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CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior A esporotricose é uma zoonose fúngica causada por espécies patogênicas do gênero Sporothrix. A rápida progressão da doença no estado de Minas Gerais tem se tornado um crescente problema de saúde pública. Os estudos moleculares na região ainda são limitados. Neste contexto, o objetivo deste trabalho foi realizar a caracterização molecular de Sporothrix spp. circulantes, isolados de amostras clínicas de gatos e cães coletadas durante a epidemia de esporotricose na região metropolitana de Belo Horizonte - Minas Gerais. Para isso, foi realizado o estudo dos casos positivos confirmados por critério laboratorial (n= 756) ao longo de 2017 a 2021, bem como a determinação por métodos moleculares baseados na análise do gene da Calmodulina das espécies patogênicas e suas relações filogenéticas. Foi constatado o aumento no número de casos de novembro de 2017 a julho de 2021 na região, sendo os gatos os mais afetados. S. brasiliensis foi detectada em 100% dos isolados de gatos e cães. Considerando a análise filogenética, todos os isolados de S. brasiliensis foram agrupados em um clado monofilético. Os dados obtidos nas análises filogenética e haplotípica demonstram que os isolados mineiros compartilharam o haplótipo originado no surto de longa duração de esporotricose transmitida por gatos no estado do Rio de Janeiro, porém, com uma contribuição secundária de genótipos circulantes em outros surtos em diferentes regiões do país. Este é o primeiro estudo que realiza a caracterização molecular de um grande número de isolados clínicos de animais em uma área epidêmica no estado de Minas Gerais. Os achados evidenciam a circulação de diferentes genótipos de S. brasiliensis associadas a esporotricose em gatos e cães na região metropolitana de Belo Horizonte. Novos estudos são necessários para estimar a prevalência das espécies de Sporothrix no estado de Minas Gerais e as relações envolvidas na evolução da doença em áreas urbanas. Técnicas para rastrear diferenças genéticas no genoma dos genótipos podem contribuir para uma melhor compreensão epidemiológica do agente causador da esporotricose zoonótica e na implementação de ações de controle e prevenção da doença no estado.

INTRODUCTION: The treatment of human and animal sporotrichosis is often performed with antifungal agents; however, the emergence of antifungal-resistant strains of Sporothrix species has been reported. We aimed to discuss the ability of Sporothrix species in developing resistance to the conventional antifungals and mechanisms for this. METHODOLOGY: Published data on databases (PubMed, Science Direct, Google Scholar) were investigated using a combination of keywords from 2008 to 2019 by the StArt tool. RESULTS: The minimal inhibitory concentrations values based on the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) from eight references were classified according to the epidemiological cutoff values in wild-type or non-wild-type strains. In this way, non-wild-type S. schenckii and, mainly, S. brasiliensis isolates were recognized on itraconazole, amphotericin B, terbinafine, and voriconazole, which are strains that deserve more attention toward antifungal control, with a probable risk of mutation to antifungal resistance. Among the few reviewed studied on antifungal resistance, the melanin production capacity (DHN-melanin, L-DOPA melanin, and pyomelanin), the low genetic diversity due to the abnormal number of chromosomes, and the mutation in cytochrome P450 are some of the factors for developing resistance mechanism. CONCLUSIONS: The emergence of Sporothrix species with in vitro antifungal resistance was evidenced and the possible mechanisms for resistance development may be due to the melanin production capacity, genetic diversity and mutations in cytochrome P450. Further studies should be carried out targeting gene expression for the development of antifungal resistance on Sporothrix species in order to prospect new therapeutic targets for human and veterinary use.

Introduction: Parinaud's Oculoglandular Syndrome is a rare granulomatous conjunctivitis, accompanied by regional lymphadenopathy. It is caused by varied etiologies, one of which is sporotrichosis, which is a rare cause and little reported in the literature. Objective: To report a case of Parinaud's Oculoglandular Syndrome caused by atypical sporotrichosis, associated with dacryocystitis, attended by an emergency eye service. Methods: The study was carried out from the analysis of the medical record, along with the anamnesis, ophthalmological examination and complementary examinations of the patient. Bibliographic research was carried out with publications of up to twenty years for theoretical and methodological foundations. Results: It was possible to identify some of the most common changes in Parinaud's Oculoglandular Syndrome due to sporotrichosis. Such changes consist of hyperemic nodules in the tarsal or bulbar conjunctiva, related with adenopathy, hardened or fibroelastic, in submandibular and / or preauricular regions. Conclusion: Sporotrichosis is a disease with an effective treatment if readily identified and should always be considered as a possible cause of Parinaud's Oculoglandular Syndrome. This case can be a reference for professionals in the field, both in diagnosis and in the management of patients with such syndromic diagnosis, since it is a rare and rarely seen case., Introducción: La síndrome oculoglandular de Parinaud es una conjuntivitis granulomatosa rara, acompañada de adenopatías regionales. Es causada por diversas etiologías, una de las cuales es la esporotricosis, que es una causa rara y poco reportada en la literatura. Objetivo: Reportar un caso de Síndrome Oculoglandular de Parinaud por esporotricosis atípica, asociado a dacriocistitis, atendido por un servicio oftalmológico de emergencia. Métodos: El estudio se realizó a partir de análisis de la historia clínica, junto con la anamnesis, examen oftalmológico y exámenes complementarios de la paciente. La investigación bibliográfica se realizó con publicaciones de hasta veinte años por razones teóricas y metodológicas. Resultados: Se pudieron identificar algunos de los cambios más frecuentes en el Síndrome Oculoglandular de Parinaud por esporotricosis, consistente en nódulos hiperémicos en la conjuntiva tarsal o bulbar, relacionados con adenopatías, endurecidas o fibroelásticas, en regiones submandibulares y / o preauriculares. Conclusión: La esporotricosis es una enfermedad de tratamiento eficaz si se identifica fácilmente y siempre se debe considerar como una posible causa del síndrome oculoglandular de Parinaud. Este caso puede ser una referencia para los profesionales del campo, tanto en el diagnóstico como en el manejo de pacientes con dicho diagnóstico sindrómico, ya que es un caso raro y poco visto., Introdução: A Síndrome Oculoglandular de Parinaud é uma conjuntivite granulomatosa rara, acompanhada de linfadenopatia regional. É causada por etiologias variadas, sendo uma delas a esporotricose, que é uma causa rara e pouco relatada na literatura. Objetivo: Relatar um caso da Síndrome Oculoglandular de Parinaud causada por esporotricose atípica, associada a dacriocistite, atendida por um serviço oftalmológico de urgência. Métodos: O estudo foi realizado a partir da análise do prontuário, juntamente com a anamnese, exame oftalmológico e exames complementares da paciente. Foi realizada pesquisa bibliográfica com publicações de até 20 anos para fundamentação teórico-metodológica. Resultados: Foi possível identificar algumas das alterações mais comuns na Síndrome Oculoglandular de Parinaud por esporotricose, consistindo em nódulos hiperémicos na conjuntiva tarsal ou bulbar, relacionados à adenopatia endurecida ou fibroelástica, nas regiões submandibular e/ ou pré-auricular. Conclusão: A esporotricose é uma doença de tratamento eficiente se identificada prontamente e deve ser sempre considerada como uma possível causa da Síndrome Oculoglandular de Parinaud. Este caso pode ser referência para profissionais da área, tanto como no diagnóstico quanto no manejo do paciente com tal diagnóstico sindrômico, já que é um caso raro e pouco visto.

