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Tesis (Doctora en Ciencias Químicas) - - Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, 2020 El sistema inmune adaptativo es un componente esencial del sistema inmunológico que permite la inducción de una respuesta específica y de memoria contra antígenos determinados. Entre los principales actores que median este tipo de respuesta se encuentran los linfocitos T CD4+ y CD8+, los cuales se desarrollan y diferencian en timo, y se activan en periferia al contactar a través de su receptor de células T (TCR) a su antígeno (Ag) específico en el contexto de una molécula del Complejo Mayor de Histocompatibilidad (MHC), adquiriendo marcadores de activación y memoria, y generando una respuesta efectora con la finalidad de eliminar el agente extraño. Sin embargo, hace algunos años se describió que en órganos linfáticos secundarios (OLS) de animales WT no expuestos a antígenos, existía entre un 10-15% de células T CD8+ que presentaban un fenotipo similar al de memoria (CD44hi CD122+) con capacidad de producir interferón gamma (IFN) de manera rápida frente a estímulos innatos, independientemente de la señalización del TCR. En base a estas características y a su similitud con células de memoria convencional dependientes de antígeno, estas células fueron designadas originalmente como: “células T CD8+ innatas”, “células con fenotipo de memoria”, “células de memoria innata” (IM, por Innate memory cells) a las presentes en timo o “células de memoria virtual” (VM, por virtual memory cells) a las presentes en periferia. Inicialmente, las células T CD8+ innatas fueron identificadas en timo de animales transgénicos que carecían de la expresión de distintas moléculas involucradas en la señalización a través del TCR. Desde entonces, muchos autores se han abocado a su estudio y a determinar diversas señales que pudieran ser importantes en la inducción de esta población, principalmente en timo (células IM, por innate memory cells). Hoy se sabe que estas células también pueden originarse en OLS, sin embargo, su origen y desarrollo en periferia (células VM) aún es controversial. En este trabajo de tesis aportamos evidencias de la distribución diferencial de las células VM en distintos OLS de animales WT portadores de tumor en condiciones normales y evaluamos además las alteraciones que esta población sufre en un contexto inflamatorio sistémico tipo T cooperador o “helper” (Th)-1 mediado por la expresión de interleuquina (IL-)12 e IL-18. Observamos en animales, que la inyección hidrodinámica (IH) de los plásmidos de expresión de IL-12 e IL-18, logra incrementar la población VM CD122+ en ambos OLS (bazo y ganglio drenante de tumor) y más aún, dentro del tumor, siendo la población CD8+ de memoria preponderante en este tejido, comparado a lo observado en animales libres de estímulo (controles no estimulados con IL-12 e IL-18). Este resultado, a su vez, estuvo correlacionado con un efectivo control del crecimiento del tejido neoplásico, sugiriendo un posible rol de las células T CD8+ innatas en la respuesta antitumoral. Utilizando modelos de animales transgénicos determinamos el aporte de citoquinas como IL-4 e IFNs tipo-I en la adquisición del fenotipo innato en periferia (expresión de Eomesodermina (Eomes) y CD122) y un posible rol de IFN en la expansión de las células VM en OLS y dentro del tumor, principalmente en el contexto de una respuesta pro-inflamatoria. Constanza Savid-Frontera Nuestros datos en animales enriquecidos en células T CD8+ Ag-independientes (animales con células T CD8+ portadoras de TCRs transgénicos para el Ag OVA), demuestran que en un contexto donde prima la respuesta de células T CD8+ no específica del TCR, un proceso pro-inflamatorio es capaz de inducir una respuesta antitumoral eficaz al igual que en un sistema policlonal (animales WT). Más aun, el estímulo con IL-12 e IL-18 en estos animales favorecería el establecimiento de una interacción entre estas células y las células tumorales e incrementaría la respuesta funcional de las células innatas, la cual podría estar siendo mediada por receptores de muerte, como NKG2D, de manera independiente al reconocimiento de un antígeno vía TCR. Los resultados obtenidos en esta tesis doctoral aportan evidencias en la inducción y distribución de las células T CD8+ innatas en periferia, de las alteraciones que estos parámetros sufren durante respuestas inflamatorias sistémicas de tipo Th1 y del posible rol de las células de memoria virtual en la respuesta antitumoral. 2022-08-31 Fil: Savid Frontera, Constanza. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentina Fil: Rodríguez Galán, María Cecilia. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; Argentina. Fil: Rodríguez Galán, María Cecilia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina. Fil: Stempin, Cinthia Carolina. Universidad Nacional de Córdoba. Faculta de Ciencias Químicas; Argentina. Fil: Stempin, Cinthia Carolina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina. Fil: Maldonado, Cristina Alicia. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Médicas; Argentina. Fil: Maldonado, Cristina Alicia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina. Fil: Fuertes, Mercedes Beatriz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental; Argentina. Fil: Gil, Germán Alejandro. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Química Biológica; Argentina. Fil: Gil, Germán Alejandro. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Química Biológica de Córdoba; Argentina.

