Search

Submitted by Neusa Fagundes (neusa.fagundes@unioeste.br) on 2021-01-26T18:06:06Z No. of bitstreams: 2 Elissiane_Amaral2020.pdf: 1292010 bytes, checksum: 6a08ca49b64affd8bc983e15223e5d00 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Made available in DSpace on 2021-01-26T18:06:06Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Elissiane_Amaral2020.pdf: 1292010 bytes, checksum: 6a08ca49b64affd8bc983e15223e5d00 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2020-08-28 The issue of inclusive education has been widespread in the country in recent decades, especially with regard to the deaf student. One of the challenges of the deaf is the learning of the written modality of the Portuguese language and, in particular, the reading and understanding of literary texts. In this direction, this research started with the following guiding question: Can literature and the exposure to literary texts help deaf students in the field of the written Portuguese language or in their better understanding? In order to find the answer(s) to this question, we have outlined, as a general objective, to provide and provoke the taste of learning in the deaf student, opportunizing the socialization, communication and interpretation of the world around him, having in literature a way of access to such learning. This research, in methodological terms, is characterized as an action research. Theoretically, it is based on the discussions of Historical-Cultural Psychology, especially in relation to language and the phases of development of the child, and on the discussions on literacy and literary literature. The study proposed the elaboration of didactic-pedagogical activities that aim at giving deaf students the opportunity to have contact with literature, either through their natural language (LIBRAS) or through their additional language (LP). As a result of this research process, we understand that it will be possible, from the development of the proposed activities, to provide deaf students with a better understanding of the Portuguese language in its written form. O tema da educação inclusiva tem sido amplamente difundido no Brasil nas últimas décadas, especialmente no que diz respeito ao aluno surdo. Um dos desafios dos surdos é a aprendizagem da modalidade escrita da Língua Portuguesa e, em especial, a leitura e a compreensão de textos literários. Nesta direção, esta pesquisa partiu da seguinte questão norteadora: Pode a literatura e a exposição a textos literários auxiliar os estudantes surdos no domínio da Língua Portuguesa escrita ou em sua melhor compreensão? A fim de encontrar resposta(s) a esta problematização, traçamos como objetivo geral proporcionar o acesso a textos literários e provocar o gosto de aprender no aluno surdo, oportunizando a socialização, a comunicação e a interpretação do mundo à sua volta, tendo na literatura uma via de acesso para essas aprendizagens. Esta pesquisa, em termos metodológicos, é caraterizada como uma pesquisa-ação. Teoricamente, sustenta-se nas discussões da Psicologia Histórico-Cultural, sobretudo, com relação à linguagem e às fases de desenvolvimento da criança, e nas discussões sobre letramento e letramento literário. O estudo propôs a elaboração de atividades didáticopedagógicas que visam a oportunizar aos alunos surdos o contato com a literatura, seja por meio de sua língua natural (a LIBRAS) ou pela língua adicional (a Língua Portuguesa). Como resultado desse processo de investigação, entendemos que será possível, a partir do desenvolvimento das atividades propostas, oportunizar que os alunos surdos compreendam melhor a Língua Portuguesa em sua modalidade escrita.

At birth, children establish their first social relationships, which mainly occur through movement. They learn and develop when moving, but such relationships should be qualitative and explore their maximum potential. Discussing movement in preschool is of the utmost importance, because motricity is fundamental to the development of zero to three-year-olds. We arrived at this hypothesis based on our undergraduate studies in pedagogy and on our also in the Group of Studies in Teacher Training and Pedagogical Practices in Early Childhood Education (GEFOPPEI) and in the Research Group: Educational Work and Schooling (GENTEE), in addition to experiences with small children. Thus, this study aimed to analyze the movement of zero to three-year-olds in the development of pedagogical practice, in order to verify its influence on their learning and development process. Seeking to elucidate our concerns about the theme of this work, we carried out a bibliographical study and fieldwork from a historical-cultural perspective. Our field research was developed in a CMEI in the municipality of Paiçandu- PR, where we applied a questionnaire to four teachers who worked with children from zero to three years involving the theme of the movement and analyzed their pedagogical practice. The work was divided into four sections to achieve this objective: 1) We contextualized how the hominization and humanization of humanity occurred and presented assumptions of historical-cultural theory to base discussions about the question of the movement of small children, in which there is reference to the quality of pedagogical work to promote learning and development. 2) We explained the concepts of learning and development according to selected literature that brings movement into official documents. 3) We pointed out the methodology used, discussed the concept of movement in the development of zero to three-year-olds and characterized the spaces and the classes of the municipal preschool where we carried out our fieldwork. 4) We analyzed the ideas of professionals who work at municipal preschools and discussed how pedagogical work to contemplate movement is developed, listing some categories. In this last section, we also discussed the importance of considering educational proposals that stimulate movement in different moments of pedagogical work with zero to three-year-olds and indicate some possible propositions. We believe that daycare professionals should consider movement to be a fundamental element in work with little ones, something that should be developed daily and qualitatively at preschools, enabling the little ones to fully develop. A qualitatively developed study on movement will determine the development of all superior functions of the subject, complexly exploring all its potential Ao nascer, a criança estabelece suas primeiras relações sociais, as quais ocorrem principalmente por meio do movimento. Ao movimentar-se ela aprende e se desenvolve, mas, para isso, tais relações devem ocorrer de forma qualitativa, explorando suas máximas potencialidades. Acreditamos que discutir o movimento na Educação Infantil seja de suma importância, pois a motricidade é fundamental no desenvolvimento das crianças de zero a três anos. Chegamos a essa hipótese tendo como base nossos estudos que ocorreram tanto na graduação em Pedagogia como também no Grupo de Estudos em Formação Docente e Práticas Pedagógicas na Educação Infantil (GEFOPPEI) e no Grupo de Pesquisa: Trabalho Educativo e Escolarização (GENTEE), somado a nossa atuação com crianças pequenas. A partir disso, este trabalho tem o objetivo de analisar o movimento com crianças de zero a três anos no desenvolvimento da prática pedagógica, a fim de verificar sua influência no processo de aprendizagem e desenvolvimento das mesmas. Com o intuito de elucidar nossas inquietações sobre o tema, nesse trabalho, realizamos uma pesquisa bibliográfica e um estudo de campo respaldando-nos na perspectiva histórico-cultural. Nossa pesquisa de campo foi desenvolvida em um CMEI no município de Paiçandu- PR, onde aplicamos um questionário a quatro professoras que trabalhavam com crianças entre zero a três anos envolvendo o tema do movimento e analisamos a prática pedagógica das mesmas. Para alcançar nosso objetivo, dividimos o trabalho em quatro seções: na primeira, contextualizamos como se deu o processo de hominização e humanização da humanidade, bem como apresentamos os pressupostos da Teoria Histórico-Cultural para fundamentar as discussões a respeito do tema sobre a questão do movimento com crianças pequenas no que se refere à qualidade do trabalho pedagógico para promover aprendizagem e desenvolvimento; na segunda seção, explicitamos os conceitos de aprendizagem e desenvolvimento com base na literatura selecionada trazendo o movimento nos documentos oficiais; na terceira seção, pontuamos a metodologia utilizada, discutimos o conceito de movimento no desenvolvimento da criança de zero a três anos e caracterizamos os espaços e as turmas do Centro Municipal de Educação Infantil no qual realizamos nossa pesquisa de campo; na quarta seção, analisamos as concepções de profissionais que atuam nos Centros de Educação Infantil discutindo como é desenvolvido o trabalho pedagógico para contemplar o movimento elencando algumas categorias. Nessa última seção, buscamos também discutir a importância de contemplar propostas educativas que estimulem o movimento nos diferentes momentos do trabalho pedagógico com a faixa etária de zero a três anos, sinalizando algumas possíveis proposições. Acreditamos que o movimento deve ser considerado pelos profissionais que atuam na creche como um elemento fundamental no trabalho com os pequenos, algo que deve ser desenvolvido no dia a dia da Educação Infantil de forma qualitativa, possibilitando que os pequenos se desenvolvam integralmente. Um trabalho desenvolvido qualitativamente com o movimento será determinante para o desenvolvimento de todas as funções superiores do sujeito explorando de forma complexa todas as suas potencialidades 184 f.

As células sangüíneas originam-se da medula óssea através da célula tronco que sofre processo de proliferação, diferenciação e maturação no microambiente hematopoiético. O microambiente hematopoiético é uma estrutura altamente organizada composta de células estromais, moléculas da matriz extracelular (MEC) e citocinas. A desnutrição protéico-energética diminui a produção de células sangüíneas e interfere na defesa do organismo. Neste trabalho estudamos os efeitos da desnutrição protéica (dieta contendo 4% de caseína) sobre a MEC da medula óssea em camundongos. Avaliamos a composição da MEC através de SDS-PAGE 7,5% e Western blot para Fibronectina (FN), laminina (LN) e trombospondina (TSP). Verificamos a capacidade da MEC aderir e sustentar proliferação da célula mielóide FDC-P1, na ausência e na presença de citocinas (GM-CSF e IL3). Avaliamos também a capacidade de ligação destas citocinas na MEC. O perfil eletroforético mostrou diferenças nas proteínas da MEC do animal desnutrido em relação ao controle. Através da densitometria dos géis observamos nas amostras obtidas do animal desnutrido, maior intensidade nas bandas de peso molecular 220, 182, 108 e 56 KDa em relação ao controle. Em 72 KDa a banda foi mais intensa nas amostras dos animais controles. A banda de 60 KDa foi evidenciada apenas nas amostras obtidas dos animais desnutridos. As bandas de 123 e 49 KDa foram evidenciadas apenas nas amostras dos animais controles. A expressão de FN, LN e TSP foi maior nas amostras obtidas dos animais desnutridos. Os ensaios de adesão e proliferação na presença e ausência de citocinas não apresentaram diferenças significativas entre as amostras. Quando avaliamos a capacidade da MEC ligar-se ao GM-CSF, houve maior interação com a MEC proveniente do animal desnutrido do que a MEC do animal controle. O teste de ligação para o IL3 não mostrou diferenças entre as amostras. Esses achados sugerem que a desnutrição protéica induz modificações na MEC, alterando o microambiente hematopoiético. Blood cells have their origin at the bone marrow through the stem cell which undergoes a proliferation, differentiation and maturation process in the hematopoietic microenvironment. The hematopoietic environment is a highly organized structure formed by stromal cells, extracellular matrix (ECM) molecules, and cytokines. Protein-energy malnutrition reduces the production of blood cells, interfering with the defense of the organism. In the present work we have studied the effects protein malnutrition has on the ECM of bone marrow in mice. We have evaluated ECM composition by means of SDS PAGE 7,5% and Western blot for fibronectin (FN), laminin (LN) and thrombospondin (TSP). We assessed the capacity ECM has in adhesion and support of proliferation of the FDC-P1 myeloid cell both in the absence and in the presence of GM-CSF and IL3 cytokines. We have also measured the binding capacity of these cytokines in the ECM. The electrophoresis profile showed the existence of differences between the ECM proteins in the undernourished animal and the control. Using gel densitometry, we observed in samples from the undernourished animal a greater intensity of bands of 220, 182, 108, 60 and 56 KDa molecular weight as compared to control. At 72 KDa the band was more intense on samples from control animals. The 60 KDa band was evident only on samples taken from undernourished animals. The 123 and 49 KDa bands were evident on control animals only. Expression of FN, LN, and TSP was greater on samples from undernourished animals. Adhesion and proliferation assays, both in the presence and in the absence of cytokines, did not show significant differences among samples. When we evaluated the capacity ECM has to bind to GM-CSF, a greater interaction was seen with the ECM from the undernourished animal than the ECM from the control. Binding test for IL3 showed no differences existed among samples. Such findings suggest protein malnutrition causes alterations of the ECM, modifying the hematopoietic microenvironment.

La termografía infrarroja es una metodología de análisis térmico empleada para la medición de la radiación electromagnética emitida por un cuerpo, sin interferir en el proceso a estudiar, por lo que resulta adecuada para analizar los gradientes de temperatura que aparecen en la superficie de dicho cuerpo. En este proyecto se aplicará esta técnica como medida de control de un proceso de captura de gas CO2. Se realizará un estudio del proceso de captura, centrándose en la adquisición y tratamiento de datos de temperatura proporcionados mediante dos métodos, la Termografía infrarroja (Sistema de contacto indirecto) y los Termopares (Sistema de contacto directo). El empleo de la cámara termográfica permite obtener datos fiables de los distintos gradientes térmicos superficiales que aparecen tanto en dirección axial como radial. La trasmisión de calor en este proceso es dependiente del tiempo, por lo que el incremento de temperatura no es constante. Los termogramas obtenidos indicarán la variación de temperatura en la superficie de la columna. Para completar al análisis infrarrojo, se contrastarán con los valores adquiridos por termopares en contacto directo con el relleno de la columna, sometidos a un tratamiento informático. Esto permitirá calcular un perfil de temperaturas en el interior de la columna y se podrá concluir si la termografía infrarroja es una metodología adecuada para el control de este tipo de procesos. A Termografía Infravermella é unha metodoloxía de análise térmica utilizada para medir a radiación electromagnética emitida por un corpo, sen interferir co proceso a ser estudado, polo que é conveniente analizar os gradientes de temperatura que aparecen na superficie do corpo. Este proxecto vai aplicar esta técnica como unha medida de control dun proceso de captura de CO2. Un estudo do proceso de captura, con foco na adquisición e procesamento de datos de temperatura proporcionados por dous métodos, o sistema de termográfía infravermella (contacto indirecto) e Termopares (contacto directo). O uso de imaxes térmicas permite obter datos fiables dos diferentes gradientes térmicos superficiais que aparecen tanto en dirección radial coma axial. A transferencia de calor neste proceso é dependente do tempo, polo que o incremento de temperatura non é constante. Os termogramas obtidos indican a variación da temperatura da superficie da columna. Para completar a análise infravermello, serán comparados con valores obtidos por termopares en contacto directo co recheo da columna, tratados nun ordenador. Isto permitirá calcular un perfil de temperaturas dentro da columna e poderase concluir se a termografía infravermella é unha metodoloxía adecuada para o control destes procesos.

