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The crosstalk between the host's inflammasome system and the invading virulent/less-virulent viruses determines the outcome of the ensuing inflammatory response. An appropriate activation of inflammasomes triggers antiviral inflammatory responses that clear the virus and heal the inflamed tissue. However, an aberrant activation of inflammasomes can result in a harmful and overwhelming inflammation that could damage the infected tissue. The underlying host's immune mechanisms and the viral virulent factors that impact severe clinical inflammatory disease remain to be fully elucidated. In this study, we used herpes simplex virus type 1 (HSV-1), the causative agent of corneal inflammatory herpetic disease, as a model pathogen to determine: (i) Whether and how the virulence of a virus affects the type and the activation level of the inflammasomes; and (ii) How triggering specific inflammasomes translates into protective or damaging inflammatory response. We showed that, in contrast to the less-virulent HSV-1 strains (RE, F, KOS, and KOS63), corneal infection of B6 mice with the virulent HSV-1 strains (McKrae, 17 or KOS79): (i) Induced simultaneous expression of the NLRP3, NLRP12, and IFI16 inflammasomes; (ii) Increased production of the biologically active Caspase-1 and pro-inflammatory cytokines IL-1β and IL-18; (iii) Heightened recruitment into the inflamed cornea of CD45highLy6C+Ly6G−F4/80+CD11b+CD11c− inflammatory monocytes and CD45highCD11b+F4/80−Ly6GhiLy6Cmed neutrophils; and (iv) This intensified inflammatory response was associated with a severe corneal herpetic disease, irrespective of the level of virus replication in the cornea. Similarly, in vitro infection of human corneal epithelial cells and human monocytic THP-1 cells with the virulent HSV-1 strains triggered a synchronized early expression of NLRP3, NLRP12 and IFI16, 2 h post-infection, associated with formation of single and dense specks of the adapter molecule ASC in HSV(+) cells, but not in the neighboring bystander HSV(−) cells. This was associated with increased cleavages of Caspase-1, IL-1β, and IL-18. These findings suggest a previously unappreciated role of viral virulence in a synchronized early induction of the NLRP3, NLRP12, and IFI16 inflammasomes that lead to a damaging inflammatory response. A potential role of common virus virulent factors that stimulate this harmful inflammatory corneal disease is currently under investigation.

Recurrent viral diseases often occur after the viruses evade the hosts' immune system, by inducing exhaustion of antiviral T cells. In the present study, we found that functionally exhausted herpes simplex virus type 1 (HSV-1) -specific CD8+ T cells, with elevated expression of lymphocyte activation gene-3 (LAG-3), an immune checkpoint receptor that promotes T cell exhaustion, were frequent in symptomatic (SYMP) patients with a history of numerous episodes of recurrent corneal herpetic disease. Similarly, following UV-B induced virus reactivation from latency the symptomatic wild-type (WT) B6 mice that developed increase virus shedding and severe recurrent corneal herpetic disease had more exhausted HSV-specific LAG-3+CD8+ T cells in both trigeminal ganglia (TG) and cornea. Moreover, a therapeutic blockade of LAG-3 immune checkpoint with antagonist antibodies combined with a therapeutic immunization with gB498−505 peptide immunodominant epitope of latently infected B6 mice significantly restored the quality and quantity of functional HSV-1 gB498−505 specific CD8+ T cells in both TG and cornea and protected against UV-B induced recurrent corneal herpes infection and disease. In contrast to dysfunctional HSV-specific CD8+ T cells from WT B6 mice, more functional HSV-specific CD8+ T cells were detected in LAG-3−/− deficient mice and were associated with less UV-B induced recurrent corneal herpetic disease. Thus, the LAG-3 pathway plays a fundamental role in ocular herpes T cell immunopathology and provides an important immune checkpoint target that can synergizes with T cell-based therapeutic vaccines against symptomatic recurrent ocular herpes.

Objetivo: Produzir concentrados de plaquetas desprovidos de contaminação por hemácias observando atentamente todas as etapas do processo no setor de processamento, mantendo a qualidade do hemocomponente dentro dos padrões exigidos pela legislação vigente. Material e métodos: Estudo descritivo de 741 bolsas triplas de sangue total da marca Terumo para obtenção de concentrado de plaquetas randômicas e sua avaliação macroscópica em todo mês de março de 2024. A validação na produção do hemocomponente foi do tipo prospectiva e avaliada em todas os momentos do processo. As bolsas foram homogeneizadas por 3 minutos com movimentos de fricção, principalmente na parte superior da bolsa e colocadas nos liners em repouso, já balanceados, por um tempo mínimo de 2 horas. Após o descanso, as bolsas foram centrifugadas e posteriormente extraídas pela metodologia de PRP. Em seguida, em até 20 minutos, as bolsas de PRP foram centrifugadas novamente até a obtenção final dos concentrados de plaquetas. As centrífugas refrigeradas utilizadas foram da marca Thermo Scientific-Cryofuge 16 e os extratores T-ACE II da Terumo. O processo é finalizado com avaliação macroscópica dos hemocomponentes. Resultados: Realizada a inspeção visual dos hemocomponentes produzidos em todo o mês de março de 2024, observamos que apenas 10 concentrados de plaquetas randômicas das 741 bolsas triplas processadas apresentaram não conformidade no quesito contaminação por hemácias. Uma representatividade significativamente baixa no valor de 1%. Os volumes de todos os concentrados estavam dentro do valor de referência e avaliação do swirling bem evidenciada. Discussão: De acordo com os resultados apresentados, podemos perceber que a produção dos concentrados de plaquetas se exibiu em excelente qualidade. A etapa de processo de homogeneização das bolsas de sangue total tem uma representatividade maior para evitar a contaminação por hemácias. Movimentos muito bruscos podem lisar as hemácias afetando a qualidade do hemocomponente. Os detalhes de massageamento na parte superior da bolsa é fundamental para evitar que fragmentos de hemácias se agreguem no plástico após sua centrifugação. Respeitar o tempo de repouso necessário, é outro ponto fundamental para evitar contaminação das plaquetas. Os cuidados no posicionamento das bolsas nos liners e a sua retirada após centrifugação são detalhes importantes que também possuem relevância na qualidade do hemocomponente, além de ter uma centrífuga em ótimo estado de funcionamento, desprovidas de ruídos e periodicidade nas manutenções preventivas e calibrações determinadas pelo fabricante. Conclusão: O processo de obtenção de concentrado de plaquetas randômicas é realizado conforme a legislação vigente. Uma técnica bem elaborada, o gerenciamento de equipamentos, a implantação de registros de qualidade, o monitoramento de indicadores e a utilização de ferramentas da qualidade foram essenciais, contribuindo para o baixo índice de descartes de concentrados de plaquetas por contaminação por hemácias. A qualidade do hemocomponente reflete na melhoria contínua do processo visando a segurança do paciente.

