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This study aimed to evaluate the risk concerning child population's health because of the occurrence of AFM1 in UHT milk, powdered milk (PM) and infant formulae (IF). Determination of AFM1 was performed in 60 samples and evaluation of the mycotoxin exposure was carried out through the determination of the estimated daily intake (EDI), whereas risk characterization was evaluated with the calculation of the risk of Hepatocellular Carcinoma (HCC) and the Margin of Exposure (MOE). AFM1 ranged from 150 to 1020 ng/kg, and all the positive samples exceeded the limits stablished by European Community. The EDI for AFM1 ranged according to the age group of the population studied (0–5 years old) from 0.828 to 2.523, 0–2.113 and 0.029–0.833 ng/kg b. w./day in UHT, PM and IF, respectively. The number of HCC cases associated with AFM1 exposure (0.0015 a 0.0045) was higher than the limit of 0.001 case/100,000. MOE values for AFM1 were 728 to 239, considerably below the security margin of 10,000. These results point to a potential risk to the health of Brazilian child population exposed to AFM1 in dairy products.

Natural antimicrobial is an effective alternative for control Alicyclobacillus spp., known to cause spoilage in fruit juices. Because of this, in this study, evaluated the antibacterial activity of green tea fermented at 7 and 14 days with Kombucha (K07 and K14). The species used were Alicycobacillus acidoterrestris 0244T, Alicyclobacillus herbarius 0246T, Alicyclobacillus acidiphilus 0247T, Alicyclobacillus cycloheptanicus 0297T, Alicyclobacillus hesperidum 0298T. Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and Minimum Bactericidal Concentration (MBC) was performed against Alicyclobacillus. At 50% concentration of green tea, 1,563% K07 and 0.195% K14, there was a bacteriostatic effect (MIC) for all strains studied. While the minimum bactericidal concentration ranged from

The present study evaluated the antibacterial and antibiofilm activity of carvacrol against Salmonella Typhimurium. The minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (MBC) were determined and the time-kill curve and scanning electron microscopy (SEM) were performed to evaluate antibacterial activity. Antibiofilm activity was evaluated by quantifying total biomass using crystal violet assay, and metabolic activity was determined using MTT [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide] assay. The action of carvacrol against preformed biofilm on polypropylene and stainless steel was also evaluated by colony counting and SEM. The MIC and MBC was 312 µg mL-1. Carvacrol at MIC and 2 x MIC eliminated cells after 6 and 1 h of treatment, respectively, as exhibited in the time-kill curve. The greatest reduction in biofilm biomass and metabolic activity was 1,719 OD550 and 0,089 OD550 respectively, both at 4 x MIC of carvacrol. In carvacrol treated biofilms of S. Typhimurium on polypropylene, a reduction of 5.12 log was observed with 4 x MIC, while on stainless steel, carvacrol at 4 x MIC reduced bacterial counts by 5 log. The results showed that carvacrol exhibits antibacterial activity and can be used as an alternative for the control of S. Typhimurium biofilms.

EnglishPeanuts are a nutritious food consumed worldwide. Some species of the genus Aspergillus, producers of aflatoxins, colonize peanuts. Human exposure to aflatoxins occurs by ingesting contaminated foods. The objective of this paper was to assess the occurrence and dietary exposure of the population to aflatoxins in peanuts commercially available in Maringa, Brazil, from May 2013 to April 2017. A total of 104 peanut samples were evaluated by thin-layer chromatography and confirmed by derivatization with trifluoroacetic acid. The contamination rate detected was 24.0% in average concentration of 13.4µg/kg. Twenty positive samples (19.2%) exceeded the maximum level permitted in Brazil for the sum of four aflatoxins. Estimated probable daily intake was 1,28 µg/kg body weight/day, exceeding the Provisional Maximum Tolerable Daily Intake (0.001μg/kg body weight/day). According to the high levels of aflatoxins found in peanuts, there is need for further monitoring the presence of aflatoxins in peanuts in natura to reduce the levels of contamination. Key words: aflatoxins; Aspergillus flavus; peanuts; risk assessment; public health portuguesO amendoim e um alimento nutritivo e muito consumido no mundo todo. Algumas especies de fungos do genero Aspergillus, produtores de aflatoxinas, colonizam o amendoim. A exposicao humana as aflatoxinas ocorre por meio do consumo de alimentos contaminados. O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrencia e exposicao da populacao as aflatoxinas em amendoim comercializado no municipio de Maringa, Brasil, durante o periodo de maio de 2013 a abril de 2017. Foram avaliadas 104 amostras de amendoim por analise cromatografica e confirmadas por derivacao com acido trifluoroacetico. A frequencia de contaminacao foi de 24,0% em concentracao media de 13,4µg/kg. Vinte amostras positivas (19,2%) apresentaram-se acima do limite maximo permitido no Brasil para a somatoria das quatro aflatoxinas. A ingestao diaria provavel media encontrada foi de 1,28µg/kg peso corporeo/dia, superando a ingestao diaria maxima toleravel provisoria (0,001µg/kg peso corporeo/dia). De acordo com os elevados teores de aflatoxinas encontrados em amendoim, ha necessidade de um maior monitoramento da presenca de aflatoxinas em alimentos, tendo em vista a reducao nos niveis de contaminacao do amendoim in natura. Palavras-chave: aflatoxinas; Aspergillus flavus; amendoim; avaliacao de risco; Saude Publica.

The objective of this study was to quantitatively evaluate mycotoxins in samples of maize and poultry feed produced in Brazil. A multimycotoxin method based on HPLC-MS/MS was applied to investigate the occurrence of toxical fungal metabolites in 119 samples collected from poultry feed factory integrated poultry farms: maize grain (74), poultry feed (36), and feed factory residue (9). Twenty of 101 fungal metabolites investigated were detected and quantified in the samples: aflatoxins B1, B2, G1, and G2, fumonisins B1, B2, and B3, hydrolyzed fumonisin B1, zearalenone, agroclavine, chanoclavine, deoxynivalenol, and nivalenol, and enniatin A, A1, B, B1, beauvericin, kojic acid, and moniliformin. Most samples were contaminated with more than one mycotoxin. All samples were contaminated with fumonisins, with medians values of 1,840 μg/kg, 239 μg/kg, and 23,676 μg/kg for maize, feed, and factory residue samples, respectively. Surprisingly, beauvericin was detected in more than 90% of samples. The median contaminations of aflatoxin and trichothecenes were low, near LOD values. The factory residue presented highest contamination levels for all mycotoxins. This is the first study dealing with agroclavine, chanoclavine, enniatin A, A1, B, B1, beauvericin, and kojic acid contamination of maize and poultry feeds from Brazil.

In order to evaluate the occupational exposure of dental professionals to metallic mercury in dental offices of a public primary health care in the city of Maringá, Brazil, samples of blood and urine were collected from 149 dental professionals (group exposed), and 51 healthy adults similar for age and gender of the exposed group (control group) in September and October, 2008. Urinary mercury was determined using atomic absorption spectrophotometry, urea and creatinine in blood and urine by UV/VIS spectrophotometry and analysis of physical, chemical and microbiological characteristics of the urine by reactive bands. The program ‘Statistic’ version 7.1 and the software R version 2.6.2 were used for the statistical calculations. Urinary mercury was 2.08 ± 2.11 µg g-1 creatinine in workers exposed to mercury and 0.36 ± 0.62 µg g-1 creatinine in the control group (p < 0.05). Urinary levels of mercury were below the maximum allowed by the biological index established in Brazil (35 µg g-1 creatinine); 11% of these professionals (n = 16) had mercury levels above the reference value (5.0 µg g-1 creatinine), whereas the maximum value found was 13 µg g-1 creatinine. The dental professionals of public primary health care in the city of Maringa was exposed to metallic mercury at levels 5.8 times higher than the non-exposed subjects.

O leite e um alimento essencial na dieta humana e por este motivo deve apresentar condicoes sanitarias adequadas e ausencia de contaminantes quimicos e baixa contaminacao microbiana. Os residuos de antibioticos sao considerados como os principais contaminantes quimicos do leite e representam risco potencial a saude do consumidor. Assim, objetivou-se detectar os residuos de antibioticos em 79 amostras de leite pasteurizado do tipo B de diferentes fabricantes adquiridos em estabelecimentos comerciais do Estado do Parana, Brasil. A deteccao de residuos de estreptomicina, cloranfenicol, ?-lactâmicos, tetraciclina e gentamicina foi realizada utilizando kits comerciais de ensaio imunoenzimatico. Foram detectados residuos de antibioticos em 15/79 (19%), das quais 6/15 (40%) estavam contaminadas por cloranfenicol, 3/15 (20%) por tetraciclinas, 1/15 (6,7%) por gentamicina, 3/15 (20%) por estreptomicina e 2/15 (13.3%) por ?-lactâmicos e tres amostras estavam contaminadas por dois tipos de residuo simultaneamente. A legislacao brasileira regulamenta que os residuos de antibioticos e outros agentes inibidores de crescimento microbiano devem estar ausentes. Assim, estudos devem ser realizados para a quantificacao desses residuos visando o monitoramento do risco de exposicao aos consumidores.

The detection of mycotoxigenic fungi in foodstuff is important because their presence may indicate the possible associated mycotoxin contamination. Fusarium graminearum is a wheat pathogen and a producer of micotoxins. The polymerase chain reaction (PCR) has been employed for the specific identification of F. graminearum. However, this methodology has not been commonly used for detection of F. graminearum in food. Thus, the objective of the present study was to develop a molecular methodology to detect F. graminearum in commercial samples of bulgur wheat. Two methods were tested. In the first method, a sample of this cereal was contaminated with F. graminearum mycelia. The genomic DNA was extracted from this mixture and used in a F. graminearum specific PCR reaction. The F. graminearum species was detected only in samples that were heavily contaminated. In the second method, samples of bulgur wheat were inoculated on a solid medium, and isolates having F. graminearum culture characteristics were obtained. The DNA extracted from these isolates was tested in F. graminearum specific PCR reactions. An isolate obtained had its trichothecene genotype identified by PCR. The established methodology could be used in surveys of food contamination with F. graminearum.

The detection of mycotoxigenic fungi in foodstuff is important because their presence may indicate the possible associated mycotoxin contamination. Fusarium graminearum is a wheat pathogen and a producer of micotoxins. The polymerase chain reaction (PCR) has been employed for the specific identification of F. graminearum. However, this methodology has not been commonly used for detection of F. graminearum in food. Thus, the objective of the present study was to develop a molecular methodology to detect F. graminearum in commercial samples of bulgur wheat. Two methods were tested. In the first method, a sample of this cereal was contaminated with F. graminearum mycelia. The genomic DNA was extracted from this mixture and used in a F. graminearum specific PCR reaction. The F. graminearum species was detected only in samples that were heavily contaminated. In the second method, samples of bulgur wheat were inoculated on a solid medium, and isolates having F. graminearum culture characteristics were obtained. The DNA extracted from these isolates was tested in F. graminearum specific PCR reactions. An isolate obtained had its trichothecene genotype identified by PCR. The established methodology could be used in surveys of food contamination with F. graminearum.

