Search

Díky velkému pokroku ve vědě, medicíně a poznání člověk dosáhl v léčení vysoké úrovně. Nicméně, i v dnešní době se lidstvo snaží o návrat ke svým kořenům – přírodě a využít ji pro udržení svého pevného zdraví. Pojmem probiotika se myslí živé mikroorganismy, které jsou schopny usídlit se v lidském střevě a mít zde kladný vliv na udržení zdravé střevní mikrofóry, což se dále promítne pozitivními účinky na lidské zdraví obecně. Firma Valosun a.s. poskytla pro testování probiotický potravní doplněk pro děti, který byl vyzkoušen matkami s dětmi předškolního věku a těhotnými. Cílem našeho sociologického průzkumu, bylo zjistit, jaká je informovanost o problematice probiotik v této skupině, dále jak vnímají dotazované dostupnost probiotik a jaké jsou nejčastější důvody pro jejich užívání., With great advances in science, medicine and knowledge of a man at the high level of treatment. However, even today the humanity seeking to return to its roots - the nature and use it to maintain its good health. The term probiotics is meant by living organisms that are capable of resettling in the human intestine and have a positive impact on maintaining healthy intestinal microorganisms, which also reflected the positive effects on human health in general. Company Valosun a.s. provided for testing probiotický food supplement for children, which was tested mothers with children preschool age and pregnant. The aim of our sociological survey was to determine what is the awareness of the issue of probiotics in this group, the perception of the queried the availability of probiotics and what are the most common reasons for their use.

Probiotické bakterie mléčného kvašení a bifidobakterie jsou přirozenou součástí gastrointestinálního traktu a v současnosti velmi využívané v potravinářském průmyslu ve formě potravinových doplňků. Cílem diplomové práce byla molekulární identifikace bakterií rodu Lactobacillus a Bifidobacterium v komplexních matricích dvou potravinových doplňků. DNA byla izolována z hrubých lyzátů buněk pomocí magnetických částic P(HEMA-co-GMA). Izolovaná DNA byla amplifikována v rodově a druhově specifických PCR. Amplikony byly detekovány pomocí agarózové gelové elektroforézy. Výsledky byly porovnány s údaji deklarovanými výrobcem ve třech různých šaržích., Probiotic lactic acid bacteria and bifidobacteria are natural part of microflora of gastrointestinal tract. In the present, day they are grossly exploited in food processing industry. The aim of the work was molecular identification of bacteria of genus Lactobacillus and Bifidobacterium in complex matrices of two food additives. Total DNA was isolated from crude cell lysates by magnetic particles P(HEMA-co-GMA). Isolated DNA was amplified in genus-specific and species-specific PCRs. Amplicons were detected by agarose gel electrophoresis. Results were compared with declared specification given by producers in three different batches.

Bakterie rodu Lactobacillus jsou součástí střevní mikroflóry, jejíž složení ovlivňuje zdravotní stav hostitele. Vzhledem k tomu, že u některých druhů Lactobacillus byly prokázány klinické účinky (např. posílení imunitního systému, prevence průjmových onemocnění a další), jsou laktobacily často používány k přípravě fermentovaných mléčných výrobků a jsou součástí potravinových doplňků pro své probiotické účinky. Bakterie rodu Lactobacillus a bakterie různých druhů Lactobacillus můžeme identifikovat metodami PCR, které jsou založeny na amplifikaci specifických fragmentů DNA. Celková bakteriální DNA Lactobacillus rhamnosus byla izolovaná metodou fenolové extrakce. Rodově specifickou PCR byla ve vzorcích prokázána přítomnost bakterií rodu Lactobacillus; druhově specifickou PCR byla prokázána přítomnost bakterií druhu Lactobacillus rhamnosus., Germs of the Lactobacillus genus form part of the micro flora, the composition of which exercises the influence on the state of health of its host. In view of the fact that at some types of Lactobacillus there were proved clinical effects (e. g. strengthening of the immune system, prevention of diarrheic illnesses and so on), the Lactobacilli have been often used for making fermented dairy products and they form part of food additives because of their probiotic effect. Germs of the Lactobacillus genus and germs of different types of Lactobacillus can be identified by means of PCR based on amplifying specific DNA fragments. The complete bacillary DNA Lactobacillus rhamnosus was separated by the phenolic extraction method. The presence of germs of the Lactobacillus genus was proved by the generic-specific PCR method; the presence of Lactobacillus rhamnosus germs was proved by the species-specific PCR method.

Probiotika a jejich pozitivní vliv na lidské zdraví jsou v současnosti často diskutované téma. Přesto je informovanost veřejnosti o jejich příznivých účincích nedostatečná, stejně tak jejich využívání v praxi. Práce shrnuje současné vědecké poznatky o účincích probiotik na lidský organismus. První kapitola se zabývá vymezením pojmu probiotika, jejich historií, významem, vlastnostmi, účinky na lidské zdraví a riziky spojenými s užíváním probiotik. Druhá kapitola obsahuje popis probiotických produktů, jejich formy a potraviny obsahující probiotika. V kapitole číslo tři se řeší probiotické mikroorganismy, jejich hlavní charakteristiky a příklady komerčních startovacích kultur. Předposlední kapitola obsahuje informace o životaschopnosti probiotických mikroorganismů. A kapitola poslední zkoumá metody začlenění probiotik do výrobku., Probiotics and their positive influence on human health are presently very discussed theme. Nevertheless is informedness of public about probiotics benign influence insufficient, as well as their practical usage. This thesis summarizes present scientific knowledge about probiotic effects on human organismus. Fisrt chapter deals with determination of concept probiotics, their history, meaning, qualities, effects on human health and hazard connected with probiotic usage. Second chapter includes description of probiotic products, their forms and foodstuff containing probiotics. Chapter three discuss probiotic microorganisms, their main characteristics and examples of commercial starting cultures. Fourth chapter takes in informations about viability of probiotic microorganisms. And last chapter researches methods of integration of probiotics into products.

Velká část imunitního systému se nachází v tlustém střevě, a to díky velkému množství mikrobů, které ovlivňují nejen trávicí trakt člověka. Kontakt těchto mikrobů a zažívacího traktu člověka je velice důležitý pro další rozvoj imunitních obranných mechanismů a přirozené imunitní odpovědi, jež podporuje zdraví hostitele (člověka). Z tohoto důvodu je v posledních letech věnována velká pozornost a úsilí možnosti zlepšení zdravotního stavu člověka modulací střevní mikroflóry. Jako probiotika jsou označovány živé mikroorganismy, které mohou mít pozitivní vliv na zdraví a některé, např. Saccharomyces boulardii, mají pozitivní účinky v prevenci a léčbě některých onemocnění spojených s průjmy. Firma Valosun a.s. poskytla probiotický doplněk stravy vhodný pro užívání při akutních průjmových onemocněních. Tento produkt byl vyzkoušen pacienty gastroenterologické ambulance. Cílem sociologického průzkumu bylo zmapovat informovanost respondentů v oblasti probiotik a probiotických preparátů., A great deal of immune system is located in the colon thanks to a large number of microbs that influence not only digestive tract of a human. The contact of these microbs with the digestive tract of a human is very important for other development of immune defensive mechanisms and the natural immune response, which supports health of a host. That is why in recent years a great deal of attention and efforts have been paid to possibility of human health status improving by a modulation of the intestinal microflora. As probiotics are indicated living microorganisms, that can have positive effects on human health and some species, for example Saccharomyces boulardii, have positive effects in prevention and treatment of many diseases associated with diarrhea. The company Valosun a.s. has provided for testing the probiotic food supplement which is suitable in acute diarrheal disorders. This product has been tried by patients of gastroenterology ambulance. The aim of sociological survey was to map knowledge of respondents in the field of probiotics and probiotic food supplements.

Táto bakalárska práca sa zaoberá výberom vhodnej kombinácie probiotickej kultúry s riasovými extraktami ako prídavok do detských príkrmov a návrhom optimálneho zloženia detského príkrmu. Pre tieto ciele boli vybrané morské riasy arame, wakame, hijiki a kombu. Teoretická časť je zameraná na správnu výživu detí, ich nedostatkov a možných ochorení. Následne sa zaoberá charakterizáciou probiotických kultúr a ich významom vo výžive dieťaťa. V neposlednom rade sú v teoretickej časti charakterizované jednotlivé morské riasy, ich nutričné zloženie a taktiež význam vo výžive dieťaťa. V experimentálnej časti sa najprv analyzovali vzorky vybraných rias z hľadiska sacharidov, obsahu nerozpustnej vlákniny, fruktooligosacharidov a -glukánov či obsahu pigmentov. Ako porovnávacia zložka sa použila vzorka inulínu, bežne používané prebiotikum do probiotických výrobkov. Dôležitou analýzou tejto experimentálnej časti bolo stanovenie vplyvu riasových extraktov na viabilitu a rast probiotických baktérií. Následne sa vykonalo modelové trávenie zmesi probiotík a riasových extraktov, pričom sa stav probiotických buniek vyhodnocoval počas trávenia aj po ukončení trávenia pomocou merania zákalu a pomocou prietokovej cytometrie. Na záver bola navrhnutá nielen optimálna kombinácia riasového extraktu a probiotickej kultúry, ale aj možnosti zlepšenia dlhodobej viability probiotických buniek v kombinácií s riasovými extraktami., This bachelor thesis deals with the selection of a suitable combination of probiotic culture with algae extracts as an addition to the baby formula and the application of the optimal composition of baby formula. Arame, wakame, hijiki and kombu seaweeds were selected for these purposes. The theoretical part is focused on the proper nutrition of children, their deficiencies and possible diseases. Subsequently, it deals with the characterization of probiotic cultures and their importance in the child's nutrition. Last but not least, the theoretical part characterizes the individual seaweeds, their nutritional composition and also their importance in the child's nutrition. In the experimental part, samples of selected algae were first analyzed in terms of saccharides, insoluble fiber content, fructooligosaccharides and -glucans or pigment content. A sample of inulin, a commonly used prebiotic in probiotic products, was used as a reference component. An important analysis of this experimental part was to determine the effect of algal extracts on the viability and growth of probiotic bacteria. Subsequently, a model digestion of a mixture of probiotics and algal extracts was performed, and the condition of the probiotic cells was evaluated during digestion and after digestion by measuring turbidity and flow cytometry. Finally, not only the optimal combination of algae extract and probiotic culture was proposed, but also the possibility of improving the long-term viability of probiotic cells in combination with algal extracts.

Probiotické baktérie se nachází v široké škále potravinových výrobků a jejich vnitřní užívání přináší pro lidský organismus mnoho pozitivních účinků. Díky těmto benefitům se probiotické bakterie začaly používat v kosmetickém průmyslu s předpokladem podobných pozitivních účinků jako jsou u vnitřního podání. Cílem této bakalářské práce byla teoretická část, která byla věnována různým rodům probiotik, které se nejčastěji používají v kosmetických výrobcích, při kterých onemocněních kůže se povrchově podávaná probiotika nejčastěji používají a jaký efekt u léčby přinášejí. Následně byly popsány nejčastěji užívané molekulárně-biologické metody identifikace probiotických bakterií. V experimentální části byla izolována DNA probiotických bakterií deklarovaných výrobcem ze dvou kosmetických krémů a následně byla ověřena jejich přítomnost za použití metody polymerázové řetězové reakce., Probiotic bacteria are found in a wide range of food products and their internal use brings many positive effects for the human body. Thanks to these benefits, probiotic bacteria began to be used in the cosmetic industry with the assumption of similar positive effects as with internal administration. The aim of this bachelor's thesis was the theoretical part, which was devoted to various genera of probiotics, which are most often used in cosmetic products, in which skin diseases, surface probiotics are most often used and what effect they bring in treatment. Subsequently, the most commonly used molecular-biological methods for the identification of probiotic bacteria were described. In the experimental part, the DNA of probiotic bacteria declared by the manufacturer was isolated from two cosmetic creams and subsequently their presence was verified using the polymerase chain reaction method.

Probiotické baktérie sú dôležitou súčasťou ľudskej výživy a prinášajú mnohé zdravotné benefity. Konzumujeme ich nielen v tradičných mliečnych fermentovaných potravinách, ale čoraz viac sa do popredia dostávajú aj fermentované výrobky rastlinného pôvodu. V teoretickej časti práce sú zhrnuté všeobecné poznatky o probiotických mikroorganizmoch, jednotlivých druhoch používaných pri technológii spracovania rastlinných a mliečnych fermentovaných produktov, a ich vplyvov na ľudské zdravie. Nasledujúce kapitoly sú venované rôznym metódam identifikácie probiotických baktérií s dôrazom na molekulárnu diagnostiku, konkrétne metódou PCR. Experimentálna časť sa sústreďuje na identifikáciu baktérií mliečneho kvasenia vo fermentovanom produkte rastlinného pôvodu – v kvasenej kapuste za použitia dvoch metód izolácie bakteriálnej DNA a následnej analýze metódou PCR., Probiotic bacteria are an essential part of human nourishment which provide many health benefits. We consume them not only in traditional dairy fermented foodstuff, but also in the ever-expanding fermented plant products. The theoretical part summarized general knowledge about probiotic microorganisms, individual species used in technology of processing plant and dairy fermented products, and their influence on human health. The following chapters are devoted to various methods of identification of probiotic bacteria with emphasis on molecular diagnostics, specifically by PCR method. The experimental part is focused on the identification of lactic acid bacteria in a plant fermented product – in a fermented cabbage using 2 methods of isolation bacterial DNA and subsequent analysis by PCR method.

