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Physalis peruviana L. (Solanaceae) is an herbaceous fruit-bearing species that has been gaining market acceptance due to its nutritional and medicinal potential. The main limitations to its cultivation are the short reproductive cycle, the susceptibility of the fruits to pests and the lack of information about the crop management. Hence, studies are necessary to develop strategies for its propagation. This study aimed to evaluate the effects of 6-benzylaminopurine (BAP) and explants on the morphogenetic potential of P. peruviana, as well as to establish a protocol for the micropropagation of the species via direct organogenesis. To evaluate the morphogenesis, cotyledonary node, cotyledon, leaf, epicotyl, hypocotyl and root explants were inoculated in Murashige & Skoog culture medium with half the normal concentration of salts and supplemented with cytokinin BAP (0.00 µM, 2.22 µM, 4.44 µM, 6.66 µM or 8.88 µM), plus 30 g L-1 of sucrose and 7 g L-1 of agar. Aiming at a direct production of shoots, the cotyledonary node explant was submitted to 0.00 µM, 2.22 µM, 4.44 µM, 6.66 µM, 8.88 µM, 13.32 µM, 17.76 µM or 22.20 µM of BAP. The obtained shoots were tested regarding their rooting potential in media with and without the addition of activated charcoal and then were transferred for acclimatation. The cotyledonary node and leaf explants were the most efficient sources for the regeneration of shoots via direct and indirect organogenesis, respectively. The most significant results for direct shoot production were obtained with 12.50 µM of BAP. These shoots were successfully rooted in vitro in medium without activated charcoal, and the microplants acclimated in vegetable earth attained 100 % of survival after 90 days of acclimatation. RESUMO Physalis peruviana L. (Solanaceae) é uma frutífera herbácea, que vem se consolidando no mercado em virtude de suas potencialidades nutricionais e medicinais. As limitações à sua produção são o ciclo reprodutivo curto, o acometimento dos frutos por pragas e a carência de estudos, o que justifica a busca de estratégias para a sua propagação. Objetivou-se avaliar os efeitos de 6-benzilaminopurina (BAP) e explantes no potencial morfogênico de P. peruviana, bem como estabelecer um protocolo para a micropropagação da espécie via organogênese direta. Para avaliar a morfogênese, explantes (nó cotiledonar, cotilédone, folha, epicótilo, hipocótilo e raiz) foram inoculados em meio de cultura Murashige & Skoog com metade das concentrações salinas e suplementado com a citocinina BAP (0,00 µM; 2,22 µM; 4,44 µM; 6,66 µM; ou 8,88 µM), acrescido de 30 g L-1 de sacarose e 7 g L-1 de ágar. Visando à produção de brotos via direta, o explante nó cotiledonar foi submetido a 0,00 µM; 2,22 µM; 4,44 µM; 6,66 µM; 8,88 µM; 13,32 µM; 17,76 µM; ou 22,20 µM de BAP. Os brotos obtidos foram submetidos ao enraizamento em meios com e sem adição de carvão ativado e, posteriormente, transferidos para aclimatização. Verificou-se que o nó cotiledonar e a folha foram as fontes de explantes mais eficientes para a regeneração dos brotos via organogênese direta e indireta, respectivamente. Os resultados mais significativos para a produção de brotos via direta foram obtidos com 12,50 µM de BAP. Estes brotos foram enraizados in vitro em meio isento de carvão, e as microplantas aclimatizadas em terra vegetal alcançaram 100 % de sobrevivência aos 90 dias da aclimatização.

Garlic cultivars are sexually sterile under standard growth conditions, with direct implications for commercial production costs as well as breeding programs. Garlic is propagated commercially via bulblets, which facilitates disease transmission and virus load accumulation over vegetative generations. Tissue culture produces virus-free clones that are more productive, while keeping the desired traits of the cultivar. Consequently, this technique allows studies of garlic genetics as well as guarantees genetic conservation of varieties. We aimed at analyzing the in vitro regeneration of eight marketable cultivars of garlic using root segments as explants. For each genotype, bulblet-derived explants were isolated and introduced into MS medium supplemented with 2,4-D and 2-iP. Calli were transferred to MS medium supplemented with 8.8 mM BAP and 0.1 mM NAA (regeneration medium A), or with 4.6 mM kinetin alone (regeneration medium B). The calli were then evaluated for regeneration frequency after sixty days of in vitro cultivation. The noble cultivar 'Jonas' presented the highest rates of plant regeneration among the cultivars tested. The medium A, which contained auxin and cytokinin, induced the highest regeneration rates of all cultivars. The process described herein is simple, reproducible and can potentially be used as a tool in molecular breeding strategies for other marketable cultivars and genotypes of garlic.Cultivares de alho são sexualmente estéreis sob condições padrão de cultivo, com implicações diretas nos custos de produção comercial, bem como em programas de melhoramento. O alho é comercialmente propagado por meio de bulbilhos, o que facilita a transmissão de doenças e leva ao acúmulo de cargas virais ao longo das gerações. A cultura de tecidos produz clones livres de vírus que são mais produtivos, mantendo as características desejadas da cultivar. Consequentemente, esta técnica permite estudar a genética do alho, bem como garantir a conservação genética das variedades. Nosso objetivo foi analisar a regeneração in vitro de oito cultivares comerciais de alho usando segmentos de raiz como explante. Para cada genótipo, explantes derivados de bulbilho foram isolados e introduzidos em meio MS suplementado com 2,4-D e 2-iP. Calos foram transferidos para meio MS suplementado com 8,8 mM BAP e 0,1 mM NAA (meio de regeneração A), ou com 4,6 mM cinetina somente (meio de regeneração B). Os calos foram avaliados quanto à frequência de regeneração após sessenta dias de cultivo in vitro. A cultivar nobre 'Jonas' apresentou as maiores taxas de regeneração entre as cultivares testadas. O meio de cultura A, o qual continha auxina e citocinina, induziu as maiores taxas de regeneração em todas as cultivares. O processo aqui descrito é simples, reprodutível e pode ser usado potencialmente como uma ferramenta em estratégias de melhoramento para outras cultivares comerciais e genótipos de alho.

