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O mormo é uma zoonose reemergente causada pelo patógeno Burkholderia mallei, uma bactéria intracelular facultativa que apresenta alto potencial de disseminação. Essa doença acomete principalmente os cavalos, os burros, as mulas, e com menor frequência os seres humanos. Em geral, a transmissão pode ocorrer por inoculação cutânea, por inalação ou por contato direto com animais infectados. As infecções podem variar de agudas a crônicas e apresentar um amplo espectro de manifestações, desde casos assintomáticos até complicações graves e fatais. O mormo é uma doença negligenciada e subnotificada em várias partes do mundo. O desenvolvimento de pesquisas sobre a soroprevalência dessa zoonose em animais e humanos são fundamentais para que políticas públicas de saúde sejam realizadas de forma eficaz pelos órgãos competentes locais visando a erradicação dessa doença. O diagnóstico do mormo pode ser realizado por várias metodologias diferentes, porém, recomenda-se a utilização de métodos rápidos, sensíveis e específicos. Nesse contexto, os métodos moleculares de PCR e LAMP aparecem como ótimas opções. Por fim, é fundamental que os setores de saúde animal e humana atuem de forma conjunta no enfrentamento dessa zoonose numa perspectiva de saúde única (One Health). Além disso, maior divulgação e conscientização sobre a ocorrência do mormo no Brasil e no mundo contribuirão para que medidas de prevenção, controle e investigação possam ser realizadas, reduzindo assim, os prejuízos causados por essa doença.

RESUMO Para estudar as lesões anátomo-histopatológicas e suas variações na infecção experimental de cobaias pela Burkholderia mallei, foram utilizados 60 animais incluídos em 5 grupos formados por 12 animais cada. Cada grupo foi inoculado com uma amostra de campo de B. mallei isolada do conteúdo purulento de nódulos cutâneos fechados de eqüídeos com mormo. Para o estudo anátomohistopatológico foram eutanasiados 2 animais por grupo a cada 48h após a inoculação. As lesões macroscópicas mais freqüentes foram congestão e hemorragia pulmonar, abscessos hepáticos, aderência da túnica vaginal, túnica vaginal hiperêmica e congesta, vaginalite purulenta e testículos hemorrágicos. O exame histológico revelou congestão, vacuolização difusa e necrose dos hepatócitos; congestão cortical e medular e vacuolização das células epiteliais; edema, congestão e hemorragias nas túnicas vaginal e albugínea, além de formação de piogranulomas; processo degenerativo tubular com descamação celular, presença de macrófagos e debris celulares, além de células sinciciais na luz dos túbulos do testículo e epidídimo. Os achados macro e microscópicos observados neste estudo indicam uma possível variação na virulência das amostras de B. mallei isoladas e que a prova de Strauss é um teste bastante sensível e que pode ser empregado no diagnóstico do mormo. ABSTRACT A histopatological study was conducted in guinea pigs inoculated experimentally with a Burkholderia mallei strain isolated from equides from farms located in Pernambuco State, Brazil. The microbiological aspects of diagnosis of glanders in horses from these farms also were studied. The B. mallei strain was obtained from nasal discharge and aspirated fluids from closed subcutaneous nodules from horses with clinical signs of glanders. The material was collected and transferred to a sterile-screw-capped tube for transport to the laboratory where bacterial isolation and biochemical tests were carried out. For the clinical and histopathological study 5 groups with 12 male guinea pigs were used to verify the injuries caused by B. mallei. During the course of the study (1-10 days post-infection) clinical evaluation was carried out in all animals. At each 48h 2 inoculated animals were euthanaized and samples from lungs, liver, spleen, kidney and testis were collected to verify gross or histologic lesions. Strauss test was positive in all animals 48h. Gross examination showed pulmonary, liver and testis injuries characterized by congestion and hemorrhages of lungs, liver abscess and changes of vaginal layer varied from vaginalitis to hemorrhages in this tissue. Microscopic lesions were observed in liver, kidney and especially in testis with the pyogranulom located not only in the albuhin but also in vaginal layer degenerative changes.

9490 Mormo maura (Linnaeus, 1758) Münchenstein (BL), Merian Gärten, 4.9.2013 / 10.9.2014. Diese grosse Eulenfalterart lebt bevorzugt in eher feuchten Gebieten mit Gehölzen entlang von Bächen und Gewässern. Die Art wird nicht häufig nachgewiesen, da die Falter kaum Lichtquellen anfliegen., Published as part of Joos, R Enato, Fritsch, Dieter, Bryner, Rudolf, Billen, Wolfgang & Wicki, Christoph, 2018, Vielfalt der nachtaktiven Gross- und Kleinschmetterlinge in zwei Parkanlagen bei Basel, pp. 57-71 in Entomo Helvetica 11 on page 63, DOI: 10.5169/seals-986024, http://zenodo.org/record/8034307

