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MANTEGAZZA, RENATO, open, Amyotrophic Lateral Sclerosis (ALS) is a neurodegenerative and fatal disease characterized by progressive cortical, bulbar and spinal motor neuron (MN) degeneration, leading to progressive muscle weakness, atrophy, paralysis and, ultimately, death. ALS can occur in two different forms: sporadic ALS (sALS) in ∼90% of individuals and familial ALS (fALS). Different genes have been associated with fALS and/or sALS; C9ORF72–SMCR8 complex subunit (C9ORF72) is the gene most commonly linked to inherited ALS, followed by TAR DNA-binding protein 43 (TARDBP), superoxide dismutase 1 (SOD1) and FUS RNA-binding protein (FUS). Such genes affect several cellular functions, including oxidative stress (SOD1), RNA metabolism (C9ORF72, TARBDP and FUS), cytoskeletal organization [e.g. tubulin alpha-4a (TUBA4A) and profilin 1 (PFN1)] and autophagy [e.g. TANK-binding kinase 1 (TBK1) and optineurin (OPTN). ALS-associated mutant genes are ubiquitously expressed, thus alterations in structure, metabolism and physiology occur in different cell types, synergistically contributing to ALS degenerative pathways. It is generally accepted that ALS is primarily caused by MN death. However, growing evidence has shown that muscle is active and plays a crucial role in the disease onset and progression. Currently, there are no effective treatments for ALS. Indeed, one of the major aims in ALS research is the development of successful therapies, by deepening the knowledge of the molecular events leading to the degeneration of both MNs and muscle tissue. It has become increasingly clear that RNA dysregulation is a key contributor to ALS pathogenesis. Among non-coding RNAs, long non-coding RNA (lncRNAs) are emerging as molecular contributors to ALS pathophysiology because of their role in regulating gene expression. LncRNAs, that are 300 to thousands nucleotides long, being more similar to mRNA than microRNAs, are key MN and muscle gene expression regulators. However, the exact contribution to ALS pathogen, La SLA è una malattia neurodegenerativa caratterizzata da una progressiva degenerazione dei MN, con conseguente atrofia muscolare, paralisi e morte del paziente. Esistono due forme di SLA, la forma sporadica, nel 90% dei pazienti, e la forma familiare, nel restante 10% dei casi. Diversi geni sono associati alla SLA, come C9ORF72 che è il gene più comunemente associato alla forma familiare di SLA, seguito da TARDBP, SOD1 e FUS. Questi geni influiscono su diverse funzioni cellulari, tra cui lo stress ossidativo, il metabolismo dell’RNA, l’organizzazione del citoscheletro e l’autofagia. I geni associati alla SLA sono espressi in modo ubiquitario e quindi diversi tipi cellulari possono subire alterazioni nella struttura e metabolismo e insieme contribuiscono ai pathways degenerativi della SLA. Oltre ai MN, studi recenti dimostrano che il muscolo scheletrico è coinvolto precocemente durante la patogenesi della SLA. Ad oggi non esistono cure e uno degli obiettivi della ricerca è lo sviluppo di terapie, ottenute tramite una conoscenza specifica degli eventi molecolari che portano alla degenerazione dei MN e del tessuto muscolare. La deregolazione dell’RNA ha un contributo chiave nella patogenesi della SLA. Nel campo dell’RNA non coding, i long non coding RNA (lncRNA) emergono come contribuenti alla patofisiologia della SLA. I lncRNA, lunghi dalle 300 alle centinaia di nucleotidi, sono regolatori dell’espressione di geni muscolari e neuronali, ma il loro contributo alla patogenesi della SLA è ancora ignoto. In questo lavoro abbiamo analizzato i livelli di espressione di MALAT1, NEAT1 e HOTTIP lncRNA coinvolti nello sviluppo e omeostasi del muscolo scheletrico, nel modello di cellule pluripotente indotte umane (iPSC) derivate da pazienti SLA e controlli sani, e differenziate verso un destino miogenico tramite un protocollo basato sulle small molecules. Abbiamo analizzato l’espressione di marcatori dello sviluppo del muscolo scheletrico tramite qPCR. Inoltre, abbiamo predetto, 0, open, Giagnorio, E

ASSELTA, ROSANNA, open, The main goal of this PhD project was to leverage the great body of genetic knowledge generated by high-throughput DNA sequencing to better characterize the genetic architecture of immune diseases, with a main focus on Primary Biliary Cholangitis (PBC). Our work has employed established statistical methods such as meta-analysis as well as novel data mining tools, such as packages dedicated to the study of chromosome X (chrX) and Machine Learning (ML) softwares. In addition, we have also applied established computational methods and ML tools to shed light on the evolutionary history of variants associated with immune-mediated traits. More specifically, the meta-analysis of previous Genome-Wide Association Studies (GWAS) in PBC has identified additional risk loci and, by means of functional annotation of credible causal variants and multi-omic analysis, has produced a list of candidate genes together with several drugs that are potentially suitable for re-purposing to PBC. The extensive analysis of chrX has identified several suggestive new loci associated with PBC located on this chromosome. The major finding of the X-Wide Association Study (XWAS) approach has been the identification of a genome-wide significantly associated locus characterized by the presence of different genes and of a superenhancer possibly involved in their co-regulation, as well as in the regulation of FOXP3 (which is located in the same TAD). Based on the new set of variants identified in the international meta-analysis, we have generated a novel Polygenic Risk Score (PRS) that has been incorporated in a new integrative risk model. This model, that has included 22 non-HLA variants, one HLA variant and sex, is accurate (Area Under the Curve (AUC) 0.83 and 0.81 in the two cohorts under study) and well calibrated. The PRS has pinpointed a subgroup of subjects at strikingly higher risk (OR ~ 14) of developing the disease that should be the target of tailored follow-up strategies. Prospective studie, Lo scopo principale di questo lavoro di tesi di dottorato è stato l'utilizzo dell'ampio materiale genetico disponibile a seguito del sequenziamento del DNA per migliorare la caratterizzazione dell'architettura genetica delle malattie autoimmuni, con un focus specifico sulla Colangite Biliare Primitiva. Il nostro lavoro ha utilizzato metodi statistici "classici" come la meta-analisi e metodi di analisi dati nuovi, come pacchetti dedicati allo studio del cromosoma X e software di Machine Learning. Inoltre abbiamo applicate tecniche di biologia evoluzionistica computazionale per studiare la storia evolutiva delle varianti associate alla immunità., 0, open, Gerussi, A

9, Citerio Giuseppe the CENTER-TBI Collaborators, open, Background: Traumatic brain injury (TBI) is an extremely heterogeneous and complex pathology that requires the integration of different physiological measurements for the optimal understanding and clinical management of patients. Information derived from intracranial pressure (ICP) monitoring can be coupled with information obtained from heart rate (HR) monitoring to assess the interplay between brain and heart. The goal of our study is to investigate events of simultaneous increases in HR and ICP and their relationship with patient mortality..Methods: In our previous work, we introduced a novel measure of brain-heart interaction termed brain-heart crosstalks (ct(np)), as well as two additional brain-heart crosstalks indicators [mutual information (mi(ct)) and average edge overlap (omega(ct))] obtained through a complex network modeling of the brain-heart system. These measures are based on identification of simultaneous increase of HR and ICP. In this article, we investigated the relationship of these novel indicators with respect to mortality in a multicenter TBI cohort, as part of the Collaborative European Neurotrauma Effectiveness Research in TBI high-resolution work package.Results: A total of 226 patients with TBI were included in this cohort. The data set included monitored parameters (ICP and HR), as well as laboratory, demographics, and clinical information. The number of detected brain-heart crosstalks varied (mean 58, standard deviation 57). The Kruskal-Wallis test comparing brain-heart crosstalks measures of survivors and nonsurvivors showed statistically significant differences between the two distributions (p values: 0.02 for mi(ct), 0.005 for ct(np) and 0.006 for omega(ct)). An inverse correlation was found, computed using the point biserial correlation technique, between the three new measures and mortality: - 0.13 for ct(np) (p value 0.04), - 0.19 for omega(ct) (p value 0.002969) and - 0.09 for mi(ct) (p value 0.1396). The measures were then introd, Si, open, Dimitri, Giovanna Maria; Beqiri, Erta; Placek, Michal M; Czosnyka, Marek; Stocchetti, Nino; Ercole, Ari; Smielewski, Peter; Lió, Pietro; Citerio, Giuseppe, Dimitri, G; Beqiri, E; Placek, M; Czosnyka, M; Stocchetti, N; Ercole, A; Smielewski, P; Lió, P; Citerio, G

PAREYSON, DAVIDE, open, Background In adults, many cases (about 30-40%) of leukoencephalopathies (LKENs), i.e. white matter (WM) diseases, are without definitive diagnosis. Patients who remain undiagnosed despite extensive investigations may have atypical forms of known acquired or genetic diseases, or novel diseases more likely genetic in nature. Aims of our work were to explore the efficiency of a systematic approach, including next generation sequencing (NGS), in the diagnosis of a cohort of adult patients with LKEN of unknown cause, and to describe their clinical features. Patients and Methods In this analytical observation study, we first reviewed the clinical and laboratory features of the adult patients (age >= 18 years) with undiagnosed LKEN assessed at the Unit of Rare Neurodegenerative and Neurometabolic Diseases of the Istituto Neurologico “C. Besta”, Milan, Italy, from 2012 to 2018. A targeted-gene panel sequencing (TGPS) was subsequently used to investigate 142 genes responsible for genetic LKENs, and a whole-exome sequencing (WES) was performed in one familial case remained undiagnosed. Results We identified 57 adult patients with LKEN of unknown cause (mean age 43 years, range 18-72; 23 males; 53 with late-adolescence or adult-onset). Thirty of them, henceforward called hypomyelinating leukoencephalopathies (HypoLKENs), presented an MRI pattern suggestive of hypomyelination (mild T2-hyperintensity and normal T1 signal), whereas the remaining 27 (henceforward called demyelinating leukoencephalopathies, DemLKENs) had an MRI pattern suggestive of demyelination (prominent T2-hyperintensity and prominent T1-hypointensity). In 13 HypoLKENs, TGPS identified the disease-causing genes, i.e., POLR3A (n = 2), POLR1C, TUBB4A, RARS1, GJA1, PLP1, GJC2, TBCD, CYP7B1, SPG11, PEX3, and PEX13, while in two further patients, WES led to the identification of a novel disease-causing gene (preliminarily called GENE_A). In contrast, TGPS identified the disease-causing gene (i.e., AUH) in only one, Retroterra scientifico Negli adulti circa il 30-40% delle leucoencefalopatie (LKEN) (= malattie della sostanza bianca) non sono diagnosticati. I pazienti che restano non diagnosticati dopo indagini approfondite possono avare forme atipiche di malattie note, sia genetiche che acquisite, oppure nuove malattie che sono più probabilmente di origine genetica. Nel nostro lavoro abbiamo voluto esplorare l’efficienza di un approccio sistematico che include il sequenziamento del DNA con tecniche di nuova generazione (NGS) nella diagnosi di pazienti adulti con LKEN a causa ignota, e descrivere le loro caratteristiche cliniche. Pazienti e Metodi In questo studio osservazionale analitico, abbiamo inizialmente revisionato le caratteristiche cliniche e paracliniche dei pazienti adulti (>=18 anni) con LKEN a causa ignota valutati nell’Unità di Malattie Neurodegenerative e Neurometaboliche Rare dell’Istituto Neurologico “C. Besta”, Milano, Italia, dal 2012 al 2018. Successivamente abbiamo usato un pannello genico per il sequenziamento di 142 geni associati a leucoencefalopatie ereditarie e, in un caso familiare rimasto non diagnosticato abbiamo studiato l’intero esoma. Risultati Abbiamo identificato 57 adulti con LKEN a causa ignota (età media 43 anni, intervallo 18-72; 23 maschi, 53 con esordio tardo-adolescenziale o adulto). Trenta di loro, che abbiamo chiamato «ipomielinizzanti», presentavano un pattern di MRI suggestivo di ipomielinizzazione (lieve iperintensità in T2 e segnale T1 normale), mentre i restanti 27, che abbiamo chiamato «demielinizzanti», avevano un pattern di MRI suggestivo di demielinizzazione (marcata iperintensità in T2 e ipointensità in T1). In 13 soggetti ipomielinizzati il pannello genico ha identificato i seguenti geni: POLR3A (n = 2), POLR1C, TUBB4A, RARS1, GJA1, PLP1, GJC2, TBCD, CYP7B1, SPG11, PEX3, e PEX13, mentre in due altri pazienti lo studio dell’esoma ha portato all’identificazione di un nuovo gene malattia. Al contrario, il pannello genico ha perm, 0, open, Salsano, E

open, The research activity during the doctorate was focused on an evaluation of HTA for a new drug for the treatment of heart failure. A first pharmaco-economic analysis was conducted before being placed on the market to demonstrate its cost-effectiveness, using data from randomized clinical trials and national rates and is part of the work carried out during the first year of the doctorate. Two new analyzes were subsequently carried out, which aim to demonstrate how pharmaceutical technology, once placed on the market, is still cost-effective and what its impact on the budget of the National Health Service is. In this case, real life data were used as efficacy data and national tariff rates for costs. The budget impact analysis makes it possible to obtain estimates on the economic sustainability of health technologies. The analysis aims to evaluate the financial impact on the Italian National Health Service (NHS) linked to the use of sacubitril / valsartan as therapy for heart failure in NYHA class II and III patients with reduced ejection fraction (FE <35%). The model estimates the target patient pool for the next three years starting from 2021. The target pool is then divided among the therapeutic options currently available. The second health and economic evaluation was conducted with the aim of examining the cost-effectiveness profile of sacubitril / valsartan (in combination with standard therapy), in comparison to enalapril (in combination with standard therapy), in the treatment of chronic heart failure with reduced ejection fraction in Italy A Markov decision model was developed to predict the effects of the two treatment options in comparison, in patients with chronic heart failure and with reduced ejection fraction, in terms of mortality (cardiovascular and all-cause), hospitalizations and quality of life. The model was adapted using data referable to a cohort of patients, specific for the Italian context, obtained from real life studies and subsequently subje, L’attività di ricerca durante il dottorato è stata focalizzata su una valutazione di HTA per uno nuovo farmaco per il trattamento dello scompenso cardiaco. Una prima analisi farmaco-economica era stata condotta prima dell’immissione in commercio per dimostrarne la costo-efficacia, utilizzando i dati degli studi clinici randomizzati e i tariffari nazionali ed è parte del lavoro svolto durante il primo anno di dottorato. Successivamente sono state svolte due nuove analisi, che hanno l’obiettivo di dimostrare come la tecnologia farmaceutica, una volta immessa nel mercato, sia ancora costo-efficace e quale sia il suo impatto sul budget del Servizio Sanitario Nazionale. Sono stati utilizzati in questo caso come dati di efficacia quelli di real life e per i costi i tariffari nazionali. L’analisi di impatto sul budget consente di ottenere stime sulla sostenibilità economica delle tecnologie sanitarie. L’analisi ha l’obiettivo di valutare l’impatto finanziario sul Servizio Sanitario Nazionale (SSN) italiano legato all’utilizzo di sacubitril/valsartan come terapia per lo scompenso cardiaco nei pazienti di classe NYHA II e III con frazione di eiezione ridotta (FE<35%). Il modello stima il pool di pazienti target per i prossimi tre anni a partire dal 2021. Il bacino target è poi suddiviso fra le opzioni terapeutiche attualmente a disposizione. La seconda valutazione economico-sanitaria è stata condotta con lo scopo di esaminare il profilo di costo-efficacia di sacubitril/valsartan (in combinazione con la terapia standard), in confronto ad enalapril (in combinazione con la terapia standard), nel trattamento dell’insufficienza cardiaca cronica con frazione d’eiezione ridotta in Italia È stato sviluppato un modello decisionale di Markov per predire gli effetti delle due opzioni di trattamento a confronto, nei pazienti con insufficienza cardiaca cronica e con frazione d’eiezione ridotta, in termini di mortalità (cardiovascolare e per tutte le cause), ospedalizzazioni e qualità di, 0, open, Ritrovato, D

ANTOLINI, LAURA, open, When studying a novel treatment with a survival time outcome, failure can be defined to include a serious adverse event (AE) among the endpoints typically considered, for instance relapse or progression. These events act as competing risks, where the occurrence of relapse as first event and the subsequent treatment change exclude the possibility of observing AE related to the treatment itself. In principle, the analysis of AE could be tackled by two different approaches: 1. the description of the observed occurrence of AE as first event: treatment ability to protect from relapse has an impact on the chance of observing AE due to the competing risks action. 2. the assessment of the treatment impact on the development of AE in patients who are relapse free in time: one should consider the occurrence of AE as if relapse would not exclude the possibility of observing AE related to the treatment itself. In the first part of the thesis we reviewed the strategy of analysis for the two approaches starting from the type of clinical question of interest. Then we identified the suitable quantities and possible estimators (crude proportion, AE rate, crude incidence, Kaplan-Meier and Aalen-Nelson smoothed estimators of the cause-specific hazard) and judge them according to two features, usually needed in a survival context: (i) the estimator should address for the presence of right censoring (ii) the theoretical quantity and estimator should be functions of time. In the second part of the thesis we proposed alternative methods, such as regression models, stratified Kaplan-Meier curves and inverse probability of censoring weighting, to relax the assumption of independence between the potential time to AE and the potential time to relapse. We showed through simulations that these methods overcome the problems related to the use of standard competing risks estimators in the second approach. In particular, we simulated different scenarios setting the hazard of relapse independent fr, Nello studio di un nuovo trattamento con un tempo di sopravvivenza come outcome, l’insuccesso può essere definito in modo da includere un evento avverso serio (AE) tra gli endpoint tipicamente considerati, come ad esempio ricaduta o progressione. Questi eventi si comportano come rischi competitivi, dove l’occorrenza di una ricaduta come primo evento e il conseguente cambio di trattamento escludono la possibilità di osservare AE legati al trattamento stesso. L’analisi degli AE può essere affrontata mediante due diversi approcci: 1. descrizione dell’occorrenza osservata di AE come primo evento: la capacità del trattamento di proteggere dalla ricaduta ha un impatto sulla possibilità di osservare AE dovuti all’azione dei rischi competitivi. 2. Valutazione dell’impatto del trattamento sullo sviluppo di AE in pazienti che sono liberi da ricaduta nel tempo: si dovrebbe considerare l’occorrenza di AE come se la ricaduta non escludesse la possibilità di osservare AE legati al trattamento stesso. Nella prima parte della tesi abbiamo rivisto la strategia di analisi per i due approcci partendo dal tipo di domanda clinica di interesse. Quindi abbiamo identificato le quantità più adatte e i possibili stimatori (proporzione grezza, tasso di AE, incidenza grezza, stimatori smoothed di Kaplan-Meier e di Aalen-Nelson per l’hazard causa-specifico) e li abbiamo valutati relativamente a due aspetti, solitamente necessari in un contesto di sopravvivenza: (i) Lo stimatore dovrebbe tenere in considerazione la presenza di censura a destra (ii) La quantità teorica e lo stimatore dovrebbero essere funzioni del tempo. Nella seconda parte della tesi abbiamo proposto metodi alternativi, come modelli di regressione, curve di Kaplan-Meier stratificate e inverse probability of censoring weighting, per rilassare l’assunto di indipendenza tra i tempi potenziali di AE e di ricaduta. Abbiamo mostrato attraverso simulazioni che questi metodi superano i problemi legati all’uso dei classici stimatori per, 0, open, Tassistro, E

