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Clostridium difficile is a major cause of antibiotic-associated colitis and is associated with signicant morbidity and mortality. Glutamine (Gln) is a major fuel for the intestinal cell population. Alanyl-glutamine (Ala-Gln) is a dipeptide that is highly soluble and well tolerated. IEC-6 cells were used in the in vitro experiments. Cell morphology was evaluated by atomic force microscopy (AFM) and scanning electron microscopy (SEM). Cell proliferation was assessed by WST-1 and Ki-67 and apoptosis was assessed by TUNEL. Cytoskeleton was evaluated by immunouorescence for RhoA and F-actin. RhoA was quantied by immunoblotting. TcdA induced cell shrinkage as observed by AFM, SEM, and uorescent microscopy. Additionally, collapse of the F-actin cytoskeleton was demonstrated by immunouorescence. TcdA decreased cell volume and area and increased cell height by 79%, 66.2%, and 58.9%, respectively. Following TcdA treatment, Ala-Gln and Gln supplementation, signicantly increased RhoA by 65.5% and 89.7%, respectively at 24 h. Ala-Gln supplementation increased cell proliferation by 137.5% at 24 h and decreased cell apoptosis by 61.4% at 24 h following TcdA treatment. In conclusion, TcdA altered intestinal cell morphology and cytoskeleton organization, decreased cell proliferation, and increased cell apoptosis. Ala-Gln and Gln supplementation reduced intestinal epithelial cell damage and increased RhoA expression.

Submitted by Jonathan Barbosa (jon_crf@hotmail.com) on 2012-02-14T15:50:15Z No. of bitstreams: 1 Borojevic2_2010.pdf: 1375185 bytes, checksum: fcf97c988706b7bfcad50dabccdf4f2a (MD5) Approved for entry into archive by Monica Couto(monicacbcouto@gmail.com) on 2012-06-19T18:07:25Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Borojevic2_2010.pdf: 1375185 bytes, checksum: fcf97c988706b7bfcad50dabccdf4f2a (MD5) Made available in DSpace on 2012-06-19T18:08:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Borojevic2_2010.pdf: 1375185 bytes, checksum: fcf97c988706b7bfcad50dabccdf4f2a (MD5) Previous issue date: 2010 B-cell precursor acute lymphoblastic leukemia (BCP-ALL) is the most common malignancy in children. The Wnt signaling pathway has been found to be extensively involved in cancer onset and progression but its role in BCP-ALL remains controversial.Weevaluate the role of the Wnt pathway in maintenance of BCP-ALL cells and resistance to chemotherapy. Gene expression profile revealed that BCP-ALL cells are potentially sensitive to modulation of Wnt pathway. Nalm-16 and Nalm-6 cell lines displayed low levels of canonical activation, as reflected by the virtually complete absence of total b-catenin in Nalm-6 and the b-catenin cell membrane distribution in Nalm-16 cell line. Canonical activation with Wnt3a induced nuclear b-catenin translocation and led to BCP-ALL cell death. Lithium chloride (LiCl) also induced a cytotoxic effect on leukemic cells. In contrast, both Wnt5a and Dkk-1 increased Nalm-16 cell survival. Also, Wnt3a enhanced the in vitro sensitivity of Nalm-16 to etoposide (VP-16) while treatment with canonical antagonists protected leukemic cells from chemotherapy-induced cell death. Overall, our results suggest that canonical activation of the Wnt pathway may exerts a tumor suppressive effect, thus its inhibition may support BCP-ALL cell survival. 10 p. : il.

