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Esse trabalho analisou a região 16S do DNA mitocondrial em populações de Melipona rufiventris do Espírito Santo, comparando a eficiência das técnicas moleculares SSCP (Single Strand Conformation Polymorfism), PCR-RFLP (Restriction Fragment Length Polymorfism-Polimerase Chain Reaction) e DS-PCR (Double-Stringency-Polimerase Chain Reaction). A técnica PCR-RFLP foi sensível para detectar alterações resultantes de mutações, entre as espécies Melipona rufiventris e Melipona compressipes mas não entre as amostras de Melipona rufiventris. A técnica DS-PCR não mostrou resultado satisfatório. A técnica SSCP foi a mais eficiente e a única capaz de identificar polimorfismo em uma amostra de M. rufiventris proveniente do município de Alto Castelinho- ES. UNITERMOS: Mutação, Abelha, Técnicas moleculares, DNA mitocondrial

Resumo não disponível

Made available in DSpace on 2018-06-05T00:37:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ID275331.pdf: 911597 bytes, checksum: 0e111388a7fd3d25c04408432fa297d0 (MD5) Previous issue date: 2006-11-16

Orientador: Carmen Silvia Bertuzzo Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: A incidência da fibrose cística no Brasil é significativamente variável, com diferenças de até 20 vezes de acordo com o grupo étnico e região geográfica estudada. A população brasileira é composta da mistura de muitos grupos étnicos. Os portugueses começaram a colonização no século XVI. Os holandeses invadiram o nordeste em 1630. Os africanos foram trazidos ao Brasil, numa contínua migração forçada, que perdurou do século XVI ao século XIX. No final do século XIX, tiveram início novos movimentos migratórios, principalmente da Alemanha, Itália, Arábia e Espanha. Durante as três primeiras décadas do século XX, nova corrente migratória ocorreu, principalmente da Itália, Espanha e Portugal Após a segunda guerra mundial, o Brasil recebeu novos imigrantes (japoneses, judeus) compondo esta população. Este estudo gerou os primeiros dados sobre a incidência da FC no nordeste e também foram obtidos novos dados para a região sudeste. Na época do estudo, na cidade de Campinas estão sob atendimento no ambulatório 70 pacientes não aparentados com dois testes de suor alterados. Nestes pacientes, foram triadas as seguintes mutações. ?F508 (50%), G542X (4,29%), R1162X (2,14%), N1303K (1,43%) e R553X (0,71%). A mutação G551D não foi encontrada. A mutação ?F508 também foi analisada em 1.138 mulheres saudáveis, sendo 694 da cidade de Campinas - SP e 444 de João Pessoa ¿ PB com idade média de 26,3 anos (15-39, ±6,8), que participaram voluntariamente de projeto de pesquisa anterior. Nas amostras coletadas em Campinas n=694 não foi encontrado nenhum alelo mutante 0/1.388, o que nos impediu de calcular a incidência nesta cidade através deste método. Dos 888 alelos analisados de João Pessoa, foram encontrados quatro alelos mutantes (p=0,0045). Sabendo que a mutação ?F508 corresponde a aproximadamente 50% dos alelos de indivíduos com FC no Brasil, a freqüência dos alelos causadores da FC foi estimada utilizando a proporção: (0,0045/0,5)=0,0090. Com isso, para a cidade de João Pessoa a incidência estimada desta doença autossômica recessiva é de 1:12.321 indivíduos. Esta incidência é similar à encontrada por afro-brasileiros, entretanto difere por exemplo, da encontrada na população do RS. Quando utilizamos o método de cruzamento de dados étnicos das duas regiões estudadas com dados literários da doença nos diferentes grupos étnicos, na cidade de Campinas a incidência da FC ficaria em 1/4.434 e na cidade de João Pessoa ficaria 1/6.087 Abstract: The incidence of the Cystic Fibrosis (CF) is significantly variable in Brazil, with differences larger than 20 fold, according with the ethnic group and geographic studied region. Brazilian population is composed by ethnic admixture. Portuguese started colonization in the 16th century. The Netherlander invaded the northeast in 1630. The Africans were brought to Brazil, in a continuous forced migration, which lasted from 16th to 19th centuries. In the 19th century, new migratory movements have begun from Germany, Italy, Arab and Spain. In the first three decades of the 20th century, started a new migratory flow, mainly from Italy, Spain and Portugal. After the World War II, Brazil received additional immigrants (Japanese, Jewish) compounding its population. These studies generated the first data about the CF incidence on the Brazilian northeast and also were obtained new data about the southeast region. At the time of this study, 70 non related patients were attended at the local CF center in Campinas, with two positive sweat tests in the city of Campinas-SP. On theses patients were screened the following mutations: ?F508 (50%), G542X (4.29%), R1162X (2.14%), N1303K (1.43%) and R553X (0.71%). The mutation G551D wasn¿t found. The ?F508 mutation was also analyzed in 1,138 healthy voluntary women, 694 from Campinas ¿ SP and 444 from João Pessoa ¿ PB, with average age of 26.3 years (15-39, ±6.8), who previously participated from another research. In the samples collected in Campinas ¿ SP n=694 wasn¿t found any mutated allele 0/1,388 and so, we wasn¿t able to make any incidence calculation through this method. In the 888 alleles from João Pessoa, four carry the ?F508 mutation (p=0.0045). Knowing that this mutation accounts for approximately 50% of the FC patients alleles in Brazil, the incidence of the CF in this region was estimated using the proportion: (0.0045/0.5)=0.009. Thus, the estimated incidence of this recessive disease in João Pessoa was 1:12,321. This incidence is similar to the found in African-Brazilians, although differs for example, to the found on the RS population. When we use the method of crossing ethnic data of both studied regions with literary data of the disease in the different ethnic groups, in the city of Campinas, the incidence of the CF would be in 1/4,434 and in the city of João Pessoa would be 1/6,087 Mestrado Mestre em Farmacologia

BACKGROUND: Pathological brain iron deposition has been implicated as a source of neurotoxic reactive oxygen species in Alzheimer (AD) and Parkinson diseases (PD). Iron metabolism is associated with the gene hemochromatosis (HFE Human genome nomenclature committee ID:4886), and mutations in HFE are a cause of the iron mismetabolism disease, hemochromatosis. Several reports have tested the association of HFE variants with neurodegenerative diseases, such as AD and PD with conflicting results. METHODS: Genotypes were analysed for the two most common variants of HFE in a series of 130 AD, 55 Mild Cognitive Impairment (MCI) and 132 PD patients. Additionally, a series of 115 healthy age-matched controls was also screened. RESULTS: A statistically significant association was found in the PD group when compared to controls, showing that the presence of the C282Y variant allele may confer higher risk for developing the disease. CONCLUSION: Taken together these results suggest that the common variants in HFE may be a risk factor for PD, but not for AD in the Portuguese population.

A influência de agentes químicos e físicos (em especial a radiação) sobre a freqüência de mutações tem sido amplamente estudada por meio da análise de alterações observadas na Tradescantia, uma planta utilizada como bioindicador dessas alterações. A avaliação das alterações genéticas da Tradescantia pode ser feita tanto pela detecção de mutações somáticas quanto de aberrações cromossômicas induzidas por mutágenos presentes no ar, solo e água. Os resultados apresentados por diversos estudos estimulam o uso da Tradescantia na avaliação dos efeitos das radiações ionizantes. Estudos futuros de mutagenicidade e aberrações cromossômicas também podem ser feitos, por meio da comparação com os efeitos produzidos por outros tipos de radiações, avaliação do efeito da associação da radiação com drogas ou outros agentes químicos, além da biomonitoração de ambientes de alto risco. The influence of chemical and physical agents (specially radiation) on the frequency of mutations has been widely studied by means of the analysis of changes observed in Tradescantia, a plant used as a bioindicator. The evaluation of these genetic changes may be performed both by detection of somatic mutations or chromosome abnormalities induced by mutagens that are present in the air, soil, or water. The results obtained from several studies support the use of Tradescantia for monitoring the effects of ionizing radiation. Studies of mutagenicity and chromosomal abnormalities may be carried out in future to compare the effects of other types of radiation, evaluation of the effects of the combined use of radiation and drugs or other chemical agents, and to monitor high risk environments.

