Search

A physical map of the M. neustria nuclear polyhedrosis virus (ManeNPV) genome was constructed, the complete order of BamHl, Kpnl and PstI restriction enzyme sites was determined, a polyhedrin gene was localized on the map. The viral DNA size was calculated to be about 139 kbp. Restriction endonuclease profiles of the DNA of ManeNPV plaques isolate propagated in A. pernyi cells demonstrated "persistent heterogeneity", submolar bands were shown to appear in a digestion pattern of DNA of the first passage virus. These bands were proved to be due to the DNA molecules presence in the non-homogeneous virus DNA pool, their chains having been shown to carry a putative break in a definite site. Such a "break site" was localized on the physical, map of ManeNPV genome. Складено фізичну карту геному вірусу ядерного поліедрозу М. neustria (ManeNPV), визначено розташування сайтів для рестриктаз BamHl, Kpnl та PstI, на карті локалізовано ген поліедрину. Розмір вірусної ДНК визначено приблизно в 139 тис. п. н. Профілі рестриктів ДНК ManeNPV, ізольованих з бляшок, отриманих у клітинах A. pernyi, демонструють «тривку гетерогенність», субмолярні фрагменти виявлено в паттерні рестрикції після першого пасажу вірусу. Встановле­но, що ці фрагменти присутні в пулі гетерогенної вірусної ДНК, а її нитки мають розриви в певному місці. Таке місце розриву було локалізовано на фізичній карті геному ManeNPV. Составлена физическая карта генома вируса ядерного полиэд­роза М. neustria (ManeNPV), определено расположение сайтов для рестриктаз BamHl, Kpnl и PstI, на карте локализован ген полиэдрина. Размер вирусной ДНК определен приблизительно в 139 тыс п. к. Профили рестриктов ДНК ManeNPV, изолироанных из бляшек, полученных в клетках A. pernyi, демонстрируют «устойчивую гетерогенность», субмолярные фрагмен­ты обнаружены в паттерне рестрикции после первого пассажа вируса. Установлено, что эти фрагменты присутствуют в пуле гетерогенной вирусной ДНК, а ее нити имеют разрыв в определенном месте. Такое место разрыва было локализовано на физической карте генома ManeNPV.

Tez (yüksek lisans) -- Ondokuz Mayıs Üniversitesi, 2017 Libra Kayıt No: 116631 …

Summary On three caterpillars (L3) of Malacosoma neustria (L.) reared in the laboratory we observed a mycosis caused by Penicillium brevi-compactum Dierckx. The moribund larvae showed a mycelium, 2–3 mm wide, approximately girdle-like sourrounding the body. Histopathological investigations and infection experiments confirmed the suggestion that these were wound-infections caused by a fungus normally not pathogenic for insects. The wounds are closed by a coagulation plug, with a mass of hyphae in his exterior strongly melanized part adjoined by the outer layer of the macroscopically visible mycelium. Hyphae grow through the coagulation plug into the body of the larvae. Apparently the infestation spreads relatively slow towards the ends of the body. The hyphae preferably grow in the fat body, muscles, tracheal matrix, epidermis (hypodermis), and endocuticle. It is striking that in moribund caterpillars the muscularis of the midgut is densely infected, whereas the epithelium cells are free or almost free of hyphae. Finally, hyphae grow through the integument in outside direction preferring the insertion-points of the hairs. Contrary to the fungus diseases caused by the typical insect pathogenic fungi which spread in the whole body, here we have the picture of a localized, but also fatal mycosis. For infection experiments 20 larvae (L4 and L5) of M. neustria obtained dorsolaterally an incision of 1 mm in the region of the first pair of the abdominal feet. After 15 min. and again after 2 hours, the wounds were contamined with spores of P. brevi-compactum. For 48 hours the larvae remained in Petri dishes with a rel. humidity of about 100 per cent. 30 per cent of the larvae died of wound-mycosis, the average time of mortality being 7,8 days. The controls, wounded and uninfected on the one side, not wounded but spore dusted on the other, did not die of mycosis. Thus the saprophytic P. brevi-compactum is able to act as a wound parasite on larvae of M. neustria. The synergism (“enchainement”) of two harmless factors (wound and fungus) causes death within a relatively short time.

The lackey moth, Malacosoma neustria (Linnaeus, 1758), a worldwide pest, causes extensive economic losses on particularly hazelnut, Prunus, Quercus, Populus, and Salix trees. In this study, a local nucleopolyhedrovirus (NPV) was isolated from the larvae of M. neustria in the northeast of Turkey. It was named ManeNPV-T2. Electron microscopic observations showed that the polyhedra of the new isolate contain several virions with multiple nucleocapsids packaged within a single viral envelope. Restriction endonuclease analysis of ManeNPV-T2 DNA indicated that it has a different restriction profile compared to the previous Turkish and Latvian isolates. The phylogenetic analysis of the amplified polh sequence of ManeNPV-T2 showed its relation to the other NPVs from Malacosoma species. Mortality values for third instar M. neustria larvae ranged from 48% to 100% according to the concentration of polyhedral occlusion bodies. Based on screening tests, the LD50 value of the new isolate was calculated as 1.34 × 104 occlusion bodies per larvae. Consequently, ManeNPV appears to be a promising microbial control agent for biocontrol of M. neustria.