open, Background: Streptococcus pneumoniae or pneumococcus, is responsible for severe invasive infections (IPD) in high risk groups and in the elderly. Moreover the pneumococcus is the most common cause of community acquired pneumonia (CAP) in adults. The aim of this study is the budget impact analysis of pneumococcal vaccination in elderly population in Italy from the perspectives of the National Health System (NHS) and Societal at 10 years of follow-up. Methods: A Markov model was developed based on the cohort of the Italian population to describe pneumococcal disease in elderly (=65 years). Three vaccination strategy scenarios were considered; No vaccination (Scenario 1), vaccination with 20% VCR (Scenario 2) and vaccination with 75% VCR (Scenario 3). The model considers costs of vaccination and other direct and indirect medical costs related to pneumococcal disease (non-bacteraemic pneumococcal pneumonia and pneumococcal meningitis). The NHS and Societal perspective and a simulated follow-up of 10 years were adopted. Results: In the base case, considering the cohort of population vaccinated followed for 10 years, the model estimated a total direct and indirect cost of €92.9, €88.8 and €77.5 million for the Scenario 1, 2 and 3. The ROI was -10% in the scenario without vaccination and 37% in the scenario with vaccination considering the impact of direct and indirect costs. Conclusions: In this study has been demonstrated that a pneumococcal vaccination in elderly populations is a strategy with a positive ROI if also indirect costs have been considered in the analysis. VCR do not affect the ROI but the budget impact., Contesto: Lo Streptococcus pneumoniae o pneumococco è responsabile di gravi infezioni invasive (IPD) in gruppi ad alto rischio e negli anziani. Inoltre il pneumococco è la causa più comune di polmoniti acquisite in comunità (CAP) negli adulti. Lo scopo di questo studio è stato di sviluppare un budget impatto e il ROI (Ritorno dell’Investimento) della vaccinazione anti-pneumococcica in una coorte di popolazione anziana in Italia dal punto di vista del Sistema Sanitario Nazionale (SSN) e della Società con 10 follow-up a 10 anni. Metodi: È stato sviluppato un modello di Markov basato sulla coorte della popolazione italiana per descrivere il pneumococco in una coorte di anziani (=65 anni). Sono stati considerati tre scenari di strategia di vaccinazione; Nessuna vaccinazione (Scenario 1), vaccinazione con 20% di copertura (Scenario 2) e vaccinazione con 75% di copertura (Scenario 3). Il modello ha considerato i costi della vaccinazione e altri costi sanitari diretti e indiretti relativi alla malattia pneumococcica (polmonite pneumococcica non batteriemica e meningite pneumococcica). E’ stata considerata la prospettiva del SSN e della società in un follow-up simulato di 10 anni. Risultati: Nel caso base, considerando la coorte di popolazione vaccinata seguita per 10 anni, il il modello ha stimato un costo totale diretto e indiretto di € 92,9, € 88,8 e € 77,5 milioni rispettivamente per gli scenari 1, 2 e 3. Il ROI varia dal -10% nello scenario senza vaccinazione al 37% nello scenario con vaccinazione considerando l'impatto dei costi diretti e indiretti. Conclusioni: In questo studio è stato dimostrato che la vaccinazione anti-pneumococcica nelle popolazioni anziane è una strategia con un ROI positivo se nell'analisi sono stati considerati anche i costi indiretti. Le differenti coperture non influiscono sul ROI ma sull'impatto sul budget., 0, open, Donnini, N

CROTTI, LIA, open, Among patients with initial diagnosis of HCM, cardiac amiloidosis has a prevalence of 9% and it increases with age. In the general population > 55 yo more than 7% has echocardiographic suspicion of the disease and echocardiography has an important role in the early diagnosis of the disease, Tra i pazienti con diagnosi iniziale di cardiomiopatia ipertrofica afferiti a Centri di Riferimento per le Cardiomiopatie, l’AC è la malattia non riconosciuta più comune con una prevalenza complessiva del 9%, e che aumenta con l'età (dall'1% nella fascia di età tra i 40-49 anni al 26% sopra gli 80 anni). Nella popolazione generale ≥55 anni più del 7% ha almeno un reperto ecocardiografico suggestivo di AC e l’ispessimento del setto interatriale è quello più frequente. I pazienti con elevato sospetto di AC (≥3 reperti) rappresentano l’1% della popolazione generale e il 4,9% di quelli con cuore non dilatato, ipertrofico e con FE normale., 0, open, Rella, V

open, Multiple Sclerosis (MS) is a chronic autoimmune disease that affects the central nervous system (CNS) leading to demyelination. The main pathological phenotypes are Relapsing-Remitting (RRMS) and Primary Progressive (PPMS) - the latter being the most severe form. Ajami B. et al. have shown that in the mouse model affected by Encephalomyelitis (EAE) - the animal model of MS- there is a strong correlation between the presence of monocytes at the level of the CNS and the worsening of the motor symptoms typical of the disease. Based on this evidence, blood samples from HC, RRMS and PPMS -all female- were collected for our study and CD14+ monocytes were isolated. Microarray experiments were conducted on these samples and subsequently qRT-PCR was performed. Bioinformatics analysis showed that RRMS distributed in two groups: one group (RR1) had similar trend to HC, the other group (RR2) had similar trend to PPMS. Gene Ontology showed that the most deregulated biological processes were those of Inflammation and Cholesterol. In addition to these patients, a second cohort of RRMS and PPMS was validated by qRT-PCR. Validation by qRT-PCR confirmed that the genes involved in cholesterol biosynthesis were deregulated in patients of both cohorts, but with specific patient-based differences. In fact, for both RRMS and PPMS, differences in expression levels of the same gene could be appreciated even among patients with the same clinical phenotype. This deregulation at the metabolic level, allowed us to hypothesize that the monocytes of these patients may have a phenotype consistent with the recently discovered Trained Immunity (TI). By TI is meant the memory of innate immunity: monocytes come into contact with a primary stimulus would retain memory of such "encounter", reacting more violently - and in the case of Multiple Sclerosis in an autoimmune way - to a second stimulation as could be an inflammatory stimulus. The first stimulus may be either a vaccine or molecules such as meva, La Sclerosi Multipla (MS) è una patologia autoimmune cronica che colpisce il sistema nervoso centrale (SNC) determinando demielinizzazione. I principali fenotipi patologici sono Recidivante-Remittente (RRMS) e Primariamente Progressiva (PPMS) – quest’ultima è la forme più grave. Ajami B. et al. hanno dimostrato che nel modello murino affetto da Encefalomielite (EAE) - il modello animale di MS- vi è una forte correlazione tra la presenza di monociti a livello del SNC ed il peggioramento dei sintomi motori tipici della malattia. Partendo da queste evidenze , per il nostro studio sono stati prelevati campioni di sangue da HC, RRMS e PPMS -tutte femmine- per poi isolare i monociti CD14+. Su tali campioni sono stati condotti esperimenti microarray e successivamente qRT-PCR. L’analisi bioinformatica ha evidenziato che gli RRMS si distribuivano formando due gruppi: un gruppo (RR1) si distribuiva similmente agli HC, l’altro (RR2) si distribuiva similmente ai PPMS. Dalla Gene Ontology è emerso che i processi biologici maggiormente deregolati erano quelli di Infiammazione e Colesterolo. In aggiunta a questi pazienti, è stata validata tramite qRT-PCR una seconda coorte di RRMS e PPMS. La validazione tramite qRT-PCR ha confermato che i geni coinvolti nella biosintesi del colesterolo sono deregolati nei pazienti di entrambe le coorti, ma con specifiche differenze basate sul paziente. Infatti, sia per gli RRMS che per i PPMS si sono potute apprezzare differenze nei livelli di espressione dello stesso gene anche tra i pazienti con lo stesso fenotipo clinico. Questa deregolazione a livello metabolico, ha permesso di ipotizzare che i monociti di questi pazienti possano avere un fenotipo concordante con la Trained Immunity (TI), recentemente scoperta. Per TI si intende la memoria dell’immunità innata: monociti venuti in contatto con uno stimolo primario conserverebbero memoria di tale “incontro” reagendo in maniera più violenta ad una seconda stimolazione come potrebbe essere uno sti, 0, open, Savinetti, I

open, Background. Long-term implications for patients surviving SARS-CoV-2 infection, mostly for those who experienced critical COVID-19, remain to be uncovered. Objective. To measure the burden of residual disease still detectable approximately three months and one year after discharge in patients underwent to mechanical ventilation during the index hospital stay. Methods. A single-center observational study was performed by including patients discharged alive from hospital admission with main diagnosis of COVID-19, and who underwent mechanical ventilation during hospital stay. Symptoms and a wide range of instrumental signs and CT exams were assessed after approximately three months and one years from index discharge by a multidisciplinary team using standardized procedures. Results. Between March and June 2020, 203 patients were enrolled and agreed to undergo an outpatient visit after two months since discharge. About 60% patients had at least one symptom, 6.5% had low level of saturation during oximetry reading and 85.0% had at least a blood test abnormality. More than 20% patients had at least 50% of the lung parenchyma affected by abnormalities. During the visit, a specialist consultation was requested for 21.2% of the subjects. Globally, just above 20% of the patients still presented severe COVID-19 Residual Illness. Duration of hospital stay longer than 30 days was significantly associated with the risk of having severe residual illness. Conclusion. A large proportion of patients still had clinical and instrumental signs of residual illness approximately two months after discharge. Provision of a coordinated, multidisciplinary long-term assessment should be considered for such patients experiencing critical COVID-19 disease, also in the light of future health planning, Introduzione. Ad oggi restano ancora da scoprire le implicazioni a lungo termine per i pazienti che sopravvivono, dopo ospedalizzaizone, all'infezione da SARS-CoV-2, soprattutto per coloro che hanno contratto una forma severa di COVID-19. Obbiettivo. Misurare il carico di malattia residua ancora rilevabile a circa tre mesi e un anno dalla dimissione in pazienti sottoposti a procedure invasive di ventilazione durante la degenza indice. Materiali e metodi. È stato condotto uno studio osservazionale monocentrico includendo pazienti dimessi vivi dal ricovero ospedaliero con diagnosi principale di COVID-19 e sottoposti a procedure ventilatorie durante la degenza ospedaliera. I sintomi e un'ampia gamma di indagini strumentali ed esami TC sono stati valutati dopo circa tre mesi e un anno dalla dimissione indice da un team multidisciplinare utilizzando procedure standardizzate. Risultati. Tra marzo e giugno 2020 sono stati arruolati 203 pazienti che hanno accettato di sottoporsi a una visita ambulatoriale dopo tre mesi dalla dimissione. Circa il 60% dei pazienti aveva almeno un sintomo, il 6,5% aveva un basso livello di saturazione durante la lettura dell'ossimetria e l'85,0% aveva almeno un'anomalia dell'analisi del sangue. Più del 20% dei pazienti presentava almeno il 50% del parenchima polmonare affetto da anomalie. Durante la visita è stata richiesta una consulenza specialistica per il 21,2% dei soggetti. A livello globale, poco più del 20% dei pazienti presentava ancora una grave malattia residua da COVID-19. La durata della degenza ospedaliera superiore a 30 giorni era significativamente associata al rischio di avere una malattia residua grave. Conclusione. Un'ampia percentuale di pazienti presentava ancora segni clinici e strumentali di malattia residua circa due mesi dopo la dimissione e ad un anno, seppur in una percentuale più ridotta si protraevano anomalie. Fornire una valutazione coordinata e multidisciplinare a lungo termine, attraverso la costruzione di proto, 0, open, Pezzetti, F

Migrant populations experience poor health, and their outcomes tend to be poorer in comparison with the general population. Vulnerability and inequality are further exacerbated in undocumented migrants, as the most invisible to healthcare systems. This a public health challenge requiring tailored action towards universal health coverage and health system equity. Objectives: To estimate health needs among undocumented migrants in the areas of maternal & perinatal health and COVID-19; and to test a combination of methodologies for systematic monitoring and evaluation. Methods: This research is based on three retrospective studies (cohort and cross-sectional) using a combination of diverse and complementary data sources to reflect the complex nature of health outcomes and healthcare access in undocumented migrants, including: national/regional health management information systems, third sector healthcare provider health information systems, and surveys at selected healthcare facilities. Cohort: Undocumented migrants having accessed: (i) maternity healthcare through National/Regional Health Services in Lombardy Region (Italy) from 2016 to 2020; (ii) healthcare through a third sector healthcare providers in Milan (Italy) from February 24th to May 24th, 2020; (iii) healthcare through participating healthcare providers in Switzerland (Geneva Canton), USA (Baltimore City), Italy (Lombardy Region), and France (Paris Region) from February to May 2021. Results: (i) The study on maternal and perinatal health included 1595 undocumented migrant women and their neonates. 57.37% women had ≥4 antenatal visits, 68.21% the first one within 12 weeks of gestation, 63.45% at least two ultrasound tests including one within 12 weeks of gestation, and 6.21% complete laboratory tests. Total cesarean sections were 26.89%. Emergency neonatal resuscitation for birth asphyxia was conducted in 2.63% births, and 49.03% neonates initiated breastfeeding within 2 hours from birth. 80.56% pregnancies, Le popolazioni migranti presentano uno stato di salute carente con esiti peggiori rispetto alla popolazione generale. Vulnerabilità e diseguaglianza sono esacerbate nei migranti irregolari, i più invisibili ai sistemi sanitari. Questa sfida di salute pubblica necessita di azione per la copertura sanitaria universale e l'equità del sistema sanitario. Obiettivi: Stimare i bisogni di salute nei migranti irregolari nelle aree di salute materna & perinatale e di COVID-19; Testare metodologie di monitoraggio e valutazione sistematici. Metodi: Questa ricerca si basa su tre studi retrospettivi (coorte e trasversali ) con fonti complementari per cogliere la complessità degli esiti di salute e dell’accesso alle cure nei migranti irregolari: i flussi sanitari amministrativi nazionali/regionali, i sistemi d’informazione delle strutture sanitarie del terzo settore, e le inchieste presso un campione di strutture sanitarie. Coorte: I migranti irregolari che hanno avuto accesso a: (i) percorso nascita tramite Servizio Sanitario Nazionale/Regionale nella Regione Lombardia (Italia) dal 2016 al 2020; (ii) cure sanitarie attraverso una struttura del terzo settore a Milano (Italia) dal 24 febbraio al 24 maggio 2020; (iii) cure sanitarie tramite strutture selezionate in Svizzera (Regione di Ginevra), Stati Uniti (Città di Baltimora), Italia (Regione Lombardia), e Francia (Regione di Paris) da febbraio a maggio 2021. Risultati: (i) Lo studio sulla salute materno-perinatale ha incluso 1595 donne migranti irregolari e i loro neonati. Il 57.37% delle donne ha avuto ≥4 visite ostetriche, 68.21% la prima entro la 12a settimana di gravidanza, 63.45% ≥2 ecografie di cui la prima entro la 12a sett. di gravidanza, e 6.21% esami di laboratorio completi. I parti cesarei totali sono stati il 26.89%, le rianimazioni neonatali in urgenza per asfissia alla nascita il 2.63%, l’allattamento materno entro 2 ore dalla nascita il 49.03%. L’80.56% delle gravidanze ha avuto decorso fisiologico ma 2.26% emorrag, 0, Genovese, E

AMMIRATI, ENRICO, GIANNATTASIO, CRISTINA, BACKGROUND: Identifying reliable markers associated with events after acute myocarditis (AM) is clinically relevant to planning a future follow-up. We aimed to clarify the prognostic performance of previously described cardiac magnetic resonance imaging (CMRI) markers including septal late gadolinium enhancement (LGE), versus evidence of left ventricular ejection fraction (LVEF)<50% on baseline CMRI, vs. complicated clinical presentation (CCP) of AM (defined as the presence of sustained ventricular arrhythmias [SVT] or LVEF <50% on the first echocardiogram of fulminant presentation). METHODS: We assessed 248 AM patients with onset of cardiac symptoms <30 days before admission, increased troponin, and CMRI consistent with myocarditis (median time from admission to CMRI of 6 days). The patients were retrospectively collected between February 2006 and April 2019 from 6 hospitals with a median follow-up of 1708 days (first to third quartile [Q1-Q3], 1000-2751). We assessed the prognostic performance of septal LGE vs. LVEF<50% on CMRI vs. CCP. RESULTS: The study population had a median age of 34 years (Q1-Q3: 23-41) with a male prevalence of 87.1% and a median LVEF of 61% (Q1-Q3, 55-66%) on baseline CMRI. Thirteen patients (5.2%) experienced at least one major cardiac event (including cardiac death, heart transplantation (N=1), aborted cardiac death (N=3), SVT (N=5), or heart failure hospitalization (N=5). Among these 13 patients, 10 (76.9%) had septal LGE, 8 (61.5%) had LVEF<50%, on CMRI, and 12 (92.3%) had a CCP. The best performance for these prognostic markers was the negative predictive value (NPV) ranging between 0.98 and 0.99 for CCP, while predictive value was low, ranging between 0.14 and 0.25 for LVEF<50%. CONCLUSIONS: We confirmed that the rate of major cardiac events after an AM is relatively low, and septal LGE, LVEF<50% on CMRI, and CCP are significantly associated with events. The most relevant finding is the high NPV of these markers to identify patients, BACKGROUND: L'identificazione di marcatori affidabili associati a eventi dopo una miocardite acuta (AM) è clinicamente rilevante per pianificare un futuro follow-up. Abbiamo cercato di chiarire la performance prognostica dei marcatori di risonanza magnetica cardiaca (CMRI) precedentemente descritti, tra cui l'aumento tardivo del gadolinio settale (LGE), rispetto all'evidenza della frazione di eiezione ventricolare sinistra (LVEF) <50% sulla CMRI basale, rispetto alla presentazione clinica complicata (CCP) della AM (definita come la presenza di aritmie ventricolari sostenute [SVT] o LVEF <50% al primo ecocardiogramma di presentazione fulminante). METODI: Abbiamo valutato 248 pazienti AM con insorgenza di sintomi cardiaci <30 giorni prima del ricovero, aumento della troponina e CMRI coerente con la diagnosi di miocardite (tempo mediano dal ricovero alla CMRI di 6 giorni). I pazienti sono stati raccolti retrospettivamente tra febbraio 2006 e aprile 2019 da 6 ospedali Lombardi con un follow-up mediano di 1708 giorni (primo - terzo quartile [Q1-Q3], 1000-2751). Abbiamo valutato la performance prognostica di LGE settale vs. LVEF<50% su CMRI vs. CCP. RISULTATI: La popolazione dello studio aveva un'età mediana di 34 anni (Q1-Q3: 23-41) con una prevalenza maschile dell'87,1% e una LVEF mediana del 61% (Q1-Q3, 55-66%) alla CMRI basale. Tredici pazienti (5,2%) hanno sperimentato almeno un evento cardiaco maggiore (tra cui morte cardiaca, trapianto di cuore (N=1), arresto cardiaco resuscitato (N=3), SVT (N=5), o ricovero per insufficienza cardiaca (N=5). Tra questi 13 pazienti, 10 (76,9%) avevano LGE settale, 8 (61,5%) avevano LVEF<50%, su CMRI, e 12 (92,3%) avevano un CCP. La migliore performance per questi marcatori prognostici era il valore predittivo negativo (NPV) che variava tra 0,98 e 0,99 per CCP, mentre il valore predittivo positivo era basso, tra 0,14 e 0,25 per LVEF<50%. CONCLUSIONI: Abbiamo confermato che il tasso di eventi cardiaci maggiori dopo una AM è relativame, 0, Varrenti, M