A tecnologia da cultura de protoplastos, células e tecidos de plantas in vitro constitui-se em uma das áreas de maior êxito na biotecnologia. No gênero Passiflora, poucas espécies têm sido utilizadas com fins biotecnológicos nos estudos de cultura de tecido. Do pouco já realizado, obteve-se sucesso na regeneração de brotos, por via indireta, a partir de calos, ou por via direta, a partir dos explantes cotiledonares, hipocotiledonares ou foliares. A regeneração in vitro é facilmente induzida em entrenós e segmentos de gavinha, com a adição de citocinina ao meio de cultivo. Recentes avanços na regeneração de protoplastos de outras frutíferas permitiram a aplicação da hibridização somática no maracujá. O uso da engenharia genética, aproveitando-se a habilidade de regeneração das plantas de P. edulis f. flavicarpa, torna-se relevante na tentativa de reduzir a devastação imposta por certas doenças e pragas, e também na adição de outras características de importância agronômica.

Visando ao desenvolvimento de um novo protocolo para a micropropagação da goiabeira serrana (Acca sellowiana (Berg) Burret) foram estabelecidos experimentos com segmentos nodais e microestacas. As citocininas 6-Benzilaminopurina (BAP), Cinetina (Kin) e 2-Isopenteniladenina (2-iP) foram adicionadas ao meio de cultura Woody Plant Midium-WPM, visando à proliferação de brotações múltiplas dos genótipos 53B-7, 101, 529 e 152-12 x 458. As microestacas obtidas in vitro foram submetidas a diferentes períodos de indução, em 20 miM de ácido indolbutírico (AIB) e, posteriormente, transferidas para meio de cultura isento desse fitorregulador para a indução de raízes ou, alternativamente, submetidas a diferentes concentrações e tempos de exposição em AIB e transferidas para substrato. As citocininas empregadas não promoveram aumento na taxa de proliferação de brotos em relação à testemunha. O meio de cultura basal WPM, adicionado de Kin (5 miM), proporcionou maior altura média dos brotos. Segmentos nodais do acesso 101 cultivados em meio de cultura WPM, isento de fitorreguladores, apresentaram maiores taxas médias de proliferação. Pulsos de seis dias com AIB (20 miM) induziram uma maior taxa de enraizamento (68,9%), um maior número médio de raízes (1,3 raízes) e raízes com maior comprimento médio (5,6miM). Microestacas enraizadas ex vitro, pela imersão em AIB (100 miM) por 60 minutos, resultaram em maior altura das plantas (45,3mm), número de raízes secundárias (11,3 raízes), massa fresca (1069mg) e seca das raízes (282mg). The objective of this study was to establish a micropropagation protocol for Acca sellowiana (Berg) Burret. Nodal segments of in vitro cultivated plantlets of the genotypes 53B-7, 101, 529 and 152-12 x 458 were inoculated in test tubes containing 15ml of Woody Plant Medium-WPM solid medium supplemented with the cytokinins BAP, Kin, and 2-iP. For rooting purpose the microcuttings were submitted to different inductive periods of time with indolilbutiric acid-IBA (20 muM), then transferred to a basal solid medium free of growth regulators, or alternatively to ex vitro substrate in a phytotron. The three cytokinins did not improve the multiple shoot regeneration rates when compared with the control. The highest shoot height was observed in the WPM medium supplemented with Kin (5 muM). Nodal segments of the genotype 101, cultivated in WPM medium free of growth regulators showed higher regeneration rates than the other treatments. Six days pulses of IBA (20 muM) induced 68.9%, of microcutting rooting as well the highest values for root (5.6mm) and length number (1.3 roots). ex vitro rooting treatment of micropropagated microcuttings with IBA (100 muM) for 60min resulted in the highest values for plantlet height (45.3mm), secondary root number (11.3 roots), fresh (1069mg) and dry weight (282mg).of roots.

The aim of this research was to evaluate the effect of different forms of leaf explants inoculation in nutritive medium of Eugenia involucrata DC., an native forest species with diverse economic potentials. Inoculations were evaluated at abaxial and adaxial positions, with and without cuts on the leaf surface in the MS nutritive medium supplemented with 10 µM NAA or combination, in µM, of 2.4-D and BAP: 5-5 and 5-10. The explants position inoculation affects the callus induction and organogenesis in E. involucrata leaf segments, being the abaxial the most suitable position, without cuts in the leaf surface. The combination of growth regulators 2.4-D and BAP, at concentrations of 5-10( µM) was most promising of callus obtaining, especially nodular callus, putative at somatic embryogenesis.

