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El objetivo de este trabajo fue estudiar el efecto de la suplementación de dos niveles de fibra soluble (FS) (bajo: 6,4 y alto: 10,6% MS) combinados con dos fuentes de almidón: trigo (con harina de colza) y guisante, sobre digestibilidad fecal y los rendimientos productivos de gazapos en crecimiento. Se utilizaron 160 gaza-pos destetados a los 25 d de edad y alojados individualmente. El incremento del nivel de fibra soluble empeo-ró la digestibilidad fecal de la proteína (P < 0,001), sin modificar la digestibilidad de la energía, lo que redujo la relación proteína digestible/energía digestible (P = 0,007). La sustitución de la combinación trigo-harina de colza no modificó la digestibilidad fecal de la energía y de la proteína. No se observaron interacciones entre la fibra soluble y el tipo de almidón. Los rendimientos productivos de 25 a 37 d no estuvieron afectados por la fibra soluble, pero los gazapos alimentados con los piensos con guisante consumieron un 15% más de pienso (P = 0,002) y tendieron a crecer más deprisa (P = 0,085), sin modificar su eficiencia alimenticia. En este periodo la mortalidad no estuvo afectada por los tratamientos. En el periodo global de cebo se confirmó un aumento de la ingestión de los gazapos alimentados con guisante de un 8% (P = 0,003), que al no mejorar la velocidad de crecimiento supuso una reducción de la eficiencia alimenticia del 7% (P < 0,001), mientras que la fibra soluble no alteró los rendimientos productivos. La mortalidad en el periodo global tendió a aumentar en todos los grupos menos en el de baja fibra soluble combinada con trigo (P ≤ 0,090).

El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto de la suplementación con xilooligosacáridos en agua (XOS) y su posible efecto sinérgico con la restricción alimenticia sobre los rendimientos productivos y la digestibili-dad de gazapos. Se utilizaron 4 tratamientos estructurados de forma factorial: 2 niveles de XOS (0, y 7,5 g/L) × 2 sistemas de alimentación (ad libitum y restricción desde 32 a 51 d de edad). El grupo restringido recibió una ración que comenzó siendo del 50% respecto al grupo ad libitum el día siguiente del destete y se incrementó linealmente hasta alcanzar el 100% de ingestión de los animales ad libitum el día 51 de edad. Se utilizaron 236 gazapos destetados a los 32 d de edad y no se medicaron. Entre los 39 y 43 d de edad se determinó la digestibilidad fecal (9/tratamiento) y a los 60 d se sacrificaron 10/tratamiento para la evaluar el rendimiento canal. La suplementación con XOS mejoró la digestibilidad de la energía y proteína (P ≤ 0,028), y redujo la ingestión (P = 0,014) en el periodo global de cebo (32-59 d edad). Sin embargo, también fue acompañada de una tendencia a reducirse la velocidad de crecimiento (P = 0,12) y a aumentar la mortalidad (P = 0,12). La restricción de alimento mejoró la digestibilidad de la energía y la proteína (P ≤ 0,013). En gazapos restringidos (71% de media) empeoró un 5% la velocidad de crecimiento, generando gazapos 75 g más ligeros a 59 d de edad (P = 0,037), pero mejoró la eficiencia alimenticia un 12% (P < 0,001), sin modificar el rendimiento canal (57,8% de media). Además, la restricción redujo la mortalidad: 22,5 vs. 4,0% (P < 0,001). No se observaron interacciones entre la suplementación con XOS y la restricción alimenticia.

El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto de la suplementación con XOS en agua y su posible efecto sinérgico con la fibra soluble sobre los rendimientos productivos de gazapos así como su influencia sobre la fisiología del tracto digestivo. Se utilizaron 6 tratamientos estructurados de forma factorial (3 niveles de xilo-oligosacaridos en agua —0, 4,0 y 8,0 g/L— × 2 niveles de fibra soluble en el pienso —8,8 vs. 12,9 % MS—). Se utilizaron 282 gazapos destetados a los 35 d. Se determinó la digestibilidad fecal de 40 a 43 d de edad y a los 46 d se suspendió la suplementación de XOS en el agua y se sacrificaron 48 gazapos para determinar los ácidos grasos volátiles (AGV) en la digesta. La suplementación con XOS mejoró la velocidad de crecimiento y la eficiencia alimenticia de 35 a 46 d de edad (un 14%; P ≤ 0,033) y tendió a reducir linealmente la mortalidad de los gazapos en este periodo (P = 0,10), sin modificar la ingestión de pienso, ni la digestibilidad de la energía y proteína. Al final del cebo solo se observó una mejora lineal de la eficiencia alimenticia de un 6,7% al suple-mentar con XOS. Los XOS modificaron poco la concentración de AGV en el íleon y el ciego y no afectaron al pH de la digesta, sin mostrar interacciones con el nivel de fibra soluble. Por su parte, el incremento del nivel de fibra soluble redujo la mortalidad en el periodo global de cebo (P = 0,002), tendió a mejorar la eficiencia alimenticia (P = 0,075), y aumentó la digestibilidad de la energía bruta (P = 0,009) y la concentración de AGV en el íleon (9,16 vs. 5,75 mmol/g, P < 0,001) y en el ciego (88,7 vs. 69,8 mmol/g, P < 0,001).

En este artículo se expone la formulación de varias dietas para conejos de engorde.

El objetivo de este trabajo fue estudiar el efecto de la inclusión de diferentes niveles de fibra soluble combi- nados con distintas relaciones de n-6/n-3 sobre la composición química corporal y de la canal de conejos en crecimiento. Para ello, se formularon cuatro piensos (BF_Bn-3, BF_An-3, AF_Bn-3 y AF_An-3) con dos niveles de fibra soluble (BF: 7,8 vs. AF: 14,4% MS) y dos ratios n-6/n-3 (Bn-3: 13,4 vs. An-3: 3,5). Se utilizaron 40 gazapos/pienso destetados a 26 d de edad (460 ± 79,8 g) para determinar la composición corporal y de la canal mediante impedancia bioeléctrica a los 27, 39, 62 y 69 d de edad. Los gazapos de los piensos BF_An-3 y AF_Bn-3 tendieron a pesar más y a tener más energía corporal (P = 0,078 y 0,094). El porcentaje de proteína de la canal disminuyó un 1,16% en los gazapos del pienso BF_An-3 (P = 0,035), respecto a los tratamientos BF_Bn-3 y AF_An-3. El peso vivo a 62 d tendió a ser mayor con los mayores niveles de n-3 (P = 0,073), disminuyendo un 1,2% (P = 0,049) el porcentaje de proteína corporal y aumentando un 2,7% (P = 0,031) el de grasa. Todas estas variables se iguala- ron a 69 d. La energía corporal a 62 d tendió a incrementarse en los gazapos del pienso BF_An-3 (2380 vs. 2353 kJ/100g MS; P = 0,064), mientras que a los 69 días tendió a incrementarse en los de los tratamientos BF_An-3 y AF_Bn-3 (2493 vs. 2463 kJ/100g MS; P = 0,064). El porcentaje de grasa de la canal a los 39 d de edad, de los gazapos del tratamiento BF_An-3 tendió a disminuir respecto al pienso BF_Bn-3 (P = 0,074), mientras que a 69 d los gazapos del tratamiento BF_An-3 tendieron a aumentar su porcentaje de grasa respecto al pienso BF_Bn-3 (P = 0,074).

El objetivo de este trabajo fue estudiar el efecto de la suplementación con B-glucanos de levaduras y quitosanos sobre los rendimientos productivos de los gazapos.

El objetivo del presente trabajo fue estudiar el efecto de la fibra soluble e insoluble de pulpa de manzana sobre la digestibilidad ileal y fecal en conejos. Se formularon cuatro piensos con niveles similares de fibra insoluble (FND 32,4%) y proteína (18,6%, ambos sobre MS). El nivel de fibra soluble fue bajo en el pienso control (4,6%, su fibra procedió de cascarilla de avena y paja) y aumentó en los piensos con pulpa de manzana depectinizada (7,1%), pulpa de manzana (9,3%) y pectinas de manzana (10,5%). Se determinó la digestibilidad fecal en 23 gazapos/pienso entre los 55 y los 59 d de edad, y se sacrificaron 23 gazapos/pienso a los 60 d de edad para proteger la digesta ileal y determinar la digestibilidad ileal.

Sugar beet pulp was digested in vitro using protease and pancreatin and the final residue (with no filtering) was fermented in vitro using three different ileal and caecal inocula (each one combining the digesta of three 70 d ols rabbits), respectively. In vitro gas production was measured and modeled using single and dual pool models (logistic and Groot model).

El objetivo de este trabajo fue estudiar el efecto de la fibra soluble y la relación n-6/n-3 sobre la microbiota de las heces y la leche de las conejas y los nódulos linfáticos mesentéricos (NLM) de los gazapos en la primera semana de gestación.

The in vitro gas production of pepsin/pancreatin used in the determination of in vitro digestibility was evaluated using different inocula from rabbits (ileal, caecal and soft faeces from rabbits). In experiment 1 were used 3 different ileal and caecal inocula obtained each one from the combination of the digesta of 3 different 70 d old rabbits.

