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81 f. Submitted by Cynthia Nascimento (cyngabe@ufba.br) on 2013-02-28T13:42:20Z No. of bitstreams: 1 Daniela Benevides Melo.pdf: 1411247 bytes, checksum: 5ffcbaed6d38d4b776b4c985ba2ff6ec (MD5) Approved for entry into archive by Alda Lima da Silva(sivalda@ufba.br) on 2013-03-01T17:32:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Daniela Benevides Melo.pdf: 1411247 bytes, checksum: 5ffcbaed6d38d4b776b4c985ba2ff6ec (MD5) Made available in DSpace on 2013-03-01T17:32:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Daniela Benevides Melo.pdf: 1411247 bytes, checksum: 5ffcbaed6d38d4b776b4c985ba2ff6ec (MD5) FAPESP A resistência de microrganismos aos antimicrobianos tem aumentado nos últimos tempos despertando a preocupação dos órgãos de saúde publica. Microrganismos resistentes podem ser transferidos aos humanos através do consumo de alimentos contaminados, podendo causar doenças de difícil tratamento ou promover a disseminação de genes de resistência. O objetivo deste trabalho foi investigar a relação entre cepas de Escherichia coli isoladas de humanos e de alimentos no Estado da Bahia, buscando avaliar seu perfil de sensibilidade aos antimicrobianos bem como evidências de ligações epidemiológicas entre as mesmas. A avaliação da sensibilidade aos antimicrobianos foi realizada por disco difusão em ágar, conforme metodologia do CLSI sendo testados 11 antibióticos e o perfil clonal foi obtido por Pulsed Field Gel Electrophoresis – PFGE. As fotografias dos géis foram avaliadas pelo software GelCompar II para avaliação da semelhança entre os perfis e criação dos dendrogramas. Das 84 cepas avaliadas 53(63%) foram sensíveis aos 11 antimicrobianos testados, duas(2,4%) tiveram perfil de sensibilidade intermediária e 29(34,6%) apresentaram resistência a pelo menos um antimicrobiano. Ampicilina e tetraciclina foram os antibióticos para os quais os isolados clínicos apresentaram o maior grau de resistência, já entre as cepas isoladas de alimentos o padrão de resistência foi maior para tetraciclina. Houve um elevado percentual de cepas multirresistentes, sobretudo entre os isolados clínicos. Observou-se a formação de 14 perfis de resistência entre as cepas sendo três perfis comuns entre os isolados clínicos e de alimentos e desconsiderando-se a origem das cepas a tetraciclina apareceu em primeiro lugar em número de E. coli resistentes. Em relação ao perfil genético das cepas obtido por Pulsed Field (PFGE) foram encontrados 31 perfis distintos não se observando cepas com padrão eletroforético indistinguível que pudessem caracterizar um clone. Assim, em virtude da não existência de correlação genética entre os isolados não foi possível estabelecer relação epidemiológica entre os mesmos. O maior percentual de similaridade encontrado foi de 84,21%, entre um isolado clínico e uma cepa de alimentos o que representou 6,5% das amostras. Entre as cepas de alimentos esse percentual foi de 72,73% e para as cepas clínicas 81,82%. Cepas com maior percentual de similaridade apresentaram em comum resistência a tetraciclina. As cepas de Escherichia coli estudadas não apresentaram altos percentuais de resistência aos antimicrobianos, no entanto observou-se grande percentual de isolados multirresistentes. Dois antibióticos se destacaram em número de cepas resistentes: ampicilina e tetraciclina. Através da tipagem molecular não foram encontrados clones bem como não se pôde estabelecer relação epidemiológica entre as cepas, pois seus perfis eram bem diferentes. Assim, sugere-se que entre isolados de origem diferente a possibilidade de ocorrência de clones é pequena. Universidade Federal da Bahia. Faculdade de Farmácia. Salvador-Ba, 2010.

Made available in DSpace on 2015-12-10T14:23:44Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-27. Added 1 bitstream(s) on 2015-12-10T14:29:44Z : No. of bitstreams: 1 000851519.pdf: 1178190 bytes, checksum: 6da71571493874117e3f938393027381 (MD5) Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) Escherichia coli diarreiogênica (ECD) representa uma das principais causas da diarreia infantil. Com base em seus mecanismos de virulência, podemos classificá-la em seis patotipos distintos: E. coli enteropatogênica (EPEC), E. coli enterotoxigênica (ETEC), E. coli enteroinvasora (EIEC), E. coli produtora da toxina Shiga (STEC), E. coli enteroagregativa (EAEC) e E. coli que adere difusamente (DAEC). O objetivo deste estudo foi investigar a prevalência de ECD, entre crianças diarreicas (Pacientes) e crianças saudáveis (Controles), menores de cinco anos de idade, na cidade de Botucatu/SP. Foram analisadas amostras de fezes de 200 crianças com diarreia, atendidas no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu, entre os meses de Março de 2013 a Setembro de 2014, e 200 crianças saudáveis. Isolados de E. coli foram classificados nos distintos patotipos de ECD pela pesquisa de marcadores de virulência específicos através de PCR e, posteriormente, foram caracterizados quanto ao padrão de aderência em células HeLa e resistência à drogas antimicrobianas. Os isolados portadores do locus of enterocyte effacement (eae+) foram submetidos ao teste de FAS (Fluorescence Actin Staining), para avaliar a capacidade desses isolados em induzir a lesão attaching and effacing (AE). Ademais, os isolados de EPEC e STEC tiveram seu antígeno somático (O), e flagelar (H) determinados. ECD foi isolada de 18,0% das crianças diarreicas, e em 19,0% das crianças saudáveis, sendo que nenhum patotipo de ECD pode ser individualmente associado com a doença diarreica (P0,05). O patotipo EAEC foi o mais frequente, tendo sido detectado em igual proporção entre crianças diarreicas e saudáveis (10,0%). Dentre os isolados de EPEC, 16 provenientes das fezes de crianças com diarreia e 18 provenientes de crianças saudáveis, somente um foi capaz de aderir às células HeLa no padrão localizado (AL), sendo esse o único isolado classificado... Diarrheagenic Escherichia coli (DEC) comprises a major cause of child hood diarrhea. Based on their virulence mechanisms, DEC can be classified into six distinct pathotypes: enteropathogenic E. coli (EPEC), enterotoxigenic E. coli (ETEC), enteroinvasive E. coli (EIEC), enteroaggregative E. coli (EAEC), enterohemorrhagic E. coli (EHEC) and diffusely adherent E. coli (DAEC). This study aims to investigate the prevalence of DEC among diarrheal children (patients) and healthy children (controls), up to five years of age in Botucatu/SP. We analyzed stool samples from 200 children with diarrhea attended at Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu, between March/2013 and September/2014, and 200 healthy children. E. coli isolates were classified in different pathotypes by detection of virulence markers (by PCR) and then, characterized regarding its adherence pattern to HeLa cells and antimicrobial resistance drugs. Isolates carrying the locus of enterocyte effacement (eae+) were submitted to FAS test (Fluorescence Actin Staining), to evaluate the ability of these isolates to induce attaching and effacing lesion (AE). In addition, EPEC and STEC isolates, had their somatic (O) and flagellar (H) antigens determined. DEC was isolated from 18.0% of diarrheal children, and 19.0% of healthy children, and none of the DEC pathotypes could be individually associated with the diarrheal disease (P>0.05). EAEC was the most frequent DEC pathotype, being detected in equal proportion between patients and controls (10.0%). Among the EPEC isolates, 16 from patients and 18 from controls, only one was able to produce the localized adherence (LA) pattern to HeLa cells, being this isolate the only typical EPEC (tEPEC) identified in this study. The remains EPEC isolates were classified as aEPEC (atypical EPEC), and detected in 8.0 and 8.5% of the patients and controls, respectively. STEC and ETEC were detected in only one child from each studied ... FAPESP: 2013/05170-1

Tese de mestrado em Biologia Humana e Ambiente, apresentada à Universidade de Lisboa, através da Faculdade de Ciências, 2015 Submitted by Cristina Manessiez (camanessiez@fc.ul.pt) on 2016-02-08T16:26:36Z No. of bitstreams: 1 ulfc116025_tm_Rafael_Graça.pdf: 1756028 bytes, checksum: ff8046b3cdd6d8d1453c3ea3aa589989 (MD5) Made available in DSpace on 2016-02-08T16:26:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ulfc116025_tm_Rafael_Graça.pdf: 1756028 bytes, checksum: ff8046b3cdd6d8d1453c3ea3aa589989 (MD5) Previous issue date: 2015

Escherichia coli samples isolated from cases of dairy mastitis in municipalities of Rio de Janeiro State, Brazil, were genotypically compared and Shiga-toxin genes were detected and their prevalence evaluated. Genetically related samples were verified and the referred genes were detected in 14.28% of the cases.

Objetivo: Determinar a acao antimicrobiana do extrato bruto de Rosmarinusofficinalis L. (alecrim), sobre cepas de Staphylococcus aureus e Escherichiacoli. Materiais e Metodos: Para obtencao do extrato bruto (EB) foramtrituradas folhas frescas do alecrim e levadas ao percolador com solucaoalcoolica (etanol 96 GL) por 10/15min, sendo posteriormente filtradas econcentradas em estufa a 65°C, ate a evaporacao completa do alcool. Foram testadas 35 cepas de Staphylococcus aureus e 35 de Escherichia coli isoladasde pacientes internados no Hospital Escola de Itajuba pelo metodo de diluicaoem caldo pela tecnica de microdiluicao em placa. As concentracoes testadasforam: 40; 20; 10; 5; 2,5; 1,25; 0,625 e 0,312mg/ml. Resultados: A inibicaodo crescimento de S. aureus foi diretamente proporcional a concentracao doextrato: a concentracao de 40mg inibiu 60% das cepas testadas; 20mg inibiu48,57%, 10mg inibiu 14,28% e a concentracao de 5mg mostrou 5,71% de inibicao. As demais concentracoes nao apresentaram inibicao. Para aEscherichia coli, apenas as concentracoes de 40mg e 20mg do extratoapresentaram capacidade de inibicao, com 37,14% e 5,71% das cepas inibidas,respectivamente. Conclusao: Houve uma correlacao direta entre aconcentracao do extrato e o percentual de cepas inibidas, demonstrando queambas as especies sao inibidas pelo extrato bruto da planta Rosmarinusofficinalis L em maiores concentracoes. Palavras-chave : Antimicrobianos. Rosmarinus officinalis L. Fitoterapicos. ABSTRACT Objective: To determine the antimicrobial action of the crude extract ofRosmarinus officinalis L. on strains of Staphylococcus aureus and Escherichiacoli. Materials and methods: In order to obtain the crude extract, freshrosemary leaves were smashed, and taken to percolador with alcoholicsolution (Ethanol 96GL) for 10/15min, being then filtered and concentrated ina incubator at 65° C until complete alcohol evaporation. 35 Staphylococcusaureus and 35 Escherichia coli strains isolated from patients in the UniversityHospital of Itajuba were tested by the method of broth dilution in thetechnique of plate microdilution. The concentrations tested were 40; 20; 10; 5;2,5; 1,25; 0,625; and 0,312mg/mL. Results: The inibition of S.aureus growthwas directly proportional to the concentration of the crude extract: theconcentration of 40mg inhibited 60% of the tested strains; 20mg inhibited48,57%, 10 mg inhibited 14,28% and the concentration of 5mg inhibited5,71%. Other concentrations did not demonstrate inhibition capacity. ForEscherichia coli, only 40mg and 20mg concentrations presented inhibitioncapacity, with 37,14% and 5,71 of strains inhibited. Conclusion: There is adirect correlation between crude extract concentration and the fraction ofinhibited strains, showing that both species are inhibited by the crude extractof Rosmarinus officinalis L in higher concentrations. Keywords: Antimycrobial. Rosmarinus officinalis. Phythotherapeutics

Out of the twenty-four samples of shrimp and fish muscle used for this study, twelve were collected near a large marine sewer for waste disposal, 3 km off the coast of Fortaleza (Brazil) and used for the isolation of E. coli. Other twelve were collected at the Mucuripe fresh fish market (Fortaleza, Brazil) and used for the isolation of Staphylococcus aureus. Ethanol, water and acetone-diluted extracts of guava and papaya leaf sprouts were tested on the bacteria in order to verify their microbicidal potential. The E. coli strains used in the trials were rated LT positive. The papaya leaf extracts (Carica papaya Linn) showed no microbicidal activity while the guava sprout extracts (Psidium guajava Linn) displayed halos exceeding 13 mm for both species, an effect considered to be inhibitory by the method employed. Guava sprout extracts by 50% diluted ethanol most effectively inhibited E. coli (EPEC), while those in 50% acetone were less effective. It may be concluded that guava sprout extracts constitute a feasible treatment option for diarrhea caused by E. coli or by S. aureus-produced toxins, due to their quick curative action, easy availability in tropical countries and low cost to the consumer. Foram coletadas doze amostras de camarão e peixes nas imediações do interceptor oceânico, em Fortaleza e igual número na Feira de pescado do Mucuripe, Fortaleza, para isolamento de E. coli e Staphylococcus aureus, respectivamente. Extratos aquosos, alcoólicos e cetônicos de broto de goiabeira e de folha de mamão foram testados frente às bactérias para se verificar suas ações antibióticas. As cepas de E. coli utilizadas nos ensaios foram as classificadas como LT positivas. Os extratos de folhas de mamão (Carica papaya Linn) não revelaram quaisquer atividades antibióticas enquanto que os preparados com broto de goiabeira (Psidium guajava Linn) apresentaram halos sempre >;13 mm para as duas espécies, considerados como de inibição pelo método empregado. Os extratos de broto de goiabeira que apresentaram melhores resultados frente às cepas de E. coli ETEC foram os alcoólicos a 50% seguido do cetônico também a 50%. Concluímos que nos tratamentos de diarréias causadas por E. coli ou por toxinas elaboradas por S. aureus o extrato de brotos de goiabeira é uma opção devido a sua pronta ação curativa, seu fácil cultivo nos países tropicais e ao seu baixo valor aquisitivo.

The aim of this work was to test 101 strains of E. coli for virulence factors associated with enterotoxigenic and enterohemorrhagic pathotypes of E. coli isolated from diarrheic and non-diarrheic calves. The virulence factors of E. coli Stx1 (Shiga toxin), Stx2, Ehly (Enterohemolysin), the eae gene, LT-II (heat-labile enterotoxin), STa (heat-stable toxin), and adhesins K99 and F41 were detected by PCR. Serogroups were determined by serological methods and Stx production was observed by biological assays in Vero cells. The frequency of the eae gene was higher in isolates from diarrheic calves (35/58, 60.3%) than in non-diarrheic calves (8/43, 18.6%; P < 0.001). The gene for Stx1 occurred at high frequencies in the diarrheic strains (24/58, 41.3%) as well as in non-diarrheic (19/43, 44.2%) ones and all strains that were Stx positive by PCR showed cytotoxicity in Vero cells. Stx2 was found in ten strains, Ehly in eight strains, and LT-II in only two strains. Twenty-eight strains were negative for all of the PCR assays, including for F41 and K99 adhesins. The serogroups O7, O23, O4, O8, O153 and O156 were observed most frequently. Our results show that strains of E. coli isolated from cattle have similar virulence factors genes to strains isolated from cases of diseases in humans and may be a source of potentially pathogenic STEC for humans. O objetivo deste trabalho foi detectar em 101 amostras de E. coli isoladas de bezerros com e sem diarreia, fatores de virulência associados aos patotipos de E. coli enterotoxigênica e enterohemorrágica. Os fatores de virulência de E. coli Stx1 (Shiga toxina), Stx2, Ehly (Enterohemolisina), o gene eae, LT-II (enterotoxina termo-lábil), STa (toxina termo-estável), e adesinas K99 e F41 foram detectados por PCR. Os sorogrupos foram determinados por métodos sorológicos e a produção de Stx foi observada através de ensaios biológicos em células Vero. A frequência de detecção do gene eae foi maior nos isolados de bezerros com diarreia (35/58, 60,3%) do que em bezerros saudáveis (8/43, 18,6%; P < 0.001). O gene da toxina Stx1 foi detectado em alta frequência em amostras diarreicas (24/58, 40,3%), bem como em amostras não diarréicas (19/43, 44,2%) e todas as amostras positivas para toxina Stx em PCR mostraram citotoxicidade em células Vero. Stx2 foi encontrada em dez amostras, Ehly em oito amostras, e LT-II em duas amostras. Vinte e seis amostras foram negativas para todos os ensaios de PCR, incluindo para as adesinas F41 e K99. Os sorogrupos O7, O23, O4, O8, O153 e O156 foram detectados com maior frequência. O trabalho mostra que amostras de E. coli isoladas de bovinos apresentam fatores de virulência semelhantes à isolados de casos de doenças em humanos e possivelmente é uma fonte para STEC potencialmente patogênicas para humanos.