Probiotické výrobky jsou ve formě různých mléčných výrobků součástí naší stravy od nepaměti. V posledních letech se dostávají do popředí i v dalších odvětvích průmyslu, a to jak v odvětví farmaceutickém, kde jsou často dostupné jako doplňky stravy, tak zejména v odvětví kosmetickém, kde se často přidávají do produktů pro intimní hygienu, anebo také do produktů pečujících o pokožku. První část práce se spočívá v teoretické rešerši v oblasti probiotik, mikrobiomu a dalšími možnostmi, jak se mohou probiotické organismy vyskytovat v kosmetických produktech. Další část je věnována způsobům kultivace a izolace bakteriální DNA z následujících výrobků: krémy Benton, Mechnikov, La Rosche-Posay a masky Benton a Neogen, a to v dostatečné kvalitě pro následnou amplifikaci pomocí PCR. DNA byla izolována pomocí magnetických nosičů, komerčním kitem a fenolovou extrakcí. Přítomnost bakteriální DNA byla prokázána analýzou q-PCR pomocí rodově specifických primerů u vybraných bakterií. Rodová identifikace byla v souladu s deklarovanými informacemi od výrobce. Dále byla provedena PCR analýza v kombinaci s barvivem propidium monoazid pro určení životaschopnosti buněk a HRM analýza., Probiotic products have always been, in the form of various dairy products, a part of our diet. In recent years, they also became prominent in the pharmaceutical sector, where they can often be found as food supplements, and in the cosmetic sector, where they are being added to intimate hygiene and skin care products. The first part of the thesis consists of conducting a theoretical research in the field of probiotics, microbiome and other possibilities of where we can find probiotic organisms in cosmetic products. Further, a part of the thesis is devoted to methods of cultivating and isolating bacterial DNA from the following products: Benton, Mechnikov, La Rosche-Posay creams and Benton and Neogen masks, in sufficient quality for subsequent PCR amplification. DNA was isolated using magnetic carriers, a commercial kit, and phenol extraction. The presence of bacterial DNA was proved by a q-PCR analysis using genus-specified primers of selected bacteria. Genus identification corresponded with the information declared by the manufacturer. To conclude, a PCR and propidium monoazide dye were used in combination for quantification of viable and dead cells, and a HRM analysis was performed.

Na onemocnění celiakie a dalších onemocnění související s konzumací lepku nebyla doposud nalezena jiná léčba než celoživotní dieta, která je ovšem značně pro nemocného omezující. Navíc ne vždy je tuto dietu možné zcela dodržet, hlavně vlivem neúmyslného pozření lepku, přičemž nastávají zdravotní komplikace spojené s těmito onemocněními. Jako alternativa léčby je momentálně ve stádiu klinického testování vakcinace a stále více pozornosti se také věnuje enzymům, které by dokázaly rozštěpit imunosekvenční část lepku, konkrétně v jeho gliadinové části. V této práci byly zkoumány bakterie, které by mohly dokázat tuto sekvenci v gliadinu rozštěpit a tím snížit jeho koncentraci při detekci. Značná část testovaných bakterií se řadí mezi probiotika, aby bylo jejich případné budoucí použití pro člověka bezpečné. Pro získání dat se využilo poznatku, kdy s rostoucími bakteriemi roste přímo úměrně i zákal, který byl následně detekován na určení množství nárůstu bakteriální kultury. Pro samotný test na detekci gliadinu se využil kit RIDASCREEN® Gliadin competitive pracující na principu kompetitivní ELISA metody s protilátkami R5. Výsledkem práce bylo zjištění, že ze zkoumaných bakterií byla pouze bakterie Bacillus subtilis schopna štěpit gliadin. Bylo také změřeno, jaké množství gliadinu dokáže při různé koncentraci bakterie rozštěpit a dle dat bylo také vyhodnoceno, že pro větší množství rozštěpeného gliadinu je vhodné kulturu nejprve adaptovat na přítomnost gliadinu., No other treatment for celiac disease and other gluten-related disorders has been found so far except for a lifelong diet, which is significantly restrictive for the patient. Moreover, it is not always possible to adhere strictly to this diet, mainly due to random gluten ingestion, which leads to health complications associated with these diseases. Currently, vaccination is being tested as an alternative treatment, and there is also increasing attention paid to enzymes that could break down the immunogenic part of gluten, specifically in its gliadin component. This thesis examined bacteria that could potentially break down this sequence in gliadin and thereby reduce its concentration during detection. A considerable proportion of the tested bacteria belong to probiotics to ensure their future use for humans is safe. To obtain data, the fact was utilized that as bacteria grow, the turbidity increases proportionally, which was subsequently detected to determine the amount of bacterial growth. The RIDASCREEN® Gliadin competitive kit was used for the gliadin detection test, which works on the principle of a competitive ELISA method with R5 antibodies. The result of the study was the finding that only the bacteria Bacillus subtilis was able to break down gliadin among the examined bacteria. It was also measured how much gliadin the bacteria could break down at different concentrations, and according to the data, it was evaluated that it is appropriate to adapt the culture to the presence of gliadin for a greater amount of broken gliadin.

V rámci této diplomové práce byly řešeny možnosti vývoje ovocno-zeleninových šťáv s obsahem zelné šťávy, charakterizace jejich nutričních a senzorických kvalit, jejich stabilita a možnost obohacení vybraných kombinací pasterovaných šťáv s přídavkem probiotické kultury Lactobacillus plantarum. Na základě senzorické analýzy byly vybrány nejlepší kombinace ovocno-zeleninových šťáv, které byly skladovány po dobu 30 dní při teplotě 8 °C. U skladovaných vzorků byly během skladování sledovány změny vybraných parametrů. Spektrofotometricky byly stanoveny parametry antioxidační aktivity, obsah celkových polyfenolů, flavonoidů, celkových ve vodě rozpustných sacharidů a redukujících sacharidů; pomocí HPLC byla stanovena kyselina mléčná a L-askorbová, pomocí průtokového cytometru byl stanoven počet probiotických buněk, dále bylo měřeno pH. Viabilita probiotik byla na konci experimentu ověřena kultivačním testem. Hodnoty antioxidační aktivity a celkový obsah polyfenolů se během pozorování příliš neměnily. Naopak k výrazným změnám docházelo u obsahu celkových a redukujících sacharidů a celkových flavonoidů. Bylo zjištěno, že v průběhu 14 dní dochází k zachování probiotické viability a následně dochází k jeho poklesu. Z hlediska zachování co největšího obsahu probiotika by bylo vhodné probioticky obohacené šťávy skladovat při teplotě 8 °C maximálně 14–19 dnů. Nejvyšší viabilita byla pozorována u vzorku JHM (obsahujícím jablečnou, hruškovou, mrkvovou a zelnou šťávu ve stejném poměru). Navzdory zjištěné nízké viabilitě probiotické kultury, zůstávají tyto navrhované funkční potraviny nutričně, chuťově i vzhledově zajímavými produkty, které mohou napomoci k popularizaci konzumace netradičních lokálních potravin., This diploma thesis focuses on the development possibilities of fruit and vegetable juices containing sauerkraut juice, the characterization of their nutritional and sensory qualities and their stability, as well as the potential for enriching selected juices with probiotic culture of Lactobacillus plantarum. The best combinations of various juice mixtures were selected based on sensory analysis and were stored for 30 days at 8 °C. Changes in selected parameters were monitored during the storage. Antioxidant activity, total flavonoids and polyphenols content and content of total water-soluble and reducing saccharides were determined by spectrophotometric methods. HPLC was used for lactic and L-ascorbic acid determination, flow cytometry was used for probiotic cell content determination, culture test was used to observe viability of cells, pH was monitored. Contents of antioxidant activity and of total polyphenols content did not drastically change during the storage. Major changes were observed in total and reducing sugar content and total flavonoids content. It was observed that probiotic viability was preserved for 14 days, decrease occurred afterwards. In order to achieve as high content of probiotics as possible, it would be advisable to store probiotically enriched juices for maximum of 14–19 days at temperature of 8 °C. The highest viability was observed in JHM sample (containing apple, pear, carrot and sauerkraut juice in the same ratio). Even through viability of probiotic cells was determined as low, these presented functional beverages remain nutritionally, visually and taste-wise interesting products, which can help popularize the consumption of non-traditional local foods.

Cílem diplomové práce byl průkaz probiotických bakterií z probiotického doplňku stravy ve formě sirupu. Z komplexní matrice výrobku byla izolována DNA v dostatečné čistotě a kvalitě vhodné pro metodu PCR v reálném čase a následně PCR-HRM. K amplifikaci pomocí PCR v reálném čase a PCR-HRM byly použity specifické primery pro rody Lactobacillus, Bifidobacterium a Streptococcus a na úrovni druhu pro druhy Lactobacillus casei, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus reuteri, Bifidobacterium animalis, Bifidobacterium breve, Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium lactis, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium infantis a Streptococcus thermophilus. Po optimalizaci podmínek pro specifické primery byly ve výrobku prokázány všechny deklarované bakterie., The aim of the diploma thesis was the identification of probiotic bacteria from a probiotic food supplement in the form of syrup. DNA was isolated from the complex matrix of the product in sufficient purity and quality suitable for the real-time PCR method followed by PCR-HRM. Specific primers for the genera Lactobacillus, Bifidobacterium and Streptococcus and at the species level for the species Lactobacillus casei, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus reuteri, Bifidobacterium animalis, Bifidobacterium breve, Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium lactis, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium infantis and Streptococcus thermophilus were used for amplification by real-time PCR and PCR-HRM. After optimizing the conditions for specific primers, all declared bacteria were detected in the product.

Na onemocnění celiakie a dalších onemocnění související s konzumací lepku nebyla doposud nalezena jiná léčba než celoživotní dieta, která je ovšem značně pro nemocného omezující. Navíc ne vždy je tuto dietu možné zcela dodržet, hlavně vlivem neúmyslného pozření lepku, přičemž nastávají zdravotní komplikace spojené s těmito onemocněními. Jako alternativa léčby je momentálně ve stádiu klinického testování vakcinace a stále více pozornosti se také věnuje enzymům, které by dokázaly rozštěpit imunosekvenční část lepku, konkrétně v jeho gliadinové části. V této práci byly zkoumány bakterie, které by mohly dokázat tuto sekvenci v gliadinu rozštěpit a tím snížit jeho koncentraci při detekci. Značná část testovaných bakterií se řadí mezi probiotika, aby bylo jejich případné budoucí použití pro člověka bezpečné. Pro získání dat se využilo poznatku, kdy s rostoucími bakteriemi roste přímo úměrně i zákal, který byl následně detekován na určení množství nárůstu bakteriální kultury. Pro samotný test na detekci gliadinu se využil kit RIDASCREEN® Gliadin competitive pracující na principu kompetitivní ELISA metody s protilátkami R5. Výsledkem práce bylo zjištění, že ze zkoumaných bakterií byla pouze bakterie Bacillus subtilis schopna štěpit gliadin. Bylo také změřeno, jaké množství gliadinu dokáže při různé koncentraci bakterie rozštěpit a dle dat bylo také vyhodnoceno, že pro větší množství rozštěpeného gliadinu je vhodné kulturu nejprve adaptovat na přítomnost gliadinu., No other treatment for celiac disease and other gluten-related disorders has been found so far except for a lifelong diet, which is significantly restrictive for the patient. Moreover, it is not always possible to adhere strictly to this diet, mainly due to random gluten ingestion, which leads to health complications associated with these diseases. Currently, vaccination is being tested as an alternative treatment, and there is also increasing attention paid to enzymes that could break down the immunogenic part of gluten, specifically in its gliadin component. This thesis examined bacteria that could potentially break down this sequence in gliadin and thereby reduce its concentration during detection. A considerable proportion of the tested bacteria belong to probiotics to ensure their future use for humans is safe. To obtain data, the fact was utilized that as bacteria grow, the turbidity increases proportionally, which was subsequently detected to determine the amount of bacterial growth. The RIDASCREEN® Gliadin competitive kit was used for the gliadin detection test, which works on the principle of a competitive ELISA method with R5 antibodies. The result of the study was the finding that only the bacteria Bacillus subtilis was able to break down gliadin among the examined bacteria. It was also measured how much gliadin the bacteria could break down at different concentrations, and according to the data, it was evaluated that it is appropriate to adapt the culture to the presence of gliadin for a greater amount of broken gliadin.

