de las CL R2C sólo disminuyó post tratamiento con α-MHD o EGCG en combinación con CP; los inhibidores administrados solos no tuvieron efecto. Puntualmente la combinación de EGCG con CP fue la más eficaz, dado que el crecimiento de los tumores se detuvo a tiempos tempranos. A pesar de no observarse efecto de ninguno de los inhibidores solos sobre el crecimiento tumoral en los tiempos evaluados, se registró una disminución en los niveles de esteroides plasmáticos, demostrando así su capacidad de contrarrestar el desbalance hormonal asociado la presencia de un tumor endócrino. En conjunto, los resultados de estos ensayos dan cuenta de la necesidad de establecer a futuro a qué fenotipo pertenecen los pacientes con TCL, a fin de definir el inhibidor de HDC que será más efectivo. Con base en los hallazgos que aquí se describen, el presente trabajo demuestra por primera vez el rol de la HA en el crecimiento de los TCL, y sienta las bases para el desarrollo de una estrategia terapéutica novedosa, menos agresiva que las utilizadas actualmente, que apunte a la inhibición de HDC. Las publicaciones relacionadas con el efecto protector del EGCG sobre las gametas masculinas en pacientes sometidos a tratamientos oncológicos subrayan la importancia del presente trabajo, y validan el uso de EGCG en combinación con las terapias de rutina. Leydig cell tumors (LCT) are endocrine tumors that originate primarily in the testicular interstitium, and to a lesser extent in the ovary, adrenal gland and spermatic cord. According to recent reports associated with an improvement in diagnostic techniques, the incidence of testicular LCT is increasing. These tumors are associated with 48% male infertility, and although they tend to be benign, when they become malignant they do not respond to currently available therapies, resulting in an average survival of only two years. Moreover, multiple studies have reported the reappearance of LCT up to ten years after its removal, suggesting the presence of remaining cells in other organs at the time of treatment. LCTs are characterized by an overproduction of steroids, the result of which is early pseudo-puberty in children and erectile dysfunction or gynecomastia in adults. All in all, the evidence above demonstrates the need to establish new therapeutic approaches. Histamine (HA), a biogenic amine synthesized solely by histidine decarboxylase (HDC) enzyme, has been described in multiple pathologies as an autocrine growth factor, in addition to its well-known role as a neurotransmitter and modulator of inflammation. Also, HA has been related to the carcinoid syndrome, a paraneoplastic syndrome which causes the patient to experience diarrhea, hypotension, tachycardia, vasoconstriction, dyspnea, retroperitoneal fibrosis and even heart failure. In our laboratory we have described the overexpression of HDC in MA-10 tumor Leydig (LC) cells, which also have significantly increased enzyme activity compared to normal LC. Also, we observed that in these cells HA is capable of stimulating cell proliferation, and that it can modulate steroidogenesis. Based on the above, the objective of this thesis was to investigate the role of HA in the progression of LCT, its effect on tumor neo-angiogenesis, and the inhibition of HDC as a potential therapeutic strategy not only to reduce tumor growth but also to minimize complications related to the tumor itself and to current treatments. In this sense, radical orchiectomy and / or chemotherapy routinely used in the clinic have physical and psychological side effects that affect the life quality of the patients. Firstly, we performed in vitro assays in two LCT cell lines with different phenotype (MA-10 mouse LCs, which secrete progesterone upon stimulation with LH as a major steroid, and R2C rat LCs, which secrete estradiol in a constitutive manner), and we observed that HA increased cell proliferation, neo-angiogenesis and steroid synthesis. In addition, R2C LCs showed high HDC expression, as we had previously reported for MA-10 LCs. In accordance with these results, we observed intense positive HDC staining in testis sections of patients with LCT, but not in normal controls of the same age. Additionally, inhibition of HDC using two inhibitors, α-MHD and EGCG (synthetic and natural, respectively) resulted in a decrease in cell proliferation and steroid synthesis, as well as in a decreased production of pro-angiogenic factors by tumor LC. For in vivo studies, two murine LCT models were established based on the aforementioned tumor LC lines. In both models we evaluated the effect of α-MHD and EGCG, as single agents or in combination with Carboplatin (CP). In the case of the LCT generated from MA-10 LCs, α-MHD was able to decrease the tumor size, alone and in combination with CP, unlike EGCG which showed no effect on tumor growth over the time and dosing scheme studied. On the other hand, the growth of the LCT generated from R2C Lcs only decreased after treatment with α-MHD or EGCG in combination with CP; the inhibitors administered alone had no effect. Particularly, the combination of EGCG with CP was the most effective, since the growth of the tumors stopped at early stages. In spite of not observing an effect of any of the inhibitors alone on tumor growth in the evaluated times, we did see a decrease in plasma steroid levels, thus demonstrating their ability to counteract the hormonal imbalance associated with the presence of an endocrine tumor. Together, the results of these work evidence the need to establish the phenotype to which patients baring LCT belong, in order to define which HDC inhibitor would be most effective. Based on the findings described herein, this work demonstrates for the first time the role of HA in the growth of TCL, and sets the basis for the development of a novel therapeutic strategy, less aggressive than the ones currently used, directed to HDC inhibition. Recent publications related to the protective effect of EGCG on male gametes in patients undergoing cancer treatments underline the importance of this work, and validate the use of EGCG in combination with current therapies. Fil: Abiuso, Adriana María Belén. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Las células madre amnióticas epiteliales (hAECs) son aisladas del amnios de la placenta humana a término. Son pluripotentes, no son tumorigénicas y poseen propiedades inmunomoduladoras. Estas características las vuelven candidatas ideales para la medicina regenerativa. La falla hepática es una de las mayores causas de morbilidad y mortalidad en el mundo. Si bien el trasplante representa el mejor tratamiento, existen varios obstáculos al respecto. Recientemente, las hAECs han sido propuestas como fuente alternativa de hepatocitos debido a su potencial de diferenciación hepatogénica. Por otro lado, el amnios presenta potencial terapéutico para tratar diferentes enfermedades, incluido el cáncer. Varios estudios indican que la membrana amniótica posee propiedades antiproliferativas, antiangiogénicas y proapoptóticas, concertando de esta manera una actividad antitumoral. El carcinoma hepatocelular (HCC) es el tercer tipo de cáncer que más muertes causa a nivel mundial. Actualmente, se buscan tratamientos alternativos a la radio o quimioterapia, con mayor efectividad. El presente trabajo de Tesis ha sido desarrollado con el objetivo de estudiar y caracterizar a las hAECs durante su diferenciación hepática, evaluando los mecanismos celulares relativos a la proliferación y a los caminos de transducción de señales activados, así como su potencial regenerativo. Por otro lado, se analizaron las propiedades antiproliferativas del medio condicionado de la membrana amniótica (MC-MA) en modelos de hepatocarcinoma, evaluando su potencial antitumoral. En primer lugar, demostramos utilizando un protocolo con factores de diferenciación (DH), que las hAECs se diferencian eficientemente a células símil-hepáticas, incrementándose la expresión de marcadores hepáticos y la síntesis de glucógeno, así como la proliferación y la progresión del ciclo celular; y activándose las vías de MAPK y de PI3K. El tratamiento de las hAECs con medio condicionado de hepatocitos en cultivo (MC) no resultó eficiente para inducir la diferenciación hepática y la proliferación de las hAECs. En este contexto, nos planteamos evaluar la capacidad regenerativa de las hAECs diferenciadas con el medio DH, en un modelo murino de daño hepático inducido con CCl4. Observamos que el trasplante de hAECs diferenciadas disminuye parámetros característicos de la fibrosis hepática como la necrosis, los depósitos de colágeno y los niveles de enzimas hepáticas. En conjunto, nuestros resultados evidencian la potencial aplicación de las hAECs diferenciadas en el tratamiento de enfermedades hepáticas en el contexto de la medicina regenerativa. Por otro lado, demostramos que el MC-MA disminuye significativamente la proliferación y la viabilidad de células HepG2 y HuH-7 y regula la expresión de microARNs involucrados en el desarrollo del HCC, contribuyendo a su posible efectiva acción antitumoral. Nuestros estudios amplían el conocimiento acerca de las propiedades antitumorales de la membrana amniótica, representando un avance para los futuros tratamientos alternativos contra el HCC. Amniotic epithelial stem cells (hAECs) can be isolated from the amnion of the human placenta at term. They are pluripotent, they are not tumorigenic and they have immunomodulatory properties. These characteristics would make it ideal candidates for regenerative medicine. Hepatic failure is one of the major causes of morbidity and mortality in the world. Although liver transplantation is the best treatment, there are several obstacles. Recently, hAECs have been spotlighted as alternative source of hepatocytes because of their potential for hepatogenic differentiation. On the other hand, the amnion has therapeutic potential to treat different diseases, including cancer. Several studies indicate that the amniotic membrane possesses antiproliferative, antiangiogenic and proapoptotic properties, thus leading to an antitumoral activity. Hepatocellular carcinoma (HCC) is the third type of cancer that causes more deaths worldwide. Currently, alternative treatments to radio- or chemotherapy have been searched. This work has been developed in order to study and to characterize the hAECs during their hepatic differentiation. In particular, we evaluated the cellular mechanisms regarding proliferation and the signaling pathways involved, as well as their regenerative potential. Moreover, we analyzed the antiproliferative properties of the human amniotic membrane conditioned medium (AM-CM) in hepatocarcinoma models, as part of its antitumoral potential. First, we demonstrated by applying a protocol with differentiation factors (HD), that hAECs efficiently differentiate to hepatic like cells, increasing hepatic markers expression and glycogen synthesis, as well as proliferation and cell cycle progression. The MAPK and PI3K pathways are activated during this differentiation process. The treatment of hAECs with conditioned medium of cultured hepatocytes (CM) was not efficient to induce neither hepatic differentiation nor proliferation of hAECs. In order to validate the regenerative capacity of the differentiated hAECs, we evaluated these hepatic like cells in a CCl4-induced mouse liver injury model. We observed that the differentiated hAECs transplantation decreases liver fibrosis characteristic parameters such as necrosis, collagen deposition and liver enzyme levels. Taken together, our results show the potential application of hepatocyte differentiated hAECs in the treatment of liver diseases. On the other hand, we demonstrated that AM-CM significantly decreases the proliferation and viability of HepG2 and HuH-7 cells and regulates the microRNAs expression involved in the HCC physiology, all together contributing to a possible effective anticancer action. Our studies increase the knowledge about the amniotic membrane antitumoral properties, representing an innovation for future alternative treatments against HCC. Fil: Riedel, Rodrigo Nicolás. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Multipotent mesenchymal stromal cells (MSCs) have emerged as a promising cell therapy in regenerative medicine and for autoimmune/inflammatory diseases. However, a main hurdle for MSCs‐based therapies is the loss of their proliferative potential in vitro. Here we report that glycoprotein A repetitions predominant (GARP) is required for the proliferation and survival of adipose‐derived MSCs (ASCs) via its regulation of transforming growth factor‐β (TGF‐β) activation. Silencing of GARP in human ASCs increased their activation of TGF‐β which augmented the levels of mitochondrial reactive oxygen species (mtROS), resulting in DNA damage, a block in proliferation and apoptosis. Inhibition of TGF‐β signaling reduced the levels of mtROS and DNA damage and restored the ability of GARP−/lowASCs to proliferate. In contrast, overexpression of GARP in ASCs increased their proliferative capacity and rendered them more resistant to etoposide‐induced DNA damage and apoptosis, in a TGF‐β‐dependent manner. In summary, our data show that the presence or absence of GARP on ASCs gives rise to distinct TGF‐β responses with diametrically opposing effects on ASC proliferation and survival., Silencing of glycoprotein A repetitions predominant (GARP) in adipose‐derived mesenchymal stromal cells (ASCs) increases the activation of transforming growth factor‐β (TGF‐β), resulting in mitochondrial reactive oxygen species‐dependent DNA damage, inhibition of proliferation, and apoptosis. In contrast, overexpression of GARP induces a TGF‐β response characterized by an increased resistance to DNA damage, increased proliferation, and a reduction in apoptosis. We show that GARP is critical in controlling TGF‐β activation/signaling in ASCs during in vitro expansion.