9, Background This study aimed at comparing, within the 2018 NIA-AA amyloidosis/tauopathy/neurodegeneration (ATN) framework, the distribution of T +/- profiles across A+patients with MCI and dementia in a retrospective, single-center, clinic-based cohort. Methods We retrospectively collected data on N=168 A+patients with either MCI due to AD (N=50) or probable AD dementia (ADD; N=118). ATN status was assigned, according to the 2018 NIA-AA framework, based on cerebrospinal fluid (CSF) biomarker concentrations. A chi(2)-test for independent samples was run to compare the distribution of A + T + vs. A + T- profiles, regardless of N status, across MCI and dementia patients. Results The most represented ATN profile in both groups was A+T+N+(MCI: 54%; dementia: 70.3%); 3.4% of dementia patients and none within the MCI cohort presented with an A+T-N+ profile. When grouping ATN profiles solely based on A and T dimensions, the prevalence of A+T+ was of 76.3% and 66% in dementia and MCI patients, respectively. No association between clinical diagnoses (i.e., MCI vs. dementia status) and AT profiles (i.e., A+T+ vs. A+T-) was detected. Discussion The distribution of A+T+ vs. A+T- does not differ between MCI and ADD, with A+T+profiles being predominant in both clinical categories. This does not support the common notion of A+T- profiles being relatively more prevalent in MCI patients, as indexing an earlier and/or less severe disease. Hence, caution should be exerted in attributing a case of MCI to prodromal AD solely based on A-positivity in the presence of a T-negative profile., No, Verde, F; Aiello, EN; Milone, I; Grigoli Giacopuzzi, E; Dubini, A; Ratti, A; Poletti, B; Ticozzi, N; Silani, V, Verde, F; Aiello, E; Milone, I; Grigoli Giacopuzzi, E; Dubini, A; Ratti, A; Poletti, B; Ticozzi, N; Silani, V

TAGLIAVINI, FABRIZIO, open, Stroke is a leading cause of mortality and acquired disability worldwide. The first genome-wide association study in Italian ischemic stroke patients found a significant association with the missense single nucleotide polymorphism (SNP) rs4780144 in the ryanodine receptor type 3 (RyR3) gene, which leads to a potential loss of function. Multiple evidences suggested that a reduced function of RyR3 could improve stroke outcome. With this study we aimed at investigating the role of RyR3 in ischemic stroke at functional, genomic, and cellular level. Adipose-derived mesenchymal stem cells (Ad-MSCs) express RyR3 but not the other ryanodine receptors (RyR1 and RyR2). We assessed the effect of the rs4780144 genotype on intracellular calcium homeostasis in Ad-MSC lines. Our results confirmed the reduction of the RyR3 function (reduced release of calcium ions into the cytoplasm) in cells with the mutated alleles, which was statistically significant in homozygous donor. A second cohort of 319 Italian ischemic stroke patients with good clinical outcome was genotyped with Illumina Human-24 720. Genotypes of cases (both first and second cohorts) and controls were imputed using the TOPMed reference panel of human haplotypes. This second GWAS replicated the association with rs4780144 and other SNPs in the RyR3 gene. Finally, ischemic injury induced by oxygen-glucose deprivation (OGD) was evaluated in organotypic brain slices from wild-type and RyR3-knockout mice. RyR3- knockout showed a decreased susceptibility to ischemic damage compared to wild-type slices as indicated by the reduced propidium iodide incorporation and LDH release at 48 and 72 h after OGD. RyR3- knockout slices showed also a reduced swelling after OGD, indicating reduction of cytotoxic edema. However, to date no significant differences were found in gene expression analysis performed on neuronal and oxidative stress related genes. The results of this work confirm that RyR3 may play a role in ischemic stroke. In par, L'ictus è una delle principali cause di mortalità e disabilità acquisita in tutto il mondo. Il primo studio di associazione genome-wide in pazienti con ictus ischemico italiano ha trovato un'associazione significativa con il polimorfismo missenso a singolo nucleotide (SNP) rs4780144 nel gene del recettore della rianodina di tipo 3 (RyR3), che porta a una potenziale perdita di funzione. Molteplici evidenze hanno suggerito che una ridotta funzione di RyR3 potrebbe migliorare l'esito dell'ictus. Con questo studio abbiamo mirato a indagare il ruolo di RyR3 nell'ictus ischemico a livello funzionale, genomico e cellulare. Le cellule staminali mesenchimali di derivazione adiposa (Ad-MSC) esprimono RyR3 ma non gli altri recettori della rianodina (RyR1 e RyR2). Abbiamo valutato l'effetto del genotipo rs4780144 sull'omeostasi del calcio intracellulare nelle linee Ad-MSC. I nostri risultati hanno confermato la riduzione della funzione RyR3 (ridotto rilascio di ioni calcio nel citoplasma) nelle cellule con alleli mutati, che era statisticamente significativa nel donatore omozigote. Una seconda coorte di 319 pazienti italiani con ictus ischemico con buon esito clinico è stata genotipizzata con Illumina Human-24 720. I genotipi dei casi (sia la prima che la seconda coorte) e i controlli sono stati imputati utilizzando il pannello di riferimento TOPMed degli aplotipi umani. Questo secondo GWAS ha replicato l'associazione con rs4780144 e altri SNP nel gene RyR3. Infine, il danno ischemico indotto dalla deprivazione di ossigeno-glucosio (OGD) è stato valutato in fette di cervello organotipiche da topi wild-type e RyR3-knockout. Il knockout di RyR3 ha mostrato una ridotta suscettibilità al danno ischemico rispetto alle sezioni wild-type come indicato dalla ridotta incorporazione di ioduro di propidio e dal rilascio di LDH a 48 e 72 ore dopo OGD. RyR3- fette knockout hanno mostrato anche un gonfiore ridotto dopo OGD, indicando una riduzione dell'edema citotossico. Tuttavia, ad oggi no, 0, open, Boncoraglio, G

MOREO, ANTONELLA, open, The first purpose of the work was to retrospectively analyze the organizational, economic and clinical impact of performing echocardiographic examinations in the hospital ward at the patient's bed using a portable echocardiograph and a certified sonographer with centralized reading of the exams by expert echocardiographers with respect to the organizational model that requires the transport of patients to the Echocardiography Laboratory for the execution of the echocardiographic examination. The second purpose was to prospectively assess the clinical and organizational impact of the latest generation ultra-mobile ultrasound scanners that have been adopted by cardiologists as part of consulting visits to inpatient patients. METHODS Historical data on the modality and time of transport of patients to the Echocardiography Laboratory were analyzed. This model was compared in economic terms and in clinical impact with the one involving bedside examinations, recorded by the sonographer. Information was also collected such as the need for repetition and / or completion at the Laboratory, recording any discrepancies or the added value of the examination carried out at the Laboratory. For the second purpose, cardiological consultations carried out in internist departments were recorded prospectively over a period of 2 months. Subsequently, the cardiologists who carried out the cardiological consultations were equipped with an ultra-mobile ultrasound system and for 5 months were recorded the method of use, the relapse in the management of the patient and what were the clinical conditions that instead required the execution of a complete echocardiogram by the sonographer or at the Laboratory. Finally, the savings in terms of hospitalization days and the economic impact of this management for the hospital are estimated, as the cardiological consultancy could be finalized on the spot. RESULTS The average duration of transport by operators of patients staying in the same hall of, Il primo scopo del lavoro è stato quello di analizzare retrospettivamente l’impatto organizzativo, economico e clinico dell’esecuzione degli esami ecocardiografici in reparto di degenza al letto del paziente utilizzando un ecocardiografo portatile e un sonographer con la lettura centralizzata degli esami da parte di medici ecocardiografisti esperti rispetto al modello organizzativo che prevede il trasporto dei pazienti presso il Laboratorio per l’esecuzione dell’esame ecocardiografico. Il secondo scopo è stato quello di valutare prospetticamente l’impatto clinico ed organizzativo di ecografi ultra-mobili di ultima generazione che sono stati adottati da parte da cardiologi nell’ambito delle visite di consulenza a pazienti degenti. METODI Sono stati analizzati dati storici sulla modalità e sui tempi di trasporto dei pazienti al Laboratorio di Ecocardiografia. Questo modello è stato confrontato in termini economici e di impatto clinico con quello che prevedeva gli esami al letto del paziente, registrati dal sonographer. Sono state raccolte anche informazioni quali la necessità di ripetizione e/o di completamento presso il Laboratorio registrando le eventuali discordanze. Per il secondo scopo sono state registrate prospetticamente nell’arco di 2 mesi tutte le consulenze cardiologiche effettuate in reparti internistici. Successivamente i cardiologi che espletavano le consulenze cardiologiche sono stati dotati di un ecografo ultra-mobile e per 5 mesi ne è stata registrata la modalità di utilizzo, la ricaduta nella gestione del paziente e quali fossero le condizioni cliniche che invece necessitavano comunque l’esecuzione di un ecocardiogramma completo da parte del sonographer o presso il Laboratorio. Sì è infine stimato il risparmio in termini di giornate di degenza e di impatto economico di tale gestione per l’Ospedale, in quanto la consulenza cardiologica poteva essere finalizzata sul momento. RISULTATI La durata media dei trasporti da parte di pedoni di pazienti degenti, 0, open, DE CHIARA, B

open, Introduction My research activity aims to use the data from the HERCOLES study, a retrospective study on hepatocarcinoma, as an application example for the comparison of statistical methods for estimating the marginal effect of a certain treatment on standard survival endpoints (unweighted) and weighted composite endpoints. This last approach, unexplored to date, is motivated by the need to take into account the different clinical relevance of cause-specific events. In particular, death is considered the worst event but a greater relevance is also given to local recurrence compared to non-local one. To evaluate the statistical performance of these methods, two simulation protocols were developed. Methods To remove or reduce the effect of confounders (characteristics of the subject and other baseline factors that determine systematic differences between treatment groups) in order to quantify a marginal effect, it is necessary to use appropriate statistical methods, based on the Propensity Score (PS): the probability that a subject is assigned to a treatment conditional on the covariates measured at baseline. In my thesis I considered some of the PS-based methods available in literature (Austin 2013): - PS as a covariate with spline transformation - PS as a stratified categorical covariate with respect to quantiles - Pairing for PS - Inverse probability weighting (IPW) The marginal effect of the unweighted composite endpoint is measured in terms of marginal hazard ratio (HR) estimated using a Cox model. As regards the weighted composite endpoint, the estimator of the treatment effect is the non-parametric estimator of the ratio between cumulative hazards proposed by Ozga and Rauch (2019). Simulation protocol The data generation mechanism is similar for both simulation studies. In both simulation protocols, the data generation mechanism is similar to that used by Austin (2013). Specifically, with regard to the unweighted endpoint (Disease Free Survival), I simulated th, Introduzione La mia attività di ricerca si propone di utilizzare i dati dello studio HERCOLES, uno studio retrospettivo sull’epatocarcinoma, come esempio applicativo per il confronto di metodi statistici per la stima dell’effetto marginale di un certo trattamento su endpoint di sopravvivenza standard (non pesati) ed endpoint compositi pesati. Quest’ultimo approccio, non ancora esplorato, è motivato dalla necessità di tenere conto della diversa rilevanza clinica degli eventi causa-specifici. In particolare, la morte è considerata l'evento peggiore ma una rilevanza maggiore è data anche alla recidiva locale rispetto a quella non locale. Per confrontare la performance statistiche di tali metodi sono stati sviluppati due protocolli di simulazioni. Metodi Per rimuovere o ridurre l'effetto dei confondenti (caratteristiche del soggetto e da altri fattori al basale che determinano differenze sistematiche tra i gruppi di trattamento) al fine di quantificare un effetto marginale, è necessario l’utilizzo di metodi statistici appropriati, basati sul Propensity Score (PS):la probabilità che un soggetto sia assegnato ad un trattamento condizionatamente alle covariate misurate al basale. Nella mia tesi ho considerato alcuni tra i metodi disponibili in letteratura basati sul PS (Austin 2013): - PS come covariata con trasformazione spline - PS come covariata categorica stratificata rispetto ai quantili - Appaiamento per PS - Inverse probability weighting (IPW) L’effetto marginale dell’endpoint composito non pesato è misurato in termini di hazard ratio (HR) marginale stimato tramite un modello di Cox. Per quanto riguarda l’endpoint composito pesato, lo stimatore dell’effetto del trattamento è lo stimatore non-parametrico del rapporto tra hazard cumulativi proposto da Ozga e Rauch (2019). Protocollo simulazioni Il meccanismo di generazione dei dati è simile per entrambi gli studi di simulazione. In entrambi i protocolli di simulazione, Il meccanismo di generazione dei dati è simile a, 0, open, Pacifico, C

open, Background. Healthy ageing is associated with changes in human’s body ability to modify organs and systems structure and function in response to stimuli. With this project we sought to understand whether remodelling in response to a stimulus, exercise training, altered with healthy ageing and to deepen the knowledge about running effects on the knee joint. Methods. 237 untrained healthy male and female subjects volunteering for their first-time marathon were recruited. At baseline and after 6 months of unsupervised training, race completers underwent tests including 1.5T cardiac magnetic resonance, brachial and non-invasive central blood pressure (BP) assessment and a 3.0T bilateral knee magnetic resonance. Biological “aortic age” was calculated from the baseline chronological age-stiffness relationship. Change in stiffness was assessed at the ascending (Ao-A) and descending aorta at the pulmonary artery bifurcation (Ao-P) and diaphragm (Ao-D). For analysis, runners were divided by age (O35: ≥35y.o.; U35:  34y.o.) Results. Injury and completion rates were similar among groups. 138 runners (under 35 [U35]: n=71, females=49%; over 35 [O35]: n=67, females=51%) completed the race. On average, U35 were faster by 37 minutes (12%). Training induced a small increase in left ventricle (LV) mass in both groups (3g/m2, p<0.001), but U35 also increased ventricular cavity sizes (LV end-diastolic volume [EDV]i +3%; LV end-systolic volume [ESV]i +8%; right ventricle [RV] EDVi +4%, RVESVi +5%; p<0.01 for all). Systemic aortic compliance fell in the whole sample by 7% (p=0.020) and, especially in O35, also systemic vascular resistance (-4% in the whole sample, p=0.04) and blood pressure (systolic/diastolic, whole sample: brachial -4/-3 mmHg, central -4/-2 mmHg, all p <0.001; O35: brachial -6/-3 mmHg, central -6/-4 mmHg, all p<0.001). At baseline, a decade of chronological ageing correlated with a decrease in Ao-A, Ao-P, and Ao-D distensibility by 2.3, 1.9, and 3.1 x 10-3 mm Hg-1, r, Introduzione. Col progredire dell’età, la capacità dell’organismo di modificare struttura e funzione di organi e apparati in risposta agli stimoli si modifica. Scopo di questo progetto è indagare l’effetto dell’età sul rimodellamento cardiovascolare in risposta all’allenamento aerobico e valutare gli effetti della corsa sulla patologia del ginocchio. Metodi. 237 volontari sani, sedentari, sono stati valutati al basale e dopo 6 mesi di allenamento non supervisionato e il completamento della loro prima maratona, con: 1) risonanza magnetica cardiaca a 1.5T; 2) misurazione non invasiva della pressione arteriosa (PA) centrale e brachiale; 3) risonanza magnetica (MRI) bilaterale del ginocchio a 3.0T. La “età aortica biologica” è stata calcolata al basale dalla relazione tra l’età anagrafica e la rigidità arteriosa. Modificazioni nella rigidità arteriosa sono state valutate a livello dell’aorta ascendente (Ao-A), discendente (Ao-D), della biforcazione polmonare (Ao-P) e del passaggio diaframmatico (Ao-D).Per l’analisi, i soggetti sono stati divisi in due gruppi in base all’età (≥35 anni: O35; 34 anni: U35). Risultati. Le percentuali di infortunio e completamento della corsa sono state simili nei due gruppi. 138 corridori (U35: n =71, femmine =49%; O35: n =67, femmine =51%) hanno completato la corsa. In media, gli U35 sono stati 37 minuti più veloci (12%). L’allenamento si è associato a un piccolo incremento nella massa del ventricolo sinistro (LV) in entrambi i gruppi (3g/m2, p <0.001), ma negli U35 si è osservato anche un aumento del volume biventricolare (volume telediastolico LV [EDV]i +3%; volume telesistolico LV [ESV]i +8%; EDVi del ventricolo destro [RV] +4%, RVESVi +5%; p<0.01 per tutti). La compliance sistemica aortica si è ridotta nell’intero campione del 7% (p=0.020) e, in particolare negli O35, anche le resistenze vascolari sistemiche (-4% nell’intero campione, p=0.04) e la PA (sistolica/diastolica, intero campione: brachiale -4/-3 mmHg, centrale -4/-2 mmHg, tu, 0, open, Torlasco, C

