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The Type 2 diabetes (T2D) is a global epidemics and considered as an inflammation related disease. Myracrodruon urundeuva (Anacardiaceae) is used in Northeast Brazil, because of its anti-inflammatory properties. The species is known to present tannins and chalcones among its active compounds. The objectives of the work were to investigate the antidiabetic and hypolipidemic activities of the stem bark decoction (MUSB) from a cultivated specimen of M. urundeuva, in the alloxan-induced diabetes model. For that, male Wistar rats were divided into normal controls, untreated and treated (MUSB, 50 and 100 mg/kg, 7 days) diabetic groups. Afterwards, the animals were subjected to biochemical measurements (glycemia, cholesterol, triglycerides and ALT and AST liver transaminases) before (48 h, post-alloxan) and after treatments, then euthanized for histopathological studies. The data were analyzed by ANOVA and Tukey’s test and considered significant for p

Background Sideroxylon obtusifolium (Roem. & Schult.) T.D. Penn., Sapotaceae family, is a medicinal species native to the Brazilian Northeastern region. The plant is popularly used as an anti-inflammatory and hypoglycemic. Purpose To evaluate the anti-inflammatory properties of the N-methyl-(2S,4R)-trans-4-hydroxy-l-proline (NMP) from S. obtusifolium leaves in models of inflammation and to clarify its action mechanisms. Methods Male Swiss mice were distributed intocontrols and groups treated with NMP (25, 50 and 100 mg/kg, p.o.), indomethacin or morphine (reference drugs). The animals were subjected to the formalin, carrageenan-induced edema and peritonitis tests. Furthermore, peritoneal lavage and slices from edematous paws were used for histological and immunohistochemical (iNOS, TNF-alpha, COX-2 and NF-kB) assays. Results Decreases in licking time, in the 1st and mainly in the 2nd phases of the formalin test, were shown after NMP treatments. In addition, decreases (around 50%) in paw edema were noticed at the 3rd h. The HE staining of paw slices demonstrated a complete reversion of the increased PMN cell numberafter NMP treatment. Similarly, decreases higher than 70% were also demonstrated in PMN cells, in the peritoneal fluid. Furthermore, NMP significantly decreased iNOS, TNF-alpha, COX-2 and NF-kB immunoreactivities. Conclusions We showed that S. obtusifolium presents a potent anti-inflammatory activity, due to the presence of the N-methyl-(2S,4R)-trans-4-hydroxy-l-proline(NMP) in the plant extract. This action is related to the inhibition by NMP of TNF-alpha and inflammatory enzymes.

The non-commercial copolymers E45S8, E45S17 and their mixtures with Pluronic® P123 (E21P67E21) were studied as carriers of the model drug griseofulvin. Critical micelle concentration (cmc) (dye solubilisation method), drug solubilisation capacity (Scp and Sh) determined by ultraviolet-visible (UV-Vis) spectroscopy and 1H nuclear magnetic resonance (1H NMR) and cytotoxicity (LDH activity in human neutrophils) were studied. E45S17 1.0 wt.% dispersions presented colloidal aggregates limiting its Scp in comparison to E45S8, but in 0.1 wt.% solutions this phenomenon seemed to be absent and E45S17 presented a higher Scp. The mixtures that showed the best Scp results contained 50% of P123 and presented low cmc. An evaluation of literature data suggested a minimum Em content of 62% in EmSn copolymers below which the increase of Sn length does not lead to an increase of Sh. The results suggested no toxicity of the copolymers on human neutrophils, supporting the use of P123 and poly(styrene oxide) containing copolymers as drug carriers.

Piperine, an alkaloid present in the Piper genus, was shown to have an anticonvulsant activity, evaluated by the pilocarpine-induced model, in mice. Pilocarpine (350 mg/kg, i.p.) was administered 30 min after piperine (2.5, 5, 10 and 20 mg/kg, i.p.) which significantly increased latencies to 1st convulsion and to death, and percentage of survivals. These parameters were also increased in the pilocarpine groups pretreated with atropine plus piperine (10 and 2.5 mg/kg, respectively), as related to the pilocarpine group. However, they were not altered in the pilocarpine groups pretreated with memantine (a NMDA-type glutamate receptors blocker, 2 mg/kg, p.o.) or nimodipine (a calciumchannel blocker, 10 mg/kg, p.o.), both associated with piperine (1 or 2.5 mg/kg), as compared to the piperine plus pilocarpine group. Moreover, the pilocarpine group pretreated with diazepam (which binds to the GABAA receptor, 0.2 and 0.5 mg/kg, i.p.) plus piperine (1 and 2.5 mg/kg) significantly increased latency to the 1st convulsion, as related to the pilocarpine group, suggesting that the GABAergic system is involved with the piperine action. Furthermore, the piperine effect was blocked by flumazenil (2 mg/kg, i.p.), a benzodiazepine antagonist. Untreated P350 animals showed decreased striatal DA and increased DOPAC and HVA levels thatwere not affected in the piperine plus pilocarpine groups. Piperine increased striatal levels of GABA, glycine and taurine, and reversed pilocarpine-induced increases in nitrite contents in sera and brain. Hippocampi from the untreated pilocarpine group showed an increased number of TNF-α immunostained cells in all areas, as opposed to the pilocarpine group pretreated with piperine. Taken together, piperine anticonvulsant effects are the result of its anti-inflammatory and antioxidant actions, as well as TNF-α reduction. In addition, piperine effects on inhibitory amino acids and on the GABAergic system may certainly contribute to the drug anticonvulsant activity.

In the present study, we evaluated omega-3 polyunsaturated fatty acid (PUFA) (consisting of 20:5n-3 and 22:6n-3) properties on inflammation and nociception. Among the in vivo tests, writhing, formalin, and hot plate tests were conducted in mice, and carrageenan-induced paw edema, peritonitis, and Hargreaves tests were performed in rats. Following the carrageenaninduced edema, immunohistochemistry for tumor necrosis factor-α (TNF-α)was also carried out. We found that omega-3 PUFA treatment significantly decreased acetic acid–induced abdominal contortions as well as the first and second phases of the formalin test, which were reversed by naloxone. The carrageenan-induced rat paw edema was significantly reduced, along with neutrophil migration to the peritoneal cavity in the omega-3 PUFA treatment. In addition, there was a decrease in TNF-α immunostained cells in the inflamed paw with the omega-3 treatment compared with no omega-3. Withdrawal threshold in response to the thermal stimulation was significantly increased by the omega-3 treatment in the Hargreaves and hot plate tests. The in vitro studies (myeloperoxidase, lactate dehydrogenase, MTT cell viability and lipid peroxidation assays) were performed in human neutrophils. These studies showed that omega-3 treatment significantlydecreasedmyeloperoxidase release,presentednocytotoxicity, anddidnot alter lipid peroxidation. Our study suggests that omega-3 PUFA anti-inflammatory and antinociceptive actionsmay involve inhibition of cyclooxygenases andmicroglial activation, leading to a reduced release of proinflammatory cytokines such as TNF-α, among other factors. The omega-3 PUFAs are potential candidates used alone or in combination with conventional nonsteroidal antiinflammatory drugs, for the treatment of diseases where inflammation plays an important role.

Amburana cearensis (Fabaceae) é uma árvore da caatinga nordestina, mais conhecida popularmente como cumaru. Suas cascas (caule) possuem um cheiro característico pela presença de cumarina, e são principalmente utilizadas no tratamento da bronquite, tosse e asma. O presente estudo procurou investigar os efeitos tóxicos e as atividades antiinflamatória, antioxidante e relaxante muscular do isocampferídio (ICPF, 3-metilflavonol) e/ou do amburosídio A (AMB, glucosídio fenólico) isolados das cascas do caule de A. cearensis. A administração intraperitoneal (i.p.) do ICPF ou do AMB em dose única (50 – 200 mg/kg) mostrou baixa toxicidade em camundongos. Na cultura primária de hepatócitos apenas o ICPF (100 µg/ml) reduziu significativamente a viabilidade celular, determinada pelo teste do MTT. O ICPF e o AMB (12,5 – 50 mg/kg, i.p.) apresentaram atividade antiinflamatória, observada inicialmente pela inibição do edema de pata induzido por carragenina-Cg, prostaglandina E2, dextrano-Dx, histamina ou serotonina e pela redução em 39 e 50% respectivamente do infiltrado de neutrófilos verificada pela análise histopatológica/morfométrica do edema induzido por Cg. O aumento da permeabilidade vascular induzido pelo Dx em camundongos, foi também significativamente inibido pelo ICPF ou AMB. O pré-tratamento (oral ou i.p.) dos animais com ICPF ou AMB (25 e 50mg/kg) causaram reduções tanto na migração de leucócitos quanto neutrófilos induzida por Cg ou fMLP no peritônio de camundongos. O ICPF e o AMB preveniram parcialmente a degranulação de neutrófilos humano induzida pelo fMLP, determinada pela redução das atividades das enzimas mieloperoxidase e elastase em até 66 e 52% respectivamente. Os compostos fenólicos em estudo não foram citotóxicos para neutrófilos (teste do MTT). O AMB mostrou uma ação hepatoprotetora/antioxidante no modelo de hepatotoxicidade induzida pelo CCl4 em ratos, determinada pelas enzimas hepáticas (ALT e AST) e pela catalase, além de TBARS, glutationa reduzida e análise histopatológica. Na traquéia isolada de cobaia o ICPF (10 – 1000 µM) e o AMB (10 – 3000 µM) relaxaram de maneira concentração-dependente o músculo pré-contraído pelo CCh ou KCl. A remoção do epitélio traqueal favoreceu o efeito relaxante do ICPF, mas não modificou o efeito do AMB. O relaxamento induzido pelo ICPF foi inibido em 41% pelo L-NAME; 31 e 50% pelo ODQ (3 e 33 µM); 31 % pelo propranolol e 37 % pela capsaicina. Na traquéia pré-contraida pelo KCl (40 mM) a glibenclamida (GLB) ou iberiotoxina reduziram o efeito relaxante do ICPF, enquanto no músculo pré-contraído pelo KCL 120mM o efeito do ICPF foi reduzido e não foi afetado pela GLB. Portanto, os resultados apresentados mostram que o ICPF e o AMB possuem atividades antiinflamatória, relaxante muscular e antioxidante, o que justifica pelo menos em parte o uso tradicional de A. cearensis no tratamento de doenças respiratórias onde as características fisiopatológicas incluem inflamação, estresse oxidativo e broncoconstrição. Amburana cearensis is a medicinal plant from Northeast Brazil popularly known as “cumaru”. Its stem bark has an odor characteristic of the presence of coumarin, being used in alternative medicine for the treatment of bronchitis and asthma. The present study investigated the toxicity, as well as the anti-inflammatory, antioxidant and smooth muscle relaxant activities of isokaempferide (IKPF, 3-metylflavonol) and amburoside A (AMB, phenolic glucoside), bioactive constituents of the plant. The intraperitoneal administration (ip) of IKPF or AMB, in single doses (50-200 mg/kg), showed low toxicity in mice. In primary hepatocyte cultures, only IKPF (100 ug/ml) reduced significantly the cellular viability, as assessed by the MTT test. ICPF and AMB (12.5- 50 mg/kg, ip) presented anti-inflammatory activities, observed initially by inhibitions of the carrageenan (Cg), prostraglandin E2 (PGE2), dextran (Dx), histamine or serotonin-induced paw edemas. Besides, IKPF and AMB (12.5 – 50 mg/kg) produced 39 and 50% reductions, respectively, of neutrophil migration as assessed by histopathological/morphometric analyses of the Cg-induced paw edema. The increase of vascular permeability induced by Dx in mice was also significantly inhibited by IKPF or AMB. Mice pretreatments (oral or ip) with IKPF or AMB (25 and 50 mg/kg) reduced peritoneal Cg or fMLP-induced leucocytes and neutrophil migrations. Also, IKPF and AMB partially prevented fMlP-induced neutrophil degranulation in human blood, as determined by the decrease in 66 and 52% of activities of the enzymes myeloperoxidase and elastase, respectively. The two compounds were not cytotoxic for neutrophil, as assessed by the MTT test. AMB showed hepatoprotective and antioxidant actions in the model of CCl4-induced liver toxicity in rats, as determined by the liver enzymes activity (AST and ALT), catalase, lipoperoxidation (TBARS assay), reduced glutathione, and histological analysis. In the isolated guinea pig trachea, IKPF (10-1000 µg/ml) and AMB (10- 3000 µg/ml) produced a concentration-dependent relaxation of the muscle precontracted by carbacol or KCl. The epithelium removal improved IKPF-induced relaxation, but did not alter the AMB effect. IKPF-induced relaxation was inhibited in 41% by L-NAME; 31 and 50% by ODQ (3 and 33 uM); 31% by propranolol and 37% by capsaicin. In the trachea pre-contracted by KCl (40 mM), the pre-incubation with glibenclamide or iberiotoxin, inhibited the IKPF-induced relaxation by 39% and 38%, respectively. On the other hand, 4-aminopyridine did not significantly influence the effect of IKPF. However, in the muscle pre-contracted with 120mM KCl the relaxant effect of IKPF was significantly reduced and not affected by glibenclamide. In conclusion, results showed that IKPF and AMB present anti-inflammatory, muscular relaxant and/or antioxidant activities, justifying the traditional use of Amburana cearensis in the treatment of respiratory tract diseases that present inflammation, oxidative stress, and bronchoconstriction as pathophysiological characteristics.

