This study investigates the Drosophilidae species associated to fruiting bodies of fungi in forested and anthropized environments of the Atlantic Rain Forest Biome, in south and southeastern Brazil. We collected samples of imagoes flying over and emerging from fruiting bodies of species of five fungi families, in six collection sites. We obtained 18 samples, from which emerged 910 drosophilids of 31 species from the genera Drosophila Fallen, 1823, Hirtodrosophila Duda, 1923, Leucophenga Mik, 1886, Mycodrosophila Oldenberg, 1914, Scaptomyza Hardy, 1849, Zaprionus Coquillett, 1901 and Zygothrica Wiedemann, 1830. The Drosophila species collected on fungi, as well as Zaprionus indianus Gupta, 1970, had previously been recorded colonizing fruits, demonstrating their versatility in resource use. Most of these species belong to the immigrans-tripunctata radiation of Drosophila. Our records expands the mycophagous habit (feeding or breeding on fungi) to almost all species groups of this radiation in the Neotropical region, even those supposed to be exclusively frugivorous. Assemblages associated to fungi of forested areas were more heterogeneous in terms of species composition, while those associated to fungi of anthropized areas were more homogeneous. The drosophilids from anthropized areas were also more versatile in resource use.Foi realizado um estudo das espécies de Drosophilidae associadas aos corpos de frutificação de fungos em ambientes florestais e antrópicos no Bioma Mata Atlântica, no sul e sudeste do Brasil. Foram realizadas coletas de adultos sobrevoando e emergindo de corpos de frutificação de espécies de fungos de cinco famílias, em seis pontos de coleta. Foram obtidas 18 amostras, onde foram coletados 910 indivíduos de 31 espécies, pertencentes aos gêneros Drosophila Fallen, 1823, Hirtodrosophila Duda, 1923, Leucophenga Mik, 1886, Mycodrosophila Oldenberg, 1914, Scaptomyza Hardy, 1849, Zaprionus Coquillett, 1901 e Zygothrica Wiedemann, 1830. As espécies de Drosophila coletadas, assim como Zaprionus indianus Gupta, 1970, já haviam sido registradas em frutos, evidenciando sua versatilidade na utilização dos recursos. A maioria destas espécies pertence à radiação immigrans-tripunctata de Drosophila. Em espécies desta radiação que habitam regiões temperadas, a micofagia é amplamente difundida; nossos registros (de sítios de alimentação e oviposição em fungos) expandem este hábito para quase todos os grupos de espécies desta radiação na região Neotropical, mesmo aquelas que se supunham ser exclusivamente frugívoras. As assembléias colonizadoras dos corpos de frutificação variaram entre as espécies de fungos e com o tipo de ambiente em que eles se desenvolviam, onde as espécies de drosofilídeos generalistas utilizam os fungos em ambientes mais degradados.