Benzodiazepines are seven-membered N-heterocyclic compounds that have a versatile structure, easy preparation and great pharmacological potential. In this sense, the present work describes the synthesis of 2,3-dihydro-1H-1,5-benzodiazepines for further evaluation in in vitro assays of antioxidant activity and antifungal activity, as well as in silico assays to investigate the clinical potential of the compounds. Among the synthesized analogues, the compounds Bdz2, Bdz5/5’, Bdz6/6’, Bdz7 and Bdz8/8’ are new. In an initial step, the optimal conditions for the synthesis of benzodiazepines in a reaction catalyzed by trifluoroacetic acid were found, which allowed the obtainment of compounds derived from substituted acetophenones (R2 = 3-OH, 4-OH and 4-Cl-3-NO2) in good to excellent yields (87 to 95%). The best reaction conditions were assigned to polar protic solvents (MeOH, EtOH) at room temperature. All compounds were characterized by FT-IR, 1H and 13C NMR, MS and melting point. In a later stage, when investigating the use of heterogeneous catalysts based on core@shell NPMs, a performance inferior to that presented by the synthesis via homogeneous catalysis was observed, having reached a maximum yield of only 31% for the classic benzodiazepine Bdz1 in reaction carried out under heating in a microwave reactor at 120 ºC. In the evaluation of antioxidant activity, the best results were presented by the hydroxylated derivatives Bdz3 (R1 = H; R2 = 4-OH) and Bdz6/6' (R1 = CH3; R2 = 4-OH), which in the CAT assay showed activity antioxidant superior to BHT and ascorbic acid standards. In the evaluation of antifungal activity, carried out in the first place for fungal species of the genus Sporothrix, the hydroxylated compounds showed better performance, with emphasis on the mixture of unprecedented regioisomers Bdz6/6', containing the methyl group in R1, with MIC values and CFM, which indicated an inhibitory action superior to that of the reference drug fluconazole. From the in silico study it was observed that all compounds had better oral bioavailability and lower toxicity than the commercial antifungal itraconazole, and the hydroxylated compounds had the best aqueous solubility and cell permeability profile. Overall, based on the results of in vitro and in silico assays, Bdz6/6’ proved to be a potential new antifungal candidate, administered orally. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES As benzodiazepinas são compostos N-heterocíclicos de sete membros que dispõem de uma estrutura versátil, de fácil preparação e com grande potencial farmacológico. Neste sentido, no presente trabalho foi descrita a síntese de 2,3-diidro-1H-1,5-benzodiazepinas para posterior avaliação em ensaios in vitro de atividade antioxidante e atividade antifúngica, bem como em ensaios in silico para a investigação do potencial clínico dos compostos. Dentre os análogos sintetizados, os compostos Bdz2, Bdz5/5’, Bdz6/6’, Bdz7 e Bdz8/8’ são inéditos. Em uma etapa inicial, foram encontradas as condições ótimas para a síntese das benzodiazepinas em reação catalisada pelo ácido trifluoroacético, as quais permitiram a obtenção dos compostos derivados de acetofenonas substituídas (R2 = 3-OH, 4-OH e 4-Cl-3-NO2) em rendimentos bons a excelentes (87 a 95 %). As melhores condições reacionais foram atribuídas aos solventes polares próticos (MeOH, EtOH) à temperature ambiente. Todos os compostos foram caracterizados por IV-FT, RMN 1H e 13C, EM e ponto de fusão. Em uma etapa posterior, ao investigar o uso de catalisadores heterogêneos a base de NPMs do tipo core@shell, observou se um desempenho inferior ao apresentado pela síntese via catálise homogênea, tendo sido alcançado um rendimento máximo de apenas 31 % para a benzodiazepina clássica Bdz1 em reação realizada sob aquecimento em reator de micro-ondas a 120 ºC. Na avaliação da atividade antioxidante, os melhores resultados foram apresentados pelos derivados hidroxilados Bdz3 (R1 = H; R2 = 4-OH) e Bdz6/6’ (R1 = CH3; R2 = 4-OH), que no ensaio de CAT exibiram atividade antioxidante superior aos padrões BHT e ácido ascórbico. Na avaliação da atividade antifúngica, realizada de forma inaugural para as espécies de fungos do gênero Sporothrix, os compostos hidroxilados apresentaram melhor desempenho, com destaque para a mistura dos regioisômeros inéditos Bdz6/6’, contendo o grupo metila em R1, com valores de CIM e CFM que indicaram ação inibitória superior a do fármaco de referência fluconazol. A partir da realização do estudo in silico foi observado que todos os compostos apresentaram melhor biodisponibilidade oral e menor toxicidade que o antifúngico comercial itraconazol, e os compostos hidroxilados apresentaram o melhor perfil de solubilidade aquosa e permeabilidade celular. De forma geral, com base nos resultados dos ensaios in vitro e in silico, Bdz6/6’ mostrou ser um novo candidato a antifúngico em potencial, administrado por via oral.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq A esporotricose é uma micose subcutânea de distribuição mundial causada por Sporothrix spp. No passado, essa infecção estava associada à caçada de tatu, horticultores, garimpeiros e jardineiros, sendo considerada uma micose de implantação adquirida por lesão através de plantas e material vegetal em decomposição. No entanto, desde o final dos anos 90, é considerada uma doença zoonótica no Brasil. No presente estudo, relata-se uma série de casos de 121 pacientes com esporotricose transmitida por gatos no Nordeste do Brasil. Os dados demográficos, clínicos e a duração do tratamento do paciente foram registrados. Além disso, foi realizado um exame micológico com posterior confirmação da identificação das espécies por PCR. Cento e vinte e dois pacientes foram diagnosticados com esporotricose subcutânea de outubro de 2016 a dezembro de 2019, enquanto a PCR revelou que 71 deles eram causados por S. brasiliensis. A maioria dos indivíduos pertencia ao sexo feminino (n = 86; 70,5%). A idade dos pacientes variou de 5 a 87 anos. As formas clínicas encontradas foram: linfocutânea (58,2%) e cutânea fixa (39,4%). Interessantemente, 115 pacientes relataram contato prévio com gatos com diagnóstico de esporotricose. Os pacientes foram tratados com sucesso com itraconazol e iodeto de potássio. Este estudo traz contribuições importantes para a investigação da disseminação da esporotricose subcutânea transmitida por gatos no Brasil, especificamente para a região Nordeste de um país de porte continental. Também ajudará os clínicos a estarem cientes da existência e da importância de diagnosticar com precisão a esporotricose e tratar pacientes com essa doença infecciosa na região de menor renda do Brasil. Sporotrichosis is a worldwide subcutaneous mycosis caused by Sporothrix spp. In the past, this infection was associated with armadillo hunting, horticulturists, miners, and gardeners, being considered an implantation mycosis acquired by plant debris injury. Nevertheless, since the late nineties, it has been considered a zoonotic disease in Brazil. Here we report a case series of 121 patients with cat-transmitted sporotrichosis seen in Northeast Brazil. Patient’s demographic, clinical data, and length of treatment were recorded. In addition, a mycological examination and further PCR confirmation of species identification were performed. One hundred and twenty two patients were diagnosed with subcutaneous sporotrichosis from October 2016 to December 2019, while PCR revealed that 71 of them were due to S. brasiliensis. The majority of the individuals were female (n = 86; 70.5%). Patient’s age ranged from 5 to 87 years old. The clinical forms found were lymphocutaneous (58.2%) and fixed cutaneous (39.4%). Interestingly, 115 patients reported previous contact with cats diagnosed with sporotrichosis. Patients were successfully treated with itraconazole and potassium iodide. Our study adds important contributions for the investigation of the spread of cat-transmitted subcutaneous sporotrichosis in Brazil, specifically towards the Northeast region of a continental-size country. It will also help clinicians to be aware of the existence and importance to accurately diagnose sporotrichosis and treat patients with this infectious disease in the lowest income region of Brazil.

A esporotricose é uma dermatozoonose causada por fungos patogênicos dimórficos do gênero Sporothrix. Embora o Sporothrix brasiliensis seja a espécie mais patogênica e prevalente na hiperendemia brasileira de esporotricose, segundo nosso conhecimento este é o primeiro relato de um gato com lesões oculares causadas por esta espécie, via diagnóstico molecular. Um felino doméstico com três meses de idade apresentou manifestação ocular com granuloma em conjuntiva palpebral inferior esquerda, além de lesões mucocutâneas em diferentes áreas do corpo. Amostras foram coletadas para posterior citopatologia, cultura de fungos, sorologia e genotipagem molecular. O itraconazol foi prescrito para o tratamento da esporotricose e o animal foi considerado clinicamente curado ao final de cinco meses de tratamento, recebendo alta. As interações do S. brasiliensis com o gato podem se manifestar com uma infinidade de formas clínicas que se assemelham a doenças infecciosas ou não. A necessidade de avaliação física meticulosa desses animais por um médico veterinário, seguida do diagnóstico laboratorial preciso, são medidas essenciais em saúde pública na área hiperendêmica para a esporotricose no Brasil. Sporotrichosis is a dermatozoonosis, caused by dimorphic pathogenic fungi of the genus Sporothrix. Although Sporothrix brasiliensis is the most frequent and pathogenic species identified from the Brazilian sporotrichosis hyperendemic, to the best of our knowledge this is the first report of its molecular diagnosis from a cat with ocular lesions. A 3-month old female, domestic feline presented an ocular manifestation with granuloma in the lower-left palpebral conjunctiva, in addition to mucocutaneous lesions in varied locations throughout the body. Samples were collected for subsequent cytopathology, fungal culture, serology, and molecular genotyping. Itraconazole was prescribed for the treatment of sporotrichosis and the animal was considered clinically cured at the end of 5 months of treatment and discharged. S. brasiliensis cat interactions can manifest with a multitude of clinical forms that resemble either infectious or noninfectious diseases. Both the need for meticulous cat physical evaluation by a veterinarian followed by accurate laboratory diagnosis are key Public Health measures in the Brazilian sporotrichosis hyperendemic area.