Acompanha: Glossário de termos biológicos em língua brasileira de sinais (GBLI) No processo de ensino-aprendizagem de alunos surdos, em especial no ensino de biologia, muitos tradutores intérpretes de libras e professores regentes, em razão da carência de sinais específicos de diversas áreas do conhecimento na língua de sinais, têm dificuldades em transmitir ideias e conceitos específicos, o que gera incompreensão e perda na agilidade de transferência de informações (SOUZA; SILVEIRA, 2011). Diante disso, alguns alunos surdos de um colégio da região norte do Paraná, motivados por um espírito empreendedor e auxiliados por professores de biologia e intérpretes de libras, empenharam-se em dicionarizar os principais termos de biologia presentes em livros didáticos do ensino médio. Esta dissertação apresenta a avaliação e aplicação de uma ferramenta de apoio (glossário de libras) no ensino de biologia do ensino médio para alunos surdos. Os objetivos específicos da pesquisa foram: identificar as dificuldades no ensino de biologia para alunos surdos, determinar a carência de sinais no ensino de biologia para os alunos surdos do ensino médio, propor para a comunidade de alunos surdos e professores de biologia do ensino médio um conjunto de sinais que pudesse contribuir para o processo de ensino-aprendizagem, avaliar a adequação dos sinais propostos ao cotidiano da sala de aula e apresentar à comunidade do ensino médio um glossário de libras para a área de biologia. Os estudos bibliográficos contemplados nesta pesquisa foram histórico da educação de surdos, estrutura linguística da língua de sinais e restrições para a formação de novos sinais, as necessidades de termos científicos específicos para o ensino e aprendizagem de alunos surdos e o empreendedorismo e sua relação no meio educacional. Para coleta de dados utilizou-se questionários abertos e fechados com professores regentes de biologia e alunos surdos do ensino médio de um colégio estadual do norte do Paraná. Os resultados obtidos por meio da pesquisa qualitativa e quantitativa demonstraram a real necessidade de um produto educacional que favorecesse a aprendizagem de termos científicos-biológicos em libras. In the process of teaching and learning of deaf students, especially in biology teaching, many sign language translators-interpreters and school teachers find difficulties to convey specific ideas and concepts, which create misunderstanding and loss of information transfer agility (SOUZA; SILVEIRA, 2011). This is due to lack of specific signals from different areas of knowledge in sign language. Therefore, some deaf students from a school in the northern region of Paraná, motivated by an entrepreneurial spirit and aided by biology teachers and sign language interpreters, endeavored to dictionarize the main terms of biology present in teaching high school books. This work presents the evaluation and application of a support tool (sign language glossary) in teaching high school biology to deaf students. The specific objectives of the research were to identify the difficulties in teaching biology to deaf students, determine the lack of signs in biology education for the deaf high school students, proposing to the community of deaf students and high school biology teachers a set of signs that could contribute to the process of teaching and learning, assessing the adequacy of signs proposed to the classroom everyday and submit to the high school community a sign language glossary for the biology area. The theoretical basis of this research consisted in the history of deaf education in the linguistic structure of sign language and restrictions on the formation of new signs, the needs of specific scientific terms for teaching and learning of deaf students and the entrepreneurship and its relationship in the educational environment. For data collection, it was used open and closed questionnaires with biology school teachers and deaf high school students from a state school in northern Paraná. The results obtained through a qualitative and quantitative research demonstrated the real need for an educational product that favors the learning of scientific / biological terms in sign language.

This research aimed to identify the didactic and pedagogical possibilities of a systematic work with mental calculation, in a dialogic way using Sign Language (Libras) with fluent deaf students, considered here as individuals who understand and interact with the world through visual experiences, being the Sign language the most important of these experiences. The investigative question was 'What are the strategies used by deaf students in teaching situations of mental calculation? The research was theoretically supported on Vergnaud's Theory of Conceptual Fields; on researches addressing the specificity regarding Sign Language and those addressing Attention Deficit Hyperactivity Disorder (ADHD); on researches on mental calculation and the Decimal Numbering System (DNS), and the elementary operations of the Additive Conceptual Field. The methodology chosen was Didactic Engineering, with the implementation of a didactic sequence composed of two blocks: the DNS and the additive. The research subjects were three deaf students who attended the end of the 6th year at the beginning of the research. The main results were: subjects were still at the building process of DNS, with the notion of the numbers "ad infinitum" related not only to the extension of the numerical sequence, but mainly to the consolidation of the rules of this system; that differentiating between spoken numbering and numbering writing was a challenge to be overcome at the DNS block; the deaf, when counting, require a combination of several elements, such as the hand gesture to indicate, the look and the hand again to signal the numbers and that, in some cases, can make counting difficult. The main strategies they used focused on the following: we observed counting from the first number uttered (not performing an overcounting); perform overcounting with and without the aid of fingers; perform countdown with and without the aid of fingers; use embedded calculations in their numeric repertoire; mentally reproduce the algorithm, using automated rules; apply numbers and operations properties and perform calculations based on the perception of some regularities of the announced numbers. The dynamics employed favored attention, self-control, and self-confidence of deaf individuals diagnosed with ADHD. Esta pesquisa objetivou identificar as possibilidades didático-pedagógicas de um trabalho sistematizado com cálculo mental, de forma dialógica, em Libras, com alunos surdos fluentes, aqui considerados como sujeitos que compreendem e interagem com o mundo por meio de experiências visuais, sendo a língua de sinais, a Libras, a mais importante dessas experiências. O trabalho partiu da seguinte questão investigativa: Quais as estratégias utilizadas pelos alunos surdos em situações didáticas de cálculo mental? A pesquisa foi sustentada teoricamente na Teoria dos Campos Conceituais de Vergnaud; em pesquisas que trataram da especificidade referente à Libras e que abordam o Transtorno de Déficit de Atenção e Hiperatividade (TDAH); em pesquisas realizadas sobre cálculo mental e sobre o Sistema de Numeração Decimal (SND) e as operações elementares do Campo Conceitual Aditivo. A opção metodológica foi a Engenharia Didática, com a aplicação de uma sequência didática composta por dois blocos: o do SND e o Aditivo. Os sujeitos de pesquisa foram três alunos surdos que cursavam o final do 6° ano no início da pesquisa. As principais constatações foram: os sujeitos surdos ainda estavam em processo de construção do SND; a noção dos números 'ad infinitum' relacionada não apenas à extensão da sequência numérica, mas, principalmente, à consolidação das regras deste sistema; a indiferenciação da numeração falada para a numeração escrita constituiu um desafio a ser vencido no bloco do SND; que o surdo, ao realizar a contagem, exige a combinação de diversos elementos, como o gesto da mão para indicar, o olhar e novamente a mão para sinalizar os números e isso, em certos casos, pode dificultar a contagem. As principais estratégias utilizadas se concentraram nisto: identificação da contagem a partir do primeiro número anunciado (não realizando uma sobrecontagem); realização da sobrecontagem com e sem o auxílio dos dedos; o uso da contagem regressiva com e sem auxílio dos dedos; a recorrência a cálculos incorporados no seu repertório numérico; a reprodução mental do algoritmo; a mobilização de regras automatizadas; a aplicação das propriedades dos números e das operações e a realização do cálculo com base na percepção de algumas regularidades dos números anunciados. A dinâmica instaurada favoreceu a atenção, o autocontrole e autoconfiança dos sujeitos surdos diagnosticados com TDAH. 259 f

