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Background Knockdown resistance (kdr) is the main mechanism that confers resistance to pyrethroids and DDT. This is a product of non-synonymous mutations in the voltage-gated sodium channel (vgsc) gene, and these mutations produce a change of a single amino acid which reduces the affinity of the target site for the insecticide molecule. In Mexico, V410L, V1016I and F1534C mutations are common in pyrethroid-resistant Aedes aegypti (L.) populations. Methods A multiplex PCR was developed to detect the V410L, V1016I and F1534C mutations in Ae. aegypti. The validation of the technique was carried out by DNA sequencing using field populations previously characterized for the three mutations through allele-specific PCR (AS-PCR) and with different levels of genotypic frequencies. Results The standardized protocol for multiplex end-point PCR was highly effective in detecting 15 genotypes considering the three mutations V410L, V1106I and F1534C, in 12 field populations of Ae. aegypti from Mexico. A complete concordance with AS-PCR and DNA sequencing was found for the simultaneous detection of the three kdr mutations. Conclusions Our diagnostic method is highly effective for the simultaneous detection of V410L, V1016I and F1534C, when they co-occur. This technique represents a viable alternative to complement and strengthen current monitoring and resistance management strategies against Ae. aegypti.

Aedes aegypti L. es el principal vector de las arbovirosis en México llegando a transmitir dengue, Chikungunya, Zika y Fiebre amarilla. Los insecticidas químicos son de uso preferente para evitar la proliferación del mosquito, y por ende las enfermedades. A tal extremo se ha llevado el uso de este método que ha provocado la selección de mutaciones en el sitio blanco de acción que confieren resistencia a insecticidas, lo que complica aún más el control del vector. Mediante el uso de herramientas genéticas se ha detectado que esta resistencia al derribo (kdr) se debe a cambios puntuales dentro del gen para del canal de sodio dependiente de voltaje. Se analizó el genotipo individualmente para cada mosquito por AS-PCR con oligonucleótidos específicos para cada mutación kdr V410L, V1016I y F1534C en 25 poblaciones de Ae. aegypti (L). del este y sur de México, México, se incluyó una población de Belice. De las poblaciones genotipadas se seleccionaron diez las cuáles fueron sometidas a bioensayos con permetrina, deltametrina y transflutrina. Una vez que se comprobó la resistencia de las poblaciones de Ae. aegypti, dio bases para proseguir con el proceso de la detección múltiple de estas mutaciones. Se estandarizó una PCR multiplex para las tres mutaciones y se validó por comparación con los resultados previos del genotipado individual. Los resultados de genotipado individual mostraron altas frecuencias de las tres mutaciones kdr en las poblaciones seleccionadas con frecuencias de 0.12 a 0.98 para I1016, 0.19 a 0.95 para L410 y con mayores frecuencias para C1534, encontrándose fija en nueve de las 25 poblaciones. Las poblaciones resultaron resistentes a los tres piretroides. En caso de permetrina solo una de las diez poblaciones analizadas exhibió susceptibilidad, para la deltametrina dos poblaciones exhibieron susceptibilidad y el resto resistencia y para el caso de transflutrina, un piretroide de reciente introducción también se registró resistencia en el 80% de los casos