La presente tesis constituye un avance en el estudio de los métodos para cuantificar la fibra soluble y los efectos de las fracciones de fibra y las fuentes de fibra sobre la digestión de las diferentes fracciones de fibra (soluble e insoluble) en el conejo. Hay un efecto positivo de la fibra soluble sobre la salud intestinal de los conejos y, por ende, una reducción de la mortalidad en animales destetados. Pese a esto, no está claro si estos efectos se deben específicamente a la fracción soluble. Por lo que los objetivos generales de esta tesis fueron: 1) comparar diferentes metodologías químicas e in vitro para cuantificar la fibra soluble y estudiar las posibles interferencias en la cuantificación de la fibra soluble por las mucinas, y viceversa, 2) determinar los efectos de la fibra, el lugar de fermentación, el método para valorar la fibra soluble e insoluble, y la corrección de la fibra soluble por el contenido intestinal de mucinas sobre la digestibilidad de las distintas fracciones de la fibra y 3) evaluar los efectos individuales de las fracciones soluble e insoluble de la fibra de pulpa de remolacha y de manzana, sobre la digestibilidad de la fibra soluble e insoluble y los parámetros digestivos. Para ello se llevaron a cabo 4 estudios. En el primer estudio se compararon diferentes metodologías químicas e in vitro para valorar la fibra soluble de diferentes alimentos y se estudió la posible interferencia en la determinación de la fibra soluble y mucinas. Para ello se utilizaron seis ingredientes (pulpa de remolacha, pectinas de pulpa de remolacha, pulpa de remolacha lavada, paja de cereal, cascarilla de girasol y lignocelulosa) y siete piensos de conejos con diferentes niveles de fibra soluble. En un primer experimento se analizó la fibra dietética total (FDT), la fibra dietética insoluble (FDI), la fibra dietética soluble (FDS), la fibra neutro detergente corregida por cenizas y proteínas (aFNDmo-pb), y la digestibilidad in vitro 2 pasos pepsina/pancreatina (residuo corregido por cenizas y proteína, ivMSi2) de los ingredientes y piensos. Además la fibra soluble se calculó mediante la diferencia entre FDT-FDI (FDSFDI), FDT- ivMSi2 (FDSivMSi2), y FDT - aFNDmo-pb (FDSaFNDmo-pb). Cuando la fibra soluble se determinó directamente como FDS o se calculó como FDT-FDI no se observaron diferencias (109 g/kg MS, en promedio). Sin embargo, cuando la fibra soluble se calculó como FDT - aFNDmo-pb su valor fue un 40% menor (153 g/kg MS. P < 0,05), mientras que la FDSFDI (124 g/kg MS) no fue diferente a ninguna de las otras metodologías. La correlación entre los tres métodos fue elevada (r > 0,96. P < 0,001. n = 13), pero disminuyó o incluso desapareció cuando la pulpa o las pectinas de la remolacha fueron excluidas del análisis. En un segundo experimento, se comparó el método ivDMi2 usando crisoles (método de referencia) con una modificación del mismo usando bolsas ANKOM digeridas individualmente o en colectivo para simplificar la determinación de la FDSivMSi2. La FDSivMSi2 no difirió entre los métodos comparados. En un tercer experimento, se analizó la posible interferencia entre la determinación de la fibra soluble y las mucinas intestinales. Se observó un contenido de FDT y de mucinas elevado en las muestras de pectinas de remolacha (994 y 709 g/kg MS), así como en el moco intestinal de conejo (571 y 739 g/kg MS) cuando se aplicó el método de mucinas por precipitación con etanol. Sin embargo, después de aplicar una pectinasa en el material precipitado, la cantidad de mucinas recuperadas en las muestras de pectinas de remolacha fue cercana a cero, mientras que en el moco intestinal fue similar a los resultados previos al uso de la enzima. Con los resultados de este ensayo se estimaron los carbohidratos de mucinas retenidos en los contenidos digestivos y se propuso una corrección para la determinación de la digestibilidad de la FDT y fibra soluble. En conclusión, la contaminación de las mucinas de la digesta con fibra soluble se soluciona usando pectinasas. El segundo estudio se centró en estudiar: 1) el efecto del tipo de fibra, 2) el sitio de fermentación, 3) el método para cuantificar fibra y 4) la corrección por mucinas sobre la digestibilidad de la fibra. Para ello se formularon tres piensos con diferentes niveles de fibra soluble (FDT-aFNDmo-pb). Un pienso bajo en fibra soluble (LSF. 85 g/kg DM), un pienso medio en fibra soluble (MSF. 102 g/kg DM), y un pienso alto en fibra soluble (HSF. 145 g/kg DM). Estos piensos se obtuvieron reemplazando un 50% del heno del alfalfa en el pienso MSF por una mezcla de pulpa de manzana y remolacha (HSF) o por una mezcla de cascarilla de avena y proteína de soja (LSF). Se utilizaron 30 conejas canuladas para determinar la digestibilidad ileal y fecal. La digestibilidad cecal se calculó mediante diferencia entre la digestibilidad fecal e ileal. La fibra insoluble se determinó como aFNDmo-pb, IDF, e ivMSi2, mientras que la fibra soluble se calculó como FDSFDI, FDSaFNDmo-pb, y FDSivMSi2. La digestibilidad de la FDT y la fibra soluble se corrigieron por las mucinas. La concentración de mucinas en la digesta ileal y fecal, aumento desde el grupo LSF hasta el grupo con el pienso HSF (P < 0,01). La corrección por mucinas aumentó las digestibilidades de la FDT y la fibra soluble a nivel ileal, mientras que a nivel cecal las redujo. (P < 0.01). El coeficiente de digestibilidad ileal de FDT aumentó desde el grupo LSF al grupo HSF (0,12 vs. 0,281. P < 0,01), sin diferencias en el coeficiente de digestibilidad cecal (0,264), por lo que la tendencia a nivel fecal entre los grupos se mantuvo. El coeficiente de digestibilidad ileal de la fibra insoluble aumento desde el grupo con el pienso LSF al grupo con el pienso HSF (0,113 vs. 0,210. P < 0,01), sin diferencias a nivel cecal (0,139) y sin efecto del método usado, resultando en una digestibilidad elevada a nivel fecal, con tendencias similares a las observadas a nivel ileal. El coeficiente de digestibilidad de la FND fue elevada en comparación con la FDI o la ivMSi2 (P > 0.01). El coeficiente de la digestibilidad ileal de la fibra soluble fue mayor en el grupo LSF respecto al grupo LSF (0,436 vs. 0,145. P < 0,01) y el método no afectó a esta determinación. El coeficiente de la digestibilidad cecal de la fibra soluble se redujo desde el grupo LSF hasta el grupo HSF (0,721 vs. 0,492. P < 0,05). El valor más bajo de digestibilidad cecal y fecal de fibra soluble fue medido con el método FDSaFNDmo-pb (P < 0,01). Se observó una alta correlación entre las digestibilidades de la fibra soluble determinada como FDSFDI, FDSaFNDmo-pb, y FDSivMSi2, por lo tanto la información proporcionada por una u otra metodología fueron similares. Sin embargo, cuando se compararon con efectos fisiológicos (producción de mucinas y peso del ciego y pH del ciego de un trabajo previo), la FDSaFNDmo-pb globalmente mostró estar mejor correlacionado con estos parámetros fisiológicos. En conclusión, la corrección por mucinas es necesaria para determinar la digestibilidad ileal de la FDT y fibra soluble, mientras que la elección de uno u otro método es menos relevante. La inclusión de pulpa de manzana y remolacha incrementa la cantidad de FDT que desaparece antes de llegar al ciego. En el tercer estudio se estudió el efecto de la fracción fibrosa soluble e insoluble de la pulpa de remolacha y el método de cuantificación de la fibra soluble e insoluble sobre la digestibilidad de la fibra y algunos parámetros digestivos. Para ello se formularon cuatro piensos con niveles similares de fibra insoluble (315g aFNDmo-pb/kg MS) y proteína (167 g/kg MS). El pienso control contuvo el nivel más bajo de fibra soluble (30,3 g/kg, con cascarilla de girasol y paja como fuente de fibra). Un segundo pienso se obtuvo mediante la sustitución de 60 g de almidón/kg del pienso control por pectinas de remolacha (82,9 g fibra soluble/kg MS). Los otras dos piensos resultaron de la sustitución parcial de las fuentes de fibra del pienso control por la fracción insoluble de la pulpa de remolacha y la pulpa de remolacha entera (42.2 y 82.3 g fibra soluble/kg MS, respectivamente). Cincuenta y seis conejos en cebo (14/pienso), de 2,4  0.21 kg de peso, fueron usados para determinar la digestibilidad ileal y fecal de la FDT, FDI, aFNDmo-pb, FDSFDI, y FDSaFNDmo-pb. La concentración de mucinas en el íleon y heces se utilizaron para corregir la digestibilidad de la FDT y fibra soluble. También se midió el peso de diferentes segmentos del tracto digestivo y el pH del contenido digestivo. Los conejos alimentados con el pienso de fibra insoluble de pulpa de remolacha mostraron los consumos más bajos con respecto a los demás grupos (124 vs. 139 g/d, respectivamente. P < 0,05). El flujo de mucinas ileales fue más alto (P < 0.05) en el grupo alimentado con el pienso de pectinas de remolacha (9,0 g/d en promedio) que los del grupo control (4,79 g/d), mostrando los otros dos grupos valores intermedios, sin detectarse diferencias a nivel fecal. La digestibilidad ileal de la FDT (corregida por mucinas) y la fibra insoluble no se vieron afectadas por el tipo de pienso. El método usado para determinar la fibra insoluble afectó su digestibilidad ileal (0,123 para FDI vs. 0,108 para aFNDmo-pb. P < 0.01). De todas formas, los métodos no afectaron al cálculo de la fibra fermentada antes del ciego (4,9 g/d en promedio). Los conejos alimentados con el pienso de pulpa de remolacha y con el pienso con la fracción insoluble de la pulpa de remolacha mostraron las digestibilidades fecales más altas de la fibra insoluble (0,266 en promedio vs. 0,106 del grupo control), mientras que en los animales