Garlic cultivars are sexually sterile under standard growth conditions, with direct implications for commercial production costs as well as breeding programs. Garlic is propagated commercially via bulblets, which facilitates disease transmission and virus load accumulation over vegetative generations. Tissue culture produces virus-free clones that are more productive, while keeping the desired traits of the cultivar. Consequently, this technique allows studies of garlic genetics as well as guarantees genetic conservation of varieties. We aimed at analyzing the in vitro regeneration of eight marketable cultivars of garlic using root segments as explants. For each genotype, bulblet-derived explants were isolated and introduced into MS medium supplemented with 2,4-D and 2-iP. Calli were transferred to MS medium supplemented with 8.8 mM BAP and 0.1 mM NAA (regeneration medium A), or with 4.6 mM kinetin alone (regeneration medium B). The calli were then evaluated for regeneration frequency after sixty days of in vitro cultivation. The noble cultivar 'Jonas' presented the highest rates of plant regeneration among the cultivars tested. The medium A, which contained auxin and cytokinin, induced the highest regeneration rates of all cultivars. The process described herein is simple, reproducible and can potentially be used as a tool in molecular breeding strategies for other marketable cultivars and genotypes of garlic. Cultivares de alho são sexualmente estéreis sob condições padrão de cultivo, com implicações diretas nos custos de produção comercial, bem como em programas de melhoramento. O alho é comercialmente propagado por meio de bulbilhos, o que facilita a transmissão de doenças e leva ao acúmulo de cargas virais ao longo das gerações. A cultura de tecidos produz clones livres de vírus que são mais produtivos, mantendo as características desejadas da cultivar. Consequentemente, esta técnica permite estudar a genética do alho, bem como garantir a conservação genética das variedades. Nosso objetivo foi analisar a regeneração in vitro de oito cultivares comerciais de alho usando segmentos de raiz como explante. Para cada genótipo, explantes derivados de bulbilho foram isolados e introduzidos em meio MS suplementado com 2,4-D e 2-iP. Calos foram transferidos para meio MS suplementado com 8,8 mM BAP e 0,1 mM NAA (meio de regeneração A), ou com 4,6 mM cinetina somente (meio de regeneração B). Os calos foram avaliados quanto à frequência de regeneração após sessenta dias de cultivo in vitro. A cultivar nobre 'Jonas' apresentou as maiores taxas de regeneração entre as cultivares testadas. O meio de cultura A, o qual continha auxina e citocinina, induziu as maiores taxas de regeneração em todas as cultivares. O processo aqui descrito é simples, reprodutível e pode ser usado potencialmente como uma ferramenta em estratégias de melhoramento para outras cultivares comerciais e genótipos de alho.

The objectives of this study were to establish appropriate conditions for obtaining plant regeneration and acclimatization of the 'RB92579' and 'RB93509' sugarcane cultivars and to elucidate the shoots origin through histological analysis. For both cultivars, obtaining shoots showed better results with the culture of explants on a callus induction medium containing 2.0mg L-1 2,4-dichlorophenoxyacetic acid, followed by cultivation on a shoot induction medium containing 0.1mg L-1 kinetin and 0.2mg L-1 benzilaminopurine. The MS medium without growth regulators proved to be appropriate for elongation and rooting of shoots and the use of the composed substrate of vermiculite + MS salts was effective for acclimatization. Histological analysis revealed that the origin of the shoots in both cultivars occurred through indirect organogenesis. Os objetivos deste estudo foram estabelecer condições apropriadas para a obtenção de regeneração de plantas e aclimatização das cultivares 'RB92579' e 'RB93509' de cana-de-açúcar e elucidar a origem das brotações através da análise histológica. Em ambas as cultivares, as brotações obtidas apresentaram os melhores resultados com a cultura dos explantes em um meio de indução de calo contendo 2,0mg L-1 de ácido 2,4-diclorofenoxiacético, seguido do cultivo em meio indutor de brotações, contendo 0,1mg L-1 de cinetina e 0,2mg L-1 benzilaminopurina. O meio MS sem reguladores de crescimento foi adequado para o alongamento e enraizamento das brotações e da utilização do substrato composto de vermiculite + sais do meio MS, foi eficaz para a aclimatização. A análise histológica revelou que a origem das brotações em ambas as cultivares ocorreu via organogênese indireta.

Syngonanthus mucugensis Giul. subsp. mucugensis is an herbaceous plant with significant economic value in the ornamental dry flower business. The restricted occurrence of the municipality Mucugê-BA, Brazil, exclusively associated with extractive exploitation, has considered this species as endangered. The objective of this work was to evaluate the organogenic potential of three different types of S. mucugensis subsp. mucugensis explants to promote the development of an alternative method to the propagation of the genetic resources of this important plant. The morphogenetic capacities of the leaf, stem and root this species was tested using Murashige and Skoog culture medium at half salt concentration and different concentrations of growth of regulators benzylaminopurine - BAP (0.00; 2.22 and 4.44 µM), and naphthalene acetic acid - NAA (0.00; 1.34 and 2.68 µM). The morphoanatomic events that lead to formation of shoots were described. Stems proved to be the best source of explants, showing 58.75% regeneration of shoot by direct organogenesis in the absence of growth regulators, and 32.18 and 47.55% of shoot regeneration by indirect organogenesis in the presence of 2.22 and 4.44 µM BAP, respectively. As for leaves, there was callus formation, but without regenerating shoots. Morphogenesis was not observed when roots were used as explants. The histological analyses showed that shoot regeneration in S. mucugensis subsp. mucugensis occurred both indirectly, by unorganized tissue differentiation, and directly through returning to merismatic activity in differentiated mature cells and preexisting bud proliferation.Syngonanthus mucugensis Giul. subsp. mucugensis é uma herbácea com grande potencial de utilização no comércio de flores secas ornamentais. A ocorrência restrita ao município de Mucugê-BA, Brasil, associado à exploração extrativista tem levado essa espécie ao risco de extinção. Neste estudo, objetivou-se avaliar o potencial organogênico de três diferentes tipos de explantes de S. mucugensis subsp. mucugensis visando ao desenvolvimento de um método alternativo para a sua propagação. A capacidade morfogênica de caule, folha e raiz foi testada utilizando o meio de cultura Murashige e Skoog com metade da concentração salina e diferentes concentrações dos reguladores de crescimento benzilaminopurina - BAP (0,00; 2,22 e 4,44 µM) e ácido naftaleno acético - ANA (0,00; 1,34 e 2,68 µM). Os eventos morfoanatômicos que levaram a formação dos brotos foram descritos. O caule demonstrou ser a melhor fonte de explante, apresentando 58,75% de regeneração de brotos via organogênese direta, em meio livre de regulador de crescimento; e 32,18 e 47,55% de regeneração de brotos por organogênese indireta na presença de 2,22 e 4,44 µM de BAP, respectivamente. Para folha, foi obtida a formação de calos sem regeneração de brotos, não sendo observada morfogênese, quando se utilizou raiz como explante. As análises histológicas mostraram que a regeneração de brotos em S. mucugensis subsp. mucugensis ocorreu tanto por via indireta, pela diferenciação do tecido calogênico desorganizado, quanto por via direta pela retomada da atividade meristemática em células maduras diferenciadas e proliferação de gemas pré existentes.