Introdução: A Leucemia Mieloide Aguda (LMA) pediátrica é responsável por 20% de todos os casos de leucemia na criança. É caracterizada por aberrações genético-moleculares e compreendem diferentes genes de fusão. Objetivo: : Relatar um caso incomum de um paciente pediátrico com LMA e a presença da fusão TCF3::ZNF384, associado às mutações no gene RAS e IKZF1, além de trissomia do cromossomo 8 e adicional do braço curto do cromossomo 12. Devido à escassez de literatura sobre o tema, estimular a discussão das possíveis abordagens terapêuticas atuais. Material e métodos: : Descrição de um paciente de 13 anos, masculino, com surgimento de equimoses, petéquias, otalgia e cefaleia, com evolução de 2 semanas. Hemograma com hemoglobina de 8,4 g/dL, leucócitos de 71740/μL e contagem de plaquetas de 41000 x 109/L. No mielograma foi observado hipoplasia do setor eritróide, setor granulocítico com granulócitos hipogranulares, ausência de megacariócitos e infiltração por 28% de blastos mielóides, sugestivo de LMA e alterações displásicas. O perfil imunofenotípico foi compatível com LMA: 28,9% de blastos mielóides positivos para CD34, HLA-DR, CD117, CD33, CD38, CD64, MPO fraco, CD13 e CD35. Negativos para: CD15, CD7, CD14, CD19, CD3, CD3ic, CD65, CD16, CD4 e CD11b. Granulócitos com expressão aberrante do CD14. No estudo citogenético por bandeamento foi observado adicional no braço curto do cromossomo 12 em 100% das metáfases. Pela técnica de FISH , 36,6% das células com trissomia do cromossomo 8. No estudo molecular por sequenciamento de nova geração (NGS ) foi detectada a fusão TCF3::ZNF384, mutações do gene NRAS (p.Gln61Lys) e no IKZF1 (Asn159Ser). Resultados: O paciente iniciou tratamento com o protocolo BFM LMA 2012 e diante dos achados genético-moleculares, o paciente foi estratificado como alto risco e considerado para transplante de células tronco hematopoiéticas (TCTH) alogênico. Após os ciclos de indução e consolidação, persistiu com doença residual mensurável (DRM). Diante da persistência de DRM, mesmo após quimioterapia de resgate, foi submetido ao TCTH com doador aparentado haploidêntico paterno. Após 8 meses do transplante, encontra-se sem doença enxerto e DRM negativa. Discussão: : Os rearranjos envolvendo o gene ZNF384 são encontrados em 5-10% de leucemias linfoblástica aguda de célula B (LLA-B) e cerca de 48% de leucemias agudas de fenótipo misto B/Mieloide (MPAL B/M). Entretanto, esse rearranjo, ainda não foi descrito na LMA. Entre os genes parceiros no rearranjo, TCF3 é o segundo mais frequente em LLA-B (25,5%) e o mais frequente em MPAL B/M (53,3%). Na literatura, alterações concomitantes a ZNF384 rearranjado incluem mutações na via Ras (35-50%), em reguladores de desenvolvimento linfóide B (85%) e em modificadores da cromatina (81-83%). Neste paciente, foram detectadas mutações do gene NRAS e no gene IKZF1. Apesar de mutações/deleções em IKZF1 serem recorrentes em LLA-B, a mutação Asn159Ser já foi detectada em LMA, sendo relatada em subgrupo de casos com perfil relacionado à mielodisplasia. Conclusão: : A importância da disponibilidade do perfil citogenético-molecular no diagnóstico, permite um tratamento direcionado, possibilidade de incorporação de terapias alvo e consequentemente, obtenção de melhores desfechos.