GENOVESE, PIETRO, open, The scope of genome engineering in hematopoietic stem/progenitor cells (HSPCs) has broadened from random to precise genome insertions for treating genetic diseases of the blood lineages. Targeted editing of inherited mutant genes allows in situ correction and functional reconstitution with preserved expression control. We recently showed that both the induced double-strand DNA breaks and the AAV6 genome trigger a p53-dependent DNA damage response in HSPC delaying proliferation and decreasing hematopoietic reconstitution after xenotransplantation. Suppression of this response by transient expression of a dominant negative p53 released cell-cycle block and rescued hematopoietic reconstitution. Yet, the underlying biology remained unknown as well as the impact of gene editing on clonal dynamics of HDR-edited HSPC upon transplantation. Moreover, it has long been contended that the quiescence of primitive HSC constrains HDR-mediated gene editing, thus limiting its perspective clinical applications in several diseases. Here, we first overcame such constraints by transiently expressing the adenovirus 5 protein E4orf6/7, which operates the major cell cycle controller E2F, together with the nuclease. By global and targeted gene expression analysis we showed engagement of targeted cells in S/G2 phases with concomitant upregulation of all major components of the HDR machinery, thus increasing the efficiency of targeted transgene insertion. Combined E4orf6/7 expression and p53 inhibition enhanced >50% HDR efficiency within human graft surpassing the levels reported until now in the literature. Such outcome was reproducible across several HSPC donors and sources, genomic loci and conceivably portable to most types of editing platforms. In parallel, we devised a novel technology (BAR-seq) which enables clonal tracking of individual HDR-edited HSC by introducing a unique heritable barcode in the AAV6 template. Deep sequencing of integrated BARs in human hematochimeric mice showed, Negli ultimi anni, l’editing genetico nelle cellule staminali/progenitrici ematopoietiche umane (HSPC) per il trattamento di malattie genetiche del sangue è migliorato drasticamente trasformando inserzioni genetiche casuali in precise e mirate modificazioni del genoma. La modifica mirata dei geni mutati ereditati consente la correzione in situ e la ricostituzione funzionale con il mantenimento del controllo endogeno dell'espressione. Recentemente abbiamo dimostrato che sia le rotture del DNA a doppio filamento indotte dall’editing che il genoma stesso dell’Adeno-Associated Virus 6 (AAV) innescano una risposta dipendente da p53 nell'HSPC che risulta in un ritardo della proliferazione con conseguente diminuzione della ricostituzione ematopoietica dopo il trapianto delle cellule editate in animali immuno-compromessi. Per cui, abbiamo quindi dimostrato come la soppressione di questa risposta mediante l’espressione transitoria della forma negativa dominante di p53 preservi la ricostituzione del lineage ematopoietico. Tuttavia, la biologia sottostante è rimasta sconosciuta, così come l'impatto dell'editing genetico sulle dinamiche clonali dell'HSPC modificate con riparo diretto per omologia (Homology Directed Repair, HDR) al momento del trapianto. Inoltre, lo stato quiescente delle HSC primitive costituisce un limite per l’editing genetico mediato da HDR, riducendo le sue possibili applicazioni cliniche. In questo lavoro, abbiamo prima superato tale limite esprimendo transitoriamente la proteina dell'adenovirus 5 E4orf6/7, che regola il principale controllore del ciclo cellulare, E2F, insieme alla nucleasi. Mediante un'analisi dell'espressione genica globale e mirata, abbiamo dimostrato come E4orf6/7 spinga le cellule in fase S/G2 con concomitante sovra-regolazione di tutti i principali componenti del macchinario HDR, aumentando così l'efficienza dell'inserimento del transgene in cellule precedentemente quiescenti. Nel contesto dello xenotrapianto, l'espressione combinata, 0, open, Jacob, A

open, The high prevalence of metabolic and cognitive disorders represents one of the major issues of health systems. Recent findings indicate that obesity may affect brain functions however the effect of a high-fat diet (HFD) on the central nervous system is not fully understood. The aim of this study is the evaluation of the influence of HFD on neuroinflammation and regional brain function in a mouse model of Insulin Resistance (IR) focusing on sex-dependent differences induced by peripheral metabolic impairment. C57BL/6J male and female mice were fed with standard chow or HFD (45%/60%) for 35 weeks. Animals were monitored weekly for body weight, haemato-chemical analysis (circulating glucose, total cholesterol, ALT, and AST), and glucose tolerance test (GTT). Positron Emission Tomography (PET) imaging studies were performed longitudinally using [18F]-FDG and [18F]-VC701 as radiotracers, to measure respectively glucose consumption and microglia/macrophages activation within the brain. Magnetic Resonance Imaging (MRI) and Magnetic Resonance Spectroscopy (MRS) was used to measure the effects of diet on hepatic lipid content and peri abdominal fat accumulation. Finally, post-mortem transcriptome analysis was applied to the anterior cortex to reveal potential modification in gene expression. HFD induced a significant increase in body weight, glucose tolerance, and haemato-chemical parameter in a sex dependent manner. HFD diet increased peri abdominal fat accumulation in male and lipid content in the liver as revealed at MR spectroscopy. This last effect was particularly evident in females. PET [18F]-FDG showed a relative increase in glucose metabolism in the anterior region of the brain including the olfactory bulbs in both male and female mice while an increase in the anterior cortex was found in males mice fed with 60% HFD. Moreover, correlation analysis between glucose uptake and different metabolic biomarkers revealed, mainly in male mice, regional brain metabolic modifi, L'elevata prevalenza di disturbi metabolici e cognitivi rappresenta uno dei maggiori problemi della salute umana. Recenti scoperte indicano che l'obesità può influenzare le funzioni cerebrali, tuttavia l'effetto di una dieta ricca di grassi sul sistema nervoso centrale non è ancora completamente compreso. Lo scopo di questo studio è la valutazione dell'influenza della dieta grassa sulla neuro infiammazione e sulla funzione cerebrale regionale in un modello murino di insulino-resistenza, con particolare attenzione alle differenze dipendenti dal sesso. I topi maschi e femmine C57BL/6J sono stati nutriti con dieta standard o dieta grassa (due tenori: 45% / 60% di grassi) per 35 settimane. Gli animali sono stati monitorati settimanalmente per analizzare le variazioni di peso corporeo, analisi ematochimiche (glucosio circolante, colesterolo totale, ALT e AST) e test di tolleranza al glucosio. Gli studi di imaging con tomografia a emissione di positroni (PET) sono stati eseguiti longitudinalmente utilizzando [18F] -FDG e [18F] -VC701 come radio-traccianti, per misurare rispettivamente il consumo di glucosio e l'attivazione di microglia / macrofagi all'interno del cervello. La risonanza magnetica (RM) e la spettroscopia a risonanza magnetica (SRM) sono state utilizzate per misurare gli effetti della dieta sul contenuto lipidico epatico e sull'accumulo di grasso peri addominale. Infine, l'analisi della trascrittomica post-mortem è stata applicata alla corteccia anteriore al fine di rivelare potenziali modifiche nell'espressione genica. La dieta grassa introduce in modo significativo un aumento del peso corporeo, della tolleranza al glucosio e dei parametri ematochimici che variano in base al sesso. Anche l'accumulo di grasso peri addominale nel maschio e il contenuto di lipidi nel fegato, come rivelato alla spettroscopia RM, sono stati osservati in tale modello. Quest'ultimo effetto è stato particolarmente evidente nelle femmine. La PET [18F]-FDG ha mostrato un aumento rela, 0, embargoed_20220120, Murtaj, V

embargoed_20230123, Cardiovascular diseases are the leading cause of premature death and disability in the world. A diet containing high amounts of plant-based foods has been associated with a reduced risk of cardiovascular diseases and the beneficial effect has been attributed to the antioxidants found in the foods. However, findings from randomized controlled trials on the role of antioxidant supplementation have been disappointing, reporting null results or even harmful effects. It has been suggested that antioxidants interact with each other to promote cardiovascular health. Therefore, the Non Enzymatic Antioxidant Capacity (NEAC) assay has been proposed, which measures the antioxidant potential of different dietary sources considering interactions between them. This thesis aimed to further clarify the effect of dietary antioxidants on the risk of cardiovascular diseases, with particular interest in measuring NEAC from diet. The specific aims were to prospectively study whether dietary NEAC is associated with a lower risk of myocardial infarction, stroke and heart failure in subjects free from CVD or cancer. Four studies were conducted using data from two large Swedish cohorts. Multivariable Cox proportional hazard regression models were fitted to estimate hazard ratios (HRs) with 95% confidence intervals (CIs). In the Swedish Women’s Lifestyle and Health Cohort (n = 45,882), a higher baseline dietary NEAC was inversely associated with the risk of myocardial infarction (quintile 5 vs. quintile 1: HR: 0.60, 95% CI: 0.45-0.81, p for trend < 0.05) and heart failure (tertile 3 vs. tertile 1: HR: 0.63; 95% CI: 0.43-0.93; p for trend < 0.05) in young to middle aged women, whereas no association was found between dietary NEAC and stroke. In the Swedish National March Cohort (n = 34,543), dietary NEAC was inversely associated with the risk of overall (quartile 4 vs. quartile 1: HR: 0.77, 95% CI: 0.61-0.96; p for trend < 0.05) and non-fatal myocardial infarction (quartile 4 vs. qua, Cardiovascular diseases are the leading cause of premature death and disability in the world. A diet containing high amounts of plant-based foods has been associated with a reduced risk of cardiovascular diseases and the beneficial effect has been attributed to the antioxidants found in the foods. However, findings from randomized controlled trials on the role of antioxidant supplementation have been disappointing, reporting null results or even harmful effects. It has been suggested that antioxidants interact with each other to promote cardiovascular health. Therefore, the Non Enzymatic Antioxidant Capacity (NEAC) assay has been proposed, which measures the antioxidant potential of different dietary sources considering interactions between them. This thesis aimed to further clarify the effect of dietary antioxidants on the risk of cardiovascular diseases, with particular interest in measuring NEAC from diet. The specific aims were to prospectively study whether dietary NEAC is associated with a lower risk of myocardial infarction, stroke and heart failure in subjects free from CVD or cancer. Four studies were conducted using data from two large Swedish cohorts. Multivariable Cox proportional hazard regression models were fitted to estimate hazard ratios (HRs) with 95% confidence intervals (CIs). In the Swedish Women’s Lifestyle and Health Cohort (n = 45,882), a higher baseline dietary NEAC was inversely associated with the risk of myocardial infarction (quintile 5 vs. quintile 1: HR: 0.60, 95% CI: 0.45-0.81, p for trend < 0.05) and heart failure (tertile 3 vs. tertile 1: HR: 0.63; 95% CI: 0.43-0.93; p for trend < 0.05) in young to middle aged women, whereas no association was found between dietary NEAC and stroke. In the Swedish National March Cohort (n = 34,543), dietary NEAC was inversely associated with the risk of overall (quartile 4 vs. quartile 1: HR: 0.77, 95% CI: 0.61-0.96; p for trend < 0.05) and non-fatal myocardial infarction (quartile 4 vs. qua, No, embargoed_20230123, Hantikainen, E

GROSSMAN, MURRAY, open, Recent studies of Alzheimer’s disease (AD) spread suggest that pathology may be transmitted from one brain area to another either via local diffusion or long-way transport via white matter pathways. However, this hypothesis requires more confirmations, and it’s even more unclear whether such models are applicable in non-amnestic AD (naAD), a group of AD phenotypes characterized by relative spared episodic memory at onset and domain-specific cognitive impairments. Few studies to date have in fact addressed the longitudinal spread of disease in naAD, and all of them considering no more than two variants. At first we compared 240 T1-weighted anatomical MRIs from 129 AD patients with elderly controls’ scans to assess atrophy in each of 120 regions-of-interest (ROIs); then we computed disease progression models separately for each phenotype: typical amnestic AD (aAD), logopenic variant primary progressive aphasia (lvPPA), posterior cortical atrophy (PCA), corticobasal syndrome (CBS), and frontal-variant AD (fvAD). All patients had autopsy or cerebrospinal fluid (CSF) evidence of AD pathology. Results from the amnestic cohort were used to determine appropriate parameters for the phase assignment algorithm, based on association with Braak pathology staging. For each AD variant, 4 phases of regional atrophy were defined based on decreasing frequency of atrophy across participants. We observed a unique distribution of accumulating atrophy for each phenotype. Phase 1 ROIs in our model represent the anatomical origin for each phenotype, including: medial temporal lobe (MTL) for the aAD group (spared in the other phenotypes), left lateral temporal lobe for lvPPA, occipito-parietal cortex for PCA, temporo-parietal cortex for CBS, and fronto-temporal cortex for fvAD. We subsequently assigned a phase to each patient MRI scan based on the similarity of regional atrophy patterns with atrophy predicted for the corresponding phenotype at each phase. ROI phases were strongly correlated, Recenti studi sulla progressione della malattia d’Alzheimer(AD)suggeriscono che la patologia possa essere trasmessa da un’area all’altra del cervello tramite diffusione locale o lungo le fibre assonali.Tuttavia,quest’ipotesi necessita di maggiori conferme ed è ancora meno chiaro se questi modelli possano essere applicabili alle varianti non amnesiche di AD(naAD),un gruppo di fenotipi AD caratterizzati da relativo risparmio all’esordio della memoria episodica e deficit cognitivi dominio-specifici.Pochi studi ad oggi hanno infatti analizzato la progressione longitudinale della malattia in naAD, tutti al massimo con due sole di queste varianti. Inizialmente abbiamo confrontato 240 RMN pesate in T1 da 129 pazienti AD con RMN di controlli sani per stabilire l’atrofia in 120 regioni di interesse(ROI); poi abbiamo calcolato modelli di progressione di malattia separatamente per ogni fenotipo: AD amnesici(aAD),variante logopenica di afasia primaria progressiva(lvPPA),atrofia corticale posteriore(PCA)e variante frontale di AD(fvAD).Tutti i pazienti avevano evidenza di patologia AD tramite dati autoptici o da liquor cefalorachidiano(CSF).I risultati dalla coorte di aAD sono stati utilizzati per determinare i parametri per l’algoritmo di assegnazione delle fasi,basato sull’associazione con lo staging di patologia di Braak. Per ogni variante AD,4 fasi di atrofia regionale sono state definite sulla base della frequenza decrescente di atrofia tra i soggetti.Abbiamo osservato pattern unici di atrofia cumulativa per ogni fenotipo.Le ROI di fase 1 nel nostro modello rappresentano l’origine anatomica di ogni fenotipo,inclusi: il lobo temporale mesiale(MTL)per il gruppo aAD(risparmiato negli altri gruppi),il lobo temporale sinistro nella lvPPA,la corteccia parieto-occipitale nella PCA,quella temporo-parietale per la CBS e le aree fronto-temporali per la fvAD.Successivamente abbiamo assegnato una fase ad ogni RMN dei pazienti in base alla somiglianza dei pattern di atrofia regionale con, No, open, DA RE, F

open, The number of acute myeloid leukemia (AML) patients cured through allogeneic hematopoietic cell transplantation (allo-HCT) is constantly increasing. The therapeutic effectiveness of this procedure mainly relies on the transfer from the donor to the patient of immune cells, capable of recognizing and eliminating residual tumor cells. Still, up to 50% of transplanted AML patients will eventually relapse, and the prognosis of these patients remains extremely poor. Thus, aim of my thesis work was to improve current understanding on the immunobiology of post-transplantation relapse, by investigating i) how therapies and leukemia itself affect immune reconstitution, ii) how to refine detection of leukemia reappearance at the stage minimal residual disease (MRD), and iii) how to uncover the molecular mechanisms at the basis of leukemia immune evasion. In particular, I will first present the results of a prospective study aiming at evaluating the clinical utility of monitoring patient-specific chimerism on peripheral blood, instead of the currently used bone marrow specimens, employing quantitative PCR (qPCR) for the early detection of leukemia relapses after transplantation. Will next present the results of two studies on the dynamics of recovery of NK and T cells after allo-HCT. Both studies aim at understanding the determinants of donor immune system failure in controlling AML disease recurrence with the potential implications of using the identified features as biomarkers to predict post-transplantation relapse. In the last sections I will present both published and unpublished data on the biological mechanisms underlying post-transplantation disease relapse, reporting how this knowledge can be easily translated in novel therapeutic rationales to combat disease recurrence. Included in these sections are two recent reviews I authored, focused, respectively, on the immunobiology of post-transplantation relapse, and on current state-of-the art epigenetic therapies for AML, Il numero di pazienti affetti da leucemia mieloide acuta (LMA) trattati con trapianto di cellule ematopoietiche allogeniche (TCE-allo) è in costante aumento. L'efficacia terapeutica di questa procedura si basa principalmente sul trasferimento dal donatore al paziente di cellule immunitarie, in grado di riconoscere ed eliminare le cellule tumorali residue. Tuttavia, fino al 50% dei pazienti trapiantati con LMA va incontro a recidiva e la prognosi di questi pazienti rimane estremamente negativa. Pertanto, lo scopo del mio lavoro di tesi era quello di migliorare la comprensione attuale dell'immunobiologia della recidiva post-trapianto, studiando i) come le terapie e la leucemia stessa influenzano la ricostituzione immunitaria, ii) come perfezionare il rilevamento della ricomparsa della leucemia nella fase di malattia minima residua (MMR) e iii) come scoprire i meccanismi molecolari alla base dell’evasione della leucemia dal sistema immune. In particolare, presenterò per la prima volta i risultati di uno studio prospettico volto a valutare l'utilità clinica di monitorare il chimerismo specifico del paziente sul sangue periferico, anziché sul midollo osseo attualmente utilizzato, impiegando la PCR quantitativa (PCRq) per la diagnosi precoce delle recidive di leucemia dopo trapianto. In seguito, saranno presentati i risultati di due studi sulla dinamica della ricostituzione delle cellule NK e T dopo il TCE-allo. Entrambi gli studi mirano a comprendere i determinanti dell'insufficienza del sistema immunitario del donatore nel controllo della recidiva della malattia LMA con la possibilità di utilizzare le caratteristiche identificate come biomarcatori per prevedere la recidiva post-trapianto. Nelle ultime sezioni presenterò dati sia pubblicati che non pubblicati sui meccanismi biologici della recidiva della malattia post-trapianto, riferendo in che modo questa conoscenza possa essere facilmente tradotta in nuove opzioni terapeutiche per combattere la recidiva della malattia, No, embargoed_20220120, Gambacorta, V

open, Background: Subjects with mental disorders have a higher risk of suicide behaviors than the general population. So, to date, researchers have investigated some biomarkers possibly related to suicidality. Despite many studies have reported a possible relationship between low lipid serum levels and suicide attempt, conflicting results have emerged. Aim We investigated whether serum total cholesterol, LDL cholesterol and triglycerides are associated with recent suicide attempts in subjects with different mental disorders. Methods We conducted a cross-sectional study, including 593 consecutively admitted inpatients with schizophrenia spectrum, bipolar, major depressive, and personality disorders. Serum lipid levels were compared between subjects admitted for a recent suicide attempt and those without such recent history. Moreover, according to hypothesis that links impulsivity and violence with low serum lipid levels, the association between lipid levels and violent suicide attempt was assessed. Results We did not find any association of total and LDL cholesterol and triglycerides with suicide attempts, also considering diagnosis and suicide methods. In addition, a post-hoc analysis showed a trend toward significance (p=0.06) in the association between high cholesterol level (≥160mg/dL) and recent suicide attempt. Conclusions Our results do not support the hypothesis of association between lipid profiles and suicide attempts in subjects with different mental disorders. Further research is needed to clarify the role of biomarkers in suicidal behaviors., Introduzione: I soggetti con disturbi mentali hanno un rischio più elevato di comportamenti suicidari rispetto alla popolazione generale. Pertanto, ad oggi, i ricercatori hanno studiato alcuni marcatori biologici potenzialmente correlati al suicidio. Nonostante molti studi abbiano riportato una possibile correlazione tra bassi livelli ematici di lipidi e tentativo di suicidio, sono emersi risultati contrastanti. Scopo del lavoro: Abbiamo studiato se il colesterolo totale , il colesterolo LDL e i trigliceridi ematici siano associati a recenti tentativi di suicidio in soggetti con diversi disturbi mentali. Metodi: Abbiamo condotto uno studio trasversale su 593 pazienti ricoverati di volta in volta, affetti da disturbo dello spettro di schizofrenico, disturbo bipolare, depressivo maggiore e di personalità. I livelli ematici dei lipidi sono stati confrontati tra soggetti ricoverati per un recente tentativo di suicidio e quelli senza tale storia recente. Inoltre, secondo l'ipotesi che collega impulsività e violenza con bassi livelli ematici di lipidi, è stata valutata l'associazione tra i livelli lipidici e il tentativo di suicidio con metodo violento. Risultati: Non abbiamo trovato alcuna associazione di colesterolo totale e LDL e trigliceridi con i tentativi di suicidio, analizzando anche per diagnosi e metodo di suicidio. Inoltre, un'analisi statistica post-hoc ha mostrato una tendenza verso la significatività (p = 0,06) nell'associazione tra un alto livello di colesterolo (≥160 mg / dL) e il recente tentativo di suicidio. Conclusioni: I nostri risultati non supportano l'ipotesi di associazione tra profili lipidici e tentativi di suicidio in soggetti con diversi disturbi mentali. Sono necessarie ulteriori ricerche per chiarire il ruolo dei marcatori biologici nei comportamenti suicidari., No, open, Capuzzi, E