Değişik dönemlerde salgınlar yaparak birçok meyve ve çalı türlerinde önemli derecede zararlara neden olan Yüzükkelebeği, Malacosoma neustria (Linnaeus, 1758) (Lepidoptera: Lasiocampidae)’nın yumurta parazitoitlerinin saptanması ve potansiyel biyolojik mücadele etmenlerinin belirlenmesi amacıyla Erzurum ilinde 2004-2005 yıllarında çalışılmıştır. Üç ayrı yöreden alınan yumurta örneklerinden Hymenoptera takımında dört familyaya bağlı sekiz parazitoit türü elde edilmiştir. Bunlardan Telenomus laevisculus (Ratzeburg, 1844) (Scelionidae) her üç yöreden de elde edilen ve en fazla yoğunluk oluşturan tür olup tüm parazitoitlerin %51’ini teşkil etmektedir. Baryscapus oophagus (Otten, 1942) ve Baryscapus nigriviolaceus (Nees, 1834) (Eulophidae) ise toplam parazitoitlerin sırasıyla %24 ve %21’ini oluşturmaktadır. Pronotalia carlinarum (Szelényi & Erdös, 1951) (Eulophidae), Anastatus bifasciatus (Geoffroy, 1785) (Eupelmidae), Trichogramma buluti Bulut & Kilincer, 1991 (Trichogrammatidae), Ooencyrtus neustriae (Mercet, 1925) (Encyrtidae) ve Baryscapus evonymella (Bouche, 1834) (Eulophidae) bu çalışmada elde edilen örnek sayıları çok düşük türlerdir. Telenomus laevisculus bu zararlı ile biyolojik mücadelede en fazla potansiyele sahip olan türdür. Elde edilen parazitoitlerin doğal parazitlenme oranı %21.81 olmuştur., Malacosoma neustria (Linnaeus, 1758) (Lepidoptera: Lasiocampidae), a pest of various fruit and bushes, were studied in Erzurum Province, during 2004-2005 with the goal of identifying potential biological control agents of the moth, which reaches outbreak levels in several year-intervals. Eight species of parasitoids in four families of Hymenoptera were obtained from the eggs of M. neustria collected from three locations. Telenomus laevisculus (Ratzeburg, 1844) (Scelionidae) was the most prevalent species occurring at all collecting sites and accounted for 51% of the parasitoids. Baryscapus oophagus (Otten, 1942) and Baryscapus nigriviolaceus (Nees, 1834) (Eulophidae) accounted for 24% and 21% respectively of the total parasitoids found. Pronotalia carlinarum (Szelényi & Erdös, 1951) (Eulophidae), Anastatus bifasciatus (Geoffroy, 1785) (Eupelmidae), Trichogramma buluti Bulut & Kilincer, 1991 (Trichogrammatidae), Ooencyrtus neustriae (Mercet, 1925) (Encyrtidae) and Baryscapus evonymella (Bouche, 1834) (Eulophidae) were also obtained, but at very low numbers. Telenomus laevisculus haspotential in the biological control of this particular pest. Overall parasitism rate was 21.81%