Submitted by Boris Flegr (boris@uerj.br) on 2021-01-07T15:13:53Z No. of bitstreams: 1 Mara Lucia Penna Queiroz Tese completa.pdf: 9271966 bytes, checksum: 2c1ffdb7b608e59f29132c7787d70737 (MD5) Made available in DSpace on 2021-01-07T15:13:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mara Lucia Penna Queiroz Tese completa.pdf: 9271966 bytes, checksum: 2c1ffdb7b608e59f29132c7787d70737 (MD5) Previous issue date: 2012-05-31 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior ESBL-producing Enterobacteriaceae have been described in hospitals and in the community worldwide. In Brazil, ESBL-producing Enterobacteriaceae have also emerged as an important cause of infections, being CTX-M enzymes the most prevalent ESBLs. The objective of this study was to analyze different genotypic aspects related to expression of antimicrobial resistance in isolates of Escherichia coli and Salmonella spp., such as: diversity of ESBLs, antibiotic resistance genes and plasmid content. Epidemiological features of ESBL-producing isolates were also investigated. We studied 88 isolates of enterobacteria, 43 E. coli and 45 Salmonella serotypes of hospital and community (mainly food) origin, isolated in the city of Rio de Janeiro. ESBL expression was observed in seven E. coli isolates (7/43; 16,3%) and in one Salmonella Typhimurium (1/45; 2,3%) and the enzymes identified as CTX-M variants and SHV-5, respectively. Among the E. coli isolates, CTX-M-2 was the most frequent (n=4), being detected in isolates recovered from rectal swabs of hospitalized patients, whereas CTX-M-59 (a CTX-M-2-variant) (n=1) and CTX-M-9 (n=2) were identified in E. coli isolated from clinical specimens. SHV-5-producing S. Typhimurium was isolated from the hospital environment (infant formula). CTX-M-producing E. coli belonged to different phylogenetic groups (A, B1, D) and STs (ST34, ST69, ST101), being blaCTX-M genes were identified in IncA/C plasmids of approximately 150 kb (blaCTX-M-2, blaCTX-M-9, blaCTX-M-59) or 80 kb (blaCTX-M-2). SHV-5-producing S. Typhimurium belonged to a single clone (A-ST19) and blaSHV-5 gene was identified in IncL/M plasmids of approximately 55Kb. This study first described in Brazil the isolation of S. Typhimurium belonging to ST313 commonly associated with severe invasive diseases, particularly in Africa. Genes encoding resistance to non-beta-lactams and class 1 integrons were found among ESBL-producers and non-ESBL-producing multidrug-resistant E. coli and Salmonella spp. In conclusion: i) our results related to E. coli confirmed the dissemination of CTX-M-enzymes (especially CTX-M-2-variants) since, at least, the beginning of the last decade in Rio de Janeiro clinical settings; demonstrated the implication of IncA/C plasmids in the spread of blaCTX-M genes; indicated the possible intra-plasmid evolution of blaCTX-M-59 from blaCTX-M-2; observation of the diversity and multiplicity of plasmids would provide genetic platforms for spread of different antibiotic resistance genes and/or elements; ii) in relation to Salmonella spp. this study described for the first time, the isolation, from infant formula, ESBL- producing S. Typhimurium; has been demonstrated the association of blaSHV-5 to plasmids belonging to IncL/M group, that can be considered epidemic plasmids ; was identified D-ST313 clone in S. Typhimurium, commonly associated with severe invasive diseases, particularly in Africa, among isolates recovered exclusively from hospital. Enterobactérias produtoras de ESBLs são descritas tanto no ambiente hospitalar quanto na comunidade em todo o mundo. No Brasil, esses microrganismos também têm emergido como uma causa importante de infecções, sendo as enzimas CTX-M as prevalentes. O objetivo deste estudo foi analisar diferentes aspectos genotípicos relacionados à expressão da resistência aos antimicrobianos em cepas Escherichia coli e de Salmonella spp, tais como: a diversidade de ESBLs, os genes de resistência aos antimicrobianos e o conteúdo plasmidial. Os aspectos epidemiológicos das cepas produtoras de ESBLs também foram investigados. Foram estudadas 88 cepas de enterobactérias, sendo 43 E. coli e 45 cepas de Salmonella spp., de origem hospitalar e da comunidade (principalmente alimentos), isoladas na cidade do Rio de Janeiro. A expressão de ESBL foi observada em sete cepas de E. coli (7/43, 16,3%) e em uma cepa de Salmonella Typhimurium (1/45, 2,3%) e as enzimas foram identificadas como variantes de CTX-M e SHV-5, respectivamente. Entre as cepas de E. coli, a enzima CTX-M-2 foi a mais frequente (n = 4), sendo detectada em cepas isoladas de swab retal de pacientes hospitalizados, enquanto as enzimas CTX-M-59 (uma variante de CTX-M) (n = 1) e CTX-M-9 (n = 2) foram identificadas em cepas isoladas a partir de espécimes clínicos. Salmonella Typhimurium produtora de SHV-5 foi isolada do ambiente hospitalar (fórmula infantil). As cepas de E. coli produtoras das enzimas CTX-M pertenceram a grupos filogenéticos (A, B1, D) e STs (ST34, ST69, ST101) diferentes, sendo os genes blaCTX-M identificados em plasmídeos com tipo de replicon IncA/C de cerca de 150 kb (blaCTX-M-2, blaCTX-M-9, blaCTX-M-59) ou 80 kb (blaCTX-M-2). A cepa de S. Typhimurium produtora de SHV-5 pertenceu a um único clone (A-ST19) e o gene blaSHV-5 foi identificado em plasmídeo com o replicon IncL/M com aproximadamente 55Kb. Foi identificado pela primeira vez no Brasil o ST313 em um clone de S. Typhimurium (D-ST313), comumente associado com doenças invasivas severas, particulamente no continente africano. Genes que codificam para a resistência aos antimicrobianos não-beta-lactâmicos e integrons classe 1 foram identificados entre as cepas de E. coli e de Salmonella spp. multirresistentes produtoras ou não de ESBLs. Em conclusão: i) nossos resultados referentes à E. coli confirmaram a disseminação de enzimas CTX-M (principalmente variantes do grupo CTX-M-2) desde, pelo menos, o ano de 2000, em hospitais no Rio de Janeiro; demonstraram a implicação dos plasmídeos IncA/C na disseminação de genes blaCTX-M; indicaram a possível evolução intra-plasmídeo de blaCTX-M-59 a partir de blaCTX-M-2; a observação da diversidade e multiplicidade de plasmídeos poderiam fornecer plataformas genéticas para a dispersão de diferentes genes e/ou elementos de resistência aos antimicrobianos; ii) em relação à Salmonella spp. este estudo descreveu, pela primeira vez, o isolamento, a partir de fórmula infantil, de uma cepa de S. Typhimurium produtora de ESBL; foi demonstrada a associação do gene blaSHV-5 com plasmídeo do tipo IncL/M, que é considerado epidêmico ; foi identificado o clone D-ST313 de S. Typhimurium, que está associado a doenças invasivas severas no continente africano, que reuniu cepas isoladas exclusivamente do ambiente hospitalar.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-07-19T13:30:10Z No. of bitstreams: 1 Andre de Souza Santos.pdf: 1140312 bytes, checksum: 1a048fad36a0b6154b6303948b772974 (MD5) Made available in DSpace on 2016-07-19T13:30:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Andre de Souza Santos.pdf: 1140312 bytes, checksum: 1a048fad36a0b6154b6303948b772974 (MD5) Previous issue date: 2014-02-21 Aimed with the present study to analyze phylogenetically, detect the presence of virulence genes and plasmids, determine the antimicrobial susceptibility profile, and verify biofilm production in Escherichia coli strains isolated from healthy pigs slaughtered in Pernambuco state, Brazil. Bacteria isolated from intestinal content were subjected to biochemical tests. 126 strains were confirmed as Escherichia coli, which were subsequently analyzed by genotypic and phenotypic methods like polymerase chain reaction (PCR), electrophoresis, disk diffusion, and adhesion microplates test. The most common phylogenetic group was B1 with 88.10% (111/126) of the strains, followed by 4.76% in group D (6/126), 3.97% (5/126) in group B2, and 3.17% (4/126) in group A. 987P (F6) gene was the most common, found in 96.72 % (118/122) of strains that showed some virulence gene, and followed by BFP in 90.98% (111/122), K88 (F4) in 18.85% (23/122), and STb in 2.46% (3/122). LT, STa, STX2e, K99 (F5), and F18 genes were not detected in any of the strains. 46.03% (58/126) of the tested strains had plasmidial content, and in resistance evaluation test to antimicrobial drugs, all isolates were resistant to erythromycin and lincomycin, while chloramphenicol was the most efficient antibacterial drug in vitro. Multiple resistance index ranged from 0.2 to 0.9, determining multidrug resistance in 99.21% (125/126) of the strains. The ability to produce biofilm was detected in 46.03% (58/126) of the strains. This study was the first of its kind in Pernambuco state. Although the strains analyzed in this study come from healthy animals and most of them have been considered commensal, the presence of virulence genes, as well as high levels of multiple antimicrobial resistance warn about the risks of transmission of bacteria with this profile between livestock and human populations, reinforcing the need for more studies that encourage the adoption of appropriate health managements in herds and presenting alternatives to control these micro-organisms. Objetivou-se neste estudo analisar filogeneticamente, detectar a presença de genes de virulência e de plasmídeos, determinar o perfil de sensibilidade a antimicrobianos e verificar a produção de biofilme em cepas de Escherichia coli isoladas de suínos hígidos abatidos no estado de Pernambuco, Brasil. A partir do cultivo de conteúdo intestinal coletado na linha de abate, isolados bacterianos foram submetidos a provas bioquímicas, sendo 126 confirmados como Escherichia coli, as quais posteriormente foram analisadas genotípica e fenotipicamente, pelos métodos de reação em cadeia da polimerase (PCR), eletroforese, teste de aderência em microplacas e disco difusão em ágar. O grupo filogenético mais frequente foi o B1, com 88,10% (111/126) dos isolados, seguido pelos grupos D com 4,76% (6/126), B2 com 3,97% (5/126) e A com 3,17% (4,126) dos isolados. O gene 987P (F6), presente em 96,72% (118/122) dos isolados que apresentaram algum gene de virulência, foi o mais frequente, seguido dos genes BFP em 90,98% (111/122), K88 (F4) em 18,85% (23/122) e STb em 2,46% (3/122) dos isolados positivos para genes de virulência. Os genes LT, STa, STX2e, K99 (F5) e F18 não foram detectados em nenhum dos isolados. Dos isolados testados, 46,03% (58/126) apresentaram conteúdo plasmidial e na avaliação da resistência aos antimicrobianos, todos os isolados foram resistentes à eritromicina e lincomicina, enquanto que o cloranfenicol foi a droga de maior eficiência in vitro. O índice de resistência múltipla (IRMA) variou de 0,2 a 0,9, determinando multirresistência em 99,21% (125/126) dos isolados. A capacidade de produzir biofilme foi detectada em 46,03% (58/126) dos isolados. Este foi o primeiro estudo desta natureza no estado de Pernambuco. Embora os isolados analisados no presente estudo sejam provenientes de animais hígidos e a maioria deles tenha sido considerada comensal, a presença de genes de virulência, bem como os elevados índices de resistência múltipla aos antimicrobianos alertam sobre os riscos da transmissão de bactérias com este perfil entre animais e humanos, reforçando a necessidade de mais estudos que incentivem a adoção de manejos sanitários adequados nos rebanhos e que apresentem alternativas no controle destes micro-organismos.

Escherichia coli O157:H7 é um dos patógenos alimentares mais importantes da atualidade, e, recentemente, diversas cepas desse microrganismo foram isoladas no sul do Brasil. O objetivo deste trabalho foi caracterizar duas cepas de E. coli O157:H7, através da avaliação de sua resistência térmica, ácida e comportamento frente a diferentes desinfetantes e procedimentos de higienização de vegetais folhosos. Resultados demonstraram a redução significativa das contagens bacterianas, após 3 minutos a 60ºC, 2 minutos a 65º, 1 minuto a 70, 72º C e 75ºC. Contudo, após adaptação ácida, nenhuma das cepas foi inativada a 60ºC, por até 3 minutos. A 70ºC foi observado aumento significativo da resistência térmica apenas para a CC. Em relação à resistência ácida, ambas as cepas sobreviveram quando expostas ao meio TSBm a diferentes pH entre 2,0 a 9,5 ajustados com ácido clorídrico e ácido propiônico (AP). Apenas, o meio com pH 2,0, ajustado com AP, foi capaz de reduzir significativamente às contagens de ambas as cepas. Na avaliação da resistência aos desinfetantes, álcool etílico (96ºGl e 70%) e quaternário de amônio foram capazes de inativar ambas as cepas, mesmo na presença de matéria orgânica. O ácido orgânico, na concentração recomendada pelo fabricante e o dobro dessa concentração, reduziu cerca de 90% das contagens, após 5 minutos de exposição. O dicloroisocianurato de sódio só apresentou reduções significativas quando foram utilizadas duas vezes a concentração recomendada pelo fabricante. Todos os procedimentos de lavagem e desinfecção de alfaces, artificialmente contaminadas com E. coli O157:H7, reduziram as contagens em 2,97±1,21logUFC/g, apenas o tratamento conduzido a 10ºC, diferiu significativamente dos demais, apresentando maior redução 6,27±0,50logUFC/g. Esses resultados demonstram que as cepas de E. coli O157:H7 foram resistentes a diferentes situações de estresse, sendo portanto importantes do ponto de vista epidemiológico, visto que estão presentes no sul do Brasil e podem se tornar agentes etiológicos de surtos alimentares. Escherichia coli O157:H7 is a major food pathogens today, and recently, several strains of this organism were isolated in southern Brazil. The objective of this study was to characterize two strains of E. coli O157: H7, by evaluating its thermal and acid resistance and behavior among different disinfectants and cleaning procedures on leafy vegetables. The results showed a significant reduction in bacterial counts after 3 minutes at 60 ° C, 2 min at 65 ° and 1 min at 70, 72 º C and 75 º C. However, after acid adaptation, none of the strains was inactivated at 60 ° C among 3 minutes. At 70 ° C significant increase in heat resistance was observed only for CC. Regarding acid resistance, both strains survived when exposed to TSBm medium at different pH adjusted from 2.0 to 9.5 with hydrochloric acid and propionic acid (PA). Only when the medium was adjusted with AP at pH 2.0 it was able to significantly reduce the counts of both strains. Evaluating the resistance to disinfectants, Ethyl Alcohol Free (96ºGl and 70 %) and quaternary ammonium were able to inactivate both strains, even in the presence of organic matter. For the orgnic acid in the concentration recommended by the manufacturer and at the double concentration there was reduced around 90 % of the counts after 5 minutes of exposure. The sodium dichloroisocyanurate only showed significant reductions when used in the double concentration recommended by the manufacturer. All procedures for cleaning and disinfecting the lettuces artificially contaminated with E. coli O157 : H7 counts decreased by 2.97 ± 1.21 log CFU / g , only the treatment conducted at 10 ° C reduced significantly from the others (6 , 27 ± 0.50 log CFU / g). The results demonstrate that the strains of E. coli O157 : H7 were resistant to different stress situations and therefore are important as an epidemiological point of view, as it is present in southern Brazil and can become etiologic agents of food borne outbreaks.