Probiotické výrobky jsou ve formě různých mléčných výrobků součástí naší stravy od nepaměti. V posledních letech se dostávají do popředí i v dalších odvětvích průmyslu, a to jak v odvětví farmaceutickém, kde jsou často dostupné jako doplňky stravy, tak zejména v odvětví kosmetickém, kde se často přidávají do produktů pro intimní hygienu, anebo také do produktů pečujících o pokožku. První část práce se spočívá v teoretické rešerši v oblasti probiotik, mikrobiomu a dalšími možnostmi, jak se mohou probiotické organismy vyskytovat v kosmetických produktech. Další část je věnována způsobům kultivace a izolace bakteriální DNA z následujících výrobků: krémy Benton, Mechnikov, La Rosche-Posay a masky Benton a Neogen, a to v dostatečné kvalitě pro následnou amplifikaci pomocí PCR. DNA byla izolována pomocí magnetických nosičů, komerčním kitem a fenolovou extrakcí. Přítomnost bakteriální DNA byla prokázána analýzou q-PCR pomocí rodově specifických primerů u vybraných bakterií. Rodová identifikace byla v souladu s deklarovanými informacemi od výrobce. Dále byla provedena PCR analýza v kombinaci s barvivem propidium monoazid pro určení životaschopnosti buněk a HRM analýza., Probiotic products have always been, in the form of various dairy products, a part of our diet. In recent years, they also became prominent in the pharmaceutical sector, where they can often be found as food supplements, and in the cosmetic sector, where they are being added to intimate hygiene and skin care products. The first part of the thesis consists of conducting a theoretical research in the field of probiotics, microbiome and other possibilities of where we can find probiotic organisms in cosmetic products. Further, a part of the thesis is devoted to methods of cultivating and isolating bacterial DNA from the following products: Benton, Mechnikov, La Rosche-Posay creams and Benton and Neogen masks, in sufficient quality for subsequent PCR amplification. DNA was isolated using magnetic carriers, a commercial kit, and phenol extraction. The presence of bacterial DNA was proved by a q-PCR analysis using genus-specified primers of selected bacteria. Genus identification corresponded with the information declared by the manufacturer. To conclude, a PCR and propidium monoazide dye were used in combination for quantification of viable and dead cells, and a HRM analysis was performed.

V rámci této diplomové práce byly řešeny možnosti vývoje ovocno-zeleninových šťáv s obsahem zelné šťávy, charakterizace jejich nutričních a senzorických kvalit, jejich stabilita a možnost obohacení vybraných kombinací pasterovaných šťáv s přídavkem probiotické kultury Lactobacillus plantarum. Na základě senzorické analýzy byly vybrány nejlepší kombinace ovocno-zeleninových šťáv, které byly skladovány po dobu 30 dní při teplotě 8 °C. U skladovaných vzorků byly během skladování sledovány změny vybraných parametrů. Spektrofotometricky byly stanoveny parametry antioxidační aktivity, obsah celkových polyfenolů, flavonoidů, celkových ve vodě rozpustných sacharidů a redukujících sacharidů; pomocí HPLC byla stanovena kyselina mléčná a L-askorbová, pomocí průtokového cytometru byl stanoven počet probiotických buněk, dále bylo měřeno pH. Viabilita probiotik byla na konci experimentu ověřena kultivačním testem. Hodnoty antioxidační aktivity a celkový obsah polyfenolů se během pozorování příliš neměnily. Naopak k výrazným změnám docházelo u obsahu celkových a redukujících sacharidů a celkových flavonoidů. Bylo zjištěno, že v průběhu 14 dní dochází k zachování probiotické viability a následně dochází k jeho poklesu. Z hlediska zachování co největšího obsahu probiotika by bylo vhodné probioticky obohacené šťávy skladovat při teplotě 8 °C maximálně 14–19 dnů. Nejvyšší viabilita byla pozorována u vzorku JHM (obsahujícím jablečnou, hruškovou, mrkvovou a zelnou šťávu ve stejném poměru). Navzdory zjištěné nízké viabilitě probiotické kultury, zůstávají tyto navrhované funkční potraviny nutričně, chuťově i vzhledově zajímavými produkty, které mohou napomoci k popularizaci konzumace netradičních lokálních potravin., This diploma thesis focuses on the development possibilities of fruit and vegetable juices containing sauerkraut juice, the characterization of their nutritional and sensory qualities and their stability, as well as the potential for enriching selected juices with probiotic culture of Lactobacillus plantarum. The best combinations of various juice mixtures were selected based on sensory analysis and were stored for 30 days at 8 °C. Changes in selected parameters were monitored during the storage. Antioxidant activity, total flavonoids and polyphenols content and content of total water-soluble and reducing saccharides were determined by spectrophotometric methods. HPLC was used for lactic and L-ascorbic acid determination, flow cytometry was used for probiotic cell content determination, culture test was used to observe viability of cells, pH was monitored. Contents of antioxidant activity and of total polyphenols content did not drastically change during the storage. Major changes were observed in total and reducing sugar content and total flavonoids content. It was observed that probiotic viability was preserved for 14 days, decrease occurred afterwards. In order to achieve as high content of probiotics as possible, it would be advisable to store probiotically enriched juices for maximum of 14–19 days at temperature of 8 °C. The highest viability was observed in JHM sample (containing apple, pear, carrot and sauerkraut juice in the same ratio). Even through viability of probiotic cells was determined as low, these presented functional beverages remain nutritionally, visually and taste-wise interesting products, which can help popularize the consumption of non-traditional local foods.

Cílem diplomové práce byl průkaz probiotických bakterií z probiotického doplňku stravy ve formě sirupu. Z komplexní matrice výrobku byla izolována DNA v dostatečné čistotě a kvalitě vhodné pro metodu PCR v reálném čase a následně PCR-HRM. K amplifikaci pomocí PCR v reálném čase a PCR-HRM byly použity specifické primery pro rody Lactobacillus, Bifidobacterium a Streptococcus a na úrovni druhu pro druhy Lactobacillus casei, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus reuteri, Bifidobacterium animalis, Bifidobacterium breve, Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium lactis, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium infantis a Streptococcus thermophilus. Po optimalizaci podmínek pro specifické primery byly ve výrobku prokázány všechny deklarované bakterie., The aim of the diploma thesis was the identification of probiotic bacteria from a probiotic food supplement in the form of syrup. DNA was isolated from the complex matrix of the product in sufficient purity and quality suitable for the real-time PCR method followed by PCR-HRM. Specific primers for the genera Lactobacillus, Bifidobacterium and Streptococcus and at the species level for the species Lactobacillus casei, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus reuteri, Bifidobacterium animalis, Bifidobacterium breve, Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium lactis, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium infantis and Streptococcus thermophilus were used for amplification by real-time PCR and PCR-HRM. After optimizing the conditions for specific primers, all declared bacteria were detected in the product.

Cílem diplomové práce byl průkaz probiotických bakterií z probiotického doplňku stravy ve formě sirupu. Z komplexní matrice výrobku byla izolována DNA v dostatečné čistotě a kvalitě vhodné pro metodu PCR v reálném čase a následně PCR-HRM. K amplifikaci pomocí PCR v reálném čase a PCR-HRM byly použity specifické primery pro rody Lactobacillus, Bifidobacterium a Streptococcus a na úrovni druhu pro druhy Lactobacillus casei, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus reuteri, Bifidobacterium animalis, Bifidobacterium breve, Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium lactis, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium infantis a Streptococcus thermophilus. Po optimalizaci podmínek pro specifické primery byly ve výrobku prokázány všechny deklarované bakterie., The aim of the diploma thesis was the identification of probiotic bacteria from a probiotic food supplement in the form of syrup. DNA was isolated from the complex matrix of the product in sufficient purity and quality suitable for the real-time PCR method followed by PCR-HRM. Specific primers for the genera Lactobacillus, Bifidobacterium and Streptococcus and at the species level for the species Lactobacillus casei, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus reuteri, Bifidobacterium animalis, Bifidobacterium breve, Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium lactis, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium infantis and Streptococcus thermophilus were used for amplification by real-time PCR and PCR-HRM. After optimizing the conditions for specific primers, all declared bacteria were detected in the product.

V rámci této diplomové práce byly řešeny možnosti vývoje ovocno-zeleninových šťáv s obsahem zelné šťávy, charakterizace jejich nutričních a senzorických kvalit, jejich stabilita a možnost obohacení vybraných kombinací pasterovaných šťáv s přídavkem probiotické kultury Lactobacillus plantarum. Na základě senzorické analýzy byly vybrány nejlepší kombinace ovocno-zeleninových šťáv, které byly skladovány po dobu 30 dní při teplotě 8 °C. U skladovaných vzorků byly během skladování sledovány změny vybraných parametrů. Spektrofotometricky byly stanoveny parametry antioxidační aktivity, obsah celkových polyfenolů, flavonoidů, celkových ve vodě rozpustných sacharidů a redukujících sacharidů; pomocí HPLC byla stanovena kyselina mléčná a L-askorbová, pomocí průtokového cytometru byl stanoven počet probiotických buněk, dále bylo měřeno pH. Viabilita probiotik byla na konci experimentu ověřena kultivačním testem. Hodnoty antioxidační aktivity a celkový obsah polyfenolů se během pozorování příliš neměnily. Naopak k výrazným změnám docházelo u obsahu celkových a redukujících sacharidů a celkových flavonoidů. Bylo zjištěno, že v průběhu 14 dní dochází k zachování probiotické viability a následně dochází k jeho poklesu. Z hlediska zachování co největšího obsahu probiotika by bylo vhodné probioticky obohacené šťávy skladovat při teplotě 8 °C maximálně 14–19 dnů. Nejvyšší viabilita byla pozorována u vzorku JHM (obsahujícím jablečnou, hruškovou, mrkvovou a zelnou šťávu ve stejném poměru). Navzdory zjištěné nízké viabilitě probiotické kultury, zůstávají tyto navrhované funkční potraviny nutričně, chuťově i vzhledově zajímavými produkty, které mohou napomoci k popularizaci konzumace netradičních lokálních potravin., This diploma thesis focuses on the development possibilities of fruit and vegetable juices containing sauerkraut juice, the characterization of their nutritional and sensory qualities and their stability, as well as the potential for enriching selected juices with probiotic culture of Lactobacillus plantarum. The best combinations of various juice mixtures were selected based on sensory analysis and were stored for 30 days at 8 °C. Changes in selected parameters were monitored during the storage. Antioxidant activity, total flavonoids and polyphenols content and content of total water-soluble and reducing saccharides were determined by spectrophotometric methods. HPLC was used for lactic and L-ascorbic acid determination, flow cytometry was used for probiotic cell content determination, culture test was used to observe viability of cells, pH was monitored. Contents of antioxidant activity and of total polyphenols content did not drastically change during the storage. Major changes were observed in total and reducing sugar content and total flavonoids content. It was observed that probiotic viability was preserved for 14 days, decrease occurred afterwards. In order to achieve as high content of probiotics as possible, it would be advisable to store probiotically enriched juices for maximum of 14–19 days at temperature of 8 °C. The highest viability was observed in JHM sample (containing apple, pear, carrot and sauerkraut juice in the same ratio). Even through viability of probiotic cells was determined as low, these presented functional beverages remain nutritionally, visually and taste-wise interesting products, which can help popularize the consumption of non-traditional local foods.

Probiotické výrobky jsou ve formě různých mléčných výrobků součástí naší stravy od nepaměti. V posledních letech se dostávají do popředí i v dalších odvětvích průmyslu, a to jak v odvětví farmaceutickém, kde jsou často dostupné jako doplňky stravy, tak zejména v odvětví kosmetickém, kde se často přidávají do produktů pro intimní hygienu, anebo také do produktů pečujících o pokožku. První část práce se spočívá v teoretické rešerši v oblasti probiotik, mikrobiomu a dalšími možnostmi, jak se mohou probiotické organismy vyskytovat v kosmetických produktech. Další část je věnována způsobům kultivace a izolace bakteriální DNA z následujících výrobků: krémy Benton, Mechnikov, La Rosche-Posay a masky Benton a Neogen, a to v dostatečné kvalitě pro následnou amplifikaci pomocí PCR. DNA byla izolována pomocí magnetických nosičů, komerčním kitem a fenolovou extrakcí. Přítomnost bakteriální DNA byla prokázána analýzou q-PCR pomocí rodově specifických primerů u vybraných bakterií. Rodová identifikace byla v souladu s deklarovanými informacemi od výrobce. Dále byla provedena PCR analýza v kombinaci s barvivem propidium monoazid pro určení životaschopnosti buněk a HRM analýza., Probiotic products have always been, in the form of various dairy products, a part of our diet. In recent years, they also became prominent in the pharmaceutical sector, where they can often be found as food supplements, and in the cosmetic sector, where they are being added to intimate hygiene and skin care products. The first part of the thesis consists of conducting a theoretical research in the field of probiotics, microbiome and other possibilities of where we can find probiotic organisms in cosmetic products. Further, a part of the thesis is devoted to methods of cultivating and isolating bacterial DNA from the following products: Benton, Mechnikov, La Rosche-Posay creams and Benton and Neogen masks, in sufficient quality for subsequent PCR amplification. DNA was isolated using magnetic carriers, a commercial kit, and phenol extraction. The presence of bacterial DNA was proved by a q-PCR analysis using genus-specified primers of selected bacteria. Genus identification corresponded with the information declared by the manufacturer. To conclude, a PCR and propidium monoazide dye were used in combination for quantification of viable and dead cells, and a HRM analysis was performed.

