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Busulfán es un agente alquilante bifuncional tipo-éster, que interfiere con la replicación del ADN. Dosis elevadas de este compuesto son aplicadas antes de los transplantes de médula ósea y de células germinales, sin embargo no han sido cuantificados el daño ni la recuperación del sistema reproductor. Para cuantificar la recuperación del efecto en la espermatogénesis, se usaron ratones de la cepa Balb C, a los que se les inyectó Busulfán intraperitonealmente, 40 mg/kg de peso corporal, y se evaluó el peso testicular y la concentración espermática en cola de epidídimo, a los 30, 54 y 72 días y se realizaron cortes histológicos de testículo. Los resultados fueron analizados con la prueba U Mann-Whitney p>0.05. A los 30 días el peso testicular, la concentración espermática y el diámetro de los túbulos seminíferos presentaron una drástica reducción del 77,8%, 97,9% y 34,3% respectivamente, comparados con el grupo control. A los 54 días, el peso testicular y el diámetro testicular muestran una recuperación del 70%. A los 72 días, la recuperación es completa en los parámetros evaluados. Por lo tanto, Busulfán aplicado en una sola dosis afecta significativamente la espermatogénesis en el ratón y se logra la recuperación completa en dos ciclos espermáticos. The DNA replication is disrupted by Busulfan which is a bifunctional alquilant as an ester agent. High dose of this compound are applied before transplants of bone marrow and germ cells. However quantification of the damage to the reproductive system and its recovery have not been established. The aim of this study was to quantify both spermatogenesis and spermiogenesis recovery in mice from damage caused by an injection of Busulfan. We used Balb C mice which were evaluated 30, 54 and 72 days after the intraperitoneal injection of 40 mg/kg body weight. We took the following variables: testicular weight, spermatic concentration in epididimus line and histological cuts to measure the diameter of the seminiferous tubules. Results were analyzed with the test U Mann-Whitney p>0.05. By day 30, testicular weight, spermatic concentration and diameter of the seminiferous tubules were reduced to 77,8%, 97,9% and 34,3% respectively compared to the controls. At day 54, testicular weight and diameter of the seminiferous tubules showed a recovery of 70%. Recovery was complete by day 72. Therefore Busulfan applied in a sigle dose, affects significantly spermatogenesis and the completed recovery takes two spermatic cycles in mice.

In order to study the morphological changes that occur in cells of the testes of isogenic black mouse C57BL/6/Uni into three periods during spermatogenetic used 15 mice divided into 3 groups of 5 animals with 40, 50 and 60 days of age. The mice were sacrificed and weighed. Then weighed and measured the testicles, to be processed finalmete histologically and stained with HE, PAS and Masson Massom-H and evaluated under light microscopy. Was observed in group I with 40 days of age in the seminiferous tubules had a lumen with sparse small amount of interstitial tubular cells. In the seminiferous epithelium were identified type A spermatogonia, intermediate and B, which occupied the compartment adbasal and intermingled with these cells was observed in spermatocytes I in Pachytene and leptotene, whereas in the adluminal compartment Golgi phase spermatids observed in the presence of acrosomal granule. In group II, the cells of the seminiferous epithelium were developed and it was observed in round spermatids cephalic hood phase plus many elongated spermatids in acrosome phase and Sertoli cells. In Group III, 60 days old, it was found that the seminiferous epithelium which was of the tubules had elongated spermatids in acrosome phase and maturation, with elongated nuclei and acrosomal system typical of spermiation in the presence of sperm and residual bodies near the tubular lumen. So you can check the morphological evolution of germ cell testicular spermatids and recognize its four phases: Golgi, cap, acrosome and maturation over the age of the animal. Con el fin de estudiar los cambios morfológicos que ocurren en las células del testículo del ratón negro isogénico C57BL/6/Uni en tres períodos diferentes del proceso espermatogenético; fueron utilizados 15 ratones divididos en 3 grupos (n=5) con 40, 50 y 60 días de edad respectivamente. Todos los animales fueron sacrificados y pesados. Posteriormente sus testículos se pesaron, midieron y procesaron histológicamente para