O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito de combinações de 6-benzilaminopurina (BAP) e ácido α-naftalenoacético (NAA), meios de cultura e antibióticos beta-lactâmicos sobre a regeneração in vitro de segmentos internodais de laranja doce ('Pêra', 'Valência' e 'Bahia') e limão 'Cravo'. Para a indução de brotações, os explantes internodais foram cultivados em meio Murashige e Skoog (MS) contendo as seguintes combinações de BAP/ANA: 0,0/0,0; 0,25/0,0; 0,25/0,25; 0,5/0,0; 0,5/0,5; 1,0/0,0; 2,0/0,0; 2,0/0,25; 2,0/0,5; e 1,0/2,0 mg L-1. A fim de testar a influência dos meios de cultura na organogênese, as formulações (MS), Murashige e Tucker (MT) e "woody plant medium" (WPM) foram avaliadas, associadas à melhor combinação de reguladores de crescimento obtida no experimento anterior. Foram utilizados quatro antibióticos beta-lactâmicos (timentin, cefotaxima, trihidrato de meropenem e augmentin), em diferentes concentrações, para avaliar sua influência na regeneração in vitro. As melhores respostas foram obtidas quando os explantes foram cultivados em meio MS com 500 mg L-1 de cefotaxima com as seguintes combinações BAP/ANA: 0,5 + 0,25 mg L-1; para 'Cravo'; 1,0 + 0,25 mg L-1; para 'Valência' e 'Bahia'; e 1,0 + 0,5 mg L-1; para 'Pêra'. Genótipos, meios de cultura e antibióticos beta-lactâmicos afetam a resposta morfogenética de tecidos maduros de citros. The objective of this study was to evaluate the effects of 6-benzylaminopurine (BAP) and α-naphthaleneacetic acid (NAA) combinations, basal media and beta-lactam antibiotics on in vitro organogenesis from mature stem segments of 'Pêra', 'Valência' and 'Bahia' sweet oranges and 'Cravo' rangpur lime. For induction of shoot regeneration, the segments of the four cultivars were placed on Murashige and Skoog (MS) medium containing the following BAP/NAA concentrations: 0.0/0.0; 0.25/0.0; 0.25/0.25; 0.5/0.0; 0.5/0.5; 1.0/0.0; 2.0/0.0; 2.0/0.25; 2.0/0.5; and 2.0/1.0 mg L-1. In order to test the influence of the culture media on shoot-bud induction, (MS), Murashige and Tucker (MT), and woody plant medium (WPM) formulations were evaluated, associated with the best combination of plant growth regulators obtained in the previous experiment. The influence of four beta-lactam antibiotics (timentin, cefotaxime sodium salt, meropenem trihydrate and augmentin) on shoot regeneration was determined. Better regeneration responses were achieved when internodal segments were cultured onto MS-based medium with 500 mg L-1 cefotaxime with the following BAP/NAA concentrations: 0.5 + 0.25 mg L-1 for 'Cravo', 1.0 + 0.25 mg L-1 for 'Valência' and 'Bahia', and 1.0 + 0.5 mg L-1 for 'Pêra'. Genotype, growth regulators, basal media and beta-lactam antibiotics affect the morphogenetic response in mature tissues of citrus.

A regeneração in vitro de plantas de Passiflora suberosa foi obtida a partir de discos foliares. Folhas foram retiradas de plantas germinadas em casa de vegetação, imersas em solução comercial de hipoclorito de sódio (3:1), durante 20 minutos. Discos foliares de 0,5 cm de diâmetro, com a face adaxial em contato com o meio de cultura, foram introduzidos em placa de petri. Organogênese foi obtida utilizando-se meio MS acrescido de 0,5 ou 1,0 mg L-1 de BAP (6-benzilaminopurina). Após 4 a 8 semanas, observou-se formação de calos nas bordas dos discos foliares. Os calos formados foram transferidos para meio MSM, acrescido de 1,0 mg L-1 de GA3 (ácido giberélico), sob fotoperíodo de 16 horas. Desenvolvimento de gemas adventícias foi obtido a partir dos calos, sendo estas alongadas e enraizadas no mesmo meio de cultura, após periódicas repicagens, e aclimatadas em casa de vegetação.In vitro regeneration of plantlets was obtained from Passiflora suberosa leaf discs. Leaves from plants germinated in the greenhouse were collected and immersed in commercial sodium hypochlorite solution (3:1), during 20 minutes. Leaf discs (0.5 cm in diameter) were obtained and placed with the adaxial side in contact with the culture medium in petri dishes. Organogenesis was obtained when MS medium was supplemented with 0.5 or 1.0 mg L-1 BAP (6-benzylaminopurine), after four to eight weeks, callus proliferated from the edge of the discs. After induction, calli were transferred to modified MS media supplemented with1.0 mg L-1 GA3, under 16-hour photoperiod. Development of adventitious shoots was obtained from the callus tissues and the shoots were elongated and rooted in the same culture medium and acclimatized in the greenhouse.