Neuroinflammation is present in the pathophysiological mechanisms of several diseases that affect the central nervous system. In this context, the microglia have a prominent role in initiating and sustaining the inflammatory process. Epiisopiloturine (EPIT), an imidazole alkaloid obtained from the by-product of pilocarpine extraction from Pilocarpus microphyllus (jaborandi), has shown to be a promising drug with anti-inflammatory and antinociceptive properties. Given the above, the present study aimed to investigate the effect of EPIT on the inflammatory response of microglial cells (BV2 cells) induced by LPS and elucidate its possible mechanism of action. Initially, the probability of EPIT to cross the blood-brain barrier (BHE) was evaluated predictively by using the Swiss ADME online platform. The cytotoxicity of EPIT per se (3.5; 35; 87.5; 175 and 350 µM) and under LPS stimulation (0.5 μg/mL), was evaluated using the lactate dehydrogenase (LDH) enzyme activity assay and by the MTT test. The effect of this alkaloid on microglial cells exposed to LPS (0.5 μg/mL) was investigated by determining the concentration of pro-inflammatory mediators such as nitric oxide/nitrite (EPIT: 3.5 - 350 µM), IL-1β, IL-6 and TNF-α (EPIT: 87.5 µM) and anti-inflammatory mediators such as IL-10 (EPIT: 87.5 µM), as well as by determining the effect of EPIT on iNOS enzyme expression. Western blot analysis was also employed to determine the effect of this molecule (EPIT: 87.5 µM) on pro-and anti-inflammatory signaling pathways, evaluated by the expression of transmembrane receptors (TLR4/TREM2), the NF-κB and MAPKs (JNK and ERK 1/2). EPIT showed a high ability to penetrate the BHE, and up to the concentration of 350 μM did not alter LDH activity, as well as did not interfere with cell viability assessed by the MTT test. Pretreatment with EPIT (35; 87.5; 175 and 350 µM), significantly reduced nitrite production and iNOS enzyme protein expression. Regarding cytokine production, EPIT (87.5 µM) reduced IL-6 and TNF-α production by up to 40 % and 34 %, respectively, with emphasis on its effect on IL-1β concentration (LPS+EPIT: 57.0 ± 14.4 pg/mL) that did not differ statistically from the RPMI/basal group (44.1 ± 3.6 pg/mL). However, EPIT did not increase the concentration of IL-10 reduced by LPS in BV2 cells. EPIT inhibited the TLR4/NF-κB-MAPKs (JNK and ERK1/2) signaling pathway by suppressing the expression of phosphorylated proteins, but did not interfere with TREM2 receptor expression in LPS-exposed cells. The study determined, in a novel way, the anti-inflammatory effect of EPIT in microglial cells, which appears to be associated with the suppression of the signaling cascades of NF-κB and MAPKs (JNK and ERK1/2) by affecting the expression of the TLR4 receptor, associated with pro-inflammatory mechanisms. A neuroinflamação está presente nos mecanismos fisiopatológicos de diversas doenças que acometem o sistema nervoso central. Nesse cenário, a micróglia, possui um papel de destaque no início e sustentação do processo inflamatório. A epiisopiloturina (EPIT), alcaloide imidazólico obtido a partir do sub-produto da extração de pilocarpina de Pilocarpus microphyllus (jaborandi), tem se mostrado um fármaco promissor com propriedades anti-inflamatórias e antinociceptivas. Diante do exposto, o presente estudo teve como objetivo investigar o efeito da EPIT sobre a resposta inflamatória de células microgliais (linhagem BV2) induzida pelo LPS e elucidar o seu possível mecanismo de ação. Inicialmente, avaliou-se de forma preditiva, a probabilidade de EPIT em atravessar a barreira hematoencefálica (BHE) por meio da plataforma online Swiss ADME. A citotoxicidade da EPIT per se (3,5; 35; 87,5; 175 e 350 µM) e sob estimulação do LPS (0,5 μg/mL), foi avaliada por meio do ensaio da atividade da enzima lactato desidrogenase (LDH) e do teste do MTT. O efeito desse alcaloide sobre células microgliais expostas ao LPS (0,5 μg/mL) foi investigado pela determinação da concentração de mediadores pró-inflamatórios como o óxido nítrico/nitrito (EPIT: 3,5 - 350 µM), a IL-1β, IL-6 e o TNF-α (EPIT: 87,5 µM) e anti-inflamatórios como a IL-10 (EPIT: 87,5 µM), bem como pela determinação do efeito de EPIT sobre a expressão da enzima iNOS. A análise por western blot foi também empregada para determinar o efeito dessa molécula (EPIT: 87,5 µM) sobre vias de sinalização pró e anti-inflamatórias, avaliadas pela expressão de receptores transmembranas (TLR4/TREM2), o NF-κB e as MAPKs (JNK e ERK 1/2). EPIT mostrou alta capacidade em penetrar a BHE, e até a concentração de 350 μM não alterou a atividade da LDH, bem como não interferiu na viabilidade celular avaliada pelo teste do MTT. O pré-tratamento com EPIT (35; 87,5; 175 e 350 µM), reduziu significantemente a produção de nitrito e a expressão proteica da enzima iNOS. Em relação a produção de citocinas, EPIT (87,5 µM) reduziu em até 40 % e 34 % a produção de IL-6 e TNF-α, respectivamente, com destaque para seu efeito sobre a concentração de IL-1β (LPS+EPIT: 57,0  14,4 pg/mL) que não diferiu estatisticamente do grupo RPMI/basal (44,1 ± 3,6 pg/mL). Porém, a EPIT não aumentou a concentração de IL-10 reduzida pelo LPS em células BV2. EPIT inibiu a via de sinalização TLR4/NF-κB-MAPKs suprimindo a expressão de proteínas fosforiladas, mas não interferiu na expressão do receptor TREM2 em células expostas ao LPS. O estudo determinou, de forma inédita, o efeito anti-inflamatório da EPIT em células microgliais, que parece estar associado à supressão das cascatas de sinalização do NF-κB e das MAPKs ao afetar a expressão do receptor TLR4, associado a mecanismos pró-inflamatórios.

Coumarin (CM - 1,2-benzopyranone), found in Caatinga plant species such as Amburana cearensis AC Smith and Justicia pectoralis Jacq, is used in the clinic to treat varicose veins, hemorrhoids and pre and postoperative thrombosis prophylaxis and in pregnancy. Studies prove its anti-inflammatory, immunomodulatory and anti-parasitic activity. However, it is a volatile molecule, with low solubility in water and its lactone is easily hydrolyzed, which makes it difficult to take advantage of its pharmacological properties. On the other hand, nanosystems have been successfully used to overcome or reduce challenges in the development of drugs with biopharmaceutical problems. Given the above, the objective of this work was the development of a nanosystem of CM, with evaluation of toxicity and leishmanicidal activity (Leishmania braziliensis) in vitro and in vivo. For this purpose, an analytical method was developed and validated for the identification and quantification of CM by High Performance Liquid Chromatography (HPLC), according to Resolution No. 166 (BRASIL, 2017). Two different nanocarriers were produced to encapsulate CM: CM-loaded Nanostructured Lipid Carriers (CM-NLC) and CM-loaded polymeric Nanocapsules (CM- NC). The CM-NLCs were produced (homogenization in high pressure at heat) with different concentrations of lipid phase (5% and 10%) using Precirol ATO5® and Miglyol 812®. CM- NC were prepared (interfacial deposition of the preformed polymer) with the aid of Central Rotational Composite Design (CRCD) 23 using the polymer Eudragit® RS100. The characterization and evaluation of the nanosystems stability for nine months was carried out in relation to the size (S), polydispersion index (PDI), zeta potential (ZP), active content (AC) and encapsulation efficiency (EE). Toxicity tests were performed in vitro (MTT test - Bromide 3 [4,5-dimethylthiazol-2-yl] -2,5-diphenyltetrazolium in macrophages/J774) and in vivo (acute toxicity in Swiss mice). The parasitic load (intracellular amastigotes) in J774 macrophages infected with L. braziliensis (24 or 48 h) was determined and the leishmanicidal activity was evaluated in Mesocricetus auratus hamsters. For the purposes of characterizing the CM-NC, the analytical method (277 nm) was validated, showing to be specific, linear, precise, accurate and robust under certain conditions. CM-NLC with 10% lipid phase and 5 homogenization cycles (CM-NLC 10%5C) showed better physical-chemical characteristics compared to other formulations of lipid carriers, but it was cytotoxic in macrophages (5 - 100 μg/ml), therefore was passed over from the study. The CM-NC formulation from the selected CRCD showed higher EE (58.01 ± 0.2%) in relation to the other nanocapsule suspensions, with S, PDI and ZP of 210.0 ± 0.24 nm; 0.13 ± 7.27; 75.9 ± 0.73 mV, respectively and a AC of 102.5 ± 8.8%, showing stability during the investigated period (nine months). CM-NC (100 μg/ml) did not show cytotoxicity in macrophages and in acute toxicity studies (10 - 40 mg/kg, v.o.), it did not cause behavioral, biochemical or hematological changes in rodents. The CM- NC (50 μg/ml) reduced the parasitic load of macrophages infected by L. braziliensis by 31.1% and 5.4% after 24 and 48 h of incubation, respectively. The treatment of animals with CM-NC (10 mg/kg, v.o.) reduced the parasitic load at the lesion site and protected the spread of the parasites to the lymph node. The study provided the development and characterization of CM- NC, which showed technological characteristics of interest and stability, not associated with toxicity and with leishmanicidal activity in vitro and in vivo. A Cumarina (CM – 1,2-benzopiranona), encontrada em espécies vegetais da Caatinga como a Amburana cearensis A. C. Smith e Justicia pectoralis Jacq, é usada na clínica no tratamento de varizes, hemorroidas e profilaxia de trombose pré e pós-operatório e na gravidez. Estudos comprovam sua atividade anti-inflamatória, imunomoduladora e anti-parasitária. No entanto, é uma molécula volátil, com baixa solubilidade em água e sua lactona é facilmente hidrolisada, o que dificulta o aproveitamento de suas propriedades farmacológicas. Por outro lado, nanosistemas têm sido empregados com sucesso visando superar ou reduzir desafios no desenvolvimento de fármacos com problemas biofarmacêuticos. Diante do exposto, o objetivo deste trabalho foi o desenvolvimento de um nanosistema de CM, com avaliação da toxicidade e atividade leishmanicida (Leishmania braziliensis) in vitro e in vivo. Para tanto, foi desenvolvido e validado método analítico para identificação e quantificação da CM por Cromatografia líquida de Alta Eficiência (CLAE), conforme resolução RE no 166 (BRASIL, 2017). Foram produzidos dois nanocarreadores diferentes para encapsular a CM: Carreadores Lipídicos Nanoestruturados de CM (CLNC) e Nanocápsulas poliméricas de CM (NCC). Os CLNC foram produzidos (homogeneização em alta pressão a quente) com diferentes concentrações de fase lipídica (5% e 10%) utilizando Precirol ATO5® e Miglyol 812®. NCC foram preparadas (deposição interfacial do polímero pré-formado) com auxílio de Delineamento Composto Central Rotacional (DCCR) 23 usando o polímero Eudragit® RS100. A caracterização e avaliação da estabilidade por nove meses dos nanosistemas foi realizada em relação ao diâmetro (D), índice de polidispersão (IPD), potencial zeta (PZ), teor de ativo (TA) e eficiência de encapsulação (EE). Foram realizados testes de toxicidade in vitro (teste do MTT - Brometo 3[4,5-dimetiltiazol-2-il]-2,5-difeniltetrazólio em macrófagos humanos/J774) e in vivo (toxicidade aguda em camundongos Swiss). A carga parasitária (amastigotas intracelulares) em macrófagos J774 infectados com L. braziliensis (24 ou 48 h) foi determinada e a atividade leishmanicida foi avaliada em hamsters Mesocricetus auratus. Para fins de caracterização da NCC, o método analítico (277 nm) foi validado, mostrando-se específico, linear, preciso, exato e robusto sob determinadas condições. O CLNC com 10% de fase lipídica e 5 ciclos de homogeneização (CLNC 10%5C) apresentou melhores características físico-químicas em relação as outras formulações de carreadores lipídicos, mas foi citotóxico em macrófagos (5 – 100 μg/ml), por isso foi preterido do estudo. A formulação de NCC oriunda do DCCR selecionada apresentou maior EE (58,01 ± 0,2%) em relação as outras suspensões de nanocápsulas, com D, IPD e PZ de 210,0 ± 0,24 nm; 0,13 ± 7,27; 75,9 ± 0,73 mV, respectivamente e TA de 102,5 ± 8,8%, mostrando-se estável durante o período investigado (nove meses). A NCC (100 μg/ml) não apresentou citotoxicidade em macrófagos e nos estudos de toxicidade aguda (10 - 40 mg/kg, v.o.), não provocou alterações comportamentais, bioquímica ou hematológica em roedores. A NCC (50 μg/ml) reduziu em 31,1% e 5,4 % a carga parasitária de macrófagos infectados por L. braziliensis após 24 e 48 h de incubação, respectivamente. O tratamento dos animais com NCC (10 mg/kg, v.o.) reduziu a carga parasitária no sítio da lesão e protegeu a disseminação dos parasitos para o linfonodo. O estudo proporcionou o desenvolvimento e caracterização de NCC, que mostrou características tecnológicas de interesse e estabilidade, não associada à toxicidade e com atividade leishmanicida in vitro e in vivo.