O Lúpua eritematoso sistêmico (LES) é uma doença inflamatória crônica multissistêmica, de de característica autoimune e etiologia desconhecida, relacionada a fatores genéticos, ambientais e hormonais, sendo mais comum e grave na raça negra e em asiáticos. O risco de infecções oportunisticas em pacientes com LES é maior pelo uso de imunossupressores no seu tratamento. Já a esporotriose é uma micose subcutânea causada pelo fungo Sporothrix schenckii que afeta principalmente homens e animais. É a mais frequente das micoses subcutâneas, e a micose mais comum na América do Sul, sendo endêmica na região Sudeste do Brasil. A apresentação clínuca da doença é muito variada, obseerva-se desde nódulos isolados à lesões múltiplas disseminadas. As lesões costumam ser restritas a pele, tecido celular subcutâneo e vasos linfáticos adjacentes.&nbsp

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Photodynamic therapy (PDT) activates a photosensitizer by visible or infrared light to generate cytotoxic oxygen species that lead to cell death. PDT is generally used in applications in superficial lesions and can be used both in the treatment of skin cancer and in infections caused by microorganisms. Skin cancer can be distinguished into melanoma and non-melanoma, both of which affect several layers of the dermis, and melanoma cancer is more aggressive because it can metastasize and affect other organs. From infections caused by fungi, sporotrichosis and candidosis are considered a public health problem in Brazil. Sporotrichosis is caused by fungi of the pathogenic Sporothrix clade and is characterized by the formation of wounds on the skin, which is also a characteristic of infections caused by Candida species. This study investigates the photosensitizing efficiency of the Ru(phen)2(pPDIp)(PF6)2 complex, RupPDIp, against Sporothrix brasiliensis and Candida albicans. And also, against human melanoma cells (A375) and melanocytes (NGM). To assess the antimicrobial photodynamic action, the RupPDIp complex was tested with irradiation at 450 nm (blue light - 36 J/cm²) and 525 nm (green light - 25.2 J/cm²) in the concentration range of 0.05-20 µM. Control groups were performed in the absence/presence of RupPDIp and irradiation and compared by cell count. For tests on human melanocyte and melanoma cells, a light source at 415 nm (blue light) was used, delivering doses of 1.76 J/cm² and 2.12 J/cm². The viability of cells after PDT was revealed by the MTT method and compared with control groups containing the photosensitizer in the absence of irradiation. Under blue light irradiation (450 nm), the complex was able to completely inhibit the growth of S. brasiliensis with concentrations

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Foi observado que a enfermidade afetou predominantemente animais de sexo masculino (75,2% e 56,5% em felinos e caninos, respectivamente), sem raça definida (SRD) (94,2% e 53,6% em felinos e caninos, respectivamente), adultos (60,5% e 69,6% em felinos e caninos, respectivamente), que apresentaram tempo de evolução da enfermidade até três meses com lesões ulceradas sendo o sinal clínico predominante. Também foi observado que os casos caninos da enfermidade apresentaram, em sua totalidade, a espécie fúngica Sporothrix brasiliensis como agente etiológico e que, em ambas as espécies animais, a realização de tratamento prévio ao diagnóstico apresentou associação significativa (p < 0,05) com o tempo de evolução mais longo da enfermidade. Com relação aos modelos de séries temporais, foi observado que o modelo ARMA (6,6) incompleto em AR (2, 4, 6) e MA (2, 4), foi considerado o mais adequado, prevendo elevado número de casos para 2019 no Município de Pelotas, enquanto que o modelo matemático suscetível-infectado-suscetível demonstrou que o caráter epidêmico da enfermidade na região, com tendência a crescimento exponencial e previsão de número superior a 10.000 felinos infectados nos próximos 25 anos (2021 – 2044). Esta dissertação é composta por três artigos científicos referente à análise clínico-epidemiológica da esporotricose canina na região Sul do Rio Grande do Sul; avaliação clínicoepidemiológica e de fatores de risco, e análise de série temporal para esporotricose felina no Município de Pelotas/RS; e simulação da dinâmica de transmissão da esporotricose felina no meio urbano através do modelo SIS. This dissertation aims to analyze clinical and epidemiological characteristics of canine and feline sporotrichosis in the southern region of Rio Grande do Sul, during the period from 2007 to 2018, as well as to analyze the incidence rate of feline sporotrichosis in this region during the period from 2013 to 2018 and to build time series models capable of representing and predicting the incidence of the disease in subsequent years in the region. For this purpose, 288 cases of feline sporotrichosis and 69 cases of canine sporotrichosis were diagnosed at the Center for Diagnosis and Research in Veterinary Mycology of the Federal University of Pelotas during the period 2007 to 2018. It was observed that the disease predominantly affected male animals (75.2% and 56.5% in felines and canines, respectively), without defined race (SRD) (94.2% and 53.6% in felines and canines, respectively), adults (60.5% and 69.6% in felines and canines, respectively), who presented time of evolution of the disease up to three months with ulcerated lesions being the predominant clinical sign. It was also observed that the canine cases of the disease presented, in its totality, the fungal species Sporothrix brasiliensis as etiological agent and that, in both animal species, the accomplishment of treatment previous to the diagnosis presented significant association (p < 0.05) with the time of longer evolution of the disease. Regarding the time series models, it was observed that the ARMA (6.6) model incomplete in AR (2, 4, 6) and MA (2, 4), was considered the most appropriate, predicting a high number of cases for 2019 in Pelotas County, while the mathematical model susceptible-infectible-suscptible (SIS) demonstred the epidemic character of the disease in the region, with a tendency to exponential growth and prediction of more than 10,000 infected cats in the next 25 years (2021 - 2044). This dissertation is composed of three scientific papers on the clinical-epidemiological analysis of canine sporotrichosis in the southern region of Rio Grande do Sul; clinical-epidemiological and risk factors evaluation, and time series analysis for feline sporotrichosis in the city of Pelotas / RS; and simulation of the transmission dynamics of feline sporotrichosis in the urban environment through the SIS model.

