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Despite being initially considered at higher risk for severe COVID-19, sickle cell disease (SCD) patients have mostly presented clinical severity similar to the general population. As their vulnerability to become infected remains uncertain, we assessed the seroreactivity for SARS-CoV-2 to estimate the prevalence of infection and possible phenotypic and socioeconomic determinants for their contagion. Serologic evaluation was performed on 135 patients with an overall prevalence of 11%; positivity was associated with older age and use of public transportation. We speculate that social distancing instructions recommended by our clinic may have contributed to lower levels of infection, but potential protection factors need further investigation FUNDAÇÃO DE AMPARO À PESQUISA DO ESTADO DE SÃO PAULO - FAPESP Aberto

Orientador: Sara Teresinha Olalla Saad Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: Exossomos são nanopartículas importantes na comunicação intercelular, carregando conteúdos de proteínas, RNAs e microRNAs que recapitulam as células de origem. Assim, poderiam ser úteis como pulso antigênico no desenvolvimento de novas formas de imunoterapia, e análise de seu conteúdo interno poderia representar uma interessante ferramenta prognóstica. O objetivo deste estudo foi avaliar o uso de exossomos extraídos do soro de pacientes com leucemia mieloide aguda (LMA) e síndromes mielodisplásicas (SMD) como fonte antigênica para células dendríticas (DC) e os efeitos sobre a citotoxicidade antitumoral. Além disso, os níveis de expressão de mir-223, importante microRNA no sistema hematopoiético, foram avaliados nos exossomos e correlacionados com dados clínicos e laboratoriais, com o intuito de explorar seu potencial uso prognóstico nessas doenças. Sangue venoso foi obtido de 14 pacientes com LMA, 28 pacientes com SMD e 19 controles saudáveis. Exossomos foram isolados usando método ExoQuick®; sua concentração e distribuição de tamanho foram caracterizadas por Nanoparticle Tracking Analysis (NanoSight, UK). Os níveis de expressão de mir-223 e mir-192 (controle endógeno) foram avaliados por RT-PCR. Para os estudos de citotoxicidade, 100µL da suspensão de exossomos (aproximadamente 1015 nanopartículas) foram incubados com DCs maduras ou imaturas e a citotoxicidade direta ou dependente de linfócitos foi avaliada pela porcentagem de lise específica de células leucêmicas K562 nas coculturas, comparado a situações de DCs não pulsadas. A concentração de exossomos nas amostras de soro variou de 5,6 x 1011 a 3,3 x 1013 partículas por ?l de suspensão, com concentrações significativamente menores nas amostras de pacientes em relação aos indivíduos saudáveis (p= 0,004). Diminuição significativa na expressão de mir-223 foi observada em exossomos de indivíduos com SMD de alto risco em comparação com controles (p= 0,002) e doença de baixo risco (p= 0,012). Curiosamente, houve correlação positiva significativa entre expressão de mir-223 exossomal e contagens de: leucócitos totais (rs de Spearman = 0,37, p = 0,003), neutrófilos (rs= 0,392, p = 0,002), monócitos (rs= 0,484, p

In sickle cell/ß-thalassemia, mutations in the corresponding ß-globin genes are responsible for complex pathological events resulting in diverse clinical complications. The objective of this study was to provide an overview of the clinical and laboratory characteristics of patients with the syndrome, and of the degree of severity of clinical manifestations resulting from the ß-thalassemia mutation. A retrospective chart review was performed on 46 patients with sickle cell/ß-thalassemia (31 Sß° and 15 Sß+), evaluating hematological parameters and end organ damage. Statistical analyzes were carried out in order to highlight differences between the two groups according to the nature of the thalassemia mutation. As expected, patients with the Sß0 phenotype had a higher degree of hematological involvement in comparison to Sß+ patients; with lower hemoglobin levels, and signs of more intense chronic hemolysis. However, Sß+ patients were more prone to the occurrence of acute chest syndrome. The impact of the thalassemia mutation upon total body and bone composition was also evident, as Sß0 patients presented lower body mass index (BMI) and bone mineral density. The degree of bone damage correlated to lower BMI and hemoglobin levels, as well as plaquetosis, monocytosis and elevated lactate dehydrogenase, possibly reflecting the effects of hemolysis and inflammation upon bone metabolism and body constitution. This study identified significant differences among sickle cell/ß-thalassemia patients according to the beta mutation involvement, pointing to an important predictor of disease severity Fechado