The strategy used in this work was to continue the studies of our research group with the fixed oil of the fruit pulp of the pequi (Caryocar coriaceum Wittm.) and thymol to contribute to the development of an emulsion that helps in the treatment of dermatitis and opportunistic infections caused by Staphylococcus aureus. The current pharmacotherapy for the treatment of dermatitis, a disease that affects about 44% of people worldwide, has limitations related to efficacy and its side effects. Studies have proven the anti-inflammatory activity of pequi fixed oil in experimental models of inflammation, as well as the antimicrobial effect of thymol against S. aureus. Thus, the aim of the present study was to evaluate anti-inflammatory and antimicrobial activities of the fixed oil of Caryocar coriaceum (OFCC) and the emulsion based on it and thymol. Therefore, OFCC was characterized (CG) and evaluated as possible cytotoxicity in human neutrophils (LDH, MTT). The emulsion, as well as its main asset (OFCC), were evaluated for anti-inflammatory effect in a model of irritant contact dermatitis induced by TPA in mice, with determination of the possible mechanism of action, as well as in an in vitro model of inflammation (human neutrophils). The antimicrobial activity was investigated against S. aureus ATCC 6538P and six non-resistant clinical strains, with determination of minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum lethal concentration (CLM). The OFCC was characterized with oleic acid (52.26%) and palmitic acid (29.80%) as major components, which did not prove to be cytotoxic and had an anti-inflammatory effect by partially inhibiting the neutrophil degranulation induced by PMA expressed by the reduction the release of myeloperoxidase (MPO), reduced TPA-induced ear edema in mice and modulated cytokines (TNF-α and IL-10) in an unprecedented way in this model of inflammation in vivo. The OFCC emulsion was characterized and it was observed, in addition to physical-chemical stability, an increase in its antimicrobial effect with the addition of thymol. It was also possible to observe that the emulsion had an anti-inflammatory effect by reducing the release of myeloperoxidase (MPO) in neutrophils and a significant reduction in TPA-induced ear edema in mice. However, when assessing the concentration of cytokines (TNF-α and IL-10), modulation was not observed. This indicates the need for further experiments investigating other cytokines to suggest the real mechanism by which the OFCC and thymol emulsion promotes its anti-inflammatory effect. A estratégia utilizada neste trabalho foi continuar os estudos do nosso grupo de pesquisa com o óleo fixo da polpa do fruto do pequi (Caryocar coriaceum Wittm.) e timol para contribuir com o desenvolvimento de uma emulsão que auxilie no tratamento da dermatite e infecções oportunistas causadas por Staphylococcus aureus. A farmacoterapia atual para o tratamento das dermatites, doença que afeta cerca de 44% de pessoas no mundo, possui limitações relacionadas a eficácia e aos seus efeitos colaterais. Estudos têm comprovado a atividade anti-inflamatória do óleo fixo do pequi em modelos experimentais de inflamação, bem como o efeito antimicrobiano do timol contra S. aureus. Dessa forma, o objetivo do presente estudo foi avaliar atividades anti-inflamatória e antimicrobiana do óleo fixo de Caryocar coriaceum (OFCC) e da emulsão a base deste e timol. Para tanto, o OFCC foi caracterizado (CG) e avaliado quanto possível citotoxicidade em neutrófilos humano (LDH, MTT). A emulsão, assim como seu principal ativo (OFCC), foram avaliados quanto ao efeito anti-inflamatório em modelo de dermatite de contato irritativa induzida por TPA em camundongos, com determinação do possível mecanismo de ação, bem como em modelo de inflamação in vitro (neutrófilos humano). A atividade antimicrobiana foi investigada contra S. aureus ATCC 6538P e seis cepas clínicas não resistentes, com determinação da concentração inibitória mínima (CIM) e concentração letal mínima (CLM). O OFCC foi caracterizado tendo como componentes majoritários o ácido oleico (52,26%) e palmítico (29,80%), este não mostrou ser citotóxico e apresentou efeito anti-inflamatório ao inibir parcialmente a degranulação de neutrófilos induzida por PMA expressa pela redução da liberação da mieloperoxidase (MPO), reduziu edema de orelha induzido por TPA em camundongos e modulou citocinas (TNF-α e IL-10) de forma inédita neste modelo de inflamação in vivo. A emulsão de OFCC foi caracterizada e observou-se além de estabilidade físico-química, aumento do seu efeito antimicrobiano com adição do timol . Também foi possível observar que a emulsão apresentou efeito anti-inflamatório ao reduzir liberação de mieloperoxidase (MPO) em neutrófilos e significativa redução do edema de orelha induzido por TPA em camundongos. Porém, ao avaliar a concentração das citocinas (TNF-α e IL-10), não se observou modulação. Isso indica a necessidade de mais experimentos investigando outras citocinas para sugerirmos o real mecanismo pelo qual a emulsão de OFCC e timol promove seu efeito anti-inflamatório.

Cashew gum - GC (Anacardium occidentale) is a natural polymer used in the preparation of microparticles. Α-bisabolol - BISA is a sesquiterpene widely used in pharmaceutical and cosmetic formulations. However, it is volatile and unstable. This work aimed to chemically characterize a cashew gum and to prepare cashew gum microparticles containing α-bisabolol (CG / BISA). The anti-inflammatory effect CG / BISA was also investigated. The analysis of cashew gum (1H NMR and 13C NMR; GC - FID) revealed a high content of carbohydrates, consisting mainly of galactose (71%). In addition, one GC showed low and low microbiological susceptibility (14% and 0.6). The gum has a diversity of minerals, with calcium found in the highest proportion (1500 mg / kg). The GC / BISA microparticles show a spherical shape (0.7 µm in diameter) and 1.5% α-bisabolol (CLAE-DAD). Thermal analysis (Thermogravimetry and Differential Scanning Calorimetry) showed that a cashew gum was able to primarily protect α-bisabolol up to approximately 200 ° C. pressure in mice. This research developed a new microparticle of CG / BISA, which showed a promising anti-inflammatory activity, with potential for use in the treatment of inflammatory diseases. A goma do cajueiro - GC (Anacardium occidentale) é um polímero natural usado na preparação de micropartículas. O α-bisabolol - BISA é um sesquiterpeno amplamente utilizado em formulações farmacêuticas e cosméticas. No entanto, é volátil e instável. Este trabalho teve como objetivo caracterizar quimicamente a goma do cajueiro e preparar micropartículas de goma do cajueiro contendo α-bisabolol (CG/BISA). O efeito anti-inflamatório CG/BISA também foi investigado. Análises da goma do cajueiro (1H RMN e 13C RMN; GC - FID) revelou alto teor de carboidratos, constituído principalmente por galactose (71%). Além disso, a GC apresentou baixa umidade e baixa susceptibilidade microbiológica (14% e 0,6). A goma apresenta uma diversidade de minerais, sendo o cálcio encontrado em maior proporção (1500 mg/kg). As micropartículas de GC/BISA mostraram formato esférico (0,7 µm de diâmetro) e 1,5% de α-bisabolol (CLAE-DAD). Análises térmicas (Termogravimetria e Calorimetria Diferencial Exploratória) demonstraram que a goma do cajueiro foi capaz de proteger primariamente o α-bisabolol até aproximadamente 200 ° C. A administração tópica de GC/BISA reduziu significativamente o nível de TNF-α em modelo de lesão por pressão em camundongos. Esta pesquisa desenvolveu uma nova micropartícula de CG/BISA, que mostrou uma atividade anti-inflamatória promissora, com potencial emprego no tratamento de doenças inflamatórias.

The actual pharmacotherapy for the treatment of leishmaniasis has serious side effects, as well as cases of drug resistance. Species such as Amburana cearensis A.C. Smith (cumaru), a caatinga tree, whose extract and / or molecules have shown antiinflammatory, antioxidant, antiparasitic properties can be a potential source for new treatments. The present study evaluated the leishmanicidal effect in vitro and in vivo of secondary metabolites isolated from A. cearensis in infection by L. braziliensis. The dry extract (spray dryer) standard HPLC-PDA (markers / CM: 48.573 ± 0.2674 mg / g and AMB: 15.118 ± 1.1181 mg / g), phenolic fraction of A. cearensis (ESAC and FFAC, respectively) and chemical constituents - coumarin (CUM), amburoside A (AMB), vanillic acid (AV) were added to the suspension of promastigotes for up to 48 hours, and the antipromastigote effect was measured by microscopic analysis with Trypan Blue. To evaluate the effect against amastigote forms Raw 264.7 macrophage infected with L. braziliensis was treated or not with CUM (10, 25,50,10 μg / mL). The cytotoxicity of the drugs was evaluated by the MTT assay, parasitic load and cytokine dosage after 24 and 48 hours of infection. For in vivo tests, lesion development and parasitic load (lesion and lymph node-LN) were evaluated, for which Hamsters (Mesocricetus auratus; n=24) were infected with 107 promastigotes of L. braziliensis in the ear. After the appearance of the lesions, animals were treated Antimony or CUM. All estudied metabolites showed anti-promastigote effect after 48h of incubation, however the CUM, showed better inhibition after 24h of incubation with reduction (100ug / mL: 57.3% ± 3.54%). The effect of CUM was not related to cytotoxicity. CUM (100ug / mL) reduced the intracellular parasitic load in 24 and 48h of incubation (maximum reduction: 49% ± 2.517%) accompanied by an increase in NO production (100ug / mL / 48h: 114, 2 µmol / L). There was an increase in TNFα and IL-10, levels and a decrease in the production of IL-4. Regarding the vivo experiments, CUM administered orally reduced the thickness of the lesion, the parasitic load at the lesion site and prevented the spread of the disease to the lymph node, compared to the untreated control. In view of the results obtained, CUM showed a promising leishmanicidal effect in animals infected with L. braziliensis, being capable to induce the control of the lesion, suggesting that this may occur due to the decrease in the parasitic load as well as a modulation of the immune response with induction of a Th1 response profile (increased TNF-α and IL-12) and increased antiinflammatory cytokines (IL-10), thus providing a favorable microenvironment for the control of intracellular parasitemia in macrophages infected with L. braziliensis. A farmacoterapia atual para o tratamento da leishmaniose apresenta efeitos colaterais graves, como também, resistência aos fármacos. Espécies como Amburana cearensis A.C. Smith (cumaru) uma árvore da caatinga, cujo extrato e/ou moléculas têm mostrado propriedades anti-inflamatória, antioxidante e antiparasitária podendo apresentar-se como fonte em potencial para novos tratamentos. Diante do exposto, no presente estudo avaliou-se o efeito leishmanicida in vitro e in vivo de metabólitos secundários isolados da A. cearensis na infecção por L. braziliensis. Para tanto o extrato seco (spray dryer) padronizado por CLAE-DAD-PDA (marcadores/ AV: 1,613 mg/g, AMB: 48,573 mg/g, CUM: 15,118 mg/g) fração fenólica de A. cearensis (ESAC e FFAC, respectivamente) e constituintes químicos - cumarina (CUM), amburosídeo A (AMB), ácido vanílico (AV) foram adicionados à suspensão de promastigotas por até 48h, e mensurado o efeito antipromastigota pela análise microscópica com Trypan Blue. Para avaliar o efeito contra as formas amastigotas, foram utilizados macrófagos Raw 264.7 infectados com L. braziliensis e tratados ou não com CUM (10, 25,50,10 g/mL). Foi avaliado a citotoxicidade dos fármacos pelo ensaio de MTT, carga parasitária e dosagem de citocinas após 24 e 48h de infecção. Para ensaios in vivo foram avaliados a espessura da lesão e carga parasitária (lesão e linfonodo drenanteLN), para isso Hamsters (Mesocricetus auratus; n=24) foram infectados com 107 promastigotas de L. braziliensis na orelha. Após o aparecimento das lesões, os animais foram tratados com Antimônio ou CUM. Embora todos os metabólitos avaliados tenham apresentado efeito anti-promastigota após 48h de incubação, a CUM e o ESAC, demonstraram melhor inibição na redução dos parasitos (100ug/mL: 57,3% ± 3,54%; 40,44 ± 3,97 %) respectivamente. A CUM não apresentou citotoxicidade, no entanto o ESAC apresentou-se tóxico e por isso apenas a CUM foi eleita para continuidade dos experimentos. Contra as formas amastigotas, a CUM (100µg/mL) reduziu a carga parasitária intracelular em 24 e 48h de incubação (redução máxima: 49% ± 2,517%) acompanhada por um aumento na produção de NO (100ug/mL/48h: 114,2 µmol/L). Observou-se aumento dos níveis de TNFα e IL-10 e diminuição da produção de IL-4. Nos experimentos in vivo, CUM administrado via oral reduziu a espessura da lesão, a carga parasitária no sítio da lesão e protegeu a disseminação da doença para o linfonodo, comparados ao controle não tratado. Diante dos resultados obtidos, a CUM mostrou um efeito leishmanicida promissor em animais infectados com L. braziliensis, sendo capaz de induzir o controle da lesão, sugerindo que isso possa ocorrer em função da diminuição da carga parasitária bem como uma modulação da resposta imune com indução de um perfil de resposta Th1 (aumento de TNF-α e IL-12) e aumento de citocinas anti-inflamatória (IL10), proporcionando assim um microambiente favorável para o controle da parasitemia intracelular em macrófagos infectados por L. braziliensis

Justicia pectoralis Jacq. (Acanthaceae), “chambá”, it used in the treatment of respiratory diseases. Present in Pharmacies Vivas and Renisus, pharmacological studies demonstrate their anti-inflammatory, bronchodilator and antiasthmatic actions, being these related to the presence of coumarin (CM) and umbelliferone (UMB) in the plant. The aim of the study was to develop standardized dry extract (microparticles) and investigate its anti-inflammatory effect in an experimental model of exacerbated asthma.. Analytical methodology (CLAE-DAD) was validated for CM and UMB dosing and showed to be specific, linear, precise, accurate and robust. It was determined that the best harvest time of the aerial parts of J. pectoralis is at three months of cultivation, and seasonal influence is verified. In the optimization of the extraction process, after investigation of several methods and process variables, it was verified that the maceration followed by percolation had the best concentration of markers. The extract was used to optimize the production of the dry extract of Justicia pectoralis by spray drying (ESPJP), presenting good rheological indexes, low hygroscopicide, spherical morphology, CM = 21.10 ± 0.014 (0.70) and UMB = 1.74 ± 0.20 (1.05) and yield of 59.45 ± 1.78 (2.05). Chromatographic study (HPLC-DAD) and structural elucidation allowed to propose 2-O-rhamnosyl-eswertine as a new chemical marker. ESPJP did not show cytotoxicity (MTT and LDH) in human neutrophils. Anti-inflammatory effect of ESPJP was investigated in an experimental model of bronchial asthma exacerbated by immuno-infectious stimulus (OVA and LPS) in BALB/c mice. ESPJP (100 mg/Kg) was able to promote a reduction in the number of total cells present in BAL, as well as the activity of myeloperoxidase. Histological analysis revealed that ESPJP caused a decrease in the number of inflammatory cells in the peribronchial region and in the production of mucus in the lungs. Results allowed to define and standardize stages and parameters of ESPJP production that showed anti-inflammatory activity and was used in the formulation of phytotherapic for oral use. Justicia pectoralis (Acanthaceae), chambá, popularmente usada no tratamento de afecções respiratórias, está presente nas Farmácias Vivas, Renisus e Formulário de Fitoterápicos da Farmacopeia Brasileira. Estudos têm demonstrado ação anti-inflamatória, broncodilatadora e antiasmática, relacionadas à presença de cumarina (CM) e umbeliferona (UMB). O objetivo do trabalho foi desenvolver extrato seco (micropartículas) padronizado e investigar seu efeito anti-inflamatório em modelo experimental de asma exacerbada. Metodologia analítica (CLAE-DAD) foi validada para dosagem de CM e UMB e se mostrou específico, linear, preciso, exato e robusto. Foi determinado que o melhor tempo de colheita das partes aéreas de J. pectoralis é aos três meses de cultivo, sendo verificada influencia sazonal. Na otimização do processo extrativo, após investigação de diversos métodos e variáveis do processo, verificou-se que a maceração seguida de percolação foi a apresentou melhor concentração de marcadores. O extrato foi empregado na otimização da produção do extrato seco de Justicia pectoralis por spray drying (ESPJP), apresentando bons índices reológicos, baixa higroscopicidae, morfologia esférica e teor de CM = 21,10 ± 0,014 (0,70) e UMB = 1,74 ± 0,20 (1,05) e rendimento de 59,45 ± 1,78 (2,05). Estudo cromatográfico (CLAE-DAD) e de elucidação estrutural permitiram propor 2-O-ramnosil-eswertina como novo marcador químico. ESPJP não mostrou citotoxicidade (MTT e LDH) em neutrófilo humano. O efeito anti-inflamatório do ESPJP foi investigado em modelo experimental de asma brônquica exacerbada por meio de estímulo imuno-infeccioso (OVA e LPS) em camundongos BALB/c. ESPJP (100 mg/Kg, v.o.) foi capaz de promover redução significativa do número de leucócitos totais presente no LBA, bem como a atividade da mieloperoxidadse. Análise histológica revelou que o ESPJP causou diminuição no número de células inflamatórias na região peribronquiolar e na produção de muco nos pulmões. Os resultados obtidos permitiram definir e padronizar etapas e parâmetros de produção do ESPJP que mostrou atividade anti-inflamatória e foi empregado na formulação de fitoterápico para uso oral.