del pienso con pectinas esta digestibilidad fue un 47% mayor respecto al pienso control (P < 0,001). La digestibilidad fecal de la fibra insoluble fue un 20% más alta cuando se usó la FND en lugar de FDI para determinarla (P < 0.001). Esto hizo variar la cantidad de fibra insoluble fermentada a lo largo del tracto digestivo (9,5 ó 7,5 g/d cuando fue calculada como FDI o aFNDmo-pb, respectivamente. P < 0,001). Las digestibilidades ileales de la fibra soluble fueron positivas cuando los análisis de fibra soluble de los contenidos ileales fueron corregidos por mucinas, (P < 0,001) excepto para la digestibilidad ileal de la FDSIDF del grupo control. Una vez corregidas por mucinas, los conejos alimentados con los piensos que contuvieron la fracción soluble de la pulpa de remolacha (pienso de pectina y pulpa de remolacha) mostraron una mayor digestibilidad ileal de la fibra soluble, respecto al grupo control (0,483 vs. -0,010. P = 0.002), mientras que el grupo del pienso de fibra insoluble de pulpa de remolacha mostró un valor intermedio (0,274). La digestibilidad total de la fibra soluble fue similar entre todos los grupos (0.93). Los conejos alimentados con pulpa de remolacha y su fracción insoluble mostraron los pesos relativos más altos del estómago respecto a los del pienso control y de pectinas (11 y 56 % respectivamente; P < 0,05). Por otra parte, el peso relativo del ciego aumentó en los animales que consumieron tanto la fracción soluble como insoluble de la pulpa de remolacha, siendo un 16% más pesados (P < 0,001) que el grupo control. El pH del contenido cecal fue más bajo en los animales del grupo de pulpa de remolacha que en los del grupo control (5,64 vs. 6,03; P < 0,001), mientras que los del grupo de pectinas y de fibra insoluble de pulpa de remolacha mostraron valores intermedios. En conclusión, el efecto positivo de la pulpa de remolacha en el flujo de mucinas a nivel ileal se debe a la fracción soluble e insoluble de la pulpa de remolacha. La mitad de la fibra soluble de la pulpa de remolacha desaparece antes de llegar al ciego, independientemente si esta proviene de pectinas puras o de la pulpa de remolacha. El pH cecal esta mejor correlacionado con la cantidad de FDT que desaparece antes del ciego más que con la que se degrada en el ciego. En el último estudio se estudiaron los efectos de la fibra soluble e insoluble de la pulpa de manzana sobre la digestibilidad de la fibra y algunos parámetros digestivos. Cuatro dietas fueron formuladas con niveles similares de fibra insoluble (aFNDmo-pb 32,4%) y proteína (18,6% ambos en base seca). El pienso control contuvo el nivel más bajo de fibra soluble (46 g de fibra soluble/kg, con cascarilla de girasol y paja de cereales como la fuentes de fibra). Un segundo pienso fue obtenido mediante la sustitución de 60 g de almidón/kg del pienso control por pectinas de manzana (105 g fibra soluble/kg). Los otros dos piensos se obtuvieron por la substitución de parte de las fuentes de fibra del pienso control por pulpa de manzana o pulpa de manzana despectinizada (93 y 71 g de fibra soluble/kg, respectivamente). La digestibilidad fecal fue determinada en 23 conejos/pienso con 1.68 ± 0.23 kg de peso vivo, los cuales fueron sacrificados a los 60 d edad para recolectar su contenido digestivo para determinar digestibilidad ileal y otros parámetros digestivos. La fibra soluble de manzana (pectinas y pulpa entera) estimuló el flujo ileal de mucinas (P = 0,002), pero no asi la pulpa despectinizada. La corrección por mucinas incrementó la digestibilidad de la FDT y la fibra soluble a nivel fecal, y especialmente a nivel ileal. Cerca de la mitad de la fibra soluble proveniente de los piensos con cualquiera de las fracciones de la pulpa de manzana fue degradada a nivel ileal, sin mostrar diferencias entre los grupos (46 y 86% en promedio a nivel ileal y fecal respectivamente). La inclusión de pulpa despectinizada de manzana mejoró la digestibilidad de la FND a nivel fecal (P < 0,05) pero no a nivel ileal. El contenido cecal de los conejos alimentados con la pulpa de manzana tuvieron el pH cecal más ácido que los del pienso control (5,55 vs. 5,95. P < 0,001), mientras que los animales con el pienso de pectinas de manzana y de pulpa de manzana despectinizada mostraron valores intermedios. En conclusión los efectos positivo de la pulpa de manzana en el flujo de mucinas se debió principalmente a la fracción soluble de la pulpa de manzana. La mitad de la fibra soluble fue degradada antes del ciego independientemente de si esta provino de las pectinas o de la pulpa de manzana. El pH cecal estuvo mejor correlacionado con la cantidad de FDT fermentada en todo el tracto digestivo y antes de llegar al ciego que con la que se degradó en el ciego. Al integrar los resultados de los estudio 2, 3 y 4 se concluyó que la corrección de mucinas de los contenidos digestivos al determinar FDT y fibra soluble es necesaria para ajustar los cálculos de su digestibilidad. Esta corrección es mucho más importante a nivel ileal y en dietas bajas en fibra soluble. Por otra parte, la FDT desapareció en proporciones importantes antes de llegar al ciego, especialmente en piensos que contienen pulpa de remolacha o de manzana o alguna fracción soluble o insoluble de las mismas y estas diferencias observadas entre los piensos a nivel ileal se correlacionaron mejor con el pH cecal, lo que indicaría que la FDT se solubilizó antes de llegar al ciego y una vez en esté fermentó. Estos resultados implican que determinar la fibra soluble como FDSaFNDmo-pb es la mejor opción y que en la determinación de la digestibilidad de la FDT y fibra soluble se debe considerar la corrección por mucinas especialmente a nivel ileal y en piensos bajos en fibra soluble. ABSTRACT The present thesis constitutes a step forward in advancing the knowledge of the methods to quantify soluble fibre and the effects of the fibre fractions and source of fibre on the site the digestion of different fractions of fibre (soluble and insoluble) in the rabbit. There is a positive effect of soluble fibre on rabbit digestive health and therefore on the reduction of mortality in weaning rabbits. Nevertheless, it is no so clear that the effects of soluble fibre on rabbits are due particularly to this fraction. This thesis aims: 1) to compare the quantification of soluble fibre in feeds using different chemical and in vitro approaches, and to study the potential interference between soluble fibre and mucin determinations, 2) to identify the effects of type of fibre, site of fermentation, method to quantify insoluble and soluble fibre, and correction of the intestinal soluble fibre content for intestinal mucin on the digestibility of fibre fractions and 3) to evaluate the individual effect of soluble and insoluble fibre from sugar beet pulp and apple pulp on ileal and faecal soluble and insoluble digestibility and digestive traits. These objectives were developed in four studies: The first study compared the quantification of soluble fibre in feeds using different chemical and in vitro approaches, and studied the potential interference between soluble fibre and mucin determinations. Six ingredients, sugar beet pulp (SBP), SBP pectins, insoluble SBP, wheat straw, sunflower hulls and lignocellulose, and seven rabbit diets, differing in soluble fibre content, were evaluated. In experiment 1, ingredients and diets were analysed for total dietary fibre (TDF), insoluble dietary fibre (IDF), soluble dietary fibre (SDF), aNDFom (corrected for protein, aNDFom-cp) and 2-step pepsin/pancreatin in vitro DM indigestibility (corrected for ash and protein, ivDMi2). Soluble fibre was estimated by difference using three procedures: TDF - IDF (SDFIDF), TDF - ivDMi2 (SDFivDMi2), and TDF - aNDFom-cp (SDFaNDFom-cp). Soluble fibre determined directly (SDF) or by difference, as SDFivDMi2 were not different (109 g/kg DM, on average). However, when it was calculated as SDFaNDFom-cp the value was 40% higher (153 g/kg DM, P < 0.05), whereas SDFIDF (124 g/kg DM) did not differ from any of the other methods. The correlation between the four methods was high (r ≥ 0.96. P ≤ 0.001. n = 13), but it decreased or even disappeared when SBP pectins and SBP were excluded and a lower and more narrow range of variation of soluble fibre was used. In experiment 2, the ivDMi2 using crucibles (reference method) were compared to those made using individual or collective ankom bags in order to simplify the determination of SDFivDMi2. The ivDMi2 was not different when using crucibles or individual or collective ankom bags. In experiment 3, the potential interference between soluble fibre and intestinal mucin determinations was studied using rabbit intestinal raw mucus, digesta and SBP pectins, lignocelluloses and a rabbit diet. An interference was observed between the determinations of soluble fibre and crude mucin, as the content of TDF and apparent crude mucin were high in SBP pectins (994 and 709 g/kg DM) and rabbit intestinal raw mucus (571 and 739 g/kg DM). After a pectinase treatment, the coefficient of apparent mucin recovery of SBP pectins was close to zero, whereas that of rabbit mucus was not modified. An estimation of the crude mucin carbohydrates retained in digesta TDF is proposed to correct TDF and soluble fibre digestibility. In conclusion, the values of soluble fibre depend on the methodology used. The contamination of crude mucin with soluble fibre is avoided using pectinase. The second study focused on the effect of type of fibre, site of fermentation, method for quantifying insoluble and soluble dietary fibre, and their correction for intestinal