O arroz é uma cultura amplamente cultivada em todo o mundo. Além da importância econômica e social, essa espécie possui atributos biológicos que a tornam modelo para a pesquisa básica. Nos últimos anos pelo menos três projetos de sequenciamento foram anunciados gerando informações valiosas. Mutantes constituem-se numa importante ferramenta para estudos de ação, função e regulação gênica. Este trabalho objetivou-se a mensurar o efeito da indução de mutação com Co60, sobre caracteres agronômicos em famílias M3 derivadas da cultivar BRS 7 "Taim". Sementes de 186 famílias e da cultivar BRS "Taim", foram semeadas no campo e avaliadas para estatura de planta, ciclo, número de panículas, número de afilhos e índice de afilhos férteis. Para a separação das famílias realizou-se uma análise multivariada e teste de agrupamento de médias, utilizando o método de Scott-Knott. Pela similaridade genética e o teste de Scott-Knott constatou-se variação entre famílias para todos os caracteres avaliados, sendo que três famílias (M3 149, M3 152 e M3 165) foram superiores para pelo menos quatro características. Rice is a major worldwide-cultivated crop. Besides it's the economical and social importance, this species have biological features that make it a model for basic studies. In the last years at least three sequencing project were announced generating valuable information. Mutants may be a powerful tool to study gene action, function and regulation. The goal of this study was to measure radiation effects on agronomical traits M3 mutated families derived from the rice cultivar BRS 7 "Taim". Seeds from 186 M3 families and from the cultivar BRS 7 "Taim", were sowed in the field and evaluated for plant height, cycle, tiller number, panicle number and panicle per tiller. For genotype separation a multivariate analysis and the Scott-Knott test were performed. Genetic similarity and Scott-Knott tests have show a great variation among families for all traits evaluated, but three families (M(3)149, M(3)152 and M(3)165) were superior for at least four traits.

Este trabalho teve como objetivo desenvolver metodologia de seleção do porte em bananeira mediante o emprego de giberelina. Foi desenvolvido em condições controladas de casa de vegetação da Embrapa Mandioca e Fruticultura Tropical, localizada em Cruz das Almas - BA (12° 48' 38" de latitude sul e 39° 06'26" de longitude oeste de Greenwich), no período de setembro de 2002 a janeiro de 2003. Para a comparação de diferentes portes de plantas das cultivares Prata-Anã e Prata-Gigante, foram testadas diferentes doses de ácido giberélico (0; 3,0; 14,0; 29,0; 59,0 e 145 µmol L-1), avaliando-se aos 30 e 60 dias após o plantio, altura da planta e altura da primeira folha. Avaliaram-se também o diâmetro do caule, massas fresca e seca da parte aérea e da raiz, e altura da segunda folha, aos 60 dias após o plantio. A concentração que provocou o maior efeito nos caracteres considerados foi de 84 µmol L-1, sendo que, na variável altura da planta, aos 60 dias foi a de 90,26 µmol L-1. Para todas as variáveis estudadas, observou-se um ponto de máximo em torno da dose de 90 µmol L-1 de giberelina. A concentração de 94,13 µmol L-1 de ácido giberélico (GA3) foi a mais eficiente na identificação precoce do porte de genótipos de Prata-Anã e Prata-Gigante. O momento adequado para efetuar a separação dos genótipos de diferentes portes é aos 60 dias após o plantio, e a variável que deve ser observada no instante da seleção, é a altura da segunda folha. This work aimed to develop a methodology for the selection of plants with different heights using gibberellin. The study was carried out under greenhouse conditions at Embrapa Cassava and Tropical Fruits, located at Cruz das Almas - BA (12º 48' 38" South latitude and 39º 06' 26" longitude West), during the period of September 2002 through January 2003. For the comparison of different heights of Prata Dwarf and Prata Gigante cultivars, different concentrations of gibberellic acid (0; 3.0; 14.0; 29.0; 59.0; and 145.0 µmol L-1) were used in order to evaluate plant height and height of first leaf at 30 and 60 days after planting. Also the stem diameter, fresh and dry matter of the root and above ground plant parts and height of the second leaves, were evaluated at 60 days after planting. The concentration that demonstrated the greatest effect in the characteristics evaluated was 84 µmol L-1; whereas for plant height at 60 days was 90.26 µmol L-1. In general, a maximum peak around 90 µmol L-1 of gibberellin dosage was observed for the variables in study. The concentration of 94.13 µmol L-1 of gibberellic acid (GA3 ) was the most efficient in the early identification of height of the Prata Dwarf and Prata Gigante. The adequate time to separate the genotypes with different heights is at 60 days after planting and the variable that must be observed at the time of the selection is the height of the second leaf.

A mutant (407-P) of Bacillus thuringiensis subsp. thuringiensis strain 407 producing a melanin was obtained after treatment with the mutagenic agent ethyl-methane-sulfonate. Several microbiological and biochemical properties of the two strains were analyzed and the results were similar. The mutant 407-P was also incorporated into non-sterilized soil samples, recovered, easily identified, and quantified, what enables its use in ecology of B. thuringiensis. Um mutante (407-P) da linhagem Bacillus thuringiensis subsp. thuringiensis 407 produtor de melanina foi obtido após tratamento com o agente mutagênico etil-metano-sulfonato. Diversas propriedades microbiológicas e bioquímicas das duas linhagens foram analisadas e os resultados foram similares. O mutante 407-P foi incorporado em amostras de solo não esterilizado, recuperado, facilmente identificado e quantificado, possibilitando seu uso em estudos de ecologia de B. thuringiensis.

PURPOSE: To analyze the frequency of the delta F508 (deltaF508) deletion mutation in 108 unrelated cystic fibrosis patients and compare the results with the previously reported data for Brazilian patients. Cystic fibrosis is the leading cause of genetic disease in Caucasians, and the deltaF508 deletion is the most common mutation associated with the disease. METHOD: The frequency of the deltaF508 mutation was assessed by means of a polymerase chain reaction (PCR) followed by detection in 8% silver-stained polyacrylamide gels. RESULTS: Twenty-three of 108 patients (21.3%) were homozygous for the deltaF508 deletion, 50 were heterozygous (46.3%), and the remaining 35 (32.4%) were non-carriers. In terms of alleles, there were 96 mutated (96/216 or 44.45%) and 120 wild-type ones (120/216 or 55.5%). CONCLUSION: The 44.45% of affected alleles that were found is higher than the 33% first described in 1993, but slightly lower than the 48% recently reported. Moreover, our data corroborated the idea that the frequency of the deltaF508 mutation is lower in Brazil in comparison to that found in studies carried out in Europe and North American (circa 70.0%), probably due to increased racial miscegenation. These findings must be taken into account before any genetic screening of the population is proposed in Brazil. OBJETIVO: Analisar a freqüência da mutação delta F508 (deltaF508) em 108 pacientes não aparentados, com fibrose cística e comparou os resultados com os dados de outros estudos brasileiros. A fibrose cística (CF) constitui a doença genética mais comum em populações caucasianas, sendo a deltaF508 a mais freqüente dentre as mutações relacionadas à doença. MÉTODO: A freqüência da deltaF508 foi analisada por meio da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) seguida de detecção em géis de poliacrilamida a 8%. RESULTADOS: Vinte e três dos 108 pacientes foram homozigotos para a mutação (21,3%), 50 foram heterozigotos (46,3%) e os 35 restantes não eram portadores da deltaF508 (32,4%). Em termos de alelos, foram observados 96 mutados (44,45%) e 120 do tipo selvagem (55,55%), ou seja, não portadores da mutação. CONCLUSÃO: A freqüência de 44,45% de alelos mutados encontrada no estudo é mais elevada que os 33,0% descritos em pesquisa realizada em São Paulo em 1993, e ligeiramente mais baixa que os 48,0% encontrados em relatos mais recentes. Além disso, nossos resultados corroboraram a idéia de que a freqüência da mutação deltaF508 é mais baixa no Brasil em comparação a países europeus e nos Estados Unidos da América (cerca de 70,0%), provavelmente devido a maior miscigenação racial. Estas observações terão que ser consideradas antes da implementação de testes genéticos de triagem no Brasil.