The main infectious agent responsible by post-weaning diarrhoea in piglets is the Escherichia coli and the therapy by drugs is used for control of this disease. The antimicrobial sensitivity of 66 strains of Escherichia coli isolated from piglets with post-weaning diarrhoea was studied. The results show high resistance at four drugs (streptomycin, sulfonamide, tetracycline and chloramphenicol). Gentamycin and neomycin were the best antimicrobial in the inhibition of strains of Escherichia coli, isolated from piglets with post-weaning diarrhoea, in the southwest of Paraná.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-05-09Bitstream added on 2014-06-13T19:56:07Z : No. of bitstreams: 1 stradiotto_gc_me_rcla.pdf: 1106762 bytes, checksum: 448baac77f7ab9689a3c77200edd88fa (MD5) O presente trabalho teve como objetivo avaliar a densidade e a resistência de Enterococcus sp e Escherichia coli, em águas e areias e Sargassum sp em três praias do município de Ubatuba-SP, bem como avaliar a relação da densidades com fatores abióticos, tais como temperatura, salinidade e precipitação. As amostras foram coletadas nas praias de Perequê Mirim e Enseada em dois pontos e em um único na praia da Fortaleza, a qual não é monitorada pela CETESB. Utilizou-se a técnica da membrana filtrante na filtração das amostras. Os resultados obtidos mostraram altas densidades de Escherichia coli e Enterococcus sp em areias e Sargassum sp, isto mostra que é necessário que sejam implantados programas de monitoramento para as areias das praias, já que estas estão mais contaminadas que as águas. As algas, que são utilizadas em diversos fins, estão altamente contaminadas indicando a poluição do ambiente. Nas águas o valor só ultrapassou o limite estabelecido na legislação na praia do Perequê Mirim para as densidades de E.coli em junho e outubro. Contudo ao se comparar com os resultados obtidos pela CETESB, verificou-se que a água da praia Perequê Mirim permaneceu imprópria de dezembro/2011 a agosto/2012 e que na praia da Enseada a água esteve imprópria nos meses de janeiro, fevereiro e junho de 2012. Houve correlação negativa das densidades com a salinidade, com a temperatura e a precipitação. A resistência antimicrobiana para as cepas isoladas da água, areias e Sargassum apresentaram em quase 100% destas, resistência a quase todos os antibióticos utilizados, o que sugere múltipla resistência para estas cepas. A estação de verão-outono foi a que apresentou maiores taxas de resistência para as cepas de Enterococcus sp, já para e Escherichia coli as taxas foram altas em todas as estações This study aimed to evaluate the density and resistance of Escherichia coli and Enterococcus sp in sand and water and Sargassum sp in three beaches of Ubatuba-SP and evaluate the relationship of density and abiotic factors such as temperature, salinity and precipitation. The samples were collected at two points Perequê Mirim’s beach and Enseada’s beach and at one point Fortaleza’ beach, which is not monitored by CETESB. We used the membrane filter technique in filtering the samples. The results showed high densities of Escherichia coli and Enterococcus sp sands and Sargassum sp, it must be implemented monitoring programs for the sandy beaches, as these are more contaminated than water. These algae are used in various purposes are highly contaminated indicating environmental pollution. In the waters only the value exceeded the limit established by legislation at Perequê Mirim’s beach for E. coli densities in June and October. However when compared with the results obtained by CETESB, it was found that the water at Perequê Mirim’s beach remained improper December of 2011 the august of 2012 and at Enseada’s beach water was improper for the months of January, February and June 2012. There was a negative correlation with salinity, with temperature and precipitation. Antimicrobial resistance for strains isolated from water, sand and Sargassum showed almost 100% of these, resistance to almost all antibiotics, suggesting multiple resistance to these strains. The season of summer-autumn showed the highest rates of resistance to the strains of Enterococcus sp, and Escherichia coli to have rates were high in all seasons

The role of psittacine birds as a reservoir of avian pathogenic Escherichia coli (APEC) is not known but would be helpful in understanding the human – animal interface, since the enteric microbiota of these birds consists of Gram positive bacteria. The aim of this study was to identify the presence of APEC in feces of clinically healthy Guaruba guarouba. To do this, we isolated and analyzed E. coli from cloacal fecal samples taken from 87 psittacine birds from six zoologic parks, three commercial breeders and one conservation breeder. Of the 87 birds examined, 46 (52.87%) presented E. coli in feces. The presence of the following eight virulence genes was determined by the polymerase chain reaction (PCR): irp2, iucD, iss, vat, cvi/cva, tsh, astA, and papC, and 29 (63.04%) of 46 E. coli isolates tested were positive at least one of the eight genes studied. The frequency of virulence genes observed in isolates of E. coli were 32.6% (15/46) irp2, 26% (12/46) iucD, 19.5% iss (9/46), 17.4% vat (8/46), 17.4% cvi/cva (8/46), 8.7% tsh (4/46), 4.4% astA (2/46) and 0% papC (0/46). The isolates were grouped in 13 genotypic profiles according to virulence gene combinations, but only 2 isolates were classified as APEC, with the pattern iuc, iss, cvi/cva, irp + and iuc, iss, cvi/cva, irp, tsh, vat +. This study reveals the presence of APEC in clinically healthy captive G. guarouba, suggesting that these psittacine birds may act as reservoir for pathogenic microorganisms. Epidemiological studies are needed to determine the relevance of this species as a reservoir and the implications for conservation of endangered species G. guarouba. O papel dos psitacídeos como reservatório de Escherichia coli patogênicas para aves (APEC) não é conhecido, mas será útil para a compreensão da interface humano-animal, uma vez que a microbiota entérica destas aves é composta por bactérias Gram-positivas. O objetivo deste estudo foi identificar a presença de APEC em fezes de Guaruba guarouba clinicamente saudáveis. Para isso, foram isoladas e analisadas E. coli presentes em fezes cloacais coletadas de 87 psitacídeos, alojados em seis zoológicos, três criatórios comerciais e um criatório conservacionista. Das 87 aves examinadas, 46 (52,87%) apresentaram E. coli nas fezes. A presença de oito genes de virulência foi determinada pela reação em cadeia pela polimerase (PCR): irp2, iucD, iss, vat, cvi/cva, tsh, astA, e papC, e 29 (63,04%) dos 46 isolados foram positivos para pelo menos um dos oito genes estudados. A frequência dos genes de virulência observada nos isolados de E. coli foi 32.6% (15/46) irp2, 26% (12/46) iucD, 19.5% iss (9/46), 17.4% vat (8/46), 17.4% cvi/cva (8/46), 8.7% tsh (4/46), 4.4% astA (2/46) e 0% papC (0/46). Os isolados foram agrupados em 13 perfis genotípicos de acordo com combinações de genes de virulência, mas apenas duas amostras foram classificadas como APEC, com o perfil iuc, iss, cvi/cva, irp + e iuc, iss, cvi/cva, irp, tsh, iuc, iss, +. Este estudo revela a presença de APEC em aves de cativeiro (G. guarouba) clinicamente saudáveis, sugerindo que estes psitacídeos possam atuar como reservatórios de micro-organismos patogênicos. Estudos epidemiológicos são necessários para determinar a relevância desta espécie como reservatório e as implicações para a conservação da espécie ameaçada G. guarouba.

BARBATO, L. Detection and characterization of Gram-negative bacteria producers extended spectrum βlactamases (ESBL) and pAmpC isolated for pets and buffalo in Sao Paulo. 2012. 56 p. Masters thesis (Microbiology) Instituto de Ciencias Biomedicas, Universidade de Sao Paulo, Sao Paulo, 2012. The emergence of multidrug-resistant bacteria (MDR) is a public health issue, which is related to the overuse and misuse of antibiotics both in human and veterinary medicine, as well as, agribusiness. This study aimed to conduct an epidemiological surveillance on MDR bacteria, elucidating molecular mechanisms of resistance and clonal relatedness among Gram-negative bacilli recovered from samples from buffalo — growth market into Brazil — and in pets exhibiting signs and symptoms related to urinary tract infection, admitted at the Veterinary Hospital of the University of Sao Paulo. The study reports the spread of MDR bacteria exhibiting a high resistance profile to veterinaryand human-use β-lactams and quinolones, in livestock of buffalos and in pets, constituting the first worldwide report of CTX-M-8-type extended-spectrum β-lactamase (ESBL)and CMY-2-type plasmid AmpC (pAmpC)producing E. coli strains in buffalo. Moreover, to the best of knowledge, this is the first report of CTX-M-15-, CTXM-8-, CTX-M-2, CMY-1, CMY-2and DHA-1-producing E. coli strains in pets in Brazil. With respect to the origin of resistance, we found no clonal relatedness among MDR E. coli isolates. Moreover, 55% β-lactamaseproducing E. coli strains belonged to the low-virulence phylogenetic groups A and B1, mainly in buffalos, which reinforces the hypothesis about endogenous selection of commensal microbiota in food-animals, due to the selective pressure caused by broad-spectrum antibiotic use and/or acquired by the horizontal gene transfer. Already in companion animals, the phylogenetic analysis of virulence in E. coli denoted the predominance of the highly virulent phylogenetic groups B2 and D which would be directly related to the cases of UTI and sepsis. The MLST analysis showed diversity among the strains, revealing commom ancestors in Asia, Africa, South America, North America and Europe. Keyword: ESBL. Escherichia coli. buffalo. CTX-M. CTX-M-15. CTX-M-2. CTX-M-8. pAmpC. LISTA DE ILUSTRACOES Figura 1Reacao de inativacao do anel βlactâmico por enzimas ESBL 16 Figura 2Distribuicao geografica das cepas produtoras de ESBL de origem humana no Brasil 18 Quadro 1Dados clinicos e epidemiologicos dos isolados bacterianos estudados 22 Quadro 2Iniciadores usados para amplificacao dos genes pesquisados 25 Figura 3Esquema de classificacao de filogenia de virulencia para Escherichia coli 27 Quadro 3Cepas bacterianas resistentes a pelo menos um antibiotico, especie bacteriana isolada, ano da coleta, animal de origem, tipo de amostra, e perfil re resistencia aos antimicrobianos testados 34 Quadro 4Caracteristicas clinicas e epidemiologicas e caracterizacao fenotipica e genotipica de cepas resistentes a quinolonas; genotipo de virulencia e grupo filogenetico dos isolados de E. coli 37 Quadro 5Caracteristicas clinicas e epidemiologicas e caracterizacao fenotipica e genotipica de beta-lactamases adquirida nos isolados estudados; similaridade genetica (perfil ERIC-2), genotipo de virulencia e grupo filogenetico dos isolados de E. coli 38 Figura 4Dendrograma e perfil genotipico de cepas de E. coli, isoladas de bufalos e animais de companhia, produtoras de enzimas β-lactamases 39

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-10-26Bitstream added on 2014-06-13T18:56:02Z : No. of bitstreams: 1 guastalli_eal_me_jabo.pdf: 288811 bytes, checksum: 03b7643862d7f270422c422ff91b53b9 (MD5) Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) Foram isoladas 90 estirpes de E. coli de fígados e de intestinos, de pintainhas de postura comercial, com sete dias de idade. Com o objetivo de caracterizar as estirpes isoladas, a patogenicidade das mesmas foi determinada, em inoculação “in vivo”. O teste revelou 44 estirpes de alta ou de intermediária patogenicidade, que foram analisadas por PCR multiplex quanto á presença de oito genes de virulência (astA, iss, iucD, irp2, papC, tsh, vat e cva/cvi) e tiveram os sorotipos O:H identificados. Os resultados demonstraram que todas as estirpes analisadas continham pelo menos um dos oito genes pesquisados e que a maioria (93,20%) possuíam o gene iss. Foram detectados 17 perfis genéticos diferentes, sendo 15 deles com combinações de dois ou mais genes, representando 70,45% do total de estirpes analisadas. Onze sorogrupos e onze antígenos “H” foram identificados, sendo O8 (15,89%) e o H17 (23,8%) os mais frequentes. Com o objetivo de verificar a susceptibilidade das estirpes aos antimicrobianos: ampicilina, enrofloxacina, eritromicina, espectinomicina, estreptomicina, fosfomicina, kanamicina, lincomicina, norfloxacina, sulfa+trimetoprim e tetraciclina, comumente utilizados na avicultura, todas as estirpes de E. coli isoladas foram analisadas. O antimicrobiano que apresentou maior atividade antibacteriana foi a espectinomicina (92,2%) e o de menor atividade foi a lincomicina. Nenhuma das estirpes foi sensível a todos os antimicrobianos testados. Os resultados demonstraram uma diversidade de sorotipos e de genes de virulência envolvidos no quadro clínico de colibacilose estudado, como também sorogrupos que não haviam sido relatados em APEC e a alta incidência de resistência antimicrobiana A total of 90 strains of E. coli were isolated from the livers and intestines of seven-day-old commercial layer chicks. With the objective of characterising the isolated strains, their pathogenicity levels were determined by in vivo inoculation. These tests identified 44 strains with high or intermediate levels of pathogenicity, which were then analysed by multiplex PCR for the presence of eight virulence genes (astA, iss, iucD, irp2, papC, tsh, vat e cvi/cva) and the serotypes O:H were identified. The results demonstrated that these isolated strains contained at least one of the eight genes of interest, and the majority (93.20%) possessed the iss gene. Seventeen different genetic patterns were detected, 15 of which had combinations of two or more genes, representing 70.45% of all analysed strains. Eleven serogroups and eleven antigens “H” were identified, O8 (15.89%) and H17 (23.80%) were most frequent. Aiming to verify the susceptibility of strains to antimicrobial agents: ampicillin, enrofloxacin, erythromycin, spectinomycin, streptomycin, fosfomycin, kanamycin, lincomycin, norfloxacin, trimethoprim sulfa and tetracycline, commonly used in poultry, all strains of E. coli isolates were analyzed. The antibiotics that showed the highest antibacterial activity was spectinomycin (92.2%) and less activity was the lincomycin (100%) strains were resistant. None of the strains were sensitive to all antibiotics tested. The results showed a diversity of serotypes and virulence genes involved in the clinical study of colibacillosis, as well as serogroups that had not been reported in APEC and the high incidence of antimicrobial resistance

