Search

TEZ9819 Tez (Yüksek Lisans) -- Çukurova Üniversitesi, Adana, 2013. Kaynakça (s. 77-83) var. xvi, 92 s. : res. (bzs. rnk.), tablo ; 29 cm. Son yıllarda, enzim immobilizasyonu için manyetik nanopartiküllerin kullanılmasına olan ilgi oldukça artmıştır.Bu çalışmada lipaz enziminin immobilizasyonu için yeni bir destek materyali olarak manyetik özellikte ve nanoboyutta Fe3O4 tanecikleri sentezlenmiş ve lipaz enziminin Fe3O4 manteyik nanopartiküllere farklı arakollar üzerinden(GA ve ECH) immobilizasyonu ve karakterizasyonu araştırılmıştır. Fe3O4 nanopartikülünün karakterizasyonu için SEM, FTIR, XRD kullanılmıştır. Sentezlenen nanopartiküllerin yaklaşık 158,2 nm çapında olduğu gözlemlenmiştir. Serbest ve immobilize lipazların ortam koşullarına göre aktivite ölçümleri yapılarak, optimum sıcaklık, optimum pH, depolama kararlılığı, termal kararlılığı ve tekrar kullanım kararlılığı incelenmiş ve kinetik sabitler belirlenmiştir.Serbest ve immobilize lipazlar için optimum pH 7,0 olarak bulunmuştur. Serbest ve immobilize lipazlar için optimum sıcaklık 40 0C olarak belirlenmiştir. Serbest ve immobilize lipazların farklı sıcaklıklarda belirlenen termal kararlılıkları karşılaştırılmış ve immobilize enzimlerin dayanıklılığının serbest haline göre daha fazla olduğu gözlenmiştir. Belirlenen optimum koşullarda serbest lipaz için Km, Vmax, Kcat, Kcat/Km değerleri sırasıyla 0,48 mM, 420,7 U/mg protein, 2,82x104 dk-1, 58,8x103 dk-1 mM-1, immobilize lipaz (GA) için sırasıyla 1,3 mM, 33,6 U/mg protein, 2,25x103 dk-1, 1,73x103 dk-1 mM-1, immobilize lipaz (ECH) için sırasıyla 9,4 mM, 51,7 U/mg protein, 3,47x103 dk-1, 0,37x103dk-1 m M-1 olarak hesaplanmıştır. İmmobilize lipazın tekrar kullanılabilirliği kesikli reactor modelinde araştırılmıştır ve 20 kullanım sonrası immobilize lipazların başlangıç aktivitelerini sırasıyla % 71 (GA) ve % 63 (ECH) ‘ ünü koruduğu belirlenmiştir. Serbest lipazın 50C ve 250C’ de 30 gün depolama süresi sonunda kalan aktivitesi sırasıyla başlangıç aktivitesin %37 ve %23’ üdür. Bununla birlikte immobilize lipazların 50C ve 250C’de 30 gün depolama süresi sonunda sırasıyla başlangıç aktivitelerinin %50 (GA), %44 (ECH) ve %44 (GA), %28 (ECH)’ ini korumuştur. In recent years, much attention has been paid toward synthesis of magnetic nano sized particles and their use for immobilization of enzyme. In this study, magnetic nano sized Fe3O4 particles were synthesized and covalent immobilization and characterization of lipase enzyme on magnetic nanoparticles by various intermediate arms (GA and ECH) are researched. Characterization of Fe3O4 nanoparticles was conducted using FTIR, SEM and XRD. The size of prepared nano particles was found approximately 158,2 nm diameter. Activitiy measurements of free and immobilized lipases were conducted in order to determine optimum temperature, optimum pH, storage stabilitiy, heat stability and reusability as well as kinetic parameters ( Km, Vmax, Kcat, Kcat/Km ). Optimum pH was determined as 7,0 for free and immobilized lipases. Optimum temperature was determined 40 0C for free and immobilized lipases. The termal stabilities of free and immobilized lipases have been improved greatly .For freelipase at optimum conditions Km, Vmax, Kcat, Kcat/Km values were calculated as sırasıyla 0,48 mM, 420,7 U/mg protein, 2,82x104 dk-1, 58,8x103 dk-1 mM-1 , the same values of immobilized lipase (GA) were calculated as respectively 1,3 mM, 33,6 U/mg protein, 2,25x103 dk-1, 1,73x103 dk-1 mM-1and for immobilized lipase (ECH) calculated as sırasıyla 9,4 mM, 51,7 U/mg protein, 3,47x103 dk-1, 0,37x103 dk-1 m M-1 .Reusability of immobilize lipases was investigated in a batch type reactor. After 20 reuses, residual activites of immobilized lipase were about %71 (GA) and %63 (ECH) of its initial activity. The residual activity for free lipase stored at 50C and 250C for 30 days were %37 and %23 of its initial activity, respectively. However, the immobilized lipases protected %50 (GA), %44 (ECH) and to %44 (GA) ,%28 (ECH) of its original activities at 50C and 250C,respectively for 30 days. Bu çalışma Ç.Ü. Bilimsel Araştırma Projeleri Birimi tarafından desteklenmiştir. Proje No: FEF2012YL12.