Objetivo: Comparar o Teste de Solubilidade/Teste da Mancha com a Eletroforese de Hemoglobina na identificação de Hemoglobina S (Hb S) em doadores de sangue do HEMOGO. Material e métodos: As amostras testadas foram obtidas dos doadores de sangue no Hemocentro Coordenador Estadual de Goiás Prof. Nion Albernaz (HEMOGO), durante o período de 27/04/24 a 30/07/24. Estas foram submetidas à triagem para pesquisa de hemoglobina variante em sistema automatizado multiparâmetros (CAPILLARYS 2). As amostras identificadas com presença de hemoglobina variante, foram submetidas ao teste de solubilidade e à identificação da hemoglobina variante realizada por capilaridade, no equipamento CAPILLARYS 2. Resultados: No período foram avaliadas20.344 amostras. O teste de triagem automatizado, através da técnica eletroforese capilar para HbA1c, detectou-se a presença de hemoglobina variante em 580 amostras (2,85%).A análise destas amostras, através da identificação da hemoglobina variante, demonstrou que351 (60,6%)apresentaram Hemoglobina S (Hb S) presente, 135 (23,2%) foram identificadas como Hemoglobina C, 16 amostras (2,7%) identificadas como Hemoglobina E e 78 amostras (13,5%) foram detectadas outras hemoglobinas. O Teste da Mancha foi realizado nas 580 amostras, destas, 351 (60,6%)apresentaram resultados positivos. Após confirmação por eletroforese, evidenciamos a compatibilidade das técnicas em 100% das amostras analisados. Discussão: Constatou-se que o traço falcêmico foi encontrado com frequência de 1,72% entre os doadores de sangue atendidos no período definido deste estudo. A compreensão da prevalência da Hb S em doadores de sangue é importante para delinear o melhor direcionamento do concentrado de hemácias (CH), para minimizar os riscos e priorizar a qualidade da transfusão, pois não é permitido a transfusão de CH em pacientes com hemoglobinopatias, acidose grave, recém-nascidos, transfusão intrauterina, procedimentos cirúrgicos com circulação extracorpórea e paciente apresentando hipotermia. Conclusão: Os resultados da identificação de Hb S por Eletroforese Capilar e Solubilidade/Teste da Mancha positivo foram 100% compatíveis. As duas técnicas mostraram-se eficazes na triagem da Hb S em doadores de sangue testados no HEMOGO. A escolha entre a técnica de solubilidade e Eletroforese de Hemoglobina depende da necessidade específica do diagnóstico e dos recursos disponíveis. O Teste da Mancha empregado para triagem na detecção de Hb S, no presente estudo, é mais rápido, tem maior estabilidade e durabilidade dos reagentes, não necessitando de grande investimento em treinamento de pessoal e demonstrou ser tão eficaz quanto à eletroforese capilar. O Teste da Mancha pode ser utilizado em locais onde técnicas automatizadas não estão implantadas, servindo como triagem para a presença de Hb S em doadores de sangue. Em contrapartida, a Eletroforese de Hemoglobina oferece maior sensibilidade, sendo essencial para diagnóstico do paciente.

Objetivo: : Validar o equipamento hematológico XN-550 da Sysmex no processo de contagem de plaquetas em amostras de hemocomponentes tendo como padrão ouro a contagem manual em câmara de Neubauer. Materiais e métodos: : A validação do equipamento XN-550 foi conduzida através de um estudo comparativo utilizando amostras de hemocomponentes, principalmente plaquetas. Foram avaliadas 20 amostras de plaquetas do controle interno de qualidade em hemocomponentes do Hemocentro Coordenador de Goiás. As amostras foram diluídas com solução fisiológica na proporção 1/200 e processadas no equipamento hematológico, após a leitura as amostras foram homogeneizadas por 15 vezes por inversão e avaliadas por contagem manual em câmara de Neubauer, conforme os protocolos definidos nos procedimentos operacionais para esse tipo de contagem. Os resultados para análise foram organizados em planilha e utilizados os métodos estatísticos de teste de hipótese e correlação de Pearson. Resultados: : As análises estatísticas demonstraram forte correlação entre o XN-550 é o método de contagem em câmara de Neubauer, com coeficiente de correlação de Pearson de 0,83, indicando concordância entre os métodos avaliados. O teste F, com F calculado menor que F crítico, aceitando a hipótese nula, mostrando que não há diferença significativa entre os grupos de resultados, enquanto a exatidão foi confirmada pela semelhança dos resultados do XN-550 em relação ao método de referência. Discussão: : O estudo evidenciou que a contagem de plaquetas no analisador hematológico XN-550 da Sysmex está em conformidade com a contagem de plaquetas do método manual em câmara de Neubauer em amostras de hemocomponentes. O uso do XN-550 oferece benefícios como a rapidez na obtenção dos resultados e o processamento de um grande número de amostras em um curto período, além de contribuir para a análise e qualidade dos produtos hemoterápicos do Hemogo. Conclusão: A avaliação da contagem de plaquetas em amostras de hemocomponentes do Hemogo é realizada conforme as legislações e manuais vigentes. O equipamento hematológico XN-550 foi validado e tornou-se o método eleito para o processo de contagem de plaquetas nos concentrados de plaquetas randômicas e aféreses, sendo o método manual em câmara de Neubauer a escolha para confirmação de resultados quando for necessário.