open, Mucopolysaccharidosis type I (MPS-I) is a lysosomal storage disorder due to deficiency in the alpha-L-iduronidase enzyme, resulting in the progressive accumulation of glycosaminoglycans (GAGs) in multiple organs and the consequent multiorgan dysfunction. Hematopoietic stem cell transplantation (HSCT) and enzyme replacement therapy (ERT) are the currently available therapies for MPS-I patients. Despite their effectiveness in correcting most clinical manifestations, muscoloskeletal abnormalities and neurocognitive defects still impact quality of life of treated patients. It is widely accepted that an early intervention may be crucial to obtain a better outcome. On the basis of these observations, we tested the therapeutic efficacy of HSCT and ERT, alone or in combination, administered at birth, in a MPS-I mouse model. We demonstrated that all three treatments were able to prevent biochemical and pathological manifestations of the disease in visceral organs, and, in particular, the combination therapy had a better outcome in difficult-to-treat organs, such as kidney and heart. Of note, transplant procedure can halt the production of antibodies specific for the recombinant enzyme that could reduce ERT efficacy. Regarding the severe skeletal disease, we observed a differential effect in reduction of bone disease, with a significant better correction in transplanted mice, in the presence of ERT or not. Otherwise in the brain, all the treatments provided a moderate decrease of inflammation without an evident metabolic correction. Our findings demonstrate that most manifestations of MPS-I can be prevented by a neonatal treatment based on a combination of HSCT and ERT, promoting the idea of an early intervention supported by the development of newborn screening programs., La mucopolisaccaridosi di tipo I (MPS-I) è una malattia da accumulo lisosomiale, dovuta alla carenza dell'enzima alfa-L-iduronidasi, determinando il progressivo accumulo di glicosaminoglicani (GAGs) negli organi. Il trapianto di cellule staminali ematopoietiche (HSCT) e la terapia di sostituzione enzimatica (ERT) sono le terapie attualmente disponibili per i pazienti affetti da MPS-I. Nonostante la loro efficacia nel correggere la maggior parte delle manifestazioni cliniche, le alterazioni muscolo-scheletriche e i difetti neurocognitivi influenzano ancora la qualità della vita dei pazienti anche dopo la terapia. Oggigiorno è ampiamente riconosciuto che un intervento precoce è di cruciale importanza per ottenere un migliore outcome clinico. Sulla base di queste osservazioni abbiamo testato l'efficacia terapeutica di HSCT e ERT, da soli o in combinazione, somministrati alla nascita, in un modello murino di MPS-I. Abbiamo dimostrato che tutti e tre i trattamenti sono in grado migliorare i parametri biochimici, ripristinando l’attività enzimatica e riducendo l’accumulo dei GAGs negli organi e nel plasma; in particolare, la terapia combinata ha dimostrato una maggiore efficacia negli organi più difficili da correggere, come i reni e il cuore. Abbiamo osservato solamente una moderata riduzione dell’infiammazione, senza una evidente correzione metabolica nel cervello. Per quanto riguarda invece il fenotipo scheletrico abbiamo riscontrato un effetto differenziale nella riduzione della patologia ossea, con una migliore correzione nei topi trapiantati. I nostri risultati dimostrano che la maggior parte delle manifestazioni patologiche possono essere prevenute, agendo in epoca neonatale, con un trattamento basato sulla combinazione di HSCT e ERT, promuovendo l'idea di un intervento precoce supportato dallo sviluppo di programmi di screening neonatali., No, embargoed_20220409, Santi, L

MANTEGAZZA, RENATO, PASINELLI, PIERA, open, Amyotrophic lateral sclerosis (ALS) is a progressive neurodegenerative disease in which blood brain barrier (BBB) dysfunction contributes to the pathogenesis and significantly limits the development of successful therapies. Astrocytes from familial and sporadic ALS patients release soluble factors implicated in BBB injury and upregulation of P-glycoprotein (P-gp), the main multidrug efflux transporter in brain endothelial cells, responsible for progressive pharmacoresistance in ALS. Recently, FM19G11, a new chemical compound, was shown to counteract astrogliosis in a spinal cord injury model, decreasing cell stress response in the microenvironment. Specific objectives of this thesis were: i) to evaluate the potential effect of FM19G11 treatment on astrocyte-driven BBB dysruption and pharmacoresistance; ii) to identify ALS astrocyte molecular features targeted by FM19G11 compound. To this purpose, we set up a human induced pluripotent stem cells (hiPSCs)-derived BBB in vitro system composed of control iPS-endothelial cells (ECs), co-cultured with hiPSCs-derived astrocytes from control, familial SOD1-A4V and Sporadic ALS patients. Control and ALS-astrocytes were conditioned with FM19G11 500nM for 48h. In parallel, ECs were seeded on transwell porous membrane inserts, allowing to form the endothelial monolayer. After 48h, astrocyte culture medium was replaced with fresh medium, and ECs-inserts (representing the “blood side” of the BBB) were placed atop of the pre-treated astrocyte layer (representing the “brain side”). Co-cultures in the transwell culture system, which guaranteed supernatant interaction, avoiding cell contact, were maintained for 5 days. Formation and integrity of human iPSC endothelial monolayer were examined by: immunostaining for Zonula Occludens-1 (ZO-1), a major protein constituent of brain endothelial tight junctions (TJs); trans-endothelial electric resistance (TEER) assessment; sodium fluorescein (NaF) permeability assay, a water-soluble molecu, La Sclerosi Laterale Amiotrofica (SLA) è una patologia neurodegenerativa progressiva in cui le disfunzioni della barriera emato-encefalica (BEE) contribuiscono alla patogenesi e limitano significativamente lo sviluppo di nuove terapie. Gli astrociti di pazienti affetti da forme familiari e sporadiche di SLA rilasciano fattori solubili implicati nel danno della BEE e nell’aumento della P-glicoproteina (P-gp), la principale pompa dell’efflusso di farmaci espressa dalle cellule endoteliali nel cervello, responsabile dei fenomeni di progressiva farmacoresistenza nella SLA. Recentemente è stato dimostrato che FM19G11, un nuovo composto chimico, limita l’attivazione astrocitaria in un modello di lesione del midollo spinale, riducendo la risposta cellulare allo stress. Lo scopo di questa tesi era esaminare gli effetti del trattamento con FM19G11 sugli astrociti reattivi di pazienti SLA a livello della BEE. Abbiamo quindi realizzato un modello in vitro di BEE derivato da cellule staminali umane pluripotenti indotte (hiPSC) e composto da cellule endoteliali controllo (EC) in co-coltura con astrociti ottenuti da iPSC di un soggetto controllo, un paziente SLA familiare con mutazione SOD1-A4V e un soggetto con SLA sporadica. Gli astrociti venivano trattati con FM19G11 per 48h. Parallelamente, le cellule endoteliali erano coltivate su una membrana porosa all’interno di inserti affinchè formassero il monostrato della barriera. Dopo 48h il terreno di coltura degli astrociti veniva sostituito con nuovo terreno e gli inserti con le cellule endoteliali (rappresentanti il “lato del circolo ematico” della BEE) venivano trasferite al di sopra delle colture di astrociti ( il “lato encefalico” della BBB). Le co-colture, che garantivano la contiguità tra i surnatanti evitando il contatto diretto tra le diverse popolazioni cellulari, venivano protratte per 5 giorni. La formazione e l’integrità del monostrato di cellule endoteliali veniva valutato tramite: immunocitochimica per Zonula Occlud, No, embargoed_20220203, Bonanno, S

PIAZZA, ROCCO GIOVANNI, open, Atypical chronic myeloid leukemia (aCML) is a clonal disorder belonging to the MDS/MPN syndromes. About 13% of aCML cases carry somatic mutations in ETNK1 gene, encoding for H243Y, N244S and G245V substitutions. We previously showed that, in both ETNK1-positive aCML primary samples and TF1 cells transduced with mutated ETNK1, the mutations lead to an impairment of ETNK1 enzymatic activity, responsible for a decrease in the intracellular level of phosphoethanolamine (P-Et). To dissect the functional role of ETNK1 mutations I created a new isogenic CRISPR/Cas9 cellular model in which ETNK1 N244S mutation was present as heterozygous variant, and I investigated the functional effect of P-Et modulation by a combined approach involving metabolomics, lipidomics, whole-transcriptome sequencing, ChIP and mitochondria respiration analyses, showing that it causes (i) increased mitochondria potential, (ii) change in mitochondria morphology, (iii) increased ROS production, (iv) increased gDNA mutation rate. I also showed that the increased mitochondrial activity in presence of ETNK1 mutations is caused by a direct competition between P-Et and succinate for complex II succinate dehydrogenase enzyme. Finally, experiments focused on the reconstruction of the hierarchy of somatic mutations in aCML patients showed that ETNK1 somatic mutations are early events in the subclonal history of aCML, which fits with a role of ETNK1 as an inducer of a mutant phenotype, which in turn would accelerate the accumulation of further oncogenic mutations., La leucemia mieloide cronica atipica (aCML) è un disordine clonale appartenente al gruppo delle sindromi mielodisplastiche/mieloproliferative (MDS/MPN). Circa il 13% dei casi di aCML è caratterizzato dalla presenza di mutazioni somatiche a carico del gene ETNK1, codificanti per le sostituzioni amminoacidiche H243Y, N244S e G245V. Precedentemente, abbiamo dimostrato che sia in campioni primari di aCML ETNK1-positiva sia nella linea cellulare TF1 trasdotta con ETNK1 mutato, le mutazioni causano una diminuzione dell’attività enzimatica di ETNK1, causando una riduzione nei livelli intracellulari di fosfoetanolamina (P-Et). Per caratterizzare il ruolo funzionale delle mutazioni di ETNK1, ho creato un nuovo modello cellulare isogenico CRISPR/Cas9 nel quale la mutazione N244S è presente come variante in eterozigosi, e ho studiato l’effetto funzionale della modulazione di P-Et applicando diverse strategie, tra cui approcci di metabolimica, lipidomica, analisi di espressione genica, ed esperimenti di respirazione mitocondriale, dimostrando che la mutazione di ETNK1 (i) causa un aumento del potenziale di membrana mitocondriale, (ii) un cambiamento della morfologia mitocondriale, (iii) un aumento della produzione di ROS, (iv) e aumenta il tasso di mutazioni al DNA genomico. Inoltre, ho dimostrato che l’aumentata attività mitocondriale causata dalla mutazione di ETNK1 è dovuta a una diretta competizione tra P-Et e succinato per l’enzima succinato deidrogenasi (complesso II). Infine, esperimenti di ricostruzione della gerarchia clonale delle mutazioni somatiche nei pazienti affetti da aCML indicano che le mutazioni di ETNK1 sono eventi precoci nel processo evolutivo della patologia, suggerendo per ETNK1 un ruolo di induttore di un fenotipo mutante, il quale a sua volta contribuisce all’accumulo di ulteriori mutazioni oncogeniche., No, embargoed_20220128, Fontana, D

BEAULIEU, JEAN-FRANCOIS, open, The recent application of nanotechnology in several fields has brought big improvements, but also a big question about their safety for humans. Particularly worrisome is the use of a great amount of metallic nanoparticles (mNPs) in food industry to improve food taste, consistency and preservation. Previous studies have demonstrated that they can impair intestinal homeostasis inducing cytotoxic damage, altering the permeability and activating autophagic processes. Moreover, they can interact with the immune system, causing different immunomodulatory effects. Since all these processes are involved in the development of celiac disease (CeD), a multifactorial enteropathy caused by dietary gliadin ingestion, we speculate that mNP may be one of the environmental factors involved in the increased incidence of this disease. Therefore we evaluated the potential interaction and synergic effects of the most used mNP (TiO2-NP used as food coloring agent, ZnO- and Ag-NP used for their antimicrobial effects and AuNP used in the agro-food sector) with the peptic-triptic digested gliadin (PTG) using several intestinal models. Cytotoxic effects and permeability alterations were studied on CaCo2 intestinal cell line, autophagic induction was evaluated on HIEC cells (primary human crypt-like epithelial cells). To evaluate the immune response, we employed duodenal biopsy specimens from both healthy subjects and celiac patients (on gluten-free diet). To characterize the morphological tissue changes we performed organs culture studies on jejunum from human fetus at mid-gestation (17-19 weeks). Results showed worse effects when mNP were used in combination with the PTG, in all the used models. Particularly important are the data showing a significant increment in cytokines production after treatment with the combination of Au-, Ag- and TiO2-NP with PTG on biopsies from celiac patients, but not from healthy subjects. This could mean that, although the use of mNP in the food industry induce, Sebbene l'uso di nanomateriali sta crescendo, non è ancora stato capito se rappresenti un rischio per la nostra salute. Particolarmente, l'uso di nanoparticelle nell'industria alimentare è preoccupante. Infatti, differenti gruppi di ricerca hanno dimostrato che, particolarmente le nanoparticelle metalliche, possono alterare l'omeostasi intestinale. Conseguentemente potrebbero rappresentare un fattore di rischio nell'insorgenza di patologie infiammatorie intestinali, come la Celiachia. La Celiacha è una patologia autoimmune che si sviluppa in soggetti geneticamente predisposti, dopo l'ingestione di glutine. Considerando queste premesse, lo scopo del nostro lavoro è capire se il crescente uso di nanoparticelle alimentari possa avere un ruolo nell’ eziopatogenesi della Celiachia. Gli effetti di nanoparticelle alimentari con o senza glutine sono quindi stati studiati in differenti modelli che mimano l’intestino. Risultati hanno evidenziato che la stimolazioni con glutine e nanoparticelle alimentari inducono peggiori effetti che le singole componenti. Tutte le alterazioni ottenute potrebbero comportare l’instaurarsi della Celiachia in un numero maggiore di soggetti predisposti, suggerendo che l’uso di nanoparticelle nell’industria alimentare dovrebbe essere maggiormente controllato., No, embargoed_20220128, Mancuso, C

open, The haematopoietic stem cell (HSC) niche is formed by several cell types which contribute to the regulation of the haematopoiesis within the bone marrow (BM). In pathological conditions, alterations of the BM microenvironment have been reported, but it is still debated whether they are cause or consequence of the disease. Support to leukaemic cells, especially to leukaemic stem cells (LSC), at the expense of normal HSC and protection against chemotherapeutic agents characterise the malignant BM niche. Thus, in order to eradicate LSC, promising therapeutic strategies may consider the chemoprotection exerted by the BM microenvironment in addition to LSC intrinsic features of refractoriness to conventional therapies. In the first part of this PhD project, we investigated the role of mesenchymal stromal cells (MSC) in the pathogenesis of aplastic anaemia (AA). Patient-derived MSC (AA-MSC) were characterised in vitro and, especially, in vivo taking advantage of our recently described in vivo BM niche model, based on the subcutaneous implantation of cartilaginous pellets generated from MSC (Serafini et al., Stem Cell Research, 2014). AA-MSC did not exhibit morphological, phenotypical, proliferative and differentiation defects in vitro. Only a reduced clonogenic potential was observed. Most importantly, they were able to recreate a functional and complete BM niche in vivo, proving their unaltered ability to support haematopoiesis and excluding their involvement in AA pathogenesis. In the second part of this PhD project, we analysed the effects of L-asparaginase (ASNase) on acute myeloid leukaemia (AML) cells, especially on LSC, and the contribution of the microenvironment to chemoresistance. ASNase was equally effective against unfractionated AML cells and against CD34+CD38- and CD34+CD38+ LSC, while slightly affecting healthy haematopoietic cells. The action of the drug against AML primitive cells was confirmed by clonogenic assays and by experiments performed in LSC supp, La nicchia staminale ematopoietica è formata da molteplici tipi cellulari che contribuiscono alla regolazione dell’ematopoiesi all’interno del midollo osseo. In alcuni disordini ematopoietici il microambiente midollare risulta alterato, sebbene il suo contributo alla patogenesi non sia ancora chiaro, fornisce supporto alle cellule staminali leucemiche (LSC), a spese delle normali cellule staminali ematopoietiche, e protezione contro i chemioterapici. Dunque, per eradicare le LSC, le strategie terapeutiche devono considerare l’effetto protettivo contro i chemioterapici esercitato dal microambiente midollare oltre alla refrattarietà intrinseca delle LSC alle convenzionali terapie. Nella prima parte di questo progetto di dottorato, abbiamo valutato il ruolo delle cellule stromali mesenchimali (MSC) nella patogenesi dell’anemia aplastica (AA). Le MSC derivate dai pazienti (AA-MSC) sono state caratterizzate in vitro e, soprattutto in vivo, utilizzando il modello di nicchia midollare in vivo recentemente sviluppato dal nostro gruppo di ricerca, basato sull’impianto sottocutaneo di pellet cartilaginei derivati dalle MSC (Serafini et al., Stem Cell Research, 2014). In vitro, le AA-MSC mostravano solo un ridotto potenziale clonogenico senza difetti morfologici, fenotipici, proliferativi e differenziativi. Inoltre, le AA-MSC erano in grado di ricreare una nicchia midollare funzionale in vivo dimostrando un’inalterata capacità di supportare l’ematopoiesi e l’assenza di un loro coinvolgimento nella patogenesi della AA. Nella seconda parte di questo dottorato, abbiamo analizzato gli effetti dell’asparaginasi (ASNase) sulle cellule derivate da pazienti affetti da leucemia mieloide acuta (AML), soprattutto sulle LSC, ed il contributo del microambiente alla resistenza ai chemioterapici. L’ASNase era egualmente efficace contro il bulk delle cellule AML e contro le LSC (CD34+CD38- e CD34+CD38+), mentre l’effetto nei confronti delle cellule ematopoietiche sane era trascurabile. L’azio, No, embargoed_20220211, Michelozzi, I

open, The evaluation of the balance between oxygen supply and demand in the myocardium is useful for predicting and diagnosing myocardial ischemia and type-2 myocardial infarction, conditions that represent a growing part of the health burden of cardiovascular disease, and whose incidence is rapidly increasing due to an ageing population. In its original assessment by invasive registrations, this balance is calculated as the ratio between the oxygen supply, defined as the area between the aortic and left ventricular pressures during diastole (diastolic pressure-time index), and the oxygen consumption, defined as the area under the pressure curve during systole (systolic pressure-time index). This ratio is called SEVR (Subendocardial Viability Ratio) and may also be calculated from the analysis of the non-invasively determined central pressure wave obtained by carotid arterial tonometry, by dividing areas between the diastolic and systolic pressure curves. The conventional non-invasive assessment of SEVR by arterial tonometry is affected by some methodological limitations, that are the exclusion from the calculation of isovolumetric systolic time in the systolic pressure-time index and the exclusion of left ventricular diastolic pressure from diastolic pressure-time index. Moreover, the calibration of central pressure wave derived from carotid tonometry can be affected by the way of calculating mean arterial pressure from brachial cuff blood pressure, which is necessary for scaling the central waveform. This thesis presents a series of studies conducted to overcome the limitations mentioned above, in order to elaborate a corrected form of the SEVR and to validate it against its invasive counterpart and as a clinical predictor. A methodology to reliably calculate the systolic-time intervals (isovolumetric ejection time and pre-ejection period) from ECG-gated arterial tonometry performed at the carotid and femoral levels, is presented and applied in subjects with or without, La valutazione del bilancio tra l'apporto e la domanda di ossigeno nel miocardio è utile per predire e diagnosticare l'ischemia miocardica e l'infarto miocardico di tipo 2, condizioni che rappresentano una parte crescente del carico sanitario delle malattie cardiovascolari e la cui incidenza è in rapido aumento a causa dell’invecchiamento. Nella sua valutazione originale, ottenuta mediante registrazioni invasive, questo equilibrio è calcolato come il rapporto tra l'apporto di ossigeno, definito come l'area tra la pressione aortica e quella ventricolare sinistra durante la diastole (indice diastolico di pressione-tempo) e il consumo di ossigeno, definito come l'area sotto la curva di pressione durante la sistole (indice sistolico di pressione-tempo). Questo rapporto è chiamato SEVR (Subendocardial Viability Ratio) e può anche essere calcolato dall'analisi dell'onda di pressione centrale ottenuta non-invasivamente dalla tonometria arteriosa carotidea, dividendo le aree tra le curve di pressione diastolica e sistolica. La valutazione non invasiva convenzionale del SEVR mediante tonometria arteriosa è influenzata da alcune limitazioni metodologiche, che sono l'esclusione dal calcolo del tempo di contrazione isovolumetrico nell'indice sistolico pressione-tempo e l'esclusione della pressione diastolica ventricolare sinistra dall'indice diastolico pressione-tempo. Inoltre, la calibrazione dell'onda di pressione centrale derivata dalla tonometria carotidea può essere influenzata dal modo di calcolare la pressione arteriosa media dalla pressione arteriosa brachiale, che è necessaria per scalare la forma d'onda centrale. Questa tesi presenta una serie di studi volti a superare queste limitazioni, al fine di elaborare una forma corretta del SEVR e di validarlo contro la sua controparte invasiva e come un predittore clinico. Viene presentata una metodologia per calcolare in modo affidabile gli intervalli di tempo sistolico (tempo di contrazione isovolumetrica e periodo pre-eiet, No, embargoed_20220207, Grillo, A