Caesalpinia ferrea, recently reclassified as Libidibia ferrea L.P. Queiroz, is a tree belonging to the Fabaceae family, traditionally used in the treatment of diabetes and gastrointestinal disorders. In the present study, the extraction of phenolic compounds obtained from L. ferrea leaves was optimized using a factorial design 23, in which was investigated the effects of the solvent concentration (methanol in water (v/v)), the proportion of L. ferrea leaves in solvent (w/v) and homogenization time (min) in ultra-turrax®. The extract with a higher phenol content was freeze-dried and chemically characterized (HPLC and NMR), in addition to the total phenol content and flavonoids content of the lyophilized. It was investigated the nutritional characteristics through the crude protein content and quantification of minerals, antioxidant properties (DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl)) and anti-inflammatory potencies, evaluating the effect of the extract on the increased nitrite concentration in LPS-induced microbial culture. The optimization suggested that the extraction with 40% of methanol during 4 minutes of homogenization, using 24% of dry leaves (w/v) had the highest total phenol content (283.7 mgGAE/g). In the freeze-dried extract, the total phenol content (260 mgGAE/g) and total flavonoids (21.1 mgQE / g) were quantified, which are related to the presence of gallic acid, quercetin-3-O-glycoside and campferol-3-O glycoside in the plant determined by HPLC and NMR. The dry extract was non-cytotoxic, presenting 4.19% crude protein and high mineral content, such as Fe (21.65 mg/100 g dry extract), Mn (4.38 mg/100 g dry extract) and Zn (31.52 mg/100g dry extract). The extract showed antioxidative / sequestering activity of the DPPH radical, with an IC50 of 10.5 ± 1.01 μg/mL and anti-inflammatory activity (extract: 50 μg / mL), significantly reducing nitrite production in BV2 microglial cells. In view of the results obtained the standardized dry extract of L. ferrea showed interesting nutritional and potential antioxidant and anti-inflammatory characteristics, making the L. ferrea a potential source to a functional food. Caesalpinia ferrea, recentemente reclassificada como Libidibia ferrea L.P. Queiroz, é uma árvore pertencente à família Fabaceae, utilizada tradicionalmente no tratamento do diabetes e distúrbios gastrointestinais. No presente estudo otimizou-se a extração de compostos fenólicos obtidos das folhas de L. ferrea, utilizando um planejamento fatorial 23, no qual foram investigados os efeitos da concentração de solvente (metanol em água (v/v)), a proporção de folhas de L. ferrea em solvente (p/v) e tempo de homogeneização (min) em ultra-turrax®. O extrato com maior teor de fenóis foi liofilizado e caracterizado quimicamente (HPLC e RMN), além de determinado o teor de fenóis totais e flavonoides do liofilizado. Investigou-se as características nutricionais através do teor de proteína bruta e quantificação de minerais, e os potencias antioxidante (sequestro do radical DPPH (2,2-difenil-1-picrilidrazil)) e anti-inflamatório, avaliando o efeito do extrato sobre o aumento da concentração de nitrito em cultura de micróglia induzida por LPS. A otimização sugeriu que a extração com 40% de metanol durante 4 minutos de homogeneização, usando 24% de folhas secas (p/v) apresentou o maior teor de fenóis totais (283,7 mgAG/g). No extrato liofilizado foi quantificado o teor fenóis totais (260 mgEAG/g) e de flavonoides totais (21,1 mgEQ/g), que estão relacionados a presença de ácido gálico, quercetina-3-O-glicosídeo e campferol-3-O-glicosídeo na planta determinados por CLAE e RMN. O extrato seco não foi citotóxico, apresentou 4,19% de proteína bruta e alto teor de minerais, tais como Fe (21,65 mg / 100g de extrato seco), Mn (4,38 mg / 100g de extrato seco) e Zn (31,52 mg / 100g de extrato seco). O extrato mostrou atividade antioxidante/ sequestradora do radical DPPH, com IC50 de 10,5 ± 1,01 μg/mL, e anti-inflamatória (extrato: 50μg/mL) reduzindo de maneira significativa a produção de nitrito em células microgliais BV2. Diante dos resultados obtidos o extrato seco padronizado de L. ferrea apresentou características nutricionais interessantes e potenciais antioxidante e anti-inflamatório, tornado o jucá uma fonte em potencial para um alimento funcional.

Asthma is a chronic inflammatory disease that affects more than 300 million people around the world. The main cause of hospitalization and mortality related to the disease are the exacerbations characterized mainly by an inflammatory response profile where Th2, Th17 and neutrophil lymphocytes play an important role in addition to resistance to corticosteroid therapy. This justifies the importance of research on new drugs for the treatment of allergic asthma, especially exacerbation. In this context, medicinal plants such as Amburana cearensis appear as a potential source of new drugs for the treatment of exacerbated allergic asthma. Faced with the risk of extinction of this wild species, in the last years several chemical and pharmacological studies have been carried out generating promising results with cultivated species, which has as active principles coumarin (CM) and vanillic acid (AV). The aim of this study was to investigate the effects of the standardized extract of cultured A. cearensis (ESPACC, markers: CM and AV), CM and AV on exacerbated allergic asthma in BALB / c mice, including the evaluation of these in the neutrophilic response. The pattern of allergic asthma induced by OVA and exacerbated by LPS in BALB / c mice was investigated, investigating different experimental conditions that were evaluated mainly by the analysis of the accumulation of inflammatory cells in the bronchoalveolar lavage (BAL) of the animals. The effects of ESPACC and CM (vo or ip) on the accumulation of inflammatory cells, tissue morphology and levels of IL-4 and TNF-α cytokines in BAL of animals sensitized and challenged with LPS + OVA , in addition to the evaluation of the effects of ESPACC, CM and AV on the degranulation and production of reactive oxygen species (EROS) in PMA-activated neutrophils. In the standardization of the exacerbated asthma model, it was seen that the dose of OVA and LPS, as well as the increase in the duration of exposure to the antigens, were determinant for obtaining the model of exacerbated allergic asthma. Treatment of CM animals (10 or 20 mg / kg, ip or v0, respectively) did not significantly reduce leukocyte accumulation in BAL compared to the control group, but selectively modulated neutrophil migration. ESPACC (100 mg / kg, ip) was able to significantly inhibit leukocyte accumulation in BAL, mucus production and cytokine secretion. In neutrophil culture, ESPACC, CM and AV significantly reduced the neutrophil degranulation induced by PMA measured by the release of MPO, as well as EROS production. The results indicate that cultured A. cearensis, CM and AV have an anti-inflammatory effect in an exacerbated allergic asthma model, modulating inflammatory cell accumulation and neutrophil response, as well as the production of mucus, cytokines and EROS. The results showed that cumaru and its chemical constituents are a potential source for the development of anti-inflammatory drugs to be used in the treatment of exacerbated allergic asthma. A asma é uma doença inflamatória crônica que afeta mais de 300 milhões de pessoas ao redor do mundo. A principal causa de internação e mortalidade relacionadas a doença são as exacerbações caracterizadas principalmente por um perfil de resposta inflamatória onde os linfócitos Th2, Th17 e neutrófilos têm um papel importante, além da resistência à terapia com corticoides. Isso demonstra a importância de pesquisas de novos fármacos para o tratamento da asma alérgica, em especial a exacerbada. Nesse contexto, as plantas medicinais como Amburana cearensis surgem como fonte em potencial de novos fármacos para o tratamento da asma alérgica exacerbada. Considerando o risco de extinção da planta silvestre, nos últimos anos diversos estudos químicos e farmacológicos têm sido realizados gerando resultados promissores com espécie cultivada, que possui como princípios ativos a cumarina (CM) e ácido vanílico (AV). Diante do exposto, o objetivo do presente estudo foi investigar os efeitos do extrato seco padronizado de A. cearensis cultivada (ESPACC, marcadores: CM e AV), CM e AV sobre a asma alérgica exacerbada em camundongos BALB/c, incluindo a avaliação desses na resposta neutrofílica. Foi realizada a padronização do modelo de asma alérgica induzida por OVA e exacerbada por LPS em camundongos BALB/c, investigando diferentes condições experimentais que foram avaliadas principalmente pela análise do acúmulo de células inflamatórias no lavado broncoalveolar (LBA) dos animais. A seguir, foram avaliados os efeitos do ESPACC e CM (vo ou ip) sobre o acúmulo de células inflamatórias, a morfologia do tecido e os níveis de citocinas IL-4 e TNF-α no LBA de animais sensibilizados e desafiados com LPS+OVA, além da avaliação dos efeitos do ESPACC, CM e AV sobre a desgranulação e produção de espécies reativas de oxigênio (EROS) em neutrófilos ativados por PMA. Na padronização do modelo de asma exacerbada, foi visto que a dose de OVA e LPS, bem como o aumento no tempo de duração da exposição aos antígenos foram determinanantes para a obtenção do modelo de asma alérgica exacerbada. O tratamento dos animais com CM (10 ou 20 mg/kg, via ip ou vo, respectivamente) não reduziu significativamente o acúmulo de leucócitos no LBA em relação ao grupo controle, mas modulou seletivamente a migração de neutrófilos. O ESPACC (100 mg/kg, ip) foi capaz de inibir significativamente o acúmulo de leucócitos no LBA, a produção de muco e a secreção de citocinas. Em cultura de neutrófilos, ESPACC, CM e AV reduziram significativamente a desgranulação de neutrófilos induzida por PMA mensurada pela liberação de MPO, bem como a produção de EROS. Os resultados indicam que A. cearensis cultivada, CM e AV possuem efeito anti-inflamatório em modelo de asma alérgica exacerbada, modulando o acúmulo de células inflamatória e a resposta neutrofílica, bem a produção de muco, citocinas e EROS. Os resultados obtidos mostraram que o cumaru e seus constituintes químicos constituem uma fonte em potencial para o desenvolvimento de fármacos anti-inflamatórios a serem empregados no tratamento da asma alérgica exacerbada.

Cocos nucifera L. (Arecaceae), a fruit palm, popularly known as coconut, used in various industrial sectors, from agricultural to cosmetic. Studies have demonstrated the antibacterial, antifungal and antiviral activities of coconut water (liquid albumen) and / or plant extracts. In recent years our group has invested unprecedentedly in technological and biological research on a residue (fibers / mesocarp) of coconut agroindustry, which has difficult decomposition in nature. In view of the above, the objective of the present study was to develop a phytocosmetic standardized antioxidant for facial use from coconut fiber (Cocos nucifera), investigating the two plant varieties. Initially it was optimized and validated spectrophotometric method for analyzes of total phenols in coconut extracts. The liquid extracts of the two varieties (yellow and green) of C. nucifera were produced by maceration associated or not to turbolysis, using 7% vegetable drug: solvent ratio. Among the extracts produced from the two coconut varieties, the yellow coconut hydroalcoholic extract (EHACNA) produced by maceration 24h associated with 10 min turbolysis showed the best results regarding the total phenol content - FT (5,20 ± 0.1 mg / mL), total solids (16.72 ± 0.04 mg / mL) and DPPH (89% inhibition of the radical). Then this extract was used in the development of the dry extract by spray-dryer with the aid of factorial planning. The dry extract of the yellow coconut showed an average content of total phenol content of 29.36% and the analysis by scanning electron microscopy revealed that it has spherical and uniform particles. Chromatographic analysis (CLAE-DAD) of the dry extract determined its fingerprint, besides the contents of three bioactive phenols, chlorogenic acid - ACLOR (0.16%); catechin - CAT (0.29%) and epicatechin - EPI (0.19%). The dry extract produced was incorporated into the peel off facial mask formulation, which was stable (evaluation period: 21 days, temperatures 27 and 45 ° C), maintaining its color, odor, appearance and pH. The face mask showed scavenging activity of DPPH (50 mg / mL - 86% reduction) and superoxide anion (50 / mL - 44.3% reduction), which were comparable to vitamin C, antioxidant standard (89% and 52%, respectively). The study showed, unprecedentedly, that the liquid extract of the yellow coconut has physical-chemical characteristics of greater interest for the development of cosmetics in relation to the green coconut. The yellow coconut dry extract showed technological properties of interest, in addition to antioxidant activity, thus giving a concrete cosmetic application of the facial mask peel off the yellow coconut. Cocos nucifera L. (Arecaceae), é uma palmeira frutífera, conhecida popularmente como coqueiro, utilizada em vários setores industriais, desde agrícola até cosmético. Estudos têm demonstrado as atividades antibacteriana, antifúngica e antiviral da água do coco (albúmen líquido) e/ou extratos da planta. Nos últimos anos nosso grupo tem investido de maneira inédita em pesquisas tecnológicas e biológicas de um resíduo (fibras/mesocarpo) da agroindústria do coco, que tem difícil decomposição na natureza. Diante do exposto, o objetivo do presente estudo foi desenvolver um insumo fitocosmético padronizado antioxidante para uso facial a partir da fibra de coco (Cocos nucifera), investigando as duas variedades da planta. Inicialmente foi otimizado e validado método espectrofotométrico para análises de fenóis totais nos extratos de coco. Os extratos líquidos das duas variedades (amarela e verde) de C. nucifera foram produzidos por maceração e maceração associada à turbólise, usando 7% relação droga vegetal: solvente. Dentre os extratos produzidos a partir das duas variedades de coco, o extrato hidroalcoólico de coco amarelo (EHACNA) produzido por maceração 24h associado à turbólise 10 min, foi o que apresentou os melhores resultados quanto ao teor de fenóis totais - FT (5,20 ± 0,1 mg/mL), sólidos totais (16,72 ± 0,04 mg/mL) e DPPH (89 % inibição do radical). Esse extrato foi então empregado no desenvolvimento do extrato seco por spray-dryer com auxílio de planejamento fatorial. O extrato seco do coco amarelo apresentou um teor médio de fenóis totais de 29,36 % e a análise por microscopia eletrônica de varredura revelou que este possui partículas esféricas e uniformes. Análise cromatográfica (CLAE-DAD) do extrato seco determinou o perfil cromatográfico, além dos teores de três fenóis bioativos, ácido clorogênico – ACLOR (0,16%); catequina – CAT (0,29 %) e epicatequina – EPI (0,19%). O extrato seco produzido foi incorporado na formulação de máscara facial peel off, que mostrou-se estável (período de avaliação: 21 dias; temperaturas: 27 e 45 °C), mantendo sua cor, odor, aspecto e pH. A máscara facial apresentou atividade sequestradora do radical DPPH (50 μg/mL – 86% de redução), e do ânion superóxido (50 μg/mL – 44,3% redução), que foram comparáveis a vitamina C, padrão antioxidante (89 % e 52%, respectivamente). O estudo mostrou, de maneira inédita, que o extrato líquido do coco amarelo possui características físico-químicas de maior interesse para o desenvolvimento de cosméticos em relação ao coco verde. O extrato seco do coco amarelo mostrou propriedades tecnológicas de interesse, além de atividade antioxidante, conferindo assim uma concreta aplicação cosmética da máscara facial peel off do coco amarelo.