Objetivos: Elucidar caso de discrepância em fenotipagem ABO de doador de sangue no HEMOGO, utilizando técnicas acessórias complementares. Material e métodos: Foi utilizado, para esta análise, o sangue coletado no momento da doação, em tubo contendo EDTA. A amostra foi submetida aos testes de triagem imunohematológicos descritos em legislação específica (pesquisa de anticorpos irregulares (PAI), fenotipagem sanguínea direta e reversa) e inclusão dos testes de anti-globulina humana direta (TAD), executados em equipamento automatizado (IH-1000-Bio-Rad), com metodologia para gel-centrifugação. Foi retestado a fenotipagem sanguínea reversa com metodologia a quente (37°C), utilizando cartões neutros em meio salínico e utilizado enzima proteolítica (papaina). A amostra foi submetida à adsorção utilizando soro comercial Anti-A e soro humano de indivíduos B, incubado a frio (4°C) por 1 hora e posteriormente, realizado a técnica de eluição por congelamento (LUI) e eluição ácida. Os produtos dos eluatos foram utilizados para novos testes. Resultados: Os resultados obtidos para PAI mostraram-se negativos. Em fenotipagem direta obtivemos 1+/4+ em Anti-A, 4+/4+ em Anti-B, 4+/4+em Anti-D IV, 3+/4+ em reversa A1 e 0/4+ em reversa de B, caracterizando uma discrepância em fenotipagem ABO. Realizado o teste TAD demostrando que as hemácias do doador não estavam sensibilizadas, assim como o autocontrole negativo. Utilizado a enzima papaína em fenotipagem direta e reversa, mas os resultados mantiveram a discrepância. O reteste para fenotipagem reversa a 37°C não inativou o anticorpo, mantendo a discrepância. O produto do eluato obtido por LUI apresentou resultado positivo quando em contado com hemácias A e negativo quando em contato com hemácias B em tubo, refeita a reação reversa em cartão Liss/coombs com hemácias reagentes A1 e B e foi possível visualizar a reação positiva em A1 e negativa em B. A eluição ácida apresentou reação negativa tanto em reversa de A quanto de B. Discussão: O doador já possuía resultado de fenotipagem B positivo no banco de dados do sistema HEMOVIDA, sendo que a mesma foi realizada em metodologia de tubo. A metodologia de fenotipagem por gel-centrifugação permite visualizar a discrepância com clareza devido à maior sensibilidade da metodologia. A discrepância originou-se na presença de antígenos A (fracamente positiva) e presença de Anti-A1, mesmo o doador não tendo histórico de transfusão. Evidenciamos a presença de subgrupo do antígeno A, isso poderia justificar a presença do anticorpo. As reações do eluato, principalmente do LUI, após as adsorções de anticorpos Anti-A, confirmou a presença do antígeno A fracamente expresso. A eluição ácida apresentou resultado negativo devido às restrições do teste para o tipo de anticorpo e a amplitude térmica do mesmo, assim como a quantidade diminuída desse antígeno nas hemácias. Conclusão: Com o uso das técnicas mais sensíveis como gel-centrifugação, é possível identificar melhor as fenotipagens e seus subgrupos e os testes adicionais nos levam a concluir que a técnica de LUI foi eficiente para a resolução do caso, evidenciando a presença do subgrupo do antígeno A.

The discovery of effective therapies and of disease mechanisms underlying valosin containing protein (VCP)-associated myopathies and neurodegenerative disorders remains elusive. VCP disease, caused by mutations in the VCP gene, are a clinically and genetically heterogeneous group of disorders with manifestations varying from hereditary inclusion body myopathy, Paget's disease of bone, frontotemporal dementia (IBMPFD), and amyotrophic lateral sclerosis (ALS). In the present study, we examined the effects of higher dietary lipid percentages on VCPR155H/R155H, VCPR155H/+ and Wild Type (WT) mice from birth until 15 months of age by immunohistochemical and biochemical assays. Findings illustrated improvement in the muscle strength, histology, and autophagy signaling pathway in the heterozygote mice when fed 9% lipid-enriched diets (LED). However, increasing the LED by 12%, 30%, and 48% showed no improvement in homozygote and heterozygote survival, muscle pathology, lipid accumulation or the autophagy cascade. These findings suggest that a balanced lipid supplementation may have a therapeutic strategy for patients with VCP-associated multisystem proteinopathies.

The currrent study identifies the people perception on the quality of public health services in Norte and Ichilo health districts (Bolivia), with a particular emphasis on the relationshisp between heath workers and patients. Both qualitative and quantitative methods were utilised such as: survey, focus groups, participatory observation, unstructured interviews to Key informants and open discussions with the community. Results show that the public health services reputation is affected by elements as discriminatory attitude towards people belonging to a low socio-economic strata, lack of communication between health workers and patients, perceived insufficient technical skills and recognition of a low therapeutic efficacy. The people who are coming from highlands (collas) appear as the most disappointed by the health service provision structured on the western predominant pattern with a top-bottom approach ignoring its potential users' expectations and needs. A low capability of the public health services to accept and recognise the inter-cultural features of the region, makes that the challenge to be undertaken by the district health personnel should focus on the establishment of intercultural bridges betwen the public health service providers and the potential patients, as well as among the different co-existing medical systems.

Glyco-lipopeptides, a form of lipid-tailed glyco-peptide, are currently under intense investigation as B- and T-cell based vaccine immunotherapy for many cancers. However, the cellular and molecular mechanisms of glyco-lipopeptides (GLPs) immunogenicity and the position of the lipid moiety on immunogenicity and protective efficacy of GLPs remain to be determined.We have constructed two structural analogues of HER-2 glyco-lipopeptide (HER-GLP) by synthesizing a chimeric peptide made of one universal CD4(+) epitope (PADRE) and one HER-2 CD8(+) T-cell epitope (HER(420-429)). The C-terminal end of the resulting CD4-CD8 chimeric peptide was coupled to a tumor carbohydrate B-cell epitope, based on a regioselectively addressable functionalized templates (RAFT), made of four alpha-GalNAc molecules. The resulting HER glyco-peptide (HER-GP) was then linked to a palmitic acid moiety, attached either at the N-terminal end (linear HER-GLP-1) or in the middle between the CD4+ and CD8+ T cell epitopes (branched HER-GLP-2). We have investigated the uptake, processing and cross-presentation pathways of the two HER-GLP vaccine constructs, and assessed whether the position of linkage of the lipid moiety would affect the B- and T-cell immunogenicity and protective efficacy. Immunization of mice revealed that the linear HER-GLP-1 induced a stronger and longer lasting HER(420-429)-specific IFN-gamma producing CD8(+) T cell response, while the branched HER-GLP-2 induced a stronger tumor-specific IgG response. The linear HER-GLP-1 was taken up easily by dendritic cells (DCs), induced stronger DCs maturation and produced a potent TLR- 2-dependent T-cell activation. The linear and branched HER-GLP molecules appeared to follow two different cross-presentation pathways. While regression of established tumors was induced by both linear HER-GLP-1 and branched HER-GLP-2, the inhibition of tumor growth was significantly higher in HER-GLP-1 immunized mice (p

