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The Phagocytosis of fungal structures by neutrophils is a well-documented function of these immune cells. However, neutrophil phagocytosis of hyphal structures in the urine sediment is not usually observed during routine sample evaluation. This is a case of hyphal phagocytosis by neutrophils in the urine of a kidney allograft recipient patient. A fagocitose de estruturas fúngicas por neutrófilos é uma função bem documentada destas células imunes. No entanto, a fagocitose de hifas por neutrófilos no sedimento urinário não é normalmente observada durante avaliação de rotina de amostras. Este é um caso de fagocitose de hifas por neutrófilos na urina de um paciente receptor de aloenxerto renal.

The Phagocytosis of fungal structures by neutrophils is a well-documented function of these immune cells. However, neutrophil phagocytosis of hyphal structures in the urine sediment is not usually observed during routine sample evaluation. This is a case of hyphal phagocytosis by neutrophils in the urine of a kidney allograft recipient patient. Resumo A fagocitose de estruturas fúngicas por neutrófilos é uma função bem documentada destas células imunes. No entanto, a fagocitose de hifas por neutrófilos no sedimento urinário não é normalmente observada durante avaliação de rotina de amostras. Este é um caso de fagocitose de hifas por neutrófilos na urina de um paciente receptor de aloenxerto renal.

Orientador: Mary Luci de Souza Queiroz Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: Neste trabalho estudamos alguns dos efeitos dos inseticidas, organofosforados e carbamatos, sobre o sistema imunológico. Foram estudados 40 indivíduos expostos ocupacionalmente a estes inseticidas e 40 indivíduos-controle, sem história de exposição ocupacional a estes compostos. A atividade das colinesterases no sangue foi utilizada como indicador de exposição. Os testes imunológicos utilizados foram: . resposta imune-inespecífica avaliada através da atividade fagocitária e lítica dos neutrófilos tfente aos antígenos Candida albicans e Candida pseudotropicalis, capacidade do neutrófilo se reduzir o corante nitroblue tetrazolium (NBT) e locomoção de neutrófilos (Quimiotaxia) resposta imune-humoral avaliada através das dosagens séricas das imunoglobulinas IgG, IgA e IgM. Os resultados demonstraram uma redução significativa na atividade lítica de neutrófilos, tfente ao antígeno C. albicans nos indivíduos expostos aos inseticidas; no entanto, a atividade fagocitária estava normal. As atividades fagocitária e lítica dos neutrófilos frente ao antígeno C. pseudotropicalis, permaneceram inalteradas. Observaamos também uma diminuição significativa na produção de superóxidos, avaliada pelo teste de redução do corante NBT. Através da quimiotaxia, observamos uma diminuição significativa na locomoção de leucócitos. Em relação às dosagens séricas da imunoglobulinas, não observamos nenhuma alteração quando comparadas ao grupo controle Abstract: In this work, some effects of the organophosphate and carbamate insecticides on the immune response were investigated. We have studied forty workers ocupationally exposed to these insecticides and forty non-exposed control individuaIs. To monitor exposure we used cholinesterase activity in red bfood cells as an indicator of exposure. Phagocytosis and killing of Candida a/bicans and Candida pseudotropicalis by neutrophils, neutrophil chemotaxis, nitroblue tetrazolium reduction and leve1s of IgG, IgM and 19A were measured. The results obtained demonstrated that the phagocytic function of neutrophi1s in exposed workers did not differ from that of the control individuals. On the other hand, lysis of C. à/bicans by neutrophi1s was significantly decreased even in those workers with normal cholinesterase activity. Conversely, the lysis of C. pseudotropicalis by neutrophils was not altered. We also observed a significant decrease of nitrqblue tetrazolium reduction and neutrophil chemotaxis in the exposed group. Regarding the levels of IgM, 19A and IgG we observed no significant alterations as compared to controls Mestrado Farmacologia Mestre em Ciências

Orientador: Marco Aurélio Ramirez Vinolo Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Os ácidos graxos de cadeia curta (AGCCs), acetato, propionato e butirato, são produtos finais oriundos do metabolismo bacteriano. Além de serem um importante substrato energético às células epiteliais intestinais, estes metabólitos são capazes de modular a ativação do sistema imune e, com isso, parecem exercer um papel importante na manutenção da homeostase do hospedeiro. Um dos principais mecanismos associados aos efeitos dos AGCCs é a ativação de receptores acoplados à proteína G, incluindo o FFAR2, receptor de membrana altamente expresso em neutrófilos. Embora se saiba que as bactérias anaeróbias são capazes de produzir altas quantidades de AGCCs em locais de infecção, os efeitos ocasionados por esta produção local e a ativação de FFAR2 ainda são incertos. Dessa maneira, este trabalho se propôs a investigar os efeitos dos AGCCs, produzidos localmente nos sítios de infecção, na resposta imunológica contra a bactéria patogênica Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa). Para isso, utilizamos modelo de câmara subcutânea em camundongos C57BL/6 para iniciar e manter uma monoinfecção isolada de Aa no interior do organismo dos animais. Os AGCCs inoculados juntamente com a bactéria na câmara não alteraram o padrão de migração leucocitária ao local da infecção, mas reduziram a capacidade das células em fagocitar e destruir as bactérias ali presentes, além de terem modulado negativamente a produção de citocinas e quimiocinas (TNF-?, IL-10 e Cxcl2) essenciais para orquestrar toda a resposta imune subsequente. Tais efeitos não decorreram de ações diretas dos AGCCs sobre o crescimento bacteriano ou de efeito citotóxico dos AGCCs sobre os leucócitos. In vitro, observamos que a incubação com AGCCs reduziu a capacidade de fagocitose e produção de TNF-? por neutrófilos humanos. Por fim, demonstramos ainda que o receptor FFAR2 é importante na resposta à infecção por Aa, uma vez que na sua ausência, houve uma redução na capacidade de