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2014. As Células-tronco progenitoras hematopoiéticas (CTPHs) do sangue de cordão umbilical e placentário (SCUP) tem sido utilizadas no tratamento de diversas doenças hematológicas neoplásicas ou não. O emprego de CTPHs do SCUP apresenta como principais vantagens a facilidade de obtenção, a ausência de riscos para a mãe e o(a) doador(a), disponibilidade de uso imediato pelo armazenamento de unidades testadas e tipadas para antígeno leucocitário humano (HLA), menor frequência e gravidade da doença do enxerto contra o hospedeiro (DECH) e a não exigência de total paridade na tipagem HLA. Como principais limitações estão o número reduzido de CTPHs que o SCUP pode prover para um transplante em função do volume limitado e a demora na pega do enxerto. Por sua vez, o sucesso do transplante de CTPHs é dependente da dose celular transplantada por kg de peso corporal do receptor, o que praticamente restringe a utilização do SCUP a pessoas com peso corporal até 50 kg. Para suplantar essa limitação têm sido utilizadas estratégias que envolvem o estabelecimento de critérios para a seleção e armazenamento das unidades de SCUP, transplante de mais de uma unidade de SCUP e a expansão ex vivo das CTPHs do SCUP. A cultura das CTPHs sem células do microambiente hematopoiético priva as CTPHs das interações celulares e moleculares que ocorrem no mesmo. O presente trabalho tem por objetivo avaliar a expansão ex vivo de CTPHs do SCUP, utilizando a co-cultura com células-tronco mesenquimais (CTMs) obtidas da membrana coriônica (MC) e do vilo de placentas humanas para suporte da hematopoiese em ambiente 2D e 3D. Para isso as CTMs foram caracterizadas morfologicamente e imunofenotipicamente (CD73, CD90, CD105, CD34 e CD45) e analisadas quanto à expressão gênica quantitativa das citocinas de interesse hematopoiético SCF, Flt3-L, TPO, IL6, IL16 e SDF1, nas passagens P1, P5 e P10. No SCUP foi realizado hemograma, contagem e separação de células CD34+ e subpopulações e avaliado o potencial clonogênico. Foram investigadas correlações entre os fatores materno-fetais e parâmetros do SCUP, taxas de expansão ex vivo e entre os próprios parâmetros do SCUP. Para expansão ex vivo foram realizadas co-culturas com CTMs da MC em P1 e do vilo em P5, em ambiente 2D e co-culturas com CTMs do vilo em P5, em ambiente 3D constituído de uma matriz de colágeno I e 6-sulfato de condroitina. Os resultados demonstraram que as CTMs da MC e do vilo apresentam características morfológicas e imunofenotípicas típicas de CTMs e expressam as citocinas de interesse hematopoiético, nas três passagens analisadas. As CTMs da MC em P1 e do vilo em P5 apresentaram o melhor perfil de expressão de citocinas e foram selecionadas para os experimentos de expansão ex vivo. A análise das correlações entre os diferentes fatores e parâmetros avaliados sugere a seleção de unidades de SCUP oriundas de doações com idade gestacional acima de 39,5 semanas, contagens de células nucleadas totais (CNT) acima de 13,05 x 106 células por mL, percentagem de eritroblastos (NRBC) maior de 2,875% e com contagem de células CD34+ superiores a 23,73 x 103 células por mL, para obtenção de amostras de melhor conteúdo hematopoiético e mais apropriadas para a expansão ex vivo. O suporte das CTMs foi crucial para a expansão ex vivo das CTPHs. As CTMs do vilo em P5 promoveram melhores taxas de expansão das CTPHs que as da MC em P1, em ambiente 2D e foram selecionadas para a expansão em ambiente 3D. A expansão das CTPHs com CTMs do vilo em ambiente 2D demonstrou melhores taxas de expansão que no ambiente 3D. Com base nos resultados conclui-se que a melhor condição para expansão ex vivo de CTPHs do SCUP, compreende a co-cultura de CTPHs oriundas de doações com idade gestacional acima de 39,5 semanas, contagens de CNT acima de 13,05 x 106 por mL, percentagem de NRBC igual ou maior de 2,875% e com contagem de células CD34+ superiores a 23,73 x 103 células por mL, em ambiente 2D e com suporte de CTMs do vilo em P5. Abstract : Umbilical cord blood (UCB) has been used as an alternative source of hematopoietic stem progenitor cells (HSPC) in HSPC transplantation to treat many hematological diseases. As a HSPC source, UCB has many practical advantages such as: easy procurement with no risks for donors and mothers, immediate availability if stored fully tested and human leucocyte antigen (HLA) typed, and a toleration of some degree of HLA mismatch. On the other hand, its major limitation is the low cell dose delivered. It is known that cell dose is the most important factor for engraftment. As a result, delayed neutrophil and platelet recovery are linked to UCB transplantation. Some strategies to overcome its main limitation include establishing criteria for the selection and storage units of UCB, transplanting more than one unit of UCB, and ex vivo expansion of CBHSPC (cord blood-derived hematopoietic stem progenitor cells). CBHSPC ex vivo expansion in 2D or 3D culture systems without cells from hematopoietic microenvironment deprived them of cell-to-cell contact and molecular interactions during hematopoiesis in vivo. This study is focused on ex vivo expansion of CBHSPC in a culture system with stromal support provided by MSC (mesenchymal stem cells) from human placental chorionic membrane (cMSC) and villi (vMSC). This approach includes cultures in 2D and 3D systems. The 3D cultures were performed on scaffold of cross-linked bovine collagen type I and chondroitin-6-sulfate. MSC morphology and phenotype (surface antigens CD73, CD90, CD105, CD34 and CD45) from both tissues were analyzed at three passages (P1, P5 and P10). In addition, real time PCR was performed to quantify gene expression of hematopoietic cytokines (SCF, Flt3-L, TPO, IL6, IL16 and SDF1) by MSC. Procedures in cord blood included CBC (complete blood count), CD34+ cells count and its subpopulations, CD34+ cell isolation, and clonogenic potential evaluation. Associations of maternal and fetal factors with UCB parameters and its clonogenic potential data as well as ex vivo expansion rates were addressed. cMSC from P1(cMSCP1) and vMSC from P5 (vMSCP5) were used in co-cultures for ex vivo expansion of CBHSPC. Results - cMSC and vMSC from all passages showed morphological and phenotypic features typically of MSC as well as expressed all hematopoietic cytokines evaluated in this study; cMSCP1 and vMSCP5 showed the best cytokines expression profile and were selected for further experiments. Analysis regarding associations among all results suggest that UCB from gestational age greater than 39,5 weeks, with nucleated cells count above 13,05 x 106 cells per mL, nucleated ed blood cells (NRBC) percentage greater than 2,875% and CD34+ cell counts greater than 23,73 x 103 cells per mL are the best UCB samples for ex vivo expansion and hematopoietic content. MSC presence was crucial for CBHSPC ex vivo expansion in both 2D and 3D cultures; vMSCP5 promoted greater expansion rates than cMSCP1 in 2D co-cultures. vMSCP5 was selected for 3D expansion cultures. When comparing expansion rates between 2D and 3D co-cultures (both with vMSCP5), 2D co-cultures promoted greater expansion rates than 3D cocultures.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2014. A placenta é um órgão essencial no desenvolvimento embrionário e fetal. Este órgão contém vários tipos de células, entre as quais diferentes populações de células-tronco ou progenitoras, tais como as células-tronco mesenquimais (CTM), células-tronco hematopoéticas (CTHs) e trofoblásticas. O objetivo deste trabalho foi estudar a organização do nicho molecular de células-tronco no tecido da placenta humana a termo. Para isto, foram utilizadas técnicas histológicas, histoquímicas, imuno-histoquímicas e de microscopia eletrônica de transmissão (MET). As técnicas de coloração histológica empregadas nas amostras do tecido tiveram como objetivo identificar, principalmente, as características estruturais das vilosidades coriônicas (VC) e da decídua basal (DB). A técnica de coloração de Hematoxilina e eosina proporcionou uma visão geral do tecido placentário, de modo a permitir a identificação dos elementos teciduais da placenta. A técnica de coloração azul brilhante de Coomassie foi utilizada para identificar a presença de proteínas totais neste tecido. Outro teste utilizado foi Azul de toluidina (ATO) para identificar a presença de polissacarídeos ácidos, através da reação de metacromasia. As amostras, contendo o tecido placentário, reagiram mais fortemente com o ATO nas regiões do sinciciotrofoblasto, nos núcleos das células que compõem o estroma e na parede dos vasos sanguíneos das vilosidades coriônicas. Na região da decídua basal, a reação também foi positiva ao ATO nas células deciduais, porém, na matriz extracelular esta reação foi menos intensa, quando comparada com as regiões do sinciciotrofoblasto e da parede dos vasos sanguíneos das vilosidades coriônicas. Testes realizados com o ácido periódico de Schiff mostraram que a reação foi positiva em praticamente todas as regiões das vilosidades, mas houve uma positividade maior na região do sinciciotrofoblasto. Com relação à decídua basal (DB), a presença de polissacarídeos neutros também foi confirmada em praticamente todas as regiões da decídua. A técnica de Mallory revelou que fibras de colágeno estão presentes em grande parte nas regiões tanto das vilosidades coriônicas, bem como, na decídua basal. Esta técnica é capaz de revelar a presença dos diferentes tipos colágenos que estão presentes tanto nas vilosidades coriônicas quanto na decídua basal, porém, sem a identificação de quais são os tipos presentes neste tecido. A técnica de imuno-histoquímica empregada no tecido da placenta teve como objetivo avaliar a expressão dos marcadores CD73, CD105 e CD34, bem como, o perfil de expressão do colágeno do tipo I, fibronectina e laminina na matriz extracelular (MEC). O perfil expresso10pelos marcadores CD73+, CD105+ e CD34+ na superfície da membrana das células, e pelas moléculas de MEC como o colágeno do tipo I, a fibronectina e a laminina, se mostrou positivo. Estes resultados nos mostram que as CTMs tem uma disposição na região das vilosidades coriônicas, em associação com moléculas de laminina e de colágeno. A fibronectina se expressa nas vilosidades coriônicas sempre com associação à lâmina basal e perivascularmente. No sinciciotrofoblasto as CTM se associam próximas às células CD34+ com característica de CTH. As análises ultraestruturais demonstraram plena atividade metabólica e de células que organizam a placenta, tanto bioquimicamente quanto metabolicamente, sugerindo que a placenta, mesmo a termo, é ainda capaz de produções celulares, tanto de CTs quanto na homeostase do tecido. Abstract : Placenta is an essential organ in the development of the embryo and/or fetus. It is a readily available material, easy to obtain, and there is no association between its use and risks for the mother or fetus health. The organ contains several types of cells, including different populations of stem cells or progenitor cells, such as mesenchymal stem cells (CTM), hematopoietic stem cells (CTHs) and trophoblast. The aim of this work was to study the molecular niche organization of stem cells in the tissue of human placenta at term. Therefore, it was possible to use histological, histochemical and immunohistochemical techniques, and also, transmission electron microscopy (TEM). Histological staining techniques employed on tissue samples aimed to identify, mainly, the structural characteristics of chorionic villi (VC) and decidua basalis (DB). Hematoxylin and eosin stain provided placental tissue overview in order to enable the identification of placenta tissue elements. Coomassie brilliant blue staining technique was used to determine the presence of total protein in the tissue. Results showed the placental tissue structures as a whole. Another test performed was toluidine blue (ATO) to identify the presence of acidic polysaccharides by metachromasia reaction. Samples with placental tissue reacted more strongly to the ATO in regions of syncytiotrophoblast, cells nuclei comprising the stroma and blood vessels wall of the chorionic villi. In the basal decidua region, there was also a positive reaction to ATO. However, it was less intense when compared to the regions of syncytiotrophoblast of chorionic villi of tissue. Tests performed with periodic acid of Schiff showed that the reaction was positive in virtually all regions of the villi, but there was a greater positivity in the syncytiotrophoblast region. With respect to basal decidua (DB), the presence of neutral polysaccharides was also confirmed in practically all regions of decidua. Mallory technique revealed that collagen fibers are present largely in the areas of both chorionic villi and basal decidua. That technique can reveal the presence of different collagen types that are present in both chorionic villi and basal decidua; however, without identifying which types are present in the tissue. The immunohistochemical technique employed in placental tissue aimed to evaluate the markers expression: CD73, CD105 and CD34, as well as the expression profile of collagen type I, fibronectin and laminin in the extracellular matrix (MEC). Profile expressed by markers CD73+, CD105+ and CD34+ on cells membrane surface and MEC molecules such as collagen type I, fibronectin and laminin showed in a positive12way. These results show that CTMs have a disposition in the region of chorionic villi in association with molecules of laminin and collagen. Fibronectin is expressed in chorionic villi always associated with basal lamina and perivascularly. In the Syncytiotrophoblast, CTM associate close to CD34+ cells with CTH characteristics. Ultrastructural analysis presented full metabolic activity and cells that organize the placenta both biochemically and metabolically, suggesting that the placenta even at term is still capable of cells production not only of CTs, but also for tissue homeostasis.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2014. Modelo experimental de isquemia cerebral focal em camundongos C57/BL6 resultou em isquemia patológica no córtex cerebral. Neste estudo, a isquemia focal foi induzida pela oclusão da artéria cerebral média. Analisamos as camadas corticais I, II/III, V and VI nas áreas motoras caudal forelimb area (CFA) e medial agranular cortex (AGm) em Grupos controle e isquêmico. Nossos resultados demonstraram evidentes diferenças morfológicas e quantitativas em neurônios normais, neurônios isquêmicos, astrócitos e microglia-like localizados nas camadas superficial (II/III) e profunda (V). Alterações patológicas celulares foram mais proeminentes, na camada V, da CFA, mostrando picnose nuclear, fragmentação da cromatina, degeneração principalmente em neurônios, como também, evidências morfológicas de apoptose. A área cortical motora CFA, foi severamente comprometida pelo insulto isquêmico comparado a área AGm, revelando neuroinflamação no tecido pela da proliferação de astrócitos e microglia-like.Também identificamos alterações celulares nas áreas motoras AGm e CFA, após 48 horas, de isquemia focal experimental, empregando procedimento histológico padrão com as colorações de Hematoxilina?Eosina (H&E) e Nissl e imunomarcação com NeuN, GFAP e Caspase-3. Entre as alterações patológicas o edema celular foi observado em neurônios e astrócitos, devido a lesão isquêmica especialmente na CFA. O edema é uma severa complicação clínica que ocorre em muitas doenças neurovasculares, e constitui uma das maiores causas de morbidade e morte em todo o mundo. Verificamos neste modelo, que o evento hipóxico/isquêmico foi associado com edema citotóxic e edema vasogênico. A permanente oclusão vascular resultou na redução do fluxo sanguíneo para o cérebro e consequentemente acúmulo de líquido em neurônios e astrócitos principalmente no córtex motor primário (referido como CFA). Alterações vasculares foram caracterizadas por descontinuidade endotelial e evidente hipertrofia de astrócitos em torno do edema vasogênico. Gliose reativa foi caracterizada por alterações específicas na morfologia dos astrócitos e aumento na síntese de Glial Fibrillary Acidic Protein (GFAP) e cicatriz glial. Baseados em nossos resultados, concluímos que o modelo de isquemia focal em camundongos, determinou importante astrogliose, na camada V da CFA, e a AGm não demonstrou esta alteração patológica. Abstract : Experimental focal cerebral ischemia results in cortical brain lesion followed by ischemic stroke. In this study, focal cerebral ischemia was induced in mice by occlusion of the middle cerebral artery. We studied I, II/III, V and VI cortical layers in caudal forelimb area (CFA) and medial agranular cortex (AGm) from control and ischemic motor cortex C57BL/6 mice. We observed significant differences in the extent of the neurons, ischemic neurons, astrocytes and microglia in the superficial II/III and deep V cortical layers analyzed in CFA and AGm motor cortex. We verified that the cellular changes were more prominent on V layer of primary motor cortex (CFA) with nuclear pyknosis, chromatin fragmentation, necrosis and degeneration, as well as, morphologic evidence of apoptosis mainly in neurons. As result, the caudal forelimb area (CFA) was more severity impaired than medial agranular cortex (AGm) in focal cerebral ischemic model. This was evident with proliferation of astrocytes that could result in neuroinflammation by microglia-like cells.This study described pathologic variations produced by ischemic lesion in mice, especially in the AGm and CFA, after forty-eight hours of the focal ischemia, by histologic procedure standard with Hematoxilina?Eosina (H&E) e Nissl staining and immunohistochemistry with NeuN, GFAP e Caspase-3 antybody. The results revealed pronounced edema in the neurons and astrocytes with altered nuclear volume. Brain edema is a severe clinical complication in a number of pathologies, and it is a major cause of increased morbidity and death worldwide. Cerebral hypoxia/ischemia is associated with cytotoxic edema and vasogenic edema. In a mouse model of ischemic lesion, we observed permanent vascular occlusion, resulting in reduced blood flow to the brain, swollen neurons and pronounced cytotoxic astrocyte swelling, as well as neuropathological indications of vasogenic edema, especially in the primary motor of the cortex (CFA). Vascular damage was characterized by endothelial discontinuity and evident reactive astrocyte hypertrophy around areas of vasogenic edema. Reactive astrogliosis was characterized by specific alterations of astrocyte morphology with pronounced upregulation of Glial Fibrillary Acidic Protein (GFAP) expression and scar formation. Based on results from our mouse model of focal cerebral ischemia, it was concluded that reactive astrogliosis was prominent in layer V of CFA motor cortex, while no layer of AGm demonstrated such abnormality.