Orientador: Carmen Silvia Bertuzzo Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: A Fibrose Cística (FC) é uma doença genética de padrão de herança autossômica recessiva com incidência de 1/2.500 indivíduos e uma freqüência de portadores de 1/25 nos indivíduos caucasóides. A doença é progressiva e apresenta como manifestação clínica a obstrução respiratória crônica, infertilidade masculina e deficiência de ganho de peso pelo dano ao pâncreas exócrino. A maioria dos pacientes tem níveis elevados de eletrólitos no suor. O gene responsável pela doença foi localizado no cromossomo 7, possui 27 exons, e é denominado CFTR (¿Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Gene¿). Existem mais de 1.200 mutações descritas em todo o gene, a mais freqüente, a DF508, é caracterizada como uma deleção de três pares de bases, o que determina a perda de uma fenilalanina na posição 508 da proteína CFTR, a qual forma um canal para o transporte dos íons cloro. O defeito básico está associado com a diminuição da condução de íons cloro- através da membrana apical de células epiteliais. O objetivo deste trabalho foi determinar a prevalência de seis mutações em pacientes portadores de Fibrose Cística na região de Campinas e estabelecer associação entre o genótipo e o quadro clínico.A mutação DF508, que é a mundialmente mais freqüente, foi encontrada em 50% dos 140 alelos analisados nesse estudo. Este dado concorda com os dados da literatura. Em seqüência as outras mutações mais encontradas foram: G542X (4,29%), R1162X (2,14%), N1303K (1,43%) e R553X (0,71%), sendo que a mutação G551D não foi encontrada. Com exceção da G542X que foi encontrada com uma freqüência menor do que a descrita na literatura e a G551D que não foi encontrada, as demais mutações estão de acordo com os dados publicados. Dos 70 indivíduos analisados, somente oito não apresentaram manifestação digestiva. Destes, nenhum possuía a mutação DF508 nos dois alelos. Com relação ao escore de Shwachman,apenas um paciente homozigoto para a DF508 teve o escore classificado como grave Abstract: Cystic Fibrosis (FC) is a genetic autossomic recessive disease with an incidence of 1/2.500 life births and a carrier frequency of 1/25 in the caucasian population. The disease is progressive and present as a clinical manifestation the respiratory chronic blockage, male infertility and deficiency to gain weight caused for the damage to the exocrine pancreas. The majority of the patients has raised electrolyte levels in the sweat. The gene responsible is located in chromosome 7, and it has 27 exons, and is called CFTR ("Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Gene"). Over 1.200 mutations have been described all over the gene and the mutation DF508 is the most frequent, and is characterized as a deletion of three bases pairs, which determines the loss of a phenylalanine in position 508 of protein CFTR. The basic defect is associated with the reduction of the conduction of íons Cl- through the apical membrane of epithelial cells. The CFTR forms a channel for the transport of this ion. The aim of this work was to determine the prevalence of the six more frequent mutations in patients with Cystic Fibrosis in Brazil and to establish association between the type of mutation and the clinical feature. Mutation DF508, that is the most worldwide frequent one, was found in 50% of the 140 alleles analyzed in this study. This data agree with previously description on the literature. In sequence, the other found mutations were: G542X (4,29%), R1162X (2,14%), N1303K (1,43%) and R553X (0,71%). The G551D mutation was not found. With exception of the G542X mutation, wich was found in a slower frequence than literature, and G551D mutation wich was not found in our sample, the others mutations frequencies are according to the literature data. Of the 70 analyzed individuals, eight did not present digestive manifestation. Of these none had the DF508 mutation in the two alleles. When the Shwachman score was considered, only one homozygous patient for the DF508 mutation was classified as severe disease Mestrado Mestre em Farmacologia

Alzheimer’s disease (AD) is the most common neurodegenerative disorder associated with dementia in late adulthood. Mitochondrial respiratory chain impairment has been detected in the brain, muscle, fibroblasts and platelets of AD patients, indicating a possible involvement of mitochondrial DNA (mtDNA) in the etiology of the disease. Several reports have identified mtDNA mutations in AD patients, but there is no consensual opinion regarding the cause of the impairment. We have studied mtDNA NADH dehydrogenase subunit 1 nucleotides 3337–3340, searching for mutations. Our study group included 129 AD patients and 125 healthy age-matched controls. We have found alterations in two AD patients: one had two already known mtDNA modifications (3197 T-C and 3338 T-C) and the other a novel transition (3199 T-C) which, to our knowledge, has not been described before.

The RAS/RAF/MEK/ERK kinase pathway is pivotal in the transduction of mitogenic stimuli from activated growth factor receptors, which regulates cell proliferation, survival, and differentiation. Up-regulation of this pathway due to RAS mutations is found in approximately 30% of human tumors. Recently, activating mutations of B-RAF were identified in a large proportion of human cancers. Gliomas are the most frequent primary central nervous system tumors and the molecular mechanisms that underlie the development and progression of these tumors are far from being completely understood. The purpose of this study was to clarify the incidence of B-RAF mutations and their possible relation with tumor progression in a series of 82 human gliomas, including 49 astrocytic and 33 oligodendroglial tumors. The analysis of B-RAF hotspot regions, exons 11 and 15, showed presence of B-RAF mutations in only 2 out of 34 (6%) glioblastomas, and absence in the remaining histological types. Both mutations were located in the hotspot residue 600 (V600E) at exon 15, which leads to constitutive B-RAF kinase activity. These data suggest that activating mutations of B-RAF are not a frequent event in gliomas; nevertheless, when present they are associated with high-grade malignant lesions.

O objetivo deste trabalho foi avaliar, durante dois anos, a viabilidade de grãos de pólen e as correlações entre essa viabilidade e as características de frutos de plantas mutantes de laranjeira 'Pêra'. As plantas mutantes foram obtidas a partir de tratamento de borbulhas com raios-gama e selecionadas após três propagações vegetativas. A viabilidade dos grãos de pólen foi avaliada pelo método de coloração com carmin acético. Não houve diferenças entre anos na viabilidade de grãos de pólen e no número de sementes por fruto, indicando que estes caracteres não foram afetados pelas alterações ambientais anuais. Correlações positivas e significativas foram observadas entre a viabilidade média dos grãos de pólen e o número médio de sementes por fruto e, também, com o teor de sólidos solúveis totais do suco dos frutos. Uma das razões para a existência de mutantes com menor número de sementes por fruto é a baixa porcentagem de grãos de pólen viáveis. The objective of this work was to evaluate the pollen grain viability of 'Pêra' sweet orange mutant plants and to estimate its correlation with fruit characteristics. Mutant plants were obtained from shoot treatment with gamma-rays and selected after three vegetative propagations. Pollen grain viability was evaluated using carmine-acetic staining method. No difference was found between years for pollen grain viability and for number of seeds per fruit, indicating that these characters were not affected by the yearly environmental alterations. Positive correlations were found between pollen grain viability and mean number of seeds per fruit, and with the total soluble solid content in juice. Therefore, one of the reasons for the smaller number of seeds per fruit in these mutants is the low percentage of viable pollen grain.

A obesidade definida como a acumulação excessiva de gordura corporal deriva de um desequilíbrio crônico entre a energia ingerida e a energia gasta. Neste desequilíbrio podem estar implicados diversos fatores relacionados com o estilo de vida (dieta e exercício físico), alterações neuro-endócrinas, juntamente com um componente hereditário. O componente genético constitui um fator determinante de algumas doenças congênitas e um elemento de risco para diversas doenças crônicas como diabetes, osteoporose, hipertensão, câncer, obesidade, entre outras. O aumento da prevalência da obesidade em quase todos os países durante os últimos anos, parece indicar que existe uma predisposição ou susceptibilidade genética para a obesidade, sobre a qual atuam os fatores ambientais relacionados com os estilos de vida, em que se incluem principalmente os hábitos alimentares e a atividade física. A utilização de modelos animais de obesidade, a transferência génica e os estudos de associação e ligamento, permitiram a identificação de vários genes implicados na obesidade. Obesity, defined as an excessive body fat accumulation, is caused by a chronic imbalance between energy intake and energy expenditure. Several factors have been associated with this energy imbalance, such as life style (diet and physical activity), neuroendocrine disorders, together with the genetic background. The genetic background is a major determinant factor of some congenital diseases and a risk factor for some chronic disorders, such as diabetes, osteoporosis, hypertension, cancer, obesity, and others. The increased prevalence of obesity in most countries during the last years, seems to indicate that there is a genetic predisposition or susceptibility to be obese which is increased by environmental and life style factors, mainly by food habits and physical in activity. The use of obesity animal models, genetic transfer and the association and linkage studies leaded to the identification of many genes associated with obesity.

As citoqueratinas (CQ) são constituintes do citoesqueleto das células epiteliais, pertencendo aos filamentos intermediários; sua distribuição é específica para cada subtipo de epitélio, permitindo que sejam utilizadas como importantes marcadores de sua diferenciação. Anticorpos monoclonais permitem sua localização nos tecidos e são utilizados no diagnóstico de tumores. Na última década inúmeras mutações foram descritas em seus genes, levando a alteração em sua estrutura molecular, esclarecendo várias enfermidades cutâneas, como epidermólise bolhosa simples (CQ 5 ou 14), hiperqueratose epidermolítica (CQ 1 ou 10), hiperqueratose palmoplantar epidermolítica (CQ 9) e paquioníquia congênita (CQ 6, 16 ou 17). Cytokeratins (CK) belong to the intermediate filament group and are expressed in epithelial cells. Their expression is tissue specific and for this reason they are the most important markers of epithelial differentiation. Monoclonal antibodies, which specifically mark one CK, are used in the diagnosis of many tumors. In the last decade, several mutations were described in CK genes, which lead to structural changes in its molecule. As a result, the pathogenesis of many skin diseases has been clarified, such as Epidermolysis bullosa simplex (CK 5 or 14), Epidermolytic hyperkeratosis (CK 1 or 10), Epidermolytic palmoplantar keratoderma (CK 9) and Pachyonychia congenita (CK 6, 16 or 17).