eliminação dessa bactéria. Em suma, estes resultados indicam que a produção de AGCCs no local da infecção interfere com a ação dos neutrófilos e com isso pode contribuir para o início ou progressão do quadro infeccioso Abstract: Short chain fatty acid (SCFAs), acetate, propionate and butyrate, are end products derived from bacterial metabolism. They are not only an important energetic substrate to the intestinal epithelial cells, but they are also capable of modulating the activation of the immune system, thereby helping to maintain the host homeostasis. One of the main mechanisms associated with the effects of the SCFAs is the activation of G protein-coupled receptors, including the FFAR2, a surface receptor highly expressed on neutrophils. Although it is already known that anaerobic bacteria are capable of producing high amounts of SCFAs at their infectious sites, the effects of this local production are still unclear. Thus, this study aimed to investigate the effects of these SCFAs, locally produced at the infectious sites, in the immune response against the pathogenic bacteria Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa). For that, we have used a subcutaneous chamber model in C57BL/6 mice to initiate and maintain a monoinfection of Aa inside the organism of the animals. The SCFAs, inoculated together with the bacteria inside of the chamber, did not alter the pattern of leukocytes migration to the infectious site, but they reduced the capacity of the migrating cells to phagocytose and to destroy the bacteria, decreasing, as well, the production of certain cytokynes and chemokynes (TNF-?, IL-10 and Cxcl2) that are essential to orchestrate the subsequent immune response. These effects were not caused by direct actions of the SCFAs in the bacterial growth or their cytotoxic effects on leukocytes. In vitro, we have seen that incubation with SCFAs reduced the phagocytic capacity and the production of TNF-? by human neuthophils. Lastly, we have also demonstrated that the FFAR2 receptor is important for the response to Aa infection, since that in its absence, there was a reduction in the capacity to eliminate this bacterium. Altogether, these results indicate that the production of the SCFAs in the infectious site interferes with neutrophils actions and with that, it can contribute to the start and progression of the infectious disease Mestrado Imunologia Mestre em Genética e Biologia Molecular FAPESP 2014/02560-6, 2012/10653-9

Painful procedures can affect the function of innate immune cells, such as neutrophils and macrophages, increasing the risk of infectious diseases. The present work aimed to verify if the analgesics flunixin meglumine or ketoprofen can attenuate the pain/discomfort of newborn lambs submitted by elastration tail docking and thereby avoid the impairment of blood granulocytes function. Twenty-one neonate lambs were divided into three treatments: the control group (n=7), not subjected to caudectomy; the flunixin group (n=7), subjected to caudectomy under local anesthesia and analgesia with two doses of flunixin meglumine; and the ketoprofen group (n=7), subjected to caudectomy under local anesthesia and two doses of ketoprofen. Pain indicators were observed by pain posture score (PS), the number of vocalizations (V), frequency of the movement of the ears (EF), and respiratory rates (RR), observed by a 10 minutes videos for each time points: -15min, 6h, 48h, and 144h. At the same time points, the reactive oxygen species (ROS) production and phagocytosis of blood granulocytes were measured by flow cytometry. At 6h after caudectomy, there was a pain indicator increase (RR, V, and PS), a blood granulocyte percentage increase, and a granulocytes phagocytosis reduction for both groups. At 48h, the ketoprofen group spend more time in pain posture and, at 144h, they exhibited a ROS production granulocyte reduction without signs of pain. We conclude the flunixin meglumine and ketoprofen did not prevent the acute pain/discomfort caused by caudectomy, because the groups showed a pain behavior and impaired of the innate immune response however, the flunixin meglumine was effective in controlling the chronic pain and their effects on blood granulocytes function in compare ketoprofen. RESUMO: Procedimentos dolorosos podem afetar a função das células imunes inatas como neutrófilos e macrófagos, aumentando o risco de ocorrer doenças infeciosas. Desta maneira, o presente trabalho pretendeu verificar se os analgésicos flunixin meglumine ou cetoprofeno conseguem atenuar a dor/desconforto de cordeiros neonatos submetidos a caudectomia por elastração, evitando assim o comprometimento da função dos granulócitos sanguíneos. Para tanto 21 cordeiras foram aleatoriamente divididas em três tratamentos: grupo controle (n=7) não submetido a caudectomia, grupo flunixin (n=7) submetido a caudectomia precedida por anestesia local e duas doses de flunixin meglumine, e cetoprofeno (n=7) submetido a caudectomia precedida por anestesia local e duas doses de cetoprofeno. Mensurou-se os indicadores de dor/desconforto após caudectomia por observações de escore de postura de dor (EP), número de vocalizações (V), frequência de movimentar as orelhas (FO) e frequência respiratória (FR), observados em vídeos de 10 minutos nos momentos -15 min e 6, 48 e 144h. Nos mesmos momentos, avaliou-se a as funções de produção de espécies reativas de oxigênio (ERO) e de fagocitose por granulócitos sanguineos em citometria de fluxo. Notou-se aumento dos indicadores de dor (FR, de V e de EP), da porcentagem dos granulócitos sanguíneos e redução da eficiência de fagocitose em ambos os grupos as 6h. As 48h, os animais do grupo cetoprofeno ainda apresentava mais tempo em postura de dor que os demais grupos e as 144h, apresentou redução da produção ERO por granulócitos. Tais achados permitem concluir que tanto o flunexin meglumine como o cetoprofeno não preveniram dor/desconforto agudo promovido pela elastração, pois os dois grupos manifestaram comportamento de dor e redução da resposta imune inata. Ainda, o analgésico flunixin meglumine foi efetivo em controlar a dor mais tardia e seus efeitos na função de granulócitos sanguíneos em comparação ao cetoprofeno.