This present research has the objective of analyzing the main registers of semiotic representation and their possible coordination in the teaching and learning of algebra for deaf students fluent in sign language. With the purpose of to provide more elements for analysis and considering the need to work with a greater diversity of semiotic representation systems, according to the theory adopted by Duval, the content of the chosen algebra was the inequality, not only because of the variety of records, but also because of the connection that exists with other contents, such as functions and equations. For achievement of the objective, the methodology used was the Didactic Engineering disseminated by Artigue; she allowed a planned application of a sequence with five activities, realized with seven deaf Brazilian students in high school, all of special school located in the pioneer north of Paraná. To extend the search, in an inclusive process different from the Brazilian, were also evaluated the previous knowledge of three Deaf students of high school Spanish in a regular school of Barcelona. The obtained results of the experiments with Brazilian students were that the language of signs, being a visual / motor language, favored the identification the representational algebraic elements, during the conversion activity, by connecting performed with the graphic records. These deaf students, by converting an algebraic expression for sign language and for writing, and vice versa, supported itself, many times, in graphical intermediate representation, including describing the details of this representation. Even sign language and writing have the same function meta-discursive of communication, they differ in their rules accordingly; the constitutive units' representations of each registers are very different. The Brazilians deaf, by translating algebraic expressions to sign language, juxtaposed two signals in the configuration of the hands, as in mathematical language. On the contrary, the previous results of the diagnostics with the deaf in Spain, revealed that these students translated algebraic expressions for sign language, sequentially, with the predominant use of dactylology, that is to say, the same as written language. The process of oral inclusion, which is tradition in Spain, presented strong influence on the cognitive process of these students. The cognitive activity conversion from written language or sign language for algebraic record and this for one to graphic record was insufficient for these students. We conclude that when the field study is algebra, with different meanings for the letters, the use of different registers of representation becomes essential for any deaf student user of sign language. Mental representations of profoundly deaf depend exclusively of sign language to generalize and abstract representations algebraic, with the intermediate representation graphs. Despite the low lexicon that sign language, from its main parameters, deaf can translate and represent any mathematical registers of representation, covering many variations, for example, with a simple change of movement or pivot point. This favors the cognitive processes of deaf students, while they work with a greater level of freedom during the conversion activities. By therefore, the study of algebra with deaf students should be performed with the advantages that sign language offers to them, detaching itself from the excessive use of algorithms, exclusively symbolic or written representations and specially the obligation to obtain just the algebraic language or numeric response. A presente pesquisa objetivou analisar os principais registros de representação semiótica e suas coordenações possíveis no ensino e na aprendizagem da álgebra para alunos surdos fluentes em língua de sinais. Com a finalidade de proporcionar mais elementos para análise e considerando a necessidade de se trabalhar com uma diversidade maior de sistemas de representações semióticas, segundo a teoria adotada de Duval, o conteúdo da álgebra escolhido foi a inequação, não só pela variedade de registros, mas também pela conexão que existe com outros conteúdos, como funções e equações. Para aconsecução do objetivo, a metodologia utilizada foi a Engenharia Didática difundida por Artigue; ela permitiu a aplicação planejada de uma sequência de cinco atividades,efetivada com sete alunos surdos do ensino médio brasileiro, todos de uma escola especial localizada no norte pioneiro do Paraná. Para ampliar o campo de pesquisa, num processo inclusivo diferente do brasileiro, também foram analisados os conhecimentos prévios de três alunos surdos do ensino médio espanhol, em uma escola regular de Barcelona. Os resultados obtidos na experimentação, com os alunos brasileiros, foram que a língua de sinais, por ser uma língua visual/motora, favoreceu a identificação dos elementos representacionais algébrico, durante a atividade de conversão, mediante a conexão realizada com os registros gráficos. Esses alunos surdos, ao converterem uma expressão algébrica para a língua de sinais e desta para a escrita, e vice-versa, se apoiavam, muitas vezes, na representação intermediária gráfica, descrevendo inclusive os detalhes dessa representação. Mesmo que a língua de sinais e a escrita tenham a mesma função meta discursiva de comunicação, elas diferem nas suas regras de conformidade; as unidades constitutivas de cada registro de representação são muito diferentes. Os surdos brasileiros, ao traduzirem as expressões algébricas, em língua de sinais, justapõem dois sinais na configuração das mãos, assim como na linguagem matemática. Ao contrário, os resultados prévios do diagnóstico realizado com os surdos na Espanha, revelou que esses alunos traduziam as expressões algébricas, para a língua de sinais, sequencialmente, com o uso predominante da datilologia, ou seja, da mesma forma que a língua escrita. O processo de inclusão oral, que é tradição na Espanha,apresentou forte influência no processo cognitivo desses alunos. A atividade cognitiva de conversão da língua escrita ou língua de sinais para o registro algébrico e deste para o registro gráfico foi insuficiente para esses alunos. Concluímos que, quando o campo de estudo é a álgebra, com diferentes significados para as letras, o uso de diferentes registros de representação se torna imprescindível para qualquer aluno surdo usuário da língua de sinais. As representações mentais dos surdos profundos dependem exclusivamente da língua de sinais, para generalizar e abstrair as representações algébricas, tendo como representação intermediária os gráficos. Apesar do reduzido léxico que a língua de sinais apresenta, a partir dos seus principais parâmetros, os surdos podem traduzir e representar qualquer registro de representação atemática, abrangendo muitas variações, por exemplo, com uma simples troca de movimento ou ponto de articulação. Isso favorece o processo cognitivo dos alunos surdos, ao trabalharem com um grau de liberdade maior durante as atividades de conversão. Por isso, o estudo da álgebra, com alunos surdos, deve ser realizado com as vantagens que a língua de sinais lhes oferece, desvinculando-se do uso excessivo dos algoritmos, de representações exclusivamente simbólicas ou escrita e, principalmente, da obrigatoriedade de se obter uma resposta apenas numérica ou da linguagem algébrica. 288 f

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Neurociências, Florianópolis, 2009

Concerning the current discourse favorable to the Inclusive Education, ali the students have been invited to share the same space. In the political sphere, some measures have been taken, for instance, the approval of Sign Language Law (BRASIL, 2002), which officializes it as weIl as assures the presence of the Sign Language Interpreters (BRASIL, 2005) at the educational attendance, both for the deaf students. Among the existent barriers which are opposed to good quality teaching to the inclusive deaf students, we feature the speaking as the muin mean of communication and the one that permeates all the methodological strategies avaialable to the teacher into the classroom. Besides, some important aspects have not been considered in view of the real deaf inclusion, as the valorization of those students' visual experiences. In this sense, the current research aims to understand how the Mathematics tiaching and leaming process occurs regarding deaf students who rely on the support of a Sign Language Interpreter. In order to accomplish it, we carried out our research in two groups of students from the 9th (ninth) grade Elernentary Education from different schools, which we name here as Case 1 and Case 2. Taking into account Case 1, we observed 30 (thirty) Mathematics classes in a public school in the north of Paraná. To organize the data, we used field notes to identify the main characteristics that are part of the Mathematics teaching and learning process to inclusive deaf students. Besides the field notes, we applied 12 (tweive) Mathematics activities to the deaf and hearer students from the sarne school, but (he deaf ones were video recorded whiie doing the activities. Considering Case 2, we also observed three Mathematics classes in a public school in the north of Paraná. Ail the classes were audio and video recorded and transcribed, with special attention to the teacher's speech und the Sign Language interpreter's irnages. After that, we compared both the transcriptions to understand the characteristics of the adopted languages, such as the Portuguese and the Sin Language. Both in Case 1 and in Case 2, it was possible to identifi the units of anaiyses drived from the data set: lack of interaction between deaf and hearer students at school; the defluitions of the Sign Language Interpreter's role at school have not been designed yet; lack of activities which explore the visual aspect in the teaching of Mathematics; initial and eontinuing education have not considered the inclusive deaf students; deaf students' dificulties in interpreting the Mathematical statements; and, on the other hand, teachers and other professionals' lack of knowledge about the deaf student's trials with respect to the language that he/she does not know; Mathernatical contradictions made in the translation process to the Sign Language. To sum up, we have proposed some implementations that need to be considered in case of alming a real good quality teaching for everybody, with special attention to the deaf students. Com o discurso atual favorável à Inclusão no ambiente escolar, todos os estudantes são convidados a comungar de um mesmo espaço. No campo político, algumas medidas passaram a ser tomadas, como a aprovação da Lei da Libras (BRASIL, 2002), que oficializa tal língua, assim como a garantia da presença de Intérpretes de Libras (BRASIL, 2005) no atendimento educacional, ambas em favor dos educandos surdos. Dentre as barreiras ainda existentes e que s opõem a um ensino de boa qualidade para os surdos em situação inclusiva, destacamos o flato de que, permeando todas as estratégias metodológicas disponíveis ao professor em uma aula, temos a fala como o principal meio de comunicação. Além disso, alguns aspectos importantes deixam de ser considerados com vistas à verdadeira inclusão dos surdos, como a valorização da experiência visual destes educandos. Nesse sentido, a presente pesquisa se destina a entender como se dá o ensino e a aprendizagem de Matemática por estudantes surdos que contam com o apoio de um Intérprete de Libras. Para tal empreitada, realizamos pesquisas em duas turmas do 9° ano do Ensino Fundamental de escolas diferentes, as quais denominamos como Casol e Caso 2. No Caso 1, observamos 30 aulas de Matemática de uma escola pública do interior do Paraná. Para organizar os dados coletados, redigimos notas de campo com o intuito de identificar as principais características que permeiam o ensino e a aprendizagem de Matemática para surdos inclusos. Além das notas de campo, aplicamos 12 atividades matemáticas para alunos surdos e ouvintes da mesma escola, sendo o desenvolvimento das atividades pelos alunos surdos videogravado. No Caso 2, observamos três aulas de Matemática de uma escola pública também do interior do Paraná. A fala do professor foi gravada e transcrita, bem como as imagens do Intérprete de Libras. Na sequência, buscamos cotejar ambas as transcrições em busca de uma compreensão mais voltada para as características das linguagens adotadas, quer sejam, o Português e a Libras. Nos dois Casos, foram destacadas unidades de análise oriundas de nosso conjunto de dados coletados: ausência de interação entre surdos e ouvintes no ambiente escolar; a definição do papel dos Intérpretes de Libras nas escolas ainda em construção; ausência de atividades que explorem o aspecto visual no ensino de Matemática; uma formação inicial e continuada que no contempla a inclusão de alunos surdos; dificuldades dos alunos surdos em interpretarem enunciados matemáticos e, somado a isso, o desconhecimento dos professores e de outros profissionais a respeito das dificuldades enfrentadas pelo aluno surdo com uma língua que ele no domina; incoerências matemáticas cometidas no ato da interpretação em Libras. Ao final, propornos alguns encaminhamentos que precisam ser considerados, caso se almeje, verdadeiramente, um ensino de boa qualidade para todos, com ênfase para os surdos. 260 f