Bacillus thuringiensis, Gram-pozitif, sporlanabilen, fakültatif anaerop bir toprak bakterisidir. Sporlanma esnasında üretilen, parasporal kristal yapıdaki ?-endotoksinler, bunların çok sayıda tarım zararlılarıyla mücadelede etkili ve yaygın bir şekilde kullanılmalarını sağlamaktadır. Bu potansiyelleri nedeniyle bugün, tüm dünyada en çok üretilen ve en fazla market satışlarına sahip ticari mikrobiyal mücadele preparatları B. thuringiensis'lerden geliştirilmiştir.Bu çalışmada kullanılan Bacillus thuringiensis MnD izolatı, doğal olarak ölmüş Malacosoma neustria larvalarından izole edildi. Bu izolata ait cry2Ab geni, dejenerat primerler kullanılarak PZR yöntemiyle çoğaltıldı. Çoğaltılan genlerin nükleotid sıralarının belirlenmesi için PZR ürünleri pGEM-T Easy vektörüne klonlandı ve dizin analizine gönderildi. Dizin analizi yapılan cry2Ab geninin DNA ve aminoasit sıraları literatürdeki mevcut cry2Ab genlerinin DNA ve aminoasit sıraları ile karşılaştırıldı.Analiz sonuçları, çalışmada kullanılan yerel Bacillus thuringiensis izolatına ait cry2Ab geninin 1902 bp uzunluğunda olduğunu, 633 aminoasit dizisi kodladığını ve literatürdeki B. thuringiensis ly30 bakterisinin cry2Ab genine %99 oranında benzerlik gösterdiğini ortaya koydu. Dizin analizi yapılan bu cry2Ab geni, pET-28a(+) ekspresyon vektörüne klonlanarak Escherichia coli'de ekspres edildi. Ekspresyon sonucu, SDS-PAGE analizine tabi tutuldu ve cry2Ab proteininin 70 kDa büyüklüğünde olduğu belirlendi. Üretimi yapılan cry2Ab proteinin insektisidal aktivitesi, Malacosoma neustria (Lepidoptera: Lasiocampidae) ve Rhagoletis cerasi L. (Diptera: Tephritidae) zararlıları üzerinde test edildi. Yüz ?g konsantrasyonundaki cry2Ab proteinin M. neustria larvaları üzerinde %73 ve R. cerasi larvalarında ise %75'lik insektisidal etki gösterdiği belirlendi. Bacillus thuringiensis is a gram-positive, facultative anaerob soil bacterium can be sporulated. During sporulation, it produces different ?-endotoxins that have a parasporal crystal structure because of the B. thuringiensis, an important insect pathogen, is effectively and widely used in combating pests. Because of their potential, B. thuringiensis is the most produced and most marketed commercial microbial control preparate around the world today.B. thuringiensis MnD isolate used in this study was isolated from a naturally dead M. neustria larvae. cry2Ab gene belonging to that isolate was amplified with the PCR method by using degenerate primers. The amplified gene was cloned to pGEM-T Easy Vector and its sequence analysis was performed in order to identify the nucleotide sequence. DNA and aminoacid sequence of cry2Ab gene that underwent a sequence analysis, was compared with the DNA and aminoacid sequences of existent cry2Ab gene in literature.The results of anaysis show that cry2Ab gene belonging to the local B. thuringiensis isolates used in this study has a length of 1902 bp and 633 aminoacid sequence. Besides, it has %99 homology with the cry2Ab gene of B. thuringiensis ly30 bacterium in literature. The sequenced cry2Ab gene was cloned to the pET-28a(+) expression vector and their proteins were expressed in Escherichia coli. The result was exposed to SDS-PAGE analysis and it was found that cry2Ab protein had the size of 70 kDa. The insecticidal activity of the cry2Ab protein produced was tested on Malacosoma neustria L. (Diptera: Lasiocampidae) and Rhagoletis cerasi L. (Diptera: Tephritidae). It was found that cry2Ab protein in 100 ?g concentration showed 73% insecticidal effect on M. neustria larvae and 75% insecticidal effect on R. cerasi larvae. 101

Bu çalışmada, geometrik analiz yöntemi kullanılarak tercihli ve tercihsiz beslenme deneyleriyle, polifaj bir tür olan Malacosoma neustria (L) larvalarının besin seçimi, gıda dengeleme mekanizması ve sekonder maddelerin larvaların gelişimleri üzerine etkisi araştırılmıştır. Tercihli ve tercihsiz beslenme deneylerinde son evredeki larvalar kullanılmıştır. Larvalara proteini fazla olan [C (p50:c10), G (p40:c20), F (p20:c10)], karbohidratı fazla olan [B (p10:c50), H (p20:c40), E (p10:c20)] ve eşit miktarda protein ve karbohidrat içeren besinler [A (P30:K30), (P15:K15)] verilmiştir. Proteini ve karbohidratı eşit olan A besinine % 0,125, % 0,25 ve % 0,5 oranında kinin ve nikotin, % 1,25, % 2,5 ve %5 oranında tanik asit eklenerek sekonder maddeli besinler hazırlanmıştır.Elde edilen sonuçlara göre, dişi ve erkek larvaların Protein (P):Karbohidrat (K) alım hedefleri farklıdır. Dişi bireylerin alım hedefi P 53,50 mg ve K 45,31 mg; erkek bireylerin alım hedefi ise P 23,49 mg ve K 19,53 mg olarak tespit edilmiştir. Dişi bireylerin gıda dengeleme mekanizması en yakın uzlaşma kuralına uygunluk gösterirken erkek bireylerin toplam hacim düzenleme kuralına göre beslenmelerini düzenledikleri belirlenmiştir.Aşırı miktarda protein veya karbohidrat içeren besinlerle beslenen larvaların pup protein miktarlarının ve pup ağırlıklarının azaldığı belirlenmiştir. Elde edilen veriler, dişi bireylerin erkek bireylerden daha fazla protein tükettiklerini ve biriktirdiklerini, sekonder maddelerin larvaların toplam besin tüketimini etkilediğini göstermiştir. Erkek larvaların düşük orandaki sekonder maddelere karşı (% 0,125 oranında kinin) duyarlılık gösterdikleri, dişi bireylerde aynı maddenin % 0,5 oranındaki miktarının caydırıcı olduğu belirlenmiştir. In this study, the food choice, the nutritional regulatory mechanism and the effects of secondary metabolits on the growth of the generalist caterpillars, Malacosoma neustria (L), were investigated by means of in choice and no-choice experiments, using Geometric Framework. In choice and no-choice experiments, newly moulted final instar larvae were provided protein-biased foods [C (p50:c10), G (p40:c20), F (p20:c10)], carbohydrate-biased foods [B (p10:c50), H (p20:c40), E (p10:c20)] and equal protein-carbohydrate ratio foods [A (P30:K30), (P15:K15)]. In addition, recepy foods were prepared by adding 0.125 %, 0.25 %, 0.5 % ratio of quinine and nicotine, 1.25 %, 2.5 % and 5 % ratio of tannic acid.According to the results, P:C of the intake targets were different for the male and the female larvae. As for, the intake target of female larvae was aimed P 53.50 mg and C 45,31 while the values determined as 31 P 23.49 mg and C 19.53 mg for male larvae. It was determined that nutritional regulation mechanism of the female larvae is suitable for closest distance rule, whereas the male larvae regulates feeding according to total volume rule.The results best support that pupal weight and pupal protein rate decreased with intake of foods containing exess protein or carbohydrate level. Our results indicated that female M. neustria larvae consumed and accumulated more protein than the males did.It was found that secondary compounds could affect the total food consumption in M. neustria larvae. The male individuals were sensitive for secondary metabolits especially 0.125 % level of quinine while 0.5 % was deterrent for female individuals. 78