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2018-06-12T14:14:59Z No. of bitstreams: 1 Cecilia Maria de Souza Leao e Silva.pdf: 1493945 bytes, checksum: 8bcc1ab9e28f749b73d9d7ff2cbaa285 (MD5) Made available in DSpace on 2018-06-12T14:16:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cecilia Maria de Souza Leao e Silva.pdf: 1493945 bytes, checksum: 8bcc1ab9e28f749b73d9d7ff2cbaa285 (MD5) Previous issue date: 2018-02-28 Glanders is a highly contagious disease caused by Burkholderia mallei solipeds, a Gram - negative bacterium, not motility and aerobic coccobacillus, primarily infecting horses, donkeys and mules, though humans are considered accidental hosts . The Burkholderia mallei is listed in the list of the World Organisation for Animal Health (OIE) as an important public health disease, and due to its high potential for infection is referred to as a bioterrorism agent. According to the OIE comprises the serological diagnosis, allergy testing and bacterial isolation, and complement fixation, the official test to be performed for trade of animals. This method of diagnosis is recommended in Brazil by Instruction Nº 22, 16 of march of 2018, Ministry of Agriculture, Livestock and Food Supply by its high sensitivity and specificity. According to the OIE comprises the serological diagnosis, allergy testing and bacterial isolation, and complement fixation, the official test to be performed for trade of animals and bacterial isolation is considered gold test for identification of the agent. From the bacterial isolation the presence of Burkholderia was identified in 11 samples from epidemiological surveillance in the disease outbreaks. Sequencing demonstrated the circulation of the strains Burkholderia pseudomallei and Burkholderia mallei in Brazilian territory where Mormo is present. The results show the differentiation of the circulating strains in the national territory and provides the knowledge of their epidemiology and virulence, later assisting in formulations of disease control and eradication measures O Mormo constitui-se em uma doença altamente contagiosa dos solípedes causada pela Burkholderia mallei, uma bactéria Gram-negativa, não móvel e cocobacilo aeróbio, infectando primariamente equínos, asininos e muares, entretanto humanos são considerados hospedeiros acidentais. Burkholderia mallei está relacionada na lista de doenças da Organização Mundial para a Saúde Animal (OIE) como doença de importância de saúde pública, e devido ao seu alto potencial de infecção é referenciada como agente de bioterrorismo. De acordo com a OIE o diagnóstico compreende o teste sorológico, alérgico, isolamento bacteriano e testes de biologia molecular, sendo a fixação do complemento, o teste oficial a ser realizado para trânsito de animais. O Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento, através da Portaria Nº 22, de 16 de março de 2018 do Ministério, utiliza o teste da Fixação do Complemento e Elisa para triagem dos animais, sendo aqueles reagentes, testados posteriormente com o Western Blotting para confirmação. Neste trabalho, temos como objetivo identificar filogeneticamente as cepas circulantes em território nacional para os animais suspeitos de Mormo. A partir do isolamento bacteriano foram identificados 08 resultados compatíveis com a Burkholderia em amostras oriundas de vigilância epidemiológica em áreas focos da doença. O sequenciamento demonstrou a circulação das cepas Burkholderia pseudomallei e Burkholdeia mallei, em território brasileiro onde há presença do Mormo. Os resultados mostram a diferenciação das estirpes circulantes em território nacional e proporciona o conhecimento de sua epidemiologia e virulência, auxiliando posteriormente em formulações de medidas para controle e erradicação da enfermidade.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2018-02-22T14:08:58Z No. of bitstreams: 1 Paulo Castelo Branco de Gouveia Filho.pdf: 1165549 bytes, checksum: 16f843e48f36122b99e932a78381d634 (MD5) Made available in DSpace on 2018-02-22T14:08:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Paulo Castelo Branco de Gouveia Filho.pdf: 1165549 bytes, checksum: 16f843e48f36122b99e932a78381d634 (MD5) Previous issue date: 2017-02-24 Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq Glanders is an often fatal zoonosis that affects horses, donkeys and mules, caused by Burkholderia mallei. Complement Fixation (CF) is the test prescribed by the World Organization for Animal Health (OIE) for its diagnosis. This work was conducted with the objective of evaluating the performance of CF using antigen produced with Brazilian strains of B. mallei (Biovetech, Recife Brazil) for the diagnosis of glanders compared to the antigen c.c.pro (GmbH, Oberdorla, Germany), which employs strains from Yugoslavia, India and Indonesia. The tests were performed in parallel using the protocol of cold incubation (4 ° C, 12 hours) of the serum, complement and antigen mixture. Of the 259 sera evaluated, 102 and 133 presented positive and negative results, respectively, in both tests. Twenty-four negative sera in the c.c.pro antigen test showed a positive result in the Biovetech antigen test. The calculated concordance index kappa was 0.81, considered almost perfect. O mormo é uma zoonose frequentemente fatal que afeta equinos, asininos e muares, causada pela Burkholderia mallei. A Fixação do Complemento (FC) é o teste prescrito pela Organização Mundial de Saúde Animal (OIE) para seu o diagnóstico. Este trabalho foi conduzido com o objetivo de avaliar o desempenho da FC empregando antígeno (Biovetech, Recife Brasil), produzido com cepas brasileiras de B. mallei para diagnóstico do mormo comparativamente ao antígeno c.c.pro (GmbH, Oberdorla, Alemanha), que emprega cepas da Iuguslávia, India e Indonésia. Os testes foram realizados em paralelo utilizando o protocolo de incubação a frio (4ºC, 12 horas) da mistura soro, complemento e antígeno. Dos 259 soros avaliados, 102 e 133 apresentaram resultado positivo e negativo, respectivamente, em ambos os testes. Vinte e quatro soros negativos no teste com antígeno c.c.pro apresentaram resultado positivo no teste com antígeno Biovetech. O índice de concordância ajustada kappa calculado foi 0,81, considerado quase perfeito.

The Mormon metalmark (Apodemia mormo) is widely distributed throughout western North America. The species exists in two peripheral populations in Canada and is listed as threatened in Saskatchewan and endangered in British Columbia. In Saskatchewan, this butterfly relies on Eriogonum pauciflorum for larval food and as its primary nectar source; however, presence of its host plant is insufficient to define habitats actually utilized by the butterfly. We investigated microhabitat characteristics that might explain habitat use of A. mormo adults using 102 host plant quadrats in which the butterfly was occupied (present) or unoccupied (absent) in Grasslands National Park and the Val Marie Community Pasture, Saskatchewan. Linear discriminant analysis demonstrated significant differences between occupied and unoccupied quadrats. Apodemia mormo was found disproportionately in quadrats with a combination of the following variables: higher percent bare ground and soil pH, steeper slope, southerly to sout...