As micoses subcutâneas são doenças causadas por uma ampla variedade de fungos que após implante traumático, invadem tecidos cutâneo e subcutâneo. A esporotricose é uma micose subcutânea, subaguda ou crônica, causada por diferentes espécies do gêneroSporothrix, que apresenta distribuição mundial. As lesões são frequentemente restritas à pele, tecido subcutâneo e vasos linfáticos adjacentes, mas há relatos de infecções pulmonares primárias, osteoarticulares e conjuntivas, bem como disseminadas. É adquirida pela manipulação de material contaminado como vegetação e, especialmente, pelo contato com gatos infectados. Ocorre em microrregiões do Sul, Sudeste e especialmente na cidade do Rio de Janeiro, onde a esporotricose é endêmica. Entretanto dados sobre casos de esporotricose nas áreas metropolitanas da região sul do país ainda são escassos. Desta forma, este estudo bouscou realizar um copilados dos dados disponíveis para a estimar a ocorrência de esporotricose humana, felina e zoonótica em algumas cidades da Região Metropolitana de Porto Alegre (RMPA). Com este objetivo foi realizado um levantamento retrospectivo da esporotricose felina diagnosticada em dois setores da Faculdade de Veterinária da UFRGS. Os dados de pacientes humanos foram obtidos através de consulta a laboratórios de Micologia de dois Hospitais localizados em Porto Alegre e a algumas Secretarias da Saúde de cidades da RMPA. Foram analisadas 256 amostras de felinos com lesões dermatológicas suspeitas de esporotricose e identificados 104 (40,6%) casos positivos, cujo diagnóstico foi realizado através das técnicas isoladas ou associadas de citologia, histopatologia e cultivo. O uso da PCR permitiu caracterizar 21 isolados como Sporothrix brasilensis, dados que corroboram outros trabalhos já descritos na literatura nacional. Trabalhos recentes descrevem novas espécies isoladas de casos clínicos em humanos e animais enfatizam que existem diferenças quanto à susceptibilidade e, provavelmente ao grau de patogenicidade das mesmas. No âmbito desse estudo, foi possível coligir dados de 44 casos de esporotricose humana e 29 de esporotricose zoonótica. É muito provável que, dentre os casos reportados como só acometendo humanos, em muitos deles a infecção tenha sido contraída de gatos contaminados. Em relação a esses dados sobre esporotricose em humanos, é preciso enfatizar que, por diversas razões, os mesmos podem ser considerados como subnotificados. É preciso envidar esforços para que haja uma coordenação estadual que elabore um questionário padrão a ser distribuído para todos serviços de saúde e de Hospitais para que esta micose subcutânea, mas que pode causar óbito em paciente imunodeprimido, seja considerada como doença de notificação compulsória no Rio Grande do Sul à semelhança do que já ocorre em alguns municípios e estados brasileiros. Subcutaneous mycotic diseases are caused by a wide range of fungi, which may, after traumatic introduction, invade cutaneous and subcutaneous tissues. Sporotrichosis is an acute to chronic subcutaneous mycosis caused by species belonging to the genus Sporothrix, a dimorphic fungus worldwide distributed. Lesions are frequently restricted to the skin, subcutaneous tissue, and adjacent lymphatics, but primary pulmonary, bone-joint, and conjunctiva infections, as well as disseminated diseases have been reported. The infection is acquired by the manipulation of contaminated material, such as vegetation and, specially, by direct contact with infected cats. It occurs in restricted areas of the Southern and Southeast regions, but most notably in Rio de Janeiro city, wherein sporotrichosis is endemic. However, information regarding sporotrichosis cases in the metropolitan area of the Southern region is still lacking. Therefore, we compiled the available data of humans, cats, and zoonotic sporotrichosis occurrence in some cities of the Metropolitan Area of Porto Alegre city (RMPA). Considering this aim, we did a retrospective study of feline sporotrichosis diagnosed in two laboratories of the Faculdade de Veterinária from UFRGS. Human patients’ data were obtained through a consult to Mycology laboratories in two hospitals located in Porto Alegre city, as well as some Secretary for Health from cities of the RMPA. A total of 256 samples of cats with cutaneous lesions and a suspicious diagnosis of sporotrichosis were found, of which 104 (40.6%) were positive. In these cases, the diagnosis was obtained through cytology, histopathology, and/or culture. In addition, 21 isolates were characterized as Sporothrix brasilensis through PCR, which is similar to other studies reported nationally. Recent published data have described new isolated species from clinical cases in humans and animals, which emphasize that susceptibility and pathogenicity to these isolates may differ. Within the scope of this study, it was possible to collect 44 cases of human sporotrichosis and 29 cases of zoonotic sporotrichosis. In cases affecting only humans it is most likely that in many of these the infection was acquired from contaminated cats. With regards to the data of sporotrichosis in humans, it is necessary to emphasize that, for many reasons, these cases are probably underreported. It is, therefore, mandatory to undertake efforts so that the state health coordination develops a standardized survey form to be distributed to all health services and hospitals in order to consider subcutaneous mycosis an obligatory notification disease in Rio Grande do Sul state, as it may lead to death of immunocompromised patients, similarly to what already occurs in other Brazilian cities and states.

RESUMO O objetivo deste estudo foi identificar as principais doenças de felinos na região sul do Rio Grande do Sul. Foram revisados os protocolos de necropsia e das amostras biológicas de felinos encaminhados ao Laboratório Regional de Diagnóstico da Faculdade de Veterinária da Universidade Federal de Pelotas (LRD/UFPel), no período de 1978 a 2018. Nesse período foram recebidas 1633 amostras de felinos, sendo 363 (22%) entre os anos de 1978 e 1999 e 1270 (78%) entre os anos de 2000 e 2018. Com relação aos diagnósticos, 457 felinos (28%) apresentaram tumores benignos ou malignos, sendo os tegumentares e os mamários os mais frequentes. As doenças bacterianas, fúngicas, virais, parasitárias, sem agente definido e as intoxicações totalizaram 554 casos (33,9%), destacando-se a esporotricose, com 12,8% dos diagnósticos. Concluiu-se que, na região sul do RS, o encaminhamento de felinos para diagnóstico aumentou significativamente após o ano 2000, comprovando que a espécie passou a ter maior importância como animal de companhia. Concluiu-se, também, que as neoplasias têm papel relevante entre as doenças de felinos e que a esporotricose é uma das mais importantes zoonoses na região. ABSTRACT The goal of this paper was to identify the main disease affecting felines in the southern region of Rio Grande do Sul. The necropsy protocols and feline biological materials submitted to the Regional Diagnostic Laboratory of the Veterinary College of the Federal University of Pelotas (LRD / UFPel) were reviewed, from 1978 to 2018. During this period 1633 feline samples were received, 363 (22%) between 1978 and 1999 and 1270 (78%) between 2000 and 2018. 59% of felines did not present a defined breed. As for diagnoses, 457 felines (28%) presented benign or malignant tumors, the most common being the integumentary and mammary tumors. Bacterial, fungal, viral, parasitic or undefined agent infections and intoxications were observed in 554 cases (33.9%), especially sporotrichosis with 12.8 % of the diagnoses. It was concluded that in southern RS the referral of cats for diagnosis increased significantly after the year 2000, proving that they became more significant as companion animals. It was also concluded that neoplasia play a relevant role among feline diseases, and that sporotrichosis is one of the most important zoonoses in the region.

Objetivo: abordar objetivamente as características da infecção fúngica por Sporothrix schenkii dando ênfase no seu manejo com o uso de Itraconazol. Revisão bibliográfica: a esporotricose é a infecção fúngica subcutânea mais comum da América Latina, caracterizando-se por ser subaguda ou crônica. Uma vez que o fungo penetra no organismo através de lesões com perda de continuidade da epiderme e mucosas, as manifestações clínicas podem ser diversas. Dentre as formas estão: cutânea localizada, extracutânea, disseminada e cutâneo-linfática, sendo a última a principal delas. O diagnóstico é clínico, epidemiológico e laboratorial, envolvendo principalmente a cultura da biópsia ou aspirado da lesão. Outros exames complementares podem ajudar na investigação. As medicações disponíveis em território nacional para tratamento da esporotricose são: iodeto de potássio, terbinafina, itraconazol e anfotericina B. Dessa forma, destaca-se o Itraconazol como primeira escolha para o tratamento da esporotricose cutânea e cutâneo-linfática. Sua ação e absorção são dependentes de pH ácido e sua dose varia de acordo com o quadro do paciente. Considerações finais: o Itraconazol apresenta a maior eficácia diante dos quadros mais prevalentes de esporotricose, devendo atentar às situações em que ele não está indicado, visando a evitar causar efeitos prejudiciais ao paciente

Outra Agência O Hospital Eduardo de Menezes (HEM) é um hospital público referência em doenças infectocontagiosas e dermatologia sanitária. Localizado na cidade de Belo Horizonte, presta assistência médica a todo o estado de Minas Gerais a nível ambulatorial e hospitalar, em especial às micoses sistêmicas. O presente estudo desenvolveu-se no laboratório de micologia da instituição que se encontrava sem responsável técnico habilitado e com notificações da Vigilância Sanitária a resolver. O processo de reestruturação do setor de micologia iniciou com uma detalhada análise situacional para identificar possíveis problemas que poderiam estar comprometendo, diretamente ou indiretamente, o desempenho dos exames laboratoriais micológicos. As inconsistências resultantes foram listadas e em seguida agrupadas em quatro grupos: estrutural, organizacional, metodológico e recursos humanos (RH). Simultaneamente, as notificações da Vigilância Sanitária (VISA) dos últimos oito anos, direcionadas ao setor estudado, foram atualizadas e listadas. Em seguida, definiu-se ações para solucionar os diferentes problemas identificados. Implementou-as e verificou se o resultado das interferências atingiu o objetivo proposto: um serviço de micologia qualificado. As ações se basearam em uma organização física e processual do setor, elaboração e atualização de Procedimentos Operacionais Padrões, estabelecimento de fluxos internos, capacitações, alinhamento com a equipe multidisciplinar de saúde e utilização e implementação de técnicas laboratoriais micológicas fundamentadas em evidências científicas. Além disso, foi feito um estudo epidemiológico dos exames micológicos no período de 2014 a 2019, com o objetivo de identificar indicadores que pudessem quantificar o resultado do processo de reestruturação. A análise estatística das informações possibilitou a avaliação aprimorada do impacto potencial das ações adotadas no processo de reestruturação do setor. Assim, evidenciou-se que a organização estrutural, processual e de recursos humanos, juntamente com programas de capacitação e uso de metodologias baseadas em evidências científicas, impactam positivamente e de forma relevante no desempenho final do serviço prestado. Este estudo também possibilitou verificar que as técnicas laboratoriais utilizadas para o diagnóstico micológico possuem limitações inerentes a cada metodologia, e que o ideal é o uso associado destas. Além disso, demonstrou a emergência da esporotricose com manifestações disseminadas atípicas. Eduardo de Menezes Hospital (HEM) is a reference hospital in infectious diseases and health dermatology. Located in the city of Belo Horizonte, it offers medical assistance to the entire state of Minas Gerais on an outpatient and hospital level, especially systemic mycoses. The present study was published in the mycology laboratory of the institution, which was without qualified technician responsible and with notifications from the Health Surveillance to be resolved. The mycology sector process started with a detailed situational analysis to identify possible that may be compromised, directly or indirectly, the performance of the mycological laboratory exams. The inconsistencies granted were listed and then grouped into four groups: structural, organizational, methodological and human resources (HR). Simultaneously, as notifications from the Health Surveillance (VISA) of the last eight years, directed to the sector studied, were updated and listed. Then, actions were defined to solve the different problems identified. The proposed objective was implemented and verified as a result of the interferences achieved: a qualified mycology service. The actions were based on a physical and procedural organization of the sector, preparation and updating of Standard Operating Procedures, internal flow standards, training, alignment with the multidisciplinary health team and the use and implementation of mycological laboratory techniques based on scientific evidence. In addition, an epidemiological study of mycological examinations was carried out, from 2014 to 2019, with the objective of identifying indicators that could quantify the result of the information technology process. A statistical analysis of the information enabled an improved assessment of the potential impact of the actions taken in the sector's IT process. Thus, it became evident that the structural, procedural and human resources organization, together with training programs and the use of methodologies based on scientific evidence, positively and significantly impact the final performance of the service provided. This study also made it possible to verify that the laboratory techniques used for the mycological diagnosis have limitations inherent to each methodology, and that the ideal is the use associated with them. In addition, alter the emergence of sporotrichosis with atypical disseminated manifestations.