INTRODUÇÃO: A obesidade na adolescência é um fator preditivo da obesidade no adulto. A prevalência em crianças e adolescentes tem aumentado na maior parte dos países e tem-se traduzido em um dos mais significativos problemas nutricionais da atualidade. OBJETIVOS: Este estudo teve por objetivo verificar os perfis antropométrico, lipídico e glicêmico em adolescentes de baixo nível socioeconômico de uma instituição filantrópica no noroeste do Paraná. MATERIAL E MÉTODOS: A população estudada foi composta por 92 adolescentes, com idade entre 10 e 17 anos. Foi utilizado o índice de massa corporal (IMC) para verificar o estado nutricional dos adolescentes, considerando normal 24,9 kg/m² e sobrepeso > 25 kg/m². A razão cintura-quadril (RCQ) foi mensurada por meio do quociente da cintura pelo quadril, e as concentrações de glicose, triglicerídeos, colesterol total, frações HDL-C, LDL-C e VLDL-C foram determinadas segundo o método enzimático colorimétrico. RESULTADOS: Encontraram-se 9,79% de sobrepeso nos adolescentes e 9,78% de RCQ e colesterol inadequados para a idade. Baixa correlação foi encontrada entre IMC e sobrepeso, glicemia, hipercolesterolemia, hipertrigliceridemia, LDL-C, VLDL-C e HDL-C, enquanto idade (razão de chance [RC] = 49,16) e RCQ (RC = 13,99) apresentaram correlação significativa (p < 0,05) com IMC. CONCLUSÃO: O resultado demonstra a necessidade de políticas públicas de saúde no âmbito escolar como fator preventivo da obesidade e seus fatores de risco. INTRODUCTION: Obesity in adolescence is a predictive factor of obesity in adulthood. The prevalence in children and adolescents has increased in most countries and has become one of the most significant nutritional problems nowadays. OBJECTIVES: This study aimed at verifying the anthropometric, lipid and glycemic profiles in lower class adolescents from a philanthropic institution located in the Northeast of Paraná State. MATERIAL AND METHOD: The studied population consisted of 92 adolescents, from 10 to 17 years of age. The Body Mass Index (BMI) was used to verify their nutritional status, considering < 24.9 kg/m² normal and > 25 kg/m² overweight. The waist-to-hip measurement was calculated through waist-to-hip ratio (WHR) and glucose concentrations, triglycerides, total cholesterol, HDL-c, LDL-c and VLDL-c fractions were determined through enzymatic methods. RESULTS: 9.79% were overweight and 9.78% of WHR and cholesterol levels were inadequate to the age group. BMI (overweight), blood glucose, hypercholesterolemia, hypertriglyceridemia, LDL-c, VLDL-c and HDL-c showed low correlation, whereas age (OR = 49.16) and WHR (OR = 13.99) showed significant correlation p < 0.05. CONCLUSION: The result evidenced the necessity of health public policies in educational scope in order to prevent obesity and its risks factors in adolescence.

OBJETIVO: Este estudo teve como objetivo averiguar a atividade enzimática da N-acetil-β-D-glicosaminidase (NAG) como possível biomarcador precoce de disfunção renal para a exposição ocupacional ao chumbo inorgânico. MATERIAIS E MÉTODOS: Foi selecionado um grupo de 30 pessoas do sexo masculino expostas ao chumbo inorgânico em uma fábrica de baterias localizada no estado do Paraná. Fizeram parte do grupo os funcionários que mostraram valores de chumbo sanguíneo inferiores a 40 mg/dl. O grupo controle foi representado por 15 adultos saudáveis com similaridade em relação à idade e ao gênero do grupo exposto. Foram determinados os níveis de plumbemia, do ácido d-aminolevulínico urinário e a atividade da NAG urinária. RESULTADOS E DISCUSSÃO: Foi evidenciado que a atividade urinária da NAG foi significativamente maior (p < 0,05; teste U de Mann-Whitney) no grupo exposto ao chumbo inorgânico quando comparado ao grupo controle, e houve uma correlação negativa com significância (p < 0,05; correlação de Spearman Rank Order) entre o indicador biológico de exposição plúmbica e a atividade urinária da NAG. CONCLUSÃO: Os resultados demonstraram que o aumento da atividade urinária da NAG pode ser utilizado como um biomarcador precoce da exposição ao chumbo inorgânico. OBJECTIVE: This study aimed to verify the enzymatic activity of N-acetyl-β-D-glucosaminidase (NAG) as a possible early biomarker of renal dysfunction due to occupational exposure to inorganic lead. MATERIALS AND METHODS: We selected a group of 30 males that had been exposed to inorganic lead in a battery factory in the state of Paraná. This group comprised those employees whose blood lead levels were below 40 mg/dl. The control group consisted of 15 healthy adults of similar age and gender compared with the exposed group. Blood lead concentrations, d-aminolevulinic acid levels and urinary NAG activity were measured. RESULTS AND DISCUSSION: It was shown that urinary NAG activity was significantly higher (p < 0.05, U test of Mann-Whitney) in the exposed group in comparison to the control group, and there was a significant negative correlation (p < 0.05, Spearman Rank Order correlation) between the biological indicator of lead exposure and urinary NAG activity. CONCLUSION: The results showed that the increase of urinary NAG activity may be used as an early biomarker of the exposure to inorganic lead.

A presença de resíduos de cloranfenicol no leite pode causar efeitos tóxicos na população exposta. O objetivo deste trabalho foi investigar a ocorrência de cloranfenicol em amostras de leite comercializadas no Estado do Paraná, Brasil. Foram analisadas 151 amostras de leite pasteurizado B e C de 61 marcas diferentes, comercializadas em 35 municípios. Os resíduos de cloranfenicol foram analisados por ensaio imunoenzimático (ELISA). Foram detectados resíduos de cloranfenicol em quatro (2,6%) das amostras analisadas, sendo duas amostras de leite tipo B e duas do tipo C. Esses dados demonstram que esse antimicrobiano continua sendo utilizado em animais destinados ao consumo humano ou há presença de contaminantes ambientais. Portanto, há necessidade de programas de monitoramento de resíduos de medicamentos veterinários em alimentos para garantir sua qualidade e, conseqüentemente, proteção à saúde humana.A presença de resíduos de cloranfenicol no leite pode causar efeitos tóxicos na população exposta. O objetivo deste trabalho foi investigar a ocorrência de cloranfenicol em amostras de leite comercializadas no Estado do Paraná, Brasil. Foram analisadas 151 amostras de leite pasteurizado B e C de 61 marcas diferentes, comercializadas em 35 municípios. Os resíduos de cloranfenicol foram analisados por ensaio imunoenzimático (ELISA). Foram detectados resíduos de cloranfenicol em quatro (2,6%) das amostras analisadas, sendo duas amostras de leite tipo B e duas do tipo C. Esses dados demonstram que esse antimicrobiano continua sendo utilizado em animais destinados ao consumo humano ou há presença de contaminantes ambientais. Portanto, há necessidade de programas de monitoramento de resíduos de medicamentos veterinários em alimentos para garantir sua qualidade e, conseqüentemente, proteção à saúde humana.The presence of chloramphenicol residues in milk can cause toxic effects on the exposed population. The aim of this work was to investigate the occurrence of chloramphenicol in milk samples commercialized in the state of Paraná, Brazil. 151 pasteurized milk samples, type B and C of 61 different marks, commercialized in 35 cities were analyzed. Chloramphenicol residues were examined by enzyme immunoassay (ELISA). Chloramphenicol residues were detected in four (2.6%) out of the milk samples analyzed, being two samples of type B and two of type C. These data show that either this antibiotic is still being used in animals destined to human consumption or there is environmental contamination. Thus, monitoring programs are needed to verify veterinary drug residues in food to certify its quality and, consequently, protection of human health.

The aim of this work was to optimize and validate, by intralaboratorial procedures, a method for the determination of patulin in grapes by thin-layer chromatography. The steps of extraction, cleanup, detection and quantification were optimized. For the validation of the method, recovery assays with standard solutions and artificially contaminated samples were carried out. The mean recovery and the variation coefficient were 65.4% and 7.58%, respectively. The optimized conditions were: 50 mL of grape juice, three extraction stages (with 100 mL of ethyl acetate in the first stage and 50 mL in second and third stages), and 100 µL of ethanol to solubilize the extract. The solvent-system used was toluene - ethyl acetate - formic acid (6:3:1), and 0.5% MBTH in 5% formic acid was sprayed on the plates to intensify the fluorescence. The visual detection and quantification limits were 7.44 ng and 15.87 µg.kg-1, respectively. The optimized and validated method demonstrated sufficient efficiency for adoption in the monitoring of patulin in grape.O objetivo deste trabalho foi otimizar e validar, por procedimentos intralaboratoriais, um método de determinação de patulina em uva por cromatografia em camada delgada. Foram realizados testes de otimização das etapas de extração, limpeza, detecção e quantificação. Para validação do método foram realizados ensaios de recuperação com soluções padrões e amostras artificialmente contaminadas. A recuperação e o coeficiente de variação foram 65,4% e 7,58%, respectivamente. As condições otimizadas foram: 50 mL do suco da uva; três etapas de extração, 100 mL de acetato de etila na primeira etapa e 50 mL na segunda e terceira etapas; 100 µL de etanol para solubilizar o extrato; a fase móvel tolueno-acetato de etila-ácido fórmico (6:3:1) e o revelador o MBTH 0,5% em ácido fórmico 5%. O limite de detecção visual foi de 7,44 ng e o de quantificação de 15,87 µg/kg. O método otimizado e validado apresentou eficiência para ser adotado em atividades de monitoramento de patulina em uva.

Neste trabalho foi avaliada a ação dos óleos essenciais de Thymus vulgaris (tomilho), Syzygium aromaticum (cravo-da-índia) e Rosmarinus officinalis (alecrim) e dos conservantes benzoato de sódio e sorbato de potássio como agentes antimicrobianos. As cepas de Staphylococcus aureus (ATCC 25923) e Escherichia coli (ATCC 25922) foram utilizadas no teste de susceptibilidade antimicrobiana usando-se a técnica de microdiluição em microplaca de 96 poços para avaliação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) e, posteriormente, subcultivo em Mueller Hinton Agar para avaliaçãoda Concentração Bactericida Mínima (CBM). As concentrações dos óleos e conservantes sintéticos testados variaram de 15,6 a 1000μg/mL. As microdiluições utilizando inóculos bacterianos nas concentrações de 104 UFC/mL foram incubadas a 37ºC/24h. As CIM para os óleos essenciais de cravo, tomilho e alecrim foram de 550, 650 e >1000μg/mL para E. coli e 550, 800 e 1000μg/mL para S. aureus, respectivamente. No entanto, a ação bactericida dos óleos essenciais do cravo-da-índia e do tomilho foi encontrada apenas em relação a E. coli, na concentração de 550 e 850μg/mL, respectivamente. Para os dois conservantes sintéticos testados, a CIM foi >1000μg/mL, portanto não apresentaram atividade antibacteriana contra os microrganismos testados. Trabalhos futuros deverão ser realizados para verifi car a efi ciência dos antimicrobianos naturais anteriormente citados e para avaliar a possibilidade de serem utilizados na indústria de alimentos.

A controlled cross-sectional study of family growers of fruit and vegetables was conducted between October 2009 and October 2010 to characterize the use of pesticides, establish the socio-demographic profile, and analyze cholinesterase activity in small-scale agricultural workers in Southern Brazil. Data was collected for 173 workers and 179 controls. A structured questionnaire was applied collecting socio-demographic information and determining knowledge and work practices in relation to pesticide use. The benchmarks for total cholinesterase (ChEs) and butyrylcholinesterase (BuChE) were obtained from the average enzymatic activity of the occupationally unexposed group (control). The mean age of the exposed population was 40.0 ± 11.2 years. The symptoms differed significantly (p30%) of ChEs activity, whereas no workers showed high inhibition (>50%) of BuChE. Potential factors involved include gender, education, pesticide orientation, exposure, and hygiene measures. Realizou-se um estudo transversal controlado, com hortifruticultores, durante o período de outubro de 2009 a outubro de 2010, a fim de caracterizar o uso de praguicidas, estabelecer o perfil sócio demográfico e analisar a atividade das colinesterases em trabalhadores rurais do sul do Brasil. Os dados foram obtidos de 173 trabalhadores e 179 controles. Um formulário estruturado foi aplicado obtendo informações sócio demográficas, conhecimento e práticas de trabalho relacionadas com o uso de praguicidas. Os valores de referência para colinesterases totais (ChEs) e butirilcolinesterase (BuChE) foram obtidos a partir da média da atividade enzimática do grupo controle. A idade média da população exposta foi de 40,0±11,2 anos. Os sinais/sintomas foram significativamente diferentes (p30%) das atividades das ChEs, e para BuChE nenhum trabalhador apresentou alta inibição (>50%). Dentre os fatores que poderiam estar envolvidos destacam-se o gênero, escolaridade, orientação para trabalhar com praguicidas, exposição e medidas de higiene.