Made available in DSpace on 2017-07-25T19:29:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 francielicolussi.pdf: 2001927 bytes, checksum: 373492674f45bb0ed7d467ad407070d5 (MD5) Previous issue date: 2006-09-01 The general objective of this research was the evaluation of in vitro culture of Euphorbia heterophylla L. one of the principal weeds that effects yield of important economic crops such as soybean and corn. In addition, some assays considered the evaluation of the species’ potential biochemical value to the pharmaceutical industry. In vitro germination of E. heterophylla seed was tested on cotton batting as substrate, full strength and ½ MS basal medium. Results show a greater percent germination and better growth indices of plant development on the ½ MS medium. Explants tested for organogenesis included hypocotyls, cotyledon and root explants which were plated on media containing the following plant growth regulators (phytohormones): 0.5 mg/L 2ip, 1mg/L Kin + 0.1 mg/L IAA, 0.5 mg/L 2ip + 0.1 mg/L IAA, 1mg/L 2ip + 0.1mg IAA, 1.5 mg.L-1 2iP + 0.1 mg.L-1 AIA added to ½ MS media. Explants were evaluated for the presence of buds, the number of buds/ explant and the number of plantlets that were rooted and re-established. On the average, hypocotyls explants responded with two buds/ explant and 50% of these developed by direct organogenesis on media containing 0.5 mg/L of 2ip. No regeneration was observed on cotyledon or root explants. Root cultures developed in all treatments with or without auxin. These results will assist in future physiological tests such as evaluating the herbicide resistance of this species and also in evaluating possible use in the pharmaceutical industry. With this objective in mind we tested the sensitivity of root cultures in vitro. Roots were placed in ½ MS media containing 0,1,2,4 and 8 times the manufacturer’s recommended dose for the products Scepter® and Flex®. The active ingredients were imazaquin and fomesafen respectively, and they are inhibitors of ALS synthesis and PROTOX. The results obtained showed evidence of suppression of the normal growth of these roots as compared to the control treatment. Therefore, this suggests that an in vitro test of this type can be used to measure resistance this species to herbicides. O objetivo geral deste trabalho foi estudar o cultivo in vitro de Euphorbia heterophylla. L, que é uma das principais plantas daninhas que afeta a produtividade das grandes culturas como soja e milho. Essa espécie também vem sendo estudado pelos aspectos fitoquímicos para indústria farmacêutica, para isto foram propostos alguns ensaios. Para avaliar a germinação in vitro de sementes de E. heterophylla foram testados substratos de algodão, meio MS e MS/2. Os resultados mostraram maior porcentagem de germinação e melhores índices de desenvolvimento das plantas em meio MS/2. Para o teste de organogênese foram utilizados explantes hipocotiledonares, cotiledonares e radiculares com as seguintes tratamentos: 0,5 mg.L-1 2iP, 1mg.L-1 CIN + 0,1 mg.L-1 AIA, 0,5 mg.L-1 2iP + 0,1 mg.L-1 AIA, 1 mg.L-1 2iP + 0,1 mg.L-1 AIA , 1,5 mg.L-1 2iP + 0,1 mg.L-1 AIA adicionado ao meio MS/2. Foram avaliados o número de explantes com gema, número de gemas por explante, número de plântulas enraizadas e aclimatadas. Obteve-se em média duas gemas por explante hipocotiledonar, em 50% destes, a partir de organogênese direta com o uso de 0,5 mg.L-1 de 2iP. Não houve regeneração a partir dos explantes cotiledonares e radiculares. A cultura racinar desenvolveu-se em todos os tratamentos contendo ou não auxina. Com o objetivo de avaliar a resistência desta planta a herbicidas, testamos a sensibilidade de culturas de raízes in vitro. As raízes foram repicadas em meio MS/2 com as seguintes concentrações: 0; 1; 2; 4 e 8 vezes a dose recomendada pelo fabricante dos herbicidas com ingrediente ativo imazaquin o fomesafen, inibidores da síntese de ALS e PROTOX. Com nomes comerciais de Scepter® e Flex®, respectivamente. Os resultados obtidos evidenciaram um retardo no crescimento normal destas raízes, quando comparada a testemunha.

Este trabalho teve como objetivo avaliar a regeneração in vitro de plantas de urucum (Bixa orellana L.) a partir de diferentes tipos de explantes. Para definir o meio de cultura adequado para indução de brotações, diferentes concentrações e, ou, combinações da auxina AIA e das citocininas BAP e ZEA foram testadas. As melhores respostas de regeneração para segmentos de hipocótilo, nós cotiledonares e hipocótilos invertidos foram observadas em meios suplementados de ZEA (2,28 µM) e AIA (0,30 µM), ZEA (4,56 µM) e ZEA (4,56 µM), respectivamente. O meio de enraizamento mais eficaz foi o MS, com a metade de sua concentração salina e 5 µM de AIB. Análises citológicas, realizadas antes da aclimatação, confirmaram a estabilidade cromossômica das plantas cultivadas in vitro, não sendo detectado variação com relação ao número de cromossomos metafásicos (2n = 14). The present work aimed the establishment of a regeneration protocol for annatto (Bixa orellana L.) from different juvenile explants. In order to promote shoot induction, different concentrations and/or combinations of IAA and the cytokinins BAP and ZEA were assessed. Better regeneration responses were achieved when segmented hypocotyl, cotiledonary nodes and inverted hypocotyl were cultured onto MS-based medium supplemented with ZEA (2.28 µM) and IAA (0.30 µM), ZEA (4.56 µM) or ZEA (4.56 µM), respectively. Rooting of elongated shoots displayed higher frequencies when half-strength MS medium with IBA (5 µM) was used. No genetic variation was detected among regenerants as revealed by cytological analysis based on metaphasic chromosome countings (2n = 14).