Tese (Doutorado) — Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Da Saúde, 2018. Uma vez que a periodontite consiste em uma doença inflamatória e infecciosa, a resposta imune contra periodontopatógenos pode resultar em uma mudança na função leucocitária comparada àquela observada em indivíduos periodontalmente saudáveis ou naqueles com Diabetes Mellitus do tipo 2 (DM2). Este trabalho teve como objetivo fazer uma breve revisão da literatura sobre a importância do tratamento periodontal mecânico em indivíduos com diabetes e periodontite. Também objetivou avaliar, de forma inédita, em amostras provenientes de sangue periférico, a produção de corpúsculos lipídicos por monócitos na periodontite associada ou não ao DM2. Foi ainda analisada a fagocitose por neutrófilos e monócitos. Além disso, foi verificada a produção de radicais peróxido pelos fagócitos. Também foram acessados os dados referentes ao hemograma e lipidograma completos, dosagem de proteína C reativa (PCR), glicemia em jejum e hemoglobina glicada. 58 participantes, 23 homens e 35 mulheres, com diabetes tipo 2 ou sistemicamente saudáveis foram divididos em quatro grupos: controle (16), periodontite (14), diabetes (11) e diabetes com periodontite (17). Os seguintes parâmetros clínicos periodontais foram avaliados: profundidade de sondagem, nível clínico de inserção, índice de placa visível e índice de sangramento à sondagem. Imediatamente após a obtenção das amostras, os corpúsculos lipídicos foram obtidos pelo método de marcação citoquímica com óleo vermelho O (Oil-Red-O). Foi realizado o teste de atividade fagocitária por aderência em lâmina de microscopia de luz e para obtenção do radical peróxido, o teste nitroblue de tetrazolium (NBT). A contagem total de leucócitos foi avaliada no hemograma. O lipidograma, a glicemia de jejum, a hemoglobina glicada (A1c) e os níveis de PCR também foram avaliados por análise bioquímica de amostras de sangue. Quando o grupo com periodontite foi comparado com indivíduos saudáveis, houve um aumento na frequência de monócitos com corpúsculos no citoplasma em amostras contendo leveduras opsonizadas (p = 0,012) ou não (p = 0,003), Kruskal-Wallis. Além disso, o índice corpuscular aumentou nos pacientes com diabetes e periodontite (p

Tese apresentada à Fundação Universidade Federal de Rondônia, como requisito para obtenção do título de Doutor em Biologia Experimental no Programa de Pós-Graduação em Biologia Experimental. Orientado: Adriana Silva Pontes Orientador: Prof.ª Dr.ª Juliana Pavan Zuliani Submitted by Rejane Sales (rejane.lima@unir.br) on 2017-10-05T18:21:00Z No. of bitstreams: 1 Tese Adriana Pontes.pdf: 3474677 bytes, checksum: 6d946456747ed6cd677a10c166c8d8c2 (MD5) Approved for entry into archive by Rejane Sales (rejane.lima@unir.br) on 2017-10-05T18:23:21Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese Adriana Pontes.pdf: 3474677 bytes, checksum: 6d946456747ed6cd677a10c166c8d8c2 (MD5) Made available in DSpace on 2017-10-05T18:23:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Adriana Pontes.pdf: 3474677 bytes, checksum: 6d946456747ed6cd677a10c166c8d8c2 (MD5) Previous issue date: 2016-10 O veneno de serpentes consiste em uma mistura complexa de proteínas, peptídeos, lipídios, polissacarídeos e substâncias químicas inorgânicas. Polipeptídeos e proteínas estão presentes em maiores proporções, chegando a 90-95% do seu peso seco. Dentre os constituintes proteicos do venenos temos as metaloproteases, fosfodilesterases, hialuronidase, fosfolipases A2 (PLA2) e L-aminoácido oxidase (LAAO). A LAAO é uma enzima que se encontra amplamente distribuída em várias espécies de seres vivos. Além de peçonhas de serpentes, a enzima foi identificada em insetos, fungos e em plantas. Esta proteína desperta um grande interesse na área científica por apresentar efeitos de oxidação sobre diversos patógenos, como fungos e vírus e, sobre várias linhagens celulares. Parte desses efeitos é creditado ao peróxido de hidrogênio, gerado na reação oxidativa dessa enzima. Estudos anteriores realizados por Pontes et al. (2014) demonstraram a capacidade da LAAO, isolada do veneno da serpente Calloselasma rhodostoma, em ativar neutrófilos humanos isolados. Vale ressaltar que esta foi à primeira descrição desse efeito. No presente estudo, a LAAO não apresentou toxicidade sobre os neutrófilos. Nas concentrações de 50 e 100 μg/ mL, a toxina estimulou a migração dos neutrófilos, inibida pelo tratamento com Wortimanina (inibidor da PI3K) e SB 202190 (inibidor da p38 MAPK). Também, foi capaz de estimular a produção de espécies reativas do oxigênio seguido de degranulação, fagocitose de partículas de zimosan e liberação de mieloperoxidase pelos neutrófilos. Além disso, a LAAO estimulou estas células a liberar citocinas proinflamatórias como a IL-8, após 3 horas e, a IL-6, após 1 hora de incubação. Os mediadores lipídicos, prostaglandina E2 e o leucotrieno B4 foram detectados após 1 e 2 horas de incubação com a LAAO, respectivamente. A LAAO também foi capaz de estimular a formação e liberação de NETs, durante a 1ª hora de incubação. Este estudo permitiu uma melhor compreensão do mecanismo de ação da LAAO sobre neutrófilos, possibilitando novas perspectivas para sua utilização como modelo molecular no estudo de processos fisiopatológicos e para o desenvolvimento de novos fármacos.