Tesis (Doctora en Ciencias Químicas) - - Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, 2019 Las células T regulatorias (Treg), una subpoblación de linfocitos T (LT) CD4+, son fundamentales para el mantenimiento de la tolerancia inmune hacia antígenos propios y ejercen múltiples funciones regulatorias y supresoras sobre diferentes poblaciones celulares. Las células Treg expresan constitutivamente el factor de transcripción Foxp3, las moléculas CD25 (cadena α del receptor de IL-2), CTLA-4, GITR, entre otras. Numerosos datos experimentales indican que las células Treg tienen una función impedida o alterada en diferentes enfermedades autoinmunes e inflamatorias. En el presente trabajo de tesis investigamos si ratones no obesos diabéticos (NOD), una cepa de ratón que desarrolla espontáneamente diversos procesos autoinmunes como diabetes tipo 1, tiroiditis, sialoadenitis y prostatitis con la edad, tienen una falla en las cantidades y/o funcionalidad de esta población celular. Para ello se realizó un estudio comparativo de la población células Treg en ratones NOD, C57BL/6 (B6), y BALB/c de 4-6 semanas de edad, previo a toda manifestación autoinmune reportada en la cepa NOD. Al comparar la proporción y los números absolutos de células Treg CD4+Foxp3+ en las diferentes cepas en estudio, se observó que, en condiciones basales, sin estimulación y a edades tempranas, ratones de la cepa NOD mostraron menores cantidades de células Treg y menor expresión de Foxp3 en órganos linfoides secundarios y en timo. En ensayos clásicos de inhibición de la proliferación de LT convencionales, observamos que células Treg de ratones NOD tenían menor capacidad supresora y por ende menor funcionalidad. Las diferencias no sólo fueron observadas en estado basal, sino también luego de la estimulación in vitro de las mismas. Tras la estimulación vía TCR en presencia de IL-2, células Treg esplénicas purificadas de ratones NOD mostraron una respuesta débil a IL-2 en comparación a células Treg de ratones B6 y BALB/c, observándose baja expresión de Foxp3, con grados de proliferación menores. Además, luego de la activación in vitro, se observó que expresaban bajos niveles de moléculas relacionadas con su función y activación tales como CD25, LAP-1, CD39, PD-1, PD-L1 y LAG-3. De manera interesante, cuando células Treg fueron cultivadas por tres días con anti-CD3/CD28 en ausencia o presencia de IL-2, células Treg de ratones NOD mostraron ser más dependientes de IL-2 para mantener la expresión de Foxp3, convirtiéndose en células productoras de IFN-γ e IL-17 más fácilmente que células Treg de las demás cepas. En estudios de inducción de pSTAT5, células Treg de ratones NOD mostraron los niveles más bajos de expresión de este factor comparado con células Treg de B6 y BALB/c. Por otra parte, en el presente trabajo reportamos por primera vez que células Treg de ratones NOD exhiben diferencias en la expresión de SOCS3, GRAIL y OTUB-1, factores involucrados en la regulación de la señalización de IL-2. Tanto en condiciones basales como luego de la activación, células Treg de ratones NOD mostraron niveles de expresión más altos de OTUB-1 y niveles más bajos de GRAIL que el resto de las cepas. Por otro lado, en las células Treg de los ratones NOD se observaron diferencias en la expresión de una ubicuitina ligasa E3 y una desubicuitina tales como STUB-1 y USP7, respectivamente, enzimas que se ha demostrado que participan en la degradación proteosomal de la proteína Foxp3. Así, en células Treg de ratones NOD se observó alta expresión de STUB-1 tanto en condiciones basales como después de la estimulación y expresión nula de USP7 en condiciones basales. Por lo tanto, en el presente trabajo reportamos menores cantidades y funcionalidad junto con expresión diferencial de SOCS3, GRAIL/OTUB-1 y STUB1/USP7 en células Treg de ratones NOD, moléculas que afectan la señalización de IL-2 y la estabilidad de Foxp3. Todos estos hallazgos podrían estar relacionados con la insuficiencia de las células Treg para regular la tolerancia a lo propio observada en los ratones de la cepa NOD. 2021-12-31 Godoy, Gloria Janet. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentina. Rivero, Virginia Elena. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina. Montes, Carolina Lucia Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina. Maldonado, Cristina Alicia. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Médicas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina. Nores, Gustavo Alejandro. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Química Biológica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Química Biológica de Córdoba; Argentina. Docena, Guillermo Horacio. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológicos; Argentina.