O trabalho objetivou comparar dois tipos de explantes (gema apical e gema axilar) do porta-enxerto de macieira 'EM-9' e o tempo de permanência destes explantes no meio de cultura de indução (20, 30 e 40 dias), na capacidade de regeneração in vitro de brotações. O meio de cultura de indução de regeneração constituiu-se dos sais de MS, suplementado com mio-inositol (100 mg.L-1), sacarose (30 g.L-1), ágar (6,0 g.L-1), BAP (4,44 µM) e ANA (0,54 µM). Transcorrido o tempo de permanência no meio de cultura de indução de regeneração, os explantes foram transferidos para meio de cultura de multiplicação, de constituição semelhante ao meio de indução, porém sem a presença de auxina. A partir dos resultados obtidos, concluiu-se que as gemas apicais e axilares do porta-enxerto de macieira 'EM-9', não diferem quanto à capacidade de regeneração in vitro de brotações e, o tempo de permanência das gemas no meio de indução de regeneração, apenas mostrou diferenças para o comprimento médio das brotações, obtendo-se o maior valor com 30 dias. The aim of this study was to compare two explants types (apical and axillary buds) of apple rootstock 'EM-9' and, their incubation period on induction medium (20, 30 and 40 days), in the capacity of in vitro regeneration of shoots. The induction medium was MS, suplemented with myo-inositol (100 mg.L-1), sucrose (30 g.L-1), agar (6.0 g.L-1), BAP (4.44 mM) and NAA (0.54 mM). Elapsed the time of permanence in the induction medium, the explants were transferred to multiplication medium without auxin. It was concluded that apical and axillary buds of the rootstock 'EM-9', did not differ in in vitro regeneration of shoots and, the incubation period of buds on regeneration induction medium, only shown differences for the average length of shoots, the highest value was obtained in 30 days.

O objetivo deste trabalho foi obter um protocolo de regeneração de brotações in vitro a partir de explantes de pereira (Pyrus communis L.) cultivar Carrick, visando a programas de transformação genética. Para tanto, utilizaram-se três tipos de explantes (ápice caulinar, folha e entrenó) que permaneceram durante 0, 10, 20, 30 ou 40 dias em meio de indução e, posteriormente, foram transferidos para meio de proliferação com 8,9 ou 13,3µM de thidiazuron (TDZ). Aos 85 dias após o início do experimento, observou-se que o explante ápice caulinar apresentou maior capacidade de regeneração de brotações quando comparado ao explante entrenó, enquanto o explante folha não mostrou capacidade de regenerar brotações. Verificou-se também que, inoculando o explante diretamente em meio de proliferação sem auxina, houve uma maior percentagem de regeneração e que, aumentando o tempo de permanência dos explantes em meio de indução, diminuiu a percentagem de regeneração de brotações. A concentração de thidiazuron (TDZ) no meio de proliferação não afetou a capacidade de regeneração de brotações. The objective of this work was to obtain a shooting regeneration protocol from explants of pear tree (Pyrus communis L.) Carrick cultivar, aiming at genetic transformation programs. Three types of explants (caulinary tip, leaf and entrenode) were used. They were left for 0, 10, 20, 30 or 40 days in induction medium, and afterwards they were transferred to proliferation medium with 8.9 or 13.3µM of TDZ. At 85 days after the beginning of the experiment, it was noted that the caulinary tip explant showed higher capacity of shooting regeneration when compared to entrenode explants, while the leaf explant was not able to regenerate. It was also observed that inoculating the explant directly in proliferation medium without auxin resulted in a higher percentage of regeneration, and increasing the period of time that the explants remained in induction medium lowered the percentage of regeneration of shoots. The TDZ concentration in the proliferation medium did not affect the capacity of shooting regeneration.

Cotilédones obtidos a partir de sementes germinadas in vitro foram usados como explantes com o objetivo de avaliar o efeito de dois complexos vitamínicos e de duas concentrações de 6-benzilaminopurina (BAP) na organogênese direta do maracujá amarelo (Passiflora edulis f. flavicarpa Deg.). Empregou-se o meio Murashige & Skoog (1962) suplementado com as vitaminas MS ou B5 (vitaminas de GAMBORG et al., 1968) e 1 ou 2 mg. -1 de BAP. Foram testados quatro tratamentos, sendo cada um constituído de 60 explantes. O experimento foi inteiramente casualizado, com dez repetições. Os dados, analisados pelo teste de Tukey, demonstraram que os meios de cultura suplementados com o complexo vitamínico B5 induziram gemas em mais de 70% dos explantes, obtendo-se até 8 brotos por explante, com um enraizamento superior a 90%. A análise de ploidia das plantas regeneradas indicou um número aparentemente normal de cromossomos típicos dessa espécie (2n=18) Cotyledons were used as explants in order to test the effect of different vitamin mixtures and BAP concentrations on yellow passion fruit (Passiflora edulis f. flavicarpa Deg.) in vitro direct organogenesis. They basal medium was constituted of MS salts, supplemented with 1 and 2mg. -1 of BAP (6-benzilaminopurina). Vitamin mixtures MS and B5 were tested. Every assay was done with 60 explants. The data were analyzed by Tukey's test. The medium supplemented with B5 vitaminic complex induced an increase of the capacity of cotyledons to regenerate in the presence of both BAP concentrations, as well for the number of explants with buds as for the number of buds per explant. The analysis of ploidy level of regenerated plants showed a number of chromosomes apparently normal and typical for this specie (2n=18).