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:23Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-06-25Bitstream added on 2014-06-13T20:56:24Z : No. of bitstreams: 1 caliman_mcw_me_jabo.pdf: 1793732 bytes, checksum: 2e6b8864381cb4eeeb7aba6bc8d4c882 (MD5) A resistência antimicrobiana em bactérias de origem animal tem se caracterizado como importante problema de saúde pública. No Brasil, muitos trabalhos têm verificado a presença de fatores de virulência e resistência em cepas de Escherichia coli isoladas de animais de produção, porém há poucos estudos avaliando estes aspectos em animais de companhia. O presente trabalho verificou o perfil de sensibilidade microbiana e a presença dos genes codificadores de adesinas (pap, sfa, afa), de intimina (eae) e de Shiga toxina (stx1, stx2) em cepas fecais de E. coli obtidas através de swabs retais de gatos diarréicos e de saudáveis, e em cepas urinárias de gatos com sintomas de infecção do trato urinário (ITU) apresentados para consultas e vacinação em clínicas veterinárias da região de Ribeirão Preto. Entre Janeiro e dezembro de 2009 foram isoladas 205 cepas de E. coli que foram caracterizadas quanto à presença de genes codificadores de fatores de virulência por PCR e sensibilidade microbiana pelo método de difusão em discos. O gene sfa ocorreu em maior abundância (35,6%) sendo mais freqüente entre animais com diarréia e ITU que entre os saudáveis. O gene eae foi verificado apenas entre os diarréicos (2,4%) e sempre associado ao sfa. O gene pap ocorreu em todos os grupos (22,43%). Genes stx1,stx2 e afa não foram encontrados. As resistências predominantemente observadas foram para cefalotina (42,1%), tetraciclina (20%) e ampicilina (15,8%) entre os isolados dos gatos diarréicos enquanto nos dos saudáveis as resistências mais freqüentes foram tetraciclina (30,5%), cotrimoxazol (17,9%) e ampicilina (20,0%). Gatos com ITU apresentaram maiores resistências para ampicilina (46,7%), cefalotina (13,3%) e ácido nalidíxico (13,3%). Multiresistência foi encontrada... Antimicrobial resistance in animal origin bacteria has been characterized as an important public health problem. In Brazil, many studies have verified the presence of antimicrobial virulence factors and resistance in strains of Escherichia coli isolated from livestock, however there are few studies evaluating these aspects in pets. The current work verified the sensibility profile and the presence of genes encoding adhesins (pap, sfa, afa) intimin (eae) and Shiga toxin (stx1, stx2) in E. coli fecal strains obtained from rectal swabs from diarrheic and healthy cats and urinary strains from cats with symptoms of urinary tract infection (UTI) presented to be consulted and get vaccination in veterinary clinics in the region of Ribeirão Preto. Between January and December 2009 were isolated 205 strains of E. coli that have been characterized for the presence of genes encoding virulence factors by PCR and microbial sensitibility by disc diffusion method. The sfa gene occurred in greatest abundance (35.6%) was more common among animals with diarrhea and UTI than among the healthy. The eae gene was found only among diarrheic (2.4%) and always associated with sfa. The pap gene occurred in all groups (22.43%). Genes stx1, stx2 and afa were not found. The predominantly observed resistance was to cephalothin (42.1%), tetracycline (20%) and ampicillin (15.8%) among the isolates from diarrheic cats while in the healthy the tetracycline resistance was most frequent (30.5%), allowed by cotrimoxazol (17.9%) and ampicillin (20.0%). Cats with UTI showed greater resistance to ampicillin (46.7%), cephalothin (13.3%) and nalidixic acid (13.3%). Multidrug resistance was found in 8.4%, 17.9% and 33.3% of strains isolated from diarrheic healthy and with symptoms of UTI cats, respectively. The phenotype of resistance extended to beta-lactams (ESBL) was not... (Summary complete electronic access click below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-02-25Bitstream added on 2014-06-13T20:56:20Z : No. of bitstreams: 1 barbosa_mmc_me_jabo.pdf: 650496 bytes, checksum: d36cf123ceb16765bef9266b5c12dc6e (MD5) Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) Pesquisou-se a ocorrência de E. coli (EPEC, EIEC, EHEC) em água e peixe (pele, trato gastrintestinal e músculo) de pesque-pagues da microbacia do Córrego Rico, Jaboticabal, SP. A amostragem foi realizada entre os meses de abril e junho de 2008 em cinco pesque-pagues. Em cada um, foram colhidos dez exemplares de peixes adultos, e para análise foram colhidas amostras do músculo, do trato gastrintestinal e da superfície corpórea. As amostras de água foram colhidas em cinco pontos distintos de todos os pesque-pague. As colônias com características morfológicas relativas à E. coli isoladas do ágar MacConkey foram submetidas a confirmação bioquímica. Posteriormente, os isolados foram identificados sorologicamente como EPEC, EIEC e EHEC e realizado os testes de susceptibilidade a antimicrobianos e atividade hemolítica. Assim, foram isoladas 115 cepas de E. coli, entre as quais 81 (70%) foram sorogrupadas como EPEC, 5 (4%) como EHEC e 8 (7%) como EIEC. Os sorogrupos mais frenquentes foram O125 (13,9%), O126 (11,3%) e O158 (10,4%). Dentre as amostras testadas, 60 (52%) apresentaram resistência simultânea a dois antimicrobianos. A Análise de Correspondência foi realizada com intuito de verificar as possíveis correspondências envolvendo o local de isolamento, sorogrupos e multirresistência e com isso pode-se observar que o músculo foi o local de isolamento com menor correlação aos demais fatores. Enquanto água, trato e pele apresentaram maior correspondência entre si. Assim, a presença de um alto número de isolados EPEC nesse estudo indica contaminação por enteropatógenos possivelmente advindos de fezes de animais, humanas e/ou águas contaminadas, representando risco à saúde dos frequentadores destes pesque-pagues e consumidores do pescado. The occurrence of Escherichia coli (EPEC, EIEC, EHEC) in water and fish (skin, gastrointestinal tract and muscle) was surveyed in fee fishing from the stream Rico micro-basin, Jaboticabal, São Paulo/Brazil. Samples were collected between april and june 2008 in five fee fishing. In each fee fishing, ten copies were collected from adult fish and for analysis were sampled muscle, gastrointestinal tract and body surface. Water samples were collected from five different points of all fee fishing. Thus, we isolated colonies from the MacConkey agar with morphological characteristics related to E. coli for biochemical confirmation. Subsequently, the isolates were identified serologically as EPEC, EIEC and EHEC and performed tests of antimicrobial susceptibility and hemolytic activity. It was found that among 115 strains of E. coli isolated, 81 (70%) were serologically classified as EPEC, 5 (4%) as EHEC and 8 (7%) as EIEC. The most common serogroups were O125 (13.9%), O126 (11.3%) e O158 (10.4%). From the 115 bacterial isolates, 60 (52%) were resistant to two antimicrobials. The Correspondence Analysis was performed to verify possible matches involving the location of isolation, serogroup and antimicrobial resistance and that can be observed that the muscle had lower correlation to other factors. While water and tract and skin had correlation with each other. Probably, the isolation of EPEC serogroups in this study indicates contamination by pathogens coming from animals, human and/or contaminated water, constituting a potential risk to the consumer health of these fee fishing.

The current study evaluated the presence of virulence factors by a multiplex PCR technique and then phylogenetically classified the studied strains into groups A, B1, B2 and D, according to Clermont et al. (2000), in 152 intestinal and extraintestinal swine isolates of Escherichia coli. Seventy seven isolates tested were positive for virulence factors. Phylogenetic characterization placed 21 samples into group A, 65 into B1, 19 into B2 and 47 into D. Fourteen urine samples were classified as uropathogenic E. coli (UPEC), nine were both UPEC and enterotoxigenic E. coli (ETEC) and four were ETEC only. The most common phylogenetic classifications were B1 and D groups. Of the analyzed fecal samples, 25 were classified as ETEC. Phylogenetically, the group of higher occurrence was B1, followed by B2, A and D. For the small intestine samples, 20 were classified as ETEC. Phylogenetic analysis found groups B1 and A to be the most commons in these samples. Six isolated tissue samples were classified as ETEC and most of them were designated as group D by phylogenetic classification. The phylogenetic analysis could be employed in veterinary laboratories in the E. coli isolates screening, including the possibility of vaccine strain selection and epidemiological searches. O presente estudo teve por objetivo avaliar a presença de diferentes fatores de virulência em 152 isolados de Escherichia coli intestinais e extra-intestinais provenientes de suínos pela técnica de PCR multiplex e classificá-los nos grupos filogenéticos A, B1, B2 e D, de acordo com Clermont et al. (2000). Setenta e sete isolados foram positivos para pelo menos um fator de virulência. Através da caracterização filogenética, 21 isolados foram caracterizados como pertencentes ao grupo A, 65 ao grupo B1, 19 ao grupo B2 e 47 isolados ao grupo D. Quatorze isolados de urina foram caracterizados como E. coli uropatogênica (UPEC); nove apresentaram fatores de UPEC e E. coli enterotoxigênica (ETEC) simultaneamente e quatro foram classificados como ETEC. Na classificação filogenética, os isolados provenientes de amostras de urina classificaram-se principalmente nos grupos D e B1. Das amostras de fezes analisadas, 25 demonstraram fatores de virulência característicos do patotipo ETEC. Filogeneticamente, o grupo de maior ocorrência foi o B1 seguido de B2, A e D. Em relação às cepas isoladas de intestino delgado, 20 foram caracterizadas como ETEC. Pela filogenia, 23 isolados classificaram-se nos grupos A ou B1. Seis isolados de tecidos foram qualificados como ETEC e a maioria deles foram designados como pertencentes ao grupo D, pela classificação filogenética. A análise filogenética pode ser empregada em laboratórios de diagnóstico veterinário como um screening para isolados de E. coli, incluindo a possibilidade de seleção de cepas vacinais e levantamentos epidemiológicos.

Oito amostras de Escherichia coli isoladas de papagaios com colibacilose aviária foram sorogrupadas e investigadas para a presença dos fatores de virulência: pili associado a pielonefrite (pap), fímbria S (sfa), adesina afimbrial (afa), cápsula K1 (neu), curli (crl, csgA), hemaglutinina termosensível (tsh), enterotoxinas termo-lábil (LT) e termo-estável (STa e STb), Shiga-like toxinas (Stx1 e Stx2), Fator citotóxico necrotizante (cnf1), hemolisina (hly), aerobactina (iuc) e resistência sérica (iss). Os resultados mostraram que os isolados pertenciam a seis sorogrupos: O23; O54; O64; O76; O128 e O152. Os genes de virulência detectados foram: crl+ em todos os isolados; pap+; iss+ e iuc+ em três isolados, tsh+ em dois isolados. Todas as amostras foram negativas para os genes neu, csgA, sfa, afa, hly, cnf e para as toxinas LT, STa, STb, Stx1 e Stx2. Estes resultados sugerem que amostras de E. coli isoladas de papagaios apresentam alguns fatores de virulência das amostras do patotipo de E. coli patogênica para aves (APEC).

A total of eight Escherichia. coli isolates from psittacine birds were serogrouping and investigated for the virulence factors: pili associated with pyelonephritis (pap), S fimbriae (sfa), afimbrial adhesin (afa), capsule K1 (neu), curli fibers (crl, csgA), temperature-sensitive hemagglutinin (tsh), heat labile (LT) and heat stable (STa and STb) enterotoxins, Shiga-like toxins (Stx1 and Stx2), Cytotoxic necrotizing factor (cnf1), haemolysin (hly), aerobactin production (iuc) and serum resistance (iss). The results showed that the isolates belonged to six serogroups: O23; O54; O64; O76; O128 and O152. The found virulence genes were: crl+ in all isolates, pap+, iuc+ and iss+ in three isolates; tsh+ in two isolates. All strains were negative for genes neu, csgA, sfa, afa, hly, cnf and LT, STa, STb, Stx1, Stx2 toxins. Our findings suggested that some E. coli isolated from psittacine birds present some virulence factors of avian pathogenic E. coli (APEC) pathotype. Oito amostras de Escherichia coli isoladas de papagaios com colibacilose aviária foram sorogrupadas e investigadas para a presença dos fatores de virulência: pili associado a pielonefrite (pap), fímbria S (sfa), adesina afimbrial (afa), cápsula K1 (neu), curli (crl, csgA), hemaglutinina termosensível (tsh), enterotoxinas termo-lábil (LT) e termo-estável (STa e STb), Shiga-like toxinas (Stx1 e Stx2), Fator citotóxico necrotizante (cnf1), hemolisina (hly), aerobactina (iuc) e resistência sérica (iss). Os resultados mostraram que os isolados pertenciam a seis sorogrupos: O23; O54; O64; O76; O128 e O152. Os genes de virulência detectados foram: crl+ em todos os isolados; pap+; iss+ e iuc+ em três isolados, tsh+ em dois isolados. Todas as amostras foram negativas para os genes neu, csgA, sfa, afa, hly, cnf e para as toxinas LT, STa, STb, Stx1 e Stx2. Estes resultados sugerem que amostras de E. coli isoladas de papagaios apresentam alguns fatores de virulência das amostras do patotipo de E. coli patogênica para aves (APEC).

Avaliou-se a freqüência dos genes de fímbrias (K88, K99, 987P, F18 e F41) e toxinas (LT, Stb, StaP e Stx2e) de cepas de E. coli isoladas de leitões com diarréia usando a técnica de PCR multiplex com primers específicos para esses genes, e estudou-se o padrão de sensibilidade das cepas patogênicas pelo método de difusão em disco ao florfenicol, ceftiofur sódico, colistina, fosfomicina, neomicina, norfloxacina, sulfa + trimetoprim, doxiciclina, tetraciclina e lincomicina. Foram utilizadas 144 amostras de E.coli isoladas de leitões com diarréia, provenientes de granjas localizadas no estado de Minas Gerais. Dessas, 42 (29,2%) foram positivas para pelo menos um dos fatores de virulência testados. Dentre essas 42 amostras, 23 (54,8%) apresentaram genes de fímbria e toxina, sete (16,6%) apresentaram somente genes de toxinas e 12 (28,6%) amostras somente genes de fímbria. O resultado do teste de sensibilidade aos antimicrobianos demonstrou que o florfenicol (89,5 %) e o ceftiofur sódico (84,2%) foram as drogas de melhor eficácia in vitro sobre cepas de E. coli com fatores de virulência. The frequency of virulence determinants genes for fimbrial adhesions (K88, K99, 987P, F18 and F41) and toxins (LT, Stb, StaP and Stx2e) in E. coli strains isolated from diarrheic piglets using the multiplex polymerase chain reaction assay with specific primers for these genes was studied. The antimicrobial sensitivity pattern of pathogenic isolates for florfenicol, sodium ceftiofur, colistin, fosfomycin, neomycin, norfloxacin, sulfa + trimetoprim, doxycycline, tetracycline and lincomycin was also tested using the disk diffusion method. E. coli were isolated from 144 diarrheic piglets from farms in the state of Minas Gerais. Forty-two out of 144 studied samples (29.2%) were positive for at least one tested virulence factor. Out of these 42, 23 samples (54.8%) contained fimbria and toxin genes, seven (16.6%) samples had genes for toxins only and 12 (28.6%) samples just fimbria genes. Disk diffusion in vitro antimicrobial sensitivity test demonstrated the best results for florfenicol (89.5%) and sodium ceftiofur (84.2%) against virulent E. coli strains.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Programa de Pós-Graduação em Saúde Animal, 2013. A bactéria Escherichia coli é um microorganismo pertencente à microbiota normal de animais e humanos. Os patotipos de E.coli podem estar presentes no trato gastrintestinal dos animais carreando genes diarreiogênicos (enterotoxinas e adesinas), sem que estes estejam manifestando sinais de diarréia. A proximidade entre humanos e animais pode ser determinante para a transmissão inter-espécie de cepas que contêm genes envolvidos nos mecanismos de patogenicidade do agente. O presente trabalho teve como objetivo detectar os genes STa (toxina termoestável), K99 (F45), Intimina (eae), Stx1(Toxina Shiga, bem como realizar o antibiograma de 48 isolados obtidos de coletas de suabe retal de 50 cães, atendidos no Hospital Veterinário da Universidade de Brasília. Nas amostras testadas nenhum isolado foi positivo para STa e K99. Foram encontrados 21 isolados positivos para Stx1(43,75%) e 14 isolados positivos (29,2%) para gene de Intimina. O perfil de sensibilidade aos antimicrobianos também foi analisado para os seguintes fármacos: Sulfazotrim, Azitromicina, Enrofloxacina, Ceftiofur, Amoxicilina+Clavulanato, Doxiciclina, Ampicilina, Cefalexina. Os antibióticos que apresentaram maiores percentuais de resistências foram: Ampicilina (25%) Doxiciclina (22,9%) e Cefalexina (20,8%). Já aqueles que demonstraram maiores percentuais de sensibilidade foram Sulfazotrim (87,5%), Azitromicina (85,41%) e Enrofloxacina (77%). ______________________________________________________________________________ ABSTRACT The bacterium Escherichia coli is a microorganism inhabitant of the normal microbiota of animals and humans. Pathotypes of E.coli may be present in the gastrointestinal tract of animals hustling genes that cause diarrhea, (enterotoxins and adhesin)s, they are not manifesting signs of diarrhea. The proximity of humans and animals can be crucial to the inter-species transmission of strains that contain genes involved in the mechanisms of pathogenicity of the agent. The present study aimed to detect the genes STa (heat stable toxin), K99 (F45), Intimina (eae), Stx1(Shiga toxin 1) and perform susceptibility testing of 48 isolates from rectal swab samples from 50 dogs attended Veterinary Hospital at the University of Brasilia. In any isolated samples tested were positive for STa and K99. 21 positive isolates were found to Stx1(43.75%) and 14 positive isolates (29.2%) to intimin gene. The antimicrobial susceptibility profile was also analyzed for the following drugs: sulfazotrim, Azithromycin, Enrofloxacin, Ceftiofur, Amoxicilina + Clavulanate, Doxycycline, Ampicillin, Cephalexin. The antibiotics that showed higher percentages of resistance were: ampicillin (25%) Doxycycline (22.9%) and cephalexin (20.8%). Those who have already demonstrated higher sensitivity were sulfazotrim percentage (87.5%), Azithromycin (85.41%) and Enrofloxacin (77%).

FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais As infecções do trato urinário (ITU) são manifestações freqüentes na população, geralmente causadas por bacilos Gram-negativos. As β-lactamases são enzimas bacterianas que conferem resistência aos antimicrobianos do tipo β-lactâmicos (penicilinas, cefalosporinas, aztreonam e carbapenêmicos). A produção de β-lactamases de Espectro Estendido (ESBL) tem sido descrita como um importante mecanismo de resistência aos β-lactâmicos. De maneira geral, Escherichia coli e Klebsiella pneumoniae são as espécies bacterianas mais comumente encontradas produzindo ESBL, embora a detecção dessas enzimas já tenha sido observada em diversos gêneros dentro da família Enterobacteriaceae. O objetivo deste estudo foi avaliar os perfis de susceptibilidade a antimicrobianos e correlacionar os testes fenotípicos com a detecção de marcadores genéticos para produção de β-lactamases dos tipos ESBL, AmpC e KPC em enterobactérias associadas à etiologia de ITUs em pacientes atendidos em um Laboratório de Análises Clínicas da cidade de Juiz de Fora, MG. Para o estudo restrospectivo (20012008), 66.660 isolados de urina com suspeita de ITU foram analisadas, e após a identificação bioquímica, as linhagens de enterobactérias foram submetidas a testes de susceptibilidade aos antimicrobianos, pelo método de disco-difusão, de acordo com as normas do Clinical and Laboratory Standards Institute/CLSI. A detecção fenotípica da produção de ESBL foi feita através do teste de aproximação dos discos. Para o estudo prospectivo (2009), 12.304 amostras com suspeita de ITU foram avaliadas, e após a identificação bioquímica das linhagens, foram feitos os testes de susceptibilidade aos antimicrobianos e o teste de aproximação dos discos, para a detecção fenotípica da produção de ESBL. A identificação dos marcadores de β-lactamase (SHV, TEM, CTX-M, AMPc e KPC) foi feita por reação em cadeia da polimerase (PCR). De 416 linhagens produtoras de ESBL entre 2001- 2008, E. coli foi a mais freqüente (74,4%). Altos níveis de resistência foram obtidos para sulfazotrim, gentamicina e ciprofloxacina neste período. Todas as linhagens foram sensíveis ao imipenem. No estudo prospectivo, 105 linhagens produtoras de ESBL foram isoladas, sendo E. coli a mais freqüente (63%). Foi observado um alto índice de resistência a amoxacilina-clavulanato (80,8%), e aproximadamente 70% das amostras foram resistentes à associação trimetoprim/sulfametoxazol e as fluoroquionolonas (ciprofloxacina e ácido nalidíxico). Dentre as drogas utilizadas como substrato para detecção de ESBL, a cefotaxima foi o substrato com maior índice de resistência (86,6%), seguido de aztreonam (60,9%) e ceftazidima (55,2%). Entre as 105 linhagens recuperadas, todos os marcadores genéticos pesquisados para ESBL foram detectados. Considerando-se a freqüência de detecção dos marcadores genéticos, TEM foi o mais frequente (86,6%), seguido por SHV (59%), CTX-M (31,4%) e AMPc (27,6%). Em todas as linhagens bacterianas avaliadas, foi detectado pelo menos 1 dos marcadores genéticos associados à produção de β-lactamases (22,8%), 52,4% apresentaram 2 marcadores, 20% apresentaram 3 marcadores e 4,8% apresentaram 4 dos marcadores pesquisados. β-lactamases do tipo KPC não foram detectadas. O conhecimento da epidemiologia, dinâmica de disseminação e circulação destes marcadores genéticos de resistência a drogas constitui um dado clínico relevante, pois possibilita a instauração de uma terapia antimicrobiana mais adequada, bem como a construção de um banco de informações epidemiológicas, como ferramenta para contenção da expansão da disseminação dos genes de resistência aos antimicrobianos β-lactâmicos. The urinary tract infections (UTI) are highly frequent within the population and usually caused by Gram-negative rods. The bacterial β-lactamases are enzymes which confer resistance against β-lactam antibiotics (penicillins, cephalosporins, aztreonam and carbapenems) amongst which Extended Spectrum β-Lactamases (ESBL) has been described as an important resistance mechanism to the β-lactam in Gram-negative bacteria. Generally, Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae are the most frequent ESBL producing bacterial species, but its production by representatives of other bacterial genus within the Enterobacteriaceae family has already been documented. The aim of this study were to evaluate the antimicrobial susceptibility patterns and to correlate phenotypic tests with the detection of genetic markers for β-lactamases production such as ESBL, AmpC and KPC in enterobacteria associated to the UTI etiology in patients assisted at a Clinical Analyses Laboratory in Juiz de Fora, MG. From a retrospective study (2001-2008), 66.660 urine samples were analyzed, and the biochemically identified bacteria were submitted to antibiotic susceptibility testing by the disk-diffusion method, according to the Clinical Laboratory Standards Institute/CLSI guidelines. Further, phenotypic detection of the ESBL production was carried out through the disk approximation test. From a prospective study (2009), 12.304 samples were evaluated, and after the microbial identification, antibiotic susceptibility tests and disk approximation assays were performed, for ESBL phenotypic detection. Identification of β-lactamase genetic markers (SHV, TEM, CTX-M, AMPc and KPC) were performed through polymerase chain reaction (PCR). Out of 416 ESBL producing bacteria identified between 2001 and 2008, E. coli was the most frequent (74.4%). High resistance levels were obtained for trimethopim-sulfamethoxazole, gentamicin and ciprofloxacin in this period. All of the strains were sensitive to imipenem. Regarding the prospective study, 105 ESBL producing bacteria were isolated, being E. coli the most frequent (63%). A high resistance rate was observed against amoxacilin/clavulanic-acid (80.8%), and almost 70% of the samples were resistant to the association trimethopim-sulfamethoxazole and the fluoroquionolones (ciprofloxacin and nalidixic acid). Among the drugs for ESBL detection, the cefotaxime was the substrate with the highest resistance rate (86.6%), followed by aztreonam (60.9%) and ceftazidime (55.2%). Among these strains, all of the researched genetic markers for ESBL were detected. In regard to the frequency of detection of the genetic markers, TEM was the most frequent (86.6%), following by SHV (59%), CTX-M (31.4%) and AmpC (27.6%). In all of the bacterial strains it was detected at least 1 of the genetic markers associated to the production of β –lactamases. Two markers were detected in 52.4% and in 20% and 48%, at least 3 or 4 markers were detected, respectively. The KPC type β -lactamase was not detected. The knowledge about the epidemiology, spread dynamics and circulation of these resistance genetic markers to drugs among the different bacterial populations constitutes a relevant issue and makes possible the establishment of a more appropriated chemotherapy. Besides, the generation of basic epidemiological information may sustain for contention of the antimicrobial resistance and the spread of resistant genetic markers related to inactivation of β-lactam drugs.

A Escherichia coli (E. coli), que foi por muito tempo esquecida como potencial patógeno, começa a ser vista sob nova ótica devido aos prejuízos econômicos que gera. No Brasil, entre 2001 e 2005, somente a condenação de carcaças, gerou um prejuízo estimado em 58 milhões de dólares à avicultura (Brasil/Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento, 2006). Deste total, 19 milhões foram devido à presença de lesões cutâneas de celulite e 39 milhões ocorreram por lesões sistêmicas. Os avanços nas pesquisas e nas ferramentas utilizadas vêm resultando no maior entendimento dos mecanismos de patogenicidade das E. coli e cada vez mais é demonstrada a grande importância da interação dos diversos fatores de virulência na determinação da patogenicidade. Entretanto, a diferenciação de cepas virulentas e avirulentas continua sendo um problema no diagnóstico e, por conseqüência, na tomada de decisão pelos veterinários de campo. Nesta tese constam quatro Artigos científicos. O Artigo 1 trata dos fatores de virulência de 63 amostras de E. coli isoladas de frangos de corte com problemas respiratórios. Estas cepas foram examinadas para a presença de fatores de virulência, tendo sido analisadas as propriedades de resistência aos antimicrobianos, produção de hemolisinas, motilidade, capacidade de hemaglutinação, presença do operon pap, produção de colicinas e resistência sérica. A capacidade de hemaglutinar hemácias de cobaio foi verificada em 84,1% das amostras. Em 76,4% das amostras, foi detectada a presença o operon pap. A produção de colicinas foi observada em 87,3% e em 88,9% foi verificada a expressão da resistência sérica. No Artigo 2, 238 amostras de E. coli, isoladas de cama de aviário e lesões de celulite, foram testadas através da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), para detecção de sete genes de virulência responsáveis pela capacidade de adesão, fimbria P (papC) e fimbria F11 (felA), produção de colicinas (cvaC), presença de aerobactina (iutA), resistência sérica (iss), hemaglutinina temperatura sensível (tsh) e presença de dois antígenos capsulares K1 e K5 (kpsII). O gene cvaC foi detectado em 31,3% das amostras de celulite e em 11,5% das isoladas de fezes. Nos dados obtidos neste estudo 80,6% das amostras de celulite e 53,8% das de fezes apresentaram o gene iss. Para o kps a positividade foi evidenciada em 27% das cepas de celulite e em 7% das isoladas de fezes. O gene iutA, foi detectado em 51,3% das amostras de celulite e em apenas 19,2% nas isoladas de fezes. O gene papC ocorreu em 46,9% das amostras de celulite e em 30,8% das de fezes. Nas amostras de celulite estudadas, 3,8% apresentaram positividade para gene felA, enquanto nas amostras de fezes este percentual foi de 1,3%. O gene tsh foi detectado em 83% dos isolados de lesão em 14% nos de fezes%. Em seis genes, cvaC, iss, iutA, kpsII, papC e tsh foi detectada diferença estatística significativa entre os isolados de lesões de celulite e cama. No Artigo 3 um total de 61 amostras de E. coli, isoladas de frangos de corte com problemas respiratórios foram testadas através da PCR, para a presença dos genes responsáveis pela capacidade de adesão, fimbria P (papC) e fimbria F11 (felA), produção de colicinas (cvaC), presença de aerobactina (iutA), resistência sérica (iss), hemaglutinina temperatura sensível (tsh) e presença dos antígenos capsulares K1 e K5 (kpsII). O gene iss foi detectado em 73,8%, tsh em 55,7%, iutA em 45,9%, felA em 39,3%, papC em 24,3%, cvaC em 23% e kpsII em 18%. No Artigo 4 são apresentadas três redes neurais artificiais que foram desenvolvidas através da análise dos genes papC, felA, cvaC, iutA, iss, tsh e kpsII, da motilidade e do índice de patogenicidade (IP) para realizarmos a predição ou classificação de patogenicidade de cepas de E. coli sem a necessidade da utilização de animais. Na Rede 1, utilizando 11 categorias de IP obtivemos 54,27% de acerto. No intuito de melhorar o desempenho do modelo foi criada uma segunda rede, utilizando 3 categorias de IP obtendo-se a classificação correta em 80,55%. Na tentativa de melhorar ainda mais seu desempenho, passamos a trabalhar com apenas duas categorias construindo, desta forma, a Rede 3. Com esta nova configuração a classificação correta do IP foi de 83,96%. Escherichia coli (E. coli), which has been forgotten as a potential pathogen for a long time, is now being seriously considered due to the economical losses it generates. In Brazil from 2001 to 2005 the condemnation of carcasses represented a loss of about 58 million dollars to the poultry industry (Brasil/ Ministerio da Agricultura, Pecuária e Abastecimento, 2006). From this total 19 million dollars were due to skin lesions and 39 million dollars to systemic lesions. There have been improvements in the comprehension of the mechanisms of pathogenicity. However, the differentiation of virulent from non-virulent samples is still a problem for veterinarians to come to a diagnosis and, as a consequence, to make decisions. Article 1 is about factors of virulence in E. coli isolates from chicken flocks presenting respiratory problems. The samples from litter were probed for the presence of factors of virulence and antimicrobial resistance. The following properties were analyzed: hemolisin production, motility, operon pap presence, colicin production and serum resistance. The capacity of hemagglutination was verified in 84.1% of the samples. In 76.4% of the samples operon pap presence was detected. Colicin production was observed in 87.3% and in 88.9% serum resistance was verified. In article 2, 238 E. coli samples were probed by Polimerase Chain Reaction (PCR) for the presence of seven virulence genes responsible for adhesion capacity, P fimbriae (papC) and F11 fimbriae (felA), colicin production (cavC), aerobactin presence (iutA), serun resistence (iss) temperature-sensitive hemmaglutinin (tsh) and presence of K1 and K5 capsular antigens (kpsll). The CvaC gene was detected in 31.3% of the cellulitis samples and in 11.5% of feces samples. In the present study 80.6% of the cellulitis samples and 53.8% of feces samples presented the iss gen. The kps was positive in 27% of the cellulitis and in 7% of the feces samples. The papC gene occurred in 46.9% of cellulitis and in 30.8% in feces samples. In cellulitis samples 3.8% were positive for the felA gene whereas in feces samples were 1.3%. The tsh gene was positive in 83% of the isolates from lesions and in 14% of feces samples.For cmvaC, iss, iutA, kpsll ,papc and tsh genes significant statistical differences were detected for isolates from lesions and litter. In article 3 an amount of 61 Escherichia coli isolates from chicken flocks with respiratory problems were probed by the Polimerase chain Reaction PCR) for the presence of the genes which are responsible for the adhesion capacity, P fimbria (papC) and F11 fimbria (felA), colicin production (cvaC), aerobactin presence (iutA), serum resistance (iss), temperature-sensitive hemmaglutin (tsh) and presence of K1 and K5 capsular antigens (kpsII). The iss gene was detected in 73.8%, the tsh in 55.7%, the iutA in 45.9%, the felA in 39.3%, the papC in 24.3%, the cvaC in 23% and kpsII in 18%. Article 4 presents three neural nets of artificial intelligence which were developed through the analysis of papC, felA, cvaC, iutA, iss, tsh and kpsII genes, motility and pathogenicity index (PI) in order to establish predictions and classifications of the pathogenicty of E. coli litter without using animals. Net 1 obtained 54.27% of correctness using 11 categories of IP. In order to improve the performance of the model, a second net was created using 3 categories of IP the correct classification of 80.55%. Trying to get an even better performance, we worked with only two categories, building this way the third net. With this new configuration the correct classification was 83.96%.