Orientador: Carmen Silvia Bertuzzo Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: As aberrações cromossômicas, principalmente aneuploidias, são de grande interesse clínico, já que são responsáveis por síndromes clinicamente importantes, perdas gestacionais e têm relação com a patogenia do câncer. Os processos que dão origem a elas são a não-disjunção ou perda cromossômica durante a divisão celular. Muitos esforços têm sido realizados para encontrar fatores que influenciam na taxa de não-disjunção. Estudos recentes têm demonstrado que o padrão de metilação do DNA está ligado a instabilidade cromossômica. O metabolismo do folato está relacionado a metilação do DNA. Nesse estudo foi determinada a freqüência de polimorfismos dos genes que codificam enzimas que participam do metabolismo do folato em casais que apresentavam gestações com aberrações cromossômicas como trissomias do 13, 18 e 21, monossomia do X e outras aneploidias (n=63) e num grupo controle (n=67). Os polimorfismos estudados foram 677 -- T e 1298A-- C (MTHFR), I278T, G307S e 844ins68 (CBS) e 5'UTRtr (TYMS). O método utilizado foi PCR seguida de digestão com enzimas de restrição, quando necessário. Foi encontrada uma associação significativa entre o genótipo paterno 677T/1298C do gene MTHFR e o surgimento das aberrações cromossômicas (P

O estudo das alterações moleculares das epidermólises bolhosas tem contribuído para que se compreenda melhor essas enfermidades. Na epidermólise bolhosa simples a maioria dos casos está associada com alteração nas citoqueratinas basais 5 (gen KRT5) e 14 (gen KRT14), o que modifica o citoesqueleto na camada basal da epiderme, levando à degeneração dessa camada, formando bolha intra-epidérmica. Mutações na plectina (gen PLEC1), componente da placa interna do hemidesmossoma, levam também à clivagem intra-epidérmica. Na epidermólise bolhosa juncional vários gens estão envolvidos, em decorrência da complexidade da zona da membrana basal, todos levando ao descolamento dos queratinócitos basais na lâmina lúcida, pela disfunção da aderência entre esses e a lâmina densa. Alterações na laminina 5 (gens LAMA3, LAMB3 e LAMC2), integrina alfa6beta4 (gens ITGA6 e ITGB4) e colágeno XVII (gen COL17A1) foram descritas. Por fim, na epidermólise bolhosa distrófica apenas um gen está mutado, alterando o colágeno VII (gen COL7A1), principal componente das fibrilas ancorantes, produzindo clivagem abaixo da lâmina densa, variando fenotipicamente de acordo com a conseqüência da mutação. Outra aplicação importante dessas informações refere-se ao diagnóstico pré-natal, com a perspectiva no futuro da terapia gênica. New data regarding the molecular aspects of the heterogeneous group of epidermolysis bullosa has brought some important information about its pathogenesis. In epidermolysis bullosa simplex the majority of mutations are localized in the genes of the basal cytokeratin 5 (gene KRT5) and 14 (gene KRT14), cytolysis at this layer with intraepidermal blister is seen under light microscopy. Mutations of plectin (gene PLEC1), a protein found in the inner hemidesmosomal plaque, leads also to intraepidermal blisters. In junctional epidermolysis bullosa many proteins from the basal membrane zone are involved, such as laminin 5 (genes LAMA3, LAMB3 and LAMC2), integrin alpha6beta4 (genes ITGA6 and ITGB4) and collagen XVII (gene COL17A1), the dysfunction which leads to a subepidermal blister, at the level of the lamina lucida. In the third group, epidermolysis bullosa dystrophica, the mutations are localized in only one gene (gene COL7A1), where they alter the structure of collagen VII, the principal compound of anchoring fibrils, splitting the skin under the lamina densa. This information can also be used in the prenatal diagnosis of epidermolysis bullosa, with future perspectives of gene therapy.

p53 is a tumor-suppressor gene encoding a nuclear phosphoprotein that plays an important role in the control of normal cell proliferation, repair of DNA damage and apoptosis. Upon cellular stress, particularly the one induced by DNA danage, p53 protein can arrest cell cycle progression, thus allowing the DNA to be repaired; or it can lead to apoptosis. These functions are achieved by the transcriptional properties of p53, which activates a group of genes involved in cell cycle regulation. Mutant p53 is no longer able to control cell proliferation, resulting in inefficient DNA repair and emergence the genetically unstable cells. The most common changes of p53 cancers are point mutations within the coding sequences of this gene. In hematological malignancies, mutations of p53 gene or inactivation and stabilization of p53 protein are less common than in solid tumor, and usually consist in missense mutations. In hematological malignancies, these alterations are more observed in the evolution from the chronic phase to blast crisis of chronic mieloid leukemia, from myelodysplastic to acute myeloid leukemia, from follicular to high-grade lymphoma, from chronic lymphoid leukemia to high-grade Richter´s syndrome, and from relapsed of acute leukemias. The objective of this review is to characterize the p53 abnormalities in hematological malignancies and discuss the clinical significance of these genetic alterations in the pathogenesis and prognosis. p53 é um gene supressor tumoral, que codifica uma fosfoproteína nuclear que desempenha um papel importante no controle do ciclo celular, no reparo do DNA e na indução da apoptose. Em condições de stress, particularmente por indução de dano no DNA, a proteína p53 bloqueia o ciclo celular, permitindo dessa forma o reparo do DNA ou promovendo a apoptose. Estas funções são efetuadas pela capacidade transcricional da proteína p53 que ativa uma série de genes envolvidos na regulação do ciclo celular. A forma mutada da p53 é incapaz de controlar a proliferação celular, resultando em reparo ineficiente do DNA e na emergência de células geneticamente instáveis. As alterações mais comuns nas neoplasias são mutações pontuais dentro das seqüências codificantes deste gene. Nas hemopatias malignas, estas mutações, freqüentemente do tipo pontuais, têm sido observadas com menor ocorrência do que em tumores sólidos. Nas neoplasias hematológicas estas alterações são mais observadas na crise blástica da leucemia mielóide crônica, progressão da síndrome mielodisplásica para leucemia mielóide aguda, na transformação do linfoma folicular para linfoma de alto grau, na evolução da leucemia linfóide crônica para síndrome de Richter e recorrência de leucemias agudas. Esta revisão tem como objetivo avaliar as alterações do gene p53 nas hemopatias malignas e discutir o significado clínico destas alterações genéticas na patogenia e prognóstico nessas neoplasias.

Submitted by Helena Donato (bibliotecaria@hospitaldebraga.com.pt) on 2013-06-21T09:25:09Z No. of bitstreams: 1 Sjögren-Larsson syndrome due to a novel mutation in the FALDH gen.pdf: 1175612 bytes, checksum: c63ef3aea620aa5eef48a418107748a6 (MD5) Approved for entry into archive by Helena Donato (bibliotecaria@hospitaldebraga.com.pt) on 2013-06-21T09:25:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Sjögren-Larsson syndrome due to a novel mutation in the FALDH gen.pdf: 1175612 bytes, checksum: c63ef3aea620aa5eef48a418107748a6 (MD5) Made available in DSpace on 2013-06-21T09:25:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sjögren-Larsson syndrome due to a novel mutation in the FALDH gen.pdf: 1175612 bytes, checksum: c63ef3aea620aa5eef48a418107748a6 (MD5) Previous issue date: 2011 Restored into DSpace on 2014-05-09T11:58:44Z (GMT).

Creutzfeldt-Jakob disease (CJD), the most known human prion disease, is usually sporadic but approximately 15% of the cases are familial. To date, seven CJD cases with codon 210 mutation (GTT to ATT) have been reported in the literature. We describe a case of a 57 year-old woman who presented gait disturbances and rapidly progressive dementia, leading to death four months after onset. Electroencephalogram revealed periodic activity, diffusion-weighted magnetic resonance imaging showed hypersignal in basal ganglia, and test for 14-3-3 protein was strongly positive in the CSF. The complete prion protein gene coding region was sequenced after PCR amplification, showing a point mutation in codon 210. This is the first case of CJD with codon 210 mutation diagnosed in Brazil. We emphasize the role of genetic search for prion protein gene mutation, even in patients presenting clinical features resembling sporadic CJD. A doença de Creutzfeldt-Jakob (DCJ), a mais conhecida das doenças priônicas, é usualmente esporádica, mas cerca de 15% dos casos são familiais. Sete casos de DCJ familial com mutação no codon 210 (GTT->ATT) foram relatados na literatura até o presente momento. Nós descrevemos o caso de uma mulher de 57 anos com distúrbios de marcha e demência rapidamente progressiva, evoluindo para óbito em 4 meses. Eletroencefalograma revelou atividade periódica, ressonância magnética com técnica de difusão mostrou hipersinal em gânglios da base e teste para proteína 14-3-3 no líquido cefalorraqueano foi fortemente positivo. A região codificadora do gene da proteína priônica foi sequenciada após a amplificação por PCR, revelando mutação de ponto no codon 210, constituindo-se no primeiro caso com esta mutação diagnosticado no Brasil. Enfatizamos a importância da investigação de mutações do gene da proteína priônica, mesmo em pacientes com quadro típico de DCJ esporádica.