Este trabalho teve por objetivo avaliar a capacidade de regeneração das cultivares de tomateiro industrial (Lycopersicon esculentum Mill) IPA-5 e IPA-6, utilizando quatro composições de meio de cultura descritos na literatura e cinco variações de inoculação. Foi testada uma nova variação de inoculação, denominada cotilédone fendido. A maior freqüência de formação de gemas vegetativas foi 100% no caso de IPA-5, e 65% no caso de IPA-6. Para induzir o alongamento de brotos, foram necessários três subcultivos dos explantes apresentando gemas. No caso de IPA-5, o número de brotos obtidos foi maior quando a indução de gemas foi realizada em meio contendo BAP (2,5 mg L-1) e AIA (0,2 mg L-1) seguido de três subcultivos, em meio como zeatina (0,5 mg L-1). Usando esse protocolo, a cultivar IPA-5 produziu uma média de 5,45 brotos alongados a partir do cotilédone fendido. Essa capacidade excedeu significativamente o cotilédone aparado, que produziu 4,4 brotos alongados por explante. No caso de IPA-6, a melhor combinação de meios e método de inoculação produziu 0,87 broto alongado por explante. Os brotos alongados foram enraizados e transferidos para casa de vegetação. The objective of this work was to evaluate the regeneration capacity of the IPA-5 and IPA-6 Brazilian industrial tomato (Lycopersicon esculentum Mill) cultivars using four compositions of culture media described in the literature and five inoculation methods. A new variation of inoculation, the split cotyledon method, was also tested. The largest frequency of shoot bud formation was 100% in the case of IPA-5 and 65% in the case of IPA-6. To induce shoot elongation, it was necessary to accomplish three subcultures of the explants presenting shoot buds. In the case of IPA-5, the number of the obtained shoots was higher when the induction of shoot buds was accomplished in culture medium containing BAP (2.5 mg L-1) and IAA (0.2 mg L-1) followed by three subcultures on zeatin (0.5 mg L-1) containing medium. Using such protocol, the IPA-5 cultivar produced, on the average, 5.45 elongated shoots through the split cotyledon method. That capacity exceeded significantly the trimmed cotyledon method, which produced 4.4 elongated shoots per explant. In the case of IPA-6, the best combination of culture medium and inoculation method produced 0.87 elongated shoot per explant. The elongated shoots were rooted and transferred to greenhouse.

Este trabalho teve por objetivo avaliar a capacidade de regeneracao das cultivares de tomateiro industrial (Lycopersicon esculentum Mill) IPA-5 e IPA-6, utilizando quatro composicoes de meio de cultura descritos na literatura e cinco variacoes de inoculacao. Foi testada uma nova variacao de inoculacao, denominada cotiledone fendido. A maior frequencia de formacao de gemas vegetativas foi 100% no caso de IPA-5, e 65% no caso de IPA-6. Para induzir o alongamento de brotos, foram necessarios tres subcultivos dos explantes apresentando gemas. No caso de IPA-5, o numero de brotos obtidos foi maior quando a inducao de gemas foi realizada em meio contendo BAP e AIA seguido de tres subcultivos, em meio como zeatina. Usando esse protocolo, a cultivar IPA-5 produziu uma media de 5,45 brotos alongados a partir do cotiledone fendido. Essa capacidade excedeu significativamente o cotiledone aparado, que produziu 4,4 brotos alongados por explante. No caso de IPA-6, a melhor combinacao de meios e metodo de inoculacao produziu 0,87 broto alongado por explante. Os brotos alongados foram enraizados e transferidos para casa de vegetacao.

The endogenous levels of isopentenyladenine, isopentenyladenosine, zeatin and zeatin riboside and the ability for #in vitro# axillary shoot organogenesis and rhizogenesis were compared between mature and rejuvenated clones of #Hevea brasiliensis# (Müll. Arg.). Enhancement of the #in vitro# organogenesis ability of rubber-tree clones following somatic embryogenesis or repeated grafting onto juvenile rootstocks was accompanied by an increase of zeatin riboside levels in shoots used as starting material for #in vitro# micropropagation. Furthermore, the zeatin level, in #in vitro# shoots of clones treated by #in vitro# micrografting, and consequently capable of axillary shoot and root organogenesis, was higher than in #in vitro# shoots of non treated mature material incapable of #in vitro# organogenesis. We conclude that the endogenous zeatin-like cytokinin level (free and ribosylated forms) can be considered as a reliable marker for the recovery of #in vitro# shoot and root organogenesis after rejuvenating treatments in rubber-tree clones.