Na onemocnění celiakie a dalších onemocnění související s konzumací lepku nebyla doposud nalezena jiná léčba než celoživotní dieta, která je ovšem značně pro nemocného omezující. Navíc ne vždy je tuto dietu možné zcela dodržet, hlavně vlivem neúmyslného pozření lepku, přičemž nastávají zdravotní komplikace spojené s těmito onemocněními. Jako alternativa léčby je momentálně ve stádiu klinického testování vakcinace a stále více pozornosti se také věnuje enzymům, které by dokázaly rozštěpit imunosekvenční část lepku, konkrétně v jeho gliadinové části. V této práci byly zkoumány bakterie, které by mohly dokázat tuto sekvenci v gliadinu rozštěpit a tím snížit jeho koncentraci při detekci. Značná část testovaných bakterií se řadí mezi probiotika, aby bylo jejich případné budoucí použití pro člověka bezpečné. Pro získání dat se využilo poznatku, kdy s rostoucími bakteriemi roste přímo úměrně i zákal, který byl následně detekován na určení množství nárůstu bakteriální kultury. Pro samotný test na detekci gliadinu se využil kit RIDASCREEN® Gliadin competitive pracující na principu kompetitivní ELISA metody s protilátkami R5. Výsledkem práce bylo zjištění, že ze zkoumaných bakterií byla pouze bakterie Bacillus subtilis schopna štěpit gliadin. Bylo také změřeno, jaké množství gliadinu dokáže při různé koncentraci bakterie rozštěpit a dle dat bylo také vyhodnoceno, že pro větší množství rozštěpeného gliadinu je vhodné kulturu nejprve adaptovat na přítomnost gliadinu., No other treatment for celiac disease and other gluten-related disorders has been found so far except for a lifelong diet, which is significantly restrictive for the patient. Moreover, it is not always possible to adhere strictly to this diet, mainly due to random gluten ingestion, which leads to health complications associated with these diseases. Currently, vaccination is being tested as an alternative treatment, and there is also increasing attention paid to enzymes that could break down the immunogenic part of gluten, specifically in its gliadin component. This thesis examined bacteria that could potentially break down this sequence in gliadin and thereby reduce its concentration during detection. A considerable proportion of the tested bacteria belong to probiotics to ensure their future use for humans is safe. To obtain data, the fact was utilized that as bacteria grow, the turbidity increases proportionally, which was subsequently detected to determine the amount of bacterial growth. The RIDASCREEN® Gliadin competitive kit was used for the gliadin detection test, which works on the principle of a competitive ELISA method with R5 antibodies. The result of the study was the finding that only the bacteria Bacillus subtilis was able to break down gliadin among the examined bacteria. It was also measured how much gliadin the bacteria could break down at different concentrations, and according to the data, it was evaluated that it is appropriate to adapt the culture to the presence of gliadin for a greater amount of broken gliadin.

Probiotika jsou živé mikroorganismy, které mají prospěšné účinky na zdraví člověka po jejich konzumaci. Teoretická část bakalářské práce popisuje vlastnosti a zdravotní účinky probiotik a jejích využití v potravinářství.Experimentální čast byla zaměřena na izolaci DNA z dvou mléčných probiotických výrobků v kvalitě pro PCR. Pomocí metody PCR byla ve výrobcích prokázana přítomnost cílových bakteriálních DNA., Probiotics are living microorganisms that have positive effects on human health after consumption. The theoretical part of the bachelor thesis describes properties and health effects of probiotics and their use in food industry. The experimental part was focused on the isolation of PCR-ready DNA from two dairy probiotic products. The presence of target bacterial DNA was confirmed using PCR methods.

Teoretická část práce pojednává o široké škále mikroorganismů a látek odvozených od probiotik. V práci jsou na základě nejnovějších publikací definovány probiotika, prebiotika, synbiotika, paraprobiotika, postbiotika, pharmabiotika, psychobiotika a onkobiotika. Dále je specifikován účel a použití zmíněných – biotik k současnému poznání jejich funkce. V experimentální části byla ze vzorku probiotických tobolek izolována DNA komerčně dostupným bakteriálním kitem a magnetickými částicemi. Byla poté spektrofotometricky stanovena její čistota a koncentrace. Za použití izolované DNA jako matrice pro konvenční PCR a detekce na agarózovém gelu bylo analyzováno složení probiotického produktu deklarovaného výrobcem. V závěru byla optimalizována metoda PMA-PCR., The theoretical part of the thesis deals with a wide range of microorganisms and substances derived from probiotics. Based on recent publications, probiotics, prebiotics, synbiotics, paraprobiotics, postbiotics, pharmabiotics, psychobiotics and oncobiotics are defined. Furthermore, the purpose and use of the mentioned -biotics is specified for the current understanding of their function. In the experimental part, DNA was isolated from a sample of probiotic capsules using a commercially available bacterial kit and magnetic particles. Its purity and concentration were then determined spectrophotometrically. Using the isolated DNA as a matrix for conventional PCR and detection on agarose gel, the composition of the probiotic product as declared by the manufacturer was demonstrated. Finally, the PMA-PCR method was optimized.

Tato bakalářská práce se zabývá identifikací probiotických mikroorganismů v kosmetických přípravcích pomocí polymerázové řetězové reakce (PCR). Cílem této práce bylo potvrdit přítomnost bakteriální DNA v kosmetických výrobcích obsahujících probiotické mikroorganismy. Teoretická část práce se zaměřuje na úlohu probiotických mikroorganismů při udržování zdraví pokožky a na jejich účinky na lidský organismus. Rovněž jsou zdůrazněny různé metody identifikace probiotik se zaměřením na molekulárně genetické přístupy. V experimentální části práce byly testovány dva kosmetické výrobky s deklarovanou přítomností probiotických mikroorganismů. Pro extrakci DNA z výrobků byly použity dvě metody: fenolová extrakce a metoda pomocí komerčního kitu. Dále byla provedena amplifikace specifické oblasti genu 16S rRNA pomocí PCR. Produkty PCR byly podrobeny elektroforéze na agarósovém gelu a byly vizualizovány pomocí ultrafialového světla. Všechny kosmetické produkty prokázaly přítomnost domény Bacteria a rodu Lactobacillus. Druhově specifická PCR navíc potvrdila přítomnost deklarovaných probiotických druhů Lactobacillus pentosus a Lactobacillus bulgaricus ve výrobcích., This bachelor thesis deals with the identification of probiotic microorganisms in cosmetic products by polymerase chain reaction (PCR). The aim of this work was to confirm the presence of bacterial DNA in cosmetic products containing probiotic microorganisms. The theoretical part of the thesis focuses on the role of probiotic microorganisms in maintaining skin health and their effects on the human body. Different methods for the identification of probiotics are also highlighted with a focus on molecular genetic approaches. In the experimental part of the work, two cosmetic products with declared presence of probiotic microorganisms were tested. Two methods were used to extract DNA from the products: phenol extraction and commercial kit method. Furthermore, amplification of a specific region of the 16S rRNA gene was performed by PCR. The PCR products were subjected to agarose gel electrophoresis and visualized by ultraviolet light. All cosmetic products showed the presence of the Bacteria domain and the genus Lactobacillus. In addition, species-specific PCR confirmed the presence of the declared probiotic species Lactobacillus pentosus and Lactobacillus bulgaricus in the products.

Tato bakalářská práce se zabývá identifikací probiotických mikroorganismů v kosmetických přípravcích pomocí polymerázové řetězové reakce (PCR). Cílem této práce bylo potvrdit přítomnost bakteriální DNA v kosmetických výrobcích obsahujících probiotické mikroorganismy. Teoretická část práce se zaměřuje na úlohu probiotických mikroorganismů při udržování zdraví pokožky a na jejich účinky na lidský organismus. Rovněž jsou zdůrazněny různé metody identifikace probiotik se zaměřením na molekulárně genetické přístupy. V experimentální části práce byly testovány dva kosmetické výrobky s deklarovanou přítomností probiotických mikroorganismů. Pro extrakci DNA z výrobků byly použity dvě metody: fenolová extrakce a metoda pomocí komerčního kitu. Dále byla provedena amplifikace specifické oblasti genu 16S rRNA pomocí PCR. Produkty PCR byly podrobeny elektroforéze na agarósovém gelu a byly vizualizovány pomocí ultrafialového světla. Všechny kosmetické produkty prokázaly přítomnost domény Bacteria a rodu Lactobacillus. Druhově specifická PCR navíc potvrdila přítomnost deklarovaných probiotických druhů Lactobacillus pentosus a Lactobacillus bulgaricus ve výrobcích., This bachelor thesis deals with the identification of probiotic microorganisms in cosmetic products by polymerase chain reaction (PCR). The aim of this work was to confirm the presence of bacterial DNA in cosmetic products containing probiotic microorganisms. The theoretical part of the thesis focuses on the role of probiotic microorganisms in maintaining skin health and their effects on the human body. Different methods for the identification of probiotics are also highlighted with a focus on molecular genetic approaches. In the experimental part of the work, two cosmetic products with declared presence of probiotic microorganisms were tested. Two methods were used to extract DNA from the products: phenol extraction and commercial kit method. Furthermore, amplification of a specific region of the 16S rRNA gene was performed by PCR. The PCR products were subjected to agarose gel electrophoresis and visualized by ultraviolet light. All cosmetic products showed the presence of the Bacteria domain and the genus Lactobacillus. In addition, species-specific PCR confirmed the presence of the declared probiotic species Lactobacillus pentosus and Lactobacillus bulgaricus in the products.

Bakalářská práce se zabývá vysvětlením termínu probiotika, vlastnostem jednotlivých rodů probiotických bakterií, přípravě kávy a čaje, stejně tak jako probiotické kávě a čaji a molekulárně diagnostickým metodám, použitých při bakalářské práci. Byly provedeny mikrobiologické a molekulárně diagnostické metody na analýzu vzorků probiotické kávy a čajů zejména, pak na potvrzení přítomnosti rodu Bacillus a na potvrzení jeho odolnosti vůči vysoké teplotě. Pomocí konvenční PCR metody a real-time PCR metody byla potvrzena přítomnost bakteriální DNA ve vzorcích kávy a čajů. Metodou PMA-PCR Byla ověřena odolnost zástupců rodu Bacillus vůči vysokým teplotám, kterým jsou v závislosti na charakteru výrobku jejichž jsou součástí vystaveny při jejich přípravě ke konzumaci., Bachelor thesis deals with explanation of therm probiotics, properties of each probiotic bacteria genuses. preparation of coffee and tea, and also deals with probiotic coffee and tea and molekular diagostic methods which were used during bachelor thesis. There were used mikrobiological and molecular diagnostic methods for analysis of probiotic coffee and teas. Namely for confirmation of bacterial genus Bacillus and for confirmation of survavibility of Bacillus during high temperatures. Presence of bacterial DNA in samples of coffee and teas was confirmed by conventional PCR method and by real-time PCR method. Survibility of genus Bacillus during high temperaturewas confirmed by PMA-PCR method.

Teoretická část práce pojednává o široké škále mikroorganismů a látek odvozených od probiotik. V práci jsou na základě nejnovějších publikací definovány probiotika, prebiotika, synbiotika, paraprobiotika, postbiotika, pharmabiotika, psychobiotika a onkobiotika. Dále je specifikován účel a použití zmíněných – biotik k současnému poznání jejich funkce. V experimentální části byla ze vzorku probiotických tobolek izolována DNA komerčně dostupným bakteriálním kitem a magnetickými částicemi. Byla poté spektrofotometricky stanovena její čistota a koncentrace. Za použití izolované DNA jako matrice pro konvenční PCR a detekce na agarózovém gelu bylo analyzováno složení probiotického produktu deklarovaného výrobcem. V závěru byla optimalizována metoda PMA-PCR., The theoretical part of the thesis deals with a wide range of microorganisms and substances derived from probiotics. Based on recent publications, probiotics, prebiotics, synbiotics, paraprobiotics, postbiotics, pharmabiotics, psychobiotics and oncobiotics are defined. Furthermore, the purpose and use of the mentioned -biotics is specified for the current understanding of their function. In the experimental part, DNA was isolated from a sample of probiotic capsules using a commercially available bacterial kit and magnetic particles. Its purity and concentration were then determined spectrophotometrically. Using the isolated DNA as a matrix for conventional PCR and detection on agarose gel, the composition of the probiotic product as declared by the manufacturer was demonstrated. Finally, the PMA-PCR method was optimized.