Glutaminase (GA) catalyzes the first step in mitochondrial glutaminolysis playing a key role in cancer metabolic reprogramming. Humans express two types of GA isoforms: GLS and GLS2. GLS isozymes have been consistently related to cell proliferation, but the role of GLS2 in cancer remains poorly understood. GLS2 is repressed in many tumor cells and a better understanding of its function in tumorigenesis may further the development of new therapeutic approaches. We analyzed GLS2 expression in HCC, GBM and neuroblastoma cells, as well as in monkey COS-7 cells. We studied GLS2 expression after induction of differentiation with phorbol ester (PMA) and transduction with the full-length cDNA of GLS2. In parallel, we investigated cell cycle progression and levels of p53, p21 and c-Myc proteins. Using the baculovirus system, human GLS2 protein was overexpressed, purified and analyzed for posttranslational modifications employing a proteomics LC-MS/MS platform. We have demonstrated a dual targeting of GLS2 in human cancer cells. Immunocytochemistry and subcellular fractionation gave consistent results demonstrating nuclear and mitochondrial locations, with the latter being predominant. Nuclear targeting was confirmed in cancer cells overexpressing c-Myc- and GFP-tagged GLS2 proteins. We assessed the subnuclear location finding a widespread distribution of GLS2 in the nucleoplasm without clear overlapping with specific nuclear substructures. GLS2 expression and nuclear accrual notably increased by treatment of SH-SY5Y cells with PMA and it correlated with cell cycle arrest at G2/M, upregulation of tumor suppressor p53 and p21 protein. A similar response was obtained by overexpression of GLS2 in T98G glioma cells, including downregulation of oncogene c-Myc. Furthermore, human GLS2 was identified as being hypusinated by MS analysis, a posttranslational modification which may be relevant for its nuclear targeting and/or function. Our studies provide evidence for a tumor suppressor role of GLS2 in certain types of cancer. The data imply that GLS2 can be regarded as a highly mobile and multilocalizing protein translocated to both mitochondria and nuclei. Upregulation of GLS2 in cancer cells induced an antiproliferative response with cell cycle arrest at the G2/M phase.