HE, PAS y tricrómico Massom-H. Las muestras obtenidas fueron evaluados con microscopía de luz. En el grupo I con 40 días se observaron túbulos seminíferos con un lúmen pequeño y escaza cantidad de células intersticiales. En el epitelio seminífero se identificaron espermatogonias tipo A, intermedio y B, quienes ocuparon el compartimiento basal entremezclándose con espermatocitos I en paquiteno y leptoteno. En el compartimiento adluminal se observaron espermatidas de fase Golgi y presencia de gránulos acrosomales. En el grupo II de 50 días, se observaron células del epitelio seminífero desarrolladas, espermatidas en fase de capuz cefálico, muchas espermatidas elongadas en fase acrosomica y células sustentaculares. En el Grupo III de 60 días se observó el epitelio del túbulo seminífero con espermátidas alargadas en fase acrosómica y de maduración, con núcleos alargados y un sistema acrosomal típico de la espermiación, con presencia de espermatozoides y cuerpos residuales cerca del lúmen tubular. En conclusión se observa la evolución morfológica de las células germinativas testiculares y se reconocen las espermatides en sus cuatro fases: Golgi, capuchón, acrosomal y de maduración en las diferentes edades del animal.

In order to study the morphological changes that occur in cells of the testes of isogenic black mouse C57BL/6/Uni into three periods during spermatogenetic used 15 mice divided into 3 groups of 5 animals with 40, 50 and 60 days of age. The mice were sacrificed and weighed. Testicles were weighed and measured, and histologically processed and stained with HE, PAS and Masson Massom-H and evaluated under light microscopy. It was observed that group I with 40 days of age in the seminiferous tubules had a lumen with sparse small amount of interstitial tubular cells. In the seminiferous epithelium type A spermatogonia, intermediate and B were identified, which occupied the compartment adbasal and intermingled with these cells in spermatocytes I in Pachytene and leptotene was observed, whereas in the adluminal compartment Golgi phase spermatids we observed the presence of acrosomal granule. In group II, the cells of the seminiferous epithelium were developed and it was observed in round spermatids cephalic hood phase plus many elongated spermatids in acrosome phase and Sertoli cells. In Group III, 60 days old, it was found that seminiferous epithelium which was of the tubules had elongated spermatids in acrosome phase and maturation, with elongated nuclei and acrosomal system typical of spermiation in the presence of sperm and residual bodies near the tubular lumen. Therefore morphological evolution of germ cell testicular spermatids can be checked and recognized in its four phases: Golgi, cap, acrosome and maturation over the age of the animal. Con el fin de estudiar los cambios morfológicos que ocurren en las células de los testículos del ratón negro isogénico C57BL/6/Uni en tres períodos durante el proceso espermatogenético, se utilizaron 15 ratones divididos en 3 grupos de 5 animales con 40, 50 y 60 días de edad. Los ratones fueron sacrificados y pesados. Luego se pesaron y midieron los testículos, para ser finalmete procesados histológicamente y teñidos con HE, PAS y tricrómico Massom-H y evaluados bajo microscopía de luz. Se observó en el grupo I con 40 días de edad que los túbulos seminíferos tenían un lumen pequeño con escaza cantidad de células tubulares intersticiales. En el epitelio seminífero se identificaron espermatogonias tipo A, intermedio y B, que ocuparon el compartimiento adbasal y entremezcladas con estas células, se observó los espermatocitos I en paquiteno y leptoteno, mientras que en el compartimiento adluminal se observaron espermátidas de fase Golgi en presencia de gránulos acrosomales. En el grupo II, las células del epitelio seminífero se desarrollaron y fue posible observar espermátidas redondas en fase de capuz cefálico además de numerosas espermátidas elongadas en fase acrosómica y células sustentaculares. En el Grupo III, de 60 días de edad, se encontró que el epitelio seminífero que revestía los túbulos presentaban espermátidas alargadas en fase acrosómica y de maduración, con sus núcleos alargados y el sistema acrosomal típico de la espermiación, con la presencia de espermatozoides y cuerpos residuales cerca del lumen tubular. Así, se puede comprobar con el paso de la edad del animal, la evolución morfológica de las células germinativas testiculares y reconocer las espermátidas en sus cuatro fases: Golgi, capuchón, acrosomal y de maduración.