Teoretická část práce pojednává o široké škále mikroorganismů a látek odvozených od probiotik. V práci jsou na základě nejnovějších publikací definovány probiotika, prebiotika, synbiotika, paraprobiotika, postbiotika, pharmabiotika, psychobiotika a onkobiotika. Dále je specifikován účel a použití zmíněných – biotik k současnému poznání jejich funkce. V experimentální části byla ze vzorku probiotických tobolek izolována DNA komerčně dostupným bakteriálním kitem a magnetickými částicemi. Byla poté spektrofotometricky stanovena její čistota a koncentrace. Za použití izolované DNA jako matrice pro konvenční PCR a detekce na agarózovém gelu bylo analyzováno složení probiotického produktu deklarovaného výrobcem. V závěru byla optimalizována metoda PMA-PCR., The theoretical part of the thesis deals with a wide range of microorganisms and substances derived from probiotics. Based on recent publications, probiotics, prebiotics, synbiotics, paraprobiotics, postbiotics, pharmabiotics, psychobiotics and oncobiotics are defined. Furthermore, the purpose and use of the mentioned -biotics is specified for the current understanding of their function. In the experimental part, DNA was isolated from a sample of probiotic capsules using a commercially available bacterial kit and magnetic particles. Its purity and concentration were then determined spectrophotometrically. Using the isolated DNA as a matrix for conventional PCR and detection on agarose gel, the composition of the probiotic product as declared by the manufacturer was demonstrated. Finally, the PMA-PCR method was optimized.

Bakalářská práce se zabývá vysvětlením termínu probiotika, vlastnostem jednotlivých rodů probiotických bakterií, přípravě kávy a čaje, stejně tak jako probiotické kávě a čaji a molekulárně diagnostickým metodám, použitých při bakalářské práci. Byly provedeny mikrobiologické a molekulárně diagnostické metody na analýzu vzorků probiotické kávy a čajů zejména, pak na potvrzení přítomnosti rodu Bacillus a na potvrzení jeho odolnosti vůči vysoké teplotě. Pomocí konvenční PCR metody a real-time PCR metody byla potvrzena přítomnost bakteriální DNA ve vzorcích kávy a čajů. Metodou PMA-PCR Byla ověřena odolnost zástupců rodu Bacillus vůči vysokým teplotám, kterým jsou v závislosti na charakteru výrobku jejichž jsou součástí vystaveny při jejich přípravě ke konzumaci., Bachelor thesis deals with explanation of therm probiotics, properties of each probiotic bacteria genuses. preparation of coffee and tea, and also deals with probiotic coffee and tea and molekular diagostic methods which were used during bachelor thesis. There were used mikrobiological and molecular diagnostic methods for analysis of probiotic coffee and teas. Namely for confirmation of bacterial genus Bacillus and for confirmation of survavibility of Bacillus during high temperatures. Presence of bacterial DNA in samples of coffee and teas was confirmed by conventional PCR method and by real-time PCR method. Survibility of genus Bacillus during high temperaturewas confirmed by PMA-PCR method.

Diplomová práce pojednává o enkapsulaci přírodních extraktů. V teoretické části jsou popsány metody enkapsulace, materiály používané pro přípravu částic a aplikace enkapsulačních technik v potravinářství. V rámci experimentální části práce byly charakterizovány vybrané přírodní extrakty získané z propolisu, zeleného ječmene a probiotik. Tyto látky byly enkapsulovány do alginátu a chitosanu. Bylo vytvořeno 25 typů částic, u kterých byla analyzována dlouhodobá stabilita ve 3 modelových typech fyziologického prostředí a ve čtyřech různých modelových potravinách. U vybraných typů částic byla sledována stabilita též ve čtyřech druzích reálných mléčných potravin. Míra stability částic byla v případě přírodních extraktů sledována spektrofotometricky stanovením množství uvolněných polyfenolů, bílkovin, chlorofylů a celkové antioxidační aktivity. U probiotických kultur byly použity techniky optické a fluorescenční mikroskopie. Přírodní extrakty propolisu a ječmene byly podrobeny testu antimikrobiálního účinku, u propolisu byly doplněny i cytotoxické testy. Jako nejlepší obalový materiál u propolisu byla navržena směs agar-chitosan, jež prokazovala optimální stabilitu v modelových podmínkách trávicího traktu i v modelových potravinách. Lipozomy byly v této práci vyhodnoceny jako nestabilní a nevhodné pro další aplikaci. V případě práškového ječmene byl jako obalový materiál zvolen škrob-alginát (poměr 1:4) a agar-chitosan, přičemž druhý typ vykazoval vyšší stabilitu z pohledu uvolněných bílkovin. Tento druhý typ byl vhodný i pro čerstvý ječmen. Pro enkapsulaci probiotických kultur byl zvolen alginát, případně alginát ve směsi se škrobem, a to díky porozitě a možnosti difúze živin. Nejlepších výsledků u reálných potravin bylo dosaženo aplikací probiotických částic do mléka. V Koenkapsulace práškového ječmene a probiotik nevedla k inhibici růstu kultur. Rovněž nebyl potvrzen antimikrobiální účinek propolisu ani ječmene, stejně jako cytotoxický efektu propolisu., This diploma thesis deals with encapsulation of natural extracts. In the theoretical part the methods of encapsulation, materials for particle preparation, as well as application of encapsulation techniques in food industry were described. In experimental part selected natural extracts of propolis, green barley and probiotics were characterized. There substances were encapsulated into alginate and chitosan. In the total of 25 types of prepared particles long-term stability in some model physiological conditions as well as in four different model foods was evaluated. Additionally, stability of selected particles in several real milk-based products was followed too. The stability of particles was determined spectroptohometrically. In natural extract a content of polyphenols, proteins, chlorophylls, as well as total antioxidant activity were analysed. To analysis of probiotics optical and fluorescence microscopy were used. In propolis and green barley antimicrobial activity was tested too. Moreover, in the sample of propolis also cytotoxic assay was applied. Agar-chitosan was chosen as the best shell material for propolis due to its optimal stability in model physiological conditions as well as model foods. Liposomes were evaluated as unstable and were not recommended for further application. As the suitable shell material for powdered green barley starch-alginate (rate 1:4) and agar-chitosan were proposed, while the second one showed better stability for released proteins. Agar-chitosan shell material was usable for fresh green barley too. For probiotics encapsulation alginate or alginate-starch were chosen because of their porosity and possibility of nutrients diffusion. In real foods the best results were reached with application of probiotic particles into milk. Coencapsulation of powdered barley and probiotics did not confirm inhibition of culture growth. Neither the antimicrobial effect of propolis and barley nor the cytotoxic effect of propolis were confirmed.

Tato diplomová práce se zabývá optimalizací pasterace zelné šťávy za účelem prodloužení její trvanlivosti. Teoretická část je zaměřena na popis technologie výroby a charakterizaci hlavních složek kysaného zelí a jeho nálevu, možnostmi pasterace a dále se zabývá probiotickými kmeny. V experimentální části bylo analyzováno složení nálevu z chemického hlediska (bioaktivní látky, cukry, sacharidy), z hlediska mikrobiologického (přítomnost probiotik, patogenních organismů) a dále vliv vybrané pasterace na tyto složky. Jako nejvhodnější byla zvolena pasterace při 90 °C po dobu 0,5 minuty, při které dochází k usmrcení případných patogenů a zároveň k zachování nejvíce původních významných složek zelného nálevu. Z důvodu ztráty životaschopnosti probiotických bakterií v zelné šťávě po jejím ošetření vybraným pasteračním zákrokem byl následně vybrán vhodný zástupce rodu Lactobacillus pro obohacení zelné šťávy. Jako nejlepší probiotický druh pro obohacení zelné šťávy byl zvolen Lactobacillus plantarum, u kterého byla stanovena nejvyšší viabilita během skladování v zelné šťávě při 8 °C po dobu 2 týdnů. Z chemického hlediska došlo po 2 týdnech k nárůstu obsahu kyseliny octové a mléčné, obsah vitaminu C zůstal beze změny. Nakonec byla provedena senzorická analýza pro zhodnocení návrhu kombinovaného ovocno-zeleninového nápoje. Z výsledků senzorické analýzy byl jako senzoricky nejlepší zvolen nápoj vzniklý smícháním zelné šťávy s jablečno-řepným džusem v poměru 2:1., This diploma thesis is focused on the optimization of pasteurization of the cabbage juice in order to extend its shelf life. The theoretical part is focused on the description of the sauerkraut production technology and characterization of the main components of fermented cabbage and its juice, it also deals with pasteurization options and presence of probiotic strains. In the experimental part, the composition of the brine was analyzed from a chemical point of view (bioactive substances, sugars, carbohydrates), from a microbiological point of view (presence of probiotics, pathogenic organisms) and the effect of selected pasteurization processes on these components. Pasteurization at 90 °C for 0.5 minutes was determined as the most suitable treatment, during which potential pathogens are being eliminated, while most of the original bioactive components are preserved. After suggesting the effective pasteurization treatment, suitable species of genus Lactobacillus was selected to enrich the cabbage juice product because of decreasing of probiotics viability during pasteurization treatment. The strain Lactobacillus plantarum was determined as the most suitable probiotic species for cabbage juice enrichment, due its ability to survive in 2 weeks storage at 8 °C in cabbage juice. Chemical composition after 2 weeks of incubation with mentioned organism has changed. Quantity of lactic and acetic acid increased, while no changes in content of vitamin C were observed. Finally, sensory analysis was performed to evaluate suggested mixed fruit-vegetable drink. According to results of sensory analysis, the drink composed of cabbage juice and apple-beetroot juice in the ratio of 2:1 was found as the most acceptable.

Tato diplomová práce se zabývá optimalizací pasterace zelné šťávy za účelem prodloužení její trvanlivosti. Teoretická část je zaměřena na popis technologie výroby a charakterizaci hlavních složek kysaného zelí a jeho nálevu, možnostmi pasterace a dále se zabývá probiotickými kmeny. V experimentální části bylo analyzováno složení nálevu z chemického hlediska (bioaktivní látky, cukry, sacharidy), z hlediska mikrobiologického (přítomnost probiotik, patogenních organismů) a dále vliv vybrané pasterace na tyto složky. Jako nejvhodnější byla zvolena pasterace při 90 °C po dobu 0,5 minuty, při které dochází k usmrcení případných patogenů a zároveň k zachování nejvíce původních významných složek zelného nálevu. Z důvodu ztráty životaschopnosti probiotických bakterií v zelné šťávě po jejím ošetření vybraným pasteračním zákrokem byl následně vybrán vhodný zástupce rodu Lactobacillus pro obohacení zelné šťávy. Jako nejlepší probiotický druh pro obohacení zelné šťávy byl zvolen Lactobacillus plantarum, u kterého byla stanovena nejvyšší viabilita během skladování v zelné šťávě při 8 °C po dobu 2 týdnů. Z chemického hlediska došlo po 2 týdnech k nárůstu obsahu kyseliny octové a mléčné, obsah vitaminu C zůstal beze změny. Nakonec byla provedena senzorická analýza pro zhodnocení návrhu kombinovaného ovocno-zeleninového nápoje. Z výsledků senzorické analýzy byl jako senzoricky nejlepší zvolen nápoj vzniklý smícháním zelné šťávy s jablečno-řepným džusem v poměru 2:1., This diploma thesis is focused on the optimization of pasteurization of the cabbage juice in order to extend its shelf life. The theoretical part is focused on the description of the sauerkraut production technology and characterization of the main components of fermented cabbage and its juice, it also deals with pasteurization options and presence of probiotic strains. In the experimental part, the composition of the brine was analyzed from a chemical point of view (bioactive substances, sugars, carbohydrates), from a microbiological point of view (presence of probiotics, pathogenic organisms) and the effect of selected pasteurization processes on these components. Pasteurization at 90 °C for 0.5 minutes was determined as the most suitable treatment, during which potential pathogens are being eliminated, while most of the original bioactive components are preserved. After suggesting the effective pasteurization treatment, suitable species of genus Lactobacillus was selected to enrich the cabbage juice product because of decreasing of probiotics viability during pasteurization treatment. The strain Lactobacillus plantarum was determined as the most suitable probiotic species for cabbage juice enrichment, due its ability to survive in 2 weeks storage at 8 °C in cabbage juice. Chemical composition after 2 weeks of incubation with mentioned organism has changed. Quantity of lactic and acetic acid increased, while no changes in content of vitamin C were observed. Finally, sensory analysis was performed to evaluate suggested mixed fruit-vegetable drink. According to results of sensory analysis, the drink composed of cabbage juice and apple-beetroot juice in the ratio of 2:1 was found as the most acceptable.