To assess the potency of the PPD-mallein produced in Brazil, five animals were from a property identified as a focus of glanders. These animals had suggestive clinical signs of the disease and the other five, from a property free from glanders, showed no clinical signs and were serology negative (control group). PPD-mallein from Burkholderia mallei was obtained by precipitation with trichlo-roa-cetic acid and ammonium sulfate. The animals were inoculated according to the criteria established by Department of Agriculture, Livestock and Supply (MAPA) for the diagnosis of glanders. After 48 h of application of PPD-mallein, there was swelling in the area of application, presence of ocular secretion and tears in sick animals. The control group showed no inflammatory reaction at the site of inoculation of PPD-mallein. This immunogen produced in Brazil and still being tested was effective for identifying the infection in true positive animals and excluding the truly negative ones, being a new possibility for diagnosis and control of glanders.

Objetivou-se com este trabalho realizar o estudo bioquímico e molecular de amostras de Burkholderia mallei isoladas de eqüídeos com diagnóstico clínico e sorológico para o mormo e provenientes da Região Metropolitana do Recife-PE e Zona da Mata dos Estados de Alagoas e Pernambuco. Foram realizadas as técnicas microbiológicas para o isolamento e identificação fenotípica de B. mallei e as técnicas moleculares de ribotipagem-PCR e RAPD-PCR. Das oito amostras estudadas, quatro apresentaram pequenas variações fenotípicas. Nas técnicas moleculares, as amostras formaram quatro grupos de diferentes perfis ribotípicos, demonstrando também quatro perfis genotípicos. Houve associação nos resultados da Ribotipagem-PCR e RAPD-PCR. As variações nos perfis ribotípicos e genotípicos foram associadas às diferentes regiões estudadas. De acordo com os resultados obtidos, conclui-se que as pequenas variações bioquímicas não estão associadas aos diferentes perfis moleculares e que essas diferenças demonstram uma heterogeneidade que está associada à procedência das amostras, indicando que a infecção nos animais ocorre por clones diferentes das amostras analisadas. The objective of this paper was to study the molecular performance and phenotypic characterization of Burkholderia mallei isolated from horses with clinical and serological diagnosis of glanders, originating from the Metropolitan District of Recife and Zona da Mata of Pernambuco and Alagoas. The isolation and biochemical identification of B. mallei was carried out by microbiological and molecular techniques of PCR-fingerprinting and RAPD-PCR. From the eight samples studied, four showed little phenotype variations. In the molecular tests, the samples formed 4 groups of different ribotype profiles and 4 genotype profiles. There was some association of PCR-fingerprinting with RAPD-PCR results. It was concluded that the slight biochemical variations were not associated with different molecular profiles. They also indicated that these differences show heterogeneity associated with the origin of the sample, indicating that the infection was caused by clones of different strains and that the polymorphism of DNA observed could make it difficult to choose one standard strain for an immune prophylactic treatment of glanders.

Designing reserves that preserve the habitat of many coexisting and threatened species often involves use of conservation surrogates, such as umbrella species. Typically, animals with legal protection are used as umbrella species, and these selections are overwhelmingly vertebrates. The tacit assumption that vertebrates automatically serve as conservation umbrellas for invertebrates rarely has been justified. The California Gnatcatcher ( Polioptila californica, Muscicapidae), is a federally listed and endangered species in the United States and has been used as an umbrella species for the conservation of coastal sage scrub in southern California. Conservation planning efforts for this community follow a general paradigm of using vertebrate-based reserve designs as de facto protection for invertebrate cohabitants. To test the effectiveness of this strategy, I surveyed 50 patches of coastal sage scrub in San Diego County for three species of Lepidoptera: Mormon metalmark ( Apodemia mormo, Riodinidae), Bernardino blue, ( Euphilotes bernardino, Lycaenidae), and Electra buckmoth ( Hemileuca electra, Saturniidae). The presence of the gnatcatcher was a poor indicator of the presence of these insects. Only the largest or most recently separated habitat patches supported all three species of Lepidoptera, but the gnatcatcher was present on nearly every site, regardless of size. Results indicate that vertebrates do not automatically function as umbrella species for invertebrate cohabitants. Reserve designs based on vertebrate umbrella species, which assume invertebrates will be protected, may result in the loss of a large portion of invertebrate diversity. Resumen: El diseno de reservas que preservan el habitat de muchas especies coexistentes y amenazadas a menudo implica el uso de abstracciones, tal como las especies sombrilla. Tipicamente, animales protegidos legalmente son utilizados como especies sombrilla, y estas selecciones son, en sugran mayoria, vertebrados. Raramente se ha justificado el superesto tacito de que los vertebrados automaticamente funcionan como sombrillas de conservacion para invertebrados. La Perlita de California ( Polioptila californica, Muscicapidae), es una especie enlistada federalmente y en peligro en los Estados Unidos y se ha utilizado como una especie sombrilla para la conservacion del matorral de salvia costero en el sur de California. Los esfuerzos de planificacion de la conservacion de esta comunidad siguen un paradigma general de utilizar reservas disenadas con base en vertebrados como proteccion de hecho para cohabitantes invertebrados. Para probar la efectividad de esa estrategia, busque tres especies de Lepidoptera: Apodemia mormo ( Riodinidae), Euphilotes bernardino ( Lycaenidae) y Hemileuca electra (Saturniidae) en 50 parches de matorral de salvia costero en el Condado de San Diego. La presencia de la perlita fue un indicador pobre de la presencia de estos insectos. Las tres especies de mariposas solo estuvieron presentes en los parches mas grandes o los separados mas recientemente, pero la perlita estuvo presente en casi todos los sitios, independientemente del tamano. Los resultados indican que los vertebrados no funcionan automaticamente como especies sombrilla para cohabitantes invertebrados. El diseno de reservas fundamentado en especies de vertebrados sombrilla, que asumen que los invertebrados seran protegidos, puede resultar en la perdida de una porcion grande de la diversidad de invertebrados.