Using the primordial germ cells transplant technique, we could be able preserve and multiply pluripotent cells in the receptor for a long period of time. In this work, We aim to evaluate intraluminal colonization of a cellular gonocyte suspension from 14.5 dpc fetus. Cellular suspension with PGC's were isolated from fetus male mice by two enzymatic digestion steps, and cellular suspensions were transplanted into the rete testis of the receptor animals that were previously injected with Busulfan to decrease their own spermatogenesis. In this research the intraluminal colonization was identified in 13.27%, demonstrating that transplantation of a cellular suspension from gonocytes of fetus of 14.5 dpc containing PGCs can colonize the seminiferous tubules and support the spermatogenesis. Con la técnica de trasplante de células germinales primordiales es posible preservar y multiplicar células pluripotentes en el receptor durante un largo periodo de tiempo. Nuestro objetivo fue evaluar la colonización intraluminal de una suspensión celular de gonocitos de 14,5 dpc obtenidos de fetos. La suspensión celular de CGP fueron aislados de fetos de ratones machos mediante dos pasos de digestión enzimática; luego, las suspensiones celulares fueron trasplantadas en la rete testis de los animales receptores los cuales fueron tratados previamente con Busulfan para disminuir su propia espermatogénesis. En esta investigación se comprobó la colonización intraluminal en 13,27%, lo que demuestra que el trasplante de una suspensión celular de gonocitos del feto de 14,5 dpc que contiene CGP pueden colonizar los túbulos seminíferos y además promover su propia espermatogénesis.

Boric acid and borate are abundant in the nature and widely used in industrial, agricultural and cosmetology applications. However it is informed as toxic in a high dose. Residents of Arica-Chile with boron-rich geology deposits are regularly exposed to higher levels in drinking water in concentrations of 6. 0 and 12.0 mg/L. The objective of this study was to analyze the damage in the masculine reproductive apparatus of mouse CF1, exposed to boric acid in concentrations of 0.54; 2.0-6.0 and 12.0 mg/L, after 60 days of treatment. Male gonad segments were fixed in Bouin's solution for 6 hours and embedded in paraffin, longitudinal sections (5 mm) were processed for histology using the hematoxyline/eosin method. The results observed in treated animals indicate a significant increase in the weight, volume and size of testicles and seminal vesicles. The histological analysis of testicle shows in treated an epithelium notoriously altered with vacuohzations, scarce gonias and few spermatids. Gonias present picnoticals nuclei, suggesting apoptosis. In conclusion boron in high dose produces important cytotoxics effects, with degeneration of epithelium of seminiferous tubules, possibly inhibiting the spermiation, causing testicular hypertrophy, altering the masculine reproductive patterns and a reduction in fertility of mice CF1 El ácido bórico y el borato son abundantes en la naturaleza y con amplio uso industrial, agrícola y cosmetológico. Sin embargo, se informa como tóxico en alta dosis. Residentes de la ciudad de Arica-Chile, están expuestos a altos niveles de boro presente en el agua potable, con concentraciones 6.0 y 12.0 mg/1. El objetivo de este estudio fue analizar el daño en el sistema reproductivo masculino del ratón CF1, expuesto a ácido bórico en concentraciones de 0.54; 2.0-6.0 y 12.0 mg/1, por un período de 60 días de tratamiento. Los segmentos masculinos de las gónadas fueron fijados en solución de Bouin por 6 horas e incluidos en parafina, secciones longitudinales (5 \aa) fueron procesadas para histología usando el método hematoxilina/eosina. Los resultados observados en animales tratados indican un aumento significativo en el peso, el volumen y el tamaño de testículos y de vesículas seminales. El análisis histológico de testículo de individuos tratados, muestra un epitelio alterado con vacuolizaciones, escasas gomas y pocas espermátidas. Gonias presentan núcleos picnóticos, sugiriendo apoptosis. En conclusión el boro en alta dosis produce efectos citotóxicos importantes, con degeneración de epitelio de túbulos seminíferos, posiblemente inhibiendo la espermiación, causando hipertrofia testicular, alterando los patrones reproductivos masculinos y una reducción en la fertilidad de los ratones CF1