A esporotricose é uma micose cutânea causada por fungos do gênero Sporothrix que afeta tanto os animais quanto o homem, sendo o gato doméstico uma importante fonte de infecção para os humanos. Apesar de ser uma doença emergente no Brasil, ainda é considerada negligenciada e subnotificada já que sua notificação é obrigatória em apenas alguns estados e municípios. Nos felinos pode-se observar variadas apresentações clínica, sendo a mais comum a forma cutânea com aparecimento de lesões ulceradas na região cefálica, extremidades dos membros e cauda. Em humanos a infecção cutânea na maioria das vezes é localizada, podendo afetar diversos órgãos internos e tecidos em indivíduos imunocomprometidos ou com doenças crônicas pré-existentes. O tratamento e controle da doença representa um desafio para o médico veterinário e os profissionais de saúde em geral que devem estar atentos aos aspectos gerais dessa importante zoonose, alertando a população sobre sua existência e importância, contribuindo dessa forma para seu controle e erradicação.

CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior A esporotricose é uma micose subcutânea, raramente sistêmica, causada pelo fungo dimórfico Sporothrix spp., recentemente classificado como um complexo de várias espécies. No Brasil, nas epidemias de esporotricose com transmissão zoonótica através de felinos, a espécie mais comumente isolada é S. brasiliensis, embora também seja encontrada S. schenckii sensu sctricto. A caracterização laboratorial do agente etiológico habitualmente é feita somente até a classificação de gênero, de acordo com suas características fenotípicas em diferentes graus de temperatura (37°C e 25°C). Os objetivos desta pesquisa foram a caracterização fenotípica e filogenética dos isolados clínicos de pacientes com esporotricose, confirmada pela cultura em Agar Sabouraud Dextrose (ASD), no setor de microbiologia da Unidade Funcional de Patologia Clínica do Hospital das Clínicas (HC) da UFMG, e sua correlação com os dados clínicos de pacientes. Os dados dos pacientes foram revisados dos seus respectivos prontuários disponibilizados no HC. Foram coletados 49 isolados de Sporothrix spp., entre os anos de 2017 e 2018, dos quais 30 estavam viáveis para cultura e análise. Estas amostras foram coletadas de 26 pacientes. Os isolados foram repicados em ASD e a extração de DNA realizada de acordo com as técnicas moleculares tradicionais. A amplificação do gene dos Espaçadores Transcritos Internos (Internal Transcribed Spacers - ITS1, 5.8S e ITS2) foi feita pela técnica de PCR (reação em cadeia da polimerase). Os amplicons do DNA foram sequenciados e depositados no NCBI (National Center for Biotechnology Information). As análises filogenéticas foram realizadas utilizando Máxima Verossimilhança no software MEGA X. Os dados coletados mostram que a forma clínica mais comum foi a linfocutânea (76,9%) e que os membros superiores foram os mais afetados (57,7%). Os pacientes infectados, em sua maioria, relataram contato com gatos com esporotricose ativa (69,3%). Destes pacientes, 76,9% eram adultos no momento da infecção. As análises filogenéticas revelaram que há outra espécie do complexo Sporothrix circulante em Minas Gerais. Nossos dados mostram que S. brasiliensis foi a espécie mais frequente, seguida por S. schenckii e S. globosa. Não foi encontrada relação direta entre a forma clínica e a espécie infectante. O maior número de casos acometeu pacientes que tiveram contato com gatos infectados. Sendo assim, estão intimamente relacionados à transmissão zoonótica, sem preferência por sexo. Sporotrichosis is a subcutaneous mycosis, rarely systemic, caused by a complex of dimorphic fungi in the genus Sporothrix spp. In Brazil reports of human epidemics of sporotrichosis involving feline zoonotic transmission is common. The most frequent isolated species is S. brasiliensis, although S. schenckii sensu sctricto has been also recorded. Laboratory characterization of the etiological agent in culture is usually done at the genus level, according to its phenotypic characteristics at 25°C and 37°C. The objectives of this research were the characterization of the phenotypic and phylogenetical features of clinical isolates of patients with sporotrichosis, confirmed by culture on Sabouraud Dextrose Agar (SDA) and its correlation with the patient’s clinical data. The cultures were collected in the microbiology section of the Clinical Pathology Unit at the “Hospital das Clínicas (HC) of “Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)”, from patients diagnosed with active sporotrichosis. Patient data were reviewed from their respective medical records available at the HC. Between 2017 and 2018, 49 isolates of Sporothrix spp. were collected of which only 30 were viable at the time of the analysis. The 30 isolates in this study were collected from 26 patients. The isolates were cultured in ASD broth, and their DNA extraction was performed according to traditional molecular techniques. The amplification of the Internal Transcribed Spacers gene (ITS1, 5.8S and ITS2) using the universal primers ITS1 and ITS 4, was by PCR (polymerase chain reaction) and their amplicons sequenced and then deposited at the National Center for Biotechnology Information (NCBI). Phylogenetic analyzes was performed using Maximum Likelihood in MEGA X software. The data collected show that the common clinical manifestation of the disease was the lymphocutaneous form (76.9%). The upper limbs (57.7%) were frequently affected. Most of the infected patients reported contact with cats infected with Sporothrix spp. (69.3%). 76.9% of patients were adults at the time of infection. Gender preference was not observed. Our phylogenetic analyzes revealed that there were several Sporothrix species circulating in Minas Gerais. The data showed S. brasiliensis as the most frequent species, followed by S. schenckii and S. globosa. There was not direct relationship between the clinical form in the investigated patients and the infecting species. In this study most human cases were in contact with infected cats; thus, their cases were considered putatively related to zoonotic transmission.

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Sporotrichosis is a dermatomycosis caused by fungi of the genus Sporothrix that can affect humans and animals. The domestic cat has fundamental importance in the epidemiological chain of the disease, since it is considered one of the main sources of infection for humans. Infected cats usually have ulcerated skin lesions, in the form of gum at cephalic region, extremities of the limbs and tail. In humans, the lesion is usually localized, and there may be lymphatic involvement of the region. The diagnosis of sporotrichosis is made through a thorough clinical examination, observing the patient's history and complementary tests such as mycological cultivation and cytological examination, in which the presence of the fungus and mycological culture can be quickly observed. The objective of this work was to report a case of feline sporotrichosis with zoonotic transmission, alerting to the occurrence of the disease in felines and its transmission to humans who maintain contact with these animals. A esporotricose é uma dermatomicose causada por fungos do gênero Sporothrix que pode acometer humanos e animais. O gato doméstico possui importância fundamental na cadeia epidemiológica da doença, já que é considerado uma das principais fontes de infecção para os humanos. Nos felinos infectados normalmente observam-se lesões cutâneas ulceradas, em forma de goma em região cefálica, extremidades dos membros e cauda. Em humanos normalmente a lesão é localizada, podendo haver comprometimento linfático da região. O diagnóstico da esporotricose é feito através de exame clínico minucioso, observando-se o histórico do paciente e exames complementares como o cultivo micológico e o exame citológico, no qual pode-se observar, de forma rápida, a presença do fungo. O objetivo deste trabalho foi relatar um caso de esporotricose felina com transmissão zoonótica, alertando para a ocorrência da doença em felinos e de sua transmissão a seres humanos que mantenham contato com esses animais.