Objetivou-se com esta revisão relatar os aspectos epidemiológicos, etiopatológicos, clínicos,diagnóstico e controle do mormo em eqüídeos para oferecer aos clínicos um suporte para oreconhecimento desta importante enfermidade reemergente no Brasil.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-07-19T14:08:54Z No. of bitstreams: 1 Cecilia Maria de Souza Leao e Silva.pdf: 1235721 bytes, checksum: fa10ebf32171212966df2a23383f5075 (MD5) Made available in DSpace on 2016-07-19T14:08:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cecilia Maria de Souza Leao e Silva.pdf: 1235721 bytes, checksum: fa10ebf32171212966df2a23383f5075 (MD5) Previous issue date: 2014-02-21 Glanders is a highly contagious disease caused by Burkholderia mallei solipeds, a Gram - negative bacterium, not motility and aerobic coccobacillus, primarily infecting horses, donkeys and mules, though humans are considered accidental hosts . The Burkholderia mallei is listed in the list of the World Organisation for Animal Health (OIE) as an important public health disease, and due to its high potential for infection is referred to as a bioterrorism agent. According to the OIE comprises the serological diagnosis, allergy testing and bacterial isolation, and complement fixation, the official test to be performed for trade of animals. This method of diagnosis is recommended in Brazil by Normative Instruction Nº 24 Ministry of Agriculture, Livestock and Food Supply by its high sensitivity and specificity. Serological qPCR showed 76 (16.7%) positivity and a sensitivity of 24.7% and a specificity of 89 % when compared to the gold standard western blotting used. The results show that the use of the qPCR may be used as a complementary technique to other methods for rapid and accurate identification of Burkholderia mallei. About statistical results showed that the ELISAi showed the highest sensitivity (35.5%) and specificity (97.6 %) when compared to western blotting. The results show the importance of preparation and use of antigens that are produced with local strains, resulting in higher sensitivity and specificity of the test. O Mormo constitui-se em uma doença altamente contagiosa dos solípedes causada pela Burkholderia mallei, uma bactéria Gram-negativa, não móvel e cocobacilo aeróbio, infectando primariamente cavalos, burros e mulas, entretanto humanos são considerados hospedeiros acidentais. A Burkholderia mallei está relacionada na lista de doenças da Organização Mundial para a Saúde Animal (OIE) como doença de importância de saúde pública, e devido ao seu alto potencial de infecção é referenciada como agente de bioterrorismo. De acordo com a OIE o diagnóstico compreende o teste sorológico, alérgico e o isolamento bacteriano, sendo a fixação do complemento, o teste oficial a ser realizado para trânsito de animais. Este método de diagnóstico está preconizado no Brasil pela Instrução Normativa Nº 24 do Ministério da Agricultura Pecuária e Abastecimento por apresentar alta sensibilidade e especificidade. A qPCR sorológica apresentou 76 (16,7%) positividade e uma sensibilidade de 24,7% e especifidade de 89% quando comparado ao western blotting padrão ouro utilizado.. Os resultados mostram que a utilização da qPCR pode ser utilizada como técnica complementar de outras metodologias para identificação rápida e precisa da Burkholderia mallei. Em relação aos testes sorológicos, os resultados estatísticos mostraram que o ELISAi apresentou a maior sensibilidade (35,5%) e especificidade (97,6%) quando comparado ao western blotting. Os resultados mostram a necessidade da preparação e utilização de antígenos que sejam produzidos com cepas locais, determinando maior sensibilidade e especificidade ao teste.

Com base em aspectos clínico-patológicos, epidemiológicos e sorológicos, bem como pelo isolamento de Burkholderia mallei, diagnosticaram-se focos de mormo em eqüídeos na Zona da Mata dos Estados de Pernambuco e Alagoas. Clinicamente observaram-se hipertermia, respiração ruidosa, inapetência, emagrecimento progressivo até caquexia, congestão nasal e descarga mucopurulenta, erosões, úlceras e cicatrizes na mucosa nasal. Os linfonodos mandibulares e cervicais superficiais apresentavam-se aumentados de volume, com abscessos e fístulas exsudando material purulento. Na pele, ao longo dos vasos linfáticos, havia formação de nódulos firmes e abscessos que, nos casos crônicos, fistulavam e ulceravam deixando cicatrizes estrelares. A histopatologia dos nódulos de diversos sítios, tanto dos eqüídeos como dos cobaios utilizados na prova de Straus, revelou lesões granulomatosas e piogranulomas. Os dados deste estudo evidenciam a emergência da doença nesta área e permitem recomendar inquéritos soro-epidemiológicos nos Estados de ocorrência dos surtos e nos Estados limítrofes. Based on clinical-pathological, epidemiological and serological aspects, as well as by the isolation of Burkholderia mallei, foci of glanders were diagnosed in equids of the "Zona da Mata" in the states of Pernambuco and Alagoas. Clinically there was hyperthermia, noisy respiration, loss of appetite, progressive loss of weight leading to emaciation, nasal congestion and muco-purulent discharge, erosions, ulcers and scars of the nasal mucosa. The size of submaxillary and cervical lymphonodes was increased, which contained abscesses and fistules exudating purulent material. In the skin, accompanying the lymph vessels, there were firm nodules and abscesses which in chronic cases fistulated and ulcerated leaving stellar scars. The histopathology of the nodules at various sites, from the horses as well as from the guinea-pigs used for the Strauss test, showed granulomatous lesions and pyogranulomas. The results of this study showed that glanders in the region was emerging and further sero-epidemiological studies are urgent for the eradication of the disease.