Podoplanin (Pdpn), a brain-tumor-related glycoprotein identified in humans and animals, is endogenously expressed in several organs critical for life support such as kidney, lung, heart and brain. In the brain, Pdpn has been identified in proliferative nestin-positive adult neural progenitor cells and in neurons of the neurogenic hippocampal dentate gyrus (DG), a structure associated to anxiety, critical for learning and memory functions and severely damaged in people with Alzheimer’s Disease (AD). The in vivo role of Pdpn in adult neurogenesis and anxiety-like behavior remained however unexplored. Using mice with disrupted Pdpn gene as a model organism and applying combined behavioral, molecular biological and electrophysiological assays, we here show that the absence of Pdpn selectively impairs long-term synaptic depression in the neurogenic DG without affecting the CA3-Schaffer’s collateral-CA1 synapses. Pdpn deletion also enhanced the proliferative capacity of DG neural progenitor cells and diminished survival of differentiated neuronal cells in vitro. In addition, mice with podoplanin gene disruption showed increased anxiety-like behaviors in experimentally validated behavioral tests as compared to wild type littermate controls. Together, these findings broaden our knowledge on the molecular mechanisms influencing hippocampal synaptic plasticity and neurogenesis in vivo and reveal Pdpn as a novel molecular target for future studies addressing general anxiety disorder and synaptic depression-related memory dysfunctions., C, PU and FM were supported by the Austrian Science Fund [FWF: Project Number P_27551].

El desarrollo de materiales poliméricos para aplicaciones biomédicas ha experimentado un avance significativo. Dado su carácter biodegradable, su biocompatibilidad y su producción económica y reproducible, los poliésteres sintéticos como el ácido poliláctico (PLA) se han visto favorecidos en el desarrollo de dispositivos terapéuticos como endoprótesis, “scaffolds” tridimensionales para la ingeniería de tejidos o stents destinados al tratamiento de la enfermedad arterial coronaria (CAD). La incorporación de diversos agentes terapéuticos (API) a este tipo de dispositivos, los convierte en sistemas liberadores de fármacos a nivel local, siendo capaces de minimizar las complicaciones asociadas al proceso quirúrgico como pueden ser el malestar postoperatorio, episodios de contaminación microbiana o inflamación e incluso mejorando el efecto del implante sobre los tejidos circundantes llegando a posibilitar su regeneración. En este Trabajo de Fin de Grado se pretende estudiar la extracción de compuestos bioactivos a partir de residuos agroalimentarios como son las hojas de mango, las hojas de olivo y el hollejo de uva tinta; su posterior impregnación asistida por CO2 supercrítico (CO2SC) en uno de los polímeros más utilizados en el diseño de endoprótesis como es el PLA y el efecto que estas matrices impregnadas con extractos naturales tienen sobre el proceso de proliferación celular. Los extractos naturales se obtienen mediante la técnica de extracción con líquidos presurizados (PLE) a unas condiciones de 80ºC y 200 bar, empleando agua y etanol como disolventes. Los extractos obtenidos se caracterizan en términos de contenido total de polifenoles (TPC), capacidad antioxidante y en el caso de los extractos de hollejo, también en términos de contenido total de antocianos (TAC). Tras los correspondientes análisis, los extractos etanólicos, especialmente el de mango, resultan aquellos con un mayor poder antioxidante. Las matrices de PLA se impregnan con los extractos etanólicos mediante CO2SC manteniendo constantes la presión (250 bar) y la temperatura (55ºC) de trabajo. Los productos resultantes se estudian y se determina que su carga de impregnación oscila entre el 1-2%. El polímero impregnado, es además capaz de mantener las propiedades antioxidantes demostrando la posibilidad de desarrollar productos con aplicaciones biomédicas mediante esta tecnología. Mediante ensayos in vitro con células endoteliales formadora de colonias (ECFCS) se analiza el efecto de los distintos extractos puros y del PLA impregnado sobre el proceso de proliferación celular. Concentraciones elevadas de extractos, como norma general, se traducen en descenso de la proliferación y de la viabilidad celular, aunque se han observado indicios de efectos proangiogénicos. Por su parte, el carácter preliminar de los ensayos con PLA hace necesario repetir los mismos en condiciones óptimas ya que los resultados no han sido concluyentes.