Phagocytosis by neutrophils and monocytes constitutes the main defense mechanism against bacterial challenges in periodontitis. Phagocytosis by neutrophils has already been evaluated, whereas phagocytic function of monocytes has hardly been addressed so far. Objectives: The aim of this study was to assess phagocytosis by neutrophils and monocytes in periodontitis. Material and Methods: The sample included 30 subjects with severe periodontitis and 27 control subjects without periodontal disease. The phagocytic index (PhI) was calculated as the mean number of adhered/ingested Saccharomyces cerevisiae per phagocytozing monocyte or neutrophil multiplied by the percentage of phagocytes involved in phagocytosis. Results: A significant reduction in phagocyte functions was observed in individuals with periodontitis. The median of PhI of neutrophils using nonsensitized S. cerevisiae was 3 for the control group, and 1.5 for the periodontitis group (p=0.01, Mann-Whitney test). The median of PhI of monocytes with non-sensitized S. cerevisiae was 26.13 for the control group, and 13.23 for the periodontitis group (p=0.03, Mann Whitney test). The median of PhI of monocytes assessed with sensitized S. cerevisiae was 97.92 for the control group and 60.1 for the periodontitis group (p=0.005, t-test). Conclusion: The data demonstrated a reduction in the function of phagocytes, suggesting a decrease in immune defenses in periodontitis.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Pós-graduação em Medicina Tropical, 2015. As parasitoses intestinais apresentam uma alta prevalência no mundo. Estudos revelam o aumento das doenças alérgicas e da asma e concomitantemente redução das doenças infectoparasitárias em crianças. A existência de uma correlação é estudada demonstrando a ação imunossupressora dos parasitos intestinais sobre a resposta imunitária sistêmica. Os objetivos do presente trabalho foram avaliar o estado de ativação dos eosinófilos e as funções dos fagócitos comparativamente em crianças com asma, com parasitoses intestinais e na associação de ambas. Foi realizado estudo transversal com 68 crianças residentes no Riacho Fundo II e na Cidade Estrutural, em Brasília/Distrito Federal. Os pacientes foram separados nos grupos: A) crianças com parasitoses intestinais; B) crianças asmáticas sem parasitoses intestinais; C) crianças com parasitoses intestinais e asma e D) grupo controle. Após técnica de aderência em lâmina, foram avaliados: o estado de ativação dos eosinófilos do sangue periférico por parâmetros morfológicos; a fagocitose pelos monócitos (MON) e neutrófilos (NEU) por receptores para padrões moleculares de patógenos (rPMP) e para opsoninas (rOps), como também a produção de ânions superóxido (O-) pelo teste do nitroblue tetrazolium (NBT). As análises estatísticas foram realizadas pelos testes de ANOVA ou Kruskal-Wallis. Observamos, além da baixa renda familiar e reduzidas condições de escolaridade, a prática de evacuações no peridomicílio pelas crianças e a ausência de tratamento domiciliar da água de beber. Os parasitos intestinais mais prevalentes foram Ascaris lumbricoides e Giardia lamblia, seguida por Hymenolepis nana e houve associação de parasitos intestinais em 38% dos pacientes parasitados. A ativação dos eosinófilos foi menor nas crianças com enteroparasitoses, quando analisados o percentual de eosinófilos normais, espraiamento, liberação de pequenas quantidades de grânulos e emissão de pseudópode único, comparativamente às crianças asmáticas. A capacidade fagocitária pelos rPMP dos NEU das crianças parasitadas exclusivamente por protozoários foi menor do que a das crianças asmáticas. Quando a fagocitose foi avaliada pelos rOps, a capacidade fagocitária dos MON das crianças asmáticas e também parasitadas foi maior do que a das crianças controle, pela maior ingestão de leveduras pelos MON. A produção de O- pelos fagócitos foi menor nas crianças parasitadas por protozoários do que nas crianças asmáticas e parasitadas por protozoários. Contudo, a produção dos O- foi maior nas crianças parasitadas por helmintos do que nas crianças asmáticas. Em conclusão, a infecção parasitária e o quadro de asma tiveram efeitos opostos sobre as diversas funções da imunidade inata estudada. O tipo de resposta dependeu do tipo de parasito e helmintos e protozoários determinaram repostas opostas: enquanto os protozoários, particularmente a Giardia intestinalis, diminuíram a capacidade fagocitária dos NEU pelos rPMP, os helmintos estimularam a fagocitose pelos MON pelos rOps. Em adição, enquanto no quadro de asma observamos certo grau de ativação dos eosinófilos, nas crianças parasitadas, essa ativação dos eosinófilos no sangue periférico não ocorreu, possivelmente por fatores supressores produzidos pelos parasitos. Tais achados podem contribuir para o esclarecimento sobre a resposta imune inata aos parasitos e suas repercussões no indivíduo, auxiliando na abordagem das parasitoses e no desenvolvimento de novas terapêuticas para a asma e atopias. Intestinal parasites have a high prevalence worldwide, mainly in developing countries in places showing poor sanitary and socio-economic conditions. Several studies point to an increase in allergic diseases and asthma over the years, and show a concomitant reduction in infectious and parasitic diseases in children. The existence of such a correlation or causal factor has been investigated in experimental models with animal and human beings, leading to findings that demonstrate the immunosuppressive