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Die Bedeutung der MicroRNA(miRNA) ‐ Dysregulierung für die Entwicklung und den Fortschritt von Krankheiten sowie die Entdeckung stabiler miRNA in peripherem Blut haben diese kurzen Nukleinsäuren zu Biomarkern der nächsten Generation gemacht. Hier präsentieren wir einen vollkommen homogenen Multiplex ‐ miRNA ‐ FRET ‐ Test, der sorgfältiges biophotonisches Design mit verschiedenen RNA ‐ Hybridisierungs ‐ und Ligationsschritten kombiniert. Im Vergleich zum Stand der Technik in der miRNA ‐ Detektion bietet der Einzelschritt ‐ Einzeltemperatur ‐ und amplifikationsfreie Assay eine einzigartige Kombination von Leistungsparametern. Präzise Multiplex ‐ Quantifizierung von miRNA ‐ 20a, ‐ 20b und ‐ 21 in Konzentrationen zwischen 0.05 und 0.5 nM in einer einzigen 150 ‐ μL ‐ Probe und Nachweisgrenzen zwischen 0.2 und 0.9 nM in 7.5 ‐ μL ‐ Serumproben zeigen die Anwendbarkeit der Technologie sowohl für die Hochdurchsatzanalyse als auch die patientennahe klinische Diagnostik. Das Zeitfenster passt: Ein amplifikationsfreier homogener „Mischen ‐ und ‐ Messen“ ‐ Assay zur Multiplex ‐ Detektion von bis zu drei MicroRNAs wurde entwickelt. Die Technik basiert auf dem Förster ‐ Resonanzenergietransfer von einem Terbiumkomplex auf einen von drei verschiedenen Farbstoffen und wird in nur einem Schritt bei nur einer Temperatur angewendet. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

The importance of microRNA (miRNA) dysregulation for the development and progression of diseases and the discovery of stable miRNAs in peripheral blood have made these short-sequence nucleic acids next-generation biomarkers. Here we present a fully homogeneous multiplexed miRNA FRET assay that combines careful biophotonic design with various RNA hybridization and ligation steps. The single-step, single-temperature, and amplification-free assay provides a unique combination of performance parameters compared to state-of-the-art miRNA detection technologies. Precise multiplexed quantification of miRNA-20a, -20b, and -21 at concentrations between 0.05 and 0.5 n M in a single 150 μL sample and detection limits between 0.2 and 0.9 n M in 7.5 μL serum samples demonstrate the feasibility of both high-throughput and point-of-care clinical diagnostics. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

Der empfindliche und selektive Nachweis von kurzsequenziellen MicroRNAs ist sehr anspruchsvoll. In der Zuschrift auf S. 10162 ff. präsentieren N. Hildebrandt et al. einen Einzelschritt ‐ FRET ‐ Assay für den Multiplex ‐ Nachweis verschiedener MicroRNAs. Der MicroRNA ‐ Test für die klinische Diagnostik kombiniert sorgfältiges biophotonisches Sondendesign mit zeitaufgelöstem FRET von einem lumineszierenden Tb ‐ Komplex auf drei verschiedene Fluoreszenzfarbstoffe. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

The simple, sensitive, and selective detection of short‐sequence microRNAs is very challenging. In their Communication on page 10024 ff. N. Hildebrandt and co‐workers present a single‐step “mix‐and‐measure” FRET assay for the multiplexed detection of different microRNAs. The careful design of the biophotonic probe and time‐gated FRET from a luminescent Tb complex to three difference fluorescent dyes are crucial to this microRNA test for multiplexed clinical diagnostics. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

Abstract: This paper demonstrates a new magnetophoretic position detection method for multiplexed immunoassay using colored microspheres as an encoding tool in a microchannel. Colored microspheres conjugated with respective capture molecules are incubated with a mixture of target analytes, followed by reaction with the probe molecules which had been conjugated with superparamagnetic nanoparticles (SMNPs). Under the magnetic field gradient, the resulting microspheres are deflected from their focused streamlines in a microchannel, and respective colored microspheres are detected using color charge-coupled device (CCD) in a specific detection region of the microchannel. The color and position of respective colored microspheres are automatically decoded and analyzed by MATLAB program, and the position was correlated with the concentration of corresponding target analytes. As a proof-of-concept, we attempted to assay simultaneously three types of biotinylated immunoglobuline Gs (IgGs), such as goat, rabbit and mouse IgGs, using colored microspheres (red, yellow and blue, respectively). As the capture molecules, corresponding anti-IgGs were employed and target analytes were probed using streptavidin-modified superparamagnetic nanoparticles. As a result, three analytes were simultaneously assayed using colored microspheres with high accuracy, and detection limits of goat IgG, rabbit IgG and mouse IgG were estimated to be 10.9, 30.6 and 12.1fM, respectively. In addition, with adjustment of the flow rate and detection zone, the dynamic range could be controlled by more than one order of magnitude. [Copyright &y& Elsevier]