Bakterie rodu Lactobacillus jsou součástí střevní mikroflóry, jejíž složení ovlivňuje zdravotní stav hostitele. Vzhledem k tomu, že u některých druhů Lactobacillus byly prokázány klinické účinky (např. posílení imunitního systému, prevence průjmových onemocnění a další), jsou laktobacily často používány k přípravě fermentovaných mléčných výrobků a jsou součástí potravinových doplňků pro své probiotické účinky. Bakterie rodu Lactobacillus a bakterie různých druhů Lactobacillus můžeme identifikovat metodami PCR, které jsou založeny na amplifikaci specifických fragmentů DNA. Celková bakteriální DNA Lactobacillus rhamnosus byla izolovaná metodou fenolové extrakce. Rodově specifickou PCR byla ve vzorcích prokázána přítomnost bakterií rodu Lactobacillus; druhově specifickou PCR byla prokázána přítomnost bakterií druhu Lactobacillus rhamnosus., Germs of the Lactobacillus genus form part of the micro flora, the composition of which exercises the influence on the state of health of its host. In view of the fact that at some types of Lactobacillus there were proved clinical effects (e. g. strengthening of the immune system, prevention of diarrheic illnesses and so on), the Lactobacilli have been often used for making fermented dairy products and they form part of food additives because of their probiotic effect. Germs of the Lactobacillus genus and germs of different types of Lactobacillus can be identified by means of PCR based on amplifying specific DNA fragments. The complete bacillary DNA Lactobacillus rhamnosus was separated by the phenolic extraction method. The presence of germs of the Lactobacillus genus was proved by the generic-specific PCR method; the presence of Lactobacillus rhamnosus germs was proved by the species-specific PCR method.

Táto bakalárska práca sa zaoberá výberom vhodnej kombinácie probiotickej kultúry s riasovými extraktami ako prídavok do detských príkrmov a návrhom optimálneho zloženia detského príkrmu. Pre tieto ciele boli vybrané morské riasy arame, wakame, hijiki a kombu. Teoretická časť je zameraná na správnu výživu detí, ich nedostatkov a možných ochorení. Následne sa zaoberá charakterizáciou probiotických kultúr a ich významom vo výžive dieťaťa. V neposlednom rade sú v teoretickej časti charakterizované jednotlivé morské riasy, ich nutričné zloženie a taktiež význam vo výžive dieťaťa. V experimentálnej časti sa najprv analyzovali vzorky vybraných rias z hľadiska sacharidov, obsahu nerozpustnej vlákniny, fruktooligosacharidov a -glukánov či obsahu pigmentov. Ako porovnávacia zložka sa použila vzorka inulínu, bežne používané prebiotikum do probiotických výrobkov. Dôležitou analýzou tejto experimentálnej časti bolo stanovenie vplyvu riasových extraktov na viabilitu a rast probiotických baktérií. Následne sa vykonalo modelové trávenie zmesi probiotík a riasových extraktov, pričom sa stav probiotických buniek vyhodnocoval počas trávenia aj po ukončení trávenia pomocou merania zákalu a pomocou prietokovej cytometrie. Na záver bola navrhnutá nielen optimálna kombinácia riasového extraktu a probiotickej kultúry, ale aj možnosti zlepšenia dlhodobej viability probiotických buniek v kombinácií s riasovými extraktami., This bachelor thesis deals with the selection of a suitable combination of probiotic culture with algae extracts as an addition to the baby formula and the application of the optimal composition of baby formula. Arame, wakame, hijiki and kombu seaweeds were selected for these purposes. The theoretical part is focused on the proper nutrition of children, their deficiencies and possible diseases. Subsequently, it deals with the characterization of probiotic cultures and their importance in the child's nutrition. Last but not least, the theoretical part characterizes the individual seaweeds, their nutritional composition and also their importance in the child's nutrition. In the experimental part, samples of selected algae were first analyzed in terms of saccharides, insoluble fiber content, fructooligosaccharides and -glucans or pigment content. A sample of inulin, a commonly used prebiotic in probiotic products, was used as a reference component. An important analysis of this experimental part was to determine the effect of algal extracts on the viability and growth of probiotic bacteria. Subsequently, a model digestion of a mixture of probiotics and algal extracts was performed, and the condition of the probiotic cells was evaluated during digestion and after digestion by measuring turbidity and flow cytometry. Finally, not only the optimal combination of algae extract and probiotic culture was proposed, but also the possibility of improving the long-term viability of probiotic cells in combination with algal extracts.

Probiotické baktérie sú dôležitou súčasťou ľudskej výživy a prinášajú mnohé zdravotné benefity. Konzumujeme ich nielen v tradičných mliečnych fermentovaných potravinách, ale čoraz viac sa do popredia dostávajú aj fermentované výrobky rastlinného pôvodu. V teoretickej časti práce sú zhrnuté všeobecné poznatky o probiotických mikroorganizmoch, jednotlivých druhoch používaných pri technológii spracovania rastlinných a mliečnych fermentovaných produktov, a ich vplyvov na ľudské zdravie. Nasledujúce kapitoly sú venované rôznym metódam identifikácie probiotických baktérií s dôrazom na molekulárnu diagnostiku, konkrétne metódou PCR. Experimentálna časť sa sústreďuje na identifikáciu baktérií mliečneho kvasenia vo fermentovanom produkte rastlinného pôvodu – v kvasenej kapuste za použitia dvoch metód izolácie bakteriálnej DNA a následnej analýze metódou PCR., Probiotic bacteria are an essential part of human nourishment which provide many health benefits. We consume them not only in traditional dairy fermented foodstuff, but also in the ever-expanding fermented plant products. The theoretical part summarized general knowledge about probiotic microorganisms, individual species used in technology of processing plant and dairy fermented products, and their influence on human health. The following chapters are devoted to various methods of identification of probiotic bacteria with emphasis on molecular diagnostics, specifically by PCR method. The experimental part is focused on the identification of lactic acid bacteria in a plant fermented product – in a fermented cabbage using 2 methods of isolation bacterial DNA and subsequent analysis by PCR method.

Probiotické baktérie se nachází v široké škále potravinových výrobků a jejich vnitřní užívání přináší pro lidský organismus mnoho pozitivních účinků. Díky těmto benefitům se probiotické bakterie začaly používat v kosmetickém průmyslu s předpokladem podobných pozitivních účinků jako jsou u vnitřního podání. Cílem této bakalářské práce byla teoretická část, která byla věnována různým rodům probiotik, které se nejčastěji používají v kosmetických výrobcích, při kterých onemocněních kůže se povrchově podávaná probiotika nejčastěji používají a jaký efekt u léčby přinášejí. Následně byly popsány nejčastěji užívané molekulárně-biologické metody identifikace probiotických bakterií. V experimentální části byla izolována DNA probiotických bakterií deklarovaných výrobcem ze dvou kosmetických krémů a následně byla ověřena jejich přítomnost za použití metody polymerázové řetězové reakce., Probiotic bacteria are found in a wide range of food products and their internal use brings many positive effects for the human body. Thanks to these benefits, probiotic bacteria began to be used in the cosmetic industry with the assumption of similar positive effects as with internal administration. The aim of this bachelor's thesis was the theoretical part, which was devoted to various genera of probiotics, which are most often used in cosmetic products, in which skin diseases, surface probiotics are most often used and what effect they bring in treatment. Subsequently, the most commonly used molecular-biological methods for the identification of probiotic bacteria were described. In the experimental part, the DNA of probiotic bacteria declared by the manufacturer was isolated from two cosmetic creams and subsequently their presence was verified using the polymerase chain reaction method.

Tato diplomová práce se zabývá přípravou probiotických kultur Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus casei a Bifidobacterium breve obohacených o vhodná prebiotika určených k aplikaci do výrobků pro dětskou výživu. Jako prebiotika byly vybrány přírodní extrakty z matchy, moringy, mladé pšenice, mladého ječmene, chlorelly a spiruliny. Teoretická část je zaměřena na probiotické bakterie, jejich biologické účinky a jejich současný vliv na dětský organismus. Experimentální část se zabývá kultivací probiotických bakterií s rostlinnými extrakty, sledováním jejich viability a následnou stabilizací do enkapsulované formy. Pro zvýšení stability byly směsi probiotických buněk s prebiotiky enkapsulovány do alginátových částic. Část alginátových částic byla ještě sušena mrazem metodou lyofilizace. Směsi probiotických kultur s rostlinnými extrakty v neenkapsulované, enkapsulované a lyofilizované formě byly působením modelových trávicích šťáv podrobeny simulaci lidského trávení. Vybrané extrakty rostlinných materiálů byly charakterizovány z hlediska celkového obsahu sacharidů, redukujících sacharidů, celkových fenolických látek, jednotlivých fenolických látek a antioxidační aktivity. Pro porovnání byly vybrány dva dětské komerční doplňky stravy s obsahem probiotik, které byly charakterizovány z hlediska počtu buněk a jejich životaschopnosti. Probiotické přípravky byly také podrobeny modelovému trávení., This Diploma thesis deals with preparation of probiotic cultures Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus casei and Bifidobacterium breve enriched with prebiotics meant for application in baby food products. Natural extracts from matcha, moringa, young beat, young barley, chlorella and spirulina were selected as prebiotics. The theoretical part is focused on probiotic bacteria, their biological effects and their effects on the child´s body. The experimental part deals with the cultivation of probiotic bacteria with plant extracts, monitoring their viability and stabilization in an encapsulated form. Mixtures of probiotic cells with prebiotics were encapsulated into alginate particles to increase stability. Some of the alginate particles were processed by freeze drying. Mixtures of probiotic cultures with plant extracts were subjected to model human digestion by the action of model digestive juices in unencapsulated, encapsulated and lyophilized form. Selected extracts of plant materials were characterized in terms of amount of total and reducing sugars, total phenolic substances, individual phenolic substances and antioxidant activity. Further, two baby commercial dietary supplements containing probiotics were selected, which were characterized in terms of cell number and viability. Probiotic products were also subjected to model digestion.

Tato diplomová práce se zabývá přípravou probiotických kultur Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus casei a Bifidobacterium breve obohacených o vhodná prebiotika určených k aplikaci do výrobků pro dětskou výživu. Jako prebiotika byly vybrány přírodní extrakty z matchy, moringy, mladé pšenice, mladého ječmene, chlorelly a spiruliny. Teoretická část je zaměřena na probiotické bakterie, jejich biologické účinky a jejich současný vliv na dětský organismus. Experimentální část se zabývá kultivací probiotických bakterií s rostlinnými extrakty, sledováním jejich viability a následnou stabilizací do enkapsulované formy. Pro zvýšení stability byly směsi probiotických buněk s prebiotiky enkapsulovány do alginátových částic. Část alginátových částic byla ještě sušena mrazem metodou lyofilizace. Směsi probiotických kultur s rostlinnými extrakty v neenkapsulované, enkapsulované a lyofilizované formě byly působením modelových trávicích šťáv podrobeny simulaci lidského trávení. Vybrané extrakty rostlinných materiálů byly charakterizovány z hlediska celkového obsahu sacharidů, redukujících sacharidů, celkových fenolických látek, jednotlivých fenolických látek a antioxidační aktivity. Pro porovnání byly vybrány dva dětské komerční doplňky stravy s obsahem probiotik, které byly charakterizovány z hlediska počtu buněk a jejich životaschopnosti. Probiotické přípravky byly také podrobeny modelovému trávení., This Diploma thesis deals with preparation of probiotic cultures Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus casei and Bifidobacterium breve enriched with prebiotics meant for application in baby food products. Natural extracts from matcha, moringa, young beat, young barley, chlorella and spirulina were selected as prebiotics. The theoretical part is focused on probiotic bacteria, their biological effects and their effects on the child´s body. The experimental part deals with the cultivation of probiotic bacteria with plant extracts, monitoring their viability and stabilization in an encapsulated form. Mixtures of probiotic cells with prebiotics were encapsulated into alginate particles to increase stability. Some of the alginate particles were processed by freeze drying. Mixtures of probiotic cultures with plant extracts were subjected to model human digestion by the action of model digestive juices in unencapsulated, encapsulated and lyophilized form. Selected extracts of plant materials were characterized in terms of amount of total and reducing sugars, total phenolic substances, individual phenolic substances and antioxidant activity. Further, two baby commercial dietary supplements containing probiotics were selected, which were characterized in terms of cell number and viability. Probiotic products were also subjected to model digestion.