Spondias mombin L. (Anacardiaceae) is a large-sized tree, fruit, common in western India, Mexico, Peru, Brazil and popularly known as cajazeira. All parts have been used by traditional medicine. The plant is part of REPLAME (List of Medicinal Plants) the state of Ceará and project Vivas pharmacies with the indication for the treatment of herpes. The aim of this study was to develop a standardized fitoproduto from the leaves of S. mombin, and evaluate its potential anti-inflammatory and antiviral (Herpes simplex 1). For that were initially established the method of preparation (drying oven with circulation / air renewal) at 60 ± 5 ° C for 4 hours and the specifications for quality control of plant drug (DV). The extraction method for obtaining a standardized extract of S. mombin was dynamic maceration for 2.5 h at 30 ° C and relative DV: solvent (30% ethanol in water) 0.3, wherein the total phenol content ( FT: 17.52 mg / mL), dry (RS: 7.12%, w / v) and chromatographic profile by HPLC-DAD (chlorogenic acid - AC: 0.83 mg / ml and Geraniina - GR: 7, 37 mg / ml). In the evaluation of potential anti-inflammatory, S. mombin extract (ESM) (1, 10, 50, 100 ug / ml) partially inhibited the release of MPO (Myeloperoxidase) induced by PMA (Folbol-12-myristate-13-acetate ), with best effect seen at the highest concentration (% inhibition: 50.4), while the standard GR (1, 10, 25, 50 and 100 ug / ml) induced a dual effect, increasing neutrophil degranulation induced by PMA in smaller concentrations (1 - 25 mg / mL) and this inhibits (40.3 and 83.5%) in higher concentrations (50 and 100 ug / ml). As the concentration of 200 / ml ESM showed cytotoxicity in human neutrophils in the MTT test. In the assessment of cytotoxicity on Vero cells, the ESM showed CC50 = 1680 mg / mL and CC50 GR = 392.5 mg / mL, whereas the standard PFA (phosphonoformic acid) showed CC50 = 392.5 mg / mL. In the evaluation of the antiviral potential, the ESM was more potent with IC 50 = 342.5 ug / ml compared to GR (IC 50 = 417.5 ug / ml) and PFA (IC50 = 570 ug / ml), and had an index selectivity (IS) next to the PFA. The IS GR was 0.94. The results obtained in this study allowed to establish, in an unprecedented manner, methods and specifications for the production and quality control of both the DV as the ESM. Furthermore, both ESM as geraniina (bioactive marker) possess anti-inflammatory activity and anti-herpes (herpes simplex 1) Spondias mombin L. (Anacardiaceae) é uma árvore de porte elevado, frutífera, frequente no Oeste da Índia, México, Peru, Brasil e conhecida popularmente como cajazeira. Todas as suas partes têm sido utilizadas pela medicina tradicional. A planta faz parte da REPLAME (Relação de Plantas Medicinais) do estado do Ceará e do projeto Farmácias Vivas com a indicação para o tratamento da herpes. O objetivo do presente estudo foi desenvolver um fitoproduto padronizado a partir das folhas de S. mombin, e avaliar seu potencial anti-inflamatório e antiviral (Herpes simplex 1). Para isso, inicialmente, foram estabelecidos o método de preparação (secagem em estufa com circulação/ renovação de ar) a 60 ± 5 ºC por 4 horas e as especificações para o controle de qualidade da droga vegetal (DV). O método extrativo para obtenção do extrato padronizado de S. mombin foi a maceração dinâmica por 2,5 h, a 30 °C e relação DV:solvente (etanol 30 % em água) de 0,3, caracterizado pelo teor de fenóis totais (FT: 17,52 mg/mL), resíduo seco (RS: 7,12 %, p/v) e perfil cromatográfico por CLAE-DAD (Ácido clorogênico - AC: 0,83 mg/mL e Geraniina - GR: 7,37 mg/mL). Na avaliação do potencial anti-inflamatório, extrato de S. mombin (ESM) (1, 10, 50, 100 μg/mL) inibiu parcialmente a liberação de MPO (Mieloperoxidase) induzida por PMA (Folbol-12-miristato-13-acetato), sendo observado melhor efeito na maior concentração (% inibição: 50,4), enquanto que o padrão GR (1, 10, 25, 50 e 100 μg/mL) promoveu um efeito dual, ampliando a desgranulação de neutrófilo induzida por PMA nas menores concentrações (1 – 25 μg/mL) e inibindo esta (40,3 e 83,5 %) nas maiores concentrações (50 e 100 μg/mL). Apenas a concentração de 200 μg/mL do ESM mostrou citotoxicidade em neutrófilos humanos no teste do MTT. Na avaliação da citotoxicidade em células VERO, o ESM apresentou CC50= 1680 μg/mL e a GR CC50 = 392,5 μg/mL, enquanto que o padrão PFA (Ácido fosfonofórmico) apresentou CC50 = 392,5 μg/mL. Na avaliação do potencial antiviral, o ESM foi mais potente com CI50 = 342,5 μg/mL em relação a GR (CI50= 417,5 μg/mL) e PFA (CI50= 570 μg/mL), e teve um índice de seletividade (IS) próximo ao do PFA. O IS da GR foi de 0,94. Os resultados obtidos no presente estudo permitiram estabelecer, de maneira inédita, métodos e especificações para a produção e controle de qualidade tanto da DV quanto do ESM. Além disso, tanto o ESM quanto a geraniina (marcador bioativo) possuem atividade anti-inflamatória e anti-herpes (Herpes simplex 1)

The species Lippia sidoides Cham., known as rosemary-peppermint, is an aromatic plant of northeastern Brazil whose research show promising antimicrobial activity and anti-inflammatory. From the leaves of L. sidoides extract an essential oil consisting mainly thymol, pronounced antimicrobial component, but it can present toxicity at high doses. The placement of drugs in nanoparticulate form have attracted great interest in recent years because these systems are able to confer protection active substance, increasing the therapeutic efficacy and reducing side effects. The aim of this study was to develop, characterize and perform nanosystems biological assessment containing essential oil of L. sidoides (OELS). The study included characterization of plant and drug derivative (essential oil), analytical standardization - HPLC-DAD and GC-MS (marker: thymol), development of nanocapsules L. sidoides (NCLS), stability studies, and evaluation of cytotoxicity and the antimicrobial, antioxidant and anti-inflammatory topical. The OELS content extracted from the leaves was around 4.6% (major compounds: thymol 65%, o-cymene 17% and ecaryophyllene 4%). The analytical method by HPLC-DAD showed specific, linear (r = 0.996), accurate, precise and robust according to ANVISA guidelines. The NCLS (thymol: 3.1 ± 2.5 mg / mL) showed 92% encapsulation efficiency, average diameter 190nm, 0.204 PDI and zeta potential -20 mV. In the stability study there was no significant change of the parameters up to 120 days (25°C). In antimicrobial evaluation OELS and NCLS showed MIC 70 mg / mL. Assessment of antiinflammatory activity demonstrated that OELS and thymol depending on the dose has pro-inflammatory or anti activity. The nanosystems no active showed antiedematogenic effect, and among the investigated nanosystems, NCLS and nanoemulsion / OELS, the latter significantly inhibited the ear edema induced by TPA and reduced the concentration of myeloperoxidase (MPO). The development and standardization of nanosystems the basis of L. sidoides showed technological features of interest, quenched toxicity OELS in maintaining human neutrophil antimicrobial potential antioxidant and anti-inflammatory plant. A espécie Lippia sidoides Cham., conhecida popularmente como alecrim-pimenta, é uma planta aromática do nordeste brasileiro cujas pesquisas apontam promissoras atividades antimicrobiana e anti-inflamatória. Das folhas de L. sidoides extrai-se um óleo essencial constituído principalmente de timol, componente de pronunciada ação antimicrobiana, mas que pode apresentar toxidade em doses elevadas. A veiculação de fármacos em forma de nanopartículas têm atraído grande interesse nos últimos anos, pois esses sistemas são capazes de conferir proteção a substância ativa, aumentando a eficácia terapêutica e diminuindo efeitos adversos. O objetivo deste trabalho foi desenvolver, caracterizar e realizar avaliação biológica de nanosistemas contendo óleo essencial de L. sidoides (OELS). O estudo incluiu caracterização da droga vegetal e derivado (óleo essencial), padronização analítica – CLAE-DAD e CG-MS (marcador: timol), desenvolvimento de nanocápsulas de L. sidoides (NCLS), estudo de estabilidade, e avaliação da citotoxidade e das atividades antimicrobiana, antioxidante e anti-inflamatória tópica em camundongos. O teor de OELS extraído das folhas foi em torno de 4,6%, (compostos majoritários: timol 65%, o-cimeno .17% e e-cariofileno 4%). O método analítico por CLAE-DAD se mostrou especifico, linear (r= 0,996), exato, preciso, e robusto de acordo com diretrizes da ANVISA. As NCLS (timol: 3,1± 2,5 mg/mL), apresentaram eficiência de encapsulação 92 %, diâmetro médio 190 nm, PDI 0,204 e potencial zeta -20 mV. No estudo de estabilidade não houve alterações expressivas dos parâmetros até 120 dias (25ºC). Na avaliação antimicrobiana OELS e NCLS apresentaram CIM de 70 μg/mL. A avaliação da atividade anti-inflamatória demonstrou que o OELS e o timol dependendo da dose possui atividade pró ou anti-inflamatória. O nanosistema sem ativo mostrou efeito antiedematogênico, e dentre os nanosistemas investigados, NCLS e nanoemulsão/OELS, o último inibiu significativamente o edema de orelha induzido por TPA e reduziu a concentração de mieloperoxidase (MPO). O desenvolvimento e a padronização do nanosistema a base de L. sidoides mostrou características tecnológicas de interesse, extinguiu a toxicidade do OELS em neutrófilo humano mantendo o potencial antimicrobiano, antioxidante e anti-inflamatório da planta.

Dengue is an infectious disease that may also happen in a severe form with hemorrhagic events. The etiological agent of the disease is an arbovirus wich is transmitted by the mosquito Aedes aegypti, the primary vector of the disease. The main actions to combat the disease are mosquito control and personal protection that can take place using repellents. Almost all repellents have DEET as active substance, which has use restrictions. In this context, thymol (monoterpene) has become a potential insect repellent against Ae. aegypti, and the use of technologies is essential to the viability of a repellent thymol based product. Given the above, the aim of this study was the preparation and pharmaceutical characterization of thymol nanocapsules and evaluation of skin permeation, in vitro cytotoxicity and mosquito repellence (Ae. aegypti). For this purpose, we developed and validated analytical method for identification and quantification of thymol by HPLC-PDA. Nanocapsules thymol (NCT - 1%) showed an active content of 85%. Continuing the characterization, NCT were analyzed for the mean diameter (D), polydispersity index (PDI), potential zeta (PZ), encapsulation efficiency, pH and product stability . Results shared showed an average diameter of approximately 150 nm, negative PZ (-27,83 ± 2,60), PDI less than 0.2 and an encapsulation efficiency of 98%. NCT and ethanolic solution of thymol were evaluated for release, permeation and retention of thymol through dialysis membrane or the porcine ear skin in a Franz diffusion cell model. NCT showed release control of thymol in relation to the ethanolic solution of thymol, which showed a maximal release of 53.8% of the dose within 24 hours of testing, higher than the amount released by the NCT (17.6%) indicating the decrease in permeability when nanoencapsulated. Cytotoxicity analysis of free and encapsulated thymol (50 to 100 ug / ml) in human keratinocytes by MTT assay showed cytotoxicity of free thymol - 100 ug / mL (% viable cells: 16.1 ± 3.2 ), which was virtually devoid with this encapsulation (% viable cells: 92.7 ± 31). Preliminary assessment of the repellent potential of NCT against Ae. aegypti showed that in human topical administration of the product promoted up to 67% repellency. The results suggest that standardized NCT has morphological and chemical characteristics of interest to a nanossystem, plus the potential repellent against Ae. aegypti mosquito. A dengue é uma doença infecciosa que pode se manifestar de forma grave, com quadros hemorrágicos. O agente etiológico é um arbovirus transmitido pela picada do mosquito Aedes aegypti, principal vetor da doença. As principais medidas de combate são controle do mosquito e proteção individual, que pode dar-se com o uso de repelentes. Quase a totalidade dos repelentes no mercado possui DEET como ativo, que possui restrições de uso. Neste sentido, o timol (monoterpeno) tem-se mostrado promissor como repelente de inseto (Ae. aegypti), sendo a agregação de tecnologias essencial para a viabilidade de um produto repelente à base de timol. Diante do exposto, o objetivo do presente trabalho foi a preparação e caracterização farmacêutica de nanocápsulas de timol, com avaliação da permeação cutânea, citotoxicidade e atividade repelente de inseto (Ae. aegypti). Para tanto, foi desenvolvido e validado método analítico para identificação e quantificação do timol por CLAE-DAD nas nanocápsulas de timol (NCT – 1%), que apresentou um teor de ativo em torno de 85%. Prosseguindo a caracterização das NCT, foram determinados o diâmetro médio, índice de polidispersão (PDI), potencial zeta (PZ), eficiência de encapsulação e pH, além do estudo de estabilidade. Análises das NCT mostraram um diâmetro médio de aproximadamente 150 nm, PZ negativo (-27,83 ± 2,60), PDI abaixo de 0,2 e uma eficiência de encapsulação de 98 %. NCT e solução etanólica de timol foram avaliadas quanto à liberação, permeação e retenção de timol através de membrana de diálise ou da pele de orelha suína, em um modelo de células de difusão de Franz. A NCT mostrou controle da liberação de timol em relação à solução etanólica de timol, que apresentou por sua vez uma liberação máxima de 53,8% da dose em 24 horas de ensaio, superior à quantidade liberada pela NCT (17,6%), evidenciando a diminuição da permeabilidade do timol quando nanoencapsulado. Análise da citotoxicidade do timol livre e encapsulado (50 e 100 g/mL) em queratinócitos humano através do teste de MTT, mostrou a citotoxicidade do timol livre - 100 g/mL (% células viáveis: 16,1 ± 3,2), que foi praticamente destituída com a encapsulação deste (% células viáveis: 92,7 ± 31). Avaliação preliminar do potencial repelente das NCT ao mosquito Ae. aegypti em humano mostrou que a administração tópica desse produto promoveu até 67 % de repelência. Os resultados obtidos sugerem que as NCT padronizadas possuem características morfológicas e químicas de interesse para um nanossistema, além do potencial repelente ao mosquito Ae. aegypti.