MOLOGNI, LUCA, open, Targeted therapy changed the standard of care in ALK-dependent tumors. However, resistance remains a major challenge. Lorlatinib is a third-generation ALK inhibitor that inhibits most ALK mutants resistant to current ALK inhibitors. In this study, we utilize lorlatinib-resistant anaplastic large cell lymphoma (ALCL), non–small cell lung cancer (NSCLC), and neuroblastoma cell lines in vitro and in vivo to investigate the acquisition of resistance and its underlying mechanisms. ALCL cells acquired compound ALK mutations G1202R/G1269A and C1156F/L1198F in vitro at high drug concentrations. ALCL xenografts selected in vivo showed recurrent N1178H (5/10 mice) and G1269A (4/10 mice) mutations. Interestingly, intracellular localization of NPM/ALKN1178H skewed toward the cytoplasm in human cells, possibly mimicking overexpression. RNA sequencing of resistant cells showed significant alteration of PI3K/AKT and RAS/MAPK pathways. Functional validation by small-molecule inhibitors confirmed the involvement of these pathways in resistance to lorlatinib. NSCLC cells exposed in vitro to lorlatinib acquired hyperactivation of EGFR, which was blocked by erlotinib to restore sensitivity to lorlatinib. In neuroblastoma, whole-exome sequencing and proteomic profiling of lorlatinib-resistant cells revealed a truncating NF1 mutation and hyperactivation of EGFR and ErbB4. These data provide an extensive characterization of resistance mechanisms that may arise in different ALK-positive cancers following lorlatinib treatment., La terapia personalizzata ha cambiato lo scenario clinico dei tumori ALK-positivi. Tuttavia, la resistenza farmacologica rimane un ostacolo importante cui far fronte. Lorlatinib è un farmaco di terza generazione che inibisce la maggior parte dei mutanti di ALK resistenti agli attuali inibitori. In questo studio sono state utilizzate in vitro e in vivo linee cellulari resistenti a lorlatinib derivanti da linfoma anaplastico a grandi cellule (ALCL), carcinoma polmonare non a piccole cellule (NSCLC) e neuroblastoma, allo scopo di studiare i meccanismi che guidano l'acquisizione della resistenza. In vitro, cellule di ALCL trattate con alte concentrazioni di lorlatinib hanno acquisito le seguenti mutazioni composte di ALK: G1202R/G1269A e C1156F/L1198F. In vivo, Le cellule di ALCL xenotrapiantate in topi immunocompromessi hanno acquisito le seguenti mutazioni ricorrenti: N1178H (5 topi su 10) e G1269A (4 topi su 10). È interessante notare che nelle cellule umane, dove l’espressione di NPM/ALK è tipicamente nucleare, la presenza della mutazione induce la localizzazione citoplasmatica di NPM/ALKN1178H, probabilmente mimandone l’overespressione. Nelle cellule resistenti si è osservata una significativa alterazione dei pathway di PI3K/AKT e RAS/MAPK, come dimostrato dall’analisi dell’espressione genica tramite RNA-seq. Il coinvolgimento di questi pathway nella resistenza a lorlatinib è stato confermato dalla validazione funzionale con inibitori. Le cellule di NSCLC trattate in vitro con lorlatinib hanno acquisito iperattivazione di EGFR. Il trattamento con un inibitore di EGFR, erlotinib, , è stato in grado di ripristinare la sensibilità a lorlatinib. In cellule di neuroblastoma resistenti a lorlatinib, il sequenziamento dell'intero esoma e l’analisi proteomica hanno rivelato una forma tronca di NF1 e l’iperattivazione di EGFR e ErbB4. Questi dati forniscono un'ampia caratterizzazione dei meccanismi di resistenza che possono insorgere in diversi tumori ALK-positivi dopo il t, No, open, Geeta, G

ZANONI, IVAN, open, NFAT is a transcription factor that has been described to be important for the activation of the innate immune system. ln our work, we demonstrated that the activation of the transcription factor NFATc2 is necessary for the elimination of Candida albicans during skin infections. We showed that the response to skin infections can be divided in two phases: the containment phase and the elimination phase. During the containment phase, there is an early activation of the TGF-b pathway that is necessary to avoid the spreading of the pathogen by inducing fibroblasts proliferation and collagen deposition. During this phase, antigens are drained to the draining lymph nodes where they can be recognized by dendritic cells (DCs). Through the activation of the transcription factor NFATc2, DCs produce interleukin-2 that we demonstrated to be necessary for the activation of NK cells. During the elimination phase NK cells are then recruited at the site of infection where they release lFN-g. lFN-g production is important for blocking collagen deposition by fibroblasts and their excessive proliferation and differentiation into myofibroblasts. ln addition to its action on the TGF-b pathway, lFN-g produced by NK cells is also necessary for the activation of the fibrinolytic system by regulating the expression of two key enzymes, PAI-1 and tPA. Plasmin formation allows then capsule digestion and ulceration leading to the elimination of the pathogen. This cross-talk between the innate immune system and the fibrinolytjc system is required not only during fungal infections but also during skin infection with S. aureus. We so far demonstrated how this cooperation is important in fighting and eliminating both fungal and bacterial skin infections. IFN-g produced by NK cells is the key molecule for both blocking fibrosis and activating the fibrinolytic system. When this cross-talk is altered, the infection is no longer resolved. These results shed new light on the complexity of an immune resp, NFAT è un fattore trascrizionale importante per l’attivazione del sistema dell’immunità innata. Nel nostro lavoro abbiamo dimostrato come l’attivazione del fattore trascrizionale NFATc2 sia necessaria per l’eliminazione del patogeno Candida albicans durante infezioni cutanee. Abbiamo dimostrato che la risposta a infezioni cutanee può essere divisa in due fasi: una fase di contenimento e una fase di eliminazione. Durante la fase di contenimento vi è un’attivazione precoce del pathway del TGF-b, necessaria per impedire la diffusione del patogeno tramite l’induzione della proliferazione dei fibroblasti e la deposizione di collagene. Durante questa fase, gli antigeni vengono drenati ai linfonodi drenanti dove possono essere riconosciuti dalle cellule dendritiche (DCs). Attraverso l’attivazione del fattore trascrizionale NFATc2, le DCs producono interleuchina-2, necessaria per l’attivazione delle cellule NK. Durante la fase di eliminazione, le cellule NK sono reclutate al sito di infezione dove rilasciano IFN-g. La produzione di IFN-g è importante in quanto blocca il deposito di collagene da parte dei fibroblasti, la loro proliferazione e il successivo differenziamento in miofibroblasti. Oltre alla sua azione sul pathway del TGF-b, l’IFN-g prodotto dalle cellule NK è necessario anche per l’attivazione del sistema fibrinolitico attraverso la regolazione di due enzimi chiave, PAI-1 e tPA. La formazione di plasmina favorisce quindi la digestione della capsula e la formazione di un’ulcera, portando quindi all’eliminazione del patogeno. Questo cross-talk tra l’immunità innata e il sistema fibrinolitico è necessario non solo durante infezioni fungine ma anche durante infezioni cutanee con S. aureus. Abbiamo quindi dimostrato come questa cooperazione sia importante nell’eliminazione di infezioni cutanee sia di origine fungina che batterica. L’IFN-g prodotto dalle cellule NK è la molecola chiave per l’attivazione del sistema fibrinolitico e per impedire lo sviluppo di un process, No, open, Santus, W

ROSSI, EMANUELA, open, Childhood cancer is a worldwide public health concern being a leading cause of death in children. While, high-income countries have improved the probability of surviving after cancer diagnosed in pediatric age (it now reaches 80%), children and adolescents with cancer living in low and middle-income countries (LIC/LMIC) have a dismal outcome. One important initiative is the AHOPCA (Asociación de Hemato-Oncología Pediátrica de Centro América) network, which is a group of hospital units specialized in childhood cancer treatment from Central America and the Caribe. These countries faces common difficulties such as widespread poverty (25 to 60% of their populations live below the poverty line), malnutrition, illiteracy, poor infrastructure, difficult access to health services, inconsistent drug availability, lack of supportive care and low priority of cancer treatment if compared to the priority of other health issues (mostly infectious diseases). This network developed from twinning programs between Italy, Switzerland, United States institutions and the countries of Central America joined formally into the AHOPCA collaborative group. Survival analysis which is the methodology typically used to describe the outcome in cancer clinical trials and is also used as an indicator of their efficacy in disease management and care, studying the time elapsed between some initial event defined as a starting point (such as date of diagnosis or start of treatment) and the time of occurrence of some event (failure) of interest (such as disease relapse or death), deals with censoring. A typical complexity of observed survival data is the presence of right censoring on the survival time, which occurs generally when the survival time is shorter than the failure time. Censoring is due to a limitation on the observability of the failure/survival time itself (for this reason it is called administrative censoring) and has to be accounted for in the analysis. Statistical methods in survival a, Childhood cancer is a worldwide public health concern being a leading cause of death in children. While, high-income countries have improved the probability of surviving after cancer diagnosed in pediatric age (it now reaches 80%), children and adolescents with cancer living in low and middle-income countries (LIC/LMIC) have a dismal outcome. One important initiative is the AHOPCA (Asociación de Hemato-Oncología Pediátrica de Centro América) network, which is a group of hospital units specialized in childhood cancer treatment from Central America and the Caribe. These countries faces common difficulties such as widespread poverty (25 to 60% of their populations live below the poverty line), malnutrition, illiteracy, poor infrastructure, difficult access to health services, inconsistent drug availability, lack of supportive care and low priority of cancer treatment if compared to the priority of other health issues (mostly infectious diseases). This network developed from twinning programs between Italy, Switzerland, United States institutions and the countries of Central America joined formally into the AHOPCA collaborative group. Survival analysis which is the methodology typically used to describe the outcome in cancer clinical trials and is also used as an indicator of their efficacy in disease management and care, studying the time elapsed between some initial event defined as a starting point (such as date of diagnosis or start of treatment) and the time of occurrence of some event (failure) of interest (such as disease relapse or death), deals with censoring. A typical complexity of observed survival data is the presence of right censoring on the survival time, which occurs generally when the survival time is shorter than the failure time. Censoring is due to a limitation on the observability of the failure/survival time itself (for this reason it is called administrative censoring) and has to be accounted for in the analysis. Statistical methods in survival a, No, open, BLANCO LOPEZ, J, BLANCO LOPEZ, J

open, The efficacy of first-line bevacizumab added to chemotherapy (CT) in patients with metastatic colorectal cancer (mCRC) was assessed by several randomized clinical trials (RTC). However, data on the added value of bevacizumab in real-world post-marketing studies are scant. Moreover, the characteristics of patients included in RTCs are different from those of patients that physicians generally face in daily clinical practice, limiting the external validity of the results. Healthcare utilization (HCU) databases, contrarily, allow the recruitment of unselected patients, including the elderly and those with co-morbidities, not always treated in highly specialised centres, reflecting the real clinical practice. The present study aimed to evaluate the effectiveness of first-line bevacizumab in the Italian clinical practice of patients with mCRC. The overall survival (OS) of patients treated with first-line bevacizumab+CT was compared to the OS of patients treated with CT alone. Baseline characteristics of patients included in the cohort and the predictors of OS were also assessed. Incident mCRC cases during the period 2010-2012 were selected from five Cancer Registries from Northern (Province of Varese, Mantova and Cremona) and Southern (Province of Palermo and Ragusa) Italy. Cases were linked to the Regional HCU databases of the five areas covered by the Cancer Registries, in order to obtain the entire pathway of health services provided by the National Health Service to each patient. The information collected from the HCU databases included the outpatient dispensations of high-cost drugs (among which bevacizumab), the diagnostic and intervention codes for admission to public or private hospitals and the outpatient services (including radiotherapies and diagnostic procedures). A cohort of 1,118 incident mCRC cases was identified. After excluding subjects who did not meet the inclusion criteria, a final study cohort of 480 subjects was selected, of which 101 received first, L’efficacia di bevacizumab come prima linea di trattamento nel tumore del colon-retto metastatico è stata valutata attraverso diversi studi clinici controllati e randomizzati. Gli studi che valutano il valore aggiunto di bevacizumab nella pratica clinica corrente sono, però, scarsi. Tuttavia, le caratteristiche dei pazienti inclusi negli studi clinici randomizzati sono diverse rispetto a quelle dei pazienti che vengono trattati correntemente nella pratica clinica, limitandone la generalizzabilità. I database amministrativi, al contrario, permettono il reclutamento di soggetti non selezionati rispetto ad alcune caratteristiche, come l’età, la presenza di comorbidità e il trattamento presso centri altamente specializzati, che solitamente vengono utilizzate come criteri di esclusione negli studi clinici randomizzati. Il presente studio ha l’obiettivo di valutare l’efficacia (effectiveness) della prima linea di trattamento con bevacizumab, in aggiunta a chemioterapia (CT), nella pratica clinica corrente di pazienti con tumore del colon-retto metastatico. L’obiettivo principale è il confronto della sopravvivenza generale tra i pazienti trattati in prima linea con bevacizumab e CT, rispetto a quelli trattati solo con CT. Gli obiettivi secondari sono la valutazione delle caratteristiche dei pazienti inclusi nella coorte e la valutazione dell’associazione tra tali caratteristiche e la sopravvivenza. I pazienti con diagnosi incidente di tumore del colon-retto metastatico nel periodo 2010-2012 sono stati selezionati dai Registri Tumori di cinque province italiane: Varese, Mantova, Cremona, Palermo e Ragusa. Per ognuno di questi pazienti sono state estratte le informazioni provenienti dai database amministrativi regionali, con l’obiettivo di ricostruirne i percorsi diagnostici e terapeutici. Tra le informazioni disponibili vi erano le prescrizioni di farmaci oncologici ad alto costo (tra cui bevacizumab), i codici relativi a diagnosi ed interventi dei ricoveri di ospedali pubb, No, open, Franchi, M, Franchi, M

open, According to the World Health Organization (WHO), every day, worldwide, about 1,000 women die due to causes related to pregnancy or childbirth and, every year, more than eight million children in low and middle income countries die before reaching five years of age. The WHO was clear: maternal and child health is a topic of enormous medical importance and requires investments, projects, energy and commitment; it is an essential part of the public health of human populations. Improving the approach and access to health care, making qualified assistance, drug treatment and training of the operators more available, but also elementary preventive interventions during pregnancy, childbirth and the early years of a child's life, can prevent avoidable deaths and reduce several neonatal outcomes. Given the complexity of all the issues and problems concerning births and maternal and child health, through this thesis I propose a path divided into several stages which covers various topics starting from the socio-economic profile of the mother, moving to the pharmacological profile of pregnancy, up to the prevention of stillbirths. Several statistical methods were implemented to answer the different questions depending on the aim of each study. Log-binomial regression was used for estimating the association between the mother’s exposure during pregnancy and the selected neonatal outcomes. The fully conditional specification (FCS) model was performed to generate appropriate values of missing data for those women with missing covariates. The rule-out approach described by Schneeweiss was implemented to make our estimates, which might be affected by unmeasured confounder, more robust. The mediation analysis described by VanderWeele and Vansteelandt was used to assess the role that some adverse neonatal events at presentation (mediator) play in the relationship between the mother’s exposure during pregnancy (exposure) and adverse neonatal events later in life (outcome). Lastly, th, Secondo l'Organizzazione Mondiale della Sanità (OMS), ogni giorno, in tutto il mondo, circa 1.000 donne muoiono per cause legate alla gravidanza o al parto e, ogni anno, più di otto milioni di bambini nei paesi a basso e medio reddito muoiono prima di raggiungere i cinque anni di vita. L'OMS è stata chiara: la salute materno-infantile è un tema di enorme importanza sanitaria e richiede investimenti, progetti, energie e impegno, rappresentando una componente fondamentale della salute pubblica delle popolazioni umane. Migliorando l'approccio e l'accesso alle cure sanitarie, rendendo più disponibili assistenza qualificata, trattamenti farmacologici e la formazione degli operatori, ma anche semplici interventi preventivi durante la gravidanza, nel corso della gravidanza, del parto e dei primi anni di vita del bambino è possibile, infatti, prevenire le morti evitabili. A fronte della complessità dell’insieme dei temi e delle problematiche relative al percorso nascita e alla salute materno-infantile, ho ritenuto di suddividere in più fasi il mio progetto sviluppando diversi profili, come quello socio-economico, farmacologico, e clinico. Sono state utilizzate diverse metodologie statistiche a seconda dell’obiettivo dello studio. Le associazioni tra le diverse esposizioni della madre, prima e/o durante la gravidanza, e gli esiti neonatali selezionati, sono state valutate attraverso modelli di regressione logistica. In alcuni studi c’è stata la necessità di imputare i dati mancanti. Vista la natura di questi ultimi, arbitrary missing data pattern, è stato utilizzato il modello “fully conditional specification (FCS)”, ipotizzando l'esistenza di una distribuzione congiunta per le variabili mancanti. Per rendere le stime più robuste, a seguito della presenza di confondenti non misurati, è stato utilizzato l'approccio rule-out descritto da Schneeweiss. Per valutare il ruolo che gli eventi avversi neonatali alla nascita svolgono nel rapporto tra l’esposizione della madre durante, No, open, Cantarutti, A, Cantarutti, A