The spermatogenesis is regulated by the hypotalamus-hypophysis gonadal axis, and the androgens play a fundamental role in their last stages. The administration of the antiandrogen flutamide interferes with the function of androgen dependent organs (Prostate (P) and Seminal Vesicle (VS)). In this study flutamide (10mg/Kg b.w.) was injected to 10 mice and vehicle to the controls (n=6). The mice were sacrificed at 24 (n=5) and 72 (n=5) hours. In testicular sections the tubular diameter (TD) and height of seminiferous epithelium (EH) were measured. P and VS were macerated, and concentrations of fructose (VS) and zinc (P) were determined. No significant difference exists in the DT among the groups. However, the 72 hrs group showed EH higher than the control (p < 0.01). The fructose is lower at 72 hrs (p < 0.01) interval, at which the biggest concentration of zinc is found (p < 0.01). The decrease of the EH could be explained by the detachment of the elongated espermatids, due to the blockade effect on the testosterone activity, without being reflected in the TD at this short interval. The decrease of fructose clearly shows the deprivacion of androgens, whereas the elevated concentration of prostatic Zn at 72 hrs suggests deficiency in the secretion of Zn to the seminal plasma La espermatogénesis está regulada por el eje hipotálamo-hipófisis-gónada, y los andrógenos juegan un rol fundamental en sus últimas etapas. La administración del antiandrógeno flutamida interfiere con ella y con la función de órganos andrógeno dependientes (próstata (P) y vesícula seminal (VS)). En este estudio se inyectó flutamida (10 mg/Kg peso corporal) a 10 ratones y vehículo al control(n=6). Los ratones se sacrificaron a las 24(n=5) y 72(n=5) horas. En cortes de testículo se midió el diámetro del túbulo (TD) y la altura del epitelio (EH). P y VS se maceraron, y se determinaron las concentraciones de fructosa (VS) y zinc (P). No existe diferencia significativa en el TD entre los grupos. Sin embargo, el grupo de 72 h presenta menor EH respecto al control (p

The DNA replication is disrupted by Busulfan which is a bifunctional alquilant as an ester agent. High dose of this compound are applied before transplants of bone marrow and germ cells. However quantification of the damage to the reproductive system and its recovery have not been established. The aim of this study was to quantify both spermatogenesis and spermiogenesis recovery in mice from damage caused by an injection of Busulfan. We used Balb C mice which were evaluated 30, 54 and 72 days after the intraperitoneal injection of 40 mg/kg body weight. We took the following variables: testicular weight, spermatic concentration in epididimus line and histological cuts to measure the diameter of the seminiferous tubules. Results were analyzed with the test U Mann-Whitney p>0.05. By day 30, testicular weight, spermatic concentration and diameter of the seminiferous tubules were reduced to 77,8%, 97,9% and 34,3% respectively compared to the controls. At day 54, testicular weight and diameter of the seminiferous tubules showed a recovery of 70%. Recovery was complete by day 72. Therefore Busulfan applied in a sigle dose, affects significantly spermatogenesis and the completed recovery takes two spermatic cycles in mice., Busulfán es un agente alquilante bifuncional tipo-éster, que interfiere con la replicación del ADN. Dosis elevadas de este compuesto son aplicadas antes de los transplantes de médula ósea y de células germinales, sin embargo no han sido cuantificados el daño ni la recuperación del sistema reproductor. Para cuantificar la recuperación del efecto en la espermatogénesis, se usaron ratones de la cepa Balb C, a los que se les inyectó Busulfán intraperitonealmente, 40 mg/kg de peso corporal, y se evaluó el peso testicular y la concentración espermática en cola de epidídimo, a los 30, 54 y 72 días y se realizaron cortes histológicos de testículo. Los resultados fueron analizados con la prueba U Mann-Whitney p>0.05. A los 30 días el peso testicular, la concentración espermática y el diámetro de los túbulos seminíferos presentaron una drástica reducción del 77,8%, 97,9% y 34,3% respectivamente, comparados con el grupo control. A los 54 días, el peso testicular y el diámetro testicular muestran una recuperación del 70%. A los 72 días, la recuperación es completa en los parámetros evaluados. Por lo tanto, Busulfán aplicado en una sola dosis afecta significativamente la espermatogénesis en el ratón y se logra la recuperación completa en dos ciclos espermáticos.