Orientador: Magnun Nueldo Nunes dos Santos Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: O novo coronavírus (SARS-CoV-2), responsável pela Síndrome Respiratória Aguda Grave, surgiu como uma ameaça às humanas desde dezembro de 2019 e a busca por uma melhor compreensão da fisiopatologia da doença pelo coronavírus 2019 (COVID-19) e seu tratamento definitivo ainda está em andamento. O objetivo deste estudo foi avaliar as citocinas pró-inflamatórias e anti-inflamatórias plasmáticas, hemogramas, razões derivadas do hemogramas (HDRs) [isto é, razão neutrófilo-linfócito (NLR), razão plaqueta-linfócito (PLR), razão monócito-linfócito (MLR), relação neutrófilos-plaquetas (NPR) e índice de imunoinflamação sistêmica (SII)], e suas associações com a gravidade e o desfecho da doença em pacientes com COVID-19. Pacientes não vacinados com diagnóstico molecular positivo para COVID-19, confirmado por Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction (RT-PCR), atendidos no Hospital de Clínicas (HC), UNICAMP, Campinas-SP foram incluídos no estudo. Os dados clínicos e laboratoriais foram extraídos dos prontuários e as concentrações plasmáticas de citocinas foram quantificadas por LUMINEX e ELISA. Dos 154 pacientes (99 sobreviventes e 55 não sobreviventes) com COVID-19 foi observada a proporção homem:mulher de 1,4:1 e a média de idade de 60 anos. Os não sobreviventes eram mais velhos que os sobreviventes (65 vs 55 anos, p

Orientador: Lilian Maria de Castilho Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: Introdução: Os genes híbridos são responsáveis pela formação de variantes Rh comuns em pacientes portadores de anemia falciforme (AF). No entanto, sua detecção muitas vezes não é possível por protocolos moleculares convencionais. No presente estudo, genes RH híbridos foram investigados usando o método Quantitative Multiplex Polymerase Chain Reaction of Short Fluorescent Fragments (QMPSF), um protocolo molecular que quantifica o número de cópias de exons dos genes RHD e RHCE. Além disso, exploramos informações relevantes adicionais obtidas com a utilização de QMPSF, como o reconhecimento de variantes RHCE e a determinação da zigosidade RHD. Método: Três grupos foram selecionados para o estudo: pacientes com AF, doadores autodeclarados afrodescendentes (ADA) e doadores fenotipados como RhD-negativo (DN). Os genes híbridos RHD e RHCE foram investigados pelo método QMPSF, além disso foi utilizado o ensaio de PCR multiplex em tempo real para confirmar o número de cópias do gene RHD. A clonagem foi realizada para caracterizar um novo alelo encontrado, no qual um paciente com genótipo RHCE*cE/RHCE*ce apresentou a variação de um único nucleotídeo (SNV) c.916A>G. A densidade antigênica do antígeno RhD foi investigada por citometria de fluxo e a fenotipagem RhCE foi realizada em microplaca e gel teste. Resultados: Foram analisados um total de 507 amostras, a frequência dos alelos RH híbridos foi de 20.08% em pacientes com AF, 18,22% nos doadores ADA e 3.67% em doadores D-negativos. Os grupos AF e ADA apresentaram maior frequência de alelos híbridos, mais comumente envolvendo o exon 8, onde encontramos associação com o SNV c.733C>G, polimorfismo comum observado em indivíduos afrodescendentes com variantes RHCE. Curiosamente, dois pacientes com AF apresentaram três cópias do gene RHD, confirmado por PCR em tempo real, mas não foi observado aumento na expressão do antígeno D nesses pacientes. Além disso, o método QMPSF proporcionou a investigação de 144 variantes RHCE, a determinação da zigosidade RHD e a identificação de dois novos alelos. Conclusão: QMPSF mostrou-se relevante para identificar alelos híbridos envolvidos em fenótipos Rh alterados em doadores de sangue e pacientes com AF. A associação encontrada do alelo híbrido RHCE-D(8)-CE com c.733C>G indica que este alelo híbrido pode ser utilizado como marcador para detecção das variantes RHCE mais frequentes