The herbal medicine Gotas Arthur de Carvalho® (GAC) produced from Matricaria recutita (chamomile), Gentiana lutea (gentian) and Foeniculum vulgare (fennel) tinctures, has indication use as antispasmodic and stomachic, and despite being on the market more than 70 years, does not have scientific studies proving its quality, stability, safety and therapeutic efficacy in gastrointestinal disorders. This study aims to validate the use of GAC in functional gastrointestinal disorders, determining the safety and efficacy of product, to meet the requirements of ANVISA and thus, contribute to the product registration renovation. Firts, were carried out the preclinical toxicity test (acute and repeated-doses toxicity) in rodents, cytotoxicity on human neutrophils and HepG2 cells and evaluation of the pharmacological activity of the herbal medicine to treat gastrointestinal disorders. Initially, the herbal medicine was standardized on the content of active markers (7-glucosídio apigenin, gentiopicrosídio and anethole) determined by the use of validated analytical method - RE 899 (BRAZIL, 2003) with the aid of Liquid Chromatography System with High Efficiency array detector diiodo (HPLC-DAD). In vitro toxicological evaluations (culture neutrophils and HepG2 cells) was investigated the determination of lactate dehydrogenase activity and / or the MTT test, and GAC (10-200 ug / ml) was shown to be not cytotoxic. Continuing toxicity studies in rodents, the estimated LD50 of the product was above 2 g / kg when administered orally. Moreover, in repeated-doses toxicity study (250-1000 mg / kg, p.o.) in rats confirmed the low toxicity of the product through biochemical, haematological and histopathological evaluations. In pharmacological evaluation, the herbal GAC (100 - 400 mg / kg, p.o.) showed activity on dyspepsia, demosntrated by reduction of intestinal transit induced by bethanechol, besides the laxative effect. Moreover, the antinociceptive effect of GAC founded in visceral pain model induced by mustard oil in mice where both opioid and adrenergic systems, in addition to potassium channels appear to have an important role in action, which is not related to a possible central effect, because sedation or decreased motor activity was not observed. Finally, the herbal medicine Arthur de Carvalho showed a safety standard which confirms its use as medicine, in addition to its potential in the treatment of gastrointestinal disorders, proving its antinociceptive activities / visceral pain and role in dyspepsia. However, further studies are still needed, especially related to determine the pharmacological mechanism of action as well as clinical studies, seeking registration as herbal medicine in Brazil. Also, is important valorize the importance of this study of university-industry partnership / Pharmaceutical Industry, which made work something concretely applied to social and economic needs of the region. O fitoterápico Gotas Arthur de Carvalho produzido a partir das tinturas de Matricaria recutita (camomila), Gentiana lutea (genciana) e Foeniculum vulgare (funcho), possui como indicação o uso como anti-espasmódico e estomáquico e, apesar de estar no mercado a mais de 70 anos, não possui ainda estudos científicos que comprovem a sua qualidade, estabilidade, segurança e eficácia terapêutica nas desordens gastrointestinais. O presente trabalho tem como principal objetivo validar o uso do fitoterápico nas desordens gastrintestinais, determinando a segurança e eficácia do produto padronizado, para atender as exigências da ANVISA e assim, contribuir para a renovação de registro do produto. Foram então realizados os testes de toxicidade pré-clínica (toxicidade aguda e de doses repetidas) em roedores, citotoxicidade em neutrófilos humano e células HepG2 e avaliação da atividade farmacológica do fitoterápico para desordens gastrintestinais. Inicialmente, fitoterápico foi padronizado quanto ao teor de marcadores ativos (apigenina 7-glucosídio, gentiopicrosídio e anetol) determinados pelo emprego de método analítico validado - RE 899 (BRASIL, 2003) com auxílio de sistema de Cromatografia Líquida de Alta Eficiência com detector de arranjo diiodo (CLAE-DAD). Nas avaliações toxicológicas in vitro (cultura de neutrófilos e células HepG2) investigada pela determinação da atividade da lactato desidrogenase e/ou teste do MTT, o fitoterápico GAC (10-200 µg/mL) não mostrou-se citotóxico. Prosseguindo os estudos de toxicidade em roedores, a estimativa da DL50 do produto foi acima de 2g/kg, quando administrado por via oral. Ademais, estudo de toxicidade de dose repetida (250-1000 mg/Kg, v.o.) em ratos ratificou a baixa toxicidade do produto através de avaliações bioquímica, hematológica e histopatológica. Na avaliação farmacológica, o fitoterápico GAC (100 – 400 mg/Kg, v.o.) mostrou potencial antidispéptico, reduziu o trânsito intestinal induzido por betanecol, além do efeito laxativo. Ainda, o fitoterápico apresentou efeito antinociceptivo no modelo de dor visceral induzido pelo óleo de mostarda em camundongos, tanto nos sistemas opióide e adrenérgico, além dos canais de potássio, que parecem possuir um papel importante nessa ação, que não está relacionada a um possível efeito central, como sedação ou diminuição da atividade motora. Por fim, o fitoterápico Gotas Arthur de Carvalho mostrou um padrão de segurança que ratifica o seu emprego como medicamento, além do seu potencial no tratamento de desordens gastrointestinal, destacando suas atividades anti-dispéptica e antinociceptiva/dor visceral. Contudo, estudos adicionais são ainda necessários relacionados especialmente à determinação mais aprofundada do mecanismo de ação farmacológico, bem como a realização de estudos clínicos, vislumbrando seu registro como fitoterápico no país. Ainda, destaca-se a importância do presente estudo que envolveu parceria universidade-empresa/Indústria Farmacêutica, o que tornou o trabalho algo concretamente aplicada às necessidades sociais e econômicas da região.

DEVELOPMENT AND PHARMACOLOGICAL EVALUATION OF METHY L CINNAMATE NANOCAPSULES: ANTI-INFLAMMATORY POTENTIAL . Elizama Shirley Silveira. Advisor: Profª. Drª. Luzia Kalyne Almeida Moreira Leal. Master degree. Program of Post-Graduate in Pharmaceutical Sciences . Department of Pharmacy. Federal University of Ceará, 2013. The methyl cinnamate (MC) is a monoterpene found in the essential oil of medicinal plants of various species, which have antimicrobial and analg esic and activities. In addition, studies have shown that the MC itself has anti-spamodic and anti-inflammatory action. However, the considerable volatility of the MC, poor stability ( stable freshly prepared solution) and lipophilic character is a challenge for further stu dies for the development of pharmaceutical formulations from that monoterpene. In this context , the encapsulation of MC in nanocarriers can be an alternative to overcome or reduce these c hallenges without compromising or even improving the pharmacological characteristics of th e product. Given the above, the objective of this work was the development and characterizati on of nanocapsules of MC (NCMC) through analytical method validation, and to evalua te the possible cytotoxicity and investigate the anti-inflammatory potential of the MC and the N CMC using in vitro assays. To that end, we developed and validated analytical method for id entification and quantification of the MC by UV spectrophotometry, as recommended in Resoluti on RE No. 899 (BRAZIL, 2003). Nanocapsules MC (NCMC) or nanocapsule-white NCW (wi thout MC) were prepared by Eudragit® RS100 polymer interfacial deposition of t he preformed polymer and characterized as the diameter (D), polydispersity index (PDI), ze ta potential (PZ), pH and content; and investigated the stability of the product for 60 da ys at ambient temperature. he in vitro toxicity was evaluated in the NCMC neutrophils or h uman keratinocytes by lactate dehydrogenase activity, and the MTT (Bromide 3 [4,5 -dimethylthiazol-2-yl] -2,5- diphenyltetrazolium bromide) test, while the anti-i nflammatory potential of MC and NCMC was assessed by neutrophil degranulation model indu ced by PMA (phorbol 12- myristate 13- acetate) , (0,1 μ M). For purposes of characterizati on and NCMC stability studies, the spectrophotometric method (270 nm) was validated, b eing specific, linear, precise, accurate and robust. In developing NCCM, among produced form ulations (NCMC1-3), the NCMC3 was selected for the large active content (88.50%) compared with other formulations (NCMC1: 42.48%; NCMC2: 81.60 %); and a diameter (D) average 136.1 ± 1.71 nm and low PDI (0.127 ± 0.01). The NCMC3 presented also an enc apsulation efficiency of 87.03 ± 0.21%. The results obtained with formulations white (NCW1-3) showed that MC does not influence the characteristics. The cytotoxicity of NCMC3 in human neutrophils (LDH) was proportional to the concentration (> 50 μ g/ml) and incubation time ( ≥ 30 min). In the MTT assay in human keratinocytes or neutrophils NCMC3 w as not cytotoxic, and quenched toxicity of free MC. Both the MC (1-100 mg / mL) an d the NCMC (1-100 μ g/mL) showed anti-inflammatory activity by significantly reducin g the degranulation of human neutrophils. In addition, the encapsulation of MC promoted an in crease in this activity in relation to the free MC, with similar magnitude to indomethacin. Th e MC encapsulation nanoscale allowed an increased in the time of stability of terpene an d reduced its cytotoxicity and increase their anti-inflammatory action in human. O Cinamato de Metila (CM) é um monoterpeno encontrado no óleo essencial de várias espécies de plantas medicinais, que possuem atividades antimicrobiana, analgésica e anti-espasmódica. Além disso, estudos têm mostrado que o próprio CM tem ação antiespamódica e anti-inflamatória. No entanto, a considerável volatilidade do CM, pouca estabilidade (estável em solução recém-preparada) e caráter lipofílico constitui um desafio para prosseguir os estudos visando o desenvolvimento de formulações farmacêuticas a partir desse monoterpeno. Nesse contexto, a encapsulação do CM em nanocarreadores, pode constituir uma alternativa no sentido de superar ou reduzir esses desafios, sem comprometer ou até mesmo melhorar as características farmacológicas do produto. Diante do exposto, o objetivo deste trabalho foi o desenvolvimento e caracterização de nanocápsulas de CM (NCCM) através de método analítico validade neste estudo, além de avaliar a possível citotoxicidade e investigar o potencial anti-inflamatório do CM e da NCCM em ensaios in vitro. Para tanto, foi desenvolvido e validado método analítico para identificação e quantificação do CM por espectrofotometria UV, conforme preconizado na resolução RE nº 899 (BRASIL, 2003). As nanocápsulas de CM (NCCM) ou nanocápsula branca-NCB (sem adição CM) foram preparadas com o polímero Eudragit® RS100 pelo método de deposição interfacial do polímero pré-formado e caracterizadas quanto ao diâmetro (D), índice de polidispersão (PDI), potencial zeta (PZ), pH e teor; e investigada a estabilidade do produto por 60 dias, a temperatura ambiente. A toxicidade in vitro da NCCM foi avaliada em neutrófilos ou queratinócitos humanos através da atividade da lactato desidrogenase e do teste do MTT, enquanto o potencial anti-inflamatório do CM e da NCCM foi avaliado através do modelo de desgranulação de neutrófilo induzido por PMA (0,1 µM). Para fins de caracterização e estudos de estabilidade da NCCM, o método espectrofotométrico (270 nm) foi validado, mostrando-se específico, linear, preciso, exato e robusto. No desenvolvimento de NCCM, dentre as formulações produzidas (NCCM1-3), a NCCM3 foi selecionada por apresentar um maior teor de ativo (88,50%) em relação as demais formulações (NCCM1: 42,48%; NCCM2: 81,60%); além de um diâmetro (D) médio de 136,1 ± 1,71 nm e baixo PDI (0,127 ± 0,01). A NCCM3 apresentou ainda, uma eficiência de encapsulação de 87,03 ± 0,21 %. Os resultados obtidos com as NCB mostraram que em algumas circunstâncias o CM parece influenciar nas características do nanosistema. A citoxicidade da NCCM3 em neutrófilo humano (LDH) foi observada de acordo com a concentração (> 50 µg/mL) e tempo de incubação (≥30min). No teste do MTT em neutrófilo ou queratinócitos humano a NCCM não foi citotóxica, e extinguiu a toxicidade do CM livre. Tanto o CM (1- 100 μg/mL) quanto a NCCM3 (1- 100 μg/mL) mostraram uma atividade antiinflamatória por reduzir significativamente a desgranulação de neutrófilos humano. Além disso, o encapsulamento do CM promoveu um aumento dessa atividade em relação ao CM livre, com magnitude semelhante à indometacina. A encapsulação do CM em escala nanométrica permitiu um aumento no tempo de estabilidade desse terpeno, além de reduzir a sua citoxicidade e aumentar a sua ação anti-inflamatória em neutrófilo humano.