Angela Aparecida Silva, Idinea Fernandes Santos, Marcia Maria Anjos, Suelen Pereira Ruiz, Isabela Carolini Pascoli, Daniela Biral Prado, Jane Martha Graton Mikcha, Miguel Machinski Junior, Benicio Alves Abreu Filho. Avaliacao da Atividade Antimicrobiana do Oleo Essencial de Rosmarinus Officinalis Frente A Alicyclobacillus Acidoterrestris.. In: Anais do 12o Congresso Latinoamericano de Microbiologia e Higiene de Alimentos MICROAL 2014 [= Blucher Food Science Proceedings, num.1, vol.1]. Sao Paulo: Editora Blucher, 2014. DOI 10.5151/foodsci-microal-299 Avaliacao da Atividade Antimicrobiana do Oleo Essencial de Rosmarinus Officinalis Frente A Alicyclobacillus Acidoterrestris.

Angela Aparecida Silva, Idinea Fernandes Santos, Marcia Maria Anjos, Jane Martha Graton Mikcha, Miguel Machinski Junior, Celso Vataru Nakamura, Benicio Alves Abreu Filho. Avaliacao da Atividade Antibacteriana do Oleo Essencial de Copaifera Multijuga Frente As Celulas Vegetativas de Alicyclobacillus acidoterrestris. In: Anais do 12o Congresso Latinoamericano de Microbiologia e Higiene de Alimentos MICROAL 2014 [= Blucher Food Science Proceedings, num.1, vol.1]. Sao Paulo: Editora Blucher, 2014. DOI 10.5151/foodsci-microal-276 Avaliacao da Atividade Antibacteriana do Oleo Essencial de Copaifera Multijuga Frente as Celulas Vegetativas de Alicyclobacillus acidoterrestris.

Angela Aparecida Silva, Idinea Fernandes Santos, Marcia Maria Anjos, Isabela Carolini Pascoli, Daniela Biral Prado, Celso Vataru Nakamura, Jane Martha Graton Mikcha, Miguel Machinski Junior, Benicio Alves Abreu Filho. Atividade Antimicrobiana do Oleo Essencial de Copaifera guianensis Frente A Alicyclobacillus acidoterrestris.. In: Anais do 12o Congresso Latinoamericano de Microbiologia e Higiene de Alimentos MICROAL 2014 [= Blucher Food Science Proceedings, num.1, vol.1]. Sao Paulo: Editora Blucher, 2014. DOI 10.5151/foodsci-microal-298 Atividade Antimicrobiana do Oleo Essencial de Copaifera guianensis Frente a Alicyclobacillus acidoterrestris.

The occurrence of aflatoxins B1 (AFB1), B2 (AFB2 ), G1 (AFG1 ) and G2 (AFG2 ), ochratoxin A (OA) and zearalenone (ZEA) was evaluated in 121 maize-based food samples collected in the commerce of Maringá City, Paraná State, Brazil. The study was carried out between January 2002 and February 2003. Thin-layer chromatographic method was used to determine the mycotoxins. The recovery averages were 106.6%, 109.4%, 106.6%, 109.4%, 101.8% and 101.7% to AFB1, AFB2, AFG1, AFG2, OA and ZEA, respectively. Three samples (2.5%) were positive to AFB1 (8 to 59 µg/kg), two (1.7%) to AFB2 (2.4 µg/kg), one (0.8%) to OA (64 µg/kg) and one (0.8%) to ZEA (448 µg/kg). The greater frequency of positive samples and also the highest concentration of AFB1 were found in popcorn samples (8.3%, 59 µg/kg). The data showed a low frequency of mycotoxins in products based on maize traded in Maringá, but the Probable Average Daily Intake (PDI) of AFB1 in them was high. Therefore, it is necessary to accomplish an active vigilance of these mycotoxins in such food products in order to provide safety to Brazilian people health.A ocorrência de aflatoxinas B1 (AFB1), B2 (AFB2), G1 (AFG1) e G2 (AFG2), ocratoxina A (OA) e zearalenona (ZEA) foi avaliada em 121 amostras de alimentos à base de milho, que foram coletadas no comércio da cidade de Maringá, PR, Brasil, entre os meses de Janeiro/2002 a Fevereiro/2003. A cromatografia em camada delgada foi empregada para a determinação das micotoxinas. As médias das recuperações foram 106,6%, 109,4%, 106,6%, 109,4%, 101,8% e 101,7% para AFB1, AFB2, AFG1, AFG2, OA e ZEA, respectivamente. Três amostras (2,5%) foram positivas para AFB1 (8 a 59 µg/kg), duas (1,7%) para AFB2 (2,4 µg/kg), uma (0,8%) para OA (64 µg/kg) e uma (0,8%) para ZEA (448 µg/kg). A maior freqüência de amostras positivas e também a mais alta concentração de AFB1 foi encontrada nas amostras de pipoca (8,3%, 59 µg/kg). Os dados demonstraram uma baixa freqüência de micotoxinas em produtos à base de milho comercializados em Maringá, mas a Ingestão Diária Provável Média (IDP M) de AFB1 foi alta nos produtos analisados. Portanto, torna-se necessário a realização de uma vigilância ativa destas micotoxinas nestes produtos alimentícios, a fim de proporcionar segurança à saúde da população brasileira.

The occurrence of aflatoxins B1 (AFB1), B2 (AFB2 ), G1 (AFG1 ) and G2 (AFG2 ), ochratoxin A (OA) and zearalenone (ZEA) was evaluated in 121 maize-based food samples collected in the commerce of Maringá City, Paraná State, Brazil. The study was carried out between January 2002 and February 2003. Thin-layer chromatographic method was used to determine the mycotoxins. The recovery averages were 106.6%, 109.4%, 106.6%, 109.4%, 101.8% and 101.7% to AFB1, AFB2, AFG1, AFG2, OA and ZEA, respectively. Three samples (2.5%) were positive to AFB1 (8 to 59 µg/kg), two (1.7%) to AFB2 (2.4 µg/kg), one (0.8%) to OA (64 µg/kg) and one (0.8%) to ZEA (448 µg/kg). The greater frequency of positive samples and also the highest concentration of AFB1 were found in popcorn samples (8.3%, 59 µg/kg). The data showed a low frequency of mycotoxins in products based on maize traded in Maringá, but the Probable Average Daily Intake (PDI) of AFB1 in them was high. Therefore, it is necessary to accomplish an active vigilance of these mycotoxins in such food products in order to provide safety to Brazilian people health.

Os impactos de origem ambiental e ocupacional, relacionados ao uso de praguicidas, têm como alvo imediato a saúde coletiva, pois os resíduos liberados do ambiente ou remanescentes nas culturas estão sendo progressivamente transferidos para a água, para os alimentos e para o homem. Este trabalho teve como objetivo caracterizar a utilização de praguicidas por trabalhadores do setor agrícola, atendidos no Ambulatório de Toxicologia e Saúde do Trabalhador do Centro de Controle de Intoxicações de Maringá (CCI-Maringá), a fim de avaliar os impactos sobre o ambiente e a saúde dessa população. Durante o período de 2002 a 2003, foi realizado um estudo descritivo retrospectivo em vinte e cinco pacientes atendidos devido à intoxicação por praguicidas. Os resultados demonstraram que os praguicidas representam um importante risco à saúde da população estudada e ao meio ambiente.The environmental and occupational origin impacts concerning the use of pesticides have the public health as immediate target. The environment residues or remainders in the crops are being gradually transferred to water, food and human being. The purpose of this paper was to characterize the use of pesticides by agricultural workers in the outpatient’s attendance of the Toxicology and Worker Health Clinic of the Poisoning Control Center of Maringá (Brazil), in order to evaluate their impacts on the environment and on the population’s health. During the period 2002-2003, a retrospective descriptive study was carried out in twenty-five patients attended for pesticide poisoning. The results showed that the pesticides represent an important risk to the health of the studied population as well as to the environment.

A determinação de álcool no sangue foi avaliada através da comparação de duas técnicas analíticas, o método de atenuação de energia radiante (AER) e o método titulométrico (TIT). A sensibilidade do AER foi de 0,4g/L e por TIT de 0,1g/L. A curva padrão de etanol foi linear até 2,5g/L e 4,0g/L para os métodos AER e TIT, respectivamente. O coeficiente de variação intra-série foi de 1,5% a 3,9% e de 0,6% a 3,2%, sendo que o coeficiente de variação inter-série foi de 2,5% a 12,8% e de 0% a 3,3% para os métodos AER e TIT, respectivamente. Os testes de recuperação apresentaram os seguintes resultados, 105% para o método AER e 88% para o método TIT. Em 70 amostras estudadas, o coeficiente de correlação (r) foi de 0,9681 e o resultado do teste-t de Student foi de -1,294, demonstrando que os métodos se correlacionam bem.The alcohol determination in the blood was evaluated through the comparison of two analytical techniques, the method of radiative energy attenuation (REA) and the chemical titration method (TIT). The sensibility of REA was 0.4g/L and of TIT was 0.1g/L. The curve standard of etanol was linear up to 2.5g/L and 4.0g/L for methods REA and TIT, respectively. The coefficient of variation was 1.5% to 3.9% and 0.6% to 3.2% in the same day, and day-to-day coefficient of variation was 2.5% to 12.8% and 0% to 3.3% for methods REA and TIT, respectively. The tests of recovery presented the following results, 105% for REA and 88% for TIT. In 70 studied samples, the coefficient of correlation (r) was 0,9681 and the result of the test-t of Student was -1,294.

The essential oil fromCurcuma longaL. was analysed by GC/MS. The major components of the oil were ar-turmerone (33.2%),α-turmerone (23.5%) andβ-turmerone (22.7%). The antifungal activities of the oil were studied with regard toAspergillus flavusgrowth inhibition and altered morphology, as preliminary studies indicated that the essential oil fromC. longainhibitedAspergillus flavusLink aflatoxin production. The concentration of essential oil in the culture media ranged from 0.01% to 5.0% v/v, and the concentration of curcumin was 0.01–0.5% v/v. The effects on sporulation, spore viability, and fungal morphology were determined. The essential oil exhibited stronger antifungal activity than curcumin onA. flavus. The essential oil reduced the fungal growth in a concentration-dependent manner.A. flavusgrowth rate was reduced byC. longaessential oil at 0.10%, and this inhibition effect was more efficient in concentrations above 0.50%. Germination and sporulation were 100% inhibited in 0.5% oil. Scanning electron microscopy (SEM) ofA. flavusexposed to oil showed damage to hyphae membranes and conidiophores. Because the fungus is a plant pathogen and aflatoxin producer,C. longaessential oil may be used in the management of host plants.

In order to evaluate the occupational exposure of dental professionals to metallic mercury in dental offices of a public primary health care in the city of Maringa, Brazil, samples of blood and urine were collected from 149 dental professionals (group exposed), and 51 healthy adults similar for age and gender of the exposed group (control group) in September and October, 2008. Urinary mercury was determined using atomic absorption spectrophotometry, urea and creatinine in blood and urine by UV/VIS spectrophotometry and analysis of physical, chemical and microbiological characteristics of the urine by reactive bands. The program 'Statistic' version 7.1 and the software R version 2.6.2 were used for the statistical calculations. Urinary mercury was 2.08 ± 2.11 μg g -1 creatinine in workers exposed to mercury and 0.36 ± 0.62 μg g -1 creatinine in the control group (p < 0.05). Urinary levels of mercury were below the maximum allowed by the biological index established in Brazil (35 μg g -1 creatinine); 11% of these professionals (n = 16) had mercury levels above the reference value (5.0 μg g -1 creatinine), whereas the maximum value found was 13 μg g -1 creatinine. The dental professionals of public primary health care in the city of Maringa was exposed to metallic mercury at levels 5.8 times higher than the non-exposed subjects.

The antifungal activity of ginger essential oil (GEO; Zingiber officinale Roscoe) was evaluated against Fusarium verticillioides (Saccardo) Nirenberg. The minimum inhibitory concentration (MIC) of GEO was determined by micro-broth dilution. The effects of GEO on fumonisin and ergosterol production were evaluated at concentrations of 500–5000μg/mL in liquid medium with a 5mm diameter mycelial disc of F. verticillioides. Gas chromatography–mass spectrometry showed that the predominant components of GEO were α-zingiberene (23.9%) and citral (21.7%). GEO exhibited inhibitory activity, with a MIC of 2500μg/mL, and 4000 and 5000μg/mL reduced ergosterol biosynthesis by 57% and 100%, respectively. The inhibitory effect on fumonisin B1 (FB1) and fumonisin B2 (FB2) production was significant at GEO concentrations of 4000 and 2000μg/mL, respectively. Thus, the inhibition of fungal biomass and fumonisin production was dependent on the concentration of GEO. These results suggest that GEO was able to control the growth of F. verticillioides and subsequent fumonisin production.