encontradas em pacientes com AF Abstract: Background: Hybrid genes are responsible for Rh variants formation and common in patients with sickle cell disease (SCD). However, their detection is often not possible by conventional molecular protocols. In the present study, hybrid genes were investigated by using the Quantitative Multiplex Polymerase chain reaction of Short Fluorescent Fragments (QMPSF), a molecular protocol that quantifies the copy number of RHD and RHCE exons. In addition, we explored additional relevant information obtained with QMPSF, such as recognition of variant RHCE and RHD zygosity. Method: Three groups were selected for the study: patients with SCD, self-declared African descent donors (SDA) and D-negative donors. RHD and RHCE hybrids genes were investigated by the QMPSF method. Real-time multiplex PCR assay was used to confirm the copy number of the RHD. Cloning was performed for investigating of allele. Relative RhD antigen density was investigated by flow cytometry and RhCE phenotyping was performed in microplate and gel test. Results: In a total of 507 samples analyzed, hybrid allele frequencies were 20.08% in patients with SCD, 18,22% in individuals from SDA group and 3.67% of D-negative donors. The SCD and SDA groups had a higher frequency of hybrid alleles, most commonly involving exon 8, which we found an association with c.733C>G, a common polymorphism observed in Afro-descendent individuals. Of note, two patients with SCD were shown to carry three gene copies, as confirmed by quantitative PCR. No increase in D expression was observed in these patients. Additionally, the QMPSF guided the investigation of 144 RHCE variants and RHD zygosity and two novel alleles were identified. Conclusion: The QMPSF was shown to be relevant to identify hybrid alleles involved in altered Rh phenotypes in African Brazilian donors and patients with SCD. The association of the hybrid RHCE-D(8)-CE allele with c.733C>G allow this hybrid allele may be used as a marker to detection of the most frequent variants found in patients with SCD Doutorado Clínica Médica Doutora em Ciências

Orientador: Simone Cristina Olenscki Gilli Dissertação (mestrado profissional) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: A Hemocromatose Hereditária (HH) é uma doença caracterizada pelo aumento da absorção intestinal de ferro, que leva ao acúmulo e deposição gradativa desse metal em diversos tecidos e órgãos, acometendo o organismo de forma sistêmica. Um dos pilares do tratamento é a depleção dos estoques de ferro através da realização de sangrias terapêuticas, que consistem na retirada e descarte do sangue coletado. Em decorrência da necessidade dos bancos de sangue em suprir os estoques de hemocomponentes, há o interesse na utilização de bolsas de sangue desses pacientes para fins transfusionais. Além disso, os pacientes com HH são reconhecidos como uma abundante fonte de doação de sangue por causa de sua resistência à deficiência de ferro. No mundo, existe uma grande variação nas políticas de doação de sangue para portadores de HH, contudo alguns países resistem em aceitar esse tipo de doador devido a preocupações sobre segurança transfusional e ética. No Brasil, a legislação atual não aborda a doação de sangue para estes indivíduos e o sangue obtido na sangria é descartado. O objetivo deste trabalho foi sintetizar as evidências sobre a prevalência de HH na população brasileira e avaliar a relevância da inclusão desses indivíduos como doadores regulares na política nacional de doação de sangue. Foi realizada uma revisão sistemática de literatura sobre a prevalência de HH na população saudável e os resultados foram comparados com a literatura mundial, associando informações sobre as políticas existentes nos países. Os resultados indicam que apesar da baixa prevalência de HH no Brasil e mesmo da escassez de resultados em determinadas regiões, existe um contingente de potenciais doadores de sangue que poderiam ser utilizados para fins transfusionais. Essa afirmação pode ser corroborada por países que apresentam frequências semelhantes as identificadas em nosso estudo e que adotam políticas públicas que aceitam essas doações Abstract: Hereditary Hemochromatosis (HH) is a disease characterized by excess intestinal absorption of iron, which leads to the accumulation and gradual