mucin on fibre digestibility. Three diets differing in soluble fibre were formulated (85 g/kg DM soluble fibre, in the low soluble fibre [LSF] diet; 102 g/kg DM in the medium soluble fibre [MSF] diet; and 145 g/kg DM in the high soluble fibre [HSF] diet). They were obtained by replacing half of the dehydrated alfalfa in the MSF diet with a mixture of beet and apple pulp (HSF diet) or with a mix of oat hulls and soybean protein (LSF diet). Thirty rabbits with ileal T-cannulas were used to determine total tract apparent digestibility (CTTAD) and ileal apparent digestibility (CIAD). Caecal digestibility was determined by difference between CTTAD and CIAD. Insoluble fibre was measured as aNDFom-cp, IDF, and ivDMi2, whereas soluble fibre was calculated as SDFaNDFom-cp, SDFIDF, SDFivDMi2. The intestinal mucin content was used to correct the TDF and soluble fibre digestibility. Ileal and faecal concentration of mucin increased from the LSF to the HSF diet group (P < 0.01). Once corrected for intestinal mucin, The CTTAD and CIAD of TDF and soluble fibre increased whereas caecal digestibility decreased (P < 0.01). The CIAD of TDF increased from the LSF to the HSF diet group (0.12 vs. 0.281. P < 0.01), with no difference in the caecal digestibility (0.264), resulting in a higher CTTAD from the LSF to the HSF diet group (P < 0.01). The CIAD of insoluble fibre increased from the LSF to the HSF diet group (0.113 vs. 0.21. P < 0.01), with no difference in the caecal digestibility (0.139) and no effect of fibre method, resulting in a higher CTTAD for rabbits fed the HSF diet compared with the MSF and LSF diets groups (P < 0.01). The CTTAD of aNDFom-cp was higher compared with IDF or ivDMi2 (P < 0.01). The CIAD of soluble fibre was higher for the HSF than for the LSF diet group (0.436 vs. 0.145. P < 0.01) and fibre method did not affect it. Caecal soluble fibre digestibility decreased from the LSF to the HSF diet group (0.721 vs. 0.492. P < 0.05). The lowest caecal and faecal soluble fibre digestibility was measured using SDFaNDFom-cp (P < 0.01). There was a high correlation among the digestibilities of soluble fibre measured as SDFaNDFom-cp, SDFIDF, and SDFivDMi2. Therefore, these methodologies provide similar information. However, the method that seems to be globally better related to the physiological traits (ileal flow of mucins, and relative weight of the caecum and caecal pH from previous work) was the SDFaNDFom-cp. In conclusion, a correction for intestinal mucin is necessary for ileal TDF and soluble fibre digestibility whereas the selection of the fibre method has a minor relevance. The inclusion of sugar beet and apple pulp increased the amount of TDF fermented in the small intestine. The third study examined the effect of fibre fractions of sugar beet pulp (SBP) and the method for quantifying soluble and insoluble fibre on soluble and insoluble fibre digestibility and digestive traits. Four diets were formulated with similar level of insoluble fibre (aNDFom-cp: 315 g/kg DM) and protein (167 g/kg DM). Control diet contained the lowest level of soluble fibre (30.3 g/kg DM, including sunflower hulls and straw as sole sources of fibre). A second diet was obtained by replacing 60 g starch/kg of control diet with SBP pectins (82.9 g soluble fibre/kg DM). Two more diets were obtained by replacing part of the fibrous sources of the control diet with either insoluble SBP fibre or SBP (42.2 and 82.3 g soluble fibre/kg DM, respectively). Fifty six (14/diet) rabbits weighing 2.40  0.213 kg were used to determine faecal and ileal digestibility of total dietary fibre (TDF), insoluble dietary fibre (IDF), neutral detergent fibre corrected for ash and CP (aNDFom-cp) and soluble fibre estimated as SDFaNDFom-cp and SDFIDF. Faecal and ileal mucin content was used to correct TDF and soluble fibre digestibility. It was also recorded weight of digestive segments and digesta pH. Rabbits fed insoluble SBP showed the lowest feed intake with respect to the other 3 diets (124 vs. 139 g/d, respectively. P < 0.05). Ileal mucin flow was higher (P < 0.05) in animals fed pectin and SBP diets (9.0 g/d, as average) than those fed control diet (4.79 g/d), showing InsSBP group an intermediate value. No differences on mucin content were detected at faecal level. There was no diet effect on the CIAD of TDF (corrected for mucin) and insoluble fibre. Fibre methodology influenced the CIAD of insoluble fibre (0.123 for IDF vs. 0.108 for aNDFom-cp. P < 0.01). Anyway, the amount of insoluble fibre fermented before the caecum did not differ between both methods (4.9 g/d, on average). Rabbits fed insoluble SBP and SBP diets showed the highest CTTAD of insoluble fibre (0.266 on average vs. 0.106 for control group), whereas those fed pectin diet had an intermediate value (0.106. P < 0.001). The CTTAD of insoluble fibre measured with IDF was higher than that measured with aNDFom-cp (by 20%. P < 0.001). It led that the amount of insoluble fibre fermented along the digestive tract were different (9.5 or 7.5 g/d when calculated as IDF or aNDFom-cp, respectively; P < 0.001). When the CIAD of soluble fibre was corrected for mucin they became positive (P < 0.001) except for control group measured as SDFIDF. Once corrected for mucin content, rabbits fed soluble fibre from SBP (pectin and SBP groups) showed higher CIAD of soluble fibre than control group (0.483 vs. -0.019. respectively), whereas the value for insoluble SBP group was intermediate 0.274. The CTTAD of soluble fibre (mucin corrected) was similar among diets 0.93. Rabbits fed with SBP and insoluble SBP diets showed higher total digestive tract and stomach relative weight than those fed pectin and control diets (by 11 and 56 %. respectively, P < 0.05). The caecal relative weight did not differ in rabbits fed pectin, insoluble SBP, and SBP diets (62 g/kg BW, as average) and they were on average 16% higher (P < 0.001) than in control group. Caecal content of rabbits fed SBP diet was more acid than those fed control diet (5.64 vs. 6.03. P < 0.001), whereas those from pectin and insoluble SBP diets showed intermediate values. In conclusion, the positive effect of SBP fibre on ileal mucin flow was due to both its soluble and insoluble fibre fraction. Half of the soluble SBP fibre was degraded before the caecum independently it came from pectin or SBP. The caecal pH correlated better with the ileal amount of fermented TDF in the digestive tract rather than with that fermented in the caecum. The last study examined the effect of soluble and insoluble fibre of apple pulp on fibre digestibility and digestive traits. Four diets were formulated with similar level of insoluble fibre (aNDFom-cp: 324 g/kg DM) and protein (18.6 g/kg DM). Control diet contained the lowest level of soluble fibre (46 g soluble fibre/kg DM, including oat hulls and straw as sole sources of fibre). A second diet was obtained by replacing 60 g starch/kg of control diet with apple pectins (105 g soluble fibre/kg DM). Two more diets were obtained by substituting part of the fibrous sources of the control diet by either apple pulp or depectinized apple pulp (93 and 71 g soluble fibre/kg, respectively). The CTTAD was determined in 23 rabbits/diet weighing 1.68  0.23 kg BW, and 23 rabbits/diet were slaughtered at 60 d of age to collect ileal digesta to determine CIAD and record other digestive traits. Soluble fibre from apple stimulated ileal flow of mucin (P = 0.002), but depectinized apple pulp did not. The correction for mucin increased the digestibility of crude protein, total dietary fibre, and soluble fibre at faecal, but especially at ileal level, depending in this case on the diet. Around half of the soluble fibre in diets containing any fibre fraction from apple was degraded at ileal level, with no differences among these diets (0.46 vs. 0.066 for control group, P=0.046). Faecal soluble fibre digestibility was 0.86 on average for all groups). Inclusion of the apple insoluble fibre improved NDF digestibility at faecal (0.222 vs. 0.069. P < 0.05) but not at ileal level. Caecal content of rabbits fed apple pulp diet was more acid than those fed control diet (5.55 vs. 5.95. P < 0.001), whereas those from pectin and depectinised apple pulp diets showed intermediate values. In conclusion, the positive effect of apple fibre on ileal mucin flow was mainly due to its soluble fibre fraction. Half of the soluble apple fibre was degraded before the caecum independently it came from pectin or apple pulp. The caecal pH correlated better with the total and ileal amount of fermented TDF in the digestive tract rather than with that fermented in the caecum. The results obtained in the studies 2, 3 and 4 were considered together. These results showed that the mucin correction is necessary when the TDF and soluble fibre digestibility is determined, and it correction is more important at ileal level and in diets with low level of soluble fibre. On another hand, incrementing the soluble fibre using sugar beet and apple pulp increased the amount of TDF disappear before the caecum. Moreover, the caecal pH correlated better with the ileal amount of fermented TDF in the digestive tract rather than with that fermented in the caecum. This suggests that an ileal fibre solubilisation may occur rather than ileal fermentation. Therefore the implications of this work were that: the estimation of soluble fibre as SDFaNDFom-cp is an adequate method considering its correlation with the physiological effects; and the TDF and soluble fibre digestibility must be corrected with intestinal mucins, especially when the ileal digestibility is determined.