action of the parasites on the systemic immune response. Factors depending on the host, such as genotype, immune competence and nutritional status; and factors depending on the parasite, as the parasite load and the pathogenicity and virulence of helminths or protozoans, will determine the type of immune response triggered in infected individuals. In this context, this work aimed to evaluate eosinophil activation status and phagocytes' functions comparatively in children with asthma, intestinal parasites and in combination of both. A cross-sectional study was done in 68 children living in Riacho Fundo II and Chácara Santa Luzia in Cidade Estrutural, in Brasilia/Federal District, Brazil. The socio-economic-cultural evaluation of the families, and clinical, laboratory and stool testing of each child were made. Four groups were studied: A) Helminths or/and protozooan parasitized children; B) asthmatic children; C) asthmatic and parasitized children; and D) control group. The blood eosinophil activation status was assessed by morphologic parameters after adherence to glass. The phagocytic capacity of monocytes and neutrophils was evaluated by pathogen-associated molecular pattern receptors (PAMPr) and the opsonin receptors, as well as superoxide anions production by nitroblue tetrazolium test (NBT). Statistic analyses were performed by ANOVA or Kruskal-Wallis test. Eosinophils were lower activated in children with intestinal parasites than in asmathic children, by percentage of normal eosinophils, spreading, releasing of small quantities of granules and emission of a single pseudopod. The phagocytic capacity of neutrophils of children exclusively parasitized by protozoan was lower than that of asthmatic children, by pathogen-associated molecular pattern receptors. When the phagocytosis was evaluated by opsonin receptors, phagocytic capacity of monocytes in asthmatic children concomitantly parasitized was higher than that of controls. Superoxide anions production was lower in children parasitized by protozoan than in children with asthma plus protozoan. However, superoxide anions production was higher in children who were parasitized by helminths than in asthmatic children. In conclusion, our data showed that parasitic infection and asthma had opposite effects on several immune innate functions. Furthermore, immune response depended on the type of parasite, and helminths and protozoa determined opposite responses: whereas protozoan, mainly Giardia intestinalis, decreased phagocytic capacity by neutrophils by PAMPr, helminths stimulated phagocytosis by monocytes by opsonin receptors. In addition, whereas in asthmatic children there were some eosinophil activation, in parasitized children there was no blood eosinophil activation possibly determined by suppressive factors produced by parasites. These findings may contribute to make clear the innate immune response to parasites and their impact on individual, assisting to understand parasites and in development of new therapies for treatment of asthma and atopies.

Made available in DSpace on 2018-07-27T18:26:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-06-03. Added 1 bitstream(s) on 2018-07-27T18:30:37Z : No. of bitstreams: 1 000873683.pdf: 2162420 bytes, checksum: 8020e5fc7625f96c8be7397dc9a7ec86 (MD5) Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) A fagocitose, por células dendríticas (CD), de células apoptóticas (CA) infectadas induz a produção de TGF-β, IL-6 e IL-23, propiciando um microambiente com condições ideais para diferenciação de células Th17. Recentes resultados obtidos por nosso grupo demonstram que a fagocitose, por CD, de células apoptóticas infectadas resulta também na produção de altos IL- 1 e PGE2. A presença destes mediadores solúveis foi capaz de induzir a diferenciação de células Th17, in vitro, no entanto, a inibição da síntese de PGE2, pelo tratamento com inibidor não seletivo da COX (Indometacina), resultou no aumento da porcentagem destes linfócitos. Neste estudo foi avaliado o efeito da fagocitose de células apoptóticas infectadas com Escherichia coli (CA+Ec) na diferenciação de células Th17 in vivo e o efeito de PGE2 neste processo. A instilação de animais com CA+Ec, induziu a produção das citocinas IL-6, IL-1β e TGF-β no pulmão, o que sugere que a presença de CA+Ec é capaz de gerar um microambiente favorável para induzir a diferenciação Th17. A instilação de CA+Ec promoveu a diferenciação de células Th17, assim como a produção de IL-17. Porém, o tratamento com inibidor de COX resultou no aumento na porcentagem e no número de células Th17 no pulmão. A presença destas células resultou no aumento na porcentagem de neutrófilos no tecido pulmonar que parece refletir na diminuição da carga bacteriana recuperada do pulmão, quando comparado com animais que não receberam o tratamento. Assim, o conjunto destes resultados sugere que a fagocitose de CA+E. coli promove a diferenciação de células Th17. No entanto, a secreção de PGE2, pela fagocitose destas CA+Ec suprime a diferenciação e/ou migração de células Th17 para o pulmão, levando a inibição do recrutamento de neutrófilos e aumento da suscetibilidade às infecções pulmonares. The phagocytosis of infected-apoptotic cells (iAC) by dendritic cells (DC) induces the production of TGF-β, IL-6 and IL-23, providing a microenvironment to Th17 cell differentiation. Recent data obtained in our group showed that the phagocytosis of infected- apoptotic cells by CD also results in high levels of IL-1β