Çalışmada, Malacosoma neustria nükleopolihedrovirüs (ManeNPV)'ün Malacosoma disstria Md203 hücre kültüründeki replikasyonu araştırıldı. Enfeksiyon, sitopatik etkiler, ektrasellüler virüs üretimi ve virüs çoğalma eğrisi, polihedral inklüzyon yapı oluşumu, viral DNA replikasyonu ve viral yapısal proteinlerin sentezi ile belirlendi.ManeNPV ile enfekte Md203 hücrelerinde sitopatik etkilerin (CPE) enfeksiyondan 24 saat sonra meydana geldiği görüldü. İlk polihedral inklüzyon yapı (PIB) oluşumu enfeksiyondan 36 saat sonra gözlendi. Enfeksiyondan 4 gün sonra hücrelerin çoğunun kültür kabının tabanından koptuğu tespit edildi. Hücrelerde, granülleşme, yuvarlaklaşma, parçalanma ve nukleusun kararması gibi tipik NPV sitopatik etkileri görüldü. Ekstrasellüler virüs (BV) üretiminde önemli miktarda artış enfeksiyondan 48 saat sonra gözlendi. Enfeksiyondan 96 saat sonra Md203 hücrelerinde 103 kat ekstrasellüler virüs üretildiği belirlendi. Viral DNA replikasyonunun enfeksiyondan 24 saat sonra başladığı slot blot hibridizasyonuyla belirlendi. Viral proteinlerin sentezi poliakrilamid jel elektroforezi (SDS-PAGE) ile belirlendi ve polihedrin proteini enfeksiyondan 36 saat sonra ortaya çıktığı tespit edildi.ManeNPV'nin konak spektrumunu belirlemek amacıyla Tn5, LdElta, Bm-5, Sf21, Se-1 ve Cf-124T hücreleri ManeNPV ile enfekte edildi. Hücrelerin virüse olan duyarlılıkları; CPE'lerin tespiti, ekstrasellüler virüs üretimi ve DNA replikasyonuyla belirlendi. Tn5 ve LdElta hücrelerinin tipik NPV CPE'lerini gösterdikleri ve ManeNPV için üretken hücre kültürleri oldukları tespit edildi. Her iki hücrede de üretilen BV miktarının enfeksiyondan 120 saat sonra 10 kat arttığı belirlendi. Aynı zamanda viral DNA replikasyonunun Tn5 ve Md203 hücrelerine göre LdElta hücrelerinde daha yüksek seviyede olduğu gözlendi.Tüm sonuçlar ManeNPV'nin Md203 hücre kültüründe verimli olarak üretildiğini gösterdi. Üretkenlik seviyesinin tipik üretken bakülovirüs enfeksiyonuna eşdeğer ve ManeNPV-Md203 sisteminin bilimsel ve ticari olarak kullanılma potansiyeline sahip olduğu tespit edildi.Anahtar Kelimeler:Bakülovirüs, ManeNPV, Md203 Hücre Kültürü, Virüs Replikasyonu, Konak Spektrumu In this study, replicational properties of Malacosoma neustria nucleopolyhedrovirus (ManeNPV) in Md203 cell line derived from Malacosoma disstria were investigated. Infection was determined by cytopathic effects (CPE), budded virus (BV) production and viral growth curve, polyhedral inclusion body (PIB) formation, viral DNA replication, and synthesis of viral structural proteins.CPEs were determined 24 h p.i. in ManeNPV infected Md203 cells. The first PIB formation was detected at 36 h p.i. It was determined that the most cells detached from the bottom of the culture plate four days post infection. Typical NPV cytopathic effects (CPE) like granulated and rounded cells, disruption and darkening were observed. Significent increase in BV production was observed 48 h p.i. 103 times extracellular virus production was determined in Md203 cells at 96 h p.i. The viral DNA replication which was started 24 h p.i. was identified by slot blot hibridization. Viral protein synthesis was determined by SDS-polyacrilamide gel electrophoresis (PAGE) and polyhedrine synthesis was observed at 36 h p.i. in Md203 cells.To determine the host range of ManeNPV Tn5, LdElta, Bm-5, Sf21, Se-1 and Cf-124T cell lines were infected with ManeNPV. The susceptibility of the cells to the virus were determined by CPE?s, extracellular virus production and DNA replication. It was observed that Tn5 and LdElta cells showed typical NPV CPE?s and they were determined as productive cell lines for ManeNPV. Extracellular virus production at both cell lines was increased 10 times 120 h.p.i. Also it was observed that viral DNA replication in LdElta was at high level compared to Tn5 and Md203 cell lines.All these results showed that ManeNPV is produced efficiently at Md203 cell culture. This productivity level is observed as equivalent to typical productive baculovirus infection and it is determined that ManeNPV-Md203 system has scientific and commercial usage potential.Key Words: Baculovirus, ManeNPV, Md203 Cell Line, Virus Replication, Host Range 81