Objetivos: A leucemia aguda (LA) é um câncer hematológico que atinge a medula óssea, alterando as células imaturas produzidas por este órgão e resultando em acúmulo de blastos no organismo. A utilização de exames de citogenética e biologia molecular é de fundamental importância para indicar o tratamento mais adequado e auxiliar na estratificação do prognóstico da doença. Este trabalho tem como objetivos quantificar os pacientes com leucemia aguda que realizaram os exames de biologia molecular e citogenética, e analisar as principais dificuldades encontradas para a não realização dos mesmos. Material e métodos: Trata-se de um estudo quantitativo, descritivo e analítico, através de entrevista e pesquisa documental, por meio do acesso a registros laboratoriais individuais e prontuários hospitalares. Foram analisadas informações de 92 pacientes diagnosticados com leucemia aguda, de todas as idades, no período de outubro de 2020 a julho de 2023, provenientes de instituições de saúde públicas e privadas do estado do Rio Grande do Norte. Resultados: Dentre os 92 pacientes analisados, 77% são atendidos apenas pelo SUS e 23% utilizam planos de saúde privados. Do total de pacientes, 28 realizaram o exame de citogenética, equivalente a 30%, e em relação às análises por biologia molecular (como BCR/ABL, FLT3, NPM1, CEBPA, cKit, TP53 e PML Rara), 17 dos 92 pacientes realizaram algum desses exames, totalizando apenas 18% dos participantes do estudo. Discussão: Um grande desafio para que a estratificação de risco dos pacientes com leucemia aguda seja completa e tenha dados para se basear é que, como já visto dentro dos resultados, grande parte dos pacientes analisados não realizaram os exames supracitados. Isso pode ser explicado perante o fato de que o Sistema Unificado de Saúde (SUS) do Rio Grande do Norte não disponibiliza a realização destes exames, e o SUS é o meio mais utilizado pelos pacientes analisados para tratamento da LA. Segundo a portaria GM/MS Nº3.721 DE 22 DE DEZEMBRO DE 2020, apenas o exame BCR-ABL por biologia molecular foi incluído nos procedimentos disponibilizados. E com isso, podemos ainda adicionar entre a problemática, a dificuldade que seria de se custear tais exames, frente seu alto custo, demandando muito da renda dos pacientes. Conclusão: Consoante resultados obtidos no presente estudo, é possível afirmar que ocorre uma escassez de dados que poderiam estar sendo utilizados para uma ampliação do conhecimento sobre a LA. Além disso, perante uma doença a qual o portador possui baixa sobrevida, muitos ficam sem realizar os devidos exames que poderiam auxiliar seu tratamento e, provavelmente, aumentar a estimativa de vida. Portanto, para uma melhor estratificação do prognóstico de LA, e visando um melhor acompanhamento dos afetados, os exames de biologia molecular e citogenética se mostram essenciais.

Introdução: O Sarcoma Mieloide (SM) é uma massa tumoral, que consiste em blastos mielóides acometendo sítios extramedular. A forma isolada, sem envolvimento da medula óssea, é rara, ocorrendo em menos de 1% dos casos. O diagnóstico exige biópsia tecidual. Cerca de 75%‒90% dos pacientes com SM desenvolverão leucemia mieloide aguda (LMA) com um período de latência que varia de 4‒12 meses e necessidade de tratamento sistêmico. Objetivo: Relatar um caso raro de SM primário de mediastino em pediatria e, devido à escassez de literatura sobre o tema, estimular a discussão das possíveis abordagens terapêuticas atuais. Material e métodos: Descrição do caso de paciente ALS, masculino, pré-escolar de 3 anos, previamente hígido. Iniciou quadro de dor abdominal difusa com relato de múltiplos atendimentos em pronto atendimento pediátrico sendo medicado com sintomáticos durante 1 mês. Na ocasião, evoluiu com piora da dor abdominal e desconforto respiratório. Foi realizado exames radiológicos e confirmado por tomografia de tórax a presença de massa de mediastino anterior. Evoluiu com dispneia, necessitando transferência para UTI pediátrica do Instituto Nacional do Câncer (INCA) para monitorização clínica e elucidação diagnóstica. Foi realizada biópsia percutânea guiada por USG, cujo resultado histopatológico foi de sarcoma mieloide, confirmado por estudo imuno-histoquímico com positividade de LCA, CD68, CD4, Mieloperoxidase (MPO), CD117 e negatividade para CD20 e CD3. O paciente apresentava hemograma normal. Não foi evidenciado acometimento de medula óssea, assim como também não se identificaram alterações citogenéticas ou moleculares. Resultados: Diante do diagnóstico foi iniciado tratamento quimioterápico conforme o protocolo BFM LMA 2004. O paciente apresentou redução significativa da massa mediastinal após a indução. Realizou exame PET-CT, após completar fase de intensificação, compatível com massa residual fibrosada com critérios de remissão. No momento, encontra-se na fase de manutenção em remissão completa. Não possui doador HLA compatível. Discussão: O tratamento do SM em pediatria exige uma abordagem multidisciplinar. Quimioterapia intensiva, com base em protocolos para LMA, seguida de terapia de consolidação com transplante de células-tronco hematopoiéticas tem sido a estratégia mais adotada. Diferentes abordagens têm sido exploradas em poucos relatos de casos, demonstrando a necessidade de individualização do tratamento, considerando o risco de toxicidade e complicações a longo prazo. Conclusão: O SM primário de mediastino é uma apresentação rara que exige atenção especializada para o diagnóstico e tratamento. Devido à raridade, não existem diretrizes de tratamento bem estabelecidas. É fundamental que os casos de SM em crianças sejam abordados em centros especializados e que uma colaboração multidisciplinar seja buscada para aprimorar o conhecimento e definir estratégias terapêuticas mais eficazes. A escolha do tratamento deve ser individualizada, considerando os benefícios potenciais em relação aos riscos.