Baktérie mliečneho kvasenia sú významnou skupinou baktérií s probiotickými účinkami, ktoré nachádzajú uplatnenie v potravinárskom priemysle a farmakológií. Identifikácia a charakteristika významných probiotických kmeňov má zásadný význam pre validáciu probiotických výrobkov na komerčné použitie. Ich identifíkácia s využitím molekulárno-biologických metód (najčastejšie s využitím metódy PCR) patrí k štandardným nástrojom v komerčných prevádzkach. Cieľom tejto bakalárskej práce je literárna rešerš o probiotikách a probiotických kmeňoch ako aj zhrnutie súčasných poznatkov o využití molekulárno-biologických metód pre identifikáciu týchto baktérií s probiotickými vlastnosťami v mliečnych výrobkoch. Experimentálna časť tejto práce overí výskyt probiotických baktérií deklarovaných na vybraných komerčných mliečnych produktoch pomocou metódy polymerázovej reťazovej reakcie (PCR)., Lactic acid bacteria are considered as an important group of bacteria with probiotic effects, which are being widely used in the food industry or pharmacology. Identification and characterization of important probiotic strains play an essential role in the validation of probiotic products for commercial purposes. Their identification using molecular-biology techniques (most commonly PCR method) is one of the standard tools in commercial operations and services. The aim of this bachelor thesis is a literature review of probiotics and probiotic strains as well as a summary of current knowledge about the use of molecular biology techniques for identification of these bacteria with probiotic properties in dairy products. The experimental part of this work verifies the presence of probiotic bacteria declared on selected commercial dairy products using the polymerase chain reaction (PCR) method.

S probiotiky se setkáváme denně, buď cílenou aplikací potravinových doplňků obsahujících živé kultury bakterií mléčného kvašení, nebo konzumací tradičních fermentovaných produktů včetně mléčných nebo nemléčných výrobků. Tyto kultury mohou výrazně ovlivňovat střevní mikrobiotu, zejména při zažívacích potížích nebo potížích spojených s průjmovými onemocněními nebo infekčními gastritidami. Tato práce se soustředí na izolaci probiotik z rostlinných fermentovaných produktů, jež jsou vhodné i pro vegetariány nebo vegany, jejichž počet v současné době narůstá. Kromě tradičních pokrmů na bázi mléčného kvašení je zde uvedena i jiná alternativa v podobě nápoje Kombucha. Probiotické bakterie izolované z reálných vzorků byly podrobeny identifikaci na základě metody polymerázové řetězové reakce (PCR), kde byla prokázána přítomnost domény Bacteria a při rodově specifické amplifikaci také přítomnost rodu Lactobacillus. Výsledkem amplifikace byly jednotlivé fragmenty, které byly vizualizovány prostřednictvím metody agarózové gelové elektroforézy., Probiotics are encountered daily, either by targeted application of dietary supplements containing live cultures of lactic acid bacteria or by consuming traditional fermented products including dairy or non-dairy products. These cultures can significantly affect intestinal microbiota, particularly during digestive discomfort or problems associated with diarrheal diseases or infectious gastritis. This work focuses on the isolation of probiotics from fermented plant-based products that are also suitable for vegetarians and vegans, whose numbers are currently increasing. In addition to traditional lacto-fermented foodstuffs, there is another alternative in the form of Kombucha. Probiotic bacteria isolated from real samples were subjected to polymerase chain reaction (PCR) to identify them. Presence of the Bacteria domain was detected, and with more specific amplification, the presence of the genus Lactobacillus was detected too, using the specific primers. The amplification resulted in individual fragments were visualized by agarose gel electrophoresis.

Predložená diplomová práca sa zaoberá problematikou chronických zápalových ochorení tráviacej sústavy a navrhuje možnosť alternatívneho zlepšenia stavu, resp. podporenia remisnej fázy pomocou probiotických preparátov obohatených prírodnými protizápalovými látkami. Fytochemikálie, najmä fenolické zlúčeniny, ich flavonoidná podskupina a karotenoidy, potláčajú nežiadúce zápalové procesy priamym ovplyvnením imunitných buniek alebo inhibíciou škodlivého oxidatívneho stresu. Z tohto dôvodu boli k ďalším analýzam zvolené rastliny s predpokladom vysokého obsahu daných biologicky aktívnych zlúčenín. Konkrétne sa jednalo o brusnicu čučoriedkovú (Vaccinium myrtillus), brusnicu pravú (Vaccinium vitis-idaea), kurkumu pravú (Curcuma longa), mätu piepornú (Mentha piperita), rumanček pravý (Matricaria recutita), škoricu ceylonskú (Cinnamomum zeylanicum), zázvor pravý (Zingiber officinale) a ľan siaty (Linum usitatissimum). Následne z nich boli pripravené tri typy extraktov s použitím vody, 20% etanolu a hexánu ako extrakčných činidiel. Extrakty boli podrobené stanoveniu obsahu celkových i konkrétnych fenolických látok, celkových flavonoidov a celkových karotenoidov. Táto charakteristika bola doplnená i o antioxidačnú aktivitu vodných a etanolových extraktov. Následne bola pozorovaná interakcia jednotlivých vzoriek s probiotickými kultúrami (Bifidobacterium breve, Lactobacillus acidophilus) a schopnosť extraktov ovplyvniť viabilitu probiotík v procese modelového trávenia. Z týchto čiastkových charakterizácií boli vybrané najzaujímavejšie vzorky. Konkrétne sa jednalo o vodné extrakty čučoriedok, mäty, harmančeku a škorice. Ich prípadná cytotoxicita voči ľudským črevným epiteliálnym bunkám bola in vitro overená pomocou MTT testu s využitím bunkovej línie CaCo-2. Extrakty vykazujúce najvyššie hodnoty prospešných fytochemikálií a antioxidačnej aktivity, neinhibujúce rast probiotických kultúr a nevykazujúce cytotoxické pôsobenie na ľudské črevné bunky boli potom koenkapsulované spolu s p, The presented thesis discusses the issues of chronic inflammatory diseases of the digestive system and suggests the possibility of the alternative natural remedies improving the health conditions or prolonging the remission phase of IBD. The main goal is to design a probiotic supplement enriched by natural anti-inflammatory agents. Phytochemicals, concretely phenolic compounds, flavonoids, and carotenoids suppress harmful inflammatory processes by direct targeting the function of the immune cells or by inhibiting damaging oxidative stress in general. Therefore, there were several plants potentially rich for these biologically active substances selected. Concretely, blueberry (Vaccinium myrtillus), lingonberry (Vaccinium vitis-idaea), turmeric (Curcuma longa), peppermint (Mentha piperita), chamomile (Matricaria recutita), cinnamon (Cinnamomum zeylanicum), ginger (Zingiber officinale) and flax (Linum usitatissimum). The suitable parts of these plants were extracted by using a total of three different solvents – water, ethanol, and hexane for obtaining lipidic extracts. The concentration of total polyphenols, total flavonoids, total carotenoids, and the ascertainment of specific polyphenols was determined in the prepared extracts. These characteristics were enhanced by the measurement of antioxidant activity of the aqueous and ethanolic extracts. The interaction of individual samples with probiotic cultures (Bifidobacterium breve, Lactobacillus acidophilus) and the ability of extracts to influence the viability of probiotics in the model digestion process has been examined. The most interesting samples (aqueous extracts of blueberries, mint, chamomile, and cinnamon) were selected for further experiments. The possible cytotoxicity towards human intestinal epithelial cells was tested in vitro by the MTT tests utilizing the CaCo-2 cell line. Extracts showing the highest levels of beneficial phytochemicals and antioxidant activity, supporting the growth of probiotic cultur

Cílem práce je kultivace probiotických bakterií L. acidophilus, B. breve a B. longum tak, aby kultura vytvářela shluky buněk nebo souvislý biofilm na různých typech volných nosičů. Tvorba biofilmu L. acidophilus na oxidu křemičitém byla následně studována z hlediska vyšší odolnost vůči nízkému pH a koncentraci žlučových solí v zažívacím traktu. Zatímco počet živých buněk u planktonické formy při pH 1 klesl o 30 %, života schopnost biofilmových buněk se udržela za stejných podmínek na 90 %. V případě působení žluči byla také sledována protektivní ochrana biofilmu před škodlivým prostředím žlučových solí. Dále byly studovány možnosti sušení tekutých biofilmových kultur komerčně užívanými technologiemi ve farmaceutickém průmyslu. Srovnání lyofilizace a fluidního sušení ukázalo, že lyofilizace je v závislosti na výběru vhodného kryoprotektivního média vhodnější sušící technikou zachovávající nejvyšší počty životaschopných buněk a ve srovnání s fluidním sušením byla získána o přibližně 90 % vyšší životaschopnost probiotických buněk. Závěrem bylo studováno velkoobjemové zpracování probiotických kmenů do pevné lékové formy. Tablety je vhodné vyrábět při pevnosti 70 - 90 N, přičemž vodní aktivita tabletoviny může být udržována pod 0,3. Následně musí být zajištěno sušení tablet v hermeticky uzavřeném prostoru s minimálně 10 % silikagelu, pak tablety i po 6 měsíčním skladování obsahují (5,4 ± 0,7)109 životaschopných buněk. Technologie výroby kapslí nemá výrazný vliv na počty živých buněk během výroby. Pro následné primární balení byla vybrána triplexová blistrovací fólie, která má nízké hodnoty propustnosti vodní páry (0,07 g H2O / (m2 × den)) a kyslíku (0,01 cm3/m2 × den). Blistrovací folie běžně užívané ve farmaceutickém průmyslu nejsou pro skladování probiotik vhodné., The aim of present work is cultivation of probiotic bacteria L. acidophilus, B. breve and B. longum in such a way that the culture forms cells clusters or comprehensive biofilm on the variety of free carriers. Biofilm formation of L. acidophilus on the silica from point of view bile and acid tolerance in gastrointestinal tract was studied. While the number of living cells in planktonic form (planktonic form) at pH 1 fell by 30 %, the viability of the biofilm cells was maintained to 90 % under the same environmental conditions. The biofilm culture showed also the protection against environment contained bile. Furthermore, the possibilities of drying procedures of biofilm cultures used as commercial technologies in pharmaceutical industry were studied. The comparison of freeze-drying and fluidization bed drying showed, that freeze-drying is more suitable method, which is able to achieve higher amount of viable cells after drying than fluidization bed drying. The effectivity of freeze-drying method is dependent on the selection of suitable cryprotective medium. In this case, about 90 % higher viability after freeze drying was achieved in comparison with fluidization bed drying. Finally, the industrial processing of probiotic strains into the solid dosage form was studied. Tablets should be produced at hardness between 70 and 90 N and water activity of tablet mixture can be maintained below 0.3. Consequently, the drying step of the tablets in a hermetically closed space with at least 10 % of silica gel must be ensured. Thereafter, the tablets contain (5.4 ± 0.7)109 viable cells after 6 months of drying process. Capsule production technology has no significant effect on the cell‘s viability during production. The triplex blistering foil for primary blistering of probiotic capsules was chosen. The triplex foil, which has low values of water vapour transition rate (0.07 g H2O / (m2 × day) and oxygen transition rate (0.01 cm3/m2 × day), was chosen. Other studied blistering

V teoretické části práce se pojednává o současném stavu a výzkumu probiotik a prebiotik, jejich využitelnosti pro modulaci mikroflóry hostitele a jejich příznivých účincích na zdraví jedince. Dále je pojednáno o problematice účinnosti probiotických kmenů, která závisí na použité potravinové matrici a na řadě dalších faktorů. Experimentální je zaměřena na identifikaci vybraného bakteriálního kmene obsaženého v probiotickém výrobku. Bakteriální DNA byla z výrobku izolována metodou fenolové extrakce a pomocí magnetických nosičů s následnou analýzou získané DNA metodou polymerázové řetězové reakce (PCR)., Theoretical part of this thesis focuses on present state and research of probiotics and prebiotics, their use for microflora modulation of host and their beneficial effects on the health of individuals. Furthermore thesis deals with efficiency of probiotics strains, which depends on the food matrix and other various factors. The experimental part focuses on the identification of chosen bacterial strain, which is contained in probiotics product. It is realized due the isolation of bacterial DNA by phenol extraction and by use of magnetic particles and subsequent analysis of obtained DNA by polymerase chain reaction (PCR).