and PGE2. The presence of these soluble mediators was able to induce the differentiation of Th17 cells, in vitro. However, the inhibition of PGE2 synthesis, by non-selective COX inhibitor (indomethacin), result the increase of percentage of Th17. In this study, it was evaluated the effect of phagocytosis of infected-apoptotic cells (AC+E. coli) during the Th17 cell differentiation, in vivo, and the effect of PGE2 in this process. The inoculation of AC+ Ec (in.) into lung induced the production of IL-6, IL-1β and TGF-β in lung, suggesting that the presence of AC+Ec is able to induce a microenvironment favorable to Th17 cell differentiation. The instillation of AC+Ec induced the differentiation of Th17 cells. However, the treatment of the animals with COX inhibitor resulted in an increase in the percentage, and number, of Th17 cells in the lung. The presence of these cells increased in the percentage of neutrophils in the lung and that apparently reflect in bacterial clearance from the lung, compared to animals that received no treatment. Taken all together, the phagocytosis of AC+Ec promotes the Th17 cell differentiation. However, the production of PGE2 by efferocytosis suppresses the differentiation and / or migration of Th17 cells to the lungs, impair the recruitment of neutrophils and increase the susceptibility to lung infections. FAPESP: 11/17611-7

OBJETIVO: Investigar o efeito de uma sessão de exercício abaixo do limiar anaeróbio sobre as funções de neutrófilos e monócitos circulantes em ratos Wistar. MATERIAL E MÉTODO: Trata-se de um delineamento experimental com um pós-teste em que os sujeitos do grupo experimental exercitaram-se na água por 30 minutos enquanto controles não foram submetidos a qualquer intervenção. A atividade funcional dos fagócitos circulantes foi avaliada por ensaio de fagocitose de Saccharomyces cerevisiae e pelo teste de redução de nitroazul de tetrazólio (NBT). Para comparação entre as médias dos grupos, utilizaram-se testes t para amostras independentes com p < 0,05. RESULTADO: Não foram observadas diferenças significativas no número total e diferencial de leucócitos entre os grupos. Entretanto, neutrófilos do grupo experimental não apenas fagocitaram mais S. cerevisiae (p = 0,005) como também foram mais eficientes em reduzir NBT (p = 0,018) em relação aos controles. Não existiram diferenças significativas na atividade funcional dos monócitos entre os grupos. CONCLUSÃO: O exercício realizado com intensidade abaixo do limiar anaeróbio foi suficiente para incrementar a atividade fagocítica e microbicida de neutrófilos em modelo animal, o mesmo não sendo observado para monócitos circulantes. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT OBJECTIVE: To assess the effect of a single session of exercise conducted below the anaerobic threshold on the functions of neutrophils and circulating monocytes in Wistar rats. MATERIAL AND METHOD: This study had an experimental design with a single post-test in which subjects of the experimental group exercised in water for 30 minutes, whereas the control group was not submitted to any intervention. Functional capacity of circulating phagocytes was assessed by means of a phagocytosis assay of Saccharomyces cerevisiae and a nitro blue tetrazolium (NBT) reduction test. To compare means between groups, t tests for independent samples were used with p set at < 0.05. RESULTS: There were no significant differences as to the total and differential number of leucocytes between groups. Nonetheless, not only did the neutrophils of the experimental group phagocyte more S. cerevisiae (p = 0.005), but they also reduced NBT more efficiently (p = 0.018) in comparison with control subjects. No significant differences in these functional activities were observed in circulating monocytes. CONCLUSION: The exercise performed below the anaerobic threshold was sufficient to increase both phagocytic and microbicide activities of neutrophils in animal model, but the same protocol did not yield similar results for circulating monocytes.

Made available in DSpace on 2016-10-10T03:52:15Z (GMT). No. of bitstreams: 5 Exercício abaixo do limiar anaeróbio aumenta as atividades fagocítica e microbicida de neutrófilos em ratos Wistar.pdf: 273014 bytes, checksum: 598a01f514d4f4adbae8c4cc24e67f19 (MD5) license_url: 52 bytes, checksum: 2f32edb9c19a57e928372a33fd08dba5 (MD5) license_text: 24259 bytes, checksum: f1f24f769b03eb8f9cd3f53c1090841c (MD5) license_rdf: 24658 bytes, checksum: 9d3847733d3c0b59c7c89a1d40d3d240 (MD5) license.txt: 1887 bytes, checksum: 445d1980f282ec865917de35a4c622f6 (MD5) Previous issue date: 2009-02 OBJETIVO: Investigar o efeito de uma sessão de exercício abaixo do limiar anaeróbio sobre as funções de neutrófilos e monócitos circulantes em ratos Wistar. MATERIAL E MÉTODO: Trata-se de um delineamento experimental com um pós-teste em que os sujeitos do grupo experimental exercitaram-se na água por 30 minutos enquanto controles não foram submetidos a qualquer intervenção. A atividade funcional dos fagócitos circulantes foi avaliada por ensaio de fagocitose de Saccharomyces cerevisiae e pelo teste de redução de nitroazul de tetrazólio (NBT). Para comparação entre as médias dos grupos, utilizaram-se testes t para amostras independentes com p < 0,05. RESULTADO: Não foram observadas diferenças significativas no número total e diferencial de leucócitos entre os grupos. Entretanto, neutrófilos do grupo experimental não apenas fagocitaram mais S. cerevisiae (p = 0,005) como também foram mais eficientes em reduzir NBT (p = 0,018) em relação aos controles. Não existiram diferenças significativas na atividade funcional dos monócitos entre os grupos. CONCLUSÃO: O exercício realizado com intensidade abaixo do limiar anaeróbio foi suficiente para incrementar a atividade fagocítica e microbicida de neutrófilos em modelo animal, o mesmo não sendo observado para monócitos circulantes. Sim Publicado