A esporotricose é a micose subcutânea mais comum na América Latina, causada pelo Sporothrix schenkii. A maioria dos casos envolve o acometimento cutâneo e linfático sendo rara a disseminação para outros órgãos e sistemas, manifestações mais frequentes em imunodeprimidos. A forma cutâneo-linfática é a mais comum, inicia-se com pápulas que evoluem para úlceras ao longo do trajeto linfático até à cadeia ganglionar regional. O acometimento mucoso é incomum e sua apresentação típica é a conjuntivite granulomatosa associada a linfadenopatia regional. Pode estar associada à profissão, nomeadamente em pessoas que lidam com terra, principalmente em áreas rurais, ou com animais como gatos (domésticos e selvagens) e tatus. Atualmente surtos urbanos tem sido associados à arranhadura e/ou mordedura de gatos infectados. Relatamos o caso de uma paciente imunocompetente, diagnosticada com esporotricose cutânea disseminada associada a lesão ocular, tendo o gato doméstico como fonte de infecção.

Sporotrichosis is a subcutaneous disease caused by dimorphic fungi belonging to the Sporothrix schenckii species complex, which antifungal drugs such as amphotericin B, itraconazole and terbinafine are used for treatment, however the toxicity and emergence of strains with low susceptibility to these drugs have stimulated the expansion of the sporotrichosis therapeutic arsenal. In this context, the statins are cholesterol-lowering drugs that have potential antimicrobial activity. Regardin the high cost of developing drugs, their repositioning has been an alternative and it is a strategy applicable to the expansion of the sporotrichosis therapeutic arsenal. Therefore, the antifungal activity of simvastatin, atorvastatin and pravastatin on planktonic cells and biofilms of Sporothrix schenckii species complex was evaluated. In addition, the interaction of pravastatin with amphotericin B, itraconazole and terbinafine was also evaluated. Eighteen strains of Sporothrix spp. (08 S. brasiliensis, 04 S. globosa, 02 S. mexicana and 04 S. schenckii stricto sensu) were used in this study. Therefore, the planktonic susceptibility of the filamentous and leveruriform forms of Sporothrix spp. was evaluated by broth microdilution method. The biofilms formed from the filamentous forms of these fungi were exposed to statins and their metabolic activity measured by XTT reduction colorimetric assay. Thus, the minimum inhibitory concentrations (MICs) of statins ranged from 8 to 512 μg.ml-1 for filamentous forms and from 8 to 256 μg.ml-1 for yeast forms, respectively. MICs capable of inhibiting 50% and 90% (BCIM50 and BMIC90) of statin-exposed biofilm growth were 128 < BCIM50 > 2048 μg.ml-1 and 512 < BMIC90 > 2048 μg.ml-1, respectively; 128 < BCIM50 > 512 μg.ml-1 and BMIC90 > 2048 μg.ml-1 for atorvastatin, respectively; and BCIM50 > 2048 μg.ml-1 and BMIC90 > 2048 μg.ml-1 for pravastatin. In addition, pravastatin showed indifferent interactions with amphotericin B, itraconazole or terbinafine. Finally, simvastatin, atorvastatin and pravastatin showed antifungal activity on planktonic cells of Sporothrix spp. in filamentous and yeast forms. In addition, simvastatin and atorvastatin inhibited biofilms of the filamentous form of Sporothrix spp.. These results highlight the antifungal and antibiofilm potential of statins, in particular simvastatin and atorvastatin. A esporotricose é uma doença subcutânea causada por fungos dimórficos pertencentes ao complexo Sporothrix schenckii, na qual são usadas drogas antifúngicas, como iodeto de potássio, anfotericina B, itraconazol e terbinafina. A toxicidade e o surgimento de cepas com baixa sensibilidade a essas drogas têm estimulado a expansão do arsenal terapêutico da esporotricose. Nesse contexto, as estatinas são drogas que atuam como redutoras de colesterol possuindo potencial atividade antimicrobiana. Diante do alto custo no desenvolvimento de novas drogas, o reposicionamento de fármacos tem sido uma alternativa, sendo uma estratégia aplicável à expansão do arsenal terapêutico da esporotricose. Diante disso, foi avaliada a atividade antifúngica de sinvastatina, atorvastatina e pravastatina sobre as formas planctônicas e biofilmes de espécies do complexo Sporothrix schenckii. Aliado a análise supracitada, foram avaliadas a interação da pravastatina com anfotericina B, itraconazol e terbinafina. Para tanto, foram utilizadas 18 cepas de Sporothrix spp. (08 S. brasiliensis, 04 S. globosa, 02 S. mexicana e 04 S. schenckii stricto sensu) neste estudo. A sensibilidade planctônica das formas filamentosas e leveruriformes de Sporothrix spp. foi avaliada por métodos de microdiluição em caldo segundo os documentos M38-A2 e M27-A3, respectivamente. Os biofilmes formados das formas filamentosas desses fungos foram expostos a sinvastatina, atorvastatina, pravastatina e a atividade metabólica deles mensurada por ensaio colorimétrico de redução de XTT. Assim, as concentrações inibitórias mínimas (CIMs) das estatinas variaram de 8 a 512 μg/mL para a forma filamentosa e de 8 a 256 μg/mL para a forma leveduriforme. As CIMs capazes de inibir 50% e 90% (CIMB50 e CIMB90) do crescimento dos biofilmes expostos às estatinas foram de 128 < CIMB50 > 2048 μg/mL e 512 < CIMB90 > 2048 μg/mL de sinvastatina, respectivamente; de 128 < CIMB50 > 512 μg/mL e CIMB90 > 2048 μg/mL de atorvastatina, respectivamente; e CIMB50 > 2048 μg/mL e CIMB90 > 2048 μg/mL de pravastatina. Além disso, a pravastatina apresentou interações indiferentes com anfotericina B, itraconazol e terbinafina. Por fim, sinvastatina, atorvastatina e pravastatina apresentaram atividade antifúngica sobre células planctônicas de Sporothrix spp. nas formas filamentosas e leveduriformes. Ademais, sinvastatina e atorvastatina inibiram biofilmes da forma filamentosa de Sporothrix spp. Estes resultados destacam o potencial antifúngico das estatinas, em destaque, sinvastatina e atorvastatina.