Falciform Anemia (FA) is a hereditary hemoglobinopathy resulting from a β-globin gene mutation (α2β26 GLU→ VAL) that originates a hemoglobin variant called S (HbS). Its polymerization promotes hemolytic and vaso-occlusive crises (VOC). Nowadays it is known that these reactions are initial FA events that unleash a chain reaction that ends with the generation of oxygen reactive types (ORT) nitric oxide (NO) bioavailability reduction, endothelial lesion, susceptibility to infections and a chronic inflammatory process with direct involvement of neutrophils in the development of such mechanisms. Neutrophils of FA patients, besides developing more rigid, non-deformable structures, also show alterations in the expression of adhesion molecules and the production of cytokines and other mediators that may induce or aggravate clinical events observed in the disease. Hydroxyurea (HU) is the most important improvement in FA treatment and the only medicine with a strong impact on the patients’ quality of life, reducing the number of VOC, hospitalizations and deaths resulting from this condition. However, not much is known about the effects of this medicine on neutrophils and on the functionality of these cells. The present study aimed at investigating cytotoxicity, inflammation and oxidative stress markers in neutrophils of FA patients, as well as the effect of HU treatment over these parameters in hematology ambulatory patients from a university hospital and a blood center, both reference centers in Fortaleza – Ceará. The sample included 101 adult patients of both sexes diagnosed with FA through molecular study and it was divided into two groups: the SS Group – composed of 47 FA patients and the SSHU Group – composed of 54 FA patients under HU treatment. A control Group AA was composed of 50 healthy individuals, voluntary blood donors matched by age and sex. Neutrophils were isolated from whole blood by differential gradient and used to measure test. In toxicity tests carried out, it was observed that HU did not have any cytotoxic effect on patients’ neutrophils, however, was shown a cytoprotective action when compared to group AA and SS patients, with a significant reduction (p

Amburana cearensis (Fabaceae) é uma árvore silvestre, típica da caatinga nordestina, conhecida popularmente como cumaru ou imburana-de-cheiro. Sua casca do caule é utilizada na medicina tradicional principalmente no tratamento da asma, tosse e bronquite. Estudos químicos e farmacológicos têm permitido caracterizar o cumaru, com definição de princípios ativos, como a cumarina e o amburosídio A, e do seu potencial anti-inflamatório, antioxidante e relaxante do músculo liso traqueal de roedores. Diante do exposto o objetivo do presente estudo foi prosseguir os estudos farmacêuticos com a casca do caule de Amburana cearensis relacionado ao desenvolvimento e a caracterização do extrato seco por spray drying de Amburana cearensis, incluindo validação de método analítico e avaliação farmacológica não clínica. Inicialmente, foi desenvolvido método para quantificação dos teores dos marcadores químicos, Amburosidio A (AMB) e cumarina (CM), por cromatografia líquida de alta eficiência acoplada ao detector de arranjo de diodos (CLAE-DAD). O método foi validado (Brasil, ANVISA RE 899, 2003), com estabelecimento dos seguintes parâmetros de performance: especificidade, linearidade, precisão, exatidão e avaliação da robustez. Na etapa seguinte foram investigadas a influência de alguns parâmetros (temperatura do ar de entrada: 100ºC, vazão de alimentação: 1l/h e taxa de fluxo de ar: 40l/h) no processo de secagem do extrato etanólico de cumaru por spray-drying com auxílio do planejamento fatorial 23 empregando como resposta: concentração dos marcadores, umidade e rendimento do processo. O método selecionado produziu um extrato com o melhor teor de marcadores (AMB: 74.54±1.45 e CM: 26.23±1.20 mg/g extrato), teor de umidade aceitável e um máximo rendimento (41.10±1.45 %). Ademais, o presente extrato foi submetido a novos ensaios para caracterização tecnológica (higroscopicidade, atividade da água, propriedades reológicas, morfologia, tamanho de partícula e avaliação microbiológica). O extrato seco de cumaru (100; 200 and 400 μg/mL) padronizado mostrou atividade sequestradora do radical DPPH. Por outro lado, ao contrário da vitamina C (padrão) o extrato não foi capaz de sequestrar o ânion superóxido. O tratamento de camundongos com extrato de cumaru (100 e 200 mg/Kg, v.o.) reduziu significativamente as duas fases de nocicepção induzida pela formalina, apresentando melhores respostas na 2ª fase (inflamatória). Os resultados obtidos no presente estudo permitiram agregar novas tecnologias na produção de produtos derivados de Amburana ceraensis, produzindo um extrato seco por spray-drying padronizado (CLAE-DAD), incluindo caracterização tecnológica, além da comprovação de propriedades farmacológicas do produto que são de interesse para o tratamento de doenças inflamatórias, como a asma. Palavras chaves: Amburana cearensis (Fabaceae) é uma árvore silvestre, típica da caatinga nordestina, conhecida popularmente como cumaru ou imburana-de-cheiro. Sua casca do caule é utilizada na medicina tradicional principalmente no tratamento da asma, tosse e bronquite. Estudos químicos e farmacológicos têm permitido caracterizar o cumaru, com definição de princípios ativos, como a cumarina e o amburosídio A, e do seu potencial anti-inflamatório, antioxidante e relaxante do músculo liso traqueal de roedores. Diante do exposto o objetivo do presente estudo foi prosseguir os estudos farmacêuticos com a casca do caule de Amburana cearensis relacionado ao desenvolvimento e a caracterização do extrato seco por spray drying de Amburana cearensis, incluindo validação de método analítico e avaliação farmacológica não clínica. Inicialmente, foi desenvolvido método para quantificação dos teores dos marcadores químicos, Amburosidio A (AMB) e cumarina (CM), por cromatografia líquida de alta eficiência acoplada ao detector de arranjo de diodos (CLAE-DAD). O método foi validado (Brasil, ANVISA RE 899, 2003), com estabelecimento dos seguintes parâmetros de performance: especificidade, linearidade, precisão, exatidão e avaliação da robustez. Na etapa seguinte foram investigadas a influência de alguns parâmetros (temperatura do ar de entrada: 100ºC, vazão de alimentação: 1l/h e taxa de fluxo de ar: 40l/h) no processo de secagem do extrato etanólico de cumaru por spray-drying com auxílio do planejamento fatorial 23 empregando como resposta: concentração dos marcadores, umidade e rendimento do processo. O método selecionado produziu um extrato com o melhor teor de marcadores (AMB: 74.54±1.45 e CM: 26.23±1.20 mg/g extrato), teor de umidade aceitável e um máximo rendimento (41.10±1.45 %). Ademais, o presente extrato foi submetido a novos ensaios para caracterização tecnológica (higroscopicidade, atividade da água, propriedades reológicas, morfologia, tamanho de partícula e avaliação microbiológica). O extrato seco de cumaru (100; 200 and 400 μg/mL) padronizado mostrou atividade sequestradora do radical DPPH. Por outro lado, ao contrário da vitamina C (padrão) o extrato não foi capaz de sequestrar o ânion superóxido. O tratamento de camundongos com extrato de cumaru (100 e 200 mg/Kg, v.o.) reduziu significativamente as duas fases de nocicepção induzida pela formalina, apresentando melhores respostas na 2ª fase (inflamatória). Os resultados obtidos no presente estudo permitiram agregar novas tecnologias na produção de produtos derivados de Amburana ceraensis, produzindo um extrato seco por spray-drying padronizado (CLAE-DAD), incluindo caracterização tecnológica, além da comprovação de propriedades farmacológicas do produto que são de interesse para o tratamento de doenças inflamatórias, como a asma.

Dentre as espécies do gênero Erythrina (Fabaceae), duas conhecidas popularmente como mulungu, E. velutina e E. mulungu, tem comprovado interesse social e econômico para o Brasil. E. mulungu ocorre no Sudeste, pertence à Relação Nacional de Plantas de Interesse para o SUS (RENISUS). Já E. velutina é uma árvore amplamente utilizada no Nordeste, cuja casca do caule é utilizada tradicionalmente no tratamento da ansiedade, agitação e insônia. Contudo, não existe um produto farmacêutico com qualidade agregada e estudos farmacológicos dessa espécie para justificar seu uso medicinal. Diante do exposto, o objetivo do presente trabalho foi realizar o desenvolvimento e o controle de qualidade do extrato de Erytrhina velutina e investigar as atividades antioxidante e neuroprotetora, visando seu emprego no tratamento de doença neurodegenerativa, como a Doença de Parkinson (DP). Inicialmente, foi validado método espectrofotométrico para dosagem de fenóis totais (FT) em produtos derivados de E. velutina, sendo este específico, linear, preciso, exato e robusto. Foi estabelecido o método de preparação (estufa com circulação e renovação de ar – 80°C; 24h) e especificações para o controle da droga vegetal. O extrato etanólico de E. velutina (EEEV) produzido por percolação foi caracterizado quando ao teor de FT (155,14 ± 3,31 µ EAG/mg de extrato) e perfil cromatográfico por CLAE-DAD (Fenóis: hesperidina - Tr: 18,8 min; abssinina - Tr: 22,9 min; homoesperidina Tr: 31,2 min; ácido rizônico (AR) - Tr: 32,1 min e sigmoidina C - Tr: 38,6 min). O EEEV não mostrou citotoxicidade no teste do MTT, mas aumentou (EEEV: 100 e 200 µg/mL) a atividade da LDH em neutrófilo humano. Em células 9L/lacZ, o EEEV (100, 400, 1000 mg/mL) reduziu significativamente a viabilidade celular, teste MTT. EEEV (0,0025 – 1 µg/mL) e AR (0,0025 – 1 µg/mL) não foram citotóxicos e inibiram parcialmente a neurotoxicidade induzida por 6-OHDA em células SH-SY5Y, modelo experimental de DP, observada pela redução significativa dos níveis de nitrito/nitrato. Na avaliação do potencial antioxidante, testes DPPH e NBT, o EEEV (10 – 200 µg/mL) apresentou atividade sequestradora de radicais livres no teste DPPH. Os resultados obtidos no presente estudo permitiram definir as condições ideais de preparação da droga vegetal e do extrato, os quais foram caracterizados, incluindo validação de método analítico e avaliação farmacológica, comprovando o potencial antioxidante e neuroprotetor do EEEV e AR.

Operculina macrocarpa (L.) Urb ("Brazilian jalapa") (Convolvulaceae) is a common species of the Brazilian Northeast. It is popularly used because of its laxative and purgative properties. The tincture of Operculina macrocarpa tubers (major constituent) and Convolvulus scammonia composes the raw materials of Aguardente Alemã®, herbal medicine, referred to as antithrombotic in folk medicine. The objective of this study was to investigate the antiplatelet and anticoagulant potential for Operculina macrocarpa in human plasma, including the bioprospection study and determination of possible mechanism of action. The evaluation of antiplatelet activity of drugs (tincture and fractions of O. macrocarpa, tincture of C. scammonia and AAL) in human platelet-rich plasma (PRP) was measured by the turbidimetric method where the aggregation was induced by the addition of agonists (adenosine diphosphate (ADP), epinephrine (EPI), arachidonic acid (AA) collagen (COL) or thrombin (TROM). Unlike tincture of C. scammonia and AAL, both O. macrocarpa tincture (TOM/preciptade (P) and supernatant (S)) and one of the organic fractions obtained from O. macrocarpa (TOM/1-F4) showed antiplatelet activity in human plasma where TOM/1-F4 (100 µg/mL) presented comparable effect to AAS. Physicochemical characterization (HPLC and spectrophotometer) of TOM/PS (content of resins 1,38g%) and TOM/1-F4 allowed the identification of phenolic acids (chlorogenic, galic and caffeic) as well as the determination of total phenols of TOM (0,14g%). The antiplatelet effect of TOM/PS and TOM/1-F4 seems to result from many intracellular actions. However, TOM/PS in presence of AAS, L-ARG, ODQ, pentoxifilin (PTX) or ticlopidine (TIC) had its antiplatelet effect modified mainly because of TIC, suggesting an important role of purinergic receptors in TOM/PS. TOM/PS presented antioxidant activity determined by DPPH test. Furthermore, TOM/PS and TOM/1-F4 did not showed anticoagulant action in human plasma but TOM/PS increased the bleeding time in mice. It was observed a relative toxicity of TOM/PS in human neutrophil. Therefore, this study demonstrated, as never before, the antiplatelet potencial of tincture and the organic fraction of "jalapa" and that at least related to the presence of phenols, particulary phenolic acids, and resins in plant. Operculina macrocarpa (L.) Urb. (“jalapa brasileira”) (Convolvulaceae) é uma espécie comum do Nordeste brasileiro, sendo popularmente utilizada pelas suas propriedades laxativa, purgativa e “depurativa”. A tintura do tubérculo de jalapa, matéria-prima majoritária, ao lado da tintura de Convolvulus scammonia (TCS) compõem o fitoterápico Aguardente Alemã® (AAL) ou Tintura de Jalapa Composta, indicada como antitrombótico na medicina popular. O objetivo do presente trabalho foi investigar o potencial antiagregante plaquetário e anticoagulante de O. macrocarpa em plasma humano, incluindo estudo de bioprospecção e determinação do possível mecanismo de ação. A avaliação da atividade antiagregante plaquetária das drogas testes (tintura e frações de O. macrocarpa, TCS e AAL) em plasma humano rico em plaquetas (PRP) foi mensurada por método turbidimétrico, sendo a agregação induzida por vários agonistas como difosfato de adenosina (ADP), epinefrina (EPI), ácido araquidônico (AA), colágeno (COL) ou trombina (TROM). Ao contrário da TCS e da AAL, tanto a tintura de O. macrocarpa (TOM/precipitado(P) e sobrenadante(S)) quanto uma das frações orgânicas obtidas da planta (TOM/1-F4) mostraram atividade antiagregante plaquetária, onde a TOM/1-F4 (100 µg/mL) apresentou efeito comparável ao ácido acetilsalicílico (AAS). Caracterização físico-química (CLAE e espectrofotometria) da TOM/PS (teor de resinas 1,38g%) e da TOM/1-F4 permitiu a identificação de ácidos fenólicos (clorogênico, gálico e caféico), bem como a determinação do teor de fenóis totais da TOM (0,14g%). O efeito antiagregante plaquetário da TOM/PS e da TOM/1F-4 parece resultar de várias ações intracelulares. Contudo, a TOM/PS na presença do AAS, L-ARG, ODQ, pentoxifilina (PTX) ou ticlopidina (TIC) teve seu efeito antiagregante plaquetário modificado principalmente pela TIC, sugerindo um papel importante dos receptores purinérgicos na bioatividade da TOM/PS. A TOM/PS apresentou atividade antioxidante determinada através do teste do DPPH. Além disso, a TOM/PS e a TOM/1F-4 não mostraram ação anticoagulante em plasma humano, mas a TOM/PS aumentou o tempo de sangramento em camundongos. Foi observada uma toxicidade relativa da TOM/PS em neutrófilo humano. Dessa forma, o presente estudo comprovou, de maneira inédita, o potencial antiagregante plaquetário da tintura e da fração orgânica de jalapa, que estão pelo menos em parte relacionados à presença de fenóis, particularmente ácidos fenólicos, e resinas na planta.