open, Glioblastoma is the most common primary malignant brain tumour in the adult population. Despite multimodality treatment with surgery, radiotherapy and chemotherapy, outcomes are very poor, with less than 15% of patients alive after two years. Increasing evidence suggests that Glioma stem cells (GSCs) are likely to play an important role in the biology of this disease and are involved in treatment resistance and tumour recurrence following standard therapy. GSCs are characterized by enhanced self-renewal, highlighted by the expression of stem cell markers, such as CD133 and Nestin, elevated invasive behaviour, chemo and radiotherapy resistance, and the ability to generate multi-lineage progenities. A typical feature of GSCs is also the elevated chromosomal instability (CIN): they are characterized by various numerical and structural aberrations, deletions, amplification and loss of heterozygosity. A variety of alterations have been proposed as being responsible for CIN, including defects in genes involved in the regulation of the mitotic machinery, such as the Aurora Kinases, making them a promising therapeutic target for GSCs depletion. My thesis address two main aspects of this research area, aiming at the identification of new GSCs-targeted therapeutic strategies for GBM complete eradication. In the first part of my project I investigated the effect of Danusertib, a pan-Aurora kinases inhibitor on 5 GSC lines isolated from glioblastoma patients, previously characterized in our laboratory from a cytogenomic and epigenomic point of view. Results showed that response to Danusertib exposure was heterogeneous among GSC lines. Some of them were more sensitive to subtle changes in Aurora kinases activity, which result in huge morphological alterations, a rapid increase in polyploidy and subsequently in senescence, with a consistent reduction in clonogenic survival and proliferation. Interestingly I also observed that the more resistant cell lines showed an increase in pl, Il glioblastoma multiforme rappresenta la forma più frequente e maligna fra i tumori cerebrali primari. Nonostante un approccio terapeutico multimodale, che include resezione chirurgica, radio e chemioterapia, la prognosi è generalmente infausta. La maggior parte dei pazienti muore dopo soli 12-15 mesi dalla diagnosi e la percentuale di recidiva è pari all’80%. Crescenti evidenze suggeriscono che una delle principali cause della comparsa di recidive e del fallimento delle attuali strategie terapeutiche è la presenza, all’interno del tumore, di una sottopopolazione di cellule tumorali con caratteristiche staminali, chiamate glioma stem cells (GSCs). Le GSCs sono caratterizzate da un aumentato self-renewal, come dimostrato dall’espressione di tipici marcatori di staminalità, quali CD133 e Nestina, da un’elevata invasività, dalla capacità di differenziare in diversi lineages neurali e da una spiccata chemo e radio resistenza. Una tipica caratteristica delle GSCs è anche l’elevata instabilità cromosomica (CIN). Infatti, tali cellule, presentano numerose alterazioni numeriche e strutturali, delezioni, amplificazioni e perdite di eterozigosità. Diverse alterazioni sono state indicate come responsabili dell’instabilità cromosomica, tra cui difetti in geni codificanti per proteine coinvolte nel macchinario mitotico, come le Aurora chinasi, rendendole un possibile e promettente target terapeutico. La mia tesi si propone, perciò, di indagare due aspetti principali di quest’area di ricerca, con l’obiettivo di individuare nuove possibili strategie terapeutiche GSC-targeted, necessarie per una completa eradicazione del GBM. Nella prima parte del mio progetto ho indagato l’effetto di Danusertib, un inibitore delle Aurora chinasi, su 5 linee di cellule staminali tumorali isolate da glioblastoma, precedentemente caratterizzate nel nostro laboratorio da un punto di vista citogenomico ed epigenomico. I risultati ottenuti hanno mostrato una risposta eterogenea delle diverse linee cell, No, embargoed_20200403, Cilibrasi, C, Cilibrasi, C

open, The framework of the uncontrolled manifold (UCM) hypothesis has been used to study a type of feed-forward postural adjustments anticipatory synergy adjustments (ASAs) compared to anticipatory postural adjustments (APAs). ASAs reflect attenuation of a synergy index stabilizing a variable (e.g., center of pressure anterior-posterior coordinate, COPAP) in preparation to a quick change in that variable, while APAs are the means of generating net forces and moments of force that minimize the effects of a predictable perturbation on posture. ASAs and APAs were explored in preparation to a self-triggered postural perturbation in conditions when the direction of the perturbation was known and unknown. Eleven healthy subjects stood on a force platform and performed two tasks: (1) voluntary cyclic body sway in the anterior-posterior (AP) direction at 0.5 Hz; and (2) self-paced load release task in two conditions where the perturbation direction was either known or unknown (randomized by the experimenter). Surface electromyograms of 13 leg and trunk muscles as well as COPAP displacements were recorded and analyzed. The first task was used to identify four muscle modes (M-modes, muscle groups with parallel scaling of activation levels). Further, inter-trial variance in the M-mode space was quantified within the UCM and orthogonal (ORT) space. An index of synergy (∆V) was computed reflecting the relative amount of inter-trial M-mode variance within the UCM for COP AP. The index of multi-M-mode synergies showed a drop starting about 200 ms prior to the time of perturbation. These ASAs were similar across conditions. In contrast, the timing and structure of APAs differed depended on knowledge of the perturbation direction. Namely, APAs were delayed when the perturbation direction was unknown. In addition, analysis of co-activation and reciprocal activation within agonist–antagonist muscle pairs showed predominance of reciprocal patterns in conditions when the subjects knew the per, INTRODUZIONE All’interno dell’ipotesi del uncontrolled manifold (UCM) sono stati esplorati due tipologie di aggiustamenti posturali anticipatori: aggiustamenti sinergici anticipatori (ASAs) ed aggiustamenti posturali anticipatori (APAs). Gli ASAs riflettono una diminuzione progressiva dell’indice di sinergia multimuscle-mode che stabilizza una variabile (e.g. coordinate antero-posteriori del centro di pressione, COPAP) in preparazione ad un rapido cambiamento in quella performance. Gli APAs, invece, sono interpretati come il risultato di segnali neurali atti a generare momenti di forza per ridurre gli effetti di eventuali perturbazioni prevedibili sulla postura. Se l’istante della perturbazione è conosciuto, gli ASAs sono funzionali per generare correzioni posturali indipendentemente dalla direzione della perturbazione. Al contrario, gli APAs sono utili solo se la direzione della perturbazione è conosciuta in anticipo. Obiettivo dello studio è stato esaminare gli ASAs e APAs in preparazione ad una perturbazione posturale auto-generata in due differenti condizioni: direzione della perturbazione conosciuta e non-conosciuta. Si è ipotizzato che gli APAs, al contrario degli ASAs, risultassero maggiormente sensibili alla preconoscenza della direzione della perturbazione. METODI Undici partecipanti sani in ortostatismo su piattaforma di forza hanno effettuato due task: (1) oscillazioni volontarie in direzione antero-posteriore a 0.5 HZ; (2) rilascio auto-generato di un carico in due condizioni: direzione della perturbazione (anteriore/posteriore rispetto al soggetto) conosciuta o non-conosciuta (randomizzata dal ricercatore). Sono stati acquisiti e analizzati i segnali elettromiografici di superficie (EMGs) di 13 muscoli (arto inferiore e tronco) e lo spostamento del COPAP. Il primo task è stato utilizzato per identificare quattro M-modes muscolari (gruppi di muscoli caratterizzati da pattern di attivazione parallela). Successivamente, la varianza inter-trail nel M-mode s, No, embargoed_20200403, Piscitelli, D, Piscitelli, D

PELUCCHI, SARA, 30955, open, Hepcidin is the main regulator of systemic iron homeostasis, acting by inhibiting macrophages iron release and intestinal iron absorption. During hypoxia hepcidin expression is inhibited to allow iron requirement to bone marrow to sustain erythropoietic expansion, but mechanisms of hypoxia-induced hepcidin down-regulation are partially unknown. Our aim was to improve our knowledge on hypoxia modulation of hepatic hepcidin, investigating the role of erythroid and iron-related pathways using in vitro and in vivo studies. We firstly studied the effect of hypoxia on healthy volunteers living at high altitude for 24h and 72h, confirming that hypoxia is a strong inhibitor of hepcidin production and that this inhibition followed EPO induction. Indeed s-hepcidin was strictly down-regulated at 72h of hypoxia while EPO levels were already markedly increased at 24h slightly decreasing thereafter. We then analyzed the effect of sera of these subjects on hepcidin expression in HuH-7 cells using both luciferase assay and RT-PCR. HAMP wild-type promoter activity decreased after exposure to hypoxic sera, suggesting that circulating factors present in sera may modulate hepcidin expression. However, analysis of the transcripts gave less homogenous results. In fact only a subgroup of hypoxic sera significantly inhibited hepcidin. These sera also induced a significant ID1 down-regulation indicating that inhibitory factor(s) seems to act through the SMADs pathway. Our results also suggest that a cellular model cannot reproduce what really happens in vivo that might depend to complex events involving both circulating and tissue factors. Therefore, we took advantages from a mouse model. For hypoxia challenge, C57BL/6 mice were housed in a hypoxic chamber at 10% O2 for 6 and 15h. mRNA levels of erythroid genes were assessed in liver, spleen and bone marrow by RT-PCR. Hamp1 levels were slightly increased after 6h of hypoxia and strongly down-regulated after 15h. After 6h we already observed, No, open, Ravasi, G, Ravasi, G

open, The selection of the primary “endpoint” is a very important step in the design of clinical trials. Typically, the goal of a clinical trial is to assess the effect of treatment on this endpoint. It often happens, that the most sensitive and relevant clinical endpoint, which will be called the “true” endpoint, might be difficult to assess and to overcome this problem, a solution is to replace the true endpoint with another one, which is measured earlier, more conveniently or more frequently. Such “replacement” endpoint is termed “surrogate” and has the purpose of evaluating the effect of a specific treatment for a specific disease. Once a candidate surrogate is identified according to some specific properties, several formal methods are available for the validation, depending on the number of the trials performed. The first formal statistical approach dates back to 1989, when Prentice proposed a definition of surrogate endpoint and four criteria to validate it. The most important criterion among these is called “The Prentice’s Criterion”, which implies that “the full effect of treatment upon the true endpoint is captured by the surrogate”. More recently, a meta-analytic approach to the validation of a surrogate endpoint was proposed for a multi-trial context (Burzykowki, 2005). It consists in estimating associations at two different levels: the association between the surrogate and the clinical endpoint, called the “individual-level association”, and the association between the effect of treatment on the surrogate and on the clinical endpoint, called “trial-level association”. A good surrogate is one that has biological/clinical plausibility and is shown, statistically, to have strong individual-level and trial-level associations with the true endpoint. Many extensions of this meta-analytic approach exist to evaluate surrogacy when the candidate surrogate and the true clinical endpoint are not continuous or have different nature, e.g. both failure time endpoints or bi, No, embargoed_20180315, Lucenti, A, Lucenti, A

CAZZANIGA, GIOVANNI, 4415, open, La leucemia linfoblastica acuta (ALL) costituisce più di un terzo di tutti i tumori del bambino e circa il 95% sono casi di leucemia acuta. Recentemente,in circa il 10% di pazienti pediatrici ALL a precursori di cellule B (BCP), negativi per marcatori prognostici noti, sono state identificate nuove alterazioni del gene CRLF2 che ne causano l’overespressione.Questa alterazione porta all’ iperattivazione della via di segnale JAK2/STAT5 ed è associata ad una prognosi infausta per i pazienti con BCP-ALL.Nella leucemia linfoblastica acuta a cellule T (T-ALL), mutazioni del gene CRLF2 non sono descritte ma alterazioni del suo partner IL7RA sono state identificate nel 10% dei pazienti.Questo sottotipo presenta una prognosi peggiore rispetto alle BCP-ALL e beneficierebbe dell’identificazione di nuovi marcatori prognostici per una migliore stratificazione dei pazienti.Nella prima parte di questo lavoro, ci siamo focalizzati sull’identificare in modo più accurato i pazienti con alterazioni di CRLF2.Lo screening dell’espressione in superficie di CRLF2 in pazienti con BCP-ALL può essere facilmente effettuato mediante protocolli standardizzati di citometria a flusso (FCM) e i risultati concordano con i livelli di trascritto di CRLF2 ottenuti con RQ-PCR. Nella seconda parte del lavoro, abbiamo investigato se l’inibizione della via di segnale CRLF2/JAK2 possa diventare uno strumento efficace per il trattamento dei pazienti CRLF2-riarrangiati.Abbiamo testato Givinostat/ITF2357, un inibitore di HDAC efficace contro neoplasie con mutazione iperattivatoria di JAK2, su pazienti CRLF2-riarrangiati con deregolazione del pathway JAK/STAT. Givinostat inibisce la proliferazione e induce apoptosi in linee cellulari di BCP-ALL CRLF2-overespresse e in blasti di pazienti CRLF2 riarrangiati.Inoltre, downregola l’espressione dei geni del pathway di JAK/STAT e inibisce la fosforilazione di Stat5 in condizioni basali e dopo stimolazione con TSLP. In vivo,riduce l’attecchimento delle cellule leucemi, No, embargoed_20180625, Savino, Savino, A

open, La famiglia del fattore nucleare delle cellule T attivate (NFAT) comprende cinque proteine con attività trascrizionale che possono essere suddivise in due gruppi sulla base dei loro domini funzionali; il gruppo comprendente NFAT5, la cui regolazione avviene sulla base di cambiamenti osmotici, e il gruppo comprendente la famiglia di NFATc, regolata dall’azione della calcineurina. Sebbene le diverse funzioni della famiglia NFATc siano state scoperte essere associate ai meccanismi di sviluppo, attivazione e tolleranza dei linfociti, in particolare delle cellule T, numerosi studi hanno evidenziato nuovi ruoli per quanto riguarda le cellule del sistema immunitario innato, come le cellule dendritiche convenzionali (DC) e i macrofagi. Inoltre, è stato proposto che i membri della famiglia NFATc, una volta attivi nelle cellule dell’immunità innata, potrebbero essere anche coinvolti nella collaborazione tra immunità innata e adattativa. Le DC sono cellule presentanti l’antigene e sono potenti attivatori della risposta delle cellule T. A tal proposito, è stato dimostrato che uno dei motivi per cui le DC presentano un’alta efficienza nell’attivare le cellule T è la loro capacità di produrre di interleuchina-2 (IL-2) in seguito ad esposizione con stimoli infiammatori (Granucci et al., 2001). Ulteriori studi hanno anche provato che sia l’aumentata espressione di CD25, sia la produzione di IL-2 da parte delle DC a livello della sinapsi immunologica sono eventi fondamentali per l’attivazione delle cellule T (Wuest et al., 2011). Dato che sia la produzione di CD25 che di IL-2 sono entrambe controllate dalla traslocazione di NFATc, è possibile che l’attivazione della via di segnalazione di NFAT nelle DC possa avere un ruolo fondamentale nell’attivazione delle cellule T alloreattive durante il rigetto acuto dei trapianti. A tale proposito, l’inibizione selettiva e specifica della via di segnalazione di NFAT nelle DC potrebbe essere fondamentale al fine di inibire l’attivazione delle c, No, embargoed_20180626, Cigni, Cigni, C

4410, open, The aim of this research is to analyze health protection in a multicultural society from a legal and philosophical point of view. The focus of analysis will be issues of self-determination and bodily integrity in female genital mutilation made by minority ethnic groups. The analysis begins with framing the concepts of health and disease in a historical and sociological perspective, with attention also on non-Western cultural practices. The definition of health by the World Health Organization is taken as a reference point to propose a concept of health which is not culturally determined and that can be an instrument of health promotion for every individual. This proposal is set against an approach that evaluates public health and hygiene on the basis of economic standards. By contrast, the definition of health introduced by the WHO includes a subjective dimension, which is also one of self-determination and to the free individual choice. The criticalities of the WHO definition approach leads one to consider different levels of description of the concept of disease which do not ignore its social and cultural dimensions. In order to analyze the legal aspects of the right to health in national and international regulations, in the second chapter, the research analyzes the theoretical and political implications of assuming concepts of fundamental rights. In particular, the focus is on the foundational challenge posed by ethical relativism and pluralism. According to these views, one cannot identify an absolute foundation of these rights; in reply, I claim that there are reasons to affirm the effective universality of internationally recognized rights, such as the right to health. Subsequently, the research pays attention to the difference between a right to health and a right to health care. The theories that consider the right to health only as a right to health care are shown to have substantial limitations, if compared to theories that regard the right to health also, La tesi di dottorato ha affrontato, dal punto di vista filosofico-giuridico, il tema della tutela della salute nel contesto multiculturale, prestando particolare attenzione alle implicazioni dei concetti di autodeterminazione e di integrità del corpo con specifico riferimento alle richieste di mutilazione genitale femminile, sempre più frequentemente avanzate da gruppi etnici minoritari. Al fine di poter analizzare le modalità di tutela della salute, la ricerca ha preso avvio da una ricognizione storico-sociologica dei concetti di salute e malattia nelle diverse epoche storiche, comprendendo anche riferimenti alle pratiche culturali diverse da quella Occidentale. In proposito, si è prestata particolare attenzione alla definizione di salute elaborata dall’Organizzazione Mondiale della Sanità, di cui sono stati messi in evidenza non solo gli elementi innovativi, ma anche i profili problematici, alla luce dei quali è emersa la necessità di un ripensamento della definizione di salute che tenga conto dei diversi livelli di descrizione del fenomeno malattia e non trascuri la dimensione sociale e culturale. Nel secondo capitolo la ricerca, portando attenzione alla nozione di diritti fondamentali, ha dato conto dell’impossibilità di individuare un fondamento assoluto di tali diritti, per poi passare in rassegna le ragioni sulla base delle quali si può predicare l’effettiva universalità di alcuni diritti riconosciuti a livello internazionale, tra i quali è possibile annoverare il diritto alla salute. In particolare, sono state messe in evidenza i limiti e le implicazioni politiche di concezioni teoriche che circoscrivono il diritto alla salute al diritto a ricevere prestazioni, rispetto a concezioni che, al contrario, ne affermano il carattere non solo di diritto sociale, ma anche di diritto di libertà. Rivolgendo attenzione agli interventi sul corpo e ai limiti che il principio di autodeterminazione trova nel concetto di integrità, nel terzo capitolo è stata presa in esame, No, open, Nobile, Nobile, M