Exposure to aflatoxins (AFs) in the diet may favour the development of hepatocellular carcinoma (HCC) and the acute exacerbation of hepatitis in chronic hepatitis B virus (HBV) carriers. Measurement of biomarkers such as aflatoxin M1 (AFM1), a metabolite of aflatoxin B1 (AFB1), in urine allows for the assessment of populations exposed to aflatoxins. The aim of this study was to investigate the occurrence of aflatoxin M1 in the urine of HBV carrier and non-carrier patients. One group included 43 randomly selected HBV carriers treated at two hospitals in the city of Maringa, Brazil, from March to June 2008. Control group consisted of 29 healthy adult volunteers with anti-HBs positive and HBsAg negative test results. Detection of AFM1 was performed by fluorescence using high performance liquid chromatography (HPLC) and post-column derivation with the Kobra Cell®. Of the 72 samples analysed, 05/29 (17.2%) AFM1 positive samples were from HBV non-carriers, and 16/43 (37.2%) of samples were from chronic HBV carriers. This study showed AFM1 in the urine of the two surveyed population. However, there is evidence that the chronic HBV carriers have a higher risk of developing HCC due to additive interaction between AFs and HBV.A exposição às aflatoxinas (AFs) na dieta é um fator de risco para o desenvolvimento do carcinoma hepatocelular (CHC) e a exacerbação da hepatite aguda em indivíduos portadores do vírus da hepatite B (VHB). O uso de biomarcadores, como a aflatoxina M1 (AFM1) na urina, produto de biotransformação da aflatoxina B1 (AFB1), permite avaliar se a população está exposta às AFs. O objetivo do presente estudo foi investigar ocorrência de AFM1 na urina de portadores e não portadores crônicos do VHB. Foi selecionado um grupo, de forma aleatória, representado por 43 portadores do VHB atendidos em dois hospitais da cidade de Maringá, Brasil, no período de Março a Junho/2008. O grupo controle foi composto por 29 voluntários adultos saudáveis anti-HBs positivo e HBsAg negativo. A determinação de AFM1 foi realizada por meio de detecção por fluorescência em sistema de cromatografia a líquido de alta eficiência com derivação pós-coluna utilizando Kobra Cell®. Das 72 amostras analisadas, 05/29 (17,2%) foram positivas para AFM1 em indivíduos não portadores do VHB, e 16/43 (37,2%) de pacientes portadores do VHB. Este estudo demonstrou a ocorrência de AFM1 na urina dos dois grupos estudados. Entretanto, há evidências de que os portadores do VHB possuam alto risco no desenvolvimento do CHC devido ao efeito aditivo pela interação entre aflatoxinas e VHB.

O objetivo deste trabalho foi avaliar a incidência de fungos dos gêneros Aspergillus, Fusarium e Penicillium e as contaminações com micotoxinas em grãos de cinco híbridos comerciais de milho em função da umidade de colheita. O trabalho foi conduzido em Astorga, Estado do Paraná, durante o período da ‘safrinha’ de 2007 e da safra de ‘verão’ de 2007/2008. As amostras de grãos, colhidas em cinco épocas distintas e em cinco repetições, foram submetidas à determinação de umidade pelo método da estufa a 103 ± 1ºC por 72h. O teste de sanidade Blotter test e a quantificação micotoxinas (método da cromatografia em camada delgada) foram efetuados, utilizando-se um delineamento inteiramente casualizado. Os resultados obtidos foram submetidos à análise de variância e de regressão. O gênero Fusarium apresentou crescimento linear da incidência, em função do aumento da umidade, enquanto os gêneros Aspergillus e Penicillium tiveram suas incidências reduzidas. Observou-se que é possível a produção de aflatoxinas, associadas aos grãos de milho, ainda no campo, e que a antecipação da colheita, seguida de secagem imediata, assegura a qualidade sanitária dos grãos de milho. The objective of this work was to evaluate the incidence of Aspergillus, Fusarium and Penicillium fungi, and the contaminations with mycotoxins in grains of five corn commercial hybrids due to harvest humidity. The work was conducted in Astorga, Paraná State, during the autumn/fall harvest of 2007 and the summer harvest of 2007/2008. The corn grain samples were collected in five distinguished periods and also in five replications, subjected to humidity content determination at an oven heated to 103 ± 1ºC for 72h. The blotter test and the mycotoxins presence were evaluated by thin layer chromatography, using a completely randomized design. The data were submitted to analyses of variance and regression. The genera Fusarium presented linear increasing incidence due to humidity increasing, whereas Aspergillus spp. and Penicillium spp. had their incidences decreased. It was observed that the possible production of aflatoxins, associated to corn grains, still in the field, and, that the anticipation of the crop harvesting, followed by immediate drying assures the sanitary quality of the corn grains.

A podridão ácida é uma patologia das videiras, de alta freqüência nos períodos quentes e chuvosos, em conseqüência do desenvolvimento de fungos e bactérias em seus frutos. Um dos gêneros de fungos responsáveis por esta doença é o Penicillium spp., que poderá levar à produção de micotoxinas, como a patulina. Neste trabalho, foi realizada uma investigação sobre a podridão ácida e a ocorrência de patulina em uvas Itália (Vitis vinifera L. cv. Rubi) cultivadas no município de Marialva, Brasil. Foram avaliados os seguintes tratamentos: (I) testemunha sem sintomas de podridão ácida; (II) amostras com sintomas, sem a remoção das bagas infectadas; (III) amostras com sintomas, com a remoção das bagas infectadas, (IV) amostras com sintomas da doença, com a remoção das bagas infectadas e desinfecção com hipoclorito. A cromatografia em camada delgada foi utilizada para a determinação de patulina. Nas amostras analisadas, não foi detectada contaminação por esta micotoxina. Sour rout is a pathology of bunch grapes occurring in hot and rainy periods. Several fungi and bacteria are associated with this disease, including Penicilium spp. In the present study it was carried out an investigation to determine the incidence of sour rout and patulin in grapes (Vitis vinifera L. cv. Rubi) cultivated in Marialva, Brazil. The treatments studied were the following: (I) samples without symptoms of sour rout, (II) samples with symptoms and without cleaning stage, (III) samples with symptoms and with cleaning stage and (IV) samples with symptoms, cleaning stage and washing with hypochlorite. The thin-layer chromatography was utilized to determine the presence and quantification of patulin. Patulin was not detected in any samples.

A Região Sul do Brasil é grande produtora de maçã, sendo 80% destinada ao consumo in natura. As micotoxinas são metabólitos secundários de fungos presentes na cadeia alimentar como contaminantes, causando diversos efeitos toxicológicos e imunológicos. Considerando que a patulina seja uma micotoxina produzida por Penicillium expansum, principal contaminante da maçã propôs-se investigar a ação de extratos aquoso e oleoso de Nim (Azadirachta indica) em maçã artificialmente contaminada. Foram testados dois tipos de extratos: o extrato aquoso obtido de maceração de folhas de Nim nas concentrações de 5, 10, 20 e 30%, e o extrato oleoso comercial (DalNeem®), obtido de sementes de Nim, nas concentrações de 0,125, 0,25, 0,5, 1, 2 e 5%. Os extratos aquosos não alteram a produção da patulina em maçãs contaminadas artificialmente por P. expansum, mas o extrato oleoso obtido das sementes da planta diminuiu acentuadamente a produção de patulina, inclusive em concentrações inferiores a 0,5%. The South region of Brazil is a major apple producer, where 80% is destined to the "in natura" consumption. The mycotoxins are fungal secondary metabolites present as contaminants in the food chain, causing several toxicological and immunological effect. Patulin is a mycotoxin mainly produced by Penicillium expansum and well known as the main contaminant in apples. Due to this contamination, the aim of this work was to access the effect of Neem extract (Azadirachta indica) on artificially contaminated apples. Two types of Neem extracts were tested: the aqueous extracts of Neem leafs at 5, 10, 20 and 30% concentrations, and commercial seed oil of Neem (DalNeem®) at 0.125, 0.25, 0.5, 1, 2 and 5% in water. Although the addition of Neem aqueous extracts in artificially contaminated apples with P. expansum was unable to affect the patulin production, the Neem seed oil extract at concentrations as lower as 0.5%, caused a pronounced diminution over patulin production.

The aim of this work was to optimize and validate, by intralaboratorial procedures, a method for the determination of patulin in grapes by thin-layer chromatography. The steps of extraction, cleanup, detection and quantification were optimized. For the validation of the method, recovery assays with standard solutions and artificially contaminated samples were carried out. The mean recovery and the variation coefficient were 65.4% and 7.58%, respectively. The optimized conditions were: 50 mL of grape juice, three extraction stages (with 100 mL of ethyl acetate in the first stage and 50 mL in second and third stages), and 100 µL of ethanol to solubilize the extract. The solvent-system used was toluene - ethyl acetate - formic acid (6:3:1), and 0.5% MBTH in 5% formic acid was sprayed on the plates to intensify the fluorescence. The visual detection and quantification limits were 7.44 ng and 15.87 µg.kg-1, respectively. The optimized and validated method demonstrated sufficient efficiency for adoption in the monitoring of patulin in grape.

Atualmente, as micotoxinas representam um risco de contaminacao ambiental, acarretando serios prejuizos a saude humana. Essas toxinas podem estar presentes em diferentes tipos de alimentos, que constituem a principal fonte de exposicao para o homem. As exposicoes podem ser monitoradas atraves do uso de biomarcadores, que elucidam a relacao causa/efeito e dose/efeito na avaliacao de risco a saude para fins de diagnostico clinico e laboratorial. Realizou-se uma revisao bibliografica do periodo de 1981-2005, no MEDLINE, sobre utilizacao e propostas de biomarcadores para a exposicao a aflatoxinas, fumonisinas, desoxinivalenol e ocratoxina A. Os possiveis biomarcadores para avaliar a exposicao humana as aflatoxinas foram os metabolitos urinarios de aflatoxina B1, como aflatoxina M1, aflatoxina P1, aflatoxina Q1, aflatoxina livre em soro ou plasma, os adutos de AFB-N7-guanina, os adutos de albumina ou mutacao no gene supressor de tumor p53, presentes em fluidos biologicos. Para as fumonisinas, os biomarcadores foram os niveis de fumonisina B1 e fumonisina B2 livres, ou de esfinganina e esfingosina em sangue e urina. O desoxinivalenol tem como biomarcadores de exposicao os produtos de seu metabolismo e adutos macromoleculares (proteina/DNA) presentes nos fluidos biologicos. Para a exposicao a ocratoxina A (OA) os biomarcadores se restringem a quantificacao da propria toxina nos fluidos biologicos. A avaliacao da exposicao as micotoxinas constitui um importante aspecto para a saude publica, tendo em vista a possibilidade de prevenir ou minimizar a incidencia de doencas decorrentes da sua interacao com o organismo.

Purpose : To evaluate the effect of carvacrol against Salmonella saintpaul biofilms on stainless steel surface. Methods : The effect of carvacrol on planktonic cells of S saintpaul was evaluated by determining the minimum inhibitory concentration (MIC) and minimal bactericidal concentration (MBC). The action of carvacrol on S. saintpaul biofilms on stainless steel surface was evaluated on established biofilm and on biofilm formation by counting the number of bacterial cells that adhered to the surface and by scanning electron microscopy. Results : The antimicrobial activity of carvacrol against planktonic cells of S. saintpaul was observed. The highest inhibitory effect of carvacrol was observed during biofilm formation at 78 and 117 µg ml -1 when S. saintpaul biofilms were reduced by 3 log cycles (p < 0.05). Conclusion : Carvacrol reduced the number of bacterial cells that adhered to stainless steel surface, making it a pot Salential compound for Salmonella saintpaul control. Keywords : Salmonella spp ., Biofilm, Carvacrol, Antimicrobial activity, Planktonic cells, Stainless steel

A comparison of Radiative Energy Attenuation and Titrimetric methods for the analysis of ethanol in blood. The alcohol determination in the blood was evaluated through the comparison of two analytical techniques, the method of radiative energy attenuation (REA) and the chemical titration method (TIT). The sensibility of REA was 0.4g/L and of TIT was 0.1g/L. The curve standard of etanol was linear up to 2.5g/L and 4.0g/L for methods REA and TIT, respectively. The coefficient of variation was 1.5% to 3.9% and 0.6% to 3.2% in the same day, and day-to-day coefficient of variation was 2.5% to 12.8% and 0% to 3.3% for methods REA and TIT, respectively. The tests of recovery presented the following results, 105% for REA and 88% for TIT. In 70 studied samples, the coefficient of correlation (r) was 0,9681 and the result of the test-t of Student was -1,294.