The present work aims at establishing the toxic effects on spermatogenesis of a single injection of the organophosphorous agropesticide Parathion, administered to immature male mice. Seven days old animals were injected intraperitoneally with 1/3 the LD50. Body and testicular weights were measured. Quantitative as well as qualitative analysis of seminiferous tubules and germ cell populations were done for control and injected mice 8, 16, 28 and 50 days after injection. The cytotoxic effect of the pesticide is substantiated by a decrease of body and testis weight and an early damage of germ cells in treated mice. The effect is reversible and recovers at longer intervals En el presente se estudió el efecto tóxico para la espermatogenesis, de una inyección única del agropesticida organofosforado parathion, administrada a ratones inmaduros. Animales de 7 días de edad fueron inyectados por vía intraperitoneal con 1/3 de la LD50. Fue medido el peso corporal y testicular. Se efectuó un análisis cuali y cuantitativo de los túbulos seminíferos y de las poblaciones de células germinales en ratones controles y tratados, a los 8, 16, 28 y 50 días post-inyección. El efecto tóxico del pesticida se demuestra por una disminución del peso corporal y testicular y un daño temprano de las células germinales de los animales tratados. El efecto es reversible y la recuperación ocurre en los intervalos largos post-inyección

Using the primordial germ cells transplant technique, we could be able preserve and multiply pluripotent cells in the receptor for a long period of time. In this work, We aim to evaluate intraluminal colonization of a cellular gonocyte suspension from 14.5 dpc fetus. Cellular suspension with PGC's were isolated from fetus male mice by two enzymatic digestion steps, and cellular suspensions were transplanted into the rete testis of the receptor animals that were previously injected with Busulfan to decrease their own spermatogenesis. In this research the intraluminal colonization was identified in 13.27%, demonstrating that transplantation of a cellular suspension from gonocytes of fetus of 14.5 dpc containing PGCs can colonize the seminiferous tubules and support the spermatogenesis., Con la técnica de trasplante de células germinales primordiales es posible preservar y multiplicar células pluripotentes en el receptor durante un largo periodo de tiempo. Nuestro objetivo fue evaluar la colonización intraluminal de una suspensión celular de gonocitos de 14,5 dpc obtenidos de fetos. La suspensión celular de CGP fueron aislados de fetos de ratones machos mediante dos pasos de digestión enzimática; luego, las suspensiones celulares fueron trasplantadas en la rete testis de los animales receptores los cuales fueron tratados previamente con Busulfan para disminuir su propia espermatogénesis. En esta investigación se comprobó la colonización intraluminal en 13,27%, lo que demuestra que el trasplante de una suspensión celular de gonocitos del feto de 14,5 dpc que contiene CGP pueden colonizar los túbulos seminíferos y además promover su propia espermatogénesis.