Tese (doutorado)- Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Neurociências, Florianópolis, 2013. As células-tronco (CTs) são células indiferenciadas com habilidade de se autorrenovar, e que em condições apropriadas podem gerar diversos tipos celulares maduros. As células da placenta possuem características morfológicas, imunofenotípicas e funcionais, similares as células tronco mesenquimais (CTMs) da medula óssea (MO), porém é improvável que estas células possuam o mesmo potencial de diferenciação e proliferação de CTs embrionárias. Estas células são ainda de origem fetal e podem ser superiores a CTs somáticas em muitos aspectos. Juntamente com o seu fácil acesso, ausência de problemas éticos e abundância celular, as CTMs da placenta podem ser uma alternativa atrativa de progenitores de CTs para pesquisa básica e aplicações clínicas. O Acidente Vascular Cerebral (AVC) é uma das principais causas de morte e incapacitação no Brasil, trazendo altos custos para o Sistema Único de Saúde (SUS), sendo então de grande importância estudos que permitam melhorar este quadro. Também é importante o estudo do microambiente, pois este e as CTs regulam-se de forma dinâmica e também, torna-se relevante o estudo de fatores de crescimento que podem estar envolvidos na diferenciação das CTMs onde são escassos os estudos. Nesta tese investigamos o potencial de diferenciação das CTMs de placenta humana, in vitro e in vivo, utilizando modelo de co-cultura e AVC respectivamente. Para alcançarmos nossos objetivos, foram realizadas culturas de CTMs de placenta humana, bem como cultura mistas de cerebelo e córtex de ratos neonatos. Foram realizados experimentos de co-cultura para verificação da importância do microambiente neural na diferenciação de CTMs, bem como injeção de CTMs em animais que sofreram lesão causada pelo AVC para possível regeneração da área lesionada. Também investigamos os fatores de crescimento expressos pelas culturas mistas que poderiam estar envolvidos no processo de diferenciação de CTMs para fenótipo neural. As análises dos experimentos se deram por RT-PCR e imunofluorescência, utilizando marcadores de células precursoras neurais, células gliais e neurônios. Nossos resultados demonstram que as CTMs quando em microambiente favorável, têm a potencialidade para diferenciar-se em fenótipos neurais, estes resultados são vistos quando as CTMs são co-cultivadas com culturas mistas de cerebelo e córtex de ratos neonatos, bem como quando injetadas no encéfalo de animais lesionados experimentalmente por AVC, demonstrando a potencialidade das CTMs da placenta humana na diferenciação neural. Além de apresentarem expressão gênica, estas células possuem a expressão protéica de Nestina, GFAP e B-Tubulina III e também as alterações morfológicas necessárias na diferenciação. Sugerimos a participação na diferenciação o fator de crescimento EGF e transcrição FOXD3 que deixam de ser expressos em culturas mistas de córtex após o co-cultivo com CTMs. Este trabalho demonstrou que CTMs de placenta humana possuem interação com o microambiente indutivo, podendo apresentar morfologia neural; e quando enxertadas em animais que sofreram lesão isquêmica, podem migrar para o local da lesão e diferenciar em células neurais in situ, podendo assim ter utilização terapêutica na medicina regenerativa. Abstract : Stem cells (SCs) are undifferentiated cells with the ability to self-renew and under appropriate conditions may generate various differentiated cell types. Placental cells have morphological, functional and immunophenotypic similar to mesenchymal stem cells (MSCs) from bone marrow (BM), but it is unlikely that these cells have the same potential for differentiation and proliferation of embryonic SCs. These cells are also of fetal origin and may be superior to somatic SCs in many ways. Along with its easy access, lack of ethical problems and cell abundance, MSCs from the placenta can be an attractive alternative for parents of SCs for basic research and clinical applications. The Cerebral Vascular Accident (CVA) is a major cause of death and disability in Brazil, bringing high costs to the National Health System (SUS), which is of great importance studies to improve this situation. Also important is the study of microenvironment, as this and SCs are regulated dynamically and also becomes relevant to the study of growth factors that may be involved in the differentiation of MSCs where there are few studies. We investigated the differentiation of human placenta MSCs in vitro and in vivo using co-culture model and experimental stroke in mice respectively. We performed cultures of MSCs from human placenta and carried out co-cultures on rat cerebellum or cortex cells from newborn rats. In co-culture assays the importance of the microenvironment was checked as an inducer for neural differentiation of MSCs. Alternatively the graft of MSCs in mice with moderate brain injury in experimental stroke to test for possible regeneration of damaged area. We also investigated growth factors expressed by mixed cultures that could be involved in the differentiation of MSCs to neural phenotype. We analyzed the expression or neural markers in MSCs by RT-PCR and immunohistochemistry. Our results demonstrated that MSCs in contact to brain microenvironment have the potential to differentiate to neural phenotypes. MSCs expressed nestin, GFAP and Tubulin III-B. These results were observed when MSCs were co-cultured with mixed cultures of cerebellum and cortex from newborn rats or when they were injected into the brain of animals injured by experimental stroke. This seemed to be under control of EGF and the transcription factor FoxD3 that failed to be expressed in mixed cultures of cortex after co-culture with MSCs. This work demonstrated that MSCs from human placenta have inductive interaction with the microenvironment may present neural morphology, and when grafted into animals undergoing ischemic injury, can migrate to the site of injury and differentiate into neural cells in situ and may thereby have therapeutic use in regenerative medicine.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2013. O Acidente Vascular Cerebral (AVC) isquêmico é uma das doenças que mais levam a óbito no mundo, sendo uma das doenças neurológicas que podem levar a um permanente dano neuronal. O único tratamento aprovado para o AVC agudo é a terapia trombolítica intravenosa, realizada através do ativador de plasminogênio tecidual recombinante (rtPA), que deve ser administrado ao paciente em no máximo quatro horas e meia após a lesão, restringindo o tratamento a poucos pacientes. Portanto, é necessário um novo tratamento, como a terapia com células tronco (CT). Uma fonte de CT promissora é a placenta humana, cujas CT mesenquimais tem reconhecida ação imunossupressora e capacidade de diferenciação para fenótipos neurais. No entanto, antes de partir para uma terapia celular, é necessário conhecer os mecanismos pelos quais as CT irão atuar, como secreção de fatores e influência das mesmas sobre a biologia de astrócitos e neurônios de camundongos, que foi o objetivo de nosso trabalho. Para isso, foram realizados experimentos de co-cultura e a utilização de meio condicionado (MC) de células tronco mesenquimais de placenta humana (CTMPHs) derivadas do córion. O MC das CTMPHs foi utilizado em diferentes concentrações (10%, 25%, 50% e 75%) sobre culturas de astrócitos e culturas de astrócitos e neurônios de camundongos neonatos, e a co-cultura foi realizada com CTMPHs sobre culturas de astrócitos e culturas de neurônio, também de camundongos neonatos. Após, as células foram fixadas e imunocitoquímicas para GFAP e ?-tubulina III foram efetuadas. As células foram contadas e analisadas estatisticamente através do teste ANOVA de 1 via e o pós-teste de Newman - Keuls. Também realizamos marcação para Sytox, afim de verificar a mortalidade celular, em todos os experimentos, e em um grupo de culturas de astrócitos que receberam MC de CTMPHs realizamos o ensaio de MTT para analisar a viabilidade celular. Pudemos concluir que o MC das CTMPHs e a co-cultura com as mesmas não é citotóxico para astrócitos e neurônios, pois não obtivemos marcações positivas com Sytox, assim como no ensaio com MTT, em astrócitos que receberam diferentes concentrações de MC, não houve diferença estatística entre os grupos tratados em comparação aos controles. O MC em baixas concentrações (10% e 25%) não mostrou diferenças em relação ao grupo controle, quando analisou-se a quantidade de células GFAP e ?-tubulina III positivas. Já em altas concentrações (50% e 75%), o MC diminuiu a proliferação dos astrócitos (células GFAP positivas) e aumentou a neuronal (células ?-tubulina III positivas). Em relação a co-cultura, o resultado foi o mesmo. Também notamos a presença de neurônios bipolares, maior no grupo que recebeu 75% de MC, e um aumento nos prolongamentos neuronais nos tratados com 50% e 75% de MC e na co-cultura. Juntos, estes resultados nos permitem concluir que as CTMPHs são uma alternativa eficaz para terapias celulares para o AVC ou outras doenças cerebrais. Abstract : The ischemic stroke is one of the most important disease that lead to death in the world, and one of neurological diseases that can lead to permanent neuronal damage. The only approved treatment for acute stroke is the intravenous thrombolytic therapy, performed using recombinant tissue plasminogen activator (rtPA), that must be administered to the patient within four hours and a half after the injury, restricting the treatment to a few patients. Therefore, a new treatment is required, like stem cell (SC) therapy. A SC promising source is human placenta, whose mesenchymal SC has recognized immunosuppressive action and capacity for differentiation to neural phenotypes. However, before going for a cell therapy, it is necessary to know the mechanisms by which SC will act, as secretion of factors and their influence on the biology of neurons and astrocytes of mice, which was the goal of our work. For this, experiments were carried out using co-culture and conditioned medium (CM) from mesenchymal stem cells from human placenta (MSCHP) derived from the chorion. The CM of MSCHP was used at different concentrations (10%, 25%, 50% and 75%) in astrocyte cultures and cultures of neurons and astrocytes from neonatal mice, and co-culture was performed with MSCHP on astrocyte cultures and cultures of neurons, also of newborn mice. Following, the cells were fixed and a immunocytochemistry for GFAP and ?-tubulina III were performed. Cells were counted and analyzed statistically by 1-way ANOVA test and post-test Newman - Keuls. We also perform marking to Sytox in order to check the cell mortality, in all experiments, and a group of astrocyte cultures that received CM from MSCHPs performed the MTT assay to analyze cell viability. We concluded that the CM of MSCHP and co-culture with them is not citotoxic to neurons and astrocytes, as we have not had positive reactions with Sytox, as well as the MTT assay in astrocytes that received different concentrations of CM, there was no statistical difference between the treated groups compared to controls. The CM at low concentrations (10% and 25%) showed no differences compared to control group, when we analyzed the number of GFAP and ?-tubulina III positive cells. Already at high concentrations (50% and 75%), CM decreased proliferation of astrocytes (GFAP positive cells) and increased neuronal cells (?-tubulina III positive cells). Regarding co-culture, the result was the same. We also noted the presence of bipolar neurons, increased in the group receiving CM 75%, and an increase in neuronal extensions treatedwith 50% and 75% CM and co-culture. Together, these results allow us to conclude that the MSCHP are an effective alternative to cellular therapies for stroke and other brain diseases.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2011 Apesar do recente avanço e evolução no desenvolvimento de medicamentos cada vez mais específicos para o tratamento de neoplasias, continuam sendo observados e relatados efeitos inespecíficos destes agentes, que além de atuar nas células neoplásicas exercem efeitos em células normais. O Mesilato de Imatinibe (MI) foi racionalmente desenvolvido para inibir a atividade de proteínas e receptores do tipo tirosinoquinase, especialmente a proteína BCR-ABL anômala característica da leucemia mielóide crônica (LMC). As células-tronco mesenquimais (CTM) compõem o microambiente hematopoiético (MH), com função de suporte e regulação da hematopoese, sendo células precursoras de outras células que também constituem o MH, como os fibroblastos, adipócitos e osteoblastos. Estudos relataram efeitos citotóxicos de diferentes agentes quimioterápicos nas CTM, porém, os efeitos que o MI exerce nesta população de células ainda são desconhecidos. O objetivo do trabalho foi avaliar, in vitro, os efeitos do MI em CTM normais isoladas da placenta humana. Aplicamos um protocolo de cultivo celular de CTM, expondo as mesmas a diferentes concentrações do MI e avaliamos parâmetros como viabilidade celular, proliferação, morfologia, diferenciação e morte celular. Também foi avaliada a expressão de marcadores de células indiferenciadas (Oct-4 e Nanog) e da molécula de matriz extracelular fibronectina. Inicialmente, caracterizamos as células isoladas da placenta humana como CTM, de acordo com características morfológicas, fenotípicas e um painel de expressão imunofenotípica preconizados para este tipo celular. O MI exerceu efeito citotóxico nas CTM a partir da concentração de 1,0 µM, com valor de IC50 de 8,7 µM. A maioria das células expostas ao medicamento demonstrou morfologia alterada em comparação com as células normais e fibroblastóides do grupo controle. O MI reduziu a taxa de proliferação das CTM de modo concentração-dependente nos diferentes tempos de exposição testados. Nos ensaios de diferenciação celular, observamos que o medicamento estimulou a diferenciação das CTM para os fenótipos osteogênico e adipogênico. Com a análise da expressão de Nanog e Oct-4, observamos que, nas menores concentrações do MI (2,5 e 5,0 µM), as células indiferenciadas são mais resistentes aos efeitos do MI quando comparadas a células possivelmente já diferenciadas. A expressão imunocitoquímica de fibronectina também foi reduzida pelo MI. Na avaliação do processo de morte celular observado nos primeiros experimentos, indicamos que este mecanismo foi provavelmente por apoptose, devido à maior quantidade de núcleos picnóticos nas CTM expostas ao MI e também pela captação do corante brometo de etídio. É importante ressaltar que todos os efeitos observados, principalmente nos ensaios quantificados, foram classificados como concentração-dependente. Estes resultados confirmam o efeito do MI em CTM normais, o que pode representar danos até mesmo irreversíveis no MH de pacientes que utilizam o medicamento por período prolongado. Estes dados indicam a necessidade do desenvolvimento de medicamentos mais específicos para o tratamento das diferentes neoplasias que acometem a população.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento As células-tronco mesenquimais (CTMs) são amplamente estudadas por apresentarem potencial de auto-renovação e multidiferenciação, além de possibilidade de isolamento a partir de diversos tecidos. A placenta humana representa uma fonte de CTMs abundante, acessível e livre de questionamentos éticos. O comportamento celular está intimamente ligado ao microambiente tridimensional que as cercam no tecido nativo. Em vista disso, biomateriais vêm sendo desenvolvidos na tentativa de mimetizar in vitro esta complexidade tecidual. O hidrogel de celulose bacteriana (HCB), em particular, tem atraído grande interesse devido a sua nanoestrutura, biocompatibilidade e propriedades mecânicas. Por outro lado, a hidroxiapatita (HAp), tem sido usada como um biomaterial promissor para engenharia de tecido ósseo, devido a sua biocompatibilidade e propriedades osteoindutoras. O plasma rico em plaquetas (PRP) mostra-se como uma interessante fonte de fatores de crescimento a ser aplicada com biomateriais. O presente trabalho teve como objetivo principal, avaliar a interação e viabilidade de células-tronco mesenquimais derivadas da placenta humana (CTMPs) em HCB e em um compósito HCB-HAp, bem como analisar a influência do PRP na viabilidade e proliferação das CTMPs. Para isto, isolamos uma população de CTMPs, com morfologia, imunofenótipos e capacidade de diferenciação características de CTMs. Os HCBs foram produzidos por bactérias Gluconacetobacter hansenii cultivadas em um meio de cultivo apropriado e sob circunstâncias estáticas. A interação célula-HCB foi analisada por microscopia eletrônica de varredura (MEV) e microscopia confocal. Os resultados revelaram que as CTMPs apresentam capacidade de aderir ao HCB, porém a interação foi superficial, apresentando pequena capacidade de migração para o interior do biomaterial. Compósitos HCB-HAp foram produzidos através da síntese biomimética de HAp, por imersão dos HCB já sintetizados em soluções de cálcio e fosfato, alternadamente. Foram testados compósitos com cinco concentrações de HAp. A microestrutura e a composição química dos compósitos foram verificadas por MEV e EDS e revelaram o aumento da deposição dos cristais de HAp ao longo dos ciclos. A interação célula-compósito foi verificada por MEV e microscopia confocal, assim como no HCB, a interação foi superficial. O aumento da concentração de HAp nos compósitos prejudicou a adesão e as células tenderam a formar agregados nos compósitos com maior concentração de HAp. Dentre os compósitos, o HCB-HAp1(com apenas um ciclo de deposição de HAp) foi considerado o ideal para estudos futuros. Os efeitos do PRP foram analisados sobre a viabilidade e proliferação celular e demonstrou ter efeito dependente da concentração utilizada, sendo 2% a concentração que mostrou aumento na proliferação celular. Desta forma, concluímos que, para ambos biomateriais, melhorias relacionadas à microestrutura e porosidade devem favorecer migração das CTMPs ao interior do hidrogel e, mediante a estas melhorias, a associação do compósito HCB-HAp1 com CTMPs e PRP, deve formar um sistema de cultivo tridimensional promissor para estudos em engenharia de tecido ósseo. Mesenchymal stem cells (MSCs) are widely studied due to their self-renewal anddifferentiation potential, in addition to the possibility of isolation from several tissues.The human placenta represents an abundantsource of MSCs, readily accessible and free of ethical questions. The unique cell behavior is closely related to the specialized, three-dimensional microenvironment that immediately surrounds them in native tissue. Inthis way, biomaterials are being developed in an attempt to mimic thiscomplexity in vitro.In particular, bacterial cellulose hydrogel (BCH)has attracted great interest due toits unique nanostructure, biocompatibility and good mechanical properties. On the otherhand, the hydroxyapatite (HAp) has been used as a ubiquitous biomaterial in bone tissue engineering due to its biocompatibility and osteoinductive properties. The platelet rich plasma (PRP) appears as an interesting source of growth factors that may be used together with biomaterials. In this study we evaluated the interaction and viability of human placenta derived mesenchymal stem cells (PMSCs) cultured in BCH and BCH-HAp composite, and analyzed the influence of PRP on the viability and proliferation of PMSCs. We isolate a population of PMSCs with morphology, immunophenotypes and differentiation ability, characteristics of MSCs.The BCHs were producted by Gluconacetobacter hansenii bacteria grown in a suitable culture medium under static conditions. The cell-BCH interaction was analyzed by scanning electron microscopy (SEM) and confocal microscopy. The results revealed that the PMSCs present the ability to adhere to BCH, but the interaction was superficial, presenting low ability to migrate into the biomaterial. BCH-HAp composites were producted by the HAp biomimetic synthesis, by immersing the synthesized BCH in calcium and phosphate solutions. Composites with five concentrations of HAp were tested. The microstructure and chemical composition of the composites were observed by SEM and EDS and revealed increased deposition of HAp crystals along the cycles. The cell-composite interaction was observed by SEM and confocal microscopy and, even as in HCB, the interaction was superficial. The increase of HAp concentration impaired the cell adhesion and the cells tended to form aggregates in the composites with higher HAp concentration. Among the composites, the BCH-HAp1 (with just one HAp deposition cycle) was considered ideal for future studies. The PRP effects were analyzed on cell viability and proliferation and demonstrate to have a concentration-dependent effect. The higher increase in cell proliferation was achieved with 2% PRP. Thus, we conclude that, for both biomaterials improvements related to the microstructure and porosity would be favorable to the PMSCs migration. By these improvements, the association of the composite HCB-HAp1 with CTMPs and PRP must form a promising three-dimensional culture system for studies in bone tissue engineering.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento A Célula-tronco (CT) é definida pela capacidade de autorrenovação e habilidade de se diferenciar em diversos fenótipos celulares. Nos últimos anos, vários estudos têm buscado a identificação e caracterização de CTs em tecidos adultos e extra-embrionários visando o desenvolvimento de alternativas para regeneração e reparo tecidual. Dentre as fontes de CTs adultas destaca-se a placenta, que além de desempenhar um papel crucial no desenvolvimento fetal, também é um importante reservatório de CTs mesenquimais (CTMs). A diferenciação de CTMs é um fenômeno ainda não totalmente esclarecido e influenciado pela atuação de diversas moléculas e pelo microambiente. Um grupo de proteínas de adesão conservadas evolutivamente que pode estar envolvido neste processo é o da família NEPH. Composta por NEPH1, NEPH2 e NEPH3, estas proteínas fazem parte da superfamília das imunoglobulinas (IgSF) e regulam a morfogênese de diferentes tecidos. Os ortólogos de NEPH têm sido amplamente caracterizados em vertebrados, onde atuam em diversos processos como no desenvolvimento neural, formação de sinapses e fusão de mioblastos. Além disso, vários estudos descrevem a expressão de NEPH1 e NEPH2 em diversos tecidos, o que apoia a hipótese de que tal expressão possa estar envolvida na diferenciação de CTs. Com isso, o enfoque deste trabalho foi comparar os níveis de expressão dos genes NEPH entre CTMs obtidas da placenta humana, no estado indiferenciado assim como após a indução à diferenciação adipogênica. As células da placenta utilizadas neste estudo apresentaram a expressão de marcadores de CTMs, a morfologia fibroblastóide esperada, bem como foram capazes de se diferenciar para o fenótipo adipogênico quando cultivadas em meio indutivo, caracterizando uma população de CTMs. Os resultados obtidos por RT-PCR em tempo real demonstraram que tanto as CTMs indiferenciadas quanto as induzidas para adipogênese apresentaram a expressão dos genes NEPH1 e NEPH2, sendo a expressão do gene NEPH1 75% mais alta nas CTMs induzidas à adipogênese do que nas células indiferenciadas. Com isso, sugerimos um papel do gene NEPH1 no processo de diferenciação das CTMs da placenta humana para adipócito. The stem cell (SC), by definition, is undifferentiated and has the ability of self-renewal. SCs are also able to differentiate into diverse cell lineages. In recent years, several studies have searching for the characterization of SCs in adult and extra-embryonic tissues that could guide to develop strategies for tissue regeneration and repair. Among these tissues the placenta is an important source of adult SCs, being a reservoir of mesenchymal SCs (MSCs). Several biological signals and the environment influence the differentiation of MSCs, although this phenomenon is not yet fully understood. The NEPH protein family, which includes NEPH1, NEPH2 and NEPH3, is a group of evolutionarily conserved adhesion molecules that may be involved in this MSCs differentiation. These proteins are part of the immunoglobulin superfamily (IgSF) and regulate the morphogenesis of different tissues. The role of NEPH orthologs have been extensively characterized in vertebrates, where they act in neural development, synapse formation and myoblasts fusion. Moreover, several studies have described the expression of NEPH1 and NEPH2 in several tissues, supporting the hypothesis that they might be involved in SCs differentiation. Thus, the objective of this study was to compare the expression of NEPH genes between undifferentiated and differentiated MSCs obtained from human placenta. The placental cells used is this study comprise a population of MSCs, being characterized by the typical fibroblastic morphology, expression of MSCs markers and ability to differentiate into adipocytes when cultured in an inductive medium. Real time RT-PCR analysis demonstrated that both undifferentiated MSCs and MSCs differentiated into adipocytes express NEPH1 and NEPH2 genes. However, the expression of NEPH1 gene was 75% higher in MSCs differentiated into adipocytes than in the undifferentiated cells. In summary, our results suggest that NEPH1 gene may play a role in the differentiation of MSCs into adipocytes.