"Aunado a sus funciones principales, recientemente se ha reconocido que el sistema nervioso central, contribuye de manera importante en el desarrollo de enfermedades como el cáncer (Kuol et al., 2018). Una de las características fundamentales que comparten la mayoría de los tipos de cáncer es la proliferación celular incontrolada, por lo tanto es importante incrementar los estudios para comprender este tipo de procesos en las células. En el presente trabajo nos enfocamos en evaluar el papel de las fibras nerviosas sensoriales, sobre la proliferación celular incontrolada de las células testiculares."

Resumen El interés y la necesidad de estudiar las células madre en terapias regenerativas han aumentado en los últimos años debido a su capacidad de proliferación y diferenciación hacia múltiples linajes. Desafortunadamente, el número de células demandado para un trasplante satisfactorio es mayor al que se logra extraer directamente del paciente, por lo que se deben realizar cultivos in vitro de células madre. Sin embargo, con el tiempo las células de estos cultivos se vuelven senescentes, disminuyendo así su número de divisiones celulares y su capacidad proliferativa. Para solucionar esta problemática se han propuesto factores de crecimiento como agentes potenciadores de la proliferación celular. Entre estos se encuentra el factor de crecimiento fibroblástico 2, que al agregarse al medio podría promover la proliferación y aumentar el tiempo de vida de las células en cultivo. En la siguiente revisión se recopila información sobre la biología de este factor de crecimiento y el tipo de señalización que utiliza, al igual que sus aplicaciones en terapia regenerativa y su efecto en la proliferación celular y senescencia. Abstract The interest and need to study stem cells in regenerative therapies has increased in recent years due to their ability to proliferate and differentiate into multiple lineages. Unfortunately, the number of cells needed for a successful transplant is greater than that obtained directly from the patient, so in vitro cultures of stem cells must be done. However, over time the cells in these cultures become senescent, decreasing their number of cellular divisions and their proliferative capacity. To solve this problem, different growth factors have been proposed as promoting agents for cell proliferation. Among these is the fibroblast growth factor 2 which, when added to the medium, could promote proliferation and increase the life time of the cells in the culture. The following review compiles information about the biology of this growth factor and the type of signaling it uses, as well as its applications in regenerative therapy and its effect on cell proliferation and senescence.

Las plantas de uso en medicina tradicional constituyen una fuente importante de compuestos con actividad inmunomoduladora; entre ellas las especies del genero Baccharis, conocidas popularmente como “Jaguareteka´a” en nuestro pais, son ampliamente empleadas. En este estudio se evaluo la actividad inmunomoduladora de extractos metanolicos de tres especies del genero Baccharis (B. trimera, B. notosergilay B. punctulata) sobre la proliferacion de celulas mononucleares humanas de sangre periferica. Los extractos de las tres especies estudiadas estimularon la proliferacion de las celulas mononucleares. Especificamente, el extracto de B. notosergila estimulo la proliferacion celular a todas las concentraciones probadas (5, 10, 25 y 50 μg/mL), mientras que los extractos de B. trimera y B. punctulata mostraron este efecto a 5 y 10 μg/mL. Ademas, por presentar mayor induccion de la proliferacion, se realizo un fraccionamiento con diferentes solventes del extracto metanolico de B. notosergila y B. punctulata. La fraccion de acetato de etilo de ambos extractos vegetales aumento la proliferacion celular, sugiriendo que compuestos de polaridad media son los responsables de esta actividad. Estos resultados demuestran que los extractos de B. trimera, B. notosergila y B. punctulata poseen actividad inmunomoduladora sobre celulas mononucleares humanas y serviran de base a otros estudios para determinar el o los componentes activos de los extractos sobre el sistema inmune.

A high adherence to a Mediterranean diet has been related to numerous beneficial effects in human health, including a lower incidence and mortality of prostate cancer (PCa). Olive oil is an important source of phenolic bioactive compounds, mainly hydroxytyrosol (HT), of this diet. Be-cause of the growing interest of this compound and its derivatives as a cancer chemopreventive agent, we aimed to compare the in vitro effect of HT isolated from olive mill wastewaters and five semisynthetic alkyl ether, ester, and nitro-derivatives against prostate cancer (PCa) cell lines. The effect in cell proliferation was determined in RWPE-1, LNCaP, 22Rv1, and PC-3 cells by resazurin assay, the effect in cell migration by wound healing assay, and tumorsphere and colony formation were evaluated. The changes in key signaling pathways involved in carcinogenesis were assessed by using a phosphorylation pathway profiling array and by Western blotting. Antiproliferative effects of HT and two lipophilic derivatives [hydroxytyrosyl acetate (HT-Ac)/ethyl hydroxytyrosyl ether (HT-Et)] were significantly higher in cancerous PC-3 and 22Rv1 cells than in non-malignant RWPE-1 cells. HT/HT-Ac/HT-Et significantly reduced migration capacity in RWPE-1 and PC-3 and prostatosphere size and colony formation in 22Rv1, whereas only HT-Ac and HT-Et reduced these functional parameters in PC-3. The cytotoxic effect in 22Rv1 cells was correlated with modifications in the phosphorylation pattern of key proteins, including ERK1/2 and AKT. Consistently, HT-Ac and HT-Et decreased p-AKT levels in PC-3. In sum, our results suggest that HT and its lipophilic derivatives could be considered as potential therapeutic tools in PCa. Junta de Andalucía PI-0152-2019, BIO-0139, RH-0084-2020 Ministerio de Economía y Competitividad PID2019-105564RB-I00, PID2019-105201RB-I00, FPU17/00263, FPU16/06190, FPU18/02485