The stem bark of Amburana cearensis AC Smith, popularly known as cumaru, is used to treat respiratory diseases like bronchitis and asthma. Previous pharmacological studies showed the anti-inflammatory, antinociceptive and antioxidant, and / or muscle relaxant activities of the the extract and isolated molecules from cumaru, including coumarin (CM) and amburoside A (AMB). Given the above, the objective of this study was to conduct a preliminary assessment of cytotoxicity, and investigate the anti-inflammatory and antioxidant potential of the capsule of the dryed extract from A. cearensis (CESAC) and afrormosin (AFM) to determine the possible mechanism of action. For this, the capsules were produced from the dried extract (spray-dryer), standardized by the content of CM and AMB by HPLC. Cytotoxicity was investigated in human neutrophil (2.5 x 106 cells / mL) through the tests of the exclusion dye trypan blue, LDH, MTT and evaluation of the pattern of cell death by acridine orange / ethidium bromide. AFM (10, 50 and 100 µg / mL) showed no cytotoxicity, while CESAC (10, 100 and 200 µg / mL) increased the number of apoptotic and necrotic cells. The CESAC (100-400 mg / kg, po) inhibited the paw edema in mice, the accumulation of cells and MDA-TBARS levels in the peritoneum induced by carrageenan. In bronchoalveolar lavage of mice challenged with ovalbumin, the CESAC reduced the accumulation of cells, as well as production of TBARS, MDA and nitrite / nitrate, and restore the levels of GSH. Both CESAC (5, 10, 25, 50, 100 and 200 µg / mL), and AFM (3, 6, 12.5, 25, 50 and 100 µg / mL) reduced the activation of human neutrophils induced by fMLP ( up to 65% and 66%, respectively) or PMA (up to 72% and 86%, respectively). Moreover, they inhibited by 70% about the activity of myeloperoxidase, but only CESAC inhibited elastase activity (6-88% inhibition). The addition of AFM or CESAC in suspension of neutrophils also reduced the levels of TNFα. The CESAC and AFM showed the inhibitory activity of neutrophil oxidative metabolism measured by tests of luminol- (CL lum) and lucigenin-dependent (CL luc) chemoluminescence. casca do caule de Amburana cearensis A C Smith, conhecida popularmente como cumaru, é utilizada para o tratamento de doenças respiratórias como bronquite e asma. Estudos farmacológicos anteriores mostraram as atividades antiinflamatória, antioxidante e antinociceptiva do extrato e moléculas isoladas do cumaru: incluindo cumarina (CM) e amburosídeo A (AMB). Diante do exposto, o objetivo do presente estudo foi realizar uma avaliação preliminar da citotoxicidade, e investigar o potencial antiinflamatório e antioxidante da cápsula do extrato seco de A. cearensis (CESAC) e da Afrormosina (AFM), com determinação do possível mecanismo de ação. Para tanto, as cápsulas foram produzidas a partir do extrato seco (spray-dryer) padronizado pelo teor de AMB e CM por CLAE. A citotoxicidade foi investigada em neutrófilo humano (2,5 x 106 células/mL) através dos testes de exclusão ao corante azul de tripan, LDH, MTT e avaliação do padrão de morte celular pelo corante laranja de acridina/brometo de etídio. A AFM (10, 50 e 100 µg/mL) não mostrou citotoxicidade, enquanto que a CESAC (10, 100 e 200 µg/mL) aumentou o número de células em apoptose e necrose. A CESAC (100-400 mg/kg, v.o.) inibiu o edema de pata em camundongos, o acúmulo de células e os níveis de TBARS-MDA no peritônio, induzidos por carragenina. No lavado broncoalveolar de ratos desafiados com ovalbumina, a CESAC reduziu o acúmulo de células, bem como a produção de TBARS-MDA e nitrito/nitrato, além de restabelecer os níveis de GSH. Tanto a CESAC (5, 10, 25, 50, 100 e 200 µg/mL), quanto AFM (3; 6; 12,5; 25; 50 e 100 µg/mL) reduziram a ativação de neutrófilos humano induzida por fMLP (em até 65 % e 66 %, respectivamente) ou PMA (em até 72 % e 86 %, respectivamente). Além disso, estes inibiram em até 70 % aproximadamente a atividade de mieloperoxidase, porém apenas a CESAC inibiu a atividade da elastase (6-88 % inibição). A adição de CESAC ou AFM à suspensão de neutrófilos reduziu também os níveis de TNFα. O CESAC e a AFM mostraram atividade inibitória do metabolismo oxidativo de neutrófilos mensurado através de ensaios de quimioluminescência dependente de luminol (QL lum) e lucigenina (QL luc).

Coumarin (1,2-benzopyrone) is an aromatic compound found in many plant species. This study proposed to evaluate the coumarin actions in behavioral models of anxiety, depression and sedation activity, such as the open field, rota rod, elevated plus maze (EPM), hole board and tail suspension, still looking to clarify mechanisms by which this compound acts, through amino acids determination studies in mice prefrontal cortex and hippocampus by HPLC (High Performance Liquid Chomatography). The coumarin (CUM) was administered acutely in all tests, at doses of 5, 20 or 40 mg/kg, by intraperitoneal route. The results show that CUM, in all used doses, decreased the locomotor activity, the number of rearing and grooming in open field test, suggesting a possible sedative action. In the rota rod the coumarin did not alter the motor coordination or caused muscular deficit in animals. This suggests that the depressant effect of coumarin should not be exercised by peripheral neuromuscular blockade, but possibly the effects must involve neurons that control the central depressive activity. In the EPM and hole board test, coumarin proved its anxiogenic effect, as it reduced all examined parameters in the EPM, as NEOA, PEOA, TPOA and PTOA, as well as the number of head dips in the hole board. This opposite effect to diazepam was not reversed by flumazenil (benzodiazepine antagonist). This suggests that coumarin does not act in a similar manner to benzodiazepines. Still aiming to clarify the changes in animals locomotor activity, it was administered levodope + carbidope (L-DOPA), which led to a small increase in the locomotor activity, compared to CUM group. When associated to haloperidol (HALO) - dopaminergic antagonist, L-DOPA had its effects reversed. HALO + CUM caused greater interference in locomotion, as a synergic effect. The coumarin did not show antidepressant effect in the tail suspension test, because it increased the immobility time of animals. Imipramine (antidepressant) decreased this parameter. In the determination of amino acids neurotransmitters it was observed an increase in the GABA levels in the prefrontal cortex, similar to diazepam, which may partly explain the decrease in locomotor activity. The levels of glutamate, glycine and taurine also increased in the group treated with coumarin 20 mg/kg. In the hippocampus, significant changes occurred in levels of glutamate, which were reduced. It follows, therefore, that the CUM has sedative, anxiogenic and depressant activities. These actions can be linked to an increase or decrease of excitatory and inhibitory amino acids levels and dopaminergic involvement. The anxiogenic effect of coumarin seems to involve the dopamine participation on striatum. Increased levels of taurine leads to a balance in the glutamate levels, which may explain the anxiogenic effect and possible neuroprotective of coumarin. The coumarin demonstrate sedative and anxiogenic action in CNS probably caused by dopaminergic antagonism modulated by gabaergic system, mainly glutamatergic in the prefrontal cortex. A cumarina (1,2-benzopirona) é um composto aromático encontrado em várias espécies vegetais. Este trabalho objetivou avaliar as ações da cumarina em modelos comportamentais de ansiedade, depressão e sedação, tais como, campo aberto, rota rod, labirinto em cruz elevado (LCE), placa perfurada e suspensão da cauda, procurando esclarecer os mecanismos através de doseamento de aminoácidos em córtex pré-frontal e hipocampo de camundongos através de HPLC (High Perfomance Liquid Chomatography). Foram utilizados camundongos albinos, variedade Swiss Webster, adultos, machos, pesando entre 25-30 g, provenientes do Biotério do Departamento de Fisiologia e Farmacologia da UFC. A cumarina (CUM) foi administrada de forma aguda por via intraperitoneal nas doses de 5, 20 ou 40 mg/kg. Os resultados mostram que a CUM, em todas as doses utilizadas, diminuiu a atividade locomotora, o número de rearing e grooming no teste do campo aberto, sugerindo uma possível ação sedativa. No rota rod não alterou a coordenação motora ou causou déficit muscular nos animais, sugerindo que seus efeitos não se devem ao bloqueio neuromuscular periférico. No LCE e no teste da placa perfurada, a cumarina mostrou seu efeito ansiogênico, pois reduziu todos os parâmetros analisados no LCE, como o número de entradas nos braços abertos (NEBA), percentagem de entrada nos braços abertos (PEBA), Tempo de permanência nos braços abertos (TPBA) e percentagem do tempo de permanência nos braços abertos (PTBA), assim como o número de head dips na placa perfurada. Ainda com o intuito de esclarecer as alterações ocorridas na atividade locomotora dos animais, foi administrada a levodopa + carbidopa (L-DOPA), que levou a um pequeno aumento na atividade locomotora, em relação ao grupo da CUM. Quando associada ao haloperidol (HALO) - antagonista dopaminérgico, o efeito da L-DOPA foi revertido. HALO + CUM causou uma maior interferência na locomoção, como um efeito sinérgico. A cumarina não apresentou efeito antidepressivo no teste da suspensão da cauda, pois aumentou o tempo de imobilidade dos animais. A imipramina (antidepressivo) diminuiu este parâmetro. No doseamento de aminoácidos neurotransmissores houve aumento nos níveis de GABA no córtex pré-frontal, de maneira semelhante ao diazepam, podendo explicar em parte a diminuição da atividade locomotora. Também aumentaram glutamato, glicina e taurina no grupo tratado com 20 mg/kg de cumarina. No hipocampo os níveis de glutamato foram significativamente reduzidos. Estas ações podem estar ligadas ao aumento ou diminuição nos níveis de aminoácidos excitatórios e inibitórios e envolvimento dopaminérgico. O efeito ansiogênico da cumarina parece envolver a participação da dopamina sobre o estriado. O aumento dos níveis de taurina leva a um balanço nos níveis de glutamato, o que pode explicar o efeito ansiogênico e possivelmente neuroprotetor da cumarina. A cumarina demonstrou ação sedativa e ansiogênica sobre o SNC provavelmente devido atuação como antagonista dopaminérgico. Esse mecanismo pode ter sido modulado pelos sistemas gabaérgico e, principalmente, glutamatérgico no córtex pré-frontal.

In recent decades the production of phytotherapy has explored new technological possibilities as the production of standardized extracts dried. This stems from the advantages offered these products for solutions extrativas. The bark of the stem of Amburana cearensis (cumaru, Fabaceae) is a tree widely used in home practice of medicine popular northeastern indicated for the treatment of asthma. The plant has been used as feedstock in the production of active syrup cumaru by Public Programs of Phytotherapy and pharmaceutical industry. The purpose of this study was the development and control of the steps involved in the production of dry extract standardized Amburana cearensis and investigate its pre-clinical toxicity. For both, was selected developed the method of drying of the (drug plant) monitored by the determination of parameters such as moisture content and labels (coumarin and amburosídio A) determined by HPLC-DAD. In developing the method extractive, shape investigated the influence of some variables on the process (of maceration time / percolation, and volume of extraction% ethanol in water). The content of labels (response) was used as a criterion for evaluation. The statistical analysis, including analysis of the surface of the response showed that the extent that the content of ethanol (20, 60 and 100% in water) increases, increases the level of markers in the extracts, while the time showed a subtle influence in the process. The volume of extraction had an effect opposite to that observed for the content of ethanol. Thus, the method selected extractive obtained by macerating / percolation at room temperature understood: extractor solution: Ethanol 100%; volume of extraction: 200 mL and time of extraction: 24h). The best conditions for drying the extrtao of cumaru were the temperature of entry of 95 ° C and 25% of silicon dioxide, resulting in a yield of 40%. The toxicological evaluation preliminary pre-clinical in vivo - hipocrático test showed that the dry extract standardized cumaru (Coumarin: 123.0 ± 0.08 mg / g extract; amburosídio A: 496.8 ± 0.29 mg / g) has a low toxicity, but showed a cytotoxicity at concentrations of 50, 100 and 200 μ g / ml in human neutrophil measured by the activity of the enzyme lactate dehydrogenase. The results of this study enabled the development of production methods, and analytical parameters that can be applied from the quality control of drugs to plant products such as dried extract of A. cearenis. Moreover, the toxicological evaluation pre-clinical allowed a preliminary overview of the degree of pre-clinical safety of the product. Nas últimas décadas a produção de fitoterápicos tem explorado novas possibilidades tecnológicas como a produção de extratos secos padronizados. Isso decorre das vantagens apresentadas desses produtos em relação às soluções extrativas. A casca do caule de Amburana cearensis (cumaru, Fabaceae) é uma árvore amplamente utilizada nas práticas caseiras da medicina popular nordestina indicado no tratamento da asma. A planta tem sido utilizada como matéria-prima ativa na produção do xarope de cumaru por Programas Públicos de Fitoterapia e indústria Farmacêutica. O objetivo do presente trabalho foi realizar o desenvolvimento e controle das etapas inerentes à produção do extrato seco padronizado de Amburana cearensis, bem como investigar seus efeitos tóxicos pré-clínicos. Para tanto, foi desenvolvido selecionado o método de secagem da planta (droga vegetal) monitorado pela determinação de parâmetros, como teor de umidade e de marcadores (cumarina e amburosídio A) determinados por CLAE-DAD. No desenvolvimento do método extrativo, forma investigadas a influência de algumas variáveis sobre o processo (tempo de maceração/percolação, volume de extração e % de etanol em água). O teor de marcadores (resposta) foi usado como critério de avaliação. A análise estatística, incluindo análise de superfície da resposta mostrou que a medida que o teor de etanol (20, 60 e 100% em água) aumenta, aumenta o teor de marcadores nos extratos, enquanto o tempo mostrou uma influência sutil no processo. O volume de extração apresentou um efeito inverso ao observado para o teor de etanol. Assim, o método extrativo selecionado obtido por maceração/percolação a temperatura ambiente compreendeu: solução extratora: Etanol a 100%; volume de extração: 200 mL e tempo de extração: 24h). As melhores condições de secagem do extrato de cumaru foram a temperatura de entrada de 95°C e 25 % de dióxido de silício, resultando num rendimento de 40 %. A avaliação toxicológica pré-clínica preliminar in vivo – teste hipocrático, mostrou que o extrato seco padronizado de cumaru (Cumarina: 123,0 ± 0,08 mg/g extrato; amburosídio A: 496,8 ± 0,29 mg/g) possui uma baixa toxicidade, porém mostrou uma citotoxicidade nas concentrações de 50, 100 e 200 µg/mL em neutrófilo humano mensurada através da atividade da enzima lactato desidrogenase. Os resultados obtidos no presente estudo permitiram o desenvolvimento de métodos de produção, além de parâmetros analíticos que podem ser aplicados desde no controle de qualidade da droga vegetal à produtos derivados como o extrato seco de A. cearensis. Além disso, a avaliação toxicológica pré-clínica permitiu uma visão preliminar do grau de segurança pré-clínica do produto.