7 f. : il. A função fagocitária e a produção de radicais microbicidas de oxigênio pelos monócitos e neutrófilos foram avaliadas em 9 pacientes com cardiopatia chagásica com insuficiência cardíaca congestiva e 9 sem a síndrome em comparação com 11 indivíduos controles normais pelo teste de fagocitose de Saccharomyces cerevisiae e redução do nitroblue tetrazolium pelos fagócitos do sangue periférico. O índice fagocitário dos monócitos dos chagásicos sem insuficiência cardíaca foi significantemente 6,7 e 10,6 vezes menor do que o dos controles e chagásicos com a síndrome congestiva, respectivamente, devido ao menor envolvimento na fagocitose e a menor capacidade destas células de ingerirem partículas. Nos chagásicos sem insuficiência cardíaca os neutrófilos também apresentaram o IF 11,2 e 19,8 vezes menor que os controles e chagásicos com insuficiência cardíaca, respectivamente. A porcentagem de redução do NBT foi normal e similar para os três grupos. Efeitos opostos equilibrados das disfunções devidas às alterações cardiovasculares e imunes podem ter atuado nos pacientes chagásicos com insuficiência cardíaca paradoxalmente recuperando a função fagocitária alterada. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT We evaluated the in vitro phagocytic function and the production of microbicidal oxygen radicals by monocytes and neutrophils of 9 Chagas’ heart disease subjects with heart failure and 9 without the syndrome in comparison with 11 healthy subjects, by assessing phagocytosis of Saccharomyces cerevisiae and NBT reduction by peripheral blood phagocytes. Phagocytic index of monocytes of chagasics without heart failure was significantly 6.7 and 10.6 times lower than those of controls and chagasics with the congestive syndrome, respectively, due to a lesser engagement in phagocytosis and to an inability of these cells to ingest particles. Neutrophils also show in chagasics without heart failure PI 11.2 and 19.8 times lower than that of controls and chagasics with heart failure, respectively. The percent of NBT reduction was normal and similar for the three groups. Balanced opposite effects of cardiovascular and immune disturbances may be acting in Chagas’ disease subjects with heart failure paradoxically recovering the altered phagocytic function.

Submitted by Guilherme Lemeszenski (guilherme@nead.unesp.br) on 2013-08-22T19:04:08Z No. of bitstreams: 0 Made available in DSpace on 2013-08-22T19:04:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2000-01-01 Made available in DSpace on 2013-09-30T20:06:44Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2000-01-01 Submitted by Vitor Silverio Rodrigues (vitorsrodrigues@reitoria.unesp.br) on 2014-05-20T15:17:03Z No. of bitstreams: 0 Made available in DSpace on 2014-05-20T15:17:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2000-01-01 Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) A inoculação intraperitoneal de 3,8 x 10(9) CFU de Salmonella typhimurium viva causou 100% de mortalidade em ratos. Nesses animais, pequeno número de neutrófilos migraram para a cavidade peritoneal. A injeção intraperitoneal de tioglicolato (TG, 90 mg), carragenina (Cg, 500 mi g) ou salmonella morta pelo calor (KS, 1,9 x10(9) CFU) 24 horas antes do desafio com S. typhimurium viva causou maior (p < 0,01) migração de neutrófilos para a cavidade peritoneal após 6 horas e conferiu proteção aos animais contra os efeitos letais da bactéria que foram da ordem de 50%, 83% e 80%, respectivamente. Todavia, o tratamento semelhante dos animais com o meio de cultivo infusão de cérebro e coração (brain heart infusion-BHI) estéril exerceu proteção de apenas 23%. O número de neutrófilos que migraram para a cavidade peritoneal representou apenas 10% do verificado nos outros tratamentos. A atividade fagocitária não estava relacionada ao índice de sobrevivência dos animais, uma vez que tal atividade foi duas vezes maior no grupo KS do que nos grupos Tg e Cg, e a taxa de sobrevivência nesse grupo foi semelhante à observada no grupo Cg. Esses resultados sugerem que o aumento da migração de neutrófilos para o sítio infeccioso induzida pelas administrações prévias das diferentes substâncias é um importante fator associado com a proteção dos animais contra os efeitos letais da infecção bacteriana. The intraperitoneal inoculation of 3.8 x 10(9) CFU of alive Salmonella typhimurium caused 100% mortality in rats. In these animals a small number of neutrophils migrated to the peritoneal cavity. The intraperitoneal inoculation of the animals with thioglycollate (Tg, 90 mg), carrageenin (Cg, 500 mu g), or killed S. typhimurium (KS, 1.9 x 10(9) CFU) 24 hours before challenge with alive S. typhimurium caused a significant neutrophil migration to the peritoneal cavity (determined 6 hours after challenge) and protected the animals against the lethal effect of the bacteria at a rate of 50%, 83% and 80%, respectively. However, similar treatment of the animals with brain heart infusion broth (BHI, S. typhimurium grout medium) protected the animals by only 23%. The migrating neutrophils in these animals represented less than 10% of those observed with other treatments. The phagocytosis activity was not associated with the survival rate as this activity was 2 times higher in the KS group than in the Tg and Cg groups, and the survival rate in this group was similar to that observed in Cg. These results suggest that the increase of neutrophil migration to the infectious site is an important factor associated with protection of the animals against the lethal effect of the bacterial infection. UNESP Faculdade de Ciências Agrárias e Veteriárias Departamento de Patologia Veterinária Universidade Federal do Piauí (FUFPI) Escola de Veterinária UNESP Faculdade de Ciências Agrárias e Veteriárias Departamento de Patologia Veterinária