The Burkholderia genus holds over 40 species of Gram-negative bacteria, including genomovars early identified as part of B. cepacia complex (Bcc), besides B. mallei (causative agent of equine glanders) and B. pseudomallei (causative agent of human melioidosis or pseudoglanders). Natural B. mallei and B. pseudomallei zoonotic infections have largely been eradicated/controlled and human infection is extremely rare, but renewed interest in these organisms parallels their classification as category B biothreat agents, the lack of any effective vaccine available for them and the serious risk of aerosol transmission, a great concern for public health surveillance. Both diseases are very ancient, but relatively little is known about details concerning virulence mechanisms in glanders and melioidosis. Here we apply bioinformatics resources and tools to investigate B. mallei and B. pseudomallei sequenced genomes, their putative genes (and coded proteins) in a pathogenomics approach aiming at the in silico identification of virulence genes potentially associated with a key-lesion of both diseases, the granuloma (or piogranuloma) formation. Granulomas are localized chronic inflammatory responses that are able to keep the pathogen inside of them and are, thus, critical sites of infection. Our results help to build a panel of eighteen (18) putative ortologs, which can be excellent targets for future experimental screenings that might lead to genetic characterizations of their functions in terms of granulomatous genesis within Burkholderia infections. O gênero Burkholderia constitui mais de 40 espécies, incluindo genomovares entre bactérias identificadas anteriormente como parte do complexo B. cepacia (Bcc), além de B. mallei (agente causal do mormo) e a B. pseudomallei (agente causal da melioidose ou pseudomormo). B. mallei e B. pseudomallei foram escolhidos como alvos deste trabalho exatamente pela incrível capacidade zoonótica (de certo modo, compartilhada na letalidade potencial para humanos e animais) e risco iminente à saúde pública em geral, assim como também por serem potenciais agentes bioterroristas, principalmente pela habilidade de infecção por aerossóis e a inexistência de vacinas efetivas. Ressalta-se, aqui, o caráter de re-emergência das zoonoses em geral, não só no Brasil, mas no mundo inteiro, em que aproximadamente 75% das doenças infecciosas humanas recém-emergentes são de origem animal; com a incrível porcentagem de cerca 60% de todos os patógenos humanos serem, em essência, zoonóticos. Apesar da relativa antiguidade das duas doenças, pouco se sabe sobre os detalhes e mecanismos de virulência e patogenicidade em mormo e melioidose. Neste trabalho foram usadas vários recursos e ferramentas de Bioinformática para investigar genes e produtos gênicos putativos em cromossomos e replicons seqüenciados dos genomas de B. mallei e B. pseudomallei, numa abordagem patogenômica visando a identificação de genes representativos de fatores de virulência associados com uma lesão-chave nas duas doenças, a formação de granulomas/piogranulomas. Granulomas são respostas localizadas de inflamação crônica capazes de reter os patógenos em seu interior, sendo, assim, sítios estratégicos da infecção. Os resultados in silico ajudaram a formar um painel preliminar contendo dezoito (18) ortólogos putativos, excelentes alvos para futuros screenings experimentais que venham a caracterizar precisamente suas funções na atividade granulomatogênica de Burkholderia.

O Mormo é uma doença dos solípedes, causada pela bactéria Burkholderia mallei. Entre os testes para diagnóstico do Mormo, destaca-se o teste alérgico da maleína. No presente trabalho,buscou-se purificar o grupo proteico constitutivo da maleína de modo a separar as frações proteicas com peso molecular acima de 350kDa, onde se acredita residir a atividade imunoalérgica específica desse reagente. O antígeno foi purificado em um sistema de filtraçãotangencial equipado com membrana de celulose regenerada com ponto de corte de 300kDa, a partir de um concentrado proteico produzido pela precipitação do sobrenadante de culturas de B. mallei pela adição de ácido tricloroacético. As frações purificadas foram caracterizadas porHPLC e revelaram possuir peso molecular na faixa de 660kDa. À eletroforese, essas frações apresentaram peso molecular entre 268 e 460kDa. As maleínas experimentais semi-purificadas tiveram sua potência testada frente a um padrão internacional pela inoculação intradérmica de equinos sensibilizados com uma suspensão inativada de B. mallei. A especificidade dos antígenos foi avaliada pela inoculação em controles negativos. As médias das reações produzidas pelas maleínas experimentais e pela maleína padrão nos animais sensibilizados foram de 6,41mm e 3,07mm, respectivamente. No grupo controle, esses valores foram de 1,72mm e 0,61mm, respectivamente. O tratamento estatístico dos dados obtidos dos testes de potência e especificidade revelou que as maleínas experimentais são mais potentes que a maleína padrão e possuem potencial para serem utilizadas como teste auxiliar no diagnóstico do Mormo. Glanders is a disease of the equid, caused by the bacteria Burkholderia mallei. One of the most frequently used tests for diagnosis of Glanders is the allergic test of mallein. In the present work it was sought to purify the protein group which makes up for mallein, in an effort to segregatethe protein fractions with molecular weight above 350kDa, which is believed to hold the specific immuno-alergic activity of this reagent. The antigen was purified from a protein preconcentrate using a tangential-flow filtration system fitted with a regenerated cellulosemembrane with a molecular weight limit of 300kDa. The purified fractions were characterized by HPLC and revealed to have a molecular weight of about 660kDa. In the electrophoresis, these values stayed between 268 and 460kDa. The potency of the semi-purified experimental malleins was tested in comparison with an international standard by the intradermicinoculation of horses sensitized by an inactivated suspension of B. mallei. The specificity of the antigen was evaluated by the inoculation of negative controls. The means of the reactions elicited by the experimental malleins and by the standard in the sensitized horses were 6.41mmand 3.07mm, respectively. In the control group, these values were 1.72mm and 0.61mm, respectively. The statistical analysis of the potency and specificity tests showed that the experimental malleins have a good potential to be used as an auxiliary test for the diagnosis of Glanders.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-10-19T17:24:07Z No. of bitstreams: 1 Marcilia Maria Alves de Souza.pdf: 1643173 bytes, checksum: de92227ec0b9b02a73e95528ab1282d2 (MD5) Made available in DSpace on 2016-10-19T17:24:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marcilia Maria Alves de Souza.pdf: 1643173 bytes, checksum: de92227ec0b9b02a73e95528ab1282d2 (MD5) Previous issue date: 2012-02-01 Glanders is a disease that affects equids, produced by Burkholderia mallei, a coccobacillus, gram-negative, immobile, and not sporulated anaerobic (Yabuuchi et al., 1992), which can be transmitted to humans, and his agent used as a biological weapon (Ulrich, et al, 2006). Reemerging disease in Brazil since 1999, has been the subject of discussion regarding the serological diagnosis. Complement Fixation Test (CFT) is recommended in the examination program for control and eradication of glanders by the Ministry of Agriculture, Livestock and Supply (BRAZIL, 2004) and the World Organization for Animal Health (OIE) for international trade (OIE 2008) The Objective of this study was to evaluate the results of the Complement Fixation Test using two antigens commercially available and two methods of incubation in sera of horses from a property in Pernambuco. O mormo é uma doença que acomete equídeos, produzida pela Burkholderia mallei, um cocobacilo, Gram-negativo, imóvel, anaeróbio e não esporulado (YABUUCHI et al., 1992), que pode ser transmitida para o homem, e seu agente utilizado como arma biológica (ULRICH, et al, 2006). Doença reemergente no Brasil desde 1999 tem sido motivo de discussão, no que concerne ao diagnóstico sorológico. Fixação do Complemento (FC) é o exame preconizado no programa de controle e erradicação do mormo, pelo Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (BRASIL, 2004) e pela Organização Mundial de Saúde Animal (OIE) para trânsito internacional (OIE 2008). Objetiva-se com este trabalho, avaliar os resultados do Teste de Fixação do Complemento frente a dois antígenos comercialmente disponíveis utilizando dois métodos de incubação, em soros de equinos de uma propriedade em Pernambuco.