A obtenção de cultivares de citros com pequeno número de sementes é importante quando o objetivo é a produção de frutas para o consumo in natura. O objetivo deste trabalho foi o de avaliar, por três anos (1997, 1998 e 1999), o número médio de sementes e 15 outras características agronômicas, de 127 mutantes putativos de laranja-'Pêra', selecionados após irradiação de borbulhas com raios-gama e 8 plantas selecionadas do controle não irradiado. Os mutantes foram divididos em 16 grupos baseados nos tipos de mutações observados e em cada grupo, como controle comum, foram incluídas plantas de laranja-'Pêra' comercial. Observou-se que 46 mutantes putativos e uma planta do controle não irradiado (PSC) apresentaram redução significativa no número de sementes por fruto, nos três anos consecutivos, sendo que 15 mutantes apresentaram frutos com média entre uma e duas sementes e 9 mutantes, frutos com média inferior a uma semente. Dentre estes 9 mutantes, os de número 27, 28 e 58, que apresentaram também alterações significativas no diâmetro de copa ou na altura de planta, além do 59 e 101, que não apresentaram alterações nas outras 15 características avaliadas, possuem um maior potencial para serem lançados como novos mutantes de laranja-'Pêra' com pequeno número de sementes. Citrus varieties with low number of seeds are important for in natura fruit market. The objective of the present work was to evaluate, for three years (1997, 1998 and 1999), the average number of seeds per fruit and 15 other agronomic characteristics of 127 putative mutated clones of sweet orange 'Pêra', selected after gamma-irradiation of budwood and 8 non irradiated control clones. Mutants were divided in 16 groups based on the type of mutation observed 'Pêra' commercial control plants (PCC) were included. It was observed that 46 putative mutants and one non-irradiated plant (PSC) showed significant reduction in seed number per fruit. Fifteen mutants had 1 -- 2 seeds on an average and 9 mutants less than one seed per fruit. Among them, the mutants 27, 28 and 58 showed other significant changes in the tree crown diameter or plant height. The mutants 59 and 101 showed no significant differences in the other 15 characteristics evaluated, indicating that they have a good potential to be released as new sweet orange 'Pêra' mutants with low number of seeds.

Submitted by Dulce Barreto (mdulce.barreto@chlc.min-saude.pt) on 2015-03-31T09:37:42Z No. of bitstreams: 1 J Inherit Metab Dis 2001_883.pdf: 45812 bytes, checksum: 6cc162f15b8c5a35d99ba48c44a33518 (MD5) Made available in DSpace on 2015-03-31T09:37:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 J Inherit Metab Dis 2001_883.pdf: 45812 bytes, checksum: 6cc162f15b8c5a35d99ba48c44a33518 (MD5) Previous issue date: 2001

Breast cancer in families with germ line mutations in the TP53 gene has been described in the medical literature. Mutation screening for susceptibility genes should allow effective prophylactic and preventive measures. Using single-strand conformational polymorphism, we screened for mutations in exons 5, 6, 7 and 8 of gene TP53 in the peripheral blood of 8 young non-affected members (17 to 36 years old) of families with a history of breast cancer. Studies of this type on young patients (mean age, 25 years) are very rare in the literature. The identification of these mutations would contribute to genetic counseling of members of families with predisposition to breast cancer. The results obtained did not show any polymorphism indicating mutation. In our sample, the familial tumorigenesis is probably related to other gene etiologies.

O diabetes insipidus nefrogênico (DIN) é uma doença rara caracterizada pela incapacidade do rim de concentrar a urina, a despeito de concentrações normais ou aumentadas do hormônio antidiurético arginina-vasopressina (AVP). Recentes avanços da fisiopatologia renal mostraram que, após a ligação do AVP ao seu receptor AVPR2 (receptor de vasopressina tipo 2), uma cascata de eventos culmina com a reabsorção de água no túbulo coletor, por meio de canais permeáveis exclusivamente à água e localizados nas membranas apicais do túbulo coletor, sendo o mais importante deles a aquaporina-2 (AQP2). A identificação, caracterização e análise mutacional dos genes AVPR2 e AQP2 permitiram estabelecer as bases moleculares de vários tipos hereditários de diabetes insipidus nefrogênico. Aproximadamente 90% desses pacientes apresentam mutações do AVPR2, 8% apresentam mutações no AQP2 e o restante não tem causas identificadas. Nessa revisão apresentamos exemplos de alterações genéticas e sugerimos que o uso de técnicas de biologia molecular pode minimizar as complicações dessa doença heterogênea mas com fenótipo bastante semelhante. Nephrogenic diabetes insipidus (NDI) is a rare disease characterized by the kidney failure to concentrate urine despite normal or increased plasma concentrations of the antidiuretic hormone arginine vasopressin (AVP). Recent advances in kidney physiopathology demonstrate that, after AVP binding to its receptor AVPR2 (vasopressin type 2 receptor), a cascade of events leads to water reabsorption in the collecting duct through channels exclusively permeable to water and localized at the apical membranes of these collecting ducts, the most important being aquaporin-2 (AQP2). The identification, characterization and mutational analysis of genes AVPR2 and AQP2 helped to establish the molecular basis of the various types of hereditary nephrogenic diabetes insipidus. Approximately 90% of patients present with mutations of AVPR2, 8% have mutations of AQP2 and the remaining do not have any identifiable causes. In this review, we present examples of such genetic alterations and suggest that the use of molecular biology techniques can minimize the complications of this heterogeneous disease that presents with similar phenotype.

O tratamento mutagênico de meristemas multicelulares em plantas de propagação vegetativa geralmente resulta na formação de plantas quiméricas. Os setores mutados podem ser ampliados e estabilizados por meio de podas repetidas. Este trabalho teve como objetivo estudar a influência de podas em distintas posições (da 1a até a 6a gema axilar) de um ramo M1V1, na freqüência de obtenção de mutantes de coloração de inflorescência e no tamanho dos setores mutados, em plantas de crisântemo irradiadas com raios-gama. Para tal, mudas enraizadas do cultivar ‘Ingrid’ (de coloração rosa escuro) foram tratadas com 20 Gy de raios-gama. Após 40 dias do plantio foram realizadas as podas. Avaliaram-se a freqüência de mutantes e o espectro de mutação para a coloração da inflorescência nos ramos M1V2. Não foram observados mutantes no controle. No total de plantas avaliadas, 22,1% apresentavam mutações na coloração das flores sendo que, do total de plantas mutantes, 1,8% eram mutantes periclinais (com coloração única) e as restantes (98,2%), apresentavam apenas alguns setores mutados. Não se observou diferença significativa quanto ao tamanho do setor mutado e ao número de mutantes nos diversos tratamentos (podas em diferentes gemas axilares). Com relação ao espectro de mutação, observaram-se mutantes com flores de coloração bronze, rosa claro, chá-rosa, variegado, amarelo, branco, vinho e creme. Um mutante de coloração vinho foi selecionado, multiplicado e avaliado em ensaio de produção. Este mutante denominado ‘Magali’ foi multiplicado para lançamento como novo cultivar. Mutagenic treatment of multicellular meristems from vegetatively propagated plants generally results in the formation of chimeric plants. Mutated sectors can be increased and stabilized through the cutting-back method. The objective of the present research was to study the influence of the application of this method in the M1V2 population, originated from six different axillary buds from the M1V1 chrysanthemum branches. For this purpose, rooted plants of the cultivar ‘Ingrid’ (dark pink) were irradiated with 20 Gy of gamma-rays and the prune was carried out 40 days after planting. Frequency and spectrum of flower color mutants were evaluated. No mutants were observed in the control population. In the M1V2 population, 22.1% of the total plants were mutants (white color, dark bronze, pale pink, yellow, wine, variegated and cream). Among them, 1.8% were periclinal chimeras (with only one different color from the original) and the others showed mutated sectors. No differences were observed in mutation frequency and size of mutated sector among six M1V2 populations. The wine colored mutant was selected, multiplied and evaluated in a yield trial. This mutant named ‘Magali’ was multiplied and was released as a new cultivar.