Sporotrichosis is a subcutaneous disease caused by dimorphic fungi belonging to the Sporothrix schenckii species complex, which antifungal drugs such as amphotericin B, itraconazole and terbinafine are used for treatment, however the toxicity and emergence of strains with low susceptibility to these drugs have stimulated the expansion of the sporotrichosis therapeutic arsenal. In this context, the statins are cholesterol-lowering drugs that have potential antimicrobial activity. Regardin the high cost of developing drugs, their repositioning has been an alternative and it is a strategy applicable to the expansion of the sporotrichosis therapeutic arsenal. Therefore, the antifungal activity of simvastatin, atorvastatin and pravastatin on planktonic cells and biofilms of Sporothrix schenckii species complex was evaluated. In addition, the interaction of pravastatin with amphotericin B, itraconazole and terbinafine was also evaluated. Eighteen strains of Sporothrix spp. (08 S. brasiliensis, 04 S. globosa, 02 S.mexicana and 04 S. schenckii stricto sensu) were used in this study. Therefore, the planktonic susceptibility of the filamentous and leveruriform forms of Sporothrix spp. was evaluated by broth microdilution method. The biofilms formed from the filamentous forms of these fungi were exposed to statins and their metabolic activity measured by XTT reduction colorimetric assay. Thus, the minimum inhibitory concentrations (MICs) of statins ranged from 8 to 512 μg.ml-1 for filamentous forms and from 8 to 256 μg.ml-1 for yeast forms, respectively. MICs capable of inhibiting 50% and 90% (BCIM50 and BMIC90) of statin-exposed biofilm growth were 128 < BCIM50 > 2048 μg.ml-1 and 512 < BMIC90 > 2048 μg.ml-1, respectively; 128 < BCIM50 > 512 μg.ml-1 and BMIC90 > 2048 μg.ml-1 for atorvastatin, respectively; and BCIM50 > 2048 μg.ml-1 and BMIC90 > 2048 μg.ml-1 for pravastatin. In addition, pravastatin showed indifferent interactions with amphotericin B, itraconazole or terbinafine. Finally, simvastatin, atorvastatin and pravastatin showed antifungal activity on planktonic cells of Sporothrix spp. in filamentous and yeast forms. In addition, simvastatin and atorvastatin inhibited biofilms of the filamentous form of Sporothrix spp. These results highlight the antifungal and antibiofilm potential of statins, in particular simvastatin and atorvastatin. A esporotricose é uma doença subcutânea causada por fungos dimórficos pertencentes ao complexo Sporothrix schenckii, na qual são usadas drogas antifúngicas, como iodeto de potássio, anfotericina B, itraconazol e terbinafina. A toxicidade e o surgimento de cepas com baixa sensibilidade a essas drogas têm estimulado a expansão do arsenal terapêutico da esporotricose. Nesse contexto, as estatinas são drogas que atuam como redutoras de colesterol possuindo potencial atividade antimicrobiana. Diante do alto custo no desenvolvimento de novas drogas, o reposicionamento de fármacos tem sido uma alternativa, sendo uma estratégia aplicável à expansão do arsenal terapêutico da esporotricose. Diante disso, foi avaliada a atividade antifúngica de sinvastatina, atorvastatina e pravastatina sobre as formas planctônicas e biofilmes de espécies do complexo Sporothrix schenckii. Aliado a análise supracitada, foram avaliadas a interação da pravastatina com anfotericina B, itraconazol e terbinafina. Para tanto, foram utilizadas 18 cepas de Sporothrix spp. (08 S. brasiliensis, 04 S. globosa, 02 S. mexicana e 04 S. schenckii stricto sensu) neste estudo. A sensibilidade planctônica das formas filamentosas e leveruriformes de Sporothrix spp. foi avaliada por métodos de microdiluição em caldo segundo os documentos M38-A2 e M27-A3, respectivamente. Os biofilmesformados das formas filamentosas desses fungos foram expostos a sinvastatina, atorvastatina, pravastatina e a atividade metabólica deles mensurada por ensaio colorimétrico de redução de XTT. Assim, as concentrações inibitórias mínimas (CIMs) das estatinas variaram de 8 a 512 μg/mL para a forma filamentosa e de 8 a 256 μg/mL para a forma leveduriforme. As CIMs capazes de inibir 50% e 90% (CIMB50 e CIMB90) do crescimento dos biofilmes expostos às estatinas foram de 128 < CIMB50 > 2048 μg/mL e 512 < CIMB90 > 2048 μg/mL de sinvastatina, respectivamente; de 128 < CIMB50 > 512 μg/mL e CIMB90 > 2048 μg/mL de atorvastatina, respectivamente; e CIMB50 > 2048 μg/mL e CIMB90 > 2048 μg/mL de pravastatina. Além disso, a pravastatina apresentou interações indiferentes com anfotericina B, itraconazol e terbinafina. Por fim, sinvastatina, atorvastatina e pravastatina apresentaram atividade antifúngica sobre células planctônicas de Sporothrix spp. nas formas filamentosas e leveduriformes. Ademais, sinvastatina e atorvastatina inibiram biofilmes da forma filamentosa de Sporothrix spp. Estes resultados destacam o potencial antifúngico das estatinas, em destaque, sinvastatina e atorvastatina.

Feline sporotrichosis is a subcutaneous, infectious, and contagious mycosis, with zoonotic characteristics. Until now there are no reports on the isolation of Sporothrix sp. in cats in the state of Pará. The present work aimed to isolate Sporothrix spp. from a cat with possible zoonotic involvement in the city of Belém, Pará. Through the active search for suspected cases of sporotrichosis, carried out by members of the Center for the Control of Zoonoses of Belém (CCZ, Belém) the suspicion of the disease in a feline was reported, with probable transmission to its owner. Clinical evaluation was performed, and biological material was collected from the animal for identifying the agent. Microscopic evaluation of the collected sample and microbial culture confirmed the presence of Sporothrix sp. in the sample. This study is the first to report the microbiological isolation of Sporothrix sp. in a cat in the metropolitan region of Belém, Pará, with possible zoonotic transmission. This indicates a probable underreporting of cases, an unknowing regarding the reality of health conditions and the need for more accurate and comprehensive evaluation of sporotrichosis in this region. La esporotricosis felina es una micosis subcutánea, infecciosa y contagiosa, con características zoonóticas. Hasta ahora no hay informes sobre el aislamiento de Sporothrix sp. en gatos en el estado de Pará. El objetivo de este trabajo fue aislar Sporothrix sp. de un gato con posible afectación zoonótica en la ciudad de Belém, Pará. La búsqueda activa de casos sospechosos de esporotricosis, realizada por miembros del Centro de Control de Zoonosis de Belém (CCZ, Belém) se informó la sospecha de la enfermedad en un felino, con probable transmisión a su dueño. Se realizó una evaluación clínica y se recogió material biológico del animal para identificar el agente. La evaluación microscópica de la muestra recolectada y el cultivo micológico confirmaron la presencia de Sporothrix sp. en la muestra. Este estudio es el primer en reportar el aislamiento microbiológico de Sporothrix spp. en un gato de la región metropolitana de Belém, Pará, con possible transmisión zoonótica. Esto indica una probable subregistro de casos, un desconocimiento de la realidad de las condiciones de salud y la necesidad de una evaluación más precisa y completa de la esporotricosis en esta región. A esporotricose felina é uma micose subcutânea, infectocontagiosa, de caráter zoonótico. No estado do Pará, até o presente momento, não existem relatos de isolamento deste fungo em gatos, embora já tenham sido diagnosticados casos em humanos e a ocorrência de uma morte, o estado provavelmente possui a situação de subnotificação e desconhecimento do real panorama sanitário de esporotricose. Diante disto, o objetivo deste estudo foi relatar o isolamento de Sporothrix sp. em felino com possível envolvimento zoonótico na cidade de Belém, PA. Através da busca ativa de casos suspeitos de esporotricose, realizada por membros do Centro de Controle de Zoonoses de Belém (CCZ, Belém), foi relatada a suspeita da doença em um felino, com provável transmissão para o seu tutor, ambos provenientes do município de Belém, Pará. A partir da suspeita foram então realizadas a avaliação clínica e coleta de material biológico do animal para identificação do agente. A avaliação microscópica da amostra coletada e cultura microbiana confirmou a presença de Sporothrix sp. na amostra. Este estudo é o primeiro a relatar o isolamento microbiológico de Sporothrix sp. em um gato da região metropolitana de Belém, Pará, com possível transmissão zoonótica. Isso indica provável subnotificação de casos, desconhecimento da realidade das condições de saúde e necessidade de avaliação mais precisa e abrangente da esporotricose na região.

O objetivo desse estudo foi obter informações sobre a percepção dos moradores em relação à esporotricose e sua disseminação em pessoas ou animais, na Zona Norte do Rio de Janeiro. A esporotricose é uma infecção subaguda ou crônica que tem como agente etiológico o complexo fungo Sporotchrix schenkii. A maioria dos moradores respondeu conhecer esporotricose e saber que é causada por agente fúngico, uma pequeno percentual desenvolveu a doença, porém todos os moradores desconheciam o telefone1746 e não sabiam evitar a sua transmissão, não sabiam que era transmissível. Conclui-se que falta de informação e as condições ambientais e comportamentais dos moradores da comunidade, contribuem com a epidemiologia da esporotricose.

Here we investigated the importance of Toll-like receptor 4 (TLR-4) in innate immune response to Sporothrix brasiliensis, a virulent fungus of Sporothrix spp. In vitro assays, using C57Bl/6 (wild type [WT]) bone marrow-derived macrophages (BMDMs), and TLR-4 knockout (TLR-4-/-) showed that the absence of TLR-4 resulted in impaired phagocytosis and lower levels of tumor necrosis factor α (TNF-α), interleukin (IL)-6, and nitric oxide. In vivo assays were also performed, and the mice (WT and TLR-4-/-) were intraperitoneally infected with S. brasiliensis yeast ATCC MyA-4831 and euthanized on days 7, 14, and 28 postinfection, with the following parameters evaluated: fungal burden in liver, spleen, kidney, and brain, and the production of cytokines interferon γ (IFN-γ), TNF-α, IL-2, IL-4, IL-6, and IL-10. The results demonstrate the macrophages dependency on TLR-4 for inflammatory activation and in the absence of TLR-4 during experimental S. brasiliensis infection enhanced dissemination occurred after 14 and 28 days. These data show that TLR-4 signals are important for the recognition of S. brasiliensis by macrophages, and their absence promotes the persistence of the infection.