Os coliformes fecais cujo principal representante é a Escherichia coli fazem parte da microbiota intestinal do homem e outros animais de sangue quente, estes microrganismos têm sido extensivamente utilizados no monitoramento da qualidade de águas e quando detectados em corpos d´água indicam a possível presença de contaminação fecal recente, e consequentemente, a presença de patógenos entéricos. Além das linhagens comensais, várias grupos patogênicos distintos de E. coli diarreiogênicas são reconhecidos: E. coli enteropatogênica (EPEC), E. coli enterotoxigênica (ETEC), E. coli enterohemorrágica ou Produtora de Toxina Shiga (EHEC/STEC), E. coli enteroinvasora (EIEC), E. coli enteroagregativa (EAEC), E. coli difusamente aderente (DAEC). As linhagens patogênicas de E. coli causadoras de infecções intestinais possuem numerosos fatores de virulência localizados em cromossomos, plasmídios ou DNAs de bacteriófagos. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi determinar a freqüência de ocorrência e os fatores de virulência de amostras de Escherichia coli isoladas em lagoas do Parque Estadual do Rio Doce - MG (PERD - MG). As coletas foram realizadas mensalmente entre Maio de 2004 e Fevereiro de 2005 nas lagoas Carioca, Jacaré, Gambazinho e Dom Helvécio. Utilizando a Técnica de Tubos Múltiplos verificou-se que as lagoas amostradas apresentaram baixas contagens para coliformes fecais na maioria das amostras analisadas. A densidade de coliformes fecais variou significativamente (E. coli F= 2,11; p = 0,035) apenas em relação aos meses de coleta. Um total de 456 (89,94%) das linhagens ambientais isoladas foram positivas em relação às provas bioquímicas específicas para a identificação da espécie Escherichia coli. A técnica de PCR foi utilizada para detecção dos genes de virulência stx1 e stx2 de EHEC, eae de EPEC e eltI de ETEC. O gene stx2 foi detectado em cinco linhagens de E. coli ambas isoladas das lagoas Carioca e Jacaré. Nenhum dos 80 isolados de E. coli investigados apresentou o fragmento de DNA correspondente ao gene stx1. Para o gene eae e elt I, apenas os isolados E. coli 373 (C LT) e E. coli 58 (C LT) respectivamente, amplificaram o fragmento de gene de interesse. Pela técnica de aglutinação em lâmina 61,3% dos isolados de E. coli aglutinaram na presença de soro específico para EPEC clássica, 18,2% das linhagens aglutinaram para o sorotipo O157: H7 x de EHEC e 20,5% aglutinaram na presença do soro específico de EIEC. Na caracterização fenotípica do sorotipo O157: H7, cinco isolados de E. coli ambientais não fermentaram o sorbitol e apenas dois não fermentaram a ramnose. Altas frequências de linhagens de E. coli resistentes à ampicilina (20%), cefalotina (50%) e cefuroxima (14%) foram verificadas, para os demais antibióticos testados a resistência quando verificada ocorreu em menos de 10% dos isolados. Todos os lagos amostrados apresentaram níveis de coliformes fecais abaixo dos valores permitidos pela resolução do CONAMA, para balneabilidade. Por outro lado, a presença de genes de virulência nas linhagens de E. coli analisadas sugere que existe a probabilidade dos banhistas adquirirem doença gastrointestinal transmitida pelas águas dos lagos investigados. A Técnica de Aglutinação em Lâmina, específica para determinados sorogrupos nem sempre correlaciona com a patogenicidade da linhagem e a discriminação de subgrupos de EPEC, ETEC, EHEC e EIEC requer a utilização de técnicas moleculares baseadas em genes de virulência. Alta incidência de isolados de E. coli multi-resistentes a antibióticos indicam a possível disseminação de linhagens resistentes pelos banhistas e animais, e também um risco para saúde dos mesmos. Os dados obtidos no presente estudo podem contribuir para manter o equilíbrio dos ecossistemas estudados e ampliar o estudo da ecologia da espécie E. coli considerando o isolamento dos subtipos no meio ambiente. ____________________________________________________________________________________________________ ABSTRACT: The fecal coliforms whose main representative is the Escherichia coli belong to the intestinal flora of humans and other warm-blooded animals, these microorganisms have been extensively used at water quality control and when found at water are an indicator of recent contamination by feces, and as consequence, enteric pathogenic microorganisms are made present. Beyond the commensal strains, there are various distinct types of diarrhoeagenic E. coli are acknowledged: enteropathogenic E. coli (EPEC), enterotoxigenic E. coli (ETEC), enterohaemorragic E. coli or shiga toxine producer (EHEC/STEC), enteroinvasive E. coli (EIEC), enteroaggregative E. coli (EAggEC), diffusely adherent E. coli (DAEC). The pathogenic strains of E. coli that are intestine infectious host numerous factors of virulence located at chromossome, plasmidis or DNA phages. Thus, the objective of the research was to determine the frequency of ocurrence and the virulence of E. coli samples isolated at lakes inside the "Parque Estadual do Rio Doce-M.G." (PERD - MG). The sample collection happened in a monthly basis between May, 2004 and February, 2005 at Carioca, Jacaré, Gambazinho and Dom Helvécio lakes. By using the Multiple Tube Technique, it was verified that the researched lakes with samples inside had low rate of fecal coliform at the broad majority of the analysed samples. The fecal coliform density varied meaningfully (E. coli F=2,11 ; p = 0,35) but only in relation to the sample gathering months. The final results were of 458 (91%) of the environment strains of Escherichia coli isolated at the sampled lakes showed positive results regarding the specific biochemical tests for recognition of the E. coli species. The PCR technique was used for detection of the virulence genes stx1 and stx2 of EHEC, eae of EPEC and eltI of ETEC. The stx2 gene was detected within five E. coli strains, when isolated at the Carioca and Jacare lakes. None of the 80 isolated E. coli examinated showed the DNA segment corresponding to the stx1 gene, for the eae and elt I gene, only the isolated E. coli 373 (C LT) and E. coli 58 (C LT), respectively amplified the segment of the relevant gene. By using the agglutination technique at a sample 61,3% of the isolated E. coli agglutinated within the presence of a classic EPEC specific serum, 18.2% of the strains agglutinated to the serum type O157:H7 of EHEC and 20,5% were agglutinated at the presence of xii the EIEC specific serum. The characterization of the serym type O157: H7, five environments E. coli isolated did not ferment the sorbitol and only two did not ferment the rhamnose. High frequencies of E. coli strains which were resistant to ampiciline (20%), cefalotine (50%) and cefuroxime (14%) were verified, to the other antibiotics tested, the resistance when verified occurred in less than 10% of the isolated. All the sampled lakes showed fecal coliform levels much below than the allowed values by the CONAMA, as it refers to the batheability. In another side, the presence of virulence genes at the E. coli strains analysed sugests that there is a possibility to that the bather acquires gastrointestinal disease transmitted by the waters of the researched lakes. The Agglutination Technique, specificly meant for some determined types of serum is not always relationed to the pathogenicity of the strains and discrimination of sub-groups of EPEC, ETEC, EHEC and EIEC, requires the use of molecular techniques based in virulence genes. High frequency of antibiotic multi-resistant isolated E. coli will indicate possible spread of resistant strains by the bather and animals, there is also a risk for their health. The obtained data at this research can contribute to the keep of the ballance at the researched ecosystems and to amplify the research of the ecology of the E. coli Species considerating the isolation of the subtypes at the environment.

Urinary tract infection (UTI) is one of the causes that often leads men and women to seek treatment at health units. This study aimed to evaluate the profile of antimicrobial resistance of Enterobacteriaceae isolated from urine cultures collected in a private laboratory in Sao Luis, MA, from 2005 to 2008. A retrospective and descriptive study was conducted with information collected from study forms with the results from 1,000 urine cultures performed during the study period. Seven hundred and forty eight cultures were positive for Enterobacteriaceae species, where Escherichia coli and Klebsiella spp were predominant, with 73.4% and 26.6% frequency, respectively. Most positive cases were from females (68.9%) and the age group of 20 to 29 years was the most affected (54.5%) for both pathogens. As to sensitivity / resistance to antimicrobials, E.coli and Klebsiella spp showed high resistance index (75.6%) to amoxicillin / clavulanic acid, and nalidixic acid (82.5%), suggesting that their use should be avoided in the treatment of urinary tract infections.

The city of Sao Luis, capital of Maranhao state (Brazil), provides ineffective treatment of its effluents, which are released straight into the water resources. In order to search for indicators of fecal contamination at the coastal environment we collected samples from different sites. Samples from Ponta d’Areia, Sao Marcos, Calhau and Olho d’Agua beaches were analyzed aiming to detect pathogens and diarrheagenic strains of Escherichia coli; in addition to test the susceptibility of diarrheagenic E. coli strains to sanitizer agents. In all analyzed areas, species of E. coli, Serratia liquefaciens, Hafnia alvei, Salmonella spp., and Serratia sp were identified. Strains of diarrheagenic E. coli were identified thorough the Polymerase Chain Reaction (PCR), 82% corresponded to enterotoxigenic E. coli (ETEC), 9% to enterohaemorrhagic E. coli (EHEC) and 9% to enteroaggregative E. coli (EAEC). The sanitizers tested were detergent, domestic alcohol and sodium hypochlorite, the latter presented higher bactericidal effect for all E. coli strains. The study showed that the local sanitation problems contributed to the contamination of the beaches in Sao Luis by microorganisms resistant to sanitizers which pose risks to public health.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-06-18Bitstream added on 2014-06-13T19:35:18Z : No. of bitstreams: 1 casella_t_me_sjrp.pdf: 770175 bytes, checksum: f7648712bfc8fa3decfd5d296852e540 (MD5) A ampla utilização de drogas antimicrobianas tem resultado em aumento e disseminação da resistência aos antimicrobianos entre bactérias patogênicas para o homem. Além do uso indiscriminado em humanos, estas drogas também são extensivamente utilizadas em medicina veterinária e no manejo de animais para a produção de alimentos, o que é reconhecido como um fator associado ao desenvolvimento da resistência em bactérias patogênicas ou comensais de animais. Evidências microbiológicas e clínicas reforçam a associação entre o uso de antimicrobianos na produção animal e o aumento da prevalência de bactérias resistentes na população humana. Sendo assim, a regulamentação da utilização de antimicrobianos no manejo de animais de produção e na terapêutica veterinária é de grande interesse para o Brasil, pois envolve além de importantes aspectos de saúde pública, questões comerciais, pois o país é um dos maiores exportadores de carnes do mundo. Neste estudo, foram analisadas amostras de carnes bovina, suína e de frango, visando à detecção de Salmonella e Escherichia coli produtoras de β-lactamases de espectro estendido (ESBLs). Os isolados bacterianos, obtidos de novembro de 2010 a agosto de 2011, foram submetidos ao teste de suscetibilidade aos antimicrobianos, e 34 cepas foram submetidas à PCR para detecção dos genes blaCTX-M, blaGES, blaSHV e blaTEM. A presença de genes de ESBLs foi confirmada em seis isolados, sendo blaCTX-M-2 detectado em uma cepa de Proteus mirabilis, uma Klebsiella pneumoniae, uma Citrobacter diversus e duas E. coli. O gene blaSHV-2 foi detectado em uma cepa de K. pneumoniae. A caracterização do ambiente genético de blaCTX-M-2 indicou a presença de integrons de classe 1 em todas as cepas, exceto C. diversus. Todos os blaCTX-M-2 foram detectados em cepas... The wide use of antimicrobial drug has resulted in increase and spread of antimicrobial resistance among pathogenic bacteria for humans. In addition, these drugs are extensively used in veterinary and agriculture for food production, which is recognized as a factor associated with the development of resistance in pathogenic or commensal bacteria of animals. Microbiological and clinical evidence strengthen the association between use of antimicrobials in animal production and the increasing prevalence of resistant bacteria in the human population. Thus, regulation of the use of antimicrobials in the management of livestock and veterinary therapy has great interest for Brazil, because it involves, in addition to important public health issues, trade issues, as the country is one of the largest exporters of beef in the world. In this study, we analyzed samples of beef, pork and chicken meat, focusing on the detection of extended-spectrum β-lactamase (ESBLs)-producing Salmonella and Escherichia coli. The bacterial isolates, obtained from November, 2010, to August, 2011, were tested for antimicrobial susceptibility, and 34 strains were tested by PCR for detection of blaCTX-M, blaGES, blaSHV and blaTEM genes. The presence of ESBLs genes was confirmed in six isolates, being blaCTX-M-2 detected in a strain of Proteus mirabilis, one Klebsiella pneumoniae, one Citrobacter diversus and two E. coli. The blaSHV-2 gene was detected in a K. pneumoniae strain. The characterization of the genetic environment of blaCTX-M-2 indicated the presence of a class 1 integron in all strains, except C. diversus. All blaCTX-M-2 were detected in strains isolated from pork samples. The presence of other multidrug-resistant Enterobacteriaceae carrying... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:54Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-01-31Bitstream added on 2014-06-13T19:22:44Z : No. of bitstreams: 1 maluta_rp_dr_jabo.pdf: 440520 bytes, checksum: 3c6ccf7fa3a09af508156250e6a377c0 (MD5) Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) Canadian Bureau For International Education (Cbie) Os ruminantes são reservatórios de cepas de Escherichia coli envolvidas na etiologia de doenças graves em humanos. Nesse estudo, a freqüência de E. coli Shigatoxigênica (STEC), E. coli enteropatogênica (EPEC) e E. coli enterotoxigênica (ETEC) foi determinada em fezes e carcaças de ovinos em três fazendas e um matadouro-frigorífico localizados no Estado de São Paulo e as cepas encontradas foram caracterizadas. A freqüência de STEC nas três fazendas foi similar, enquanto a freqüência de EPEC foi variável. Não foram encontradas amostras contendo ETEC. As cepas de STEC stx1- stx2+ revelaram-se geneticamente heterogêneos, possuindo freqüentemente as variantes Stx2a ou Stx2dact, as quais são relacionadas à doenças mais severas em humanos e ademais eles foram freqüentemente originados de amostras colhidas do matadouro-frigorífico. Adicionalmente, algumas cepas desse grupo possuíram novas variantes de Stx2 ou o subtipo Stx2e, que é relacionado à doença do edema em suínos. As cepas de STEC stx1+ stx2+ e stx1+ stx2- mostraram-se geneticamente mais homogêneas, a maioria possuindo os genes lpfAO113, iha e ehxA. As cepas de STEC stx1+ stx2- apresentaram comumente o gene relacionado à ExPEC tsh. As estirpes de EPEC foram heterogêneas, muitas possuíram os genes efa1, ehxA, lpfAO113 ou paa, que são associados à diarréia em humanos. As cepas de STEC e EPEC demonstraram-se geneticamente diversas quando analisadas por PFGE. Esses resultados demonstram que cepas de E. coli potencialmente patogênica para humanos estão presentes na microbiota intestinal de ovinos, com potencial de contaminar carcaças em abatedouro e conseqüentemente serem transmitidas por via alimentar Ruminants are a reservoir of Escherichia coli which may cause severe disease in humans. Pathotypes related to intestinal disease include Shiga toxin-producing E. coli (STEC), enteropathogenic E. coli (EPEC) and enterotoxigenic E. coli (ETEC). In this study, the prevalence of these pathotypes was examined in sheep feces and carcasses on three farms and at an abattoir. The strains were then characterized. The prevalence of STEC on the three farms was similar, whereas that of EPEC varied between farms. No ETEC were detected. STEC stx1- stx2+ strains were genetically heterogeneous, more frequently possessing Stx2 variant Stx2a or Stx2dact related to more severe disease in humans, and often originated from the abattoir rather than the farms. In addition, some strains of this group possessed new Stx2 variants or Stx2e, the subtype related to porcine edema disease. STEC stx1+ stx2+ and stx1+ stx2- strains were genetically more homogeneous, mostly possessed the genes lpfAO113, iha and ehxA. The STEC strains stx1+ stx2- commonly harbored ExPEC-related gene tsh. The EPEC strains were heterogeneous, several possessing efa1, ehxA, lpfAO113 or paa, genes associated with diarrhea in humans. STEC and EPEC strains were genotypically diverse by PFGE. These results demonstrate that E. coli potentially pathogenic for humans are present in the sheep intestinal microflora, particularly at the abattoir, underlining the potential for foodborne transmission