Objetivo: Validar o congelamento do plasma fresco no Ultra Freezer Thermo Scientific com temperatura a -80°C, determinando o tempo ideal para congelamento total, mantendo a qualidade do hemocomponente dentro dos padrões exigidos pela indústria de produção de fatores. Material e métodos: Estudo descritivo de congelamento de 18 bolsas de plasmas da marca Terumo e análise do controle de qualidade no dia 14 de março de 2023. A validação foi do tipo prospectiva e executada no Ultra Freezer Thermo Scientific, modelo 8930086D e para o monitoramento das temperaturas foi utilizado o equipamento Fieldlogger da Novus com 12 sensores de medição. As bolsas foram dispostas na posição horizontal sendo 6 unidades e 4 sondas do looger por gaveta. Os sensores de temperatura foram colocados no meio da bolsa e fixados com fita autocolante. Após o fechamento da porta, o aparelho foi acionado para iniciar o registro das temperaturas. Após 3 horas de congelamento, as sondas foram retiradas e 15 bolsas foram encaminhadas para o controle de qualidade para dosagem do fator VIII. Resultados: O software do logger apresentou no final do processo os resultados com os dados de medição. O congelamento total do plasma com os 12 sensores foi observado após 1 hora e 42 minutos da colocação dos plasmas. Nesse período todas as bolsas atingiram a temperatura de - 30°C. Em 100% das amostras analisadas pelo controle de qualidade apresentaram resultados satisfatórios na dosagem do fator VIII, reproduzindo valores ≥0,7 UI/mL conforme preconiza a legislação vigente. Discussão: De acordo com as temperaturas registradas pelas sondas foi notório perceber que as 4 primeiras sondas fixadas nos plasmas na gaveta superior alcançaram primeiramente temperaturas mais inferiores em comparação com as demais. Esse acontecimento pode ser explicado pelo fenômeno da convecção térmica, processo em que o ar quente menos denso sobe, em contra partida, o ar frio(mais denso) desce formando as correntes de convecção. A última sonda que atingiu a temperatura de -30°C estava posicionada na gaveta no meio do equipamento, o motivo por tal comportamento se deve pelas etapas dos ciclos que ocorre durante a convecção térmica. À medida que o ar vai circulando no interior do equipamento, o congelamento é mais lento na parte do meio, da mesma forma é o congelamento no interior da bolsa de plasma fresco, em que as extremidades são congeladas primeiramente para depois totalizar na parte central da bolsa. Na análise geral, todas as gavetas apresentaram conformidade para o congelamento conforme preconizado pela indústria de fatores. Conclusão: A validação de congelamento é uma atividade essencial e crítica para a produção do plasma fresco congelado determinado pelas legislações vigentes. Utilizar um freezer qualificado e um logger calibrado é fundamental para realização de um congelamento de plasma ideal garantindo o máximo de conservação, assegurando a utilização eficiente de um hemocomponente seguro e com qualidade.

BackgroundCross-reactive SARS-CoV-2-specific memory CD4+ and CD8+ T cells are present in up to 50% of unexposed, pre-pandemic, healthy individuals (UPPHIs). However, the characteristics of cross-reactive memory CD4+ and CD8+ T cells associated with subsequent protection of asymptomatic coronavirus disease 2019 (COVID-19) patients (i.e., unvaccinated individuals who never develop any COVID-19 symptoms despite being infected with SARS-CoV-2) remains to be fully elucidated.MethodsThis study compares the antigen specificity, frequency, phenotype, and function of cross-reactive memory CD4+ and CD8+ T cells between common cold coronaviruses (CCCs) and SARS-CoV-2. T-cell responses against genome-wide conserved epitopes were studied early in the disease course in a cohort of 147 unvaccinated COVID-19 patients who were divided into six groups based on the severity of their symptoms.ResultsCompared to severely ill COVID-19 patients and patients with fatal COVID-19 outcomes, the asymptomatic COVID-19 patients displayed significantly: (i) higher rates of co-infection with the 229E alpha species of CCCs (α-CCC-229E); (ii) higher frequencies of cross-reactive functional CD134+CD137+CD4+ and CD134+CD137+CD8+ T cells that cross-recognized conserved epitopes from α-CCCs and SARS-CoV-2 structural, non-structural, and accessory proteins; and (iii) lower frequencies of CCCs/SARS-CoV-2 cross-reactive exhausted PD-1+TIM3+TIGIT+CTLA4+CD4+ and PD-1+TIM3+TIGIT+CTLA4+CD8+ T cells, detected both ex vivo and in vitro.ConclusionsThese findings (i) support a crucial role of functional, poly-antigenic α-CCCs/SARS-CoV-2 cross-reactive memory CD4+ and CD8+ T cells, induced following previous CCCs seasonal exposures, in protection against subsequent severe COVID-19 disease and (ii) provide critical insights into developing broadly protective, multi-antigen, CD4+, and CD8+ T-cell-based, universal pan-Coronavirus vaccines capable of conferring cross-species protection.