The scaffolds and their interaction with mesenchymal stem cells are objects of study in bioengineering and tissue repair. Mechanisms such as surface adhesion, proliferation, viability, and cytotoxicity are essential for the development of therapies. The present study analyzed the influence of platelet-rich fibrin (PRF) in viability, cytotoxicity, and proliferation of stem cells from human exfoliated deciduous teeth (SHED) exposed to bovine biomaterial surfaces. The studied groups were divided and analyzed as follows: (S) only SHED as control Group; (SB) SHED + biomaterial; (SBP) SHED + biomaterial + PRF. Analyses of cells seeded in 24-well plates were performed after 24, 48 and 72 hours. Individual groups were subjected to viability, cytotoxicity and cell proliferation tests using neutral red, MTT and crystal violet, respectively; and in the 72-hour group, scanning electron microscopy (SEM) was performed to record cell ultra-morphology. Data were submitted to statistical analysis by two-factor ANOVA with a significance level of 5%. The results demonstrated a better performance in the viability/cytotoxicity and proliferation of stem cells for the group (SBP) in comparison to the group (SB) and the group (S). The applied statistical tests showed that the biomaterial factor, time, and interaction between them gave rise to results with statistical significance. SHED submitted to bovine biomaterial were more viable, proliferative and with lower toxicity when associated with PRF. PRF seemed to activate the metabolism of stem cells in culture, indicating that such an association can bring an effective benefit in clinical outcome. El marco y su interacción con las células madres mesenquimales son objetos de estudio en bioingeniería y reparación de tejidos. Mecanismos como la adhesión superficial, la proliferación, la viabilidad y la citotoxicidad son fundamentales para el desarrollo de terapias. El presente estudio analizó la influencia de la fibrina rica en plaquetas (PRF) sobre la viabilidad, citotoxicidad y proliferación de células madre mesenquimales de dientes primarios humanos exfoliados (SHED) en contacto con biomateriales bovinos. Los grupos estudiados se dividieron y analizaron de la siguiente manera: (S) solo SHED como grupo de control; (SB) SHED + biomaterial; (SBP) SHED + biomaterial + PRF. Se realizaron análisis de células sembradas en placas de 24 pocillos después de 24, 48 y 72 horas. Los grupos individuales se sometieron a pruebas de viabilidad, citotoxicidad y proliferación celular utilizando rojo neutro, MTT y violeta cristal, respectivamente, y en el grupo de 72 horas, se realizó microscopía electrónica de barrido (SEM) para registrar la morfología celular. Los datos se sometieron a análisis estadístico mediante ANOVA de dos factores con un nivel de significancia del 5%. Los resultados demostraron un mejor desempeño en la viabilidad / citotoxicidad y proliferación de células madre para el grupo (SBP) en comparación con el grupo (SB) y el grupo (S). Las pruebas estadísticas aplicadas mostraron que el factor biomaterial, el tiempo y la interacción entre ellos dieron lugar a resultados con significación estadística, las SHED sometidas a biomaterial bovino fueron más viables, proliferativos y con menor toxicidad cuando se asociaron con PRF. PRF parecio activar el metabolismo de las células madres en cultivo, lo que indica que tal asociación puede aportar un beneficio efectivo en los resultados clínicos. O arcabouço e a sua interação com as células-tronco mesenquimais são objetos de estudo em bioengenharia e reparo de tecidos. Mecanismos como adesão superficial, proliferação, viabilidade e citotoxicidade são fundamentais para o desenvolvimento de terapias. O presente estudo analisou a influência da fibrina rica em plaquetas (PRF) na viabilidade, citotoxicidade e proliferação de células-tronco mesenquimais de dentes decíduos humanos esfoliados (SHED) em contato com biomaterial de origem bovina. Os grupos estudados foram divididos e analisados ​​da seguinte forma: (S) apenas SHED como Grupo controle; (SB) SHED + biomaterial; (SBP) SHED + biomaterial + PRF. As análises das células semeadas em placas de 24 poços foram realizadas após 24, 48 e 72 horas. Grupos individuais foram submetidos a testes de viabilidade, citotoxicidade e proliferação celular usando vermelho neutro, MTT e cristal violeta, respectivamente, e no grupo de 72 horas foi realizada a microscopia eletrônica de varredura (MEV) para registrar a ultra morfologia celular. Os dados foram submetidos à análise estatística por ANOVA de dois fatores com nível de significância de 5%. Os resultados demonstraram um melhor desempenho na viabilidade / citotoxicidade e proliferação de células-tronco para o grupo (SBP) em relação ao grupo (SB) e ao grupo (S). Os testes estatísticos aplicados mostraram que o fator biomaterial, o tempo e a interação entre eles deram origem a resultados com significância estatística. As SHED submetidas ao biomaterial bovino se apresentaram mais viáveis, proliferativas e com menor toxicidade quando associadas à PRF. A PRF pareceu ativar o metabolismo das células-tronco em cultivo, indicando que tal associação pode trazer um benefício efetivo nos desfechos clínicos.