The objective of this study was evaluate the presence of AFM1 in 82 samples of pasteurized bovine milk commercialized in 11 municipalities in the State of Parana, Brazil, from March 2010 to May 2011. Analytical methodology used was the enzyme immunoassay to determine qualitatively the presence of AFM1 (detection limit = 0.05 ?g.kg-1). AFM1 was not detected in any sample. The results were satisfactory. However, there is need for monitoring by government agencies, in order to provide safety, quality and integrity for human health.

Orientador: Lucia Maria Valente Soares Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Resumo: As micotoxinaspresentes em milho, são metabólitos secundários produzidos, principalmente,por espéciesdos gêneros Fusarium, Aspergillus e Penicillium. São toxinas que apresentam efeitos tóxicos agudos e crônicos em diversos animais de experimentação, assim como em animais domésticos. Em humanos, estão associadas epidemiologicamente com determinadas doenças em diversas regiões do mundo. o presente trabalho teve por objetivos: 1- avaliar a presença de fumonisinas, aflatoxinas, ocratoxina A e zearalenona em amostras de milho recém-colhido; 2- pesquisar a ocorrência de fumonisinas em produtos alimentícios à base de milho; 3- avaliar os efeitos de fatores bióticos (duração do ciclo vegetativo, tipo de cultivar, tipo de endosperma) e abióticos (local de plantio, diferentes épocas de cultivo, condições climáticas) na produção de micotoxinas em milho. Numa primeira etapa do trabalho, o método de SHEPHARD et alii (1990) utilizado para a determinação de fumonisinas em milho, por cromatografia líquida de alta eficiência com detecção por fluorescência, foi otimizado para as condições do laboratório. A extração com metanol-água (3:1, v/v) foi mantida. Os volumes de solvente no condicionamento e lavagem da coluna de extração em fase sólida de troca aniônica forte, usadas na etapa de limpeza dos extratos, foram aumentados para 10 mL e o volume e composição do solvente de eluição alterado para 20 mL de metanol-ácido acético glacial (95:5, v/v). Na etapa de cromatografia líquida de alta eficiência, a fase móvel foi modificada para cetonitrila-água-ácido acético glacial (50:50:0,5, v/v/v) durante os primeiros 15 minutos, seguida de acetonitrila pura até o final da conida. As recuperações médias obtidas foram de 95 e 76%, e os limites de detecção de 20 e 40 ng/g, para fumonisinas B1 e B2, respectivamente. Os coeficientes de variação médios para amostras artificialmente contaminadas foram de 5,8 e 13,4% para fumonisinas BI e B2, respectivamente.... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital. Abstract: Mycotoxins are produced in maize mainly by fungi belonging to the genera Fusarium, Aspergillus and Penicillium. These toxins affect laboratory and domestic animal and are epidemiologically associated with human disese reported in some areas of the globe. ... Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations. Doutorado Doutor em Ciência de Alimentos

Patulin is a secondary metabolite produced by different species of fungi, being Penicillium expansum the most important species. Patulin is a mycotoxin that has been found mainly in mature apples used in the production of concentrated apple juice, but it can also be in other fruits, vegetables and nutritious products. Experiments carried out with laboratory animals have demonstrated that this mycotoxin produces several harmful effects, including mutagenicity, teratogenicity, carcinogenicity, immunosuppression and acute intoxications characterized by pulmonary oedema, hemorrhages, damages in the capillaries of liver, spleen and kidneys, as well as cerebral oedema. This revision article approaches physicochemical properties and toxicological aspects of the patulin, as well as its occurrence and strategies to prevent its presence in apple juices.

Peanut is a food widely consumed worldwide, due to its nutritional properties and its accessibility. In Brazil, due to tropical and subtropical characteristics of the country, peanut samples often are contaminated by fungi produce toxins, mainly the species: Aspergillus flavus and Aspergillus parasiticus, aflatoxin producers.Aflatoxins are hepatocarcinogenics, particularly aflatoxin B1. Human exposure aflatoxins is through consumption of contaminated food. This study aimed to to evaluate the exposure of the population aflatoxins in peanuts marketed in the city of Maringa, Parana State, Brazil, during the period from May 2013 to April 2014.Forty-seven samples of three brands of peanut were collected in three major markets of the city of Maringa, Parana State, Brazil. The samples were analyzed by thin layer chromatography and confirmed by chemical derivatization with trifluoroacetic acid. Recovery was accomplished by the addition of known quantities of standard solutions satisfactorily test the four aflatoxins (B1 + B2 + G1 + G2) in five samples free of contamination peanuts. Daily likely average intake was assessed by multiplying the average concentration of aflatoxin, found in this study, the average consumption of peanut population of Maringa region (6.7 g / person / day) divided by the average body weight of an adult (70 kg).The average recovery method presented for aflatoxins B1, B2, G1 and G2 106, 120, 106.7 and 90%, respectively. Aflatoxin B1 and B2 were identified in 25.5% of all samples. We did not find any samples with detectable levels of G1 and G2 aflatoxins. All positive samples showed levels above the maximum permitted level for the sum of the four aflatoxins according to Brazilian law. Aflatoxin levels in positive samples ranged from 36-832 μg / kg.The daily average intake probable (IDPM) was 7.4 μg / kg body weight / day for the sum of aflatoxin B1 and B2 aflatoxin. The value found exceeds the maximum daily intake provisional tolerable (IDMTP) of 0.001 μg / kg body weight / day of aflatoxin B1 for adults and children with no diagnosis of hepatitis B and 0.0004 vg / kg body weight / day of aflatoxin B1 to hepatitis virus carriers B. IDPM for aflatoxin B1 (6.5 μg / kg body weight / day) obtained in this study exceeded both IDMTP values, indicating the need for further studies to assess the overall risks for the health of the population by exposure to aflatoxins in Brazil. O amendoim é um alimento muito consumido em todo o mundo, devido as suas propriedades nutricionais e sua acessibilidade. No Brasil, devido as características subtropicais e tropicais do país, amostras de amendoim, frequentemente, estão contaminadas por fungos produtores de toxinas, principalmente pelas espécies: Aspergillus flavus e Aspergillus parasiticus, produtores de aflatoxinas. As aflatoxinas são hepatocarcinogênicas, principalmente a aflatoxina B1. A exposição humana as aflatoxinas se dá pelo consumo de alimentos contaminados.O presente trabalho teve como objetivo avaliar a exposição da população as aflatoxinas em amendoim comercializado em Maringá, Brasil, durante o período de maio de 2013 a abril de 2014.Foram coletadas 47 amostras de três marcas de amendoim em três mercados de grande porte da cidade de Maringá, Estado do Paraná, Brasil. As amostras foram analisadas por cromatografia em camada delgada e confirmadas por derivação química com ácido trifluoroacético. Foi realizado teste de recuperação por meio da adição de quantidades conhecidas das soluções-padrão contento as quatro aflatoxinas (B1+B2+G1+G2) em cinco amostras de amendoim livres de contaminação. A ingestão diária provável média foi avaliada através da multiplicação da concentração média de aflatoxinas, encontrada neste estudo, pelo consumo médio de amendoim da população da região de Maringá (6,7 g/pessoa/dia) dividido pelo peso corporal médio de um adulto (70 kg). O método apresentou recuperação média para aflatoxinas B1, B2, G1 e G2 de 106, 120, 106,7 e 90%, respectivamente. Aflatoxinas B1 e B2 foram identificadas em 25,5% de todas as amostras analisadas. Não foi encontrada nenhuma amostra com níveis detectáveis de aflatoxinas G1 e G2. Todas as amostras positivas apresentaram níveis acima do nível máximo permitido para a soma das quatro aflatoxinas de acordo com a legislação brasileira. Os níveis de aflatoxinas nas amostras positivas variaram de 36-832 μg/kg. A ingestão diária provável média (IDPM) foi 7,4 μg/kg peso corpóreo/dia para a soma de aflatoxina B1 e aflatoxina B2. O valor encontrado ultrapassa a ingestão diária máxima tolerável provisória (IDMTP) de 0,001 μg/ kg peso corpóreo/dia de aflatoxina B1 para adultos e crianças sem diagnóstico do vírus da hepatite B e de 0,0004 μg/ kg peso corpóreo/dia de aflatoxina B1 para portadores do vírus da hepatite B. A IDPM para aflatoxina B1 (6,5 μg/ kg peso corpóreo/dia) obtido no presente estudo superou ambos os valores de IDMTP, indicando a necessidade da realização de mais estudos para avaliar os riscos globais para a saúde da população pela exposição a aflatoxinas no Brasil. 23 f

