CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior As leishmanioses são doenças que afetam indivíduos em cinco continentes, sendo endêmicas em 98 países, incluindo o Brasil. A cada ano são reportados oficialmente 58.000 novos casos de leishmaniose visceral (LV) e 220.000 novos casos de leishmaniose cutânea. A espécie Leishmania amazonensis é um dos agentes causadores das leishmanioses, podendo levar a uma ampla variedade de manifestações clínicas da doença. O objetivo desse estudo foi analisar a relação entre o cultivo axênico de L. amazonensis por longos períodos de tempo e a variação da capacidade infectiva dos parasitas, no intuito de identificar proteínas que possam estar envolvidas nesse processo. Para isso, parasitas em fase estacionária foram cultivados por 150 dias e amostras foram coletadas a cada 50 dias. As amostras foram utilizadas para avaliar a infecciosidade dos parasitas por meio de experimentos in vitro e in vivo, e para uma caracterização proteômica. Em relação aos resultados obtidos, após a realização da eletroforese bidimensional, 315 spots apresentaram variação de intensidade ao longo do cultivo, sendo que 258 spots foram identificados por espectrometria de massa. Das 56 proteínas selecionadas, 37 e 19 apresentaram diminuição ou aumento significativo de sua expressão, respectivamente, ao longo do cultivo. Dessas proteínas, cinco tiveram sua variação de expressão validada por Immunoblotting. As análises da eletroforese bidimensional associada com a espectrometria de massas e estudos por bioinformática indicaram que a diminuição de infecciosidade em parasitas cultivados por longos períodos sob condições axênicas pode ser ocasionada pelo controle de vias metabólicas específicas, da atuação de proteínas envolvidas no sistema redox do parasita, ou de proteínas do citoesqueleto. As informações apresentadas nesse estudo podem contribuir para um melhor entendimento dos processos biológicos envolvidos com a diminuição da infecciosidade de L. amazonensis quando submetida a culturas axênicas por longos períodos de tempo. Essas descobertas representam uma contribuição para o descobrimento de novos candidatos vacinais, agentes para diagnóstico e/ou alvos imunoterapêuticos contra as leishmanioses, usando as proteínas conhecidas e/ou hipotéticas que apresentaram variação significativa de sua expressão ao longo das culturas axênicas. Leishmaniasis is an endemic disease that affects people in five continents and 98 countries, including Brazil, being officially reported 58,000 new cases of visceral leishmaniasis and 220,000 new cases of cutaneous leishmaniasis each year. Leishmania amazonensis , a causative agent of leishmaniasis, can cause a wide variety of clinical manifestations of the disease. The aim of this study was to analyzethe relationship between the L. amazonensis axenic cultivation for long periods with the infectivity ability of the parasite in order to identify proteins that may be involved in this process. For that purpose, L. amazonensis stationary phase was grown for 150 days and aliquots were collected every 50 days, been used to analysis of of infectivity of the parasite by in vitro and in vivo experiments, and to proceed with proteomic characterization. After 2-DE, from the 315 spots with variation in intensity throughout the cultivation, 258 were identified by mass spectrometry. From the 56 selected proteins, 37 have possible decreased of expression over the passages and 19 different proteins showed possible increased of expression during the parasite cultivation. The expression variation of five of these proteins was validated by Immunoblotting. Twodimensional electrophoresis associated with mass spectrometry and bioinformatics analyzes showed that loss of infectivity observed in cultured parasites for prolonged periods under axenic conditions may be caused by the control of specific metabolic pathways, as well as by the control of the performance of the proteins involved with the parasite redox system or by changes in cytoskeletal proteins. The information presented in this study may help to a better understanding of biological processes involved in the reduction of infectivity of L. amazonensis when subjected to axenic cultures for long periods of time. Moreover, these findings may represent a contribution to the elucidation of novel vaccine candidates, diagnostic agents and / or immunotherapeutic targets against the parasite-induced disease, using known and hypothetical proteins with significant changes in their expression along the axenic cultures. more...