In the present contribution seven species of butterflies on oaks (Quercus spp.) are presented: gypsy moath (Lymantria dispar), European oak leaf roller (Tortrix viridana), winter moth (Operophthera brumata), mottled umber moth (Erannis defoliaria), oak processionary moth (Thaumetopoea processionea), browntail moth (Euproctis chrysorrhoea) and lackey moth (Malacosoma neustria).L. dispar and T. viridana have appeared several times in the sub-mediterranean and sub-pannonic areas of Slovenia and have caused damage. The next two species cause less significant defoliation mostly in natural pedunculate oak (Quercus robur) stands in Prekmurje and in the Krakovo forest as well as in thermophyllic oak stands in the coastal region. T. processionea, E. chrysorrhoea and M. neustria cause damage on oaks sporadically. Researchers state that butterflies which defoliate forests are appearing more frequently in Europe and are starting to cause extensive damagein forests again. Recently, in Slovenia the situation in oaks forests isthe same. A short description of the insects' morphology, bionomy, a description of damage, possible misidentifications, hosts, their most important natural enemies, causes of beginning or continuation of their outbreaks and their threat to forests are given. Prikazujemo sedem vrst metuljev, ki obžirajo hrastove liste: gobar (Lymantria dispar), zeleni hrastov zavijač (Tortrix viridana), mali zimski pedic (Operophthera brumata), veliki zimski pedic (Erannis defoliaria), hrastov sprevodni prelec (Thaumetopoea processionea), zlatoritka (Euproctis chrysorrhoea) in prstaničar (Malacosoma neustria). L. dispar in T. viridana sta se v submediteranskem in predpanonskem območju Slovenije pojavljala večkrat v močnejših gradacijah in povzročala škode. Naslednje dve vrsti pri nas povzročata manjše golobrste predvsem v naravnih sestojih doba v Prekmurju in Krakovskem gozdu ter v sestojih termofilnih hrastov v primorskem območju. T. processionea, E. chrysorrhoea ter M. neustria sporadično povzročajo poškodbe listja hrastov. Ugotavljajo, da se metulji defoliatorji pojavljajo v evropskih gozdovih vse pogosteje in začenjajo ponovno povzročati velike škode.Tudi pri nas ugotavljamo v zadnjih letih ponavljajoče se golobrste v hrastovih sestojih. Na kratko je prikazana morfologija, bionomija, opis poškodb, morebitne zamenjave, gostitelji, najpomembnejši naravni sovražniki inza nekatere omenjene vrste tudi vzroki za nastanek in nadaljevanje gradacij ter ogroženost sestojev.

Tez (doktora) -- Ondokuz Mayıs Üniversitesi, 2008 Libra Kayıt No: 64995 Bu çalışmada, geometrik analiz yöntemi kullanılarak tercihli ve tercihsiz beslenme deneyleriyle, polifaj bir tür olan Malacosoma neustria (L) larvalarının besin seçimi, gıda dengeleme mekanizması ve sekonder maddelerin larvaların gelişimleri üzerine etkisi araştırılmıştır. Tercihli ve tercihsiz beslenme deneylerinde son evredeki larvalar kullanılmıştır. Larvalara proteini fazla olan [C (p50:c10), G (p40:c20), F (p20:c10)], karbohidratı fazla olan [B (p10:c50), H (p20:c40), E (p10:c20)] ve eşit miktarda protein ve karbohidrat içeren besinler [A (P30:K30), (P15:K15)] verilmiştir. Proteini ve karbohidratı eşit olan A besinine % 0,125, % 0,25 ve % 0,5 oranında kinin ve nikotin, % 1,25, % 2,5 ve %5 oranında tanik asit eklenerek sekonder maddeli besinler hazırlanmıştır.Elde edilen sonuçlara göre, dişi ve erkek larvaların Protein (P):Karbohidrat (K) alım hedefleri farklıdır. Dişi bireylerin alım hedefi P 53,50 mg ve K 45,31 mg; erkek bireylerin alım hedefi ise P 23,49 mg ve K 19,53 mg olarak tespit edilmiştir. Dişi bireylerin gıda dengeleme mekanizması en yakın uzlaşma kuralına uygunluk gösterirken erkek bireylerin toplam hacim düzenleme kuralına göre beslenmelerini düzenledikleri belirlenmiştir. Aşırı miktarda protein veya karbohidrat içeren besinlerle beslenen larvaların pup protein miktarlarının ve pup ağırlıklarının azaldığı belirlenmiştir. Elde edilen veriler, dişi bireylerin erkek bireylerden daha fazla protein tükettiklerini ve biriktirdiklerini, sekonder maddelerin larvaların toplam besin tüketimini etkilediğini göstermiştir. Erkek larvaların düşük orandaki sekonder maddelere karşı (% 0,125 oranında kinin) duyarlılık gösterdikleri, dişi bireylerde aynı maddenin % 0,5 oranındaki miktarının caydırıcı olduğu belirlenmiştir.