O contínuo monitoramento através de método rápido confiável de alta sensibilidade, especificidade, precisão e econômico, é o procedimento preventivo apropriado visando redução da exposição humana e animal a toxinas naturais, com ênfase a micotoxinas e cianotoxinas. Em consideração ao papel destaque da imunoquímica como bioferramenta de escolha na detecção in loco de toxinas, o trabalho abrangeu inovação tecnológica desde desenvolvimento de hibridoma para produção de anticorpo monoclonal - AcM contra molécula não-imunogênica de baixa massa molecular, proliferação celular para produção de AcM, à padronização – otimização de imunoensaio indireto competitivo ic-ELISA para o controle de qualidade na cadeia produtiva. O desenvolvimento de hibridoma foi conduzido com microscistina LR – MC-LR, cianotoxina de ocorrência potencial em água eutrofizada. A proliferação celular de hibridoma AF.2 e ZEN.2 foi conduzido in vitro (meio RPMI 1640 e Hybridoma Serum Free Media – H-SFM). O AcM produzido foi purificado e, após padronização metodológica, aplicado na análise de aflatoxina (AF) e zearalenona (ZEA) por ic-ELISA e CLAE; a otimização da análise de desoxinivalenol (DON) foi conduzida com AcM previamente produzido por DON.3. A fusão celular para desenvolver hibridoma secretor de AcM contra MC-L foi testada com conjugado MC-LR-KLH (128 dias, sete injeções) e, MC-LR-BSA (49 dias, 4 injeções, obtendo 9 clones) em camundongo BALB/c fêmea. Estes procedimentos não geraram híbridos produtores de AcM com alta afinidade a MC-LR, testado por ic-ELISA. Este i-ELISA para seleção de clone foi estabelecido com: 1μg/mL de MC-LR-KLH; 0,1% de leite desnatado/PBS para bloqueio; AcM anti-MC-LR em PBST; anticorpo secundário em PBST (IgG anti-mouse conjugado com fosfatase, 1: 2000) e substrato para-nitro fenil fosfato - pNPP. Os híbridos AF.2 e ZEN.2 produziram AcM de alta especificidade, aliado a baixa reatividade cruzada contra micotoxinas (DON, OTA e ZEA ou AF). O produto de hibridoma AF.2, obtido em H-SFM, consistiu de AcM de alta pureza com teor proteico de 0,94 mg/mL, não ocorrendo o mesmo com hibridoma ZEN.2 em RPMI 1640 adicionado de 10 % de soro fetal (teor proteico de 2,06 mg/mL). O ic-ELISA visando aplicação no controle de qualidade foi desenvolvido com AcM produzido, sendo estabelecido para análise de AF total: 250 ng/mL de AFB1-BSA, 1:104 de AcM anti-AF (0,094 μg/mL), 1:2000 de IgG anti-mouse HPR e 0,1 % de BSA para bloqueio. A curva padrão (0 a 5 ng/mL de AFB1) apresentou coeficiente R2 de 0,996 e correlação de Pearson de -0,93. A aplicabilidade de AcM para análise de AF, DON e ZEA em milho foi avaliado perante interferência de matriz e recuperação. A interferência de matriz na análise de AF permaneceu semelhante a partir de diluição 1:5 (p>0,05), obtendo-se limite de detecção (LD) de 2 e quantificação (LQ) de 4,6 μg/Kg, com recuperação média de 113, 106 e 104 % nas concentração de 10, 20 e 40 μg/Kg, respectivamente (coeficiente de variação – CV 6 a 20 %). Analisando AF em 75 amostras de milho por ic-ELISA e CLAE, oito apresentaram-se positiva por ambos os métodos (razão ELISA/CLAE, 0,8 a 1,2). Cinco amostras positivas por CLAE foram negativas por ic-ELISA, devido à diferença no LD e LQ. O parâmetro estabelecido para análise de DON por ic-ELISA em milho, trigo e derivado (biscoito) foi: 2 μg/mL de DON-HS-OVA; 1:2000 de AcM anti-DON (10,9 μg/mL). O AcM produzido por hibridoma DON.3 permitiu análise de biscoito sem requerer diluição da matriz (LD 159,3 e LQ 370 μg/Kg), i.e., sensibilidade superior ao obtido para análise de milho (diluição 1:5; LD 302,8; LQ 589,3 μg/Kg). A recuperação de DON em biscoito artificialmente contaminado (500, 1000 e 2000 μg/Kg) foi de 95 a 106 % (CV 3 a 8 %); em milho, a mesma foi de 95 a 106 % (CV 7 a 11 %). Analisando DON em 29 amostras de biscoito por ic-ELISA e CLAE, o coeficiente de correlação (r) foi 0,72 (razão ELISA/CLAE, 0,4 a 15,8). Procedendo mesma análise em milho (75), cinco amostras apresentaram positivas por ambas as técnicas, embora 49 amotras foram quantificadas por CLAE (LQ de 30,4 μg/Kg) e 6 por ic-ELISA (LQ de 589,3 μg/Kg). Os parâmetros estabelecidos para análise de ZEA por ic-ELISA foram: 2,5 μg/mL ZEA-OVA e 1:200 de AcM anti-ZEA (10,3 μg/mL). A interferência de matriz na análise de ZEA em milho (LD 51,7 e LQ 93,2 μg/Kg) e biscoito (LD 9,7 e LQ 23,7 μg/Kg) foi semelhante a partir da diluição 1:5 (p>0,05), enquanto que o trigo requereu diluição a 1:10 (LD 33,5 e LQ 87 μg/Kg). A recuperação média em milho artificialmente contaminado variou de 98 a 108 % (CV 3 a 9 %); 97 a 112 % em trigo (CV 2 a 8 %), e em biscoito 96 a 102 % (CV 4 a 7 %). A análise de ZEA em milho (36 amostras) por ic-ELISA e CLAE apresentou r = 0,77. Considerando o limite máximo de 400 μg/Kg para ZEA pela legislação brasileira, 16 amostras de milho apresentaram nível superior determinado por ambas as técnicas, embora duas apresentassem valores distintos (509,3 vs 218,8 μg/Kg e 388,6 vs 430,3 μg/Kg, sendo ic-ELISA vs CLAE). Analisando ZEA em trigo (125) por ic-ELISA e CLAE, cinco apresentaram-se positivas, em relação a 74 amostras negativas. Analisando ZEA em biscoito, 9 amostras apresentaram-se positivas por ic-ELISA (31,3 a 95 μg/Kg), comparada a 21 positivas por CLAE (0,9 a 92,2 μg/Kg). O ic-ELISA desenvolvido com AcM produzido no Laboratório (hibridoma AF.2, ZEN.2 e DON.3) demonstraram estabilidade das microplacas sensibilizadas por pelo menos duas semanas a 10 °C, ratificando a aplicação na triagem rápida de micotoxinas na cadeia produtiva de alimentos. The continuous monitoring through rapid, reliable, high sensitivity, specificity, precision, robustness and economic method is the appropriate preventive procedure aimed at reducing human and animal exposure to natural toxins, with emphasis on cyanotoxins and mycotoxins. Considering the prominent role of immunochemistry as chosen biotool for in situ detection of toxins, this work covered technological innovation since the development of hybridoma producer of monoclonal antibody - mAb against non-immunogenic molecule of low molecular mass, cell proliferation for mAb production, standardization – optimization of indirect competitive immunoassay - ic-ELISA for quality control in the production chain. The development of hybridoma was conducted using microscistin LR - MC-LR, cyanotoxin of potential occurrence in eutrophic water, due to great advances in the Brazilian agricultural production. The AF.2 and ZEN.2 hybridoma cell proliferation was conducted in vitro (RPMI 1640 and Hybridoma Serum Free Media - H-SFM). The mAb was produced and purified, and applied in analysis of aflatoxin (AF) and zearalenone (ZEA) by ic-ELISA and HPLC after standardization of method. Optimization of deoxynivalenol (DON) analysis was conducted with mAb previously produced by DON.3 stored at -20 ° C. The cell fusion carried out for developing hybridoma secreting MAb against MC-LR was tested in conjunction with MC-LR-KLH (128 days, seven injections), and MC-LR-BSA (49 days, 4 injection, getting 9 clones) in mouse BALB/c female. These procedures did not generate hybrids producing mAb with high affinity to MC-LR, tested by ic-ELISA. The i-ELISA for clone selection was established as: 1μg/mL MC-LR-KLH, 0.1% skimmed milk / PBS for blocking; mAb anti-MC-LR in PBST; second antibody in PBST (IgG anti-mouse conjugated with phosphatase, 1:2000) and substrate para-nitrophenyl phosphate-PNPP. The AF.2 and ZEN.2 hybrids produced high specificity MAbs coupled with low cross-reactivity against other group of mycotoxins. The product of AF.2 hybridoma obtained in H-SFM consisted of high purity MAbs with protein content of 0.94 mg/mL, which did not happen with hybridoma ZEN.2 in RPMI 1640 supplemented with 10% fetal serum (protein content of 2.06 mg/mL). The ic-ELISA aiming application in quality control was developed with produced MAb, being established for the analysis of total AF: 250 ng/mL of AFB1-BSA, 1:104 mAb anti-AF (0.094 μg/mL), 1:2000 anti-mouse IgG-HPR and 0.1% BSA for blocking. The standard curve (0 to 5 ng/mL of AFB1) presented coefficient of prediction (R2) of 0.996 and Pearson's correlation (r) of -0.93. The applicability of MAb for analysis of AF, DON and ZEA in corn was evaluated against matrix interference and recovery. The matrix interference analysis was similar to AF from 1:5 dilution (p> 0.05) with limit of detection (LOD) of 2 and quantification (LOQ) of 4.6 μg/kg, average recovery of 113, 106 and 104% in concentrations of 10, 20 and 40 μg/kg, respectively (coefficient of variation - CV of 6 to 20%). By analyzing AF in 75 corn samples using ic-ELISA and HPLC, it was observed that eight resulted positive by both methods (ratio ELISA/HPLC, 0.8 to 1.2). Five positive samples by HPLC were negative by ic-ELISA due to the difference in the LOD and LOQ. The parameter set for DON analysis by ic-ELISA in corn, wheat and wheat products (biscuit) was: 2 μg/mL of DON-HS-OVA; 1:2000 MAb anti-DON (10.9 μg/mL). The mAb produced by DON.3 hybridoma allowed for analysing biscuit without requiring matrix dilution (LOD of 370 and LOQ of 159.3 μg/kg), i.e. higher sensitivity than obtained for analysis of corn (1:5 dilution; LOD of 302.8, LOQ of 589.3 μg/kg). Recovery of DON in biscuit artificially infected (500, 1000 and 2000 μg/kg) was between 95 to 106% (CV of 3 to 8%) whereas in corn, it was 95-106% (7 to 11% fo CV). Analyzing DON in 29 samples of biscuit by ic-ELISA and HPLC, the correlation coefficient was 0.72 (ratio ELISA/HPLC 0.4 to 15.8). For the same analysis on corn (75), five samples were positive with both techniques, although 49 samples were quantified by HPLC (LOQ of 30.4 μg/Kg) and 6 samples by ic -ELISA (LOQ of 589.3 μg/Kg). The parameters set for analysis by ZEA ic-ELISA were: 2.5 μg/mL of ZEA-OVA and anti-ZEA MAb 1:200 (10.3 μg/mL). The matrix interference analysis of ZEA in corn (LOD of 51.7 and LOQ of 93.2 μg/Kg) and biscuit (LOD of 9.7 LD and LQ 23.7 of μg/Kg) were similar from the 1:5 dilution (p> 0.05), while the wheat required 1:10 dilution (LD of 33.5 and LQ of 87 μg kg).The average recovery in artificially contaminated corn ranged from 98 to 108% (CV 3 to 9%), 97 and 112% for wheat (CV 2 to 8%), and 96 to 102% (CV 4 to 7%) for biscuit. Analysis of ZEA in maize (36 samples) by ic-ELISA and HPLC showed a correlation coefficient of 0.77. Considering the maximum ZEA established by Brazilian legislation, 16 corn samples had levels exceeding 400 μg/Kg for both techniques, although two samples presented different values in the analysis (509.3 vs 218.8 μg/Kg and 388.6 vs. 430.3 μg/Kg, for ic-ELISA vs. HPLC, respectively). Analysis of ZEA in wheat (125) by ic-ELISA and HPLC showed five positive results, while they presented 74 negative samples. Analyzing ZEA in biscuit, 9 samples were tested positive by ic-ELISA (31.3 to 95 μg/Kg), compared to 21 positive by HPLC (0.9 to 92.2 μg/Kg). The ic-ELISA developed with mAb produced in the laboratory (hybridoma AF.2, ZEN.2 and DON.3) showed stability of sensibilized microplate at least two weeks at 10 °C confirming the application in the rapid screening of mycotoxins in the food chain.

Genus Alicyclobacillus spp. is composed of gram positive bacilli with cyclic fatty acids as the main component of the cell membrane. The forming spores are the main factors of resistance to the thermal processes in food. Growth pH ranges between 2.2 and 6.0 and temperature lies between 35ºC and 55ºC. Bacteria may change the sensorial characteristics of food, such as citric juices, since they produce guaiacol (2-methoxyphenol) providing unpleasant smell and taste to the products. These microorganisms are often associated to the degradation of reconstituted orange juice. In fact, it is unavoidable that fruits bear the bacterium or its spores to the respective industrial processes since the genus is widely distributed in the soil. Orange juice is the only Brazilian product that makes up 50% of world production and 85% of Brazilian exports. Consequently, it contributes significantly towards the country´s commercial balance; its deterioration brings high liabilities. Due to different pH bands and best temperatures for the growth of different species, it is currently difficult to identify a standard methodology for the development of Alicyclobacillus spp. In the case of bacteria control in the industrial juice processing, the industry employs procedures, such as fruit washing, aspersion by sanitizing products and pasteurization of the product. However, spores and biofilm resist all these procedures and the bacterium may nevertheless be present in the final product. Certain factors, such as concentration and contact time between sanitizing products and the microorganism, reduce the bacteria, but no conclusive data are extant on the activities of the sanitation products used in fruit washing on the spores and on the biofilm of Alicyclobacillus spp. O gênero Alicyclobacillus spp. é composto por bacilos Gram-positivos que contém ácidos graxos cíclicos como principal componente da membrana celular e são formadores de esporos, sendo estes os principais fatores que propiciam sua resistência aos processos térmicos empregados em alimentos. O pH de crescimento varia de 2,2 a 6,0 e a temperatura de 35 ºC a 55 ºC. Essas bactérias podem alterar as características sensoriais de alimentos como sucos cítricos, pois produz um composto chamado guaiacol (2-methoxyphenol) caracterizando odor e sabor desagradáveis ao produto. Estes micro-organismos frequentemente são associados à deterioração de sucos de laranja reconstituídos e como este gênero está amplamente distribuído nos solos, é inevitável que a fruta carregue essa bactéria ou o seu esporo para o ambiente industrial. O suco de laranja é o único produto brasileiro que detém mais de 50% da produção mundial, além de 85% das exportações, portanto contribui significativamente para a balança comercial do país e sua deterioração acarreta sérios prejuízos ao comércio. Atualmente, é difícil desenvolver uma metodologia padrão para a determinação e identificação de Alicyclobacillus spp., por causa das diferentes faixas de pH e temperaturas ótimas para crescimento das diferentes espécies. Para o controle de bactérias no processamento do suco a indústria utiliza procedimentos como a lavagem das frutas, aspersão de sanitizantes e a pasteurização do produto. Porém, tanto o esporo como o biofilme podem resistir a todos esses procedimentos, podendo a bactéria estar presente no produto final. Alguns fatores como a concentração e o tempo de contato entre o sanitizante e o micro-organismo interferem na redução das bactérias, no entanto, não existem dados conclusivos sobre a ação dos sanitizantes utilizados para a lavagem das frutas em esporos e biofilme de Alicyclobacillus spp. 49 f

