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International audience

International audience; Dans le cadre du projet InvaProtect soutenu par le programme INTERREG V Rhin supérieur, de nombreux spécialistes français, allemands et suisses, travaillant pour 30 organismes de recherche et du conseil dans l’espace du Rhin supérieur, sont réunis pour étudier plus précisément les nouvelles espèces invasives et pour développer des mesures de maîtrise efficaces.

The ampeloviruses causing grapevine leafroll disease are transmitted by mealybug and soft scale insect vectors. Vector transmission of virus species in this complex occurs in a semi-persistent manner, with no current evidence of a strict vector-virus species specificity. However, only a limited number of studies have addressed questions such as virus-vector transmission efficiency, and there are no published studies on virus-vector molecular interactions. Here we present a summary of what is known about the vector transmission of grapevine-associated ampeloviruses. Because the management of grapevine leafroll diseases depends on a robust understanding of how these viruses are disseminated in vineyards, we also highlight research needs and knowledge gaps.

The Grapevine Red Blotch Disease was recently identified in the Napa Valley in California and attributed to a circular DNA virus. The sequencing of the virus, called Grapevine Red Blotch-associated Virus (GRBaV), has provided tools for its detection, including PCR. A survey showed that the GRBaV is present in other growing areas of the North American continent. This virus was also found in the state of New York and called Grapevine Cabernet franc-associated Virus (GCFaV). Although the presence of this virus is consistently associated with the disease, the causal links remain unproven. The symptoms of this disease are similar to those of another virus disease, i.e. the Grapevine Leafroll-associated Virus (GLRaV), while having some differences. The authors review the symptoms associated with this new disease and possible confusions with other symptoms caused by other diseases or accidents in the grapevine., Le Grapevine Red Blotch Disease est une maladie récemment identifiée dans la Napa Valley en Californie en présence d’un nouveau virus à ADN circulaire. Le séquençage du virus, appelé Grapevine Red Blotch-associated Virus (GRBaV), a fourni des outils pour son dépistage, notamment par test PCR. D’après ces tests le GRBaV est présent dans d’autres zones viticoles du continent Nord-américain. Ce virus a également été identifié dans l’état de New York, où il a été appelé : Grapevine Cabernet franc-associated Virus (GCFaV). Bien que la présence de ce virus soit systématiquement associée à la maladie, son rôle exact dans l’étiologie de la maladie reste àdémontrer. Les symptômes caractéristiques de cette maladie se rapprochent de ceux de l’enroulement de la vigne (GLRaV) tout en présentant quelques différences. Les auteurs font le point sur la symptomatologie associée à cette nouvelle maladie de la vigne et les confusions possibles avec d’autres symptômes dus à d’autres maladies ou accidents.

Etude de la dispersion du Grapevine Leafroll-associated virus 1 (GLRaV-1, Ampelovirus, Closteroviridae) par la cochenille Phenacoccus aceris (Pseudococcidae). 7e Congrès de la Société Française de Phytopathologie

Des particules virales de type clostérovirus ont été purifiées de vignes atteintes d’enroulement. Ces particules sont extraites par une précipitation fractionnée au polyéthylèneglycol (PEG 6000) permettant de réduire la proportion de contaminants végétaux. Elles sont finalement purifiées par centrifugation dans un gradient de saccharose. Les nucléoprotéines virales sont injectées à un lapin afin de produire les immunoglobulines nécessaires à leur détection en ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay). Parallèlement, les mêmes particules virales ont servi à l’immunisation d’une poule et à l’extraction d’immunoglobulines à partir des oeufs recueillis. L’utilisation simultanée d’immunoglobulines de poule (IgGC) et de gammaglobulines de lapin (IgGR) préalablement absorbées par des extraits foliaires de vigne saine, permet la détection de vignes atteintes d’enroulement au moyen d’un protocole ELISA indirect. La comparaison d’extraits végétaux provenant de différents organes de vigne malade montre que les feuilles constituent l’organe de choix pour la détection sérologique des particules de type clostérovirus. Afin de vérifier la corrélation entre la présence de particules virales filamenteuses et l’observation des symptômes d’enroulement, nous avons éprouvé 61 vignes de différents cultivars par le procédé ELISA indirect. Des réactifs immunochimiques spécifiques de particules de type clostérovirus isolées de vignes atteintes d’enroulement nous ont été fournies par le Dr GUGERLI (GLRV1) et le Dr GONSALVES (NY-1). Leur utilisation en ELISA a permis une analyse complémentaire des 61 vignes mentionnées ci-dessus. Parmi les 50 vignes montrant des symptômes d’enroulement, 44 réagissent dans au moins un des 3 systèmes ELISA employés. Aucune vigne saine ne réagit en ELISA. Deux virus différents liés à l’enroulement ont été distingués sur la base des réactions sérologiques obtenues. Des travaux d’immunomicroscopie (ISEM) complètent les études sérologiques en ELISA., Closterovirus-like particles were purified from leafroll-diseased grapevines. These particles were extracted from leaves by a fractionated PEG precipitation and purified by centrifugation through a sucrose gradient. The purified nucleoproteins were injected into a rabbit to produce immunoglobulins (IgGR) useful for the development of an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The same closterovirus particles were used to immunize a hen in order to extract immunoglobulins from egg yolk IgGC. The simultaneous use of yolk IgGC and IgGR absorbed with healthy leaf extracts allowed the detection of leafroll-diseased grapevines by ELISA. Comparison of extracts from different grapevine organs showed that leaves were the best source of material for routine diagnosis. In order to check the correlation between leafroll symptoms and the presence of closterovirus-like particles, we analysed 61 grapevines from different sources. Immunochemical reagents specific to closterovirus particles isolated from leafroll-affected grapevines obtained by GONSALVES (NY-1) and Dr GUGERLI (GLRV1) were also used in these serological analyses. Among the 50 diseased grapevines, 44 showed reactions in at least one of the ELISA procedures. None of the healthy grapevines reacted in the ELISA mentioned previously. Two different viruses could be distinguished on the basis of these serological reactions. Using immunosorbent electron microscopy (ISEM), we checked the reactions observed in ELISA.

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