En el desarrollo de esta Tesis Doctoral se ha analizado la compatibilidad del biodiesel comercial con el motor diesel, para lo cual se han realizado los siguientes estudios: 1. Estudio fisico-químico inicial del biodiesel y de sus mezclas. El biodiesel es un combustible renovable derivado de aceites o grasas de origen vegetal o animal. El prefijo bio- hace referencia a su naturaleza renovable y biológica en contraste con el combustible diesel tradicional derivado del petroleo; mientras que diesel se refiere a su uso en motores de este tipo. El biodiesel está compuesto por ésteres metílicos de ácidos grasos (FAME: Fatty Acid Methyl Ester) cuyas propiedades están definidas en la Norma UNE-EN 14214. Siguiendo dicha Norma durante este estudio se han medido propiedades tales como la densidad, viscosidad, flash point o calor de combustión; se ha determinado, mediante cromatografía de gases, el contenido en glicerol libre, en glicéridos y en glicerol total y, mediante espectrometría de emisión, se ha determinado el contenido en fósforo y en metales de los grupos I (sodio y potasio) y II (calcio y magnesio). Para realizar este estudio se han preparado un total de 19 mezclas diesel/biodiesel, variando la proporción de biodiesel a intervalos constantes de 5% en volumen. En la preparación de las mezclas, se han empleado diesel y biodiesel comerciales adquiridos a las mismas empresas que, posteriormente, suministraron el combustible para los ensayos realizados en el banco de pruebas. Todas las muestras fueron sometidas, en igualdad de condiciones, a los mismos análisis, cuyos resultados han permitido extraer interesantes conclusiones acerca de la influencia de la concentración de biodiesel en la mezcla, sobre los parámetros analizados. 2. Estudio de compatibilidad de los materiales poliméricos del sistema de alimentación de combustible, con el biodiesel y sus mezclas. Durante este estudio se evalúa como varían las propiedades mecánicas y dimensionales de los polímeros de construcción de los componentes del sistema de alimentación de combustible. La mayor parte de los componentes del sistema de combustible han sido fabricados con polímeros (Boca de carga, Depósito de carburante, Conectores, Palas de la bomba de vacío, Rampa de inyección, Colector de admisión…), con lo cual, el objetivo final de este trabajo, es estudiar la compatibilidad de estos materiales poliméricos con el biodiesel y sus mezclas. Con ello se pretende como única finalidad, contestar a una serie de preguntas que todo usuario de biodiesel puede plantearse: • ¿El biodiesel deteriora los polímeros del sistema de combustible más rápidamente que el diesel? • En los sistemas de alimentación de combustible de los vehículos actuales ¿hay que sustituir alguno de sus componentes, por otro fabricado con un material más resistente, al utilizar biodiesel? Para responder a estas preguntas, hay que determinar la degradación producida por la acción del biocombustible sobre los materiales poliméricos utilizados en la fabricación del sistema de alimentación de combustible del motor diesel, comparándolo con el efecto producido por los combustibles convencionales. Este estudio se centra en los materiales poliméricos, ya que cada vez éstos están más presentes en el vehículo y además, en la bibligrafía ya pueden encontrarse numerosos estudios que tratan la corrosion de diferentes metales con el biodiesel. Para llevar a cabo este estudio, se han inyectado probetas de ensayo de los 10 tipos de polímeros utilizados en la construcción del sistema de combustible de un motor diesel convencional y actual. Además, se ha estudiado el comportamiento de otro polímero fabricado expresamente para resistir el contacto con el biodiesel. Los polímeros se sumergen en B0, B20 y B100 a las temperaturas a las cuales va a operar el sistema de combustible (60 y 90 ºC). El seguimiento de su envejecimiento se realiza retirando probetas de cada uno de los combustibles, tras períodos de 250, 1000 y 1500 horas y analizando como varían las siguientes propiedades: • Color, densidad y variación dimensional. • Resistencia a la tracción (UNE-EN ISO 527-1,2 y a la Flexión (ISO 178) • Resistencia al impacto Charpy (UNE-EN ISO 179-1) 3. Estudio compatibilidad del motor diesel con el biodiesel y sus mezclas. Para realizar este estudio se ensayan tres motores diferentes alimentados cada uno de ellos con B0, B20 y B100, monitorizando a lo largo de los ensayos diferentes parámetros (desgaste, consumo y potencia, emisiones contaminantes, seguimiento del aceite lubricante…) Los tres motores fueron ensayados siguiendo un ciclo EMA (Engine Manufacturers Association) durante 480 horas y alimentados con combustibles comerciales. Estos combustibles fueron analizados, con la finalidad de descartar la falta de calidad de los mismos, como causa de posibles fallos del motor.