Cigarette smoke compromises the salivary glands, altering saliva. Cotinine is the most effective biomarker to assess tobacco consumption, and passive smokers are characterized by serum cotinine levels above 2.1 ng/mL. This study aimed to evaluate the effect of exposure to cigarette smoke on rats submandibular glands. The morphology, the proliferative cells of intercalated ducts (immunohistochemistry for KI-67) and its correlation with serum cotinine levels were analyzed. Wistar rats were grouped: control (C); inhalation of smoke for 30 days (T1) and 60 days (T2). Data were analyzed with the Levene variance homogeneity test, Spearman's test, ANOVA and Tukey's post-test, with significance p

Pocos avances recientes han revolucionado tanto la biología del desarrollo como la reprogramación de células por transferencia nuclear. Desde 1952 a la fecha, se ha acumulado suficiente información teórica así como tecnologías de avanzada, para desmitificar el paradigma de la irreversibilidad de la diferenciación celular. El cigoto totipotente cuando empieza a segmentarse da origen al blastocisto, estado embrionario cuyas células de la masa celular interna son pluripotentes y capaces de originar los linajes celulares de las tres capas germinales. Estas células son las denominadas células madre embrionarias. La diversidad celular en un organismo adulto es consecuencia del control epigené- tico de la expresión génica que restringe progresivamente la pluripotencia y permite que algunas de ellas proliferen continuamente durante la vida del individuo, otras estén en reposo proliferativo y unas pocas alcancen una masa adecuada y dejen de proliferar. Sin embargo en todas estas poblaciones celulares, existen grupos pequeños que son pluripotentes y se denominan células madre adultas. La transferencia de núcleos somáticos a citoplasma de ovocitos o de cigotos demostró que su información genética puede ser reprogramada y regresarla al estado de pluripotencia. Los conocimientos señalados, han permitido emplear esta biotecnología con fines reproductivos y terapéuticos pero cuya aplicación en humanos es cuestionada desde el punto de vista de la bioética. Recientemente se ha logrado fusionar células madre embrionarias con células somáticas adultas, logrando que la célula hibrida resultante vuelva al estado pluripotente. Además se ha descubierto que la pluripotencia es consecuencia de la

Se estudiaron tres lectinas de la familia Fabacea (LDG-I y LDG-II de D. grandiflora, y LGL-II de G. lindenii), y se determinó su especificidad de unión y la influencia de ciertos glicotopes, así como de algunos residuos de azúcares circundantes en el reconocimiento de cada lectina, usando distintas glicoformas de O/N-glicoproteínas, eritrocitos de diferente perfil glicómico y a través del acople molecular in silico para la LGL-II. Se evaluó el efecto de las lectinas sobre los procesos de proliferación y migración celular en queratinocitos epidérmicos humanos; y se propuso un modelo de interacciones moleculares promovidas por las mismas. Las lectinas tipo II, i.e., LDG-II y LGL-II (con especificidades por cierto tipo de galactósidos y determinados glicotopes) mostraron efectos positivos sobre la proliferación y la migración en queratinocitos epidérmicos humanos; mientras que la lectina LDG-I (con especificidad por manósidos y otros glicotopes) mostró efecto positivo sobre la proliferación solo en la menor concentración usada e inhibió la migración en todas las condiciones probadas. La expresión del receptor de crecimiento epidérmico EGFR fosforilado se vió incrementada en lisados de queratinocitos cultivados en presencia de las lectinas tipo II; y se detectó un aumento en la concentración del factor EGF en los sobrenadantes de células cultivadas en presencia de LGL-II. Se observaron algunas similitudes en la especificidad de las lectinas tipo II hacia ligandos conocidos de la galectina-3 (LGALS3), lectina que tiene un papel en la reepitelización de la piel en mamíferos, y se plantean algunas semejanzas en los modelos propuestos de interacciones moleculares de las lectinas LDG-II y LGL-II, con las interacciones conocidas y predichas de la galectina LGALS3 con glicoconjugados celulares encontradas en bases de datos y en artículos publicados. Los resultados obtenidos, nos permiten tener como perspectiva la realización de estudios enfocadas a evaluar el efecto de las lectinas vegetales tipo II, en heridas de piel en modelo mamífero, y el uso potencial de alguna(s) de estas en tratamientos de curación de lesiones cutáneas en humanos, teniendo en cuenta sus efectos y sus especificidades de ligando. Abstract: Three plant lectins from Fabacea family were studied (LDG-I and LDG-II from D. grandiflora, and LGL-II from G. lindenii); their binding specificity was evaluated and the influence of certain glycotopes as well as some residues of surrounding sugars in the recognition of each lectin was determined using different glycoforms of O/N-glycoproteins, erythrocytes of different glycomic profile and through the in silico molecular docking for LGL-II. Lectins effect on the proliferation and cell migration processes in human epidermal keratinocytes was accesed; and a model of molecular interactions promoted by them was proposed. LDG-II and LGL-II (with specificities for a certain type of galactosides and certain glycotopes) showed proliferative and migration effects in human epidermal keratinocytes; while LDG-I lectin (with specificity for mannosides and other glycotopes) produced positive effect on proliferation only at the lowest concentration used and inhibited migration under all conditions tested. The expression of the epidermal growth receptor EGFR phosphorylated was increased in lysates of keratinocytes cultured in the presence of the lectins type II; and an increase in the concentration of EGF factor was detected in supernatants of cells cultured in the presence of LGL-II. Some similarities were observed in the specificity of lectins type II towards known ligands of galectin-3 (LGALS3), lectin that has a role in re-epithelialization of the skin in mammals; and some similarities are suggested in the proposed models of molecular interactions of lectins LDG-II and LGL-II, with the known and predicted interactions of galectin-3 LGALS3 with cellular glycoconjugates, found in databases and published articles. The results in the present work allow us to have the prospect of carrying out studies of the effect of plant lectins type II on skin wounds in a mammalian model, and the potential use of some of said lectin (s) in healing treatments of skin lesions in humans, considering their effects and their ligand specificities. Doctorado