Bu çalışmada glutaraldehit ile çapraz bağlanmış aljinat/kitosan nanopartiküllere bir antienflamatuar ilaç olan kolşisinin bağlanması ve kontrollü salımı için uygun üretim ve kullanım koşulları araştırılmıştır. Bu çalışma kontrollü ilaç salımını sağlayan materyal geliştirmeye dönük bir çalışmadır. Kolşisinin bu çalışma için seçilmiş olması onun gut, ailesel Akdeniz Ateşi ve Behçet hastalığı gibi tedavisi zor olan hastalıklarda yerine başka preparatlar ikame edilemeyen bir ilaç olmasıdır. İlaç taşıyıcı nanopartiküller, aljinat ve kitosan polimerleri ile glutaraldehit çapraz bağlayıcısı kullanılarak oluşturulmuştur. Çalışmada kolşisin tutuklanma kapasitesi incelenmiş ve sıcaklıkla ilaç tutulma kapasitesinin arttığı görülmüştür. Son olarak ilacın nanopartiküllerden salım çalışmaları farklı yapay vücut sıvılarında gerçekleştirilmiştir. Kolşisinin in vitro mide ortamında çözünmemiş ve salım gerçekleşmemiştir. Kolşisin in vitro ince bağırsak ortamında salımı ilk üç saat içinde maksimuma erişmiş ve daha sonra bir platoya ermiştir. Kolşisin gut, FMF, Behçet hastalığı tedavisinde çok kullanılmasına rağmen polimer sistemlerde tutuklanması ve salımıyla ilgili literatürde fazla çalışma bulunmamaktadır. Bu çalışma sonuçlarının kolşisin salımı yapabilecek toksik olmayan doğal polimerlerden oluşmuş sistemlerin üretilme ve uygulama koşullarının belirlenmesine katkı yapması beklenmektedir.Anahtar kelimeler: Kolşisin, aljinat, kitosan, nano, ilaç salımı, glutaraldehit In this study we aimed to assess appropriate production steps for binding and controlled delivery of colchicine, an anti-inflammatory drug, to glutaraldehyde cross-linked alginate/chitosan nanoparticles. This study is designed to develop materials using in controlled drug delivery. The reason lying behind choosing colchicine as trial drug was that colchicine is still the gold standard for treatment of several chronic diseases like gout, Familial Mediterranean Fever and Behçet?s Disease and the necessity of chronic use of this drug in treatment of these diseases. Nanoparticles used for drug release was produced by using alginate and chitosan natural polymers. Glutaraldehyde was used as cross-linker. Colchicine entrapment capacity was investigated and a positive correlation between temperature and colchicine entrapment was observed. Release of colchicine from nanoparticles was investigated in various artificial body fluids. No colchicine release in in vitro artificial gastric juice. Reelease of colchicine in in vitro simulated gastric juice environments reach to a plato in 3 hours and continued up to 5 hours with the same. Colchicine is used by oral administration and can be toxic in case of overdose. Colchicine is a commonly used drug for treatment of gout, FMF and Behçet?s Disease but there is not enough study in the literature about entrapment of colchicine by polymer systems. With this study we aim to contribute to assessment and production of colchicine delivery systems made of natural polymers.Key words: Colchicine, alginate, chitosan, nano, drug delivery, glutaraldehyde 89

Balıkesir Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, Kimya Ana Bilim Dalı, Bu çalışmada, ilk olarak sığır serum PON1 enzimini saflaştırmak amacıyla Sepharose 4B L-tirozin 1-naftilamin kimyasal yapısındaki hidrofobik etkileşim kromatografi jeli kullanılmış ve PON1 enzimi saflaştırılmıştır. SDS-PAGE ile serbest enzim için saflık kontrolü yapılmıştır. İkinci aşamada, enzim farklı glutaraldehit yüzdelerinde immobilize edilmiş ve enzim aktivitesi en fazla % 7 glutaraldehit oranında immobilize edilen enzimde gözlenmiştir. Dolayısıyla deneysel çalışmamızın bundan sonraki aşamalarında, % 7 glutaraldehit oranında immobilize edilen enzim dikkate alınmıştır. Buradan immobilize ve serbest enzim için enzim ünitesi ve substrat konsantrasyon değerleri hesaplanarak Km ve Vmax değerleri elde edilmiş ve serbest enzimin katalitik etkinliğinin immobilize enzime göre daha fazla olduğu gözlenmiştir. Son aşamada da Mn+2, Co+2, Cu+2 metallerinin (%7) immobilize ve serbest paraoksonaz enzimi üzerindeki inhibisyon etkileri çalışılmıştır. Cu+2 metalinin paraoksonaz enzim aktivitesi üzerindeki etkisine bakıldığında immobilize ve serbest enzimi inhibe ettiği gözlenirken, Mn+2 ve Co+2 metallerinin immobilize enzimi aktive ettiği, fakat serbest enzimi inhibe ettiği gözlenmiştir., In this research, paraoxonase 1 (PON1) was purificated from serum blood by using sepharose 4B L-tirozin 1-naftylamin hydrofobic interaction chromotography gel and purification of the enzyme was controlled by sodium dodecylsulfate polyacrylamide gel electrophoresis. Paraoxonase enzyme was immobilized at different ratios of glutaraldehyde and the maximum activity was observed at the ratio of % 7 immobilized enzyme. So this immobilized enzyme was investigated for other steps of our experiment. And for immobilized and free enzyme, enzyme units and substrate concentrations were calculated. Km and Vmax plots were determined and catalytic efficiency of free enzyme was bigger than immobilized enzyme. And finally, the effects of inhibition of Mn+2, Co+2, Cu+2 metals onto the immobilized and free enzyme activity were studied. When the effect of Cu+2 onto the immobilized and free enzyme were investigated, the inhibition of enzyme was observed. But on the other hand, the activation of immobilized enzyme was observed and inhibition of free enzyme was observed with Mn+2 and Co+2 metals.