Teoretická část bakalářské práce je zaměřena na probiotika v mléčných výrobcích a zejména na molekulárně genetické metody využívané k analýze DNA. Pozornost je věnována především metodám stanovení bakteriálních buněk rodu Lactobacillus. Základní technikou je v současné době zejména polymerázová řetězová reakce (PCR), při které dochází k amplifikaci specifických úseků DNA pomocí krátkých oligonukleotidových primerů. V praktické části práce je izolována celková DNA z čisté bakteriální kultury a probiotického mléčného výrobku metodami fenolové extrakce a magnetické separace za využití magnetických nosičů P(GMA) pokrytých karboxylovými funkčními skupinami. Kvalita izolované DNA byla potvrzena amplifikací v PCR za použití primerů specifických pro doménu Bacteria, Lactobacillus a Biffidobacterium., The theoretical part of the thesis is focused on probiotics in dairy products. Thesis deals with molecular genetic methods, which are used to analyze DNA. Especially are discussed methods used for isolation bacterial cells belonging to genus Lactobacillus. The polymerase chain reaction (PCR) is the basic technique at present time. Short chain of oligonucleotide primers are used to amplification specific parts of DNA molecule chain. The practical part of the thesis is focused on the DNA from pure bacterial culture and probiotic dairy product. DNA was isolated using methods of phenol-chloroform extraction and magnetic separation. For magnetic separation was used magnetics particles covered with carbonyl functional groups. Quality of the DNA was confirmed by PCR amplification. Primers specific for domain Bacteria and genus Lactobacillus and Bifidobacterium was used.

Napriek vysokej úrovni vedy a medicíny sa ľudia snažia vrátiť k prírode a využiť ju pre svoje zdravie. Napríklad sa snažia využiť probiotiká, čo sú živé kultúry, schopné usídliť sa v ľudskom čreve a tu vykonávať svoju činnosť. Teoretická časť bakalárskej práce sa zaoberá probiotickými baktériami, ich vlastnosťami ako aj vlastnosťami, ktoré sú dôležité pre potravinársky priemysel a hlavne sa zameriava na probiotiká využívané v detskej výžive. Experimentálna časť je zameraná na analýzu dvoch potravinových výrobkov pre deti (BioLac Baby a Probacílium+). Z týchto produktov bola vyizolovaná DNA metódou fenolovej extrakcie a pomocou magnetických nosičov. Celková izolovaná DNA z výrobkov bola amplifikovaná rodovo špecifickou PCR., Despite of the high level of science and medicine, people are trying to return to the nature and use it for their lives. For example, they are using probiotics, which are live cultures able to reside in the human intestine and there can start their role. The teoretical part of this bachelor thesis deals with probiotic bacteria, their properties and those properties which are important in the food industry and the main part focuses on the probiotics used in baby food. The experimental part of the thesis targets on an analysis of two probiotic supplements for children (BioLac Baby and Probacílium+). There was a DNA isolated from these two products by method of phenol extraction and using magnetic media. The whole DNA isolated from these products was amplificated by genus-specific PCR.

Tato bakalářská práce se zabývá enkapsulací dvou druhů probiotických bakterií do několika typů obalových materiálů, většinou polysacharidů. V teoretické části jsou popsány enkapsulační techniky aplikovatelné pro potravinářský průmysl. V experimentální části byly připraveny částice alginátového a chitosanového typu, lišily se jak velikostí, tak různou modifikací, kdy byl do roztoku přidán roztok škrobu nebo karboxymethylcelulózy. Tyto částice byly následně použity pro enkapsulaci dvou probiotických kmenů - Bifidobacterium breve a Lactobacillus acidophilus. S využitím průtokového cytometru byla proměřena viabilita buněk z 24hodinové kultivace. Pod mikroskopem byla sledována stabilita jednotlivých částic, a to ihned po enkapsulaci a vložení do modelových potravin a poté po dvou dnech, po týdnu a po 4 týdnech inkubace. S využitím Bürkerovy komůrky byl po týdnu a po 4 týdnech pozorován poměr živých a mrtvých bakterií, a to jak uvnitř kapsule, tak i počet uvolněných živých a mrtvých bakterií mimo kapsuli. Byla také sledována stabilita a viabilita buněk v simulovaných fyziologických prostředích – v pankreatické, žlučové a žaludeční šťávě. Jako nejvhodnější obalový materiál pro enkapsulaci probiotických bakterií byl potvrzen 2% alginát modifikovaný 2% roztokem karboxymethylcelulózy. Nejvyšší viabilita buněk byla stanovena v reálné modelové potravině – v mléce. Připravené částice s laktobacily jsou vhodné pro použití do potravinářského průmyslu., This bachelor thesis is focused on encapsulation of two strains of probiotic bacteria. Lactic acid bacteria were encapsulated into several types of materials, mostly polysaccharides. The theoretical part describes the techniques of encapsulation applicable in the food industry. During the experimental part alginate and chitosan microparticles were prepared. These particles exhibited different sizes and some of them were modified by starch and carboxymethyl cellulose. Particles were used for encapsulation of two strains - Bifidobacterium breve and Lactobacillus acidophilus. Using flow cytometry cell viability was measured after 24-hours cultivation of bacteria. Particles were observed immediately after encapsulation by optical microscopy and then long-term stability in model foods was evaluated after two days, a week and after four weeks of incubation. Using the Bürker chamber the alived and death bacteria were counted inside and outside the capsule. The stability and viability of the cells were studied also in the artificial intestinal, stomach and bile juices. As the best material for encapsulation of lactic acid bacteria 2% alginate modified by carboxymethyl cellulose was found. The highest viability of bacteria was observed in milk as the real model food. Prepared particles are suitable for use in the food industry.

Bifidobakterie a laktobacily jsou gram pozitivní bakterie patřící do skupiny bakterií mléčného kvašení. Jsou běžnou součástí mikroflóry trávícího traktu člověka, hrají důležitou roli ve výživě a zdraví, prevenci tvorby a kolonizaci trávícího traktu patogeny a udržování slizniční imunity. V současnosti jsou používány při výrobě funkčních potravinových výrobků a farmaceutických preparátů. Na detekci a identifikaci bakterií rodu Bifidobacterium a Lactobacillus se využívá polymerázová řetězová reakce (PCR) se specifickými primery pro daný rod, při které dochází k amplifikaci určitého úseku DNA in vitro. V této práci byla ze tří potravinových doplňků (Pangamin Bifi plus, Biopron Junior a Probiodom) izolována celková DNA metodou fenolové extrakce a pomocí rodově specifické PCR byly amplifikovány produkty o velikosti 523 bp (Bifidobacterium) a 250 bp (Lactobacillus). Ve všech třech výrobcích byla prokázána přítomnost bakterií obou bakteriálních rodů., Bifidobacteria and lactobacilli are gram-positive bacteria which belong to the lactic acid bacteria group. They are ordinary constituents of gastrointestinal microflora, play a pivotal role in human nutrition and health, prevent pathogen colonization and maintain normal mucosal immunity. In present days they are used in production of functional food products and pharmaceutical additives. Polymerase chain reaction (PCR) is used to the detection and identification of bacteria which belong to the genus of Bifidobacterium and Lactobacillus. Specific primers for each genus are used in PCR reactions for in vitro amplification of definite part of DNA. In this work, total DNA was isolated from three additives (Pangamin Bifi plus, Biopron Junior and Probiodom) by the method of phenol extraction and amplified using genus-specific PCR primers giving amplicons of 523 bp (Bifidobacterium) and 250 bp (Lactobacillus). Occurrence of bacteria of both genera was proved in all of the three tested probiotic products.

Bakterie rodu Lactobacillus jsou součástí střevní mikroflóry, jejíž složení ovlivňuje zdravotní stav hostitele. Vzhledem k tomu, že u některých druhů Lactobacillus byly prokázány klinické účinky (např. posílení imunitního systému, prevence průjmových onemocnění a další), jsou laktobacily často používány k přípravě fermentovaných mléčných výrobků a jsou součástí potravinových doplňků pro své probiotické účinky. Bakterie rodu Lactobacillus a bakterie různých druhů Lactobacillus můžeme identifikovat metodami PCR, které jsou založeny na amplifikaci specifických fragmentů DNA. Celková bakteriální DNA Lactobacillus rhamnosus byla izolovaná metodou fenolové extrakce. Rodově specifickou PCR byla ve vzorcích prokázána přítomnost bakterií rodu Lactobacillus; druhově specifickou PCR byla prokázána přítomnost bakterií druhu Lactobacillus rhamnosus., Germs of the Lactobacillus genus form part of the micro flora, the composition of which exercises the influence on the state of health of its host. In view of the fact that at some types of Lactobacillus there were proved clinical effects (e. g. strengthening of the immune system, prevention of diarrheic illnesses and so on), the Lactobacilli have been often used for making fermented dairy products and they form part of food additives because of their probiotic effect. Germs of the Lactobacillus genus and germs of different types of Lactobacillus can be identified by means of PCR based on amplifying specific DNA fragments. The complete bacillary DNA Lactobacillus rhamnosus was separated by the phenolic extraction method. The presence of germs of the Lactobacillus genus was proved by the generic-specific PCR method; the presence of Lactobacillus rhamnosus germs was proved by the species-specific PCR method.

V teoretické části práce se pojednává o současném stavu a výzkumu probiotik a prebiotik, jejich využitelnosti pro modulaci mikroflóry hostitele a jejich příznivých účincích na zdraví jedince. Dále je pojednáno o problematice účinnosti probiotických kmenů, která závisí na použité potravinové matrici a na řadě dalších faktorů. Experimentální je zaměřena na identifikaci vybraného bakteriálního kmene obsaženého v probiotickém výrobku. Bakteriální DNA byla z výrobku izolována metodou fenolové extrakce a pomocí magnetických nosičů s následnou analýzou získané DNA metodou polymerázové řetězové reakce (PCR)., Theoretical part of this thesis focuses on present state and research of probiotics and prebiotics, their use for microflora modulation of host and their beneficial effects on the health of individuals. Furthermore thesis deals with efficiency of probiotics strains, which depends on the food matrix and other various factors. The experimental part focuses on the identification of chosen bacterial strain, which is contained in probiotics product. It is realized due the isolation of bacterial DNA by phenol extraction and by use of magnetic particles and subsequent analysis of obtained DNA by polymerase chain reaction (PCR).

Bakterie rodu Lactobacillus jsou součástí střevní mikroflóry, jejíž složení ovlivňuje zdravotní stav hostitele. Vzhledem k tomu, že u některých druhů Lactobacillus byly prokázány klinické účinky (např. posílení imunitního systému, prevence průjmových onemocnění a další), jsou laktobacily často používány k přípravě fermentovaných mléčných výrobků nebo farmakologických preparátů. Pro identifikaci bakterií rodu Lactobacillus v mléčných výrobcích byla vyvinuta metoda PCR, která je založena na amplifikaci fragmentu DNA představující oblast mezi geny kódující 16S a 23S rRNA. Celková DNA izolovaná metodou fenolovou extrakce z výrobku Actimel Natur byla v této práci amplifikována rodově specifickou PCR. Detekcí specifického PCR produktu byla prokázána přítomnost bakterií rodu Lactobacillus ve výrobku. Provedením druhově specifické PCR byla ve výrobku Actimel Natur detekována přítomnost probiotického druhu Lactobacillus casei (ve výrobku Actimel Natur) v množství, které se přibližně shodovalo s deklarovaným údajem., The genus Lactobacillus is part of intestinal microbiota which constitution plays important role in health and well-being of the host. Probiotic properties of lactobacili have been studied in lot of studies and clinical effects (immune enhancement, prevention of diarrhoeal disease etc.) of some probiotic species have been documented. Therefore bacteria of genus Lactobacillus are used in the production of fermented dairy products and probiotic preparations. PCR method based on amplification of 16S – 23S rRNA intergenic spacer regions was developed for identification of Lactobacillus species presented in dairy products. Whole DNA obtained by phenol extraction from dairy product Actimel Natur was used in this work as template for PCR. Purified DNA was amplificated by genus-specific PCR. Bacteria of genus Lactobacilllus were detected due to the detection of specific PCR product. Using species-specific PCR probiotic species Lactobacillus casei was detected in the Actimel Natur in quantity that approximately corresponded to declared amounts.

Fermentované mléčné výrobky s obsahem probiotických mikroorganismů, které se vyznačují příznivými účinky na střevní mikroflóru, jsou v dnešní době konzumovány ve velkém množství. Nabídka výrobků, do kterých jsou mikroorganismy přidávány, se v posledních letech velmi rozšířila. V současné době jsou na trhu dostupné nejen mléčné, ale například i masné či zeleninové výrobky tohoto typu. Cílem práce je seznámení se s probiotickými mikroorganismy, popis jejich využití v potravinářství a toho, zda mají pro nás ,,Homo sapiens sapiens‘‘ příznivé či nepříznivé účinky a dokázat přítomnost těchto bakterií ve vybraných fermentovaných mléčných výrobcích., Fermented dairy products containing probiotic microorganisms which are distinguished by favorable effects on the intestinal microflora, are in present time consumed in large quantities. Products range in which microorganisms are contained in recent years expanded greatly. On the market are currently available not only milk, but also meat or vegetable products of this type. The aim of work was to get acquainted with probiotic microorganisms, a description of their use in food industry, and whether they have for us “Homo sapiens sapiens,, favorable or unfavorable effects. In the practical part of work was showed the presence of probiotic bacteria in fermented dairy product using the polymerase chain reaction methods.