Malacosoma neustria (Lepidoptera; Lasiocampidae) önemli tarımsal zararlılardan biridir. Bu zararlı ile mücadelede kullanılan kimyasal insektisitlerin çevre üzerinde zararlı etkileri bulunmaktadır. Kimyasal ilaçların yan etkilerinin keşfedilmesi, bilim adamlarını daha etkili ve daha güvenli bir mücadele yöntemi geliştirmeye sevk etmiştir. Bu tezde, Malacosoma neustria'da patojenik olan bir virüsün morfolojik, ultrastrüktürel, moleküler karakterizasyonu ve biyolojik mücadelede kullanılmak üzere konak hassasiyeti ve taşınımı çalışıldı. Viral infeksiyon Gümüşhane-Köse yöresinden toplanan M neustria larvalarında tespit edildi. Yapılan morfolojik, ultrastrüktürel, ve moleküler çalışmalar sonucunda tespit edilen virüsün Baculoviridae familyasından bir nükleopolihedrovirus olduğu belirlendi. Virusa ait PIB yapılarının 1,64±0,52 um çapında olduğu belirlendi. Polihedralann enine kesitinde her bir virionun 1 ile 18 adet arasında değişen sayılarda nükleokapsid içerdiği gözlendi. Bu nükleokapsidlerin 240 x 35 nm boyutlarında olduğu tespit edildi. Virus DNA'sının EcöBJ, BamHL ve HindSl restriksiyon enzim analizleri, bu çalışmada tespit edilen virüsün daha önce izole edilen ManeMNPVlerden farklı bir restriksiyon enzim profiline sahip olduğunu ortaya çıkardı. Polihedrin geni sekans analizleri sonucunda diğer ManeMNPV orijinli polihedrin genleriyle önemli farklılıkların olduğu belirlendi. Virüsün infeksiyon özelliğini belirlemek için yapılan çalışmalar birinci ve ikinci instar M. neustria larvaları üzerinde virüsün oldukça etkili olduğunu gösterdi. Konak spektrumunu belirlemek için virus Gypsonoma deaîbana, Cydia pomonella (Lep.Tortriciidae), Euproctis chrysorrhoea (Lep; Lymantriidae), Pieris brassicae (Lep; Pieridae), Yponomeuta malineüus (Lep; Yponomeutiaae) ve Hyphantria cunea (Lep; Arctiidae) larvalarına karşı test edildi. Elde edilen sonuçlar bu virüsün konak spektrumunun çok dar olduğunu gösterdi. Horizontal infeksiyonun yüksek oranda gerçekleştiği tespit edildi. Yapılan çalışmalar bu izolatın M. neustria ile biyolojik mücadelede etkili bir ajan olarak kullanılabileceğini göstermektedir. Anahtar Kelimeler: Malacosoma neustria, Nükleopolihedrovirus, Biyolojik Mücadele, Baculovirus VI Isolation and Characterization of Virus from Malacosoma neustria (Lepidoptera: Lasiocampidae) and Its Potential Use in Microbial Control Malacosoma neustria (Lepidoptera; Lasiocampidae) is one of the important agricultural pests. Chemical pesticides utilized to control this pest have hazardous effect on the environment. Recent concern on the hazardous effect of chemical pesticides in the environment made scientists consider finding more effective and safer control agents. In this study, morphological, ultrastructural and molecular characterization, transmission and host spectrum of a viral pathogen of M. neustria were carried out for biological control. Viral infection was only observed in the populations of Malacosoma neustria collected in Gümüşhane. Morphological, ultrastructural and molecular studies showed that the virus is a nucleopoyhedrovirus. The dimension of polyhedra was 1.6410.52 urn. In cross-section of polyhedrae it was visible that virions contain 1 to 18 nucleocapsids per virion. The average size of particles was 240 x 35 nm. Restriction endonuclease analysis of the viral DNA by EcdRL, BamHL and HindBI enzymes and sequence analysis of polyhedrin gene showed that there is significant differences between this isolate and earlier isolates. The biossays carried out to determine the infectivity of the virus showed that it is very effective on the first-second instar larvae of M neustria. On the other hand, to detect host specificity, the isolated virus was tested against Gypsonoma dealbana, Cydia pomonella (Lep;Tortriciidae), Euproctis chrysorrhoea {Lep; Lymantriidae), Pieris brassicae (Lep; Pieridae), Yponomeuta malinellus {Lep; Yponomeutidae) and Hyphantria cunea (Lep; Arctiidae), This result indicated the host spectrum of MnNPV is narrow. Horizontal transmission of ManeMNPV is very high. The result of our study show that Turkish isolate of Malacosoma neustria nucleopoh/hedrovirus is very promissive for biological control of M. neustria. Key Words: Malacosoma neustria, Nucleopolyhedrovirus, Biological Control, Baculovirus VII 83