BackgroundThe coronavirus disease 2019 (COVID-19) pandemic has created one of the largest global health crises in almost a century. Although the current rate of Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2) infections has decreased significantly, the long-term outlook of COVID-19 remains a serious cause of morbidity and mortality worldwide, with the mortality rate still substantially surpassing even that recorded for influenza viruses. The continued emergence of SARS-CoV-2 variants of concern (VOCs), including multiple heavily mutated Omicron sub-variants, has prolonged the COVID-19 pandemic and underscores the urgent need for a next-generation vaccine that will protect from multiple SARS-CoV-2 VOCs.MethodsWe designed a multi-epitope-based coronavirus vaccine that incorporated B, CD4+, and CD8+ T- cell epitopes conserved among all known SARS-CoV-2 VOCs and selectively recognized by CD8+ and CD4+ T-cells from asymptomatic COVID-19 patients irrespective of VOC infection. The safety, immunogenicity, and cross-protective immunity of this pan-variant SARS-CoV-2 vaccine were studied against six VOCs using an innovative triple transgenic h-ACE-2-HLA-A2/DR mouse model.ResultsThe pan-variant SARS-CoV-2 vaccine (i) is safe , (ii) induces high frequencies of lung-resident functional CD8+ and CD4+ TEM and TRM cells , and (iii) provides robust protection against morbidity and virus replication. COVID-19-related lung pathology and death were caused by six SARS-CoV-2 VOCs: Alpha (B.1.1.7), Beta (B.1.351), Gamma or P1 (B.1.1.28.1), Delta (lineage B.1.617.2), and Omicron (B.1.1.529).ConclusionA multi-epitope pan-variant SARS-CoV-2 vaccine bearing conserved human B- and T- cell epitopes from structural and non-structural SARS-CoV-2 antigens induced cross-protective immunity that facilitated virus clearance, and reduced morbidity, COVID-19-related lung pathology, and death caused by multiple SARS-CoV-2 VOCs.

Aggressive angiomyxoma is a rare benign and locally invasive mesenchymal tumor that is found most frequently in women at reproductive age. We report typical CT and MRI appearances of a 36-year old young woman with an aggressive angiomyxoma of the pelvis and perineum that was proved by ultrasound guided biopsy.This study describe the imaging features of theses tumors,wich may help to approch the diagnosis by their distinctive imaging with high signal intensity on T2-weighted image related to the myxomatous stroma and their characteristic of swirling or layering internal pattern after intravenous gadolinium contrast administration.We also review the CT and MRI features of this disease in the current literature.

The development of vaccines against herpes simplex virus type 1 and type 2 (HSV1 and HSV-2) is an important goal for global health. In this review we reexamined (i) the status of ocular herpes vaccines in clinical trials; and (ii) discusses the recent scientific advances in the understanding of differential immune response between HSV infected asymptomatic and symptomatic individuals that form the basis for the new combinatorial vaccine strategies targeting HSV; and (iii) shed light on our novel “asymptomatic” herpes approach based on protective immune mechanisms in seropositive asymptomatic individuals who are “naturally” protected from recurrent herpetic diseases. We previously reported that phenotypically and functionally distinct HSV-specific memory CD8+ T cell subsets in asymptomatic and symptomatic HSV-infected individuals. Moreover, a better protection induced following a prime/pull vaccine approach that consists of first priming anti-viral effector memory T cells systemically and then pulling them to the sites of virus reactivation (e.g., sensory ganglia) and replication (e.g., eyes and vaginal mucosa), following mucosal administration of vectors expressing T cell-attracting chemokines. In addition, we reported that a combination of prime/pull vaccine approach with approaches to reverse T cell exhaustion led to even better protection against herpes infection and disease. Blocking PD-1, LAG-3, TIGIT and/or TIM-3 immune checkpoint pathways helped in restoring the function of antiviral HSV-specific CD8+ T cells in latently infected ganglia and increased efficacy and longevity of the prime/pull herpes vaccine. We discussed that a prime/pull vaccine strategy that use of asymptomatic epitopes, combined with immune checkpoint blockade would prove to be a successful herpes vaccine approach.

Morocco’s economy has recently seen an unprecedented growth, which made the country emerge into the 5th strongest economy of the African continent. As other countries at the same stage of development, Morocco is also undergoing rapid urbanization, which results in increased anthropogenic air-pollution levels. The geographical location of the country makes it vulnerable to both short and longterm impacts of climate change. Despite the elevated risk and vulnerability, the current air pollution and climate change monitoring strategy of the country needs improvement. The present paper introduces a novel strategy to improve the air quality monitoring system in the capital combined with developing a project-based climate education curriculum, and promises to raise public awareness to the risks related to air pollution and climate change. The sustainability of the project is guaranteed by the low cost of instruments and the educational aspect which ensures that future experts are well-trained for the maintenance of the system that we propose to install.

Herpes simplex virus 1 (HSV-1) infects the cornea and caused blinding ocular disease. In the present study, we evaluated whether and how a novel engineered version of fibroblast growth factor-1 (FGF-1), designated as TTHX1114, would reduce the severity of HSV-1-induced and recurrent ocular herpes in the mouse model. The efficacy of TTHX1114 against corneal keratopathy was assessed in B6 mice following corneal infection with HSV-1, strain McKrae. Starting day one post infection (PI), mice received TTHX1114 for 14 days. The severity of primary stromal keratitis and blepharitis were monitored up to 28 days PI. Inflammatory cell infiltrating infected corneas were characterized up to day 21 PI. The severity of recurrent herpetic disease was quantified in latently infected B6 mice up to 30 days post-UVB corneal exposure. The effect of TTHX1114 on M1 and M2 macrophage polarization was determined in vivo in mice and in vitro on primary human monocytes-derived macrophages. Compared to HSV-1 infected non-treated mice, the infected and TTHX1114 treated mice exhibited significant reduction of primary and recurrent stromal keratitis and blepharitis, without affecting virus corneal replication. The therapeutic effect of TTHX1114 was associated with a significant decrease in the frequency of M1 macrophages infiltrating the cornea, which expressed significantly lower levels of pro-inflammatory cytokines and chemokines. This polarization toward M2 phenotype was confirmed in vitro on human primary macrophages. This pre-clinical finding suggests use of this engineered FGF-1 as a novel immunotherapeutic regimen to reduce primary and recurrent HSV-1-induced corneal disease in the clinic.