The global aim of this thesis was to study the possible synergistic effects of different nutritional strategies that have demonstrated previously a positive effect on rabbit digestive health. Previous data indicated that dietary soluble fibre exerts positive effects on rabbits with epizootic rabbit enteropathy (ERE) fed diets with low-insoluble fibre. Therefore, the aim of the first trial was to evaluate whether the effects of dietary soluble fibre on growth performance, intestinal health, nitrogen and energy retention efficiency (Experiment 1), and ileal and faecal digestibility of energy and nutrients in rabbits depends on the level of insoluble fibre. Four diets (2 × 2 factorial arrangement) were used combining two levels of insoluble fibre (314 vs. 393 g/kg DM; LIF and HIF) and two of soluble fibre (87 vs. 128 g/kg DM; LSF and HSF), resulting in four diets with increasing total dietary fibre levels (LIF_LSF, LIF_HSF, HIF_LSF and HIF_HSF, respectively). In Exp. 1, growth performance and chemical composition (body and carcass) (28–62 d of age), faecal digestibility (54–57 d of age), and jejunal mucosa morphometry and sucrose activity (39 d of age) were determined. Mortality was low (

La presente tesis constituye un avance en el conocimiento de la suplementación de la celobiosa en el agua de bebida de los conejos y su posible relación con el nivel de fibra soluble en el pienso. Existe un efecto positivo de la fibra soluble en la salud digestiva del conejo y por lo tanto, en la reducción de la mortalidad en los conejos destetados. Sin embargo, esto no parece resolver el problema que enfrentan los productores. Esta tesis pretende: 1) determinar las dosis adecuadas de celobiosa para suplementar al conejo y su interacción potencial con el nivel de fibra soluble incluido en el pienso, 2) caracterizar el perfil fermentativo ileal y cecal de la celobiosa cuando se combina con diferentes niveles de fibra soluble, y 3) evaluar la influencia de la suplementación de celobiosa y fibra soluble en la fermentación cecal in vitro de celobiosa y otros alimentos ricos en carbohidratos. Estos objetivos fueron desarrollados en seis experimentos. En el experimento 1, el objetivo fue examinar si la combinación de fibra soluble y celobiosa ejerce un efecto sinérgico sobre los rendimientos productivos, el estado de salud, las características de la fermentación intestinal y la respuesta inmune en conejos. Se utilizaron seis tratamientos estructurados factorialmente (3 × 2): 3 concentraciones de celobiosa en agua de bebida (0,0, 7,5 y 15,0 g/L) × 2 niveles dietéticos de fibra soluble (84,0 y 130 g/kg MS, para la dieta baja fibra soluble (BFS) y para la dieta alta fibra soluble (AFS), respectivamente). Un total de 264 conejos (35/tratamiento) fueron destetados a los 34 d de edad y tuvieron acceso ad libitum a los alimentos y el agua. A los 46 d de edad, 9 conejos/tratamiento fueron sacrificados y se recogieron muestras de digesta ileal y cecal para analizar el perfil de AGV y la respuesta inmune en la mucosa del apéndice. A los 48 d de edad, se retiró la suplementación con celobiosa y los piensos experimentales se reemplazaron por una dieta comercial estándar hasta los 61 d de edad. De 34 a 48 d de edad hubo un aumento lineal de la mortalidad con el nivel de celobiosa en el grupo de AFS (0 frente a 17,1%, P = 0,003). Por el contrario, se encontró un efecto cuadrático del nivel de celobiosa sobre la mortalidad en el grupo BFS, donde los conejos a los que se les ofrecío 7,5-celobiosa mostraron la mortalidad más baja (5,7 vs. 21,4%, P = 0,030). El nivel de celobiosa tuvo un efecto cuadrático sobre el consumo medio diario (CMD), ganancia media diaria (GMD) y eficacia alimenticia (G:C) en este período (P ≤ 0,047), en los grupos de 7,5-celobiosa mostrando el mejor rendimiento de crecimiento. Por el contrario, a partir de los 48 días de edad solo se observaron cambios menores en estas variables. El nivel de celobiosa influyó cuadráticamente en las concentraciones ileales de AGV (P = 0,014), mostrando el valor máximo los grupos de 7,5-celobiosa. En conejos alimentados con 7,5-celobiosa-BFS, se encontró un cambio de acetato a propionato, butirato y valerato en el íleon (P ≤ 0,070). El aumento de los niveles de celobiosa redujo linealmente las concentraciones de AGV cecales en conejos alimentados con AFS, pero no se detectó ningún efecto en los grupos de BFS (P = 0,033). El nivel de fibra soluble aumentó las concentraciones de AGV tanto en el íleon (en un 22%, P < 0,001) como en ciego (en un 11%, P = 0,005). La expresión génica relativa de IL-6, IL-10 y TNF-α, iNOS, MUC-1 y receptores de tipo toll (TLR-2 y TLR-4) en el apéndice aumentaron de forma lineal y cuadrática con niveles crecientes de celobiosa (P ≤ 0,063). En conclusión, en conejos alimentados con dietas BFS se recomienda una dosis de 7,5 g de celobiosa/L, mientras que estos niveles de suplementación con celobiosa se deben evitar en conejos alimentados con dietas AFS. El segundo, tercer y cuarto experimento fue realizado para evaluar el efecto de suplementar celobiosa (≤ 7,0 g/L) sobre el rendimiento de conejos en crecimiento. En el experimento 2, se utilizaron seis tratamientos estructurados factorialmente (3 × 2): 3 concentraciones de celobiosa en agua (0.0, 3,5 y 7,0 g/L) × 2 piensos que difieron en el nivel de fibra soluble (71,9 vs. 130 g/kg DM, para las dietas baja en fibra soluble (BFS) y alta (AFS), respectivamente). Se utilizaron 192 gazapos destetados a los 26 d de edad, teniendo acceso ad libitum a los alimentos y el agua. Para el experimento 3, se evaluaron las mismas concentraciones de celobiosa del experimento 2 en conejos alimentados con una dieta BFS (71,9 g/kg MS), y 186 gazapos destetados a los 26 d de edad fueron utilizados. En el experimento 4, se emplearon cuatro tratamientos en una disposición factorial 2 × 2: 2 concentraciones de celobiosa en agua durante un período previo al destete × 2 concentraciones de celobiosa en agua durante el período posterior al destete (0,0 y 7,0 g/L en ambos períodos). Para la etapa pre-destete, los gazapos 20 camadas (10 gazapos/camada) fueron divididos en dos grupos (5 gazapos/grupo) hasta los 29 d de edad. A los 29 d de edad para la etapa post-destete 4 gazapos/camada fueron destetados y asignados al azar a dos tratamientos (0,0 y 7,0 g de celobiosa/L), obteniendo cuatro tratamientos. La suplementación de celobiosa afectó el consumo de alimento y eficacia alimenticia en todos los experimentos (P ≤ 0,045). En el experimento 2, suplementar 3,5 g de celobiosa / L aumentó (P = 0,017) su ganancia de peso en comparación con las otras concentraciones de celobiosa (0,0 y 7,0 g de celobiosa/L), resultando en un mayor peso a los 56 d de edad (P = 0,017). Los resultados de 26-40 d de edad del experimento 3, difieren de los del experimento 2, observando que el incremento de la concentración de celobiosa tendió a reducir la eficacia alimenticia (P = 0,098). A pesar de esto, de 40 a 50 d de edad (experimento 3) este incremento en la concentración de celobiosa aumentó la eficacia alimenticia (P = 0,009). En el experimento 4, de 22 a 29 d de edad (periodo previo al destete), la suplementación con celobiosa disminuyó (P = 0,042) la ingesta de alimento. Después del destete, de 29 a 43 d conejos suplementados con celobiosa, aumentaron (P ≤ 0,001) la ganancia de peso y la eficacia alimenticia (51,7 vs. 42,4 g / d 0,457 vs 0,385 g/g, respectivamente). El incremento de la concentración de celobiosa tendió a reducir la mortalidad en conejos alimentados con dietas BFS (experimentos 2 y 3, P ≤ 0,098). Por el contrario, en el experimento 4 suplementando los animales con celobiosa en ambos períodos tendieron a incrementar la mortalidad (P = 0,087). En conclusión, el suplemento de concentraciones de celobiosa (≤ 7,0 g/L) se recomienda para conejos alimentados con dietas BFS. En el quinto estudio, se investigó la influencia de la pre-digestión del sustrato y el pienso de los donantes en la fermentación cecal in vitro de diferentes sustratos en conejos. Ocho conejos fueron alimentados con dos piensos experimentales que contenían un nivel bajo (BFS; 84,0 g/kg MS) o alto de fibra soluble (AFS; 130 g/kg MS). Las incubaciones in vitro se llevaron a cabo utilizando heces blandas como inóculo y cuatro sustratos fibrosos o derivados de fibra, con bajo contenido de almidón y proteína: D-celobiosa (CEL), pectinas