Inherited resistance to activated protein C caused by the factor V Leiden (FVL) mutation is the most common genetic cause of venous thrombosis yet described, being found in 20-60% of patients with venous thrombophilia. A relationship between the FVL mutation and an increased predisposition to arterial thrombosis in young women was recently reported. We assessed the prevalence of the FVL mutation in 440 individuals (880 chromosomes) belonging to four different ethnic groups: Caucasians, African Blacks, Asians and Amerindians. PCR amplification followed by MnlI digestion was employed to define the genotype. The FVL mutation was found in a heterozygous state in four out of 152 Whites (2.6%), one out of 151 Amerindians (0.6%), and was absent among 97 African Blacks and 40 Asians. Our results confirm that FVL has a heterogeneous distribution in different human populations, a fact that may contribute to geographic and ethnic differences in the prevalence of thrombotic diseases. In addition, these data may be helpful in decisions regarding the usefulness of screening for the FVL mutation in subjects at risk for thrombosis.

Nos últimos dez anos, o tratamento da leucemia mielóide crônica (LMC) passou por uma grande mudança com a introdução da terapia alvo, onde o mesilato de imatinibe (MI) atua inibindo a atividade tirosina quinase do transcrito BCR-ABL produto este do cromossomo Filadélfia (Ph). Esta revolução terapêutica obrigou que técnicas moleculares, até então de uso restrito na oncohematologia, como a reação em cadeia da polimerase em tempo real (RQ-PCR), fossem necessárias para monitorar o sucesso terapêutico ou a detecção precoce da perda de resposta ao MI. Nesta revisão estão delineados, de forma resumida, os principais procedimentos quanto à monitoração dos pacientes com LMC em tratamento com o MI segundo o Consenso Brasileiro de LMC.Treatment of chronic myeloid leukemia (CML) has changed since the introduction of imatinib mesylate (IM) 10 years ago. IM acts as a target therapy against the BCR-ABL gene by inhibiting its tyrosine kinase activity. This revolution in treating CML compels the introduction of molecular techniques, such as real time quantitative polymerase chain reaction (RQ-PCR) to monitor the response to IM by providing an accurate measurement of the degree to which the BCR-ABL transcript is reduced or an early detection of loss of response identified by a rising level of BCR-ABL. In this review, we summarize the Brazilian CML consensus regarding the main procedures used to monitor CML patients treated with IM.

Made available in DSpace on 2022-05-20T17:12:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 document.pdf: 2292719 bytes, checksum: 2f4cdd1d99d60287e370c7f0dc7c5112 (MD5) Previous issue date: 1999

RESUMO Há evidências de que a variabilidade genética é um dos pontos básicos para o progresso da aveia no Sul do Brasil. O caráter adaptativo, como estatura da planta, poderá contribuir para o desenvolvimento da cultura, desde que existam diferenças genéticas para a seleção. Desta forma, a indução à mutação poderá ser um mecanismo eficiente no melhoramento da espécie. A azida sódica e o cobalto-60 foram testados na indução de mutações em duas variedades de aveia, UFRGS-7 e UFRGS-8, em diferentes doses. A média e a variância das gerações provenientes de sementes tratadas foram comparadas aos genótipos não tratados, evidenciando alteração genética no caráter estudado para todos os tratamentos. A azida sódica foi mais favorável para a indução de modificações herdáveis sem causar efeitos deletérios. Os resultados evidenciam que o uso de agentes mutagênicos poderá ser uma eficiente alternativa de incremento de variabilidade em aveia. SUMMARY Genetic variability is basic for oat progress in southern Brazil. Adaptative trait, as plant stature, could be of major importance for oat crop development. In this way, mutation breeding should be an efficient tool for plant breeders develop new genetic combinations for selection of superior genotypes. Two mutagenic agents, sodium azide and γ-ray, were applied on two oat varieties, UFRGS-7 and UFRGS-8, using different product doses. In order to induce heritable alterations (micromutations), the sodium azide showed the best beneficts, withoutshowing deleterious effects on plants. The data obtained evidenciated that mutation breeding is an interesting approach in order to enlarge oat variability range in southern Brazil.

Background Although extensive HIV drug resistance information is available for the first 400 amino acids of its reverse transcriptase, the impact of antiretroviral treatment in C-terminal domains of Pol (thumb, connection and RNase H) is poorly understood. Methods and Findings We wanted to characterize conserved regions in RT C-terminal domains among HIV-1 group M subtypes and CRF. Additionally, we wished to identify NRTI-related mutations in HIV-1 RT C-terminal domains. We sequenced 118 RNase H domains from clinical viral isolates in Brazil, and analyzed 510 thumb and connection domain and 450 RNase H domain sequences collected from public HIV sequence databases, together with their treatment status and histories. Drug-naive and NRTI-treated datasets were compared for intra- and inter-group conservation, and differences were determined using Fisher's exact tests. One third of RT C-terminal residues were found to be conserved among group M variants. Three mutations were found exclusively in NRTI-treated isolates. Nine mutations in the connection and 6 mutations in the RNase H were associated with NRTI treatment in subtype B. Some of them lay in or close to amino acid residues which contact nucleic acid or near the RNase H active site. Several of the residues pointed out herein have been recently associated to NRTI exposure or increase drug resistance to NRTI. Conclusions This is the first comprehensive genotypic analysis of a large sequence dataset that describes NRTI-related mutations in HIV-1 RT C-terminal domains in vivo. The findings into the conservation of RT C-terminal domains may pave the way to more rational drug design initiatives targeting those regions.

Objectives: To characterize the main identified mutations on cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) in a group of children and adolescents at a cystic fibrosis center and its association with the clinical and laboratorial characteristics. Method: Descriptive cross-sectional study including patients with cystic fibrosis who had two alleles identified with CFTR mutation. Clinical, anthropometrical, laboratorial and pulmonary function (spirometry) data were collected from patients’ records in charts and described with the results of the sample genotyping. Results: 42 patients with cystic fibrosis were included in the study. The most frequent mutation was F508del, covering 60 alleles (71.4%). The second most common mutation was G542X (six alleles, 7.1%), followed by N1303K and R1162X mutations (both with four alleles each). Three patients (7.14%) presented type III and IV mutations, and 22 patients (52.38%) presented homozygous mutation for F508del. Thirty three patients (78.6%) suffered of pancreatic insufficiency, 26.2% presented meconium ileus, and 16.7%, nutritional deficit. Of the patients in the study, 59.52% would be potential candidates for the use of CFTR-modulating drugs. Conclusions: The mutations of CFTR identified more frequently were F508del and G542X. These are type II and I mutations, respectively. Along with type III, they present a more severe cystic fibrosis phenotype. More than half of the sample (52.38%) presented homozygous mutation for F508del, that is, patients who could be treated with Lumacaftor/Ivacaftor. Approximately 7% of the patients (7.14%) presented type III and IV mutations, therefore becoming candidates for the treatment with Ivacaftor.

Fabry disease is an X-linked lysosomal storage disease due to alpha-galactosidase A (α-Gal A) deficient activity which leads to the accumulation of glucoesphingolipids, such as globotriaosilceramide. There are over 700 known mutations of the enzyme gene, and most of them cause Fabry Disease. This case report describes a hemodialysis patient with a rare and controversial GLA gene mutation, the D313Y. The medecial investigation confirmed that D313Y is an alpha-galactosidase A sequence variant that causes pseudo deficient enzyme activity in plasma but not Fabry disease. Thus, clinical symptoms that prompted Fabry disease investigation could not be attributable to Fabry disease and therefore enzyme replacement therapy was not indicated.

O etil-metanossulfonato (EMS) é um dos agentes mutagênicos mais comumente utilizados na indução de mutações em plantas (5, 6, 8, 13). Isso se deve, entre outras razões, à sua alta eficiência (3, 5, 7, 11) e ao fato de produzir relativamente poucas aberrações cromossômicas grosseiras (5, 11, 14). Made available in DSpace on 2019-08-17T00:37:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CNPAF1987rc.pdf: 2404050 bytes, checksum: fea58a58b5fb967d1b095dd64322b066 (MD5) Previous issue date: 1987

Germinating seeds of a high yielding black bean (Phaseolus vulgaris L.) cultivar were treated with O (con trol), 0.0625, 0.125, 0.25 and O .5% (v/v) buffered ethyl methanesulfonate (EMS) solutions with the purpose 01' exploring the possibility 01' inducing seedcoat color mu tations. The highest frequency of mutations was induced by 0.25% EMS. The results indicate that EMS-induced genetic modifications can readily change the seedcoat color 01' the cultivar used to different hues of brown. Made available in DSpace on 2019-08-17T00:37:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CNPAF1988rbg.pdf: 2183588 bytes, checksum: 485fc67c20401696ce2e5c39a3c930b8 (MD5) Previous issue date: 1988