open, Molecular imaging allows the non-invasive visualization and characterization of biological processes. It can be used in oncology to identify biomarkers for the evaluation of tumor progression and response to therapy. In this thesis work, the animal PET was used as potential biomarker of tumor response to therapy focusing on altered metabolism and hypoxia in a) a model of oncogenic k-ras and b) in a model of glioma. Metabolic alterations, such as increased glycolysis and glutamine consumption, are associated with mutations in k-ras gene. The decoupling of glucose and glutamine uptake leads to a reprogramming of their metabolism to support cell proliferation representing a target for cancer therapy. The aim of this study is to investigate metabolic alterations in k-ras transformed fibroblasts (NIH-RAS) in in vivo studies and to assess response to therapy. Animals subcutaneously implanted with NIH-RAS performed [18F]FDG- and [18F]FLT-PET at several time points to evaluate glucose metabolism and cell proliferation, respectively. Tumors were collected and evaluated for different markers by immunohistochemistry (IHC) to confirm in vivo results. In the same model, the efficacy of chloroquine (autophagy blocker) and BPTES (glutaminase inhibitor) alone or in combination was monitored by [18F]FDG- and [18F]FLT-PET before and 48 hours after treatments. All animals developed fast growing and highly glycolytic tumors in few days that appear homogeneous for both [18F]FDG and [18F]FLT uptake. PET imaging showed a significant increase in [18F]FDG uptake while cell proliferation remained stable over time, as depicted by [18F]FLT uptake. IHC analyses confirmed the high aggressiveness of these cells. Chloroquine and BPTES combined treatment slowed down tumor growth only if compared to vehicle, without affecting glucose metabolism or cell proliferation. The presence of alternative pathways for glutamate production and the need of higher doses of treatments may provide explanations to t, Le tecniche di imaging molecolare permettono di visualizzare e caratterizzare processi biologici e rivestono un ruolo fondamentale in oncologia, consentendo di identificare marcatori per la diagnosi e la risposta al trattamento. In questo lavoro di tesi è stato valutato il ruolo della PET come possibile marcatore di risposta al trattamento in a) un modello con k-ras oncogenico e b) un modello di glioma, focalizzando l’attenzione sulle alterazioni del metabolismo e l’ipossia. L’incremento della glicolisi e del consumo di glutammina sono associati a mutazioni dell’oncogene ras in diversi tumori. Il disaccoppiamento di tali processi determina una riprogrammazione del metabolismo per supportare l’aumentata proliferazione fornendo un interessante target terapeutico. Scopo dello studio è la valutazione in vivo delle alterazioni metaboliche e della risposta alla terapia nel modello ottenuto mediante inoculo di fibroblasti con k-ras oncogenico (NIH-RAS). A tale scopo gruppi di topi sono stati monitorati longitudinalmente mediante PET-[18F]FDG e [18F]FLT per la valutazione del metabolismo glucidico e della proliferazione cellulare. I tumori sono stati sottoposti ad analisi immunoistochimiche per confermare i dati ottenuti in vivo. Nello stesso modello è stato valutato l’effetto di un inibitore dell’autofagia (Clorochina) e della glutaminasi (BPTES) singolarmente e in combinazione mediante PET-[18F]FDG e [18F]FLT. Gli animali hanno sviluppato in breve tempo tumori glicolitici e caratterizzati da un’omogenea captazione di [18F]FDG e [18F]FLT. Le immagini PET hanno mostrato un aumento della captazione di [18F]FDG nel tempo e un andamento stabile della proliferazione come mostrato dalla costante captazione di [18F]FLT. Clorochina e BPTES in combinazione hanno determinato un rallentamento della crescita tumorale rispetto ai controlli, ma non sono state osservate variazioni nella captazione di [18F]FDG e [18F]FLT. La presenza di vie alternative per la produzione di glutammato e la, No, open, Raccagni, Raccagni, I

open, Nonostante gli studi clinici randomizzati forniscano importanti informazioni sull'efficacia e sulla sicurezza dei farmaci, i risultati provenienti da tali studi non possono essere generalizzati a tutta la popolazione. Questi studi, infatti, sono basati su campioni altamente selezionati, costituiti da un numero limitato di individui, che spesso sotto-rappresentano i pazienti più vulnerabili. La maggior parte degli studi clinici, inoltre, viene condotta in strutture ospedaliere, spesso molto prestigiose, nelle quali i pazienti sono sottoposti a regimi dietetici e comportamentali strettamente controllati e non sono liberi di gestire le proprie abitudini secondo una propria scelta, una caratteristica che rende tali studi lontani dalla reale pratica clinica. Di conseguenza, malgrado i risultati provenienti dagli studi clinici randomizzati siano sufficienti per approvare l'immissione in commercio di un farmaco, non lo sono per rispondere ai quesiti più rilevanti che devono affrontare quotidianamente medico e pazienti. Per questi motivi, è necessario che l'osservazione degli individui in trattamento continui anche dopo la commercializzazione del farmaco. A tale proposito, nell'ultimo decennio si è assistito all'ampio utilizzo di database (DB) di pertinenza sanitaria, per la conduzione di studi di farmacoepidemiologia. Tali database possono essere classificati in due grandi categorie: quelli che raccolgono informazioni a fini amministrativi (DB amministrativi) e quelli che vengono utilizzati dai medici per registrare informazioni cliniche sulla salute dei propri pazienti (DB clinici). Attraverso le informazioni reperibili dai DB amministrativi, sono stati condotti diversi studi che hanno fornito importanti risultati circa il profilo di sicurezza ed efficacia dei farmaci. Una delle principali caratteristiche di tali DB, che li rende molto apprezzati, riguarda la possibilità di riflettere la reale pratica clinica per popolazioni ampie e non selezionate, un aspetto che sicuram, No, open, Ghirardi, Ghirardi, A

Centro di Studio e di Ricerca in Biostatistica per l'Epidemiologia Clinica, open, In clinical studies it is often of interest to compare the survival experience of patients in two or more treatment groups. In some situations the categorization is not fixed at baseline but changes during the follow-up, where patients, for example, start from an initial treatment and either continue it or switch to an alternative one after some time (waiting time). Thus, treatment is a binary non reversible time-dependent variable. A typical problem is comparing outcomes of chemotherapy vs stem-cell transplantation in Acute Lymphoblastic Leukemia (ALL) where patients are treated initially with chemotherapy and during the follow-up they can receive bone marrow transplant. In this context, the standard Kaplan-Meier method is unreliable since it is affected by the immortal time bias. Two alternative non-parametric approaches were proposed in the literature. Andersen et al. (1983) suggests to classify patients at a landmark time which corresponds to the starting point for the estimation of the Kaplan-Meier survival curve, involving only patients still at risk at the landmark. The second, proposed by Simon and Makuch (1984), consists in dynamically updating in time the risk set of the two time-dependent treatment groups. Both methods were presented mostly relying on heuristic bases and without specifying the theoretical quantities corresponding to the proposed estimators. Thus, the interpretations of the curves estimated by the two methods was never clarified. When the focus is not on the overall survival experience but rather on profile-specific prediction, i.e. accounting for the individual characteristics of the subjects, one must resort to semi-parametric or parametric regression models. The Cox model is the most popular one but in the presence of time-varying effects and/or time-dependent covariates it cannot be used to obtain survival curves. Among the possible alternatives we considered the full parametric model by Hanley and Miettinen (2009) and the semi-paramet, Negli studi clinici spesso è di interesse confrontare la sopravvivenza di pazienti appartenenti a due o più gruppi di trattamento. In alcune situazioni, la classificazione non è effettuata all’inizio del follow-up ma cambia nel tempo. Ad esempio, tutti i pazienti sono sottoposti ad un trattamento iniziale ed alcuni lo continuano mentre altri cambiano dopo un certo periodo di tempo. In questo caso il trattamento è rappresentato da una variabile binaria tempo-dipendente. Un contesto tipico è il confronto tra chemioterapia e trapianto di cellule staminali nella Leucemia Linfoblastica Acuta. In questa situazione, il metodo Kaplan-Meier non è utilizzabile in quanto affetto da immortal time bias. Due approcci non-parametrici alternativi sono stati proposti in letteratura. Andersen et al. (1983) suggeriscono di classificare i pazienti ad un tempo “landmark” che corrisponde al punto iniziale della stima della curva di sopravvivenza, includendo solo i pazienti ancora a rischio al landmark. Il secondo metodo, proposto da Simon e Makuch (1984), consiste nell’aggiornamento dinamico dei “risk sets” dei due gruppi di trattamento tempo-dipendenti. Entrambi i metodi sono stati presentati in maniera euristica e senza specificare le quantità teoriche che corrispondono agli stimatori proposti. Perciò, l’interpretazione delle curve stimate dai due metodi non è mai stata chiarita. Quando l’interesse non è rivolto alla sopravvivenza globale ma alla predizione profilo-specifica, ovvero tenendo conto delle caratteristiche individuali dei soggetti, occorre utilizzare metodi di regressione parametrici o semi-parametrici. Il modello di Cox è quello più popolare ma in presenza di effetti tempo-dipendenti e/o di covariate tempo-dipendenti non può essere utilizzato per ottenere delle curve. Tra le possibili alternative sono stati considerati il modello parametrico di Hanley e Miettinen (2009) e il modello di regressione semi-parametrico basato sul landmark di Van Houwelingen (2007). Il primo è b, No, embargoed_20150905, Bernasconi, Bernasconi, D

INTRODUZIONE: il controllo motorio è un’area delle scienze naturali che esplora come il sistema nervoso interagisce con altre componenti del corpo e dell’ambiente al fine di produrre movimenti volontari ed azioni coordinate. Recentemente alcuni ricercatori hanno focalizzato il loro interesse sul “controllo motorio” in soggetti affetti da dolore cronico lombare; l’efficacia di trattamenti fondati sui principi del controllo motorio è stata paragonata all’efficacia di trattamenti che prevedono l’utilizzo di esercizi generici o altre tecniche di trattamento, i risultati ottenuti sono controversi. Per quanto di nostra conoscenza gli autori che hanno affrontato questo tema non hanno preso in considerazione uno degli aspetti del controllo motorio: la ridondanza motoria. La ridondanza motoria, come definito da Nikolai Bernstein, costituisce un problema di eliminazione dei gradi di libertà ridondanti. In passato questo problema è stato affrontato attraverso l’utilizzo di metodi di ottimizzazione basati su una varietà di funzioni. Recenti scoperte suggeriscono che il problema sia stato formulato in modo errato. Un’interpretazione alternativa è costituita dal principio di abbondanza motoria, questo principio considera i gradi di libertà “apparentemente ridondanti” come utili, anzi vitali per molti aspetti del comportamento motorio. Negli ultimi 10 anni sono emerse numerose pubblicazioni a supporto di questa interpretazione basata su principi come il controllo sinergico, l’ipotesi del manifold non controllato e l’ipotesi del punto di equilibrio (configurazione referente). In particolare, la presenza di grandi quantità di “good variance” (variabilità nello spazio degli elementi che non influenza il livello di performance generale) è stata documentata in varie azioni comunemente svolte. La “good variance” aiuta il sistema motorio ad adattarsi in presenza di perturbazioni non attese o nella gestione di un compito secondario. La quantità di “good variance” presenta una modulazione, 1, open, Introduzione: L’importanza del controllo motorio e dei pattern di movimento corretti nei pazienti affetti da dolore muscolo-scheletrico sono considerati da alcuni autori un elemento chiave per la valutazione ed il trattamento delle sindromi da dolore muscolo-scheletrico. In questo contesto si inserisce l’interesse dello studio degli equivalenti motori, ovvero la capacità del Sistema Nervoso Centrale di generare azioni motorie attraverso il sistema muscolo-scheletrico, mantenendo un parametro correlato all’andamento del task (compito) nonostante le variazioni di valori degli elementi motori sottostanti. Nei soggetti con dolore lombare non è mai stato studiato il fenomeno degli equivalenti motori, anche se diversi studi sono stati pubblicati rispetto il controllo motorio e l’esecuzione di esercizi terapeutici volti a migliorare il pattern di attivazione motoria. Scopo: Analizzare il pattern motorio e gli equivalenti motori in soggetti affetti da LBP e in soggetti di controllo attraverso tecniche di analisi del movimento. Materiali e metodi: 11 soggetti di cui 4 affetti da dolore lombare cronico (LBP) sono stati valutati attraverso un sistema di analisi del movimento. Il compito analizzato consisteva nel raggiungere una scatola attraverso un movimento di flessione anteriore. Il movimento è stato effettuato con diverse modalità di esecuzione. La co-varianza articolare è stata valutata attraverso il metodo UCM. Per quanto riguarda l’analisi UCM sono state considerate due ipotesi relative alla stabilizzazione del tronco ed alla stabilizzazione dei movimenti del COM. Risultati: I soggetti del gruppo LBP hanno evidenziato un maggior contributo al movimento in flessione lombare durante il movimento libero e sono emerse differenze nelle diverse modalità di esecuzione proposte. L’analisi UCM ha messo in evidenza differenze tra i due gruppi rispetto alla stabilizzazione del COM. Conclusioni: È stato possibile applicare le tecniche proposte per lo studio del controllo motorio. P, No, embargoed_20171112, Meroni, R, Meroni, R

Centro di Studio e di Ricerca sulla Sanità Pubblica (CESP), 4415, open, Objective: To estimate a value set for the calculation of Italian specific Quality-Adjusted-Life-Years (QALYs), based on preferences elicited on EQ-5D health states using the time trade-off (TTO) technique. Methods: the revised standard Measurement and Valuation of Health (MVH) protocol was followed. Twenty-five health states, divided into 3 groups and given to 450 subjects, were selected to obtain 300 observations per state. Subjects aged 18-75 years were recruited to be representative of the Italian general adult population for age, gender and geographical distribution. To improve efficiency, face-to-face interviews were conducted using the Computer Assisted Personal Interviewing approach. Several random effects regression models were tested to predict the full set of EQ-5D health states. Model selection was based on logical consistency of the estimates, sign and magnitude of the regression coefficients, goodness of fit and parsimony. Results: The most efficient model includes 10 main effect dummy variables for the EQ-5D domain levels and the D1 interaction term, which accounts for the number of dimensions at levels 2 or 3 beyond the first. This model has a R2=0.389 and an MAE=0.03, comparable to or better than models used in other Countries. The utility estimates after state 11111 range from 0.92 (21111) to -0.38 (33333). Italian utility estimates are higher than those estimated in the UK and Spain and used so far to assess QALYs and conduct cost-utility evaluations in Italy. Conclusion: A specific value set is now available to calculate QALYs for the conduction of health economic studies targeted at the Italian healthcare system., open, Cortesi, Cortesi, P

4406, open, Prostate cancer (PC) is the most common cancer in Europe and USA, the second reason of death caused by cancer among men in the world and its incidence has increased in developed countries during the last 20 years. The etiology of PC is not entirely clear and epidemiologic results on risk factors are not consistent. Physical activity (PA) and abdominal fat, measured through waist-to-hip ratio (WHR), have been suggested to have a potential role in the development of the disease. We designed an observational study to test if the effect of PA on PC is mediated by WHR: our aim was to decompose a total causal effect of the exposure on the outcome into two different components. The first one reflects a direct pathway from PA to PC and the second one reflects an indirect pathway, which involves the mediator variable. We used the Swedish National March Cohort data and we performed a mediation analysis using the recent theoretical development in causal mediation analysis field. Preliminary results showed that occupational PA has a role in preventing low-risk PC incidence but risk reduction is not mediated through the WHR control. Thus, other hypotheses need to be tested in order to highlight how PA acts in reducing PC incidence., open, Grotta, Grotta, A

MOLOGNI, LUCA, 4415, open, The dual ALK/MET inhibitor Crizotinib was recently approved for the treatment of metastatic and late stage ALK+ NSCLC, and is currently in clinical trial for other ALK‐related diseases. As predicted after other TKIs clinical experience, the first mutations that confer resistance to Crizotinib have been described in Non Small Cell Lung Cancer (NSCLC) and in one Inflammatory Myofibroblastic Tumor (IMT) patients. Here we focused our attention on Anaplastic Large Cell Lymphoma (ALCL), where the oncogenic fusion protein NPM-ALK, responsible for 70-80% of cases, represents an ideal Crizotinib target. We selected and characterized two human NPM-ALK+ ALCL cell lines, KARPAS299 and SUP-M2, able to survive and proliferate at different Crizotinib concentrations. Sequencing of ALK kinase domain revealed that a single mutation became predominant at high Crizotinib doses in each cell line, namely L1196Q and I1171N in Karpas299 and SUP-M2 cells, respectively. These mutations also conferred resistance to Crizotinib in Ba/F3 cells expressing human NPM‐ALK. The resistant cell populations, as well as mutated Ba/F3 cells, were characterized for sensitivity to two additional ALK inhibitors: the dual ALK/EGFR inhibitor AP26113 and NVPTAE684. While L1196Q-positive cell lines were sensitive to both inhibitors, cells carrying I1171N substitution showed cross-resistance to all ALK inhibitors tested. This study provides potential relevant information for the management of ALCL patients that may relapse after Crizotinib treatment., open, Ceccon, Ceccon, M

4414, open, Introduzione. Negli ultimi anni c'è stato un crescente interesse sulla sindrome metabolica (MetS) e sul ruolo che questa può ricoprire nell’aumentare il rischio di mortalità cardiovascolare tra i soggetti affetti da disturbo mentale grave (SMI). Obiettivi. L’obiettivo primario di questo studio è la stima del rischio tra soggetti affetti da SMI, rispetto ad individui che ne sono privi, di essere affetti da MetS. Metodi. (1) Revisione sistematica e meta-analisi: La revisione sistematica e meta-analisi è stata realizzata seguendo i criteri del MOOSE e del PRISMA Statement. Sono stati utilizzati PubMed e Embase come database per la ricerca. Sono stati inclusi tutti gli studi in cui fossero presenti dati di prevalenza di MetS in un gruppo di soggetti affetti da SMI e in un gruppo di controllo privo di patologia psichiatrica. (2) Studio trasversale comparativo: Lo studio è stato effettuato tra marzo 2011 e febbraio 2012 presso l’Azienda Ospedaliera Universitaria San Gerardo di Monza. Un campione randomizzato di individui affetti da SMI e un gruppo di controllo adeguato privo di tale disturbo sono stati reclutati per la valutazione della prevalenza di MetS, sulla base dei criteri NCEP ATP III, e delle caratteristiche correlate. Risultati. (1) Revisione sistematica e meta-analisi: Sulla base dei criteri di inclusione, 27 articoli sono stati inclusi per la meta-analisi. Il pooled OR di MetS in soggetti affetti da SMI era 1.95 [1.54, 2.47], con un’elevata eterogeneità tra gli studi (I2 = 87%). Gli studi selezionati presentavano tuttavia numerose criticità dal punto di vista della qualità e del rischio di bias. (2) Studio trasversale comparativo: Abbiamo rilevato una prevalenza del 26.1% di MetS nel gruppo SMI e del 15.9% nel gruppo di controllo. L’analisi multivariata ha evidenziato come soggetti affetti da SMI avessero una probabilità di essere affetti da MetS oltre quattro volte superiore rispetto al gruppo di controllo. Conclusioni. I risultati della meta-analisi e dello s, open, Bartoli, Bartoli, F

Introduzione: Nell’ultimo decennio il Servizio Sanitario Nazionale ha subito numerosi cambiamenti principalmente a causa della riduzione delle risorse economiche disponibili. Si è però contemporaneamente assistito ad un incremento della spesa sanitaria dovuto alla crescente e continua introduzione di tecnologie in campo sanitario. È quindi necessario condurre appropriate analisi, quali le analisi costo-efficacia, che valutano congiuntamente costi ed efficacia legati al’introduzione di una nuova tecnologia sanitaria al fine di fornire importanti informazioni ai decisori in campo sanitario che possono influenzare l’allocazione delle scarse risorse a disposizione. Un campo d’interesse per la valutazione economica in campo sanitario può essere l’analisi costo-efficacia dell’incremento di aderenza alle terapie per il trattamento delle patologie croniche nella pratica clinica corrente. Infatti, affinchè queste terapie siano efficaci devono essere assunte con continuità e per un consistente periodo di tempo. I risultati ottenuti negli studi clinici circa la loro efficacia non sempre sono evidenziati anche dagli studi osservazionali in quanto nella pratica clinica si osserva una scarsa aderenza dei pazienti alla terapia. Sarebbe quindi necessario attivare degli interventi volti a incrementare l’aderenza al trattamento al fine di massimizzare l’efficacia dei farmaci. Per questo tipo di analisi, gli usuali metodi utilizzati per l’analisi costo-efficacia, quali i modelli markoviani, non sono particolarmente adatti in quanto questi generalmente utilizzano dati provenienti dalla letteratura scientifica e in particolare da studi clinici controllati e randomizzati che a causa delle loro caratteristiche non sono in grado di descrivere la pratica clinica corrente. L’obiettivo principale di questo lavoro è quello di identificare l’approccio per effettuare analisi costo-efficacia nel contesto degli studi osservazionali unendo le potenzialità di questi studi, largamente utilizzati in f, 1863, open, open, Scotti, Scotti, L