de remolacha (PEC), pulpa de remolacha (PR) y paja de trigo (Paja). En la mitad de de las incubaciones de cada sustrato se realizó una digestión in vitro de 2-pasos pepsina/pancreatina sin filtración, y se incubó el residuo completo (parte soluble, insoluble y enzimas añadidas) a 40ºC. La producción de gas se midió hasta las 144 h, y se determinó la producción de ácidos grasos volátiles (AGV) a las 24 h de incubación. Se incluyeron cultivos sin sustrato (blancos) para corregir los valores de producción de gas con el gas liberado de los sustratos endógenos y las enzimas añadidas. La pre-digestión no influyó en la cinética de producción de gas in vitro de la Paja, y solo redujo el tiempo de retraso con el que comenzó la producción de gas (Lag, en un 31%, P = 0,042) para la PR, pero para ambos sustratos la pre-digestión disminuyó la proporción molar de acetato (en un 9%; P ≤ 0,003) y aumentó las de propionato y butirato (P ≤ 0,014). Para la CEL, la pre-digestión aumentó el gas y la producción total de AGV (en 30 y 114%), acortó el tiempo tiempo de retraso con el que comenzó la producción de gas (en un 32%) y solo cuando se combinó con el inóculo BFS se reemplazaron 38 unidades porcentuales de acetato por butirato (P ≤ 0,039). Los tratamientos tuvieron una influencia menor en las características de la fermentación in vitro de la PR. Los resultados mostraron que el proceso de pre-digestión influyó en la fermentación cecal in vitro en conejos, pero los efectos fueron influenciados por el pienso de los donantes y el sustrato incubado. Sería recomendable una predigestión del sustrato antes de realizar fermentaciones cecales in vitro. El nivel de fibra soluble en el pienso de los donantes también influyó en la fermentación cecal in vitro, pero su efecto dependió del tipo de sustrato. En el último experimento, se investigó la fermentación cecal in vitro de cinco sustratos con bajo contenido de almidón y proteína [D - (+) - glucosa (GLU), D-celobiosa (CEL), pectinas de remolacha azucarera (PEC), pulpa de remolacha azucarera (PR) y paja de trigo (Paja)] utilizando como inóculo heces blandas de conejos que recibieron diferentes niveles de celobiosa y fibra soluble. Veinticuatro conejos fueron suplementados con tres niveles de celobiosa en el agua (0.0, 7,5 y 15,0 g/L) y alimentados con dos piensos experimentales que contenían un nivel bajo (BFS; 84,0 g/kg MS) o alto de fibra soluble (AFS; 130 g/kg MS). Todos los sustratos se sometieron a una pre-digestión in vitro de pepsina / pancreatina en dos etapas, y se utilizó el residuo completo como sustrato para las incubaciones in vitro. La producción de gas se midió hasta las 144 h, y la producción de ácidos grasos volátiles (AGV) se determinó a las 24 h de incubación. Los tratamientos experimentales no afectaron la fermentación de PR y solo tuvieron una ligera influencia en la fermentación de la Paja y la GLU. Por el contrario, la fermentación de la CEL se vio notablemente afectada, y se detectaron interacciones entre la suplementación de celobiosa y la dieta de los donantes para la mayoría de los parámetros de producción de gas. Tanto la tasa fraccional de producción de gas (k) como las tasas máximas de producción de gas aumentaron linealmente (P ≤ 0,025) y la demora inicial en el inicio de la producción de gas (Lag) disminuyó linealmente (P < 0,001) mediante suplementación de celobiosa con el inóculo AFS, sin mostrar diferencias (P > 0,05) entre las dosis de 7,5 y 15. Por el contrario, con el inóculo BFS la suplementación con celobiosa sólo afectó a los valores de k, que aumentaron cuadráticamente (P = 0,043) y tuvieron valores máximos para la dosis de 7,5 de celobiosa. Se observó un efecto cuadrático (P ≤ 0,018) de la suplementación con celobiosa para la producción total de AGV a las 24 h cuando se fermentaron CEL y PEC, obteniéndose la producción máxima de AGV para la dosis de 7,5 de celobiosa. La producción total de AGV para la CEL fue mayor con el inóculo BFS que con el AFS (20,7 vs. 12,9 mmol/L; P = 0,014), pero se observó lo contrario para la Paja (3,97 vs. 6,21 mmol/L; P = 0,005). El uso del inóculo BFS para la fermentación de la CEL redujo el acetato (P = 0,001) y aumentó las proporciones de butirato (P ≤ 0,001) en comparación con el inóculo AFS. Se observó una relación positiva entre las concentraciones totales de AGV en conejos que recibieron los mismos tratamientos experimentales y los valores in vitro cuando se utilizó la Paja como sustrato (r = 0,90; P = 0,015; n = 6). Los resultados sugieren que los factores experimentales influyeron en la actividad fermentativa de la digestión cecal, pero la respuesta observada difirió con el sustrato incubado, siendo la CEL la más afectada. De los resultados encontrados en esta tesis doctoral se puede concluir que las dosis de 7,0 y 7,5 g de celobiosa/L disminuyeron la mortalidad cuando los animales fueron alimentados con piensos con bajo en contenido de fibra soluble. Estos efectos positivos podrían estar relacionados con el aumento en la proporción de butirato observado in vivo e in vitro. Por el contrario, las concentraciones superiores a 7,0 g de celobiosa/L, incrementaron la mortalidad independientemente del contenido de fibra soluble en el pienso. Debido a esto, sería interesante evaluar el potencial sinérgico de la celobiosa con otros oligosacáridos beneficiosos (por ejemplo, xilo-oligosacáridos) para reducir la mortalidad por debajo del umbral del 10%. ----------ABSTRACT---------- The present thesis constitutes a step forward in advancing the knowledge of the supplementation of cellobiose in the drinking water of rabbits and its possible relationship with soluble fibre level in the diet. There is a positive effect of soluble fibre on rabbit digestive health and therefore on the reduction of mortality in weaning rabbits. Nevertheless, this does not seem to end the problem faced by producers. This thesis aims: 1) to determine the adequate dose of cellobiose and its potential interaction with the dietary soluble fibre level, 2) to characterize the ileal and caecal fermentative profile of the cellobiose when combined with different levels of soluble fibre and 3) to evaluate the influence of cellobiose and soluble fibre supplementation on the in vitro caecal fermentation of cellobiose and other carbohydrate-rich feedstuffs. These objectives were developed in six experiments. In experiment one, the aim of the study was to examine whether the combination of dietary soluble fibre and cellobiose exerts a synergistic effect on growth performance, health status, fermentation traits and immune response in rabbits. Six treatments in a 3 × 2 factorial arrangement were used: 3 cellobiose concentrations in drinking water (0.0, 7.5 and 15.0 g/L) × 2 dietary levels of soluble fibre (84.0 and 130 g/kg DM, for the low soluble fibre (LSF) and high soluble fibre (HSF) diets, respectively). A total of 264 young rabbits (35/treatment) were weaned at 34 d of age and had ad libitum access to feed and water. At 46 d of age the other 9 rabbits/treatment were slaughtered and ileal and caecal digesta collected to analyze VFA profile and the immune response in the appendix mucosa. At 48 d of age the cellobiose supplementation was withdrawn and the experimental diets were replaced by a standard commercial diet until 61 d of age. From 34 to 48 d of age there was a linear increase of mortality with the level of cellobiose in the HSF group (0 vs. 17.1%; P = 0.003). In contrast, a quadratic effect of cellobiose level on mortality was found in the LSF group, the rabbits offered 7.5-cellobiose showing the lowest mortality (5.7 vs. 21.4%; P = 0.030). Cellobiose level had a quadratic effect on ADFI, ADG and G:F in this period (P ≤ 0.047), with the 7.5-cellobiose groups having the best growth performance. In contrast, only minor changes on these traits were observed from 48 d of age onwards. Cellobiose level influenced quadratically the ileal VFA concentrations (P = 0.014), showing the maximal value the 7.5-cellobiose groups. In rabbits fed 7.5-cellobiose-LSF a change of acetate to propionate, butyrate and valerate was found in the ileum (P ≤ 0.070). Increasing cellobiose levels reduced linearly caecal VFA concentrations in HSF fed rabbits, but no effect was detected in LSF groups (P = 0.033). The level of soluble fibre increased VFA concentrations in both the ileum (by 22%; P < 0.001) and