This paper presents a molecular characterization of the interaction between the SARS-CoV-2 envelope (E) protein and TLR2. We demonstrated that the E protein, both as a recombinant soluble protein and as a native membrane protein associated with SARS-CoV-2 viral particles, interacts physically with the TLR2 receptor in a specific and dose-dependent manner. Furthermore, we showed that the specific interaction with the TLR2 pathway activates the NF-κB transcription factor and stimulates the production of the CXCL8 inflammatory chemokine. In agreement with the importance of NF-κB in the TLR signaling pathway, we showed that the chemical inhibition of this transcription factor leads to significant inhibition of CXCL8 production, while the blockade of the P38 and ERK1/2 MAP kinases only results in partial CXCL8 inhibition. Overall, our findings propose the envelope (E) protein as a novel molecular target for COVID-19 interventions: either (i) by exploring the therapeutic effect of anti-E blocking/neutralizing antibodies in symptomatic COVID-19 patients, or (ii) as a promising non-spike SARS-CoV-2 antigen candidate for inclusion in the development of next-generation prophylactic vaccines against COVID-19 infection and disease.

Infectious disease: A leap forward for disease models Rabbits offer a powerful complement to rodents as a model for studying human immunology, disease pathology, and responses to infectious disease. A review from Pedro Esteves at the University of Porto, Portugal, Rose Mage of the National Institute of Allergy and Infectious Disease, Bethesda, USA and colleagues highlights some of the areas of research where rabbits offer an edge over rats and mice. Rabbits have a particularly sophisticated adaptive immune system, which could provide useful insights into human biology and produce valuable research and clinical reagents. They are also excellent models for studying - infectious diseases such as syphilis and tuberculosis, which produce pathology that closely resembles that of human patients. Rabbit-specific infections such as myxomatosis are giving researchers insights into how pathogens and hosts can shape each other’s evolution.

We recently reported that the human immunodeficiency virus type-1 (HIV-1) Tat protein induced the expression of programmed death ligand-1 (PD-L1) on dendritic cells (DCs) through a TLR4 pathway. However, the underlying mechanisms by which HIV-1 Tat protein induces the abnormal hyper-activation of the immune system seen in HIV-1 infected patients remain to be fully elucidated. In the present study, we report that HIV-1 Tat protein induced the production of significant amounts of the pro-inflammatory IL-6 and IL-8 cytokines by DCs and monocytes from both healthy and HIV-1 infected patients. Such production was abrogated in the presence of anti-TLR4 blocking antibodies or soluble recombinant TLR4-MD2 as a decoy receptor, suggesting TLR4 was recruited by Tat protein. Tat-induced murine IL-6 and CXCL1/KC a functional homologue of human IL-8 was abolished in peritoneal macrophages derived from TLR4 KO but not from Wt mice, confirming the involvement of the TLR4 pathway. Furthermore, the recruitment of TLR4-MD2-CD14 complex by Tat protein was demonstrated by the activation of TLR4 downstream pathways including NF-κB and SOCS-1 and by down-modulation of cell surface TLR4 by endocytosis in dynamin and lipid-raft-dependent manners. Collectively, these findings demonstrate, for the first time, that HIV-1 Tat interacts with TLR4-MD2-CD14 complex and activates the NF-κB pathway, leading to overproduction of IL-6 and IL-8 pro-inflammatory cytokines by myeloid cells from both healthy and HIV-1 infected patients. This study reveals a novel mechanism by which HIV-1, via its early expressed Tat protein, hijacks the TLR4 pathway, hence establishing abnormal hyper-activation of the immune system.

Herpes simplex viruses type 1 and type 2 (HSV-1 and HSV-2) are amongst the most common human infectious viral pathogens capable of causing serious clinical diseases at every stage of life, from fatal disseminated disease in newborns to cold sores genital ulcerations and blinding eye disease. Primary mucocutaneous infection with HSV-1 & HSV-2 is followed by a lifelong viral latency in the sensory ganglia. In the majority of cases, herpes infections are clinically asymptomatic. However, in symptomatic individuals, the latent HSV can spontaneously and frequently reactivate, reinfecting the muco-cutaneous surfaces and causing painful recurrent diseases. The innate and adaptive mucosal immunities to herpes infections and disease remain to be fully characterized. The understanding of innate and adaptive immune mechanisms operating at muco-cutaneous surfaces is fundamental to the design of next-generation herpes vaccines. In this paper, the phenotypic and functional properties of innate and adaptive mucosal immune cells, their role in antiherpes immunity, and immunopathology are reviewed. The progress and limitations in developing a safe and efficient mucosal herpes vaccine are discussed.

The best hope of controlling the herpes simplex virus type 1 and type 2 (HSV-1 and HSV-2) pandemic is the development of an effective vaccine. However, in spite of several clinical trials, starting as early as 1920s, no vaccine has been proven sufficiently safe and efficient to warrant commercial development. In recent years, great strides in cellular and molecular immunology have stimulated creative efforts in controlling herpes infection and disease. However, before moving towards new vaccine strategy, it is necessary to answer two fundamental questions: (i) why past herpes vaccines have failed? (ii) Why the majority of HSV seropositive individuals (i.e., asymptomatic individuals) are naturally “protected” exhibiting few or no recurrent clinical disease, while other HSV seropositive individuals (i.e., symptomatic individuals) have frequent ocular, orofacial, and/or genital herpes clinical episodes? We recently discovered several discrete sets of HSV-1 symptomatic and asymptomatic epitopes recognized by CD4+ and CD8+ T cells from seropositive symptomatic versus asymptomatic individuals. These asymptomatic epitopes will provide a solid foundation for the development of novel herpes epitope-based vaccine strategy. Here we provide a brief overview of past clinical vaccine trials, outline current progress towards developing a new generation “asymptomatic” clinical herpes vaccines, and discuss future mucosal “asymptomatic” prime-boost vaccines that could optimize local protective immunity.