This study results of bibliographic research and practical intervention with hearer and deaf children from Municipal Education System of Maringá, in the perspective of Cultural-Historical Psychology (PHC). In general, the goal was, under PHC, characterize Brazilian Sign Language (Libras) teaching in early childhood education as a resource in mediation among deaf and hearer children, identifying the importance of this teaching to the inclusion. We hypothesized that Libras teaching is based on resource and content and may promote children development in language aspect and psychomotor field, raising their awareness for the intended inclusive education. This proposal was justified by scarce publication about this theme and, so far, the special and inclusive education has been based on its majority by others theoretical perspectives. We observed that, currently in Brazil, the researchers who rely on PHC dedicate themselves to propositive investigations focused on applied research - in previous decades the attention was more for studies of fundaments and approach methods. As development, PHC considers that verbal language is important to superior psychological functions (FPS). It's necessary quality mediations in order to children appropriate themselves on verbal language and what they communicate, as it revolutionizes the development, raising it to more complex levels. We understand that Libras enables the FPS formation in deaf and hearer human beings, such as another language which conducts the language. The methodology involved study of primary (Soviet publications) and second sources (recent publications about Soviet defectology, Libras and language teaching). The practical study involved the development and implementation of a Libras teaching proposal for a classroom of hearer and deaf children of Early Childhood Education. The work was carried out from 05/09 to 07/27/2012, in a total of 40 hours in classroom, interviews with teacher, interpreter and pedagogue for observation and class report about its development, totalizing 10hours. As results, we verified the possibility of hearer and deaf children development, regarding to the language and psychomotricity, enabling Libras teaching as a second language, while content and resource, for hearer children. The use and domain of Libras may constitute in a privileged resource to encourage communication among deaf children and the hearer ones. Thus, we concluded that it's necessary to enhance the teaching, which requires that regulated legislation is complied. It is also considered essential that this language reaches the initial and continued teachers training, by implementing Decree-Law 5.626/2005. But for these implementations, it's necessary that Libras is an alive language for the communication among people. It must be in all areas of school education. It's not a privilege, but constitutes in a fundamental element to whom is deaf and an aggregator one for the hearer in his process of generic formation, as cultural man. Esta pesquisa resulta de uma investigação bibliográfica e intervenção prática junto às crianças ouvintes e surdas da Rede Municipal de Educação de Maringá, na perspectiva da Psicologia Histórico-Cultural (PHC). Objetivou-se, de modo geral, à luz da PHC, caracterizar o ensino da Língua Brasileira de Sinais (Libras) na educação infantil como recurso na mediação entre crianças ouvintes e surdas, identificando a importância deste ensino para a inclusão. A hipótese de trabalho norteadora foi a de que o ensino da Libras se constitui em recurso e, também, conteúdo, o que pode promover o desenvolvimento das crianças no aspecto da linguagem e do campo psicomotor, sensibilizando-as para a educação que se pretende inclusiva. Justificou-se esta proposta, pela escassez de publicações sobre essa temática e porque até o momento a educação especial e inclusiva tem sido subsidiada, na maioria, por outras perspectivas teóricas. Verificamos que, atualmente no Brasil, os pesquisadores que se apóiam na PHC dedicam-se a investigações propositivas e voltadas à pesquisa aplicada em décadas anteriores atentaram-se mais aos estudos dos fundamentos e métodos da abordagem. Como desenvolvimento, a PHC considera que a linguagem verbal é fundamental ao desenvolvimento das funções psicológicas superiores (FPS). Nesse sentido, mediações de qualidade são necessárias para que crianças surdas e ouvintes se apropriem da linguagem verbal e do que comunicado por ela, visto que isto revoluciona o desenvolvimento elevando-o a níveis mais complexos. Entendemos que a Libras possibilita a formação das FPS em sujeitos surdos e ouvintes, tal como qualquer outra língua que veicule a linguagem. A metodologia utilizada envolveu estudos de fontes primárias (publicações soviéticas) e secundárias (publicações recentes sobre a defectologia soviética, ensino de Libras e linguagem). A investigação prática envolveu a elaboração e aplicação de uma proposta de ensino de Libras para uma classe de crianças ouvintes e surdas do nível infantil V. O trabalho prático foi realizado de 09/05 a 27/07/2012, perfazendo um total de 40 horas em sala, além de entrevistas com professor, intérprete e pedagogo para observação e relato da classe no desenvolvimento desta, totalizando 10 horas. Os resultados apontam para a possibilidade de desenvolvimento de crianças ouvintes e surdas no que concerne à linguagem e à psicomotricidade, sendo possível o ensino da Libras como segunda língua, enquanto conteúdo e recurso, para crianças ouvintes. O domínio da Libras e seu emprego constitui-se em recurso privilegiado que favoreça a comunicação entre as crianças surdas e os pares ouvintes da turma as quais pertencem. Com isso, conclui-se ser necessário que se incremente o ensino de Libras, o que requer que a legislação regulamentada seja de fato cumprida. Também, considera-se essencial que essa língua alcance a formação de professores, inicial e continuada, implementando-se o Decreto de Lei 5.626/2005. Para essas implementações, é necessário que a Libras seja uma língua viva, para comunicação entre os homens. Ela deve estar presente em todos os espaços da educação escolar, deixar de ser um privilégio, para se constituir em elemento fundante ao surdo, e elemento agregador para o ouvinte em seu processo de formação genérica, de homem cultural. 152 f

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Neurociências, Florianópolis, 2009

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Neurociências As células tronco (CTs) são células indiferenciadas com habilidade de se auto-renovar infinitivamente, e que em condições apropriadas podem gerar diversos tipos celulares maduros. As células da placenta possuem características morfológicas, imunofenotípicas e funcionais similares as células tronco mesenquimais (CTMs) da medula óssea, porém é improvável que estas células possuam o mesmo potencial de diferenciação e proliferação de CTs embrionárias. Estas células são ainda de origem fetal e podem ser superiores a CTs somáticas em muitos aspectos. Juntamente com o seu fácil acesso, ausência de problemas éticos e abundância celular, as CTMs da placenta podem ser uma alternativa atrativa de progenitores de CTs para pesquisa básica e aplicações clínicas. É importante o estudo do microambiente, pois este e as CTs regulam-se de forma dinâmica e também, torna-se relevante a caracterização das vias de sinalização envolvidas nos processo de diferenciação de CTMs em fenótipo neural, onde são escassos os estudos. Nesta dissertação investigamos o potencial de diferenciação das CTMs de placenta humana, utilizando modelo de co-cultura, para fenótipos neurais. Para alcançarmos nossos objetivos, foram realizadas culturas de CTMs de placenta humana, bem como cultura de células astrocitárias de ratos neonatos. Foram realizados experimentos de co-cultura para verificação da importância do microambiente neural na diferenciação de CTMs, bem como a análise da importância da matriz extracelular (MEC) e dos fatores de crescimento liberados pelas células astrocitárias. Também investigamos as vias de sinalização envolvidas no processo de diferenciação de CTMs para fenótipo neural. As análises dos experimentos se deram por RT-PCR e imunofluorescência, utilizando marcadores de células precursoras neurais, células gliais e neurônios. Nossos resultados demonstram que as CTMs quando em microambiente favorável, têm a potencialidade para se diferenciar em fenótipos neurais, estes resultados são vistos quando as CTMs são co-cultivadas com células astrocitárias de ratos neonatos, bem como quando apenas tratadas com o meio condicionado produzido por estes, demonstrando a importância dos fatores de crescimento liberados pelas células astrocitárias na diferenciação neural de CTMs. Além de apresentarem expressão gênica, estas células possuem a expressão protéica de Nestina, GFAP e B-Tubulina III e também as alterações morfológicas necessárias na diferenciação. Sugerem estar envolvidas na diferenciação para células gliais e precursores neurais as vias MAPK, PI3K e JNK II, porém ambas não afetam a diferenciação para o fenótipo neuronal. The stem cells (SCs) are undifferentiated cells with ability to self-renew, and that under appropriate conditions can generate various cell types ripe. The cells of the placenta have morphological characteristics, and functional immunophenotypes similar mesenchymal stem cells (MSCs) of the bone marrow, but it is unlikely that these cells have the same potential for proliferation and differentiation of embryonic CTs. These cells are of fetal origin and can be greater than somatic SCs in many respects. Along with its easy access, lack of ethical problems in cellular abundance, the MSCs the placenta may be an attractive alternative for parents of SCs for basic research and clinical applications. It is important to the study of the microenvironment as this and the governing SCs are dynamic way and also, it is relevant to the characterization of signalling pathways involved in the process of differentiation of neural MSCs in phenotype, where the studies are scarce. In this dissertation investigated the potential of varying MSCs from human placenta, using model of co-culture, for neural phenotypes. To achieve our goals, cultures were performed for MSCs from human placenta and culture of astrocytes cells of newborn rats. Experiments were conducted in co-culture for verification of the importance of microenvironment in neural differentiation of MSCs, and the analysis of the importance of the extracellular matrix (MEC) and growth factors released by astrocytes cells. We also investigate ways of signalling involved in the process of differentiation of neural MSCs to phenotype. The analysis of the experiments is given by RT-PCR and immunofluorescence using markers of neural precursor cells, gliais cells and neurons. Our results show that the microenvironment favorable MSCs when they have the potential to differentiate into neural phenotypes, these results are seen when the MSCs are co-cultured with cells astrocytes of newborn rats, and only when treated with the means produced by conditioning these, demonstrating the importance of growth factors released by astrocytes cells in neural differentiation of MSCs. Besides submit gene expression, these cells have the protein expression of Nestin, GFAP and B-Tubulin III and the changes needed in morphological differentiation. Suggested to be involved in cell differentiation gliais neural precursors and the MAPK pathways, PI3K and JNK II, but both do not affect the differentiation for the neuronal phenotype.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Farmácia