Orientador: Hernandes Faustino de Carvalho Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: O aluno que se envolve com seu processo de aprendizagem aprende melhor. A partir dessa premissa, nosso objetivo no presente estudo foi desenvolver, aplicar e avaliar uma nova ferramenta didática em disciplinas de Biologia Celular, baseada em aulas com RPG (roleplaying game). O RPG é um sistema de jogo cooperativo onde os participantes têm objetivos comuns e precisam atuar em grupo para alcançá-los. Aplicado à educação, acreditamos que funciona como um facilitador da aprendizagem ativa, sendo o aluno o construtor de seu conhecimento enquanto participa da aula, orientado pelo professor. A criação e aplicação dessas aulas constitui desafio estimulante para professores, e a formação de professores também constituiu foco dentro desse estudo. A metodologia incluiu: pesquisas teóricas sobre o assunto a ser trabalhado na aula (um processo celular como síntese de ATP, por exemplo) e subsequente criação da aula na forma de uma aventura; testes das aulas criadas; aplicação das aulas a alunos de nível superior em diferentes cursos em três diferentes universidades; avaliação dos resultados através de notas em provas regulares das disciplinas, questionários, construção de mapas conceituais, depoimentos dos alunos e dos professores participantes, e observações dos alunos durante as aulas. Também foi avaliada a retenção do conteúdo em médio prazo, pela aplicação de um teste sem aviso prévio, um ano após a aula ter sido ministrada. Para comparar as médias de desempenho dos alunos as turmas foram divididas de forma que, enquanto metade dos alunos participou da aula com uso do RPG (GRPG), a outra metade participou de uma aula expositiva "tradicional" (GC). GC e GRPG tiveram notas iguais nas avaliações formais, exceto por uma questão na qual o GC teve melhor desempenho, embora ambos os grupos tenham tido notas muito baixas. Na avaliação de médio prazo, o GRPG foi melhor em duas questões. A maioria dos alunos que participaram do GRPG considerou que essa é uma boa metodologia didática que deve ser utilizada em sala de aula; entende que ela deve ser utilizada como ferramenta complementar à aula expositiva; sentiu-se estimulada a ler mais sobre os temas das aulas. Os alunos sentiram-se mais seguros em responder questões sobre os temas de Biologia Celular após as aulas com RPG. A análise dos mapas conceituais, construídos pelos alunos antes e depois da aula com RPG, permitiu concluir que novos conceitos foram incorporados à teia de conhecimento dos alunos, e que houve melhora significativa na forma como os conceitos foram correlacionados nos mapas. Professores e estudantes (voluntários e bolsistas, de graduação e pós-graduação), que atuaram como professores nas aulas consideraram essa ferramenta didática como um bom instrumento de aprendizagem. Nós concluímos que a aula com RPG é uma metodologia didática que pode trazer benefícios em termos da construção de conteúdos em Biologia Celular e é um potencial promotor da aprendizagem ativa e do desenvolvimento de habilidades como cooperação e criatividade Abstract: Student who gets involved with their learning process learns better. Starting from this premise, the aim of this study was to develop, implement and evaluate a new teaching method in the disciplines of cell biology, the RPG-based class. The RPG (role-playing game) is a cooperative game where the players have common goals and must work together actively to achieve the goals. Each student builds his own knowledge while participating in the classroom guided by the teacher. Creating and implementing these classes was an exciting challenge for teachers, and teacher training using this approach was also a focus of this study. The methodology included: theoretical research on the topics of cellular biology (a cellular process such as ATP synthesis, for example) and the subsequent creation of the class in the form of an RPG adventure, testing the created classes, and applying the material to students of higher education in three different universities. The students attended either an RPG-based class (GRPG) or a lecture (GC) on specific cellular biology topics. Pre- and post-class questionnaires, conceptual maps, regular exam scores and on an unannounced test one year later (medium-term retention) were compared to assess student attitudes and learning in the two groups. The evaluation also consisted of testimonials from students, interviews with participating teachers, and observations of students during class. GC scored better than GRPG in 1 of 20 regular exam questions, but the score for this one question was very low in both groups. In the medium-term evaluation the RPG group showed higher scores on 2 of 22 questions and left fewer questions unanswered. Most students who participated in the GRPG considered that this is a good teaching/learning method, that it should be used as a complementary tool to lecture, and felt more confident and encouraged to read more about the class topics. The analysis of concept maps constructed by students before and after school, shows that new concepts were incorporated into the web of knowledge of students, and a significant improvement in the concepts' connections were established as assessed by concept maps. Teachers and students who acted as teachers in the RPG-based classes considered this a good teaching/learning tool, and were willing to apply this tool in their own classrooms. Our results showed that RPGs is quantitatively as good as formal lectures, but can be an educational tool that gives students the chance to learn actively and potentially lead to a better retention of the acquired knowledge Doutorado Biologia Celular Doutor em Biologia Celular e Estrutural