Mestrado em Engenharia Alimentar - Qualidade e Segurança Alimentar - Instituto Superior de Agronomia The bacteria Escherichia coli diarrheagenic (DEC) are an important cause of gastrointestinal diseases. The DEC are classified into: enteropathogenic, enterohaemorrhagic, enterotoxigenic, enteroaggregative, enteroinvasive and diffusely adherent, due to the presence of certain virulence factors. The toxins LT, ST, EAST1 and VT are encoded by the genes lt, st, astA and stx, respectively. The intimin, encoded by the gene eae, causes the A/E lesions (attaching and effacing), which favors the adherence of bacteria to the intestine, being also an important factor of pathogenicity. This study was aimed to evaluate the virulence of 36 isolates of E. coli from ready-to-eat (RTE) food, by investigating the presence of the stx, lt, st, astA and eae genes (Multiplex PCR) and by measuring the activity of the enzyme lactate dehydrogenase (LDH) from Vero cells and microscopic observation (phase contrast and DAPI) of these cells, exposed to bacterial toxins. Five isolates showed the stx gene, one of which also amplified the eae, four isolates, the lt gene and three, the st. Cytotoxicity tests and microscopic analysis of exposed Vero cells validate the results obtained by multiplex PCR, being that the isolates stx+ induced higher release (p ≤ 0.05) of LDH (19.9 a 32%) than the isolates stx- (4.6 a 9.1%), having the first ones caused extensive cytopathic effects.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:52Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-01-29Bitstream added on 2014-06-13T20:44:10Z : No. of bitstreams: 1 pigatto_cp_dr_jabo.pdf: 841661 bytes, checksum: 288fcbc74e176eac0befc1827d1bc15e (MD5) Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) Escherichia coli produtoras de toxina Shiga (STEC) são reconhecidas como agentes causadores de infecções em humanos em todo o mundo. O principal reservatório é o bovino. Neste trabalho, cepas de STEC previamente isoladas de fezes bovinas foram caracterizadas usando PCR multiplex para determinar os genes de virulência (stx1, stx2, ehxA, eaeA e saa), soroaglutinação passiva reversa em látex (RPLA-VTEC screen) para avaliar a expressão da toxina Shiga, PCR-RFLP e sequenciamento para obter os subtipos e a variabilidade dos genes stx2, respectivamente. Foram determinados também os sorotipos, o perfil de sensibilidade e a viabilidade das cepas de STEC em queijo minas frescal. A freqüência de STEC nas amostras de fezes bovinas foi de 37%. Foram encontrados trinta e quatro sorotipos de STEC sendo os mais freqüentes o ONT:H7 (10%), O22:H8, O22:H16 e ONT:H21 (7% cada). Onze sorotipos encontrados não tinham sido associados com STEC até o momento. A maioria das STEC (96%) foi susceptível a todos os antimicrobianos testados. A produção de toxina Shiga determinada pelo ensaio RPLA foi de 89%. Os marcadores de virulência foram encontrados em 11 diferentes combinações, a mais freqüente foi stx2 (27%), stx1 stx2 e stx1 stx2 ehxA saa (16% cada). Foram detectados 8 subtipos de stx2: stx2OX3a/O111; stx2; stx2c; stx2(vha); stx2(vhb); stx2OX3b; stx2vnb/vhc e stx2O48. Os genes que apresentaram maior freqüência foram: stx2 e stx2c. As seqüências parciais obtidas sugerem a presença de elevada variabilidade nos genes do tipo stx2 nas STEC analisadas. A viabilidade de STEC não-O157 em queijo minas revelou que diferentes cepas de STEC podem ser detectadas nos queijos após 10 dias de armazenamento sob refrigeração. Os dados encontrados neste trabalho sugerem isolados com alto potencial de patogenicidade oferecendo risco de desencadear graves infecções à população. Shiga toxin-producing Escherichia coli (STEC) is recognize worldwide as an organism capable to cause human diseases. Cattle are the main source of STEC. In this research, STEC strains previously isolated were analyzed using multiplex-PCR for virulence genes, the RPLA assay to detect the Shiga toxin production and serotyping. PCR-RFLP and nucleotide sequence were analyzed to detect stx2 genes subtypes and their variability. Moreover tests for antimicrobial susceptibility and the vialbility of STEC in Minas Frescal cheese were done. The frequency of cattle shedding STEC was 37%. Thirty-four serotypes of STEC were found, the most frequent being ONT:H7 (10%), O22:H8, O22:H16 and ONT:H21 (7% each). Eleven serotypes had not been associate with STEC until the moment. Most of the strains (96%) were susceptible to all antimicrobial agents tested. Production of Shiga toxin by the RPLA assay was detected in most (89%) of the STEC strains. The frequency of virulence markers were found in 11 diferent combinations: stx2 (27%), stx1 stx2 e stx1 stx2 ehxA saa (16% each). Eigth stx2 subtypes were detect (stx2OX3a/O111; stx2; stx2c; stx2(vha); stx2(vhb); stx2OX3b; stx2vnb/vhc; stx2O48) and the most frequent were: stx2; stx2c. The partial sequences of stx2 genes suggested a high variability of stx2 types in the STEC analyzed. The STEC viability in cheese could be detected after 10 days of storage under refrigeration. The results found in this work suggest strains with high potential of pathogenicity offering risk to lead serious infections to the population.

Esta atualização sobre diarreia em bezerros tem como objetivo abordar sobre os principais agentes bacterianos causadores de diarreia (Escherichia coli e Salmonella spp.), sua fisiopatogenia, tratamento e prevenção. Além disso, aborda o uso de antimicrobianos na Médicina Veterinária, caracteristicas de classes dos antimicrobianos e seus mecanismos de resistência. This update on diarrhea in calves aims to approach on the main bacterial causes of diarrhea (Escherichia coli e Salmonella spp.), their pathogenesis, treatment and prevention. Approaching use for antimicrobials in Veterinary medicine, the characteristics of classes of antimicrobials and their macanisms of resistence.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico This study evaluated the antimicrobial activity of the essential oils of Origanum vulgare (oregano), Thymus vulgaris (thyme), Cinnamomum zeylanicum (cinnamon), Lippia graveolens (Mexican oregano), Zingiber officinale (ginger), Salvia officinalis (sage), Rosmarinus officinalis (rosemary) and Ocimum basilicum (basil) against Escherichia coli 31 strains isolated from swine, 43 strains from poultry and 36 strains from cattle. The minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (MBC) were determined for each isolate using the broth microdilution technique. Antimicrobial activity was observed with the maximum concentration tested (6400 μg/ml) or less for the essential oils of oregano, Mexican oregano, thyme and cinnamon; the oregano essential oil had the most potent activity against the evaluated microorganisms, whereas cinnamon essential oil had the lowest activity. Avaliou-se a atividade antibacteriana dos óleos essenciais (OES) de Origanum vulgare (orégano), Thymus vulgaris (tomilho), Cinnamomum zeylanicum (canela), Lippia graveolens (orégano mexicano), Zingiber officinale (gengibre), Salvia officinalis (sálvia), Rosmarinus officinalis (alecrim) e Ocimum basilicum (manjericão) frente a Escherichia coli sendo 31 isolados de suínos, 43 isolados de aves e 36 isolados de bovinos. A concentração inibitória mínima (CIM) e a concentração bactericida mínima (CBM) foram determinadas através da técnica de microdiluição em caldo. Observou-se atividade antimicrobiana inferior ou igual à máxima concentração testada (6400μg/ml) para os óleos essenciais de orégano, orégano mexicano, tomilho, canela. Observou-se que o óleo essencial de orégano foi o que possuiu maior atividade sobre os microrganismos testados. O óleo essencial de canela apresentou menor atividade em relação aos demais óleos essenciais.

A colibacilose é uma enfermidade causada pela bactéria Escherichia coli. Algumas cepas podem ser potencialmente patogênicas, favorecendo doenças localizadas e/ou sistêmicas, acarretando consideráveis prejuízos econômicos para avicultura brasileira. Com o objetivo de determinar a resistência frente a antimicrobianos por (E. coli) foram analisadas 115 amostras isoladas de aves de produção, provenientes de três diferentes origens: cama de aviários (34 amostras), lesões de celulite (48 amostras) e lesões de aves com sintomatologia respiratória (33 amostras). Os padrões dos antibiogramas realizados seguiram as normativas disponíveis no National Commitee of Laboratory Standards (NCCLS, 2003). Entre os isolados de aves com sintomatologia respiratória, não foi observado resistência aos antimicrobianos: amoxicilina/ácido clavulâmico; cefuroxima, ceftiofur e amicacina, ou seja, três β- lactâmicos e ao aminoglicosídeo testado. Na análise estatística constatou-se diferença significativa entre as amostras de E.coli. de cama, celulite e aves com sintomatologia respiratórias, para as drogas norfloxacina e ciprofloxacina. As análises não apresentaram diferenças significativas para as demais drogas testadas. Os testes não apresentaram diferenças significativas entre as resistências e cada origem, nos seguintes casos: ampicilina, enrofloxacina, ciprofloxacina, ofloxacina, sulfametoxazole/trimetoprim e tetraciclina. Contudo, houve significância para os antimicrobianos: norfloxacina e ciprofloxacina. Os percentuais de resistência para os antimicrobianos avaliados foram: ampicilina (35,7%); amoxicilina/ácido clavulânico (0,9%); cefalexina (8,7%); cefuroxime (2,6%); ceftiofur (4,3%); clindamicina (98,3%); enrofloxacina (18,3%); ciprofloxacina (22,6%); norfloxacina (20%); ofloxacina (18,3%); sulfametoxazol/trimetoprim (47,8%); amicacina (3,5%); gentamicina (25,2%); tetraciclina (59,1%). A múltipla resistência para dois, ou mais agentes antimicrobianos, em cama, celulite e para amostras de sintomatologia respiratória, foi de (35,2%), (31,2%) e (66,6%), respectivamente. Não houve diferença significativa nas proporções de resistência entre as origens e as estações do ano. Colibacilosis is a disease caused by the bacterium Escherichia coli. Some strains can be potentially pathogenic, favoring illnesses located and/or systemic, causing considerable economic damages for Brazilian poultry production. With the objective to determine the resistance front the antimicrobials for (E. coli) had been analyzed 115 isolated samples of poultry production, proceeding from three different origins: litter of poultry houses (34 samples), injuries of celulitis (48 samples) and injuries of poultry with respiratory signals (33 samples). The standards of the carried through antibiograms had followed normative available in the National Commitee of Laboratory Standards (NCCLS, 2003). It enters the isolated ones of birds with respiratory signals, was not observed resistance to antimicrobials: amoxicillin/ clavuanic acid; cefuroxime, ceftiofur and amikacyn, that is, three β- lactams and to the tested aminoglycosides. In the analysis statistics significant difference was evidenced enters the respiratory samples of E.coli of litter, celulitis and poultry with signals, for the drugs norfloxacin and ciprofloxacin. The analyses had not represented significant differences for the too much tested drugs. The tests had not presented significant differences between the resistances and each origin, in the following cases: ampicilin, enrofloxacin, ciprofloxacin, ofloxacin, sulfamethoxazole/trimethoprim and tetracyclin. However, it had significance for antimicrobials: norfloxacin and ciprofloxacin. The percentages of resistance for evaluated antimicrobials had been: ampicilin (35.7%); amoxicillin/ clavulanic acid (0.9%); cefalexin (8.7%); cefuroxime (2.6%); ceftiofur (4.3%); clindamycin (98.3%); enrofloxacin (18.3%); ciprofloxacin (22.6%); norfloxacin (20%); ofloxacin (18.3%); sulfamethoxazole/trimethoprim (47.8%); amikacyna (3.5%); gentamycin (25.2%); tetracyclin (59.1%). The multiple resistance for two or more agents antimicrobials, in litter, celulitis and for samples of respiratory signals, was of (35,2%), (31,2%) e (66,6%), respectively. It did not have significant difference in the ratios of resistance between the origins and the stations of the year.

O óleo essencial obtido das folhas do Eucalyptus sp. foi avaliado quanto à atividade inibitória frente a diferentes cepas de Escherichia coli e Staphylococcus aureus, bem como verificado o possível efeito sinérgico da associação entre o óleo essencial e antibióticos. Para a avaliação qualitativa e quantitativa da atividade antibacteriana de óleos essenciais e antibióticos comerciais foram aplicados os métodos de difusão de disco e diluição em caldo, respectivamente. Os resultados obtidos evidenciaram que o óleo essencial de Eucalyptus sp. apresentou maior potencial inibitório frente à cepa de S. aureus isolada de sururu (Mytella falcata). Não se verificou efeito sinérgico da associação dos antibióticos com o óleo essencial de Eucalyptus sp. sobre bactérias multirresistentes. O óleo essencial das folhas do Eucalyptus sp. apresentou potencial bacteriostático, podendo representar alternativa para a terapia à base de produtos naturais. Contudo, estudos mais detalhados sobre a toxicidade do eucalipto devem ser realizados.

Os fatores de virulência e a resistência aos antimicrobianos foram avaliados em Escherichia coli. Um total de 80 isolados de E. coli, sendo 64 de amostras clínicas (conteúdo intestinal e fragmentos de órgãos de leitões diarreicos), sete das fezes de porcas e leitões saudáveis e nove de amostras ambientais (cinco de instalações, dois de alimentos, um de inseto e um de esterqueira). A caracterização molecular feita pela PCR objetivou detectar fimbrias e toxinas, bem como a determinação do conteúdo de plasmídeos. Os isolados foram caracterizados quanto à resistência ou sensibilidade às seguintes drogas: ampicilina, sulfazotrim, tetraciclina, amikacina, colistina, norfloxacina, florfenicol, enrofloxacina, cefalexina, trimetoprim, neomicina, cloranfenicol e gentamicina. Dos 80 isolados, 53,8% foram classificados como E. coli enterotoxigênica (ETEC), 2,5% como E. coli produtora de shiga toxina (STEC) e 43,8%, por não apresentarem padrão específico, não foram classificadas. Pela PCR, um isolado de fezes de suíno sem diarreia foi classificado como ETEC. Os isolados das amostras clínicas foram principalmente resistentes à tetraciclina e à sulfazotrim. Em 70 isolados, observaram-se DNA plasmidial, destes 78,5% foram obtidos de amostras clínicas, 8,57% de leitões sadios e 12,8% de amostras ambientais. Virulence factors and antimicrobial resistance patterns of Escherichia coli isolates were evaluated. A total of 80 E. coli isolates were evaluated, being 64 from clinical samples (intestinal content and fragments of organs from diarrheic piglets), seven from feces of clinically healthy piglets and sows, and nine environmental samples (five from facilities, two from feed, one from insect, and one from waste). Molecular characterization was performed by PCR detection of fimbriae and toxin genes and plasmid content determination. The isolates were also characterized according to their resistance or sensitivity to the following drugs: ampicillin, trimethoprim:sulfamethoxazole, tetracycline, amikacine, colistin, norfloxacin, florfenicol, enrofloxacin, cefalexin, trimethoprim, neomycin, chloramphenicol, and gentamicin. From 80 E. coli isolates, 53.8% were classified as enterotoxigenic E. coli (ETEC), 2.5% were shiga toxin-producing E. coli (STEC), and 43.8% showed a non specific pattern and were unclassified. One fecal isolate from non-diarrheic piglet was classified as ETEC by PCR. Clinical isolates showed resistance mainly for tetracycline and trimethoprim:sulfamethoxazole. Plasmidial DNA was observed in 70 isolates, being 78.5% of clinical isolates, 8.57% of non-diarrheic feces, and 12.8% of environment.

Amostras uropatogênicas de Escherichia coli isoladas de indivíduos moradores de localidades distintas na Cidade do Rio de Janeiro, foram caracterizadas quanto o sorotipo, propriedades hemolíticas e hemaglutinantes, susceptibilidade a antimicrobianos e perfil isoenzimático. O método molecular empregado associado com a investigação de marcadores de urovirulência, permitiu detectar uma grande diversidade entre os isolados. Entretanto, foi observada uma relação mais estreita entre amostras de Escherichia coli epidemiologicamente relacionadas. Uropathogenic Escherichia coli strains isolated from individuals living in different areas of the city of Rio de Janeiro were characterized according to serotype, hemolytic properties, hemagglutination properties, antimicrobial susceptibility and isoenzymatic profile. The molecular approach used, together with investigation of urovirulence markers, enabled detection of great diversity among the isolates. However, closer relationships were observed between epidemiologically related Escherichia coli samples.

Amostras uropatogênicas de Escherichia coli isoladas de indivíduos moradores de localidades distintas na Cidade do Rio de Janeiro, foram caracterizadas quanto o sorotipo, propriedades hemolíticas e hemaglutinantes, susceptibilidade a antimicrobianos e perfil isoenzimático. O método molecular empregado associado com a investigação de marcadores de urovirulência, permitiu detectar uma grande diversidade entre os isolados. Entretanto, foi observada uma relação mais estreita entre amostras de Escherichia coli epidemiologicamente relacionadas.