the caecum (by 11%; P = 0.005). The relative gene expression of IL-6, IL-10, and TNF-α, iNOS, MUC-1 and toll like receptors (TLR-2 and TLR-4) in the appendix increased linear and quadratically with increasing levels of cellobiose (P ≤ 0.063). In conclusion, in rabbits fed LSF diets a dose of 7.5 g cellobiose/L drinking water would be recommended, whereas levels of cellobiose supplementation beyond 7.5 g/L should be avoided in rabbits fed HSF diets. The second, third and fourth experiments were performed to evaluate the effect of supplement cellobiose (≤ 7.0 g/L) on performance of growing rabbits. In experiment 2, six treatments in a 3 × 2 factorial arrangement were used: 3 cellobiose concentrations in drinking water (0.0, 3.5, and 7.0 g/L) × 2 feeds differing in the soluble fibre level (71.9 vs. 130 g/kg DM, for (LSF) and (HSF) diets, respectively). A total of 192 young rabbits (32/treatment) were weaned at 26 d of age and had ad libitum access to feed and water. For experiment 3, the same cellobiose concentrations from experiment 2 were evaluated in rabbits fed with a LSF diet (71.9 g/kg DM) and for this propose, 186 young rabbits (62/treatment) weaned at 26 d of age were used. In experiment 4, four treatments in a 2 × 2 factorial arrangement were structured: 2 cellobiose concentrations in drinking water during the pre-weaning period × 2 cellobiose concentrations in drinking water during the post-weaning period (0.0 and 7.0 g/L in both periods). For the pre-weaning period, 20 litters (10 kits/litter) were used. Each litter was divided at 22 d of age in two groups (5 kits/group) until 29 d of age. From each group 4 kits/litter were weaned at 29 d of age and assigned at random 0.0 or 7.0 g of cellobiose/L. Cellobiose supplementation affected feed intake and feed efficiency in all experiments (P ≤ 0.045). In experiment 2, supplemented 3.50 g of cellobiose/L increased (P = 0.017) weight gain compared with the others cellobiose concentrations (0.0 and 7.0 g of cellobiose/L), resulting in greater weight at 56 d of age (P = 0.017). Results from 26 to 40 d of age in experiment 3 differed from experiment 2, as the increment of cellobiose concentration tended to decrease feed efficiency (P = 0.098). Despite this, from 40 to 50 d of age (experiment 3) this increment the cellobiose concentration increase the feed efficiency (P = 0.009). In experiment 4, from 22 to 29 d of age (pre-weaning period), cellobiose supplementation decreased (P = 0.042) the feed intake. After weaning, from 29 to 43 d rabbits supplemented with cellobiose, increased (P ≤ 0.001) the weight gain and the feed efficiency (51.7 vs. 42.4 g/d and 0.457 vs 0.385 g/g, respectively). The increment of cellobiose concentration tended to reduce the mortality in rabbits fed with LSF diets (experiments 2 and 3; P ≤ 0.098). Contrary, in experiment 4 supplemented the animals with cellobiose in both periods tended to increment the mortality (P = 0.087). In conclusion, supplement moderates concentrations of cellobiose (≤ 7.0 g/L) would be recommended for rabbits fed with LSF diets. In experiment 5, the influence of substrate pre-digestion and donors’ diet on in vitro caecal fermentation of different substrates in rabbits was investigated. Eight hybrid rabbits were fed two experimental diets containing either low (LSF; 84.0 g/kg DM) or high soluble fibre (HSF; 130 g/kg DM) levels. In vitro incubations were conducted using batch cultures with soft faeces as inoculum and four fibrous or fibre-derived, low-starch and low-protein substrates: D-cellobiose (CEL), sugar beet pectin (PEC), sugar beet pulp (SBP) and wheat straw (WS). Substrates in half of the cultures were subjected to a 2-step pepsin/pancreatin in vitro digestion without filtration, and the whole residue (soluble, insoluble and added enzymes) was incubated at 40ºC. Gas production was measured until 144 h, and volatile fatty acid (VFA) production at 24 h incubation was determined. Cultures without substrate (blanks) were included to correct gas production values for gas released from endogenous substrates and added enzymes. Pre-digestion had no influence on in vitro gas production kinetic of WS, and only reduced the time before gas production begins (lag time; by 31%; P = 0.042) for SBP, but for both substrates the pre-digestion decreased the molar proportion of acetate (by 9%; P ≤ 0.003) and increased those of propionate and butyrate (P ≤ 0.014). For CEL, the pre-digestion increased the gas and total VFA production (by 30 and 114%), shortened the lag time (by 32%), and only when it was combined with LSF inoculum 38 percentage units of acetate were replaced by butyrate (P ≤ 0.039). Treatments had a minor influence on in vitro fermentation traits of SBP. The results showed that the pre-digestion process influenced the in vitro caecal fermentation in rabbits, but the effects were influenced by donors’ diet and the incubated substrate. A pre-digestion of substrate is recommended before conducting in vitro caecal fermentations. The level of soluble fibre in the donors’ diet also influenced the in vitro caecal fermentation but its effect depended on the type of substrate. In the last experiment, the in vitro caecal fermentation of five substrates low in starch and protein content [D-(+)-glucose (GLU), D-cellobiose (CEL), sugar beet pectin (PEC), sugar beet pulp (SBP) and wheat straw (WS)] was investigated using as inoculum soft faeces from rabbits receiving different levels of cellobiose and soluble fibre. Twenty four rabbits were supplemented three levels of cellobiose in the drinking water (0.0, 7.5 and 15.0 g/L) and fed two experimental diets containing either low (LSF; 84.0 g/kg DM) or high soluble fibre (HSF; 130 g/kg DM) levels. All substrates were subjected to a two-step pepsin/pancreatin in vitro pre-digestion, and the whole residue was used as substrate for the in vitro incubations. Gas production was measured until 144 h, and volatile fatty acid (VFA) production was determined at 24 h incubation. Experimental treatments did not affect SBP fermentation and had only a subtle influence on fermentation of WS and GLU. In contrast, fermentation of CEL was markedly affected, and cellobiose supplementation × donors’ diet interactions were detected for most gas production parameters. Both, the fractional gas production (k) and maximal gas production rates were linearly increased (P ≤ 0.025) and the initial delay in the onset of gas production (Lag) linearly decreased (P < 0.001) by cellobiose supplementation with the HSF inoculum, with no differences (P > 0.05) between the 7.5 and 15 doses. In contrast, with the LSF inoculum cellobiose supplementation only affected k values, which were quadratically increased (P = 0.043) and had maximal values for the 7.5 dose. A quadratic effect (P ≤ 0.018) of cellobiose supplementation was observed for total VFA production at 24 h when CEL and PEC were fermented, obtaining the maximal VFA production for the 7.5 dose of cellobiose. Total VFA production for CEL was greater with LSF than with HSF inoculum (20.7 vs. 12.9 mmol/L; P = 0.014), but the opposite was found for WS (3.97 vs. 6.21 mmol/L; P = 0.005). The use of LSF-inoculum for CEL fermentation sharply reduced acetate (P = 0.001) and increased butyrate proportions (P ≤ 0.001) compared with the HSF-inoculum. A positive relationship between total VFA caecal concentrations in rabbits receiving the same experimental treatments and in vitro values was only observed when WS was used as substrate (r = 0.90; P = 0.015; n = 6). The results suggest that experimental factors influenced the fermentative activity of caecal digesta, but the observed response differed with the incubated substrate, being the CEL the most affected. From the results found in this PhD Thesis it can be concluded that a doses of 7.0-7.5 g of cellobiose/L decreased the mortality when the animals where fed with diets low in soluble fibre content. This positive effect might be related with the increased in the butyrate proportion observed in vivo and in vitro. In contrast, a concentration higher than 7.0 g of cellobiose/L, increased the mortality independently of the soluble fibre content. Accordingly, it would be interesting to evaluate the synergic potential of the cellobiose with other beneficial oligosaccharides (e.g., xylo-oligosaccharides) in order to reduce mortality below the threshold of 10%.