Temporal and demographic aspects of the growth of Botrychium gallicomontanum and B. mormo were studied for 2 yr. A total of 219 B. gallicomontanum and 412 B. mormo plants were monitored in a prairie and maple-basswood forest, respectively. Growth events were divided into four stages: leaf emergence, leaf separation, spore release, and senescence. Botrychium gallicomontanum emerged in April, peaked during the first week of June, and declined rapidly. The largest plants were found in late June and early July with a mean peak trophophore size of 4.0 ± 1.8 cm. Botrychium mormo emerged in June, and the population size peaked in early July. The largest plants occurred late in August with a mean peak trophophore size of 3.0 ± 1.1 cm. The mean season span, or period of emergence aboveground annually, for B. gallicomontanum and B. mormo was 7.7 ± 2.4 and 11.9 ± 3.5 wk, respectively. Late-emerging plants produced spores in shorter periods. The separation stage was prolonged in B. gallicomontanum plants, whereas B. mormo plants had a much longer separation stage. Phenological differences are related to different habitat parameters of grassland and forest. Understanding the phenology of these rare species will help us more accurately predict the impact of management practices.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-10-13T16:32:06Z No. of bitstreams: 1 Karla Patricia Chaves da Silva.pdf: 1396251 bytes, checksum: 8552def0e4e6ca947fd2a699f600a245 (MD5) Made available in DSpace on 2016-10-13T16:32:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Karla Patricia Chaves da Silva.pdf: 1396251 bytes, checksum: 8552def0e4e6ca947fd2a699f600a245 (MD5) Previous issue date: 2010-07-13 The objective this study produce and evaluate PPD-mallein with potential for application in the diagnosis of glanders from of the the production and purification of immunogenic proteins of B. mallei isolates from equines with glanders in Brazil. Were isolated and characterized phenotypically and by detecting the activity of proteases, polyphenol oxidases, esterases and determination of the resistance profile in vitro. Samples of B. mallei studied were susceptible to antimicrobial gentamicin, ciprofloxacin, norfloxacin, doxycycline and enrofloxacin and resistant to trimethoprim / sulfamethoxazole, amoxicillin and ampicillin. Was observed the activity of proteases, absence esterases polyphenyloxidase and bacterial growth resulted in toxic metabolites. For the production and purification of the protein partially mallein were used two strains of B. mallei Brazilian already characterized phenotypically and genotypically. Was inoculated broth samples Dorset-Henley to metabolize and get the bacterial proteins. Proteins were separated and precipitated with trichloroacetic acid and ammonium sulphate. The PPD-mallein were concentrated at 1.0 mg / mL and evaluation in guinea pigs previously sensitized with bacter were effective for identifying infection in animals truly positive and exclude the animals truly negative. Histological analysis of the application site of mallein revealed the development of Type IV hypersensitivity. Was evaluated the PPD-mallein about their power in five asinines with clinical signs, with bacteriological diagnosis and positive serology for glanders and five asinines negative in serology and bacteriology. The animals were tested according to the criteria established by paragraph IN nº24 regarding the diagnosis of glanders. After 48 hours of inoculation, there was swelling in the area of injection, presence of ocular discharge and tearing confirming the diagnosis of glanders. The other seronegative animals showed no inflammatory reaction at the site of inoculation of PPD-mallein. This immunogen produced and being tested in Brazil was effective being a new possibility for diagnosis and control of glanders in this country. Objetivou-se nesse estudo produzir e avaliar PPD-maleína com potencial para aplicação no diagnóstico do mormo a partir da purificação de proteínas imunogênicas de Burkholderia. mallei isoladas de equídeos com mormo no Brasil. As bactérias foram isoladas e caracterizadas fenotipicamente por meio da detecção da atividade de proteases, polifenoloxidases e esterases, além da determinação do perfil de resistência à antimicrobianos in vitro. Para produção e purificação parcial da maleína foram utilizadas duas estirpes de B. mallei brasileiras fenotípica e genotipicamente caracterizadas. Inoculou-se as amostras em caldo Dorset-Henley para metabolizar e obter as proteínas bacterianas. As proteínas foram separadas e precipitadas com ácido tricloroacético e sulfato de amônia. As PPDs maleína foram concentradas em 1,0mg/mL e na avaliação realizada em cobaios previamente sensibilizados com a bactéria foram eficazes na identificação dos animais verdadeiros positivos e na exclusão dos verdadeiros negativos. Avaliou-se a PPD-maleína quanto a sua potência em cinco asininos com sinais clínicos e diagnóstico bacteriológico e sorológico positivo para o mormo e em cinco asininos negativos na sorologia e bacteriologia. As amostras de B. mallei estudadas foram sensíveis à gentamicina, ciprofloxacina, norfloxacina, doxiciclina e enrofloxacina, e resistentes a trimetoprim/sulfametoxazol, amoxacilina e ampicilina. Observou-se a atividade de proteases, ausência de esterases e polifenoloxidades e o crescimento bacteriano em meio de cultura resultou em metabólitos tóxicos. A análise histológica do local de aplicação da maleína, em cobaias, revelou o desenvolvimento de hipersensibilidade do tipo IV. Os asininos foram testados de acordo com os critérios estabelecidos pela IN nº24 do Ministério de Agricultura Pecuária e Abastecimento referente ao diagnóstico do mormo. Após 48 horas da inoculação, observou-se edema na área da injeção, presença de secreção ocular e lacrimejamento, confirmando-se o diagnóstico do mormo. Os outros animais sorologicamente negativos não apresentaram reação inflamatória no local de inoculação da PPD-maleína. Esse imunógeno produzido e em fase de teste no Brasil é uma nova alternativa para o diagnóstico e controle do mormo no país.