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Neurociências O glifosato é um herbicida sistêmico, pós-emergente e não seletivo, derivado da glicina, amplamente utilizado no Brasil para o controle de plantas daninhas, sendo comumente comercializado na forma de sal de isopropilamina. Toxicologicamente é classificado como produto da Classe IV - Pouco Tóxico, sendo sua DL50 para camundongos de 1.570 mg/kg de peso corporal, e pertence à Classe III - Produto Perigoso em relação à periculosidade ambiental. Dados da literatura referentes aos efeitos deste produto sobre a saúde humana são contraditórios e em alguns aspectos, como imunológico e comportamental, escassos. Desta maneira o objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da exposição sub-crônica ao glifosato sobre a resposta imune humoral, a barreia hematoencefálica e o comportamento de camundongos. Para isso quatro grupos de animais receberam o agrotóxico por via oral em doses equivalentes a 1/100 e 1/10 da DL50 do produto, em intervalos de 48 horas, por um período de 30 dias. Posteriormente um grupos de cada dosagem foram inoculados com 180 g/0,2ml de OVA por via intraperitonial nos dias 0, 7, 14, 21 do experimento este mesmo protocolo de inóculo de OVA foi repetido para o grupo que só recebeu OVA. Ao grupo controle foi administrado salina. Ao término do período de trinta dias foram realizados os testes comportamentais e coletadas amostras de sangue e cérebro. Foram realizadas as seguintes análises: os testes de campo aberto, labirinto em cruz elevado, nado forçado, dosagens de IgM e IgG totais e anti-OVA presentes no plasma e no cérebro. Os animais tratados com glifosato apresentaram redução dos valores de IgM e aumento dos de IgG, uma permeabilidade seletiva da barreira hemato-encefálica e uma tendência a menor exposição a lugares abertos, porém sem afetar o comportamento relacionado a ansiedade, e tendo uma atuação "antidepressiva", que é revertida quando há a inoculação de OVA. Os resultados demonstraram que a exposição ao glifosato compromete os parâmetros imune humoral, afeta a barreira hemato-encefálica de maneira específica e o comportamento. Isto pode levar ao comprometimento da efetividade do sistema imune e de outros sistemas, facilitando o aparecimentos de patologias. The glyphosate is a systemic, post-emergent and nonselective herbicide, derived from glycine, widely used in Brazil for the control of weeds, being commonly commercialized in the form of isopropylamine salt. Toxicologically it is classified as a Class IV product - Little Toxic - being its LD50 1570 mg/kg of body weight for mice, and belonging to Class III - Dangerous Products regarding to environmental dangerousness. Literature data referent to the effects of this product over human health are contradictory and in some aspects, as the immunological and behavior ones, rare. In this way the objective of this study was the evaluation of the effect of sub-chronic exposure to glyphosate to the humoral immune response, the blood-brain barrier and the behavior of mice. For this, four groups of animals were given the pesticide by gavage in doses equivalent to 1/100 and 1/10 of the glyphosate LD50, in intervals of 48 hours, during a period of 30 days. From this groups, two were inoculated intraperitonialy with 180 g/0,2ml of OVA in the days 0, 7, 14 and 21 of the experiment. The same protocol was applied in the group which received only OVA. To the control group only saline was given. By the end of the period, the behavior tests was applied and blood and brain samples were collected. The following analyses were made: open field, plus maze and forced swimming test, and the determination of total and anti- OVA IgM and IgG in the serum and brain samples. The glyphosate treated animals presented a reduction of IgM and an increase of IgG, a selective permeability of the bloodbrain barrier and a tendency to less exposure a open places, although without alterations in the anxiety parameters, and having an "ant depressive" actuation, which are reversed when we have the OVA inoculation. The results demonstrated that the exposure to glyphosate compromises parameters of the humoral immune system, affects the bloodbrain barrier and the behavior. This can lead to the immune system effectiveness compromising and of others systems, facilitating the surging of pathologies.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Neurociências O microambiente extracelular é capaz de modular a organização e expressão dos filamentos intermediários (vimentina, GFAP) durante os processos de adesão, proliferação, migração e diferenciação celular. A elucidação destes mecanismos é de relevante importância no estudo da biologia de células normais e tumorais. O presente trabalho visa compreender o envolvimento do microambiente na modulação da expressão e organização de vimentina e GFAP durante a adesão, proliferação e migração celular na linhagem de astrocitoma humano U-87. Sobre fibronectina (FN) e colágeno do tipo IV (Col IV) foi observada uma rápida adesão das células U-87, acompanhado por um padrão morfológico composto predominantemente por adesões fibrilares. Sobre laminina (LN) e controle o padrão de adesão foi do tipo focal, com células aderindo muito lentamente. As matrizes de FN e Col IV foram abeis em estimular proliferação e migração celular, estes fenômenos foram acompanhados de aumento na expressão de vimentina e redução na expressão de GFAP. Sobre a matriz de LN foram observadas baixa proliferação e migração, estes eventos foram associados a discretas modificações na expressão de vimentina e GFAP. A vimentina apresenta-se por todo citoplasma e processos celulares como redes bem definidas, sendo mais densa nas regiões mais distais destes processos. A marcação para GFAP apresenta-se um pouco difusa mais concentrada em regiões onde ocorreriam possíveis pontos de adesão focal. As variações do ambiente extracelular foram capazes de modular eventos como adesão, proliferação e migração. Esta modulação foi acompanhada por alterações na expressão dos filamentos intermediários de Vimentina e GFAP em células U-87.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Farmácia. A matriz extracelular (MEC) representa um complexo macromolecular que determina a histoarquitetura específica de cada tecido servindo como um arcabouço para a adesão celular e codificando informações que podem ser transmitidas para os domínios internos das células modulando, desta maneira, a atividade celular. Durante os processos neoplásicos ocorrem determinadas mudanças no estroma tecidual (componentes celulares e extracelulares) que conduzem as células tumorais a um padrão invasivo e metastático. Estas alterações teciduais decorrentes do estabelecimento tumoral podem variar de acordo com seu tecido de origem e os sítios de invasões secundárias. O linfoma histiocítico verdadeiro (LHV) representa uma das neoplasias mais raras e agressivas entre os linfomas Não-Hodgkin. Linhagens celulares de LHV, como a linhagem U-937, já foram isoladas e representam um modelo bastante útil para a investigação dos efeitos de variados agentes sobre a progressão deste tipo de tumor. Em consonância com o exposto o objetivo deste trabalho foi avaliar a deposição tecidual de proteínas da MEC em um caso de LHV e analisar a influência destas proteínas sobre o estabelecimento e a progressão tumoral. Para isso foram realizadas imunomarcações para as proteínas laminina (LN), fibronectina (FN) e colágeno tipo IV (COL IV) em linfonodos normal e comprometido por LHV. Foram realizados também testes de adesão e proliferação das células U-937 sobre substratos compostos por LN, FN ou COL IV. Por fim, as células foram tratadas com drogas (clorato de sódio ou b-xilosídeo) que alteram as propriedades dos proteoglicanos para se avaliar a participação destes durante os processos de adesão e proliferação celular. Os cortes histológicos avaliados apresentaram marcação, para todas as proteínas testadas, no córtex e na cápsula do linfonodo normal. No linfonodo comprometido por LHV foi verificada uma deposição diferencial das proteínas da MEC avaliadas, principalmente da FN que apresentou um grande aumento. Os estudos in vitro demonstraram que esta proteína proporcionou um maior potencial de adesão e proliferação das células U-937 quando comparada aos demais substratos. O tratamento destas células com clorato de sódio ou b-xilosídeo reduziu a taxa de proliferação celular, mas não foi capaz de modificar o padrão de adesão das células aos substratos de FN. Os resultados demonstraram que alterações no estroma linfonodal podem ocorrer durante a progressão do LHV e que estas alterações podem afetar diretamente a adesão e a proliferação das células tumorais, efeitos estes relacionados a receptores de superfície celular, que neste modelo evidenciam a importância dos proteoglicanos na proliferação celular sobre substratos de FN.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Farmácia. A camptotecina é um fármaco que apresenta uma considerável atividade antitumoral cujo mecanismo de ação envolve a inibição da topoisomerase I, enzima presente em altas concentrações nos tumores. Entretanto, a administração intravenosa deste fármaco é limitada devido a sua baixa solubilidade aquosa em soluções apresentando baixos valores de pH, e a sua inativação, decorrente da abertura do anel lactônico, em pH fisiológico. Além disso, a administração de camptotecina em doses baixas e protocolos prolongados tem demonstrado ser mais efetiva para o tratamento do câncer do que o emprego de altas doses por um curto período de tempo, tornando este fármaco perfeitamente adaptável para a utilização em estratégias terapêuticas que visam a liberação prolongada. Diante disso, o objetivo deste trabalho foi preparar microesferas de poli-e-caprolactona (PCL) contendo camptotecina, visando à manutenção da integridade da molécula frente à inativação pelo pH fisiológico, o prolongamento da liberação do fármaco e a melhoria da eficácia terapêutica. As microesferas de PCL contendo camptotecina (CPT) foram preparadas pela técnica de emulsificação/extração do solvente. A influência da quantidade de CPT inicialmente adicionada (15, 30 e 60 mg) sobre a encapsulação do fármaco, bem como sobre as características das partículas foi avaliada. Após determinação da camptotecina por CLAE, a eficiência de encapsulação se manteve em torno de 81% em todas preparações, mas o teor de fármaco aumentou proporcionalmente com o aumento da quantidade inicial de CPT. A obtenção de partículas esféricas apresentando superfície rugosa com tamanho em torno de aproximadamente 1-100mm foi verificada após visualização das microesferas por MEV, tendo sido a rugosidade relacionada à rápida eliminação do solvente orgânico da fase interna da emulsão proporcionada pela adição de etanol. Além disso, a presença de cristais de fármaco foi evidenciada na superfície das microesferas preparadas com 30 e 60 mg de CPT. Os ensaios de liberação in vitro foram realizados empregando-se como meio uma solução de tampão fosfato pH 7,4 a 37oC contendo Tween 80 2% (p/v). Para as microesferas preparadas com 15 e 30 mg de CPT foram obtidos percentuais de liberação em torno de 100% após 72 horas para ambas formulações, sendo esta governada predominantemente por um fenômeno de difusão. No entanto o efeito burst variou sendo de 7% e 35% para as microesferas preparadas com 15 e 30 mg de CPT, respectivamente. Este resultado foi associado à presença de cristais de fármaco na superfície das partículas. A eficácia terapêutica das microesferas foi avaliada empregando-se o ensaio de metástase pulmonar, após a inoculação intraorbital de células B16-F10 em camundongos. Diferentes grupos de animais foram tratados com as microesferas e com o fármaco livre em intervalos de 3 ou 5 dias durante 24 dias. Após, os camundongos foram sacrificados, os pulmões foram removidos e o número de metástases foi contado. O sangue dos animais, previamente coletado por punção cardíaca, foi analisado para avaliação da toxicidade renal e hematológica. Neste ensaio, foi observado que todos os grupos tratados com a camptotecina conduziram à diminuição significativa do número de metástases pulmonares. No entanto, a presença de toxicidade foi verificada pela alta taxa de letalidade, perda significativa de peso e neutropenia, nos animais que receberam o fármaco livre. Nos grupos de camundongos tratados com as microesferas de camptotecina foi observada perda de peso significativa apenas naqueles que receberam o fármaco a cada 3 dias, mas não ocorreram óbitos nem neutropeunia. Desta maneira, as microesferas de camptotecina apresentaram eficácia terapêutica similar aquela do fármaco livre, mas com toxicidade significantemente reduzida. A administração de microesferas de CPT de liberação prolongada a cada 5 dias demonstrou ser mais segura, além de apresentar a vantagem de evitar o procedimento de perfusão intravenosa, geralmente incômodo ao paciente.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Farmácia. A agricultura moderna tem se tornado cada vez mais dependente da mecanização e do uso de insumos como os agrotóxicos. A utilização destes produtos em larga escala, combinada às diferentes formas pelas quais o ser humano pode ser exposto aos mesmos, tem resultado em freqüentes contaminações humanas e ambientais. A literatura científica tem associado a exposição crônica aos agrotóxicos com conseqüências para a saúde humana, tais como alterações hematológicas, imunológicas e o desenvolvimento de neoplasias. O glifosato é um herbicida sistêmico, pós-emergente e não seletivo, derivado da glicina, amplamente utilizado no Brasil para o controle de cerca de 70 espécies de plantas daninhas perenes e 80 espécies de anuais e normalmente é comercializado na forma de sal de isopropilamina. Toxicologicamente é classificado como produto da Classe IV - Pouco Tóxico, sendo sua DL50 para ratos de 4.870 mg/kg de peso corporal. Quanto a periculosidade ambiental pertence a Classe III - Produto Perigoso. Dados da literatura referentes aos efeitos deste produto sobre a saúde humana são contraditórios e em alguns aspectos como o imunológico, escassos. Em consonância com o exposto o objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da exposição crônica ao glifosato sobre o fígado, sangue periférico, medula óssea e sistema imunológico, em ratos. Para isso três grupos de animais receberam o agrotóxico por via oral em doses equivalentes a 1/1000, 1/100 e 1/10 da DL50 do produto, em intervalos de 48 horas, por um período de 75 dias. No grupo controle foi administrado água. Ao término do período foram coletadas amostras de sangue, fígado, medula óssea e linfonodos. Foram realizadas as seguintes análises: controle do ganho de peso, hemograma; dosagem de uréia, medida da atividade sérica das enzimas aspartato aminotranferase (AST) e alanina aminotransferase (ALT); análises histológicas do fígado e da medula óssea; contagem de células CD4+ e CD8+ no sangue periférico e linfonodos. Os animais tratados apresentaram redução no ganho de peso, alterações no hemograma, aumento dos níveis séricos das enzimas e da uréia, aumento da reticulina e do número de células de Kupffer no fígado, redução de células CD4+ e CD8+ no sangue periférico, redução de células CD4+ e aumento de células CD8+ no linfonodo e redução da relação CD4+/CD8+ neste último, o qual apresentou-se hipertrofiado. Os resultados demonstraram que a exposição ao glifosato compromete vários parâmetros do sangue periférico, a função hepática e o sistema imune.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. O presente estudo tem por objetivo verificar efeitos dos glicosaminoglicanos sobre a adesão in vitro do glioma C6. Analisamos também, os efeitos da subsulfatação dos GAGs na implantação intracerebral do glioma. Sendo a adesão um passo crítico para o estabelecimento inicial tumoral, realizamos ensaios de adesão celular para testar propriedades de proteínas da Matriz Extracelular (MEC) (laminina, fibronectina e colágeno tipo IV), assim como de GAGs (heparina e condroitin-sulfato) na adesão das célula C6 em placas de ELISA. As proteínas da MEC estimularam a adesão de C6 de modo crescente. A heparina apresentou diferentes efeitos de interação com cada proteína da MEC testada, inibindo a adesão a laminina, aumentando a colágeno IV e não alterando a Fibronectina. Por outro lado, a presença de condroitin-sulfato reduziu a adesão de C6 de modo dose-dependente, às três proteínas testadas. Os experimentos de pré-incubação da heparina às proteínas da MEC ou às células, podem sugerir que interações entre a MEC e GAGs podem ser específicas para determinar a adesão celular. Trabalhos anteriores do nosso laboratório mostraram que o tratamento in vitro de células C6 com clorato de sódio (inibidor de sulfatação de GAGs) reduz a adesão e a proliferação de um modo dose-dependente sem induzir morte celular. Assim, nós testamos os efeitos do tratamento in vivo com o clorato de sódio sobre o crescimento do glioma C6, e procuramos verificar alguns aspectos imunológicos. Realizamos inoculações subcutâneas (2 X 107 células) e intracerebrais (1 X 105 células) de células C6 e analisamos os hemogramas, testes anatomopatológicos, histopatológicos, de sobrevivência e de comportamento. No tratamento local subcutâneo, clorato de sódio revelou ser eficiente em reduzir o crescimento tumoral 30 dias após a inoculação de células C6. Nas inoculações intracerebrais, o pré-tratamento de células C6 com clorato de sódio e tratamento posterior no sítio tumoral, reduziu o crescimento do glioma, revelado pelos testes de sobrevivência e histopatologia. Sensibilizações prévias, intraperitoneais, com células C6 pré-tratadas com clorato de sódio ou com células controle, inibiram o crescimento do glioma após a inoculação intracerebral de células C6, como mostrado nos experimentos de sobrevivência e nas histopatologias. Os hemogramas revelaram uma redução linfocitária 24 e 28 dias após a inoculação intracerebral de C6, porém sem diferenças na leuco e linfometria entre os grupos sensibilizados, entre si e em relação ao controle. Os testes comportamentais revelaram redução em parâmetros exploratórios nos animais inoculados intracerebralmente com C6 quando comparados com o grupo que recebeu C6 pré-tratado com clorato de sódio ou com o grupo controle-operado(sham). Estes resultados sugerem que a sulfatação dos GAGs pode ser importante para o estabelecimento e progressão do glioma C6 in vivo.