Tesis (Doctor en Ciencias Químicas) - - Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, 2018 Uno de los últimos grandes avances en la evolución de los vertebrados fue el advenimiento de los ganglios linfáticos y la formación de centros germinales en los mamíferos placentarios. Los centros germinales, estructuras microanatómicas transientes e increíblemente dinámicas, son el escenario de expansión clonal de linfocitos B, diversificación de inmunoglobulinas y maduración de la afinidad; todos eventos claves para la generación de anticuerpos de alta afinidad que conforman el núcleo fuerte de la respuesta inmune humoral. Los linfocitos B que experimentan la reacción de centro germinal se diferencian finalmente a células plasmáticas de larga vida o a linfocitos B de memoria y expresan un repertorio de anticuerpos altamente seleccionado, con mayor afinidad por el antígeno, fenómeno conocido como maduración de la afinidad. El gran número de interacciones moleculares y celulares que se suscitan en los centros germinales no solo tiene como objetivo la generación de clones altamente afines para un antígeno extraño, sino también la eliminación de aquellos clones que puedan reaccionar contra antígenos propios. Esto presenta un gran desafío para el organismo, ya que la aparición de células autorreactivas puede conducir a la generación de autoanticuerpos capaces de unirse a componentes propios, con la consecuente afectación y destrucción de órganos y tejidos. Por tal motivo, resulta imprescindible comprender la complejidad de interacciones celulares y moleculares involucrados en la reacción de centro germinal para intervenir, en consecuencia, eficientemente. En los últimos años, se han dedicado cada vez más esfuerzos al estudio de las galectinas, una familia de proteínas de unión a glicanos conservadas evolutivamente implicadas en una amplia variedad de procesos diológicos, incluida la modulación del sistema inmune. En particular, Galectina-3, surge como una proteína involucrada en la respuesta inmune regulando y modificando el comportamiento tanto de células del sistema inmune innato como del sistema inmune adaptativo. Los resultados obtenidos en esta tesis doctoral proporcionan la primera evidencia de la participación de Salectina-3 como molécula clave en la reacción de centro germinal. En comparación con ratones wild-type, los ratones deficientes en Galectina-3 generan centros germinales espontáneos, mayor porcentaje de células secretantes de anticuerpos e hipergammaglobulinemia, niveles excesivamente elevados de IFN=y en suero y zesarrollan una enfermedad autoinmune de características similares al lupus. IFN-y resulta fundamental para miucir y mantener estas alteraciones puesto que el bloqueo del mismo, en ratones deficientes en Galectina-3, “etuce la formación espontánea de centros germinales y la producción de autoanticuerpos previniendo, así, la zazología renal. A su vez, el uso de ratones quimera de médula ósea permitió evidenciar que la señalización intrínseca de Galectina-3 en los linfocitos B controla la formación espontánea de centros germinales. Te esta forma, los resultados expuestos en esta tesis, integrados junto a reportes previos, demuestran una dssendencia completa entre la presencia de centros germinales espontáneos autorreactivos e IFN-y en ratones B==centes en Galectina-3. Se revela así, un nuevo rol de Galectina-3 en la modulación de la respuesta inmune humoral, poniendo de manifiesto el potencial de esta vía para el diseño de terapias específicas en enfermedades autoinmunes mediadas por autoanticuerpos. Palabras clave: Centros Germinales; Autoinmunidad; Galectina-3; IFN-y, Lupus om N £ Q0 2 2020-12-31 Beccaria , Cristian Gabriel. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentina. Gruppi, Adriana. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina. Rodríguez Galán, María Cecilia. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina. Maldonado, Cristina Alicia. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Médicas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina. Guido, Mario Eduardo. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Química Biológica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Química Biológica de Córdoba; Argentina. Arana, Eloisa Irene. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo; Argentina.