FACEPE (Fundação de Amparo à Ciência e Tecnologia do Estado de Pernambuco) Introdução: Lesões dos nervos periféricos levam a alterações musculares, desde atrofia até morte das fibras. Busca-se por recursos que auxiliem o processo de regeneração nervosa, diminuindo suas consequências no tecido muscular. Objetivos: Avaliar a eficácia do ultrassom terapêutico (UT) associado à terapia com células mononucleares da medula óssea (CMMO) no processo de reinervação do tecido muscular. Material e Métodos: Utilizou-se 32 ratos, Wistar, distribuídos em grupo controle (GC) e 4 grupos submetidos a neurotmese do nervo ciático [lesionado (GL), tratado com CMMO (GLT), tratado com UT (GLU), tratado com CMMO+UT (GLTU)]. No 1º dia pós-neurotmese, foi iniciado o UT pulsátil (1MHz; 0,5W/cm2; frequência de pulso - 100Hz; duração de pulso - 2ms, 1:5), e o tratamento durou 12 dias. O índice funcional do ciático (IFC) foi avaliado, e o peso muscular e as quantidades de miosinas lenta e rápida foram aferidos. Foram aplicados os testes estatísticos de Kruskal-Wallis e Mann-Whitney, p

Submitted by Boris INFORMAT (boris@uerj.br) on 2021-04-26T01:11:33Z No. of bitstreams: 1 TESE_FINAL_PUBICADA_Viviane_Younes_Rapozo.pdf: 3009232 bytes, checksum: 3bdcc6eb96ed5893acb77c6d161443e4 (MD5) Made available in DSpace on 2021-04-26T01:11:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TESE_FINAL_PUBICADA_Viviane_Younes_Rapozo.pdf: 3009232 bytes, checksum: 3bdcc6eb96ed5893acb77c6d161443e4 (MD5) Previous issue date: 2009-08-23 Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico The mitogen-activated protein kinase/extracellular signal-regulated kinase (MAPK/ERK) pathway is important for both long-term survival and timing of the progression of oligodendrocyte differentiation. In this work, the MAPK/ERK signaling in oligodendroglia was studied in vitro by using MEK inhibitors. Cell morphology and distribution of proteins were analyzed in different stages of maturation. Primary cultures of oligodendroglia were treated with the MEK inhibitors PD98059 or U0126, at 5 or 11div for 30min, 24 or 48h. Oligodendroglial cells were distinguished by using stage specific markers: NG2 proteoglycan, A2B5, 2´3´nucleotide-cyclic 3´phosphodiesterase (CNPase) and myelin basic protein (MBP), and classified according to their morphology into different developmental stages. Treatment significantly increased the number of cells with more immature morphologies and decreased the number of mature cells. Furthermore, it increased the number of rounded cells that could not be classified into any of the oligodendroglial developmental stages. The strongest effects were usually observed shortly after treatment. Rounded cells were CNPase/MBP positive and they were not stained by anti-NG2 or A2B5, indicating that they were mature cells unable either to extend and/or to maintain their processes. In fact, these changes were accompanied by alterations in the distribution of the oligodendroglial proteins MBP and CNPase, and alterations in cytoskeleton proteins, as actin, tubulin and the focal adhesion kinase (FAK). MBP was observed in a continuous distribution in cell body and processes in control cultures. Furthermore, in treated cultures a disorganized pattern of distribution of CNPase, actin and tubulin was observed. In control cultures, these proteins compose the cytoskeleton vein-like structures. By the other side, after a short time of MEK inhibition (30min), actin and tubulin showed the same punctual pattern observed in CNPase distribution. Treatment also caused a reduction of focal adhesion sites showed by FAK. As treatment progressed, after 24 and 48h, actin and tubulin seemed to be rearranged into a filament-like pattern. These data showed an effect of the MAPK/ERK pathway on oligodendroglial branching, with possible consequences for the formation of the myelin sheath. A via de sinalização da cinase regulada por fatores extracelulares, da família das proteínas cinases ativadas por mitógenos (MAPK/ERK) é importante tanto para a sobrevivência como para a progressão da diferenciação de oligodendrócitos. Neste trabalho, a via da MAPK/ERK foi avaliada na oligodendroglia in vitro com a utilização de inibidores da MEK. A morfologia celular, assim como a distribuição de proteínas foram analisadas em diferentes estágios de maturação da oligodendroglia. Culturas primárias de oligodendrócitos foram tratadas com os inibidores da MEK PD98059 ou U0126, aos 5 ou 11dias in vitro (div), por 30min, 24 ou 48h. A oligodendroglia foi distinguida com marcadores estágio-específicos: A2B5, 2´3´nucleotídeo cíclico 3´ fosfodiesterase (CNPase) e proteína básica de mielina (MBP), e classificada de acordo com sua morfologia em diferentes estágios de desenvolvimento. O tratamento aumentou significativamente o número de células com morfologia mais imatura e diminuiu o número de células maduras. Além disso, aumentou o número de células redondas e sem prolongamentos as quais não puderam ser classificadas em nenhum dos estágios de desenvolvimento da oligodendroglia. Os efeitos mais evidentes foram observados logo após o menor tempo de tratamento. Células redondas eram positivas para CNPase e MBP, porém não foram marcadas com A2B5 ou com NG2, indicando que seriam células maduras incapazes de estender ou manter seus prolongamentos. De fato, estas mudanças foram acompanhadas por alterações na distribuição de proteínas de oligodendrócitos como a MBP e a CNPase, assim como alterações em proteínas de citoesqueleto, como actina, tubulina e na cinase de adesão focal (FAK). A MBP foi observada nas células tratadas em um padrão de distribuição desorganizado e disperso, oposto ao padrão contínuo que é observado nas células das culturas controle. Além disso, o tratamento causou uma desorganização na distribuição da CNPase, actina e tubulina. Nas células das culturas controle, estas proteínas apresentam um padrão organizado compondo as estruturas de citoqueleto semelhantes a nervuras. Após um pequeno período de tratamento (30min), actina e tubulina apresentaram o mesmo padrão de marcação puntiforme que a CNPase apresentou. O tratamento também reduziu os pontos de adesão focal demonstrados pela FAK. Com o decorrer do tratamento, após 24 e 48h, actina e tubulina aparentavam estar se reorganizando em um padrão filamentar. Estes resultados indicam um efeito importante da via da MAPK/ERK na ramificação e alongamento dos prolongamentos dos oligodendrócitos, com possíveis consequências para a formação da bainha de mielina.