Biofilm formation on surfaces has important consequences for health and food industry, since they can be a source of food contamination leading to food spoilage and foodborne diseases. This study evaluated the effect of cinnamon essential oil (EO) and cinnamaldehyde against Salmonella enterica serotype Saintpaul biofilms on stainless steel surface. The effects of cinnamon EO and cinnamaldehyde on biofilms was evaluated in 96-well plates using 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) staining. Colony forming units (CFU) counting assays and scanning electron microscopy (SEM) were used to evaluate the effect of the compounds on S. Saintpaul biofilms on stainless steel surface. The MTT assay results showed that the cinnamon EO and cinnamaldehyde at 312 μg/mL and 624 μg/mL respectively could decrease approximately 50% of S. Saintpaul biofilms in polystyrene microplate. The highest reduction of bacterial counts on stainless steel surface was observed with addition of 156 μg/mL and 234 μg/mL of cinnamon EO during biofilm formation. Cinnamon EO and cinnamaldehyde reduced the number of bacterial cells on stainless steel surface, making it a potential compound for Salmonella spp. control. A formação de biofilmes bacterianos nas superfícies tem importantes conseqüências para a saúde e para a indústria alimentar, podendo ser fontes de contaminação levando a deterioração de alimentos e transmissão de doenças. Este estudo avaliou o efeito do óleo essencial de canela (OE) e cinamaldeído contra biofilmes de Salmonella enterica sorotipo Saintpaul em superfície de aço inoxidável. Os efeitos do óleo essencial de canela e cinamaldeído em biofilmes foram avaliados em microplacas de 96 poços utilizando a coloração de MTT (brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difenil) tetrazólio). Ensaios de contagem de Unidades Formadoras de Colônias (UFC) e microscopia eletrônica de varredura (MEV) foram utilizados para avaliar o efeito dos compostos em biofilmes de S. Saintpaul em aço inoxidável. Os resultados do ensaio com MTT demonstraram que o óleo essencial de canela e cinamaldeído nas concentrações de 312 μg/mL e 624 μg/mL reduziram aproximadamente 50% dos biofilmes de S. Saintpaul em microplaca de poliestireno. A maior redução das contagens bacterianas na superfície de aço inoxidável foi observada com a adição de óleo essencial de canela nas concentrações de 156 μg/mL e 234μg/mL durante a formação do biofilme. O óleo essencial de canela e cinamaldeído reduziram o número de células bacterianas no aço inoxidável, tornado-os potenciais compostos no controle de Salmonella spp. 44 f

Celiac disease (CD) is the intolerance to gluten protein, which presents stance to the digestive enzymes and triggers an inflammatory response in genetically predisposed individuals. The main treatment is based on restricting the consumption of foods containing this protein fraction. Food containing gluten, such as oats, barley, rye and wheat, causes inflammation in the intestinal villi, followed by atrophy and low absorption of nutrients in affected individuals. CD is one of the most frequent genetic diseases of humanity, affecting 0.5% lo 1.0% of world population. In Brazil, studies performed in blood banks screening, indicate the prevalence of CD in 1:276 to 1:681 of donors. Most of industrial products have gluten in their composition, making the diet of patients with this disease very difficult, which becomes monotonous and restricted. Besides, these products usually have high amounts of simple carbohydrates and saturated fats. The development of food for celiac patients with good nutritional contribution corresponds to the needs of this class of consumers. Rice flour is an alternative to replace wheat flour in bakery products processing such as gluten free cookie, because it does not contam this protein fraction, but the amino acid profile is deficient in lysine. In most cereal bars available in the market, the main ingredient is oats and contents of saturated fat are high in these bars. An alternative for the production of cookies and food bars for celiac with good nutritional support is the use of gluten-free ingredients with essential nutrients. In this context, quinoa, amaranth and flaxseed are emphasized. Quinoa and arnaranth are pseudocereals (grains with similar proximate composition of cereals) originated from Andean regions, mainly from Chile. The grains are highlighted due to high quality proteins and mineral composition. Amaranth presents approximately 12-13% protein, 67-69% carbohydrates, 10-13% fiber, 5-6% fat and 2-3% minerais. Quinoa has 14-15% protein, 55-64% carbohydrates, 9-11% fiber, 6-10% fat and 3- 4% minerals. The constitution of these two pseudocereals also presents saponins, which act as natural antimicrobial agent and insecticide for the plant, but in high concentrations in the human body they become toxic. In order to adapt crops of quinoa and amaranth to the Brazilian climate for cuitivation of the species in the country, the Brazilian Agricultural Research Corporation (EMBRAPA) developed crops of quinoa and amaranth, genetically modified, resulting in the species Chenopodiuin quinoa BRS Piabiru and Amaranthus cruentus BRS Alegria without saponins. Flaxseed stands out for its high content of Omega-3, considerate as an alternative to improve the lipid profile of gluten-free products because the grain has 14-22% oleic acid, 15-17% linoleic acid and 52-60% alpha-linolenic acid in relation (o its total lipids (44%). Therefore, the development of products ready for consumption such as gluten free cookie and food bar, with good nutritional finds the needs of the celiac consuming public. Besides the nutritional composition, another topic to be taken into consideration in the development of food bars and cookies is sensory acceptance. The influence of ingredients on the sensory, nutritional and technological characteristics can be detected with the use of chemometric tools, because they allow the recognition of patterns, Information gathering and a reduction of data dimensionality, as well as the organization of them in a more simple and easy to understand structure. The principal component analysis is based on achievement and linear comparisons of the original variables. The principal components (PCs) are mutually orthogonal and expIain the decrease in variance with increase in number of PCs... cont. A doença celíaca (CD), definida como a intolerância à proteína do glúten, surge a partir da resistência desta proteína às enzimas digestivas, o que desencadeia uma resposta inflamatória, em indivíduos geneticamente predispostos. O principal tratamento baseia-se na restrição do consumo de alimentos contendo esta fração protéica. Alimento que contém glúten, como aveia, cevada, centeio e trigo, causa inflamação nas vilosidades intestinais, com subseqüente atrofia e baixa absorção de nutrientes em indivíduos afetados. A CD é uma das doenças genéticas mais freqüentes da humanidade, afetando 0,5% a 1,0% da população mundial. No Brasil, estudos realizados em bancos de sangue, indicam a prevalência da DC em 1:276 a 1:681 nos doadores. A maioria dos produtos industrializados apresenta glúten em sua composição, dificultando a dieta dos portadores desta doença, a qual se torna monótona e restrita. Ainda, estes produtos, geralmente apresentam alta quantidade de carboidratos simples e de gorduras saturadas. O desenvolvimento de alimentos para celíacos e com bom aporte nutricional vem de encontro às necessidades desta classe de consumidores. A farinha de arroz é uma alternativa para substituição da farinha de trigo no processamento de produtos de panificação como o biscoito sem glúten, pois não contém esta fração protéica, porém em seu perfil de aminoácidos verifica-se deficiência em lisina. Na maioria das barras de cereais disponíveis no mercado, o ingrediente principal é a aveia e o teor de gorduras saturadas nestas barras é elevado. Uma alternativa para a produção de biscoitos e barras alimentícias para celíacos, com bom aporte nutricional, é a utilização de ingredientes sem glúten e com nutrientes essenciais. Neste contexto, destaca-se, a quinoa, o amaranto e a linhaça. A quinoa e o Amaranto são pseudocereais (sementes que apresentam similaridade em composição proximal com os cereais) originados das regiões Andinas, principalmente do Chile. Destacam-se pela presença de proteínas de alta qualidade e composição mineral, O amaranto apresenta em sua composição proximal, aproximadamente, 12-13% de proteínas; 67-69% de carboidratos; 10-13% de fibras; 5-6% de lipídios e 2-3% de minerais. A Quinoa apresenta 14-15% de proteínas; 55-64% de carboidratos; 9-1 1% de fibras; 6-10% de lipídios e 3-4% de minerais. Encontram-se também, na constituição destes dois pseudocereais, as saponinas. Estas atuam como inseticida e agente antimicrobiano natural para a planta, mas quando ingerido em altas concentrações no organismo humano apresenta efeito tóxico. Com intuito de adaptar as culturas de quinoa e amaranto ao clima brasileiro para o cultivo das espécies no País, a Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária (EMBRAPA), desenvolveu culturas de quinoa e amaranto, geneticamente modificadas, resultando nas espécies Chenopodium quinoa BRS Piabiru, Ainaranthus cruentus BRS Alegria sem saponinas. A linhaça (Linum usitiasiinum, L.) destaca-se, pelo alto teor de Omega-3, como uma alternativa para melhorar o perfil lipídico de produtos sem glúten, pois apresenta 14-22% de ácido oléico; 15-17% de ácido linoléico e 52-60% de ácido alfa-linolênico em relação ao seu conteúdo total de lipídios (44%). Sendo assim, o desenvolvimento de produtos prontos para o consumo, como biscoito e barra alimentícia sem glúten, com bom aporte nutricional, vem de encontro às necessidades do público consumidor celíaco. Além da composição nutricional, deve-se levar em consideração, no desenvolvimento de barras alimentícias e biscoitos, a aceitação sensorial dos mesmos. A influência dos ingredientes utilizados, sobre as características sensoriais, nutricionais e tecnológicas, pode ser detectada com a utilização de ferramentas quimiométricas, pois as mesmas permitem o reconhecimento de padrões, coleta de informações, e uma redução da dimensionalidade dos dados, bem como a organização dos mesmos em uma estrutura mais simples, de fácil entendimento. A análise de componentes... cont . 59 f

Mycotoxins are secondary metabolites produced by a variety of fungi, including aflatoxins produced of Aspergillus flavus, A. parasiticus and A. nomius and are present in many important agricultural products, such as cereals. Aflatoxin B1 is the most studied because it is the most frequent and is a potent hepatocarcinogenic. In mammals, aflatoxin B1 is biotransformed in aflatoxin M1, hydroxylated product, eliminated in urine and secreted in milk. The introduction of aflatoxin M1 in diet has occurred mainly by ingestion of bovine milk. Due to its effects, the International Agency for Research on Cancer - IARC in 2002 included aflatoxin M1 in group 1, carcinogenic to humans. Brazil produced 32.091 billion liters of milk in 2011, 67.9% of which were purchased by the dairy industry. The state of Paraná occupied the third place in the national production with 11.9%. According to the Brazilian Association of Long Life Milk, UHT milk consumption has increased in 2011 by 6.7% from 5.45 million liters to 5.81 million liters, exceeding the segment milk powder and pasteurized. Exposure to mycotoxins occurs by ingestion of contaminated food, so there is a risk the health of human and animal population. The risk assessment is to analyze human exposure to toxicant quantified in food in one place. Therefore, there is need for reliable analytical methods for determining toxicantes in foods, ie for quantification of aflatoxin M1 in milk requires the determination of trace levels of this toxin (ng or pg). Given the importance of consumer and UHT bovine milk to feed the population, the objectives of this study were to optimize and validate an analytical method for the determination of aflatoxin M1 in cow milk by high performance liquid chromatography with fluorescence detection system, estimate the population exposure to aflatoxin M1 in milk marketed in Maringá, Paraná, Brazil and investigate the occurrence of toxin in different seasons. The intralaboratory validation was performed according to Directive 2002/657/EC of 12 August 2002 of the European Community and the Manual of Analytical Quality Assurance of the Ministry of Agriculture, Livestock and Supply (MAPA) of Brazil. The method proved to be selective, showed an average recovery of 89.9% and a reproducibility of 5.6%, the values of detection and quantification limits were 0.0000156 µg/kg and 0.0000519 µg/kg and the values for the decision limit (CCα) and detection capability (CCβ) were 0.56 µg/kg, 0.62 µg/kg, respectively. A validated analytical method is efficient for determination of aflatoxin M1 in milk and bovine met the criteria established by the rules. To evaluate the estimate population exposure to aflatoxin M1, we collected 152 samples of bovine milk UHT of four brands in three different supermarkets from Maringá, Paraná, Brazil. Of the 152 samples, 133 (87.5%) was contaminated with an average value of aflatoxin M1 19.6 ng/L. The samples that showed higher levels of contamination belonged seasons winter and autumn showed a mean concentration of 121 and 72.8 ng / mL, respectively. In our study, the autumn season, which was significantly higher than the averages of the other seasons (p