İn this study carried out in the years of 1981 -1983, in Ankara, Kırıkkale and Afyon provinces, and egg parasites of Lackey moth, MalacosomaneustriaL. (Lepidoptera:Lasiocampidae), their distribution and natural effectiveness were invesigated. Forthis purpose, hibernated eggs of M.neustria'vr\ March and April, new laid eggs also in July and September were collected and incubated in parasite obtaining boxes in a room maintained at 25 ± 2°C and 60-70 % RH. At the end this study seven parasite species, Trichogramma 6u/ıtf/Kostadinov (Hym:Trichogrammatidae), Te/enomusfaeviuscu/usRakz. (Hym.rScelionidae), Ooencyrtusspp., O.neustriaMercet, O.tardusRatz., 0./77as//Mercet(Hym.: Encyrtidae) and Anastatus bifasciatus Fonsc. (Hym.:Eupelmidae) were determined from the eggs of Lackey moth (Fig. 1 -9). T.bu/utiis a new species for the world and was determined firstly in this study in Türkiye. This species vvereobtained only in August collected from new laid Lackey moth eggs. T./aevuiscufuswere obtained only in March and April collected from hibernated eggs, Ooencyrtusspp. and A bifasciatus were from hibernated and also new laid eggs., 1981 -1983 Yıllarındayapılan bu çalışmada, dahaçok Ankara ili olmak üzere Kırıkkale ve Afyon illerinde, Yüzük kelebeği {MalacosomaneustriaL.yri\n yumurta parazitoidleri, bulundukları yerler ve doğadaki etkinlikleri araştırılmıştır. Bunun için, kışlamış yumurtalar Mart-Nisan, yeni bırakılmış yumurtalar daTemmuz-Eylül aylarında örneklenerek parazitoid çıkartma kutularında kültüre alınmıştır. AraştırmasonundaYüzükkelebeğiyumurtalarında: TrichogrammabulutiKostadinov, Tefenomus laewüscu/usRa\.z., Ooencyrtus sp., O. neustriae (Mercet), O. tardus(Ratz.), O. mas/7 (Mercet) ve Anastatus bifasctatusF onsc. olmak üzere 7 parazitoid türü tespit edilmiştir. Yeni bir tür olan T. buluti, sadece Ağustos ayında toplanan yeni bırakılmış yumurtalardan, T. taev/üscu/ussaöece Mart ve Nisan aylarında örneklenen kışlamış yumurtalardan, Ooencyrtus spp. ve A bifasciatushem kışlamış, hemde yeni bırakılmış yumurtalardan elde edilmiştir. Yukarıda adı geçen illerden, 3 yıl içinde toplam 1004 adet Yüzük kelebeği yumurta kümesi (yaklaşık 271.880 adet yumurta) toplanarak kültüre alınmış ve bunlardan 12.594 adet T. laeviusculüs, 6.194 adet Ooencyrtus spp., 249 adet A. bifasciatus ve 6 adet T. bu/utie\6eedilmiştir. Yumurtalardaki doğal parazitlenme oranı, 1981'yılında ortalama % 18.71 (%0.0-39.60), 1982'de ise %22.57(%11.89-56.65) olarakbulunmuştur. Bu parazitoidlerden en yaygın ve etkin olanı T. laeviuscui'us olup, bunu Ooencyrtus spp. izlemektedir. A. bifasciatusve T. bulutitm fazla yaygın ve etkin olmadıkları görülmüştür.

The relative susceptibility of third- and fourth-instar Malacosoma neustria larvae to a nucleopolyhedrosis virus was studied by bioassay in the laboratory. Larval mortality increased with increased dosage, whereas the dosage-incubation relationship was reversed. Larval age inversely affected mortality and incubation. The computed LD 50 's for third- and fourth-instar larvae were 1,405 and 12,320 polyhedral inclusion bodies (PIB's)/larva. The median lethal doses calculated as number of PIB's/mg body weight showed that third-instar larvae were only twice more susceptible to virus than fourths. The LT 50 values for 3 × 10 5 , 3 × 10 4 , and 3 × 10 3 PIB's/larva were 5.9, 6.58, and 8.15 days, respectively, in third-instar assay; the corresponding figures for the two highest concentrations were 9.3 and 10.7 days in the older larvae. Lethally infected individuals died after one or, exceptionally, two molts. No correlation was found between pupal weight or adult emergence of survivors and the virus dose administered to the larvae.