Submitted by Juliana Aparecida Jellmayer (jujellmayer@yahoo.com.br) on 2020-01-22T14:48:53Z No. of bitstreams: 1 Tese- Juliana Aparecida Jellmayer.pdf: 2251816 bytes, checksum: 2c1016591bd1cbd45930fb679eedd8f6 (MD5) Approved for entry into archive by Maria Irani Coito (irani@fcfar.unesp.br) on 2020-01-22T17:43:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 jellmayer_ja_dr_arafcf_par.pdf: 1370214 bytes, checksum: 74436807dfee8aa64502b2e6c4e18459 (MD5) Made available in DSpace on 2020-01-22T17:43:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 jellmayer_ja_dr_arafcf_par.pdf: 1370214 bytes, checksum: 74436807dfee8aa64502b2e6c4e18459 (MD5) Previous issue date: 2019-11-25 Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) A esporotricose é uma micose de distribuição universal causada por fungos termodimórficos do complexo de espécies Sporothrix schenckii (S. schenckii). No Brasil, a esporotricose é considerada endêmica, sendo normalmente adquirida pela inoculação acidental do seu agente causal através da pele ou através da transmissão zoonótica por gatos infectados. As formas clínicas podem variar entre cutânea, linfocutânea e sistêmica, esta última sendo mais comumente observada em pacientes imunodeprimidos. A ineficácia do tratamento antifúngico contra esta micose, especialmente em pacientes imunocomprometidos, tem levado à busca de terapias mais eficazes e seguras. Com base em vários estudos que mostram a eficiente utilização de células dendríticas como ferramenta para o desenvolvimento de vacinas contra diferentes fungos, o objetivo deste trabalho foi avaliar a capacidade protetora de células dendríticas derivadas da medula óssea (BMDCs) ativadas com as proteínas da superfície celular de S. schenckii (PSCs) em camundongos infectados com S. schenckii strictu sensu. As BMDCs foram estimuladas com PSCs e analisadas quanto à expressão superficial de moléculas co-estimulatórias, bem como à secreção de citocinas pró-inflamatórias. Posteriormente, camundongos sádios foram vacinados com uma ou duas doses de BMDCs para avaliar a sua imunogenicidade e, por último, foi avaliado o efeito das BMDCs em camundongos infectados por S. schenckii. Nossos resultados mostram que as PSCs foram capazes de ativar as BMDCs. A imunização de camundongos saudáveis com BMDCs estimulados por PSCs induziu uma resposta imune com perfil Th17, com aumento da frequência de células IL-17A+ e da liberação de IL-17 e IL-6. Já a vacinação com BMDCs estimuladas com PSCs nos camundongos infectados com S. schenckii levou à redução da carga fúngica no baço desses animais, além do aumento da frequência de células Th IL-17+ e Th IFN+ e uma maior secreção de IL-10, IL-17 e IFN-γ, induzindo uma resposta Th1/Th17 mista. Como um todo, nossos resultados mostram que a vacinação com BMDCs estimuladas com PSCs foi capaz de conferir proteção nos animais vacinados, o que nos leva a crer que é possível, com os ajustes adequados, utilizar DCs como ferramenta terapêutica contra a esporotricose. Sporotrichosis is a universally distributed mycosis caused by thermodimorphic fungi of the Sporothrix schenckii (S. schenckii) species complex. In Brazil, sporotrichosis is considered endemic and is usually acquired by accidental inoculation of its causative agent through the skin or through zoonotic transmission by infected cats. Clinical forms may vary between cutaneous, lymphocutaneous and systemic, the latter being more commonly observed in immunosuppressed patients. The ineffectiveness of antifungal treatment against this mycosis, especially in immunocompromised patients, has led to the search for more effective and safe therapies. Based on several studies showing the efficient use of dendritic cells as a tool for the development of different fungal vaccines, the aim of this work was to evaluate the protective capacity of bone marrow derived dendritic cells (BMDCs) activated with cell surface proteins of S. schenckii (ScCWP) in mice infected with S. schenckii strictu sensu. The BMDCs were stimulated with PSCs and analyzed for surface expression of costimulatory molecules and the secretion of proinflammatory cytokines. Subsequently, healthy mice were vaccinated with one or two doses of BMDCs to assess their immunogenicity, and finally the effect of BMDCs on S. schenckii infected mice was evaluated. Our results show that the ScCWPs were able to activate BMDCs. Immunization of healthy mice with ScCWPs-stimulated BMDCs induced a Th17 profile immune response, with increased Th IL-17A+ cell frequency and IL-17 and IL-6 release. Vaccination with ScCWPs-stimulated BMDCs in mice infected with S. schenckii led to a reduction in the fungal load in the spleen of these animals, as well as increased frequency of Th IL-17+ and Th IFN+ cells and increased IL-10, IL-17 and IFN-γ secretion, inducing a mixed Th1/Th17 response. Overall, our results show that vaccination with ScCWPs-stimulated BMDCs was able to provide protection in vaccinated animals, leading us to believe that it is possible, with appropriate adjustments, to use DCs as a therapeutic tool against sporotrichosis. FAPESP: 2015/04023-0 CAPES 001

RESUMO: A esporotricose é uma micose subcutânea de evolução subaguda a crônica, causada pelo fungo dimórfico e geofílico Sporothrix schenckii. A transmissão zoonótica vem recebendo destaque, tendo os felinos domésticos um importante papel epidemiológico na doença. Este trabalho pesquisa teve como objetivo diagnosticar casos de esporotricose em felinos domésticos atendidos no município de Campos dos Goytacazes/RJ, bem como correlacionar os casos positivos com os sinais clínicos observados nos mesmos, assim como fatores de risco tais quais sexo, animais castrados ou não, dentre outras características. Foram utilizados 100 felinos domésticos, portadores de lesões cutâneas suspeitas de esporotricose, os quais passaram por avaliação clínica minuciosa e preenchimento de fichas individuais. As lesões foram então selecionadas para coleta de material em suabes estéreis e posterior análise laboratorial, através da citologia e cultura fúngica. Dos 100 animais analisados, 66 (66%) foram positivos para Sporothrix spp., sendo 46 (69,6%) machos não castrados, 15 (22,7%) fêmeas não castradas, 4 (6,06%) fêmeas castradas e 1 (1,5%) macho castrado, os quais 89,3% tinham acesso à rua. Quanto à topografia lesional e estado clínico dos animais, 43 (65,2%) apresentavam lesões focais e 23 (34,8%) lesões disseminadas, onde 21 (31,8%) vieram à óbito ou foram submetidos a eutanásia por opção do tutor. Com os resultados dos exames foi possível a adequada prescrição do protocolo terapêutico e acompanhamento de 40 animais (60,6%), e nos casos dos felinos encaminhados (7,5%), foi reportado ao médico veterinário responsável o respectivo diagnóstico para que este escolhesse sua conduta terapêutica. ABSTRACT: Sporotrichosis is a subcutaneous mycosis of subacute to chronic evolution, caused by the dimorphic and geophilic fungus Sporothrix schenckii. The zoonotic transmission has been highlighted, with domestic cats having an important epidemiological role in the disease. This research aimed to diagnose cases of sporotrichosis in domestic cats treated in the city of Campos dos Goytacazes/RJ, as well as to correlate the positive cases with the clinical signs observed in them, as well as risk factors such as sex, castrated animals or not, among other characteristics. One hundred domestic felines were used, with skin lesions suspected of sporotrichosis, which underwent a thorough clinical evaluation and completion of individual files. The lesions were then selected for material collection in sterile swabs and subsequent laboratory analysis, through cytology and fungal culture. Of the 100 animals analyzed, 66 (66%) were positive for Sporothrix spp., Being 46 (69.6%) uncastrated males, 15 (22.7%) uncastrated females, 4 (6.06%) females castrated and 1 (1.5%) castrated male, 89.3% of whom had access to the street. Concerning the lesion topography and clinical status of the animals, 43 (65.2%) had focal lesions and 23 (34.8%) disseminated lesions, where 21 (31.8%) died or were submitted to euthanasia at the option of tutor. With the results of the exams, it was possible to adequately prescribe the therapeutic protocol and follow up of 40 animals (60.6%), and in the cases of the cats referred (7.5%), the respective veterinarian was informed of the respective diagnosis so that this To choose their therapeutic behavior.