Thirty-six enteropathogenic Escherichia coli strains isolated from Cuban pigs with diarrhea were serotyped and screened by PCR for the presence of virulence genes. The 36 isolates belonged to 11 O serogroups and 14 O:H serotypes, with 53% of the isolates belonging to only two serotypes: O141:H- (13 isolates) and O157:H19 (6 isolates). Genes coding for STb, STa, VT2e, and LT toxins were identified in 69, 61, 53, and 6% of the isolates, respectively. The most prevalent fimbrial adhesin was F18, detected in 22 (61%) isolates. The gene encoding F6 (P987) colonization factor was identified in three (8%) isolates. None of the 36 isolates assayed contained genes encoding F4 (K88), F5 (K99), or F41. The seropathotype O141:H-:STa/STb/VT2e/F18 (13 isolates) was the most frequently detected, followed by O157:H19:VT2e/F18 (5 isolates). A genetic diversity study, carried out by pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) of 24 representative isolates, revealed 21 distinct restriction patterns clustered in 18 groups (I-XVIII). Isolates of the same serotype were placed together in a dendrogram, but isolates of serotype O157:H19 showed a high degree of polymorphism. The results of this study demonstrate the presence in Cuba of different clusters among one of the most prevalent serotypes isolated from pigs with diarrhea. Further experiments are needed to determine whether some of these clusters have appeared recently; if so, their evolution, as well as their possible association with pathogenicity in farms should be studied. En este estudio, 36 cepas enteropatógenas de Escherichia coli aisladas de cerdos con diarrea en Cuba fueron serotipadas y sometidas a un cribado mediante PCR para detectar la presencia de genes de virulencia. Los 36 aislamientos pertenecían a 11 serogrupos O y 14 serotipos O:H. No obstante, el 53% de los aislamientos presentaron solamente dos serotipos: O141:H- (13 aislamientos) y O157:H19 (6 aislamientos). Los genes que codifican las toxinas STb, STa, VT2e y LT fueron identificados, respectivamente, en 69%, 61%, 53%, y 6% de los aislamientos. La adhesina fimbrial predominante fue la F18, que se detectó en 22 (61%) de los aislamientos. El gen que codifica el factor de colonización F6 (P987) fue identificado en tres (8%) aislamientos. Ninguno de los 36 aislamientos ensayados presentaba los genes que codifican las adhesinas F4 (K88), F5 (K99) y F41. El seropatotipo O141:H-:STa/STb/VT2e/F18 fue el detectado con más frecuencia (13 aislamientos), seguido del O157:H19:VT2e/F18 (5 aislamientos). El estudio de la diversidad genética, que se llevó a cabo mediante electroforesis en gel en campo pulsado (PFGE) en 24 aislamientos representativos, reveló 21 patrones de restricción diferentes repartidos en 18 grupos (I-XVIII). Los aislamientos del mismo serotipo se agruparon en un dendograma, pero los aislamientos del serotipo O157:H19 mostraron un alto grado de polimorfismo. Los resultados de este estudio indican que en Cuba existen diferentes complejos génicos (clusters) en uno de los serotipos predominantes aislados de cerdos afectados de diarrea. Son necesarios más estudios para saber si algunos de estos complejos han aparecido recientemente y, en ese caso, para poder analizar su evolución y determinar la posible relación con su poder patógeno en las granjas. Neste estudo, 36 cepas enteropatógenas de Escherichia coli isoladas de porcos com diarréia em Cuba foram sorotipadas e submetidas a uma sondagem por PCR para detectar a presença de genes de virulência. Os 36 isolamentos pertenciam a 11 sorogrupos Ou e 14 sorotipos Ou:H. Não obstante, 53% dos isolamentos presentaram somente dois serotipos: Ou141:H- (13 isolamentos) e Ou157:H19 (6 isolamentos). Os genes que codificam as toxinas STb, STA, VT2e e LT foram identificados, respectivamente, em 69%, 61%, 53%, e 6% dos isolados. A adesina fimbrial predominante foi o F18, que se detectou em 22 (61%) dos isolados. O gene que codifica o fator de colonização F6 (P987) foi identificado em três (8%) isolados. Nenhum dos 36 isolamentos testados apresentou os genes que codificam as adhesinas F4 (K88), F5 (K99) e F41. O soropatotipo O141:H-:STA/STb/VT2e/F18 foi o detectado com mais freqüência (13 isolamentos), seguido do O157:H19:VT2e/F18 (5 isolamentos). O estudo da diversidade genética, que foi realizado mediante electroforese em gel de campo pulsado (PFGE) em 24 isolados representativos, revelou 21 patrões de restrição diferentes repartidos em 18 grupos (I-XVIII). Os isolamentos do mesmo sorotipo foram agrupados juntos em um dendograma, mas os isolamentos do sorotipo O157:H19 mostrou um alto grau de polimorfismo. Os resultados deste estudo indicam que em Cuba existem diferentes complexos genéticos (clusters) em um dos sorotipos predominantes isolados de porcos afetados por diarréia. São necessários mais estudos a fim de se comprovar se destes complexos apareceram recentemente e, nesse caso, poder analisar sua evolução e determinar a possível relação com seu poder patógeno nas fazendas.

Avaliou-se o comportamento de Salmonella Enteritidis (SE) e Escherichia coli em albúmen e gema de ovos de galinha, submetidos a duas diferentes temperaturas, 8 e 30°C, quando inoculadas isoladamente ou na forma de culturas mistas. Não houve diferença no comportamento dos agentes testados mesmo quando inoculadas em conjunto. Mesmo sob temperatura alta, E. coli não se multiplicou no albúmen, demonstrando o poder inibidor de seus constituintes para esse microrganismo, enquanto a SE aumentou sua população em até três ciclos logarítmicos. Em gema de ovo, SE demonstrou características psicrotróficas. The behavior of Salmonella Enteritidis (SE) and Escherichia coli in albumen and yolk of chicken eggs submitted to two different temperatures, 8oC and 30oC, when separately inoculated or in the form of mixed cultures was studied. There was no difference in the behaviour of the tested agents even when inoculated together. Even under high temperature, E. coli did not multiply in the albumen, demonstrating the inhibition power for that microorganism, while SE increased its population up to three logarithmic cycles. In egg yolk, SE demonstrated psychrotrophic characteristics.

The purpose of this study was to verify the microbiological quality of chicken pies commercialized in a fair in the city of Goiânia, Brazil, and to carry out the test of antimicrobial susceptibility of isolated microorganisms. From 24 different tents, 144 chicken pies samples were collected. The samples were analyzed according to Brazilian legislation including the counting of thermotolerant coliforms, Escherichia coli, coagulase positive Staphylococcus, Bacillus cereus, sulfite reducing Clostridium and the research of Salmonella sp. Forty-one (28.5 %) of the samples presented thermotolerant coliforms contamination, 22 (15.3 %) were positive for E. coli and nine (6.2%) for coagulase positive Staphylococcus. All of the samples were negative for B. cereus, C. perfringens and Salmonella sp. contamination. The strains were submitted to antimicrobial susceptibility test. The S. aureus isolates showed greater resistance for penicillin (88.9 %). The strains were grouped in five phenotypic profiles (A-E), suggesting different sources of contamination. The E. coli strains tested, showed greater resistance to tetracycline (41.0 %) and cephalothin (41.0 %). The E. coli strains were grouped in seven phenotypic profiles (A-G). The results evidenced the poor microbiological quality of the chicken pies commercialized in those conditions, signaling for the potential risk of foodborne diseases. Educative works with food handlers with the aim to minimize the identified errors and, consequently, to promote the protection of the consumers’ health are recommended.

The antimicrobial sensibility of Escherichia coli strains isolated from the uterine content of bitches was evaluated. Fifteen E. coli strains were tested in relation to their susceptibility to different antimicrobials. The results demonstrated 100% of resistance to all tested drugs, being a quite conflicting finding compared to other works, which observed variable resistance of those bacteria to different antimicrobials but not the same multi-resistance pattern. The detection of those multi-resistance strains configures a problem, with important implications on the antimicrobial therapy. Therefore, additional investigations for a best characterization and extension of this problem are needed.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-09-21Bitstream added on 2014-06-13T19:35:22Z : No. of bitstreams: 1 paula_cjs_me_jabo.pdf: 334942 bytes, checksum: 17d2a17239376692690b930753f05b71 (MD5) Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Cachorros têm sido propostos como possíveis reservatórios de cepas de Escherichia coli patogênicas que causam infecções em cachorros e em humanos. Entre Janeiro e Dezembro de 2006, 92 cepas de E. coli foram analisadas para a detecção da presença de genes produtores de toxina Shigalike (stx 1 e stx 2) e o gene da intimina (eae). Doze cepas de E. coli Shigatoxigênica (STEC) foram detectadas por PCR como portadoras dos genes de Shiga toxina, 7 cepas do gene stx 1 (7,6%), 5 do stx 2 (5,4%) e nenhuma delas apresentando ambos os genes. Nove (9,8%) das cepas de E. coli apresentaram o gene eae e não eram produtoras de Shiga toxina. Os isolados de E. coli foram também examinados para a detecção dos genes codificadores de adesinas (pap, sfa e afa), hemolisina e aerobactina. A freqüência dos genes de virulência detectados nestes isolados foi de 12,0% pap, 1,0% sfa, 10,0% hemolisina e 6,5% aerobactina. Seis destes isolados foram caracterizados como cepas de E.coli patogênica extraintestinal (ExPEC). Entre as cepas de STEC e ExPEC foi encontrado um alto nível de resistência a agentes antimicrobianos (estreptomicina com 81% e 100% e cefalotina com 85,7% e 50% respectivamente) e algumas delas foram caracterizadas como E. coli resistentes a múltiplas drogas (MDREC), o que representa um motivo de preocupação devido ao risco de disseminação dos genes de resistência para a microbiota dos seres humanos. Dogs have been proposed as a possible reservoir of the pathogenic Escherichia coli that causes infection in dogs and human beings. From January to December 2006, 92 E. coli isolates from 25 diarrheic dogs were analyzed by screening for the presence of Shiga toxin-producing (stx 1 and stx 2) and intimin (eae) genes. Twelve Shiga toxin-producing E. coli (STEC) isolates were detected by PCR to harbor the Shiga toxin genes, 7 isolates the stx 1 (7.6%); 5 the stx 2(5.4%) and none both of them. Nine (9.8%) of the E. coli isolates studied were eae positive non Shiga toxin-producing. The E. coli isolates also were screened for the presence of adhesion-encoding genes (pap, sfa, afa), hemolysin and aerobactin genes. Virulence gene frequencies detected in those isolates were: 12.0% pap, 1.0% sfa, 10.0% hemolysin and 6.5% aerobactin. Ten isolates were characterized as extraintestinal pathogenic E. coli (ExPEC) strains. Among STEC and ExPEC isolates was found high level of resistance to antimicrobial agents and some of them as characterized as multidrug resistant E. coli (MDREC), what represent a reason for concern due the risk of dissemination of antimicrobial resistant genes to the microbiota of human beings.

Two hundred and five Escherichia coli strains isolated from calves with diarrhea from mid-western Brazil were screened for the presence of virulence factors associated with bovine colibacillosis. One hundred and two (49.8%) of the E. coli strains produced toxins: Shiga toxins 1 (9.7%) and 2 (6.3%), a-hemolysin (9.7%), enterohemolysin(6.8%), Cytotoxic Necrotizing Factors type 1 (0.5%), and type 2 (4.4%), enterotoxins LT-II (8.3%) and STa (3.9%). No strain produced enterotoxin LT-I. Fimbrial adhesins F5 and F17 were produced by 7.3% and 4.8% of the strains, respectivly, and none expressed F41. Seven strains (3.4%) possessed the gene eae and belonged to serotypes O26:H-; O111:H- and O118:H16. These results suggest that calves in Brazil may be an important source of pathogenic E. coli for animals and humans. Duzentas e cinco amostras de Escherichia coli isoladas de bezerros com diarréia da região centro oeste do Brazil foram examinados quanto a presença de fatores de virulência associados à colibacilose bovina. Cento e duas amostras (49,8%) de E. coli produziram toxinas: toxina de Shiga do tipo 1 (9,7%) e 2 (6,3%), a-hemolisina (9,7%), enterohemolisina (6,8%), Fatores Citotóxicos Necrotisantes tipo 1 (0,5%) e 2 (4,4%), enterotoxinas LT-II (8,3%), e STa (3,9%). Nenhuma amostra produziu enterotoxina LT-I. Adesinas fimbriais F5 e F17 foram produzidas por 7,3% e 4,8% das cepas, respectivamente, e nenhuma expressou F41. Sete das amostras (3,4%) apresentaram o gene eae e pertenceram aos sorotipos O26:H-; O111:H- e O118:H16. Estes resultados sugerem que bezerros no Brasil podem ser uma importante fonte de E. coli patogênica para animais e humanos.

The prevalence of Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae that produce extended-spectrumb-lactamases (ESBL) was investigated in patients of a university hospital in Split, Croatia. Patients were grouped according to age (pediatric vs. adult), antibiotic type, and hospital ward. From Jan. 2001 to Dec. 2002, the susceptibility of E. coli and K. pneumoniae isolates to antimicrobials was tested. ESBL production was assayed using the double-disk synergy test. ESBL-producing E. coli and K. pneumoniae were detected in all sites of infection sampled. The percentages of ESBL-positive isolates were higher in the pediatric wards than in the adult wards. The antibiotics most commonly prescribed to patients in all hospital wards belonged to the third-generation cephalosporin group. Among ESBL producers, E. coli isolates were more resistant to aminoglycosides, but less resistant to ciprofloxacin and cotrimoxazole. Resistance of E. coli and K. pneumoniae to ciprofloxacin was exclusively found in isolates from adult patients. None of the isolates, regardless of ESBL production, was resistant to carbapenemes. In addition, the prevalence and antimicrobial resistance of ESBL-producing E. coli and K. pneumoniae isolates differed between pediatric and adult patients. Se ha investigado la frecuencia de Escherichia coli y Klebsiella pneumoniae productoras deb-lactamasas de espectro extendido (ESBL) en pacientes de un hospital universitario de Split (Croacia). Los pacientes se agruparon en relación con la edad, el tipo de antibiótico recetado y la ubicación en el hospital. Desde enero de 2001 a diciembre de 2002 se realizaron ensayos de susceptibilidad a antimicrobianos en aislados de E. coli y K. pneumoniae. La producción de ESBL fue ensayada mediante tests de sinergia de disco doble. En todos los lugares de infección se detectaron aislados de E. coli y K. pneumoniae productores de ESBL. En las salas de pediatría se detectaron los porcentajes más elevados de ESBL-positivos. Los antibióticos más recetados en el hospital fueron las cefalosporinas de tercera generación. Entre los aislados productores de ESBL, los de E. coli fueron más resistentes a los aminoglicósidos, pero menos a ciprofloxacina y cotrimoxazol. Sólo se halló resistencia de E. coli y K. pneumoniae a la ciprofloxacina en aislados obtenidos de pacientes adultos. Ningún aislado, independientemente de la producción de ESBL, fue resistente a los carbapenemos. Se hallaron diferencias en la incidencia y resistencia antimicrobiana de los aislados de E. coli y K. pneumoniae productores de ESBL entre pacientes pediátricos y pacientes adultos. A freqüência de Escherichia coli e Klebsiella pneumoniae produtoras deb-lactamasas de amplo espectro (ESBL) foi investigada em pacientes de um hospital universitário de Split (Croácia), em relação com a idade, o grupo de antibiótico receitado e a localização. Desde janeiro de 2001 a dezembro de 2002 foram realizados ensaios de suscetibilidade a diferentes antimicrobianos em isolados de E. coli e K. pneumoniae. A produção de ESBL foi ensaiada mediante testes de sinergia de disco duplo. Em todos os lugares de infecção foram detectados isolados de E. coli e K. pneumoniae produtores de ESBL. Nas salas de pediatria foram detectados os valores mais elevados de ESBL. Os antibióticos mais prescritos no hospital foram as cefalosporinas de terceira geração. Entre os isolados produtores de ESBL, os de E. coli foram mais resistentes aos aminoglicósidos, mas menos a ciprofloxacina e co-trimoxazol. Só foi achada resistência de E. coli e K. pneumoniae à ciprofloxacina em isolados obtidos de pacientes adultos. Nenhum isolado, independentemente da produção de ESBL, foi resistente aos carbapenemos. Foram encontradas diferenças na incidência e resistência antimicrobiana dos isolados de E. coli e K. pneumoniae produtores de ESBL entre pacientes pediátricos e pacientes adultos.