The results of the creation of new expressive system on Malacosoma neustria nuclear polyhedrosis virus and cell line originated from Antheraea pernyi tissues was demonstrated. The expression of bacterial beta-galactosidase-coding gene was analyzed in this system.

Malacosoma neustria testacea accumulates crystals of Ca oxalate monohydrate in the Malpighian tubes abundantly. The mode of accumulation in the fifth instar larvae was followed by estimating the calcium content of the Malpighian tubes. To determine the incorporation of the radioactivity into Ca oxalate, glucose-U- 14 C, Na citrate-1,5- 14 C, glycine-1,2- 14 C, Na oxalate-1,2- 14 C, and Ca oxalate-1,2- 14 C were administered by mouth or by injection into the larvae. The results revealed that most of the oxalic acid in the crystals comes from dietary oxalic acid. A minor pathway of oxalic acid formation from glycine is also indicated.

Составлена физическая карта кольцевого генома вируса ядерного полиэдроза М. neustria. Локали­зованы сайты для рестриктаз BamHI, KpnI, PstI. На карте локализован ген полиэдрина. Определен размер генома вируса, составляющий 139 тыс. п. н. Складено фізичну карту кільцевого геному вірусу ядерного поліедрозу М. neustria. Локалізовано сайти для рестриктаз ВаmНІ, KрnІ, PstI. На карті локалізовано ген поліедрину. Визначено розмір вірусного геному, що складає 139 тис. п. н. A physical map of the circular M. neustria nuclear polyhedrosis virus genome was constructed. The complete order of BamHI, KpnI and PutI restriction enzyme sites was determined. The polyhedrin gene was localized on the map. The size of the viral DNA was calculated to be about 139 kbp.

Восстановленный и карбоксиметилированный полиэдрин расщепляли трипсином. Из триптического гидролизата методом гель-фильтрования, высоковольтного электрофореза и хроматографии на бумаге выделено 48 пептидов. Определено их строение или амино- кислотный состав. 30 пептидов с уникальными аминокислотными последовательностями насчитывают 246 остатков аминокислот. Обсуждаются особенности взаимодействия протеазы полиэдров ВЯП М. neustria с полиэдрином. Відновлений та карбоксиметильований поліедрин розщепляли трипсином. Із триптичного гідролізату методом гель-фільтрування, високовольтового електрофорезу і хроматографії на папері виділено 48; пептидів. Визначено їх побудову або амінокислотний склад. 30 пептидів з унікальними амінокислотними послідовностями нараховують 246 залишків амінокислот. Обговорюються особливості взаємодії протеази поліедрів ВЯП М. neustria з поліедрином. The polyhedrin of the M. neustria nuclear polyhedrosis virus (NPV) was reduced and carboxymethylated and subjected to tryptic digestion was separated by gel filtration and paper high-voltage electrophoresis and chromatography. 48 peptides were isolated and the structure or amino acid composition of them was determined. 30 peptides have non-overlapping sequences comparising 246 amino acid residues. The peculiarities of the interaction of the M. neustria NPV polyhedral protease with the polyhedrin of that are discussed.

Ген β-галактозидазы Escherichia coli встроен в рамке считывания в ген полиэдрина вируса ядерного полиэдроза (ВЯП) кольчатого шелкопряда. Котрансфекцией рекомбинантной плазмиды pMPEA-β-gal с ДНК ВЯП M. neustria дикого типа связанный ген был встроен в геном ВЯП M. neustria. Инфицирование культуры клеток тутового шелкопряда Anteraea pemi (MCAp-I) полученным рекомбинантным ВЯП М. neusiria-gal3 выявило высокий уровень экспрессии связанного белка полиэдрин-β-галактозидаза. Синтеза полиэдрина в этих клетках не обнаружено. Ген β-галактозидази Escherichia coli вбудовано в рамці зчитування у ген поліедрину вірусу ядерного поліедрозу (ВЯП) кільчастого шовкопряда. Котрансфекцією рекомбінантної плазміди pMPEA-β-gal з ДНК ВЯП M. neustria дикого типу зв’язаний ген було вбудовано в геном ВЯП M. neustria. Інфікування культури клітин тутового шовкопряда Anteraea pemi (MCAp-I) отриманим рекомбінантним ВЯП М. neusiria-gal3 виявило високий рівень експресії зв’язаного білка поліедрин-β-галактозидаза. Синтезу поліедрину у цих клітинах не виявлено. The β-galactosidase gene of E. coli was inserted in phase with coding sequence of the Malacoscma neustria nuclear polyhedrosis virus (MnNPV) polyhedrin gene. The fusion gene was inserted into the MnNPV genome by cotransfection of recombinant plasmid pMPEA-3 gal and wild-type MnNPV DNA. Infection of Antheraea pernyi cells (MCAp-1) by the resulting recombinant MnNPV gal 3 has shown high level of expression of polyhedrin-β-galactosidase fusion protein, no synthesis of polyhedrin being revealed.