El objetivo de esta tesis doctoral ha sido estudiar la capacidad que tienen varios nutrientes de mejorar la salud intestinal de los gazapos. Para lograr este objetivo general, se llevaron a cabo tres objetivos principales. El primer objetivo consistió en describir la evolución con la edad de la microbiota intestinal, el sistema inmune y la morfología de la mucosa tras el destete. Para ello se destetaron 100 gazapos de 20 camadas a los 26 d de edad con un peso de 429 ± 57 g y se sacrificó 1 animal por camada a los 26, 31, 38, 45 y 52 d de edad. Se tomaron muestras de la mucosa intestinal y del apéndice para determinar la morfología de la mucosa y la expresión genética de las citoquinas/interleucinas TNF-α, IFN-ϒ, IL-2, IL-6, IL8, IL-10 e iNOS (en íleon y apéndice). El perfil de la microbiota se estudió en el íleon y en una mezcla de ciego y cecotrofos. El peso relativo del ciego aumentó (P 0,05). La digestibilidad ileal de la mayoría de los aminoácidos mejoró con la suplementación con los amino ácidos (P ≤ 0,10). La digestibilidad fecal de la materia seca y del nitrógeno aumentaron (P < 0,05) en los animales alimentados con los piensos Arg, Gln o Arg+Gln mientras que la digestibilidad fecal de la energía se incrementó en los gazapos suplementados con arginina o con glutamina (P = 0,003). La digestibilidad fecal de la FND fue mayor con los piensos Gln y Arg+Gln (P 0.05). Ileal digestibility of the most of amino acids increased with amino acid supplementation (P < 0.10). Faecal digestibility of dry matter and nitrogen increased (P < 0.05) in rabbits fed with Arg, Gln or Arg+Gln diets whereas, energy faecal digestibility increased (P = 0.003) in rabbits from Arg and Gln groups respect to unsupplemented rabbits. Neutral detergent fibre faecal digestibility trend to be higher with Gln and Arg+Gln diets (P = 0.11). Arginine supplementation decreased by 7.87% (P < 0.001) nitrogen efficiency and, by 6.8% (P < 0.001) energy efficiency due to the increase of the digestible nitrogen intake by 7.79% (P < 0.001) and DE intake by 8.4% (P < 0.001), whereas the nitrogen and energy carcass retention were similar independently of the amino acid supplementation. This led to a tendency to increase nitrogen losses as skin and viscera (P = 0.098) and an increase in urine excretion (by 23%; P = 0.030), energy losses in faeces (P = 0.060) and in urine + heat production (P = 0.003). The third trial studied whether the exposure to glutamine, arginine or their combination from pregnancy and lactation, through the maternal diet, to a post weaning supplemented diet, can stimulate litter performance, gut development and immune function. Rabbits were weaned at 25 d of age and fed the same experimental diet as their mothers for 10 additional days (35 d of age). Bacterial translocation to mesenteric lymph nodes (MLN) at 6 d of age and intestinal histology, enzymatic activity, phenotypical and functional analysis of intraepithelial lymphocytes (IEL) from the appendix were determined at 6, 25 and 35 d of age. No significant differences on animal performance or mortality rates were observed among dietary treatments. However, kits from rabbit does supplemented with Gln tended (P ≤ 0.10) to reduce the translocation of total number of both aerobic and facultative anaerobic bacteria to the MLN. Also, rabbits fed the Gln supplemented diets maintained intestinal villous height at weaning compared to the non-supplemented diets (P < 0.05). The proportions of CD45+CD4+ and CD45+CD8+ IEL in the appendix were not affected by dietary means. However, in rabbits IEL at weaning dietary Gln significantly upregulated IL-2 and IL-10 and downregulated IL-6 expression. In conclusion, despite a lack of effect on performance and mortality the inclusion of 0.4 % Gln has a positive effect by maintaining intestinal villous height and inducing a cytokine profile with a more moderate and balanced Th1-Th2 response at weaning. The supplementation with Arg or Arg+Gln at the selected doses in this study did not report any beneficial effect on the analyzed variables. The third aim was to determine the effect of dietary soluble fibre and n-6/n-3 fatty acid ratio on the productivity of rabbit does and growing rabbits and intestinal health of young rabbits. Three trials were carried out to achieve this objective. Four diets were formulated in a 2×2 factorial arrangement with two levels of SF (7.8 vs. 13.0, on DM basis; HSF and LSF) and two different n-6/n-3 fatty acids ratio (13.4/1 vs. 3.5/1). Levels of CP and NDF were 16.4 and 30.9 % DM respectively, while the level of starch content was higher in low soluble fiber diets (22.4 vs. 18.3% DM). In the first trial was studied whether the dietary supplementation with soluble fiber (SF) and the reduction of the n-6/n-3 fatty acid ratio or the combination of both influence the digestibility, body composition, and reproductive performance of rabbit does during the first three parturitions. Nulliparous does were used (24/diet), and they were inseminated 11 d after parturition. Chemical composition and energy content of rabbit does and their performance, litter growth and milk production were measured between birth and weaning (25 d) along three parturitions, and milk composition and faecal digestibility were also recorded. The proportion of the does removed decreased in HSF respect to LSF groups (22.9 vs. 50.0%; P = 0.005) and it tended to increase in LSF groups when the n-6/n-3 ratio increased and in HSF diets when the n-6/n-3 ratio decreased (P = 0.059). The increase of the level of SF reduced the digestible CP/DE ratio (by 4%; P < 0.001) and increased the digestibility of all fibrous fractions (P < 0.001). The reduction of the n-6/n-3 ratio reduced the total dietary fibre digestibility in rabbit does fed LSF diets but it had no effect in those fed HSF diets (P = 0.043). Treatments had no effect on ADFI among parturitions (P = 0.16), but the digestible CP intake among parturitions was lower in HSF compared to LSF groups (P = 0.003). Treatments had no a relevant effect on the total number of kits born, litter or average kit weight at birth or litter size at weaning, fertility, feed efficiency, total milk production and body chemical composition and body energy content (P ≥ 0.29). The average weight of kits at weaning from LSF_Hn-6/n-3 and HSF_Ln-6/n-3 groups decreased by 6% compared with those from the other two groups (P = 0.030). The reduction of the dietary n-6/n-3 ratio increased the milk fat content by 12% 5 d after parturition with no effect on protein and DM content (P = 0.031). The proportion of milk odd fatty acids and SFA increased in rabbit does fed the HSF diets compared with those fed LSF diets (P ≤ 0.037) with no effect of the n-6/n-3 fatty acid ratio. The reduction of the dietary n-6/n-3 ratio reduced the milk C18:1n9 (by 19%; P < 0.001) and increased the C18:3n3 proportion (by 306%; P < 0.001). In conclusion, SF reduced the replacement rate of rabbit does with no effect of the n-6/n-3 ratio, while both dietary factors modified milk composition and fatty acid profile with minor influence on litter productivity. In the second trial was studied whether the dietary supplementation with soluble fibre (SF) and the reduction of the n-6/n-3 fatty acid ratio or the combination of both influence the growth traits, body composition, energy and nitrogen retention efficiency in fattening rabbits. The increase of SF reduced the mortality in the whole experimental period (38.3 vs. 24.1%; P = 0.018), with no effect of the n-6/n-3 ratio. The feed efficiency in the whole experimental period (26-62 d of age) improved with the increase of the level of SF (by 3.5%; P = 0.003) and with the reduction of the n-6/n-3 (by 2.3%; P ≤ 0.048). The increase of SF decreased the ratio CP/DE (by 2.3%; P = 0.050). Rabbits fed Ln-6/n-3 diets tended to have less body fat and more body protein concentrations at weaning (26 d of age), but at the end of fattening (62 d of age) they tended to be heavier and to have more body fat and less body protein proportions (P ≤ 0.11). The increase of SF and the reduction of the n-6/n-3 ratio reduced the digestible nitrogen intake (by 4%. P ≤ 0.030). However, the amount of nitrogen retained in the body or in the carcass was not affected by treatments (P ≥ 0.26). Consequently, the increase of dietary SF improved the retention of digestible nitrogen in the body and in the carcass (by 5.4 and 4.7% respectively; P ≤ 0.001). Moreover, the reduction of the n-6/n-3 ratio increased the body and carcass efficiency of digestible nitrogen retention (by 3.9 and 3.4%, respectively. P ≤ 0.017). This improvement of the digestible nitrogen efficiency was associated with a reduction of the urinary nitrogen excretion in HSF respect to LSF groups (by 12.6%; P = 0.004) and in Ln-6/n-3 respect to Hn-6/n-3 groups (by 12.1%; P = 0.006). In contrast, the increase of SF increased the faecal nitrogen excretion by 5.2% (P = 0.004), and this effect tended to be more pronounced for Ln-6/n-3 group (P = 0.072). Treatments had no effect on DE intake and on body and carcass energy retention (P ≥ 0.13). The increase of SF improved the body and carcass DE retention efficiency (by 2.7 and 3.0%. P ≤ 0.042). The improvement of retention of DE in the carcass in HSF groups was mainly due to the impairment observed in rabbis fed LSF_Hn-6/n-3 respect to those fed LSF_Ln-6/n-3 diet (P = 0.071). There was no influence of SF on the energy losses as urine and heat production, but they tended to be lower when the n-6/n-3 ratio decreased (P = 0.058). The faecal losses of energy were lower with the HSF than with the LSF diets (by 6.1%. P < 0.001). In conclusion, the increase of SF improved the survival of fattening rabbits, but the reduction of the n-6/n-3 ratio did not influence it. In contrast, both the increase of soluble fibre and the reduction of the n-6/n-3 ratio improved the efficiency of the digestible energy and protein retained in the body and in the carcass. No additive effect of both factors was found. In the third trial was studied whether the dietary supplementation with soluble fiber (SF) and the reduction of the n-6/n-3 fatty acid ratio or the combination of both influence the digestion and immune response in young rabbits after weaning. Rabbits came from multiparous rabbit does fed with the same diets described, and all rabbits used were fed with the same diet of their mother. Fifty-six rabbits (14/diet) of 26 d of age, were used to determine the nutrient apparent faecal digestibility. Two-hundred eight rabbits (56/treatment) weaned at 26 d, were slaughtered at 39 d of age and ileal digesta collected to determine the nutrient apparent ileal digestibility and recovered the weight of digestive organs, caecal pH and ileal and appendix mucosa to determine the immune response. The reduction of soluble fibre improved the ileal and faecal digestibility of total dietary fibre (TDF; P ≤ 0.029). The increase of the n-6/n-3 ratio impaired the faecal TDF and soluble fibre digestibility only in rabbits fed low SF diets (P < 0.05). Rabbits fed high SF diets tended to have a higher ileal starch digestibility and ileal flow of mucins compared with those fed low SF diets (P ≤ 0.064). The increase of SF reduced mortality from 25 to 39 d of age, or until the end of fattening when a common commercial diet was offered from 39 to 56 d of age, whereas no differences were observed when a common diet was provided from weaning to the end of fattening. The level of SF and n-6/n-3 ratio had a minor influence on the gene expression of immune related genes in the appendix. The appendix of rabbits fed with LSFn-6/n-3 diet showed an up-regulation for IL-8 (P = 0.040) compared with the other groups. The expression of IL-6 tended (P = 0.093) to show a similar interaction. Also, the expression of TLR-4 decreased (P = 0.037) in rabbits fed the Ln-6/n-3 diets. Rabbits fed HSF diets showed a higher ileal MUC-13 (P = 0.046) and iNOS gene expression (P = 0.050) than those fed LSF diets. In contrast, the reduction of the n-6/n-3 ratio increased the ileal gene expression of IL2, IL10, IFN-γ and TLR-2 (P ≤ 0.028).