CONTEXT: Extra-adrenal paragangliomas are rare tumors that have been reported in many locations, including the kidney, urethra, urinary bladder, prostate, spermatic cord, gallbladder, uterus and vagina. CASE REPORT: This report describes, for the first time to the best of our knowledge, a primary paraganglioma of the seminal vesicle occurring in a 61-year-old male. The patient presented persistent arterial hypertension and a previous diagnosis of chromophobe renal cell carcinoma. It was hypothesized that the seminal vesicle tumor could be a metastasis from the chromophobe renal cell carcinoma. Immunohistochemical characterization revealed expression of synaptophysin and chromogranin in tumor cell nests and peripheral S100 protein expression in sustentacular cells. Succinate dehydrogenase A and B-related (SDHA and SDHB) expression was present in both tumors. CONCLUSIONS: No genetic alterations to the VHL and SDHB genes were detected in either the tumor tissue or tissues adjacent to the tumor, which led us to rule out a hereditary syndrome that could explain the association between paraganglioma and chromophobe renal cell carcinoma in a patient with arterial hypertension. CONTEXTO: Paragangliomas extra-adrenais são tumores raros que têm sido relatados em muitas localizações, incluindo rim, uretra, bexiga, próstata, cordão espermático, vesícula biliar, útero e vagina. RELATO DE CASO: Este relato descreve, pela primeira vez em nosso conhecimento, um paraganglioma primário da vesícula seminal ocorrendo em um paciente do sexo masculino de 61 anos de idade. O paciente apresentou hipertensão arterial persistente e um diagnóstico prévio de carcinoma de células renais cromófobo (CCRC). Foi pensado que o tumor de vesícula seminal poderia ser uma metástase do CCRC. A caracterização imunoistoquímica revelou expressão de sinaptofisina e cromogranina nos ninhos de células tumorais e expressão de proteína S100 nas células sustentaculares. Expressão de succinato de-hidrogenase A e B relacionada (SDHA e SDHB) estiveram presentes em ambos os tumores CONCLUSÕES: Nenhuma alteração genética dos genes VHL e SDHB foi detectada nos tecidos tumorais e adjacentes ao tumor, o que nos levou a afastar uma síndrome hereditária que poderia explicar a associação entre o paraganglioma e o CCRC em um paciente com hipertensão arterial.

OBJECTIVE: To determine the relevance of screening for the F508del mutation of the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator gene as a first step in the genetic diagnosis of cystic fibrosis (CF) by associating the genotype with various clinical variables. METHODS: We evaluated 180 CF patients regarding the F508del mutation. The clinical data were obtained from the medical records of the patients and from interviews with their parents or legal guardians. RESULTS: Of the 180 patients studied, 65 (36.1%) did not carry the F508del mutation (group 0 [G0]), 67 (37.2%) were F508del heterozygous (G1), and 48 (26.7%) were F508del homozygous (G2). All three groups showed associations with the clinical variables. Homozygosis was associated with younger patients, younger age at CF diagnosis, and younger age at the first isolation of Pseudomonas aeruginosa (PA), as well as with higher prevalence of pancreatic insufficiency (PI) and non-mucoid PA (NMPA) colonization. In comparison with G1+G2 patients, G0 patients were older; first experienced clinical symptoms, digestive disease, and pulmonary disease at an older age; were older at CF diagnosis and at first PA isolation; and had a lower prevalence of PI and meconium ileus, as well as of colonization by NMPA, mucoid PA, and Burkholderia cepacia. In G1 patients, values were intermediate for age at CF diagnosis; age at first PA isolation, first pulmonary symptoms, and first clinical manifestations; MPA colonization; and OR for PI. CONCLUSIONS: The identification of F508del in 63.9% of the patients studied showed that this can be a useful tool as a first step in the genetic diagnosis of CF. The F508del genotype was associated with clinical severity of the disease, especially with the variables related to CF onset. OBJETIVO: Verificar a importância da detecção da mutação F508del no gene cystic fibrosis transmembrane conductance regulator como primeiro passo no diagnóstico genético de fibrose cística (FC), associando-se o genótipo com várias variáveis clínicas. MÉTODOS: Foram avaliados 180 pacientes com FC quanto à mutação F508del. As variáveis clínicas foram obtidas dos prontuários médicos dos pacientes e de entrevistas com seus pais ou responsáveis. RESULTADOS: Dos 180 pacientes estudados, 65 (36,1%) não apresentavam a mutação F508del (grupo 0 [G0]), 67 (37,2%) eram heterozigotos (grupo 1 [G1]), e 48 (26,7%) eram homozigotos (grupo 2 [G2]). Todos os três grupos mostraram associações com as variáveis clínicas. A homozigose associou-se a pacientes mais jovens, menor idade ao diagnóstico e menor idade no primeiro isolamento de Pseudomonas aeruginosa (PA), bem como maior prevalência de insuficiência pancreática (IP) e colonização por PA não mucoide (PANM). Na comparação com os pacientes G1+G2, os pacientes G0 eram mais velhos, com início de sintomas clínicos, doença digestiva e doença pulmonar mais tardio, diagnóstico tardio, PA isolada tardiamente, e menor prevalência de IP, íleo meconial e colonização por PANM, PA mucoide e Burkholderia cepacia. Nos pacientes G1, os valores foram intermediários para idade ao diagnóstico, idade no primeiro isolamento de PA, idade no início de doença pulmonar e de manifestações clínicas, colonização por PAM e OR para IP. CONCLUSÕES: A identificação de F508del em 63,9% dos pacientes estudados mostrou que ela pode ser uma ferramenta útil como primeiro passo no diagnóstico genético de FC. O genótipo F508del foi associado à gravidade clínica da doença, particularmente às variáveis relacionadas com o início da doença.

Disease-causing alterations within the F8 gene were identified in 177 hemophilia A families of Portuguese origin. The spectrum of non-inversion F8 mutations in 101 families included 67 different alterations, namely: 36 missense, 8 nonsense and 4 splice site mutations, as well as 19 insertions/deletions. Thirty-four of these mutations are novel. Molecular modeling allowed prediction of the conformational changes introduced by selected amino acid substitutions and their correlation with the patients' phenotypes. The relatively frequent, population-specific, missense mutations together with de novo alterations can lead to significant differences in the spectrum of F8 mutations among different populations This study was partially supported by Fundação para a Ciência e a Tecnologia: research grant PBIC/C/SAU/1588/92 and Programa de Financiamento Plurianual do CIGMH

Objective: To describe the case of a patient with central congenital hypothyroidism (CCH) due to a recurrent mutation in the TSHB gene, as well as to conduct a genetic study of his family. Case description: It is presented a case report of a 5-month-old boy with a delayed diagnosis of isolated CCH in whom the molecular analysis was performed 12 years later and detected a recurrent mutation (c.373delT) in TSHB gene. The parents and sister were carriers of the mutant allele. Comments: The c.373delT mutation has previously been reported in patients from Brazil, Germany, Belgium, United States, Switzerland, Argentina, France, Portugal, United Kingdom and Ireland. In summary, our case and other ones reported in the literature support the theory that this mutation may be a common cause of isolated TSH deficiency. Isolated TSH deficiency is not detected by routine TSH-based neonatal screening, representing a clinical challenge. Therefore, when possible, molecular genetic study is indicated. Identification of affected and carriers allows the diagnosis, treatment and adequate genetic counseling. RESUMO Objetivo: Descrever o caso de um paciente com hipotireoidismo congênito central (HCC) por conta de uma mutação recorrente no gene TSHB, bem como realizar um estudo genético de sua família. Descrição do caso: Relato de caso de um menino de 5 meses de idade com diagnóstico tardio de HCC isolado, em quem a análise molecular foi realizada 12 anos depois e detectou uma mutação recorrente (c.373delT) no gene TSHB. Os pais e a irmã eram portadores do alelo mutante. Comentários: A mutação c.373delT já foi relatada em pacientes do Brasil, da Alemanha, da Bélgica, dos Estados Uinidos, da Suíça, da Argentina, da França, de Portugal, do Reino Unido e da Irlanda. Em resumo, nosso caso e outros relatados na literatura reforçam a teoria de que essa mutação pode ser uma causa comum de deficiência isolada de TSH. A deficiência isolada de TSH não é detectada na triagem neonatal com base na dosagem de TSH, representando um desafio clínico. Portanto, quando possível, o estudo genético molecular é indicado. A identificação dos afetados e dos portadores permite o diagnóstico, o tratamento e o aconselhamento genético adequado.