RESUMEN: La lesión central de células gigantes (LCCG) es una lesión osteolítica benigna que en algunos casos presenta un comportamiento agresivo, con recidiva y mal pronóstico. Ki-67 es una proteína nuclear cuya función general es la regulación de la proliferación celular. Este marcador es utilizado para el reconocimiento de células en proliferación y como herramienta de pronóstico en el diagnóstico de neoplasias. El objetivo de este estudio fue cuantificar la inmunoexpresión de Ki-67 en las diferentes poblaciones celulares de las LCCG y analizar su asociación con las características clínicas, demográficas y radiográficas. Se evaluó la inmunoexpresión de Ki-67 de 17 casos de LCCG en dos poblaciones celulares: células gigantes multinucleadas (CGM) y células mesenquimatosas estromales (CME). El análisis estadístico se efectuó con el programa SAS 9.0 y SPSS versión 23.0, con un nivel alfa impuesto de P

TRIM32 is a E3 ubiquitin -ligase containing RING, B-box, coiled-coil and six C-terminal NHL domains. Mutations involving NHL and coiled-coil domains result in a pure myopathy (LGMD2H/STM) while the only described mutation in the B-box domain is associated with a multisystemic disorder without myopathy (Bardet-Biedl syndrome type11), suggesting that these domains are involved in distinct processes. Knock-out (T32KO) and knock-in mice carrying the c.1465G > A (p.D489N) involving the NHL domain (T32KI) show alterations in muscle regrowth after atrophy and satellite cells senescence. Here, we present phenotypical description and functional characterization of mutations in the RING, coiled-coil and NHL domains of TRIM32 causing a muscle dystrophy. Reduced levels of TRIM32 protein was observed in all patient muscle studied, regardless of the type of mutation (missense, single amino acid deletion, and frameshift) or the mutated domain. The affected patients presented with variable phenotypes but predominantly proximal weakness. Two patients had symptoms of both muscular dystrophy and Bardet-Biedl syndrome. The muscle magnetic resonance imaging (MRI) pattern is highly variable among patients and families. Primary myoblast culture from these patients demonstrated common findings consistent with reduced proliferation and differentiation, diminished satellite cell pool, accelerated senescence of muscle, and signs of autophagy activation., Supported in part by grants from the Health Institute Carlos III and FEDER a way to achieve Europe (PI16–01843 to CP, JR15/00042 to MC-S), the Fundación Progreso y Salud, Junta de Andalucía (PI-0085-2016 to JLN-G), and Australian National Health and Medical Research Council (NHMRC) Fellowships (APP1122952 and APP1117510 to GR and NGL).

Introduction: Gliomas are characterized by rapid proliferation and aggressive invasion into normal surrounding brain tissue. In medical laboratories, the in vitro wound healing assay stands out as a simple, easy, inexpensive and affordable method to evaluate cell migration and proliferation. Objective: To standardize the in vitro wound healing assay using antimicrotubule drugs as positive controls. Methods: U87MG glioma cells were seeded at different densities and, after 24 h, the monolayer was scratched using different micropipette tip size to create a gap with no cells. The cells were then treated with colchicine and paclitaxel in culture medium with the presence or absence of fetal bovine serum. The wound was photographed with the aid of an inverted microscope and the wound area was measured using the Image J software. Results: Better defined edges scratches and monolayer with approximately 90% confluence were obtained at 1.5 and 2 x 105 cells/well density. The width and area of the scratch were, respectively, 948 pm/2.193221 mm2; 964 pm/2.266 mm2 and 1448 pm/3.221 mm2 to 10. 200 and 1000 pl micropipette tips. Colchicine inhibited wound closure by 12.6% or 3.4%, both in the presence or absence of serum; paclitaxel 2.4 and 6.7% respectively. Conclusion: Under standardized conditions, colchicine and paclitaxel proved to be efficient positive controls into the in vitro wound healing assay. RESUMEN Introducción: Gliomas se caracterizan por rápida proliferación e invasion agresiva del tejido cerebral normal circundante. En laboratorios médicos, el ensayo de cierre de herida - una prueba in vitro - se destaca por ser un método simple, fácil, de bajo costo y accesiblepara evaluar la migración y la proliferación celular. Objetivo: Estandarizar el ensayo de cierre de herida usando agentes anti-microtúbulos como control positivo. Métodos: Las células de glioma U87MG fueron sembradas en diferentes concentracionesy, después de 24 horas, la monocamadafue rayada con punteras de diferentes tamanos para crear una hendidura sin células. Las células fueron entonces tratadas con colchicina y paclitaxel, en medio con o sin suero fetal bovino. La ranura fue fotografiada con la ayuda de un microscopio invertido, y el área de la ranura fue medida mediante el programa Image J. Resultados: Ranuras con bordes más bien-definidos y monocamada con alrededor de 90% de confluencia se obtuvieron con 1,5 y 2 x 105 células/pozo. La anchura y el área de las ranuras obtenidas fueron, respectivamente, 948 p.m/2,193 mm2; 964p.m/2,266mm2; y 1448p.m/3,221 mm2 para las punteras de 10,200y 1000pl. La colchicina inhibió el cierre de las ranuras en 12,6% o 2,4%, tanto en presencia como en ausencia de suero; el paclitaxel, 3,4% y 6,7%, respectivamente. Conclusión: En condiciones estandarizadas, colchicina y paclitaxel pueden ser usados como control positivo en el ensayo de cierre de herida in vitro. RESUMO Introdução: Gliomas são caracterizados por terem rápida proliferação e invasão agressiva no tecido cerebral circundante normal. Em laboratórios médicos, o ensaio de ranhura - um teste in vitro - destaca-se por ser um método simples, fácil, barato e acessível para avaliar a migração e a proliferação celular. Objetivo: Padronizar o ensaio de ranhura, utilizando drogas antimicrotúbulos como controles positivos. Métodos: As células de glioma U87MG foram semeadas em diferentes concentrações e, após 24 horas, a monocamada foi arranhada usando ponteiras de diferentes tamanhos para criar uma fenda sem células. As células foram então tratadas com colchicina e paclitaxel, com meio em ausência ou presença de soro fetal bovino. A ranhura foi fotografada com auxílio de microscópio invertido, e a área da ranhura foi medida por meio do programa Image J. Resultados: Ranhuras com bordas mais bem definidas e monocamada com aproximadamente 90% de confluência foram obtidas com 1,5 e 2 x 105 células/poço. A largura e a área das ranhuras obtidasforam, respectivamente, 948pm/2,193 mm2;964pm/2,266mm2; e 1448 pm/3,221 mm2 para as ponteiras de 10, 200 e 1000 pl. A colchicina inibiu o fechamento das ranhuras em 12,6% ou 2,4%, tanto na presença quanto na ausência de soro; o paclitaxel, em 3,4% e 6,7%, respectivamente. Conclusão: Em condições padronizadas, colchicina e paclitaxel podem ser usados como controles positivos eficientes no teste in vitro de ranhura.