O trabalho objetivou comparar dois tipos de explantes (gema apical e gema axilar) do porta-enxerto de macieira 'EM-9' e o tempo de permanência destes explantes no meio de cultura de indução (20, 30 e 40 dias), na capacidade de regeneração in vitro de brotações. O meio de cultura de indução de regeneração constituiu-se dos sais de MS, suplementado com mio-inositol (100 mg.L-1), sacarose (30 g.L-1), ágar (6,0 g.L-1), BAP (4,44 µM) e ANA (0,54 µM). Transcorrido o tempo de permanência no meio de cultura de indução de regeneração, os explantes foram transferidos para meio de cultura de multiplicação, de constituição semelhante ao meio de indução, porém sem a presença de auxina. A partir dos resultados obtidos, concluiu-se que as gemas apicais e axilares do porta-enxerto de macieira 'EM-9', não diferem quanto à capacidade de regeneração in vitro de brotações e, o tempo de permanência das gemas no meio de indução de regeneração, apenas mostrou diferenças para o comprimento médio das brotações, obtendo-se o maior valor com 30 dias.The aim of this study was to compare two explants types (apical and axillary buds) of apple rootstock 'EM-9' and, their incubation period on induction medium (20, 30 and 40 days), in the capacity of in vitro regeneration of shoots. The induction medium was MS, suplemented with myo-inositol (100 mg.L-1), sucrose (30 g.L-1), agar (6.0 g.L-1), BAP (4.44 mM) and NAA (0.54 mM). Elapsed the time of permanence in the induction medium, the explants were transferred to multiplication medium without auxin. It was concluded that apical and axillary buds of the rootstock 'EM-9', did not differ in in vitro regeneration of shoots and, the incubation period of buds on regeneration induction medium, only shown differences for the average length of shoots, the highest value was obtained in 30 days.

Etude sur deux applications de la culture in vitro. - mise au point d'un milieu pour la régénération in vitro de Philadelphus x purpurea maculatus "silver shower" et extension de la méthode à d'autres ligneux ornementaux. Modalités de traitements mutagènes

Calos obtidos da cultura in vitro de embrião imaturo do cruzamento interespecífico L. esculentum x L. peruvianum, praticamente perderam a capacidade morfogenética, após dois anos de subcultura. Na tentativa de recuperação do processo de organogênese desses calos, realizaram-se dois experimentos, utilizando-se os fitorreguladores ácido indolacético (IAA) e 6-benziladenina (6-BA), cujas concentrações foram combinadas em dialélicos de 5 x 5 e 3 x 3. A composição de sais minerais e vitaminas baseou-se no meio de Murashige e Skoog, adicionando-se sacarose a 3% e ágar a 0,8%, e ajustando-se o pH final dos meios de cultura para 5,5. As condições para o dialélico 5 x 5 foram fotoperíodo de 16 horas de luz a 600 lux e temperatura de 25 ± 3°C. No dialélico 3 x 3, os tratamentos foram mantidos em câmara de crescimento a 2.000 lux, sob a mesma variação de temperatura e fotoperíodo. Em cada frasco, inoculou-se um calo com cerca de 1 cm³, totalizando quinze repetições. Avaliaram-se o desenvolvimento de calos, atribuindo-se uma escala de notas de 1 a 5, e a presença de plantas (organogênese) após 30 dias de cultura. Observou-se o número total de plantas por tratamento, bem como o desenvolvimento das plantas em centímetro. No dialélico 5 x 5, a organogênese foi apenas incipiente em três tratamentos, porém as melhores combinações para o desenvolvimento dos calos foram de 0,5, 2,5 e 5,0µM de IAA com 2,5µM de 6-BA. No dialélico 3 x 3, houve a indução de plantas em sete tratamentos, sendo mais eficientes 25 e 50µM de 6-BA, sem auxina. O tratamento de 0,5 e 10,0µM de IAA e 6-BA, respectivamente, permitiu simultaneamente o crescimento de calos e a regeneração de plantas. Nota-se a influência das condições ambientais de manutenção das culturas, principalmente da intensidade de luz.Callus from Lycopersicon esculentum x L. peruvianum interespecific hybrids cultured in vitro lost their morphogenetic abilities after two years. An attempt has been made to recover the organogenesis of those callus, using 5 x 5 and 3 x 3 diallelic combinations between indolacetic acid (IAA) and 6-benzyl-adenin (6-BA). Mineral salts and vitamins of the MS medium (Murashige & Skoog), were used, added with sucrose (3%) and agar (0.8%). Culture medium pH was kept at 5.5. The 5 x 5 diallelic treatments were incubated under the following conditions: day temperature = 25 ± 3°C; day length = 16 hours; light intensity = 600 lux. The 3 x 3 diallelic treatments were kept at the same conditions of daylight and temperature but at 2000 lux light intensity. Callus development and shoot formation were graded from 1 to 5, 30 days after inoculation, Shoot number and height were also evaluated. In the 5 x 5 diallelic experiment, it was observed a low number of differentiated plants. The best combinations for callus development have been 0.5, 2.5 and 5.0µM of IAA with 2.5µM of 6-BA, respectively. However in the 3 x 3 diallelic experiment, it was recorded a high frequency of shoot formation s and the most efficient treatments were the 25.0 and 50.0µM concentrations of 6-BA, without any auxin. It was also observed the influence of environmental condi-tions (mainly light intensity) on the process.

Fragments of roots and shoot tips were taken from sugarcane (Saccharum sp., clone Q 75) plants propagated in vitro. The effects of light, 2, 4-dichlorophenoxyacetic acid and 6-benzyl-aminopurine on initiation and growth of calli were observed. These factors were first studied at two levels in an experiment based on a factorial design. Light appears to inhibit callus formation. Thus, the next experiments were carried out in the dark. Optimization of the concentrations of growth substances was attained using a more complete factorial plan, according to Box and Wilson's method. Mathematical models were established and used in the calculation of the most favourable combinations of these growth substances. The diffusion of phenolic compounds in the media never occurred. Neoformation of plants was obtained by transferring calli of stem origin to a medium with a low concentration of auxin.