Search

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico Efetuaram-se levantamentos da microbiota fitopatogênica associada às seguintes plantas daninhas nativas do Brasil: Mitracarpus hirtus (Rubiaceae), Palicourea marcgravii (Rubiaceae). Pereskia aculeata, (Cactaceae), Psidium catleianum (Myrtaceae) e Tradescantia fluminensis (Commelinaceae). Tais levantamentos foram conduzidos em todos os estados