Search

CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Brassica oleracea consiste em uma cultura de grande importância econômica e alimentícia, sendo a brássica mais cultivada no Brasil. Dentre as doenças que afetam esta cultura destacam-se a podridão negra e o mofo branco. Neste trabalho foram desenvolvidas estratégias para o controle dessas doenças utilizando silenciamento gênico associado ou não a nanoestruturas. Para o controle da podridão negra foi realizada a avaliação da expressão de genes envolvidos na patogenicidade de Xcc em sistema in vitro e in vivo. Foi observado que a presença de extrato vegetal no sistema in vitro resultou em um perfil de expressão similar ao in vivo, sendo eficaz no estudo de mecanismos de patogenicidade em Xanthomonas. Cinco dos genes avaliados foram selecionados como alvos para o silenciamento gênico. Para avaliar a ocorrência do silenciamento de genes de Xanthomonas por HIGS, bactérias foram transformadas com o gene uidA e inoculadas em plantas transgênicas capazes de silenciar esse gene. Os resultados indicaram a ocorrência do silenciamento gênico nas bactérias. Visando obter um método para o carreamento de ácidos nucleicos para a célula bacteriana, foi desenvolvida uma nanoestrutura avaliada em Escherichia coli. O vetor pPM7g contendo o gene gfp foi complexado com lipossomos. Os ensaios mostraram que houve carreamento de ácidos nucleicos ao interior da célula bacteriana por meio das nanoestruturas desenvolvidas. A metodologia de HIGS também foi utilizada para o controle do mofo branco. Foram selecionados três genes efetores como alvos para o silenciamento gênico. Plantas de Arabidopsis thaliana foram transformadas e foram obtidas três linhagens transgênicas para cada gene. Os resultados obtidos neste trabalho mostraram que as estratégias utilizadas tem grande potencial para o controle de fitopatógenos, podendo gerar produtos biotecnológicos eficientes no controle de doenças em plantas. Brassica oleracea consists in a culture of high economic and food importance, being the most cultivated brassica in Brazil. Among diseases that affect this culture, we can highlight black rot and the white mold. In this work, strategies for the control of these diseases were developed using gene silencing associated or not with nanostructures. In order to control black rot, the expression of genes involved in Xcc pathogenicity using in vitro and in vivo systems was evaluated. The presence of plant extract in the in vitro system resulted in an expression profile similar to that observed in vivo, being effective in the study of pathogenicity mechanisms in Xanthomonas. Five of these genes were selected as targets for gene silencing. To evaluate the occurrence of gene silencing by HIGS in Xanthomonas, bacteria were transformed with the uidA gene and inoculated into transgenic plants able to silence this gene. The results indicated the occurrence of gene silencing in bacteria. Furthermore, aiming to obtain a method for the nucleic acid delivery into the bacterial cell, we developed a nanostructure evaluated in Escherichia coli. The pPM7g vector containing the gfp gene was complexed with liposomes. The assays showed the occurrence of transport of nucleic acids into the bacterial cell through the nanostructures developed. In order to control white mold, three effector genes were selected as targets using HIGS. Arabidopsis thaliana plants were transformed by floral dip and 3 transgenic lines were obtained for each gene. The results obtained in this work showed that the strategies used have a high potential to control phytopathogens, and can generate biotechnological products efficient in the control of plant diseases.