Trabalho final de mestrado para obtenção do grau de mestre em Engenharia Biomédica Charles Darwin (1809-1882) apresentou a sua teoria da evolução em 1859 quando publicou “Origem das Espécies por Meios de Seleção Natural ou a Preservação das Raças Favorecidas na Luta pela Vida” que indica que todos os seres vivos têm um ancestral comum. Esta teoria leva à conclusão de que a maioria das funções biológicas moleculares e celulares do organismo humano podem ser estudadas de uma forma mais eficiente e simples em organismos não-humanos. A utilização de modelos animais não humanos para determinados estudos de investigação em vez do ser humano traz vantagens a níveis experimentais e, principalmente, a nível ético. A experimentação animal traz benefícios não só ao ser humano mas também aos próprios animais. Organismos Modelo são assim espécies não humanas que são biologicamente estudadas na expectativa de descobrir funções de genes, curas para doenças ou melhorias na qualidade de saúde que podem ser aplicadas a outros organismos. Espécies como Danio rerio (peixe-zebra), Drosophila melanogaster (mosca-da-fruta) e Mus musculus (murganhos), são exemplos de animais usados como organismos modelo pela comunidade científica. Os murganhos por exemplo, constituem o organismo modelo geneticamente mais semelhante ao ser humano, sendo cerca de 85% das regiões codificadoras dos murganhos idênticas à do ser humano, chegando para alguns dos genes mesmo a 99% de semelhança. Apesar do genoma humano estar completamente sequenciado, para muitos genes ainda é desconhecida a sua função. Para estudar a função dos genes, um organismo knockout é essencial porque ao tornar o gene inativo permite quantificar/qualificar a consequência dessa inatividade, e daí inferir a função génica. Um knockout pode ser conseguido através de uma mutação no gene. A tecnologia de CRISPR/Cas9 é um mecanismo encontrado na resposta imunitária das bactérias, que tornou possível provocar mutações dirigidas a genes específicos. Para este sistema funcionar é necessário a proteína CRISPR associated 9 (Cas9) (para cortar o ADN), uma região proto-spacer adjacent motif (PAM) (região no ADN reconhecida pela proteína Cas9) e um guideRNA (que guia a Cas9 à região alvo). A proteína Cas9 provoca um corte na dupla cadeia de ADN e a célula tenta reparar esse corte através do mecanismo Non Homologous End Joining (NHEJ), mas durante este processo podem ocorrer várias mutações, como deleções ou inserções, provocando uma frameshift que, ou produz uma proteína deficiente ou impossibilita a produção da proteína - qualquer das opções é um knockout do gene. Não existe um protocolo de produção de guideRNA e consequente produção de knockouts que seja facilmente intermutável entre os 3 organismos modelo abordados neste projeto, sendo esse o nosso maior objectivo na elaboração deste trabalho. Para alcançar o objectivo da tese foi usado um protocolo já estabelecido para produção de guideRNA e consequente produção de animais mutantes em peixe-zebra: primeiramente como prova de princípio em peixe-zebra e posteriormente em mosca-da-fruta e murganho. Depois de estabelecido esse protocolo em peixe-zebra e de termos obtido animais mutantes estáveis, tentámos optimizar o mesmo protocolo para mosca-da-fruta e para murganho de acordo com as diferenças de desenvolvimento embrionário inerentes a cada organismo. Para a realização deste projeto, foram escolhidos genes que provocariam um efeito fenotipicamente visível aquando mutados de modo a facilitar o processo de rastreamento de mutantes. No caso do peixe-zebra e do murganho, o gene escolhido foi tyrosinase, envolvido na produção do pigmento preto no corpo e nos olhos dos animais. Para a mosca-da-fruta, o gene escolhido foi o yellow, também envolvido na produção do pigmento acastanhado da cutícula deste insecto. Em peixe-zebra, o gene tyrosinase foi mutado com sucesso, ficando assim inoperativo. Esta mutação causou mosaicismo fenotípico e genético: algumas células destes animais não tinham pigmento e confirmou-se a presença de diversos alelos mutantes diferentes no genoma. Exemplo de algumas limitações que existiram na elaboração deste projeto foi, no protocolo de produção de guideRNA e produção de animais mutantes e a extração de ARN a partir do ADN transcrito. Para extração de ARN o protocolo utiliza o Qiagen micro-RNA extraction kit. No entanto, a quantidade extraída de ARN com recurso a este reagente foi diminuta. Face a estes resultados, fizemos uma comparação direta entre a extração de ARN com esse mesmo kit e extração com fenol/clorofórmio a partir do mesmo produto de transcrição. Com o fenol/clorofórmio foi possível extrair quase 10 vezes mais ARN do que com o kit. Após estes resultados, todos os outros guideRNAs foram extraídos com o método de fenol/clorofórmio. Outra limitação existente no seguimento do protocolo usado neste projecto, foi a amplificação a partir de ADN genómico extraído de embriões com 24h de peixe-zebra. Para concluir que essa região do gene poderia não estar acessível no estadio de desenvolvimento de embrião de 24h, testámos dois factores: o protocolo de extração de ADN em embriões de 24h e os estadios de desenvolvimento até aos 5 dias de idade. Para testar a extração de ADN em embriões de 24h, comparámos a amplificação a partir de ADN genómico extraído de embriões de 24h para dois genes: tyrosinase e DIA1R (amplificação deste gene em embriões de 24h já tinha sido anteriormente observada) como controlo. Foi possível observar que para o o gene DIA1R continuava a existir amplificação do gene, ao contrário do gene da tyrosinase. De seguida, para testar em que estadio de desenvolvimento a amplificação da região pretendida do gene da tyrosinase começava a ser observada, extraímos ADN de embriões de 24h, larvas de 72h, larvas com 3 dias e larvas com 5 dias de idade, seguidas de reações de PCR para amplificação dessa mesma região. Amplificação da região pretendida do gene tyrosinase a partir de ADN genómico extraído de larvas de 5 dias foi observada, no entanto é uma amplificação muito diminuta. A microinjeção em mosca-da-fruta de guideRNA in vitro ao contrário de em plasmídeo, apesar de ter sido mostrado por outros investigadores, ser mais eficiente, leva a um processo de produção de guideRNA mais dispendioso e demorado. Ao optimizar este protocolo em mosca-da-fruta estaríamos a ultrapassar essas dificuldades. No entanto, não foi possível terminar a experiência sendo por isso necessária a continuação deste projecto. Pudemos apenas concluir que a co-microinjeção de guideRNA com proteína Cas9 não é eficiente, uma vez que a concentração necessária de proteína Cas9 é muito maior do que a que foi possível utilizar neste projeto. Por último, o protocolo foi utilizado em murganhos e neste caso, obtivemos 41 animais provenientes de microinjeção de guideRNA e proteína Cas9, mas nenhum apresentava fenótipo facilmente observável ao nível da pigmentação da pelagem. No entanto, estudos em tyrosinase em murganhos mostram resultados de animais sem fenótipo de pigmentação mas que apresentavam mutações quando genotipados, passo essencial para uma conclusão definitiva quanto à aplicabilidade deste método na geração de mutantes em murganho, mas que, infelizmente e por constrangimentos temporais não conseguimos efetuar em tempo útil. Concluimos que conseguimos reproduzir com sucesso o protocolo em peixe-zebra. Em mosca-da-fruta, o mesmo protocolo de produção e injeção de guideRNA poderá funcionar mas será preciso adpatar a entrega da proteína Cas9. Por útlimo, em murganhos parece que o protocolo a usar poderá ser muito semelhante ao do peixe-zebra, no entanto fica por confirmar o sucesso na produção de mutantes. Model organisms are non-human species, that due to similarities with the human organism, are studied in the expectation of discovering gene functions, cure for diseases, improvements in healthcare and welfare. Danio rerio, Drosophila melanogaster and Mus musculus are examples of model organisms widely used in all biomedical research fields. To study gene function, production of knockout animals is an important approach. The CRISPR/Cas9 targeted mutagenesis technology offers the possibility of targeting any gene of interest as long as there is a proto-spacer adjacent motif (PAM) in that region, a gRNA and a Cas9 protein. Cas9 protein makes a DSB in the DNA that the cell tries to fix through the NHEJ mechanism. This mechanism is not always efficient and small base deletions or insertions may arise, causing a frameshift that leads to the production of a deficient protein or null protein, causing a knockout of the gene. A common protocol for gRNA production and knockout generation that fits all three model organisms above referred, is not yet available. In this project, we first did a proof of principle with a pre-existing protocol for gRNA production and knockout zebrafish production. When establishing the zebrafish protocol, the main objective was to use the same protocol structure to produce knockout animals in both fruit fly and mouse, making the necessary optimizations regarding differences in embryonic development. To do this, genes that would cause a phenotypic readout were chosen: tyrosinase in zebrafish and mouse, and yellow in fruit fly. The tyrosinase gene in zebrafish was successfully mutated and mosaic phenotypic and genotypic disruption was observed. Co-microinjection of gRNA for the yellow gene in fruit fly with Cas9 protein didn’t produce a positive result, since Cas9 protein is required in a much higher concentration in the cell. For this animal model, we concluded it was best to micro-inject the gRNA in embryos already producing the Cas9 protein. In mouse, injection of Cas9 protein and gRNA targeting the tyrosinase gene resulted in the successful generation of 41 animals, but we fail to observe a clear tyrosinase mutant. N/A