deposition of this metal in various tissues and organs, affecting various bodily functions. One of the pillars of the treatment is the depletion of iron stores through therapeutic bleeding, which consists of the withdrawal and disposal of the patient's blood. Due to the need of blood banks to supply blood components stocks, there is an interest in the use of blood bags of these patients for transfusion purposes. Furthermore, HH patients are recognized as a potential source of blood donation due to their resistance to iron deficiency. In the world, there is a great variation in blood donation policies for HH carriers, however some countries still resist accepting this type of donor due to concerns about transfusion safety and ethics. In Brazil, the current legislation does not address the donation of blood to these individuals and the blood obtained through bleeding is discarded. The objective of this study was to synthesize the evidence on the prevalence of HH in the Brazilian population and to assess the relevance of including these individuals as regular donors in the national blood donation policy. A systematic review of the literature on the prevalence of HH in the healthy population was carried out and the results were compared with the world literature, associating information on existing policies in the countries. The results found a low prevalence of HH in Brazil, however, they indicate that the implementation of a public policy for the inclusion of HH carriers as blood donors could effectively contribute to the stock needs Mestrado Hemoterapia Mestra em Hemoterapia

Orientador: Fernando Vieira Pericole de Souza Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: A doença falciforme é caracterizada pela deformidade do eritrócito, que se assemelha ao formato de foice, em virtude da alteração do gene responsável pela produção da hemoglobina S. Essa alteração provoca redução da flexibilidade do eritrócito comprometendo a circulação sanguínea. O presente estudo objetivou avaliar a adesão ao tratamento de pessoas com Doença Falciforme acompanhadas no Hemocentro Regional de Montes Claros, Minas Gerais, bem como a submissão destes pacientes ao atendimento especializado e a realização de exames, propostos pelo Ministério da Saúde. Em adição, foi objetivo ainda conhecer as dificuldades enfrentadas pelos portadores e por seus responsáveis. Os dados foram obtidos através da análise de prontuários dos pacientes e por meio da aplicação de questionário. A Fundação Hemominas é responsável pelo acompanhamento de portadores de hemoglobinopatias. Para isso, detém o Protocolo de Atendimento Ambulatorial, baseado em diretrizes do Ministério da Saúde, que regulamenta a prestação da atenção integral com rotineiras consultas médicas, testes laboratoriais, exames especiais e ações profiláticas. Foram entrevistadas 70 pessoas com doença falciforme, residentes no norte de Minas Gerais, sendo 64,3% provenientes de área urbana e 35,7% de área rural. Em 25,7% dos casos foi relatada a presença de uma ou mais pessoas com quadro clínico semelhante vivendo no mesmo domicílio do paciente. Aproximadamente 79,0% dos entrevistados relataram que em seus domicílios vivem até quatro moradores e cerca de 3,0% possuíam mais de oito residentes. Para chegarem ao Hemocentro, 74,3% dos entrevistados relataram necessitar de condução da prefeitura. Em relação às demandas assistenciais, os entrevistados citaram terem sido encaminhados para nove diferentes especialidades médicas, com destaque para oftalmologia (48,6%), cardiologia (44,3%) e neurologia (21,4%). Dentre os encaminhamentos para equipe multiprofissional, psicologia e serviço social somaram 22,8% das solicitações. Os exames laboratoriais mais solicitados foram hemograma e contagem de reticulócitos, ambos requeridos para todos os participantes da pesquisa, seguidos pela sorologia (75,7%) e eletroforese de hemoglobina (62,9%). A ultrassonografia abdominal e as análises eletrocardiograma e/ou ecocardiograma foram os exames especializados mais requisitados, sendo apontados em 70,0 e 67,1% dos casos, respectivamente. Foi frequente a prescrição de ácido fólico (92,9%) e algum analgésico (78,6%) aos pacientes. Além disso, os entrevistados relataram o uso de hidroxiureia (35,7%) e deferasirox (11,4%). Dentre os integrantes da pesquisa, 22,9% relataram o uso de