Usnic acid is a naturally occurring dibenzofuran derivative found in several lichen species. The compound has been marketed as an ingredient of food supplements for weight reduction. There is evidence that the compound acts as an uncoupler of mitochondrial oxidative phosphorylation and it is also clear that consumption of the drug can lead to severe hepatotoxicity depending on the dosis. Based on these and other notions the objective of the present work was to investigate the possible effects of usnic acid on liver metabolism. Livers of male Wistar rats were perfused in a non-recirculating system. Usnic acid stimulated oxygen consumption at low concentrations, diminished the cellular ATP levels, increased the cytosolic but diminished the mitochondrial NADH/NAD+ ratio, strongly inhibited gluconeogenesis from three different substrates (IC50 between 1.33 and 3.61 μM), stimulated glycolysis, fructolysis, glycogenolysis and ammoniagenesis and inhibited ureogenesis. The 14CO2 production from [1-14C]- octanoate and [1-14C]oleate was increased by usnic acid, but ketogenesis from octanoate was diminished and that from oleate was not affected. The conclusion is allowed that the effects of usnic acid up to 2.5 μM reflect predominantly its activity as an uncoupler. At higher concentrations, however, several other effects may become significant, including inhibition of mitochondrial electron flow and inhibition of medium-chain fatty acid oxidation. In metabolic terms, toxicity of usnic acid can be predicted to be especially dangerous in the fasted state due to the combination of several deleterius events such as diminished hepatic glucose and ketone bodies output to the brain and increased ammonia production. O ácido úsnico é um composto de ocorrência natural derivado do dibenzofurano, encontrado em várias espécies de liquens. O composto tem sido vendido como ingrediente de suplemento para redução de peso. Existe evidência de que este composto tem ação desacopladora da fosforilação oxidativa mitocondrial e está também claro que o seu consumo pode causar severa injúria hepática dependendo da dose. A conseqüência mais óbvia da ação desacopladora do ácido úsnico é a depleção do ATP, como de fato foi demonstrado em dois estudos utilizando hepatócitos isolados. No entanto, este fenômeno está em geral ligado, direta ou indiretamente, a uma variedade de modificações em fluxos metabólicos. Embora as manifestações estritamente tóxicas a nível celular tenham sido investigadas mais extensamente, uma quantificação precisa das vias metabólicas individuais sob a influência do ácido úsnico ainda não está disponível. Uma avaliação mais significativa das vias metabólicas pode ser feita no fígado de rato em perfusão isolada, um sistema no qual estados estacionários podem ser estabelecidos sob condições mais próximas das fisiológicas comparada com células isoladas e/ou cultivadas. Dessa maneira, o presente estudo, utiliza a vantagem da perfusão isolada do fígado para quantificar os efeitos do ácido úsnico sobre vias catabólicas e anabólicas sob várias condições. Os resultados devem aumentar o entendimento dos efeitos metabólicos do ácido úsnico e também permitir comparar a ação deste composto com a de outras drogas. 42 f

O agronegócio globalizado, cada vez mais competitivo, exige segurança com enfoque na legislação sanitária perante alimento saudável aos consumidores. No cenário, o controle de Ocratoxina A (OTA) em produtos derivados de uva, com ênfase ao vinho, já é uma realidade na Comunidade Européia, cujo monitoramento contínuo deve ser executado empregando métodos confiáveis e acessíveis. Em contraste ao iminente lançamento de biosensores, capazes de conferir rapidez na análise in loco, o Brasil ainda é dependente de kits analíticos importados, cujo custo restringe o amplo monitoramento na rotina de controle de qualidade. Considerando que ensaios imunoquímicos, a exemplo de ELISA, seja a base para avanço tecnológico - biosensores, procedeu-se desde o cultivo de hibridoma OTA.1 em meio sintético, visando produção de imunorreagente. O anticorpo monoclonal (AcM) IgG anti-OTA obtido foi aplicado no desenvolvimento de ELISA competitivo indireto (ic-ELISA) e coluna de imunoafinidade (IAC). O cultivo de hibridoma OTA.1 iniciado em meio RPMI com 10% de soro fetal bovino foi gradativamente adaptado até 100% de meio H-SFM (Hybridoma-Serum Free Medium). O AcM de maior pureza produzido (meio 100% H-SFM) apresentou título de 1:10.000, analisado por ic-ELISA, sendo utilizado juntamente com o conjugado OTA-BSA na diluição de 1:30.000. A validação intra-laboratorial foi realizada, procedendo comparação com CLAE para análise de OTA em vinho tinto (VT), rosado (VR) e branco (VB). Os parâmetros avaliados consistiram de limite de detecção (0,17; 0,15 e 0,14 ng/mL para VT, VR e VB respectivamente); quantificação (1,29; 0,91 e 0,64 ng/mL para VT, VR e VB); exatidão (recuperação média de 90,6%; 89,2% e 89,6% para VT, VR e VB); linearidade; precisão avaliada em termo de repetibilidade (RSD de 9,41; 8,01 e 9,29%, respectivamente para VT, VR e VB) e precisão intermediária (RSD de 15,81; 12,66 e 12,65%). A incerteza padrão máxima foi calculada para três níveis de contaminação de OTA (0,5; 2 e 5 ng/mL) obtendo-se para 0,5 ng/mL 26, 25 e 24% para VT, VR e VB, respectivamente, e incerteza de 20% para níveis de OTA de 2 e 5 ng/mL para as três matrizes. O ic-ELISA desenvolvido apresentou correlação de R=0,975 com CLAE, na análise de 14 amostras positivas, do total de 70 vinhos comerciais (47 VT e 23 VB). Consequentemente, CLAE detectou positividade em 14 amostras, divididas em 10 VT (0,14 a 0,99 ng/mL) e em 4 VB (0,33 a 0,90 ng/mL). O ic-ELISA detectou 12 amostras positivas, divididas em 8 VT (0,26 a 0,86 ng/mL) e 4 VB (0,29 a 1,12 ng/mL). Paralelamente, CIA baseada em suporte ativado Affi-Gel 10 foi confeccionada com AcM IgG obtido de cultivo em 75 e 100% H-SFM (1:1) nas concentrações de 5, 10 e 20 mg de IgG/mL de gel; as CIAs desenvolvidas foram denominadas CIA 5, 10 e 20, respectivamente. Comparando a eficiência de etanolamina e glicina no capeamento pós-imobilização de IgG (end-capping), ambas apresentaram resultados similares. A etanolamina foi escolhida para continuidade da padronização, em virtude de menor custo, obtendo-se eficiência da imobilização de AcM de 86,43% para CIA 5; 85,18 % para CIA 10 e 88,50% para CIA 20. A seguir, a capacidade de retenção de toxina pela coluna desenvolvida foi avaliada aplicando 20 ng de OTA; CIA 5 reteve 72,08%, CIA 10, 76,85% e CIA 20, 67,20% de OTA. A atividade específica foi de 6,54 ng de OTA retida/mg de IgG imobilizada para CIA 5; 3,58 para CIA 10 e 1,50 para CIA 20. A CIA 10 e CIA 5 apresentaram a efetividade de recuperação de OTA similar, quando testadas em concentrações entre 0,5 a 15 ng em tampão PBS-bicarbonato de sódio 1% (p

Considerando os efeitos tóxicos, agudos e crônicos, para a saúde humana e animal, causados por resíduos de praguicidas em alimentos, este trabalho teve como objetivo a identificação e quantificação da presença de resíduos de praguicidas organofosforados (OF) e carbamatos (CB) no leite cru, nos componentes da alimentação e água dos animais, e estimar a ingestão diária provável desses resíduos pelos consumidores. Em 28 propriedades e em dois resfriadores comunitários do agreste pernambucano foram coletadas 30 amostras de leite, 38 de água e 109 da alimentação animal. A quantificação de OF e CB nas amostras foi realizada por Cromatografia Gasosa (CG). Nas propriedades onde as amostras de leite apresentaram resíduos, a água e todos os componentes da alimentação animal foram analisados, por CG, para o grupo químico encontrado no leite. Das 30 amostras de leite analisadas, 12 (40%) apresentaram resíduos, sendo seis (20%) positivas para OF, cinco (16,7%) para CB e uma (3,32%) para ambos praguicidas. Os praguicidas detectados no leite e suas respectivas médias em ng/ml foram: 0,04 para coumafós, 0,01 para dimetoato, 0,06 para fention, 0,02 para malation, 0,02 para aldicarb, 0,02 para carbaril e 0,01 para carbofuran. Das 109 amostras da alimentação animal e das 28 amostras de água coletadas, 48 amostras de alimentação e 16 amostras de água foram analisadas pela CG, provenientes de 11 propriedades que apresentaram resíduos no leite. Das 48 amostras de alimentação analisadas, 22 (45,83%) apresentaram resíduos, sendo 15 (31,25%) positivas para OF, seis (12,50%) para CB e uma (2,08%) para ambos praguicidas. Os praguicidas detectados na alimentação e suas respectivas médias em ng/ml foram 0,01 para dimetoato, 4,72 para diazinon, 80,45 para malation, 0,95 para fention, 1,00 para metil-paration, 0,04 para aldicarb e 0,01 para carbaril. Para as amostras de água, seis (37,50%) apresentaram resíduos para OF e nenhuma amostra apresentou resíduos para CB. Os praguicidas detectados na água e suas médias em ng/mL foram: 0,32 para diazinon, 0,78 para malation, 0,13 para metil-paration e 0,06 para fention. Em quatro propriedades foram detectados resíduos no leite com o mesmo princípio ativo detectado na água e/ou alimentação animal, sugerindo transferência pela alimentação. Quando a Ingestão Diária Provável Média dos princípios ativos detectados no leite foi comparada à respectiva Ingestão Diária Aceitável, não houve risco para nenhuma faixa etária, considerando o consumo per capta Brasileiro, pernambucano e o consumo recomendado pelo Ministério da Saúde de leite. Considering the toxicity, acute and chronic, for human and animal health, by residues of pesticides in food, this study aimed to research and quantify residues of pesticides organophosphates (OP) and carbamates (CB) in raw milk, water and components of animal feed, and estimate consumer?s health risk through Probable Daily Intake (PDI). On 28 milk farms and 2 community milk coolers on Pernambuco were collected 30 samples of milk, 38 samples of water, and 109 samples of animal feed. The quantification of OP and CB in the samples was performed by gas chromatography (GC). Farms where samples of milk were positive, water and all components of animal feed were performed by CG, for the chemistry group found in milk. Of 30 milk samples analyzed, 12 (40%) were found residues, six (20%) positive for OP, five (16,7%) for CB and one for both. The pesticides found in milk and their respective averages in ng / ml were: 0.04 for coumaphos, 0.01 for dimethoate, 0.06 for fenthion, 0.02 for malathion, 0.02 for aldicarb, 0.02 for carbaryl and 0.01 for carbofuran. Of the 109 samples of animal feed and 28 samples of water analyzed, 22 (45.83%) were found residues, 15 positives for OF, six (12,50%) positives for CB and one positive for both. The pesticides found in animal feed and their respective averages in ng / ml were: 0.01 for dimethoate, 4.72 for diazinon, 80.45 for malathion, 0.95 for fenthion, 1.00 for metil-parathion, 0.04 for aldicarb and 0.01 for carbaryl. About samples of water, six (37,50%) were positive for residues of OP and no one was positive for CB. The pesticides found in water and their respective averages in ng / ml were: 0.32 for diazinon, 0.78 for malathion, 0.13 for metil-paration and 0.06for fenthion. On four milk farms the pesticides detected in milk were compatible with the active principle found in the water and/or animal feed, suggesting transfer through feed. When Probable Daily Intake of active principal found in milk samples was compared to its Acceptable Daily Intake, there was no risk to any age, considering the brazilian consumption per capita, the consumption per capita from pernambuco and the recommended daily intake by the Ministério da Saúde.