The clinical, anatomical and histopatological findings of glanders diagnosis in donkeys in the state of Pernambuco-Brazil are reported. The animals were euthanized and necropsied, and evaluated for lesions in respiratory and lymphatic systems, confirming the disease by isolation of Burkholderia mallei and Strauss test.

The Burkholderia genus holds over 40 species of gram-negative bacteria, including genomovars early identified as part of B. cepacia complex (Bcc), besides B. mallei (causative agent of equine glanders) and B. pseudomallei (causative agent of human melioidosis or pseudoglanders). Natural B. mallei and B. pseudomallei zoonotic infections have largely been eradicated/controlled and human infection is extremely rare, but renewed interest in these organisms parallels their classification as category B biothreat agents, the lack of any effective vaccine available for them and the serious risk of aerosol transmission, a great concern for public health surveillance. Both diseases are very ancient, but relatively little is known about details concerning virulence mechanisms in glanders and melioidosis. Here we apply bioinformatics resources and tools to investigate B. mallei and B. pseudomallei sequenced genomes, their putative genes (and coded proteins) in a pathogenomics approach aiming at the in silico identification of virulence genes potentially associated with a key-lesion of both diseases, the granuloma (or piogranuloma) formation. Granulomas are localized chronic inflammatory responses that are able to keep the pathogen inside of them and are, thus, critical sites of infection. Our results help to build a panel of eighteen (18) putative ortologs, which can be excellent targets for future experimental screenings that might lead to genetic characterizations of their functions in terms of granulomatous genesis within Burkholderia infections. O gênero Burkholderia constitui mais de 40 espécies, incluindo genomovares entre bactérias identificadas anteriormente como parte do complexo B. cepacia (Bcc), além de B. mallei (agente causal do mormo) e a B. pseudomallei (agente causal da melioidose ou pseudomormo). B. mallei e B. pseudomallei foram escolhidos como alvos deste trabalho exatamente pela incrível capacidade zoonótica (de certo modo, compartilhada na letalidade potencial para humanos e animais) e risco iminente à saúde pública em geral, assim como também por serem potenciais agentes bioterroristas, principalmente pela habilidade de infecção por aerossóis e a inexistência de vacinas efetivas. Ressalta-se, aqui, o caráter de re-emergência das zoonoses em geral, não só no Brasil, mas no mundo inteiro, em que aproximadamente 75% das doenças infecciosas humanas recém-emergentes são de origem animal; com a incrível porcentagem de cerca 60% de todos os patógenos humanos serem, em essência, zoonóticos. Apesar da relativa antiguidade das duas doenças, pouco se sabe sobre os detalhes e mecanismos de virulência e patogenicidade em mormo e melioidose. Neste trabalho foram usadas vários recursos e ferramentas de Bioinformática para investigar genes e produtos gênicos putativos em cromossomos e replicons seqüenciados dos genomas de B. mallei e B. pseudomallei, numa abordagem patogenômica visando a identificação de genes representativos de fatores de virulência associados com uma lesão-chave nas duas doenças, a formação de granulomas/piogranulomas. Granulomas são respostas localizadas de inflamação crônica capazes de reter os patógenos em seu interior, sendo, assim, sítios estratégicos da infecção. Os resultados in silico ajudaram a formar um painel preliminar contendo dezoito (18) ortólogos putativos, excelentes alvos para futuros screenings experimentais que venham a caracterizar precisamente suas funções na atividade granulomatogênica de Burkholderia.