[eng] Microtubules (MTs) mediate a range of essential cellular processes including cell division, intracellular transport and organelle positioning, by forming specifically adapted arrays. Assembly, maintenance and remodelling of these arrays crucially depend on the de novo formation of MTs, termed nucleation, and its regulation in space and time. This process is mediated by the γ-­‐tubulin ring complex (γTuRC), and impairment of the function of this complex is typically associated with mitotic defects. However, while the depletion of most γTuRC subunits compromises mitotic progression, the main role of GCP8/MZT2 seems to be the regulation of MT nucleation at the centrosome during interphase, although the molecular details are still unclear. Therefore, the main goal of this project was to elucidate the mechanism by which GCP8 regulates interphase MT organization. I found that GCP8 regulates MT nucleation by direct binding to a small segment at the N-­‐terminal end of the GCP2 subunit of the γTuRC. Interestingly, using immunoprecipitation coupled to mass spectrometry, I have identified the MT depolymerase KIF2A as an interactor of GCP8. GCP8 recruits KIF2A to inhibit γTuRC-­‐ dependent nucleation at the centrosome and the Golgi apparatus. Moreover, I have observed that the depletion of GCP8 or KIF2A also results in loss of Golgi integrity. Compared to control cells, where the Golgi is typically organized as a ribbon on one side of the centrosome, Golgi membranes in knockdown cells appear more condensed and cluster tightly around the centrosome. Curiously, these defects promote cell cycle exit in non-­‐transformed RPE-­‐1 cells. Cell cycle exit is p53-­‐ independent and thus is unlikely to be caused by problems during mitotic progression. Strikingly, depletion of GCP8 or KIF2A impairs mTOR activation which may explain the cell cycle progression defect. In summary, by analysing the contribution of GCP8 in the regulation of interphase MT nucleation, I have described an unexpected mechanism that links MT-­‐dependent organization of the centrosome-­‐Golgi axis to G1/S progression and involves regulation of mTOR., [spa] Los microtúbulos (MTs) regulan una amplia variedad de procesos celulares, incluyendo la división celular, el transporte intracelular y la posición de los orgánulos, al formar una red específicamente adaptada. El ensamblaje, mantenimiento y remodelación de estas redes depende crucialmente de la formación de nuevos MTs, denominada nucleación, y de su regulación en el espacio y tiempo. Este proceso está mediado por el por el complejo en anillo de γ-­‐tubulina (γTuRC) y defectos en la función de este complejo están directamente asociados con problemas mitóticos. Sin embargo, pese a que la depleción de la mayoría de las subunidades del γTuRC compromete la progresión de la mitosis, la función principal de GCP8/MZT2 parece ser la nucleación de MTs desde los centrosomas durante la interfase, aunque se desconocen los mecanismos moleculares. GCP8 regula la nucleación de MTs mediante la unión a través del externo N-­‐terminal de la subunidad GCP2. Mediante técnicas de inmunoprecipitación acoplada a espectrometría de masas, identifiqué la proteína KIF2A, una despolimerizadora de MTs, como un interactor de GCP8. KIF2A es reclutada por GCP8 para inhibir la nucleación dependiente del γTuRC en los centrosomas y en el aparato de Golgi. Además, observé que la depleción tanto de GCP8 como de KIF2A da lugar a la pérdida de la integridad del Golgi. Comparado células control, donde el Golgi está típicamente organizado como un lazo o “ribbon” próximo al centrosoma, las membranas del Golgi en ausencia de GCP8 o KIF2A están más condensadas y estrechamente agrupadas alrededor del centrosoma. Curiosamente, estos defectos dan lugar a la salida del ciclo celular en células RPE-­‐1. Esta salida es independiente de la vía de señalización p53 por lo que es improbable que estos defectos se deban a problemas durante la progresión de la mitosis. Sorprendentemente, la depleción de GCP8 o KIF2A impide la activación de la mTOR lo que podría explicar los defectos en la progresión del ciclo celular. En resumen, al analizar la contribución de GCP8 en la regulación de la nucleación de MTs durante la interfase he conseguido describir un inesperado mecanismo que vincula la organización de MT dependiente del eje centrosoma-­‐Golgi con la progresión de las fases G1/S del ciclo celular, involucrando a la vía de señalización de mTOR.

RESUMEN Introducción: Los fibroblastos gingivales (FGs) son células responsables del mantenimiento de la homeostasis, cicatrización y tolerancia inmunitaria del tejido conjuntivo gingival. Por sus características fisiológicas, los FGs pueden ser un candidato en la terapia celular. Sin embargo, la conservación de su fenotipo en cultivo celulares requiere de condiciones estrictamente definidas. Una de ellas es la concentración de Suero Fetal Bovino (SFB). Nuestro objetivo es evaluar el efecto concentración-dependiente de la suplementación de SFB en el medio de cultivo sobre el comportamiento, crecimiento, proliferación y supervivencia de los fibroblastos gingivales humanos. Materiales y métodos: FGs fueron cultivados con DMEM (Dulbecco's modification of Eagle médium) y concentraciones de 0%, 0.5% y 10% de SFB durante tres semanas. Análisis morfológico, de proliferación e inmunohistoquímicos fueron llevados a cabo en el presente trabajo. Se llevó a cabo un análisis factorial de varianza (ANOVA) por medio el software R Project. Los resultados fueron considerados significativos con un valor de p