Orientadores: Mary Luci de Souza Queiroz, Giselle Zenker Justo Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: Neste trabalho, investigamos os efeitos imunomoduladores do composto MAPA nas atividades fagocitária, lítica e quimiotática de neutrófilos frente aos antígenos Candida albicans e Candida kefyr in vitro, bem como sobre o crescimento e diferenciação de células progenitoras hematopoiéticas da medula óssea para a série granulócito-macrófago (CFU-GM) de animais infectados com Listeria monocytogenes. A capacidade fagocitária apresentou-se aumentada com todas as concentrações de MAPA utilizadas (25, 50, 75 e 1000 j.lg/mL) frente à C. albicans. Por outro lado, em presença de C. kefyr houve um aumento com as três maiores concentrções (50, 75 e 1000 f.lg/mL). Quanto à capacidade lítica, houve um aumento nas três menores concentrações frente à C. albicans e com as três maiores concentrações frente à C. kefyr, indicando uma ação do composto na aderência dos fagócitos, bem como no processo de desgranulação de neutrófilos. A capacidade do neutrófilo de reduzir o corante nitroblue tetrazolium apresentou-se aumentada nas duas maiores concentrações testadas (50 e 75 f.lgfmL), sugerindo uma ação do composto MAPA na produção de óxido nítrico. A quimiotaxia foi utilizada para o estudo quantitativo da locomoção de leucócitos polimorfonucleares, quando incubados com as concentrações de 25, 50 e '75 j.lgfmL de MAPA. Esta atividade apresentou-se aumentada apenas quando as células polimorfonucleares foram incubadas com a concentração de 75 j.lgfmL. Para a realização dos experimentos in vivo os animais foram tratados por 7 dias, consecutivos nas doses de 0,5; 2,0; 5,0 e 7,5 mglKg de MAPA. Ao final do tratamento, os animais foram infectados com uma dose subletal de Listeria monocytogenes. Após a infecção ocorreu uma diminuição dos números de CFU-GM na medula óssea dos animais. Os animais previamente tratados com MAPA apresentaram um aumento no número de CFU-GM da medula óssea com as doses de 2,0 e 5,0 mg/Kg às 48 e 72 horas após a infecção, em relação ao controle e ao grupo infectado. Para avaliar a resistência destes animais à infecção pela L. monocytogenes realizamos uma curva de sobrevida, utilizando uma dose letal da bactéria (3 x 108 bactérias/animal). Trinta e quarenta por cento dos animais previamente tratados com as doses de 0,5 e 5,0 mgIKg de MAPA, respectivamente, sobreviveram à dose letal da L. monocytogenes, enquanto 100% dos animais do grupo controle infectado morreram em oito dias. No entanto, com 7,5 mg/Kg de MAPA todos os animais morreram em até oito dias, não havendo proteção contra a infecção. Diante dos resultados obtidos neste trabalho, podemos sugerir que o composto MAPA aumenta a resistência dos camundongos BALB/c infectados com a L. monocytogenes através do aumento dos precursores hematopoiéticos da medula óssea Abstract: ln this work, we investigated the effeets of MAPA on the immune response. We have stlldied the neutrophils exposed to these eompound of six normal individuaIs. Phagoeytosis and killing of Candida albicans and Candida ke.fyr by neutrophils, neutrophil ehemotaxis and nitroblue tetrazolium reduetion were measured. The results obtained demonstrated - an inerease in the phagoeytie funetion of neutrophils in exposed to MAPA. On the other hand, lysis of C. albicans and C. kefyr by neutrophils was signifieantly inereased. We also observed a signifieant inerease of nitroblue tetrazolium reduetion and neutrophil ehemotaxis in these eells. e also investigated the effeets of magnesium ammonium phospholinoleatepalmitoleate anhidryde (MAPA), a roteie aggregated polymer isoleted from Aspergillus orizae, on the growth and differentiation of granuloeyte-maerophage progenitor eells (CFU-GM) in normal and Listeria monocytogenes infeeted miee. MAPA was administred subeutaneously (0.5-7.5 mg/Kg) for 7 days. ln the MAPA treated/infeeted groups L. monocytogenes was administred at the end of MAP A treatment. A signifieant reduetion in the numbers ofCFU-GM was observed at 48 h after the infection, followed by a slight restoration at 72 h. Treatment of, these animaIs previously to infection stimulated marrow myelopoiesis in a dosedependent manner. The 5.0 mg/Kg MAPA was the optimal biological aetive dose in infected mice and this dose shedule also stimulated myelopoiesis in normal mice. The 0.5 and 5. O mg/Kg doses given prior to in.fection with a lethal dose of 3 x 108 bacterialanimal led to a 30% and 40% survival, respectively. These results demonstrated that MAPA produces a significant increase in the resistanee of the animaIs infeeted with L. monocytogenes, and that this protection is due, at least in part to increased CFU-GM in the bone marrow ofinfeeted animals Mestrado Mestre em Farmacologia