penicilinas, incluído nesse percentual todos os participantes com idade até 5 anos. A análise da adesão ao tratamento farmacoterapêutico detectou a ocorrência de escore alto ou médio em 97,1%. Entretanto, 27,1% dos entrevistados revelaram possuir alguma dificuldade com a medicação. Conclui-se que a assistência profissional prestada se apresenta em conformidade com os protocolos de tratamento estabelecidos, e os entrevistados possuem alta taxa de adesão ao tratamento. Contudo, os pacientes ainda enfrentam obstáculos que prejudicam a submissão à terapia, como a distância do hemocentro, dependência de veículo da prefeitura do município de origem, dependência do tempo de marcação de consultas e procedimentos junto ao SUS, falta de medicamentos nas atenções primária e secundária e necessidade de arcarem com despesas médicas de forma particular, mesmo aqueles que apresentam dificuldade financeira Abstract: Sickle cell disease is characterized by erythrocyte deformity, which resembles sickle shape, due to the alteration of the gene responsible for the production of hemoglobin S. This alteration reduces the flexibility of the erythrocyte, compromising blood circulation. The present study aimed to evaluate adherence to the treatment of people with sickle cell disease monitored at the Regional Blood Center of Montes Claros, Minas Gerais, as well as the submission of these patients to specialized care and the performance of tests, proposed by the Ministry of Health. objective is also to know the difficulties faced by patients and their guardians. Data were obtained through the analysis of patients' medical records and through the application of a questionnaire. The Hemominas Foundation is responsible for monitoring patients with hemoglobinopathies. For this, it has the Outpatient Care Protocol, based on guidelines from the Ministry of Health, which regulates the provision of comprehensive care with routine medical consultations, laboratory tests, special exams and prophylactic actions. Seventy people with sickle cell disease, living in the north of Minas Gerais, were interviewed, 64.3% from urban areas and 35.7% from rural areas. In 25.7% of cases, the presence of one or more people with a similar clinical condition living in the same home as the patient was reported. Approximately 79.0% of respondents reported that up to four residents live in their homes and about 3.0% had more than eight residents. To reach the Blood Center, 74.3% of the interviewees reported that they needed driving from the city hall. Regarding the care demands, the interviewees mentioned having been referred to nine different medical specialties, with emphasis on ophthalmology (48.6%), cardiology (44.3%) and neurology (21.4%). Among the referrals to the multidisciplinary team, psychology and social work accounted for 22.8% of requests. The most requested laboratory tests were complete blood count and reticulocyte count, both required for all research participants, followed by serology (75.7%) and hemoglobin electrophoresis (62.9%). Abdominal ultrasound and electrocardiogram and / or echocardiogram analyzes were the most requested specialized tests, being reported in 70.0 and 67.1% of cases, respectively. The prescription of folic acid (92.9%) and some analgesic (78.6%) were frequent to patients. In addition, the interviewees reported the use of hydroxyurea (35.7%) and deferasirox (11.4%). Among the research members, 22.9% reported the use of penicillins, including in this percentage all participants aged up to 5 years. The analysis of adherence to pharmacotherapeutic treatment detected the occurrence of a high or medium score in 97.1%. However, 27.1% of respondents reported having some difficulty with medication. It is concluded that the professional assistance provided is in accordance with the established treatment protocols, and the interviewees have a high rate of adherence to treatment. However, patients still face obstacles that hinder submission to therapy, such as distance from the blood center, dependence on a vehicle from the municipality of origin, dependence on the time to make appointments and procedures with the SUS, lack of drugs in primary care and secondary and need to pay medical expenses in a particular way, even those who have financial difficulties Mestrado Hemoterapia Mestre em Hemoterapia