A Burkholderia mallei é a bactéria causadora do mormo, doença de alta morbidade e letalidade para os eqüídeos, e também uma zoonose. Recentemente diagnosticada nos estados de Pernambuco e Alagoas, vem dizimando populações de eqüídeos na Região da Zona da Mata destes estados, causando grandes prejuízos à atividade canavieira que utiliza tais animais como tração. Objetivou-se com este trabalho investigar as alterações protéicas causadas pelo mormo. Foram estudados 90 muares adultos, de diferentes raças, destinados ao trabalho, provenientes da região canavieira, Zona da Mata, do Estado de Pernambuco. Estes foram divididos em três grupos: G1: composto por trinta animais sorologicamente negativos para o mormo; G2: composto por trinta animais sorologicamente positivos e sem sintomatologia clínica aparente e G3: composto por trinta animais sorologicamente positivos e com sintomatologia clínica aparente. Os resultados obtidos, referentes à média dos parâmetros estudados para G1, G2 e G3 foram respectivamente: proteína sérica total 7,33; 7,73 e 7,46g/dl; albumina 2,57; 2,43 e 1,81g/dl; globulinas 4,37; 4,86 e 5,64g/dl; relação albumina/globulinas 0,55; 0,47 e 0,34g/dl; alfa-globulina 1.06; 1.33 e 1,33g/dl; beta-globulina 1,10; 1,21 e 1,80g/dl e gama-globulina 2,21; 2,32 e 2,51g/dl. Conclui-se que as variações para os parâmetros estudados foram significativas, o aumento das globulinas caracteriza um estímulo antigênico nos animais positivos, bem como uma inversão na relação albumina/globulinas para os animais com clínica aparente em relação aos demais animais. Estes achados poderão ser considerados no diagnóstico, prognóstico e em pesquisas futuras que visem estudar formas de imunização contra esta importante enfermidade. The Burkholderia mallei is the causing bacterium of glanders, illness of high morbidity and lethality for the equides, and also one zoonosis. Recently diagnostic in the Pernambuco and Alagoas States/Brazil, it comes decimating populations of equides in the Zone of Forest Region of these states, causing great damages to the sugar cane plantation activity that it uses such animals as traction. The objective this work was to investigate the proteins alterations caused by glanders. Had been studied ninety adult mules, of different races, destined to the work, proceeding from the sugar cane plantation region, Zone of Forest, in the Pernambuco State/Brazil. These were divided in three groups: G1: thirty animals with negative serology for glanders; G2: thirty animals with positive serology for glanders and without apparent symptoms and G3: thirty animals with positive serology for glanders and with apparent symptoms. The gotten results, referring the medium of the parameters studied respectively for G1, G2 and G3 had been: total serum protein 7.33; 7.73 and 7.46g/dl; albumin 2.57; 2.43 and 1.81g/dl; globulins 4.37; 4.86 and 5.64g/dl; albumin/globulins ratio 0.55; 0.47 and 0.34g/dl; alpha-globulin 1.06; 1.33 and 1.33g/dl; beta-globulin 1.10; 1.21 and 1.80g/dl and gamma-globulin 2.21; 2.32 and 2.51g/dl. It is concluded that the variations for the studied parameters were significant; the increase of the globulins characterizes an antigenic stimulus in the sick animals, as well as an inversion in the albumin/globulins ratio for the animals with apparent clinic in relation to the excessively animal ones. These findings could be considered in the diagnosis, prognostic and in future research that they aim at to study forms of immunization against this illness.

RESUMEN En este estudio fueron aisladas y caracterizadas bioquímicamente siete muestras deBurkholderia mallei de secreción de nódulos cutáneos cerrados de equinos y asininos naturalmente infectados por la B. mallei y procedentes del Estado de Pernambuco, Nordeste de Brasil. Las muestras de B. mallei fueron sometidas a pruebas bioquímicas para su clasificación y posteriormente a varias pruebas de sensibilidad in vitro a diferentes drogas antimicrobianas. Se observo variación en el bioquimismo entre las muestras bacterianas, principalmente referente a la fermentación de los carbohidratos. Se observácion además, mayor sensibilidad in vitro al clorofenicol, doxaciclina, enrofloxacina, florfenicol, gentamicina, netilmicina, nitrofurantoína, oxalinato, sulfa+trimetoprim y tetraciclina. A pesar de la sensibilidad observada para algunos antimicrobianos, no se indica el tratamiento de los animales enfermos con estos por la posibilidad de que se tornen portadores y mantenedores de la bacteria en el ambiente. RESUMO Neste estudo foram isoladas e caracterizadas bioquimicamente sete amostras de Burkholderia mallei de secreção de nódulos cutâneos fechados de eqüinos e asininos naturalmente infectados pela B. mallei procedentes do Estado de Pernambuco, Nordeste do Brasil. As amostras de B. mallei foram submetidas a provas bioquímicas de classificação e posteriormente a vários testes de sensibilidade in vitro a diferentes drogas antimicrobianas. Foi observada variação no bioquimismo entre as amostras, principlamente no que se refere a fermentação dos carboidratos. Também se observou maior sensibilidade in vitro ao clorofenicol, doxaciclina, enrofloxacina, florfenicol, gentamicina, netilmicina, nitrofurantoína, oxalinato, sulfa+trimetoprim e tetraciclina. Apesar da sensibilidade observada para alguns antimicrobianos, o tratamento dos animais contaminados não é indicado pela possibilidade de que estes se tornem portadores e mantenedores da bactéria no ambiente.

A Burkholderia mallei é a bactéria causadora do mormo, doença de alta morbidade e letalidade para os eqüídeos, e também uma zoonose. Recentemente diagnosticada nos estados de Pernambuco e Alagoas, vem dizimando populações de eqüídeos na Região da Zona da Mata destes estados, causando grandes prejuízos à atividade canavieira que utiliza tais animais como tração. Objetivou-se com este trabalho investigar as alterações protéicas causadas pelo mormo. Foram estudados 90 muares adultos, de diferentes raças, destinados ao trabalho, provenientes da região canavieira, Zona da Mata, do Estado de Pernambuco. Estes foram divididos em três grupos: G1: composto por trinta animais sorologicamente negativos para o mormo; G2: composto por trinta animais sorologicamente positivos e sem sintomatologia clínica aparente e G3: composto por trinta animais sorologicamente positivos e com sintomatologia clínica aparente. Os resultados obtidos, referentes à média dos parâmetros estudados para G1, G2 e G3 foram respectivamente: proteína sérica total 7,33; 7,73 e 7,46g/dl; albumina 2,57; 2,43 e 1,81g/dl; globulinas 4,37; 4,86 e 5,64g/dl; relação albumina/globulinas 0,55; 0,47 e 0,34g/dl; alfa-globulina 1.06; 1.33 e 1,33g/dl; beta-globulina 1,10; 1,21 e 1,80g/dl e gama-globulina 2,21; 2,32 e 2,51g/dl. Conclui-se que as variações para os parâmetros estudados foram significativas, o aumento das globulinas caracteriza um estímulo antigênico nos animais positivos, bem como uma inversão na relação albumina/globulinas para os animais com clínica aparente em relação aos demais animais. Estes achados poderão ser considerados no diagnóstico, prognóstico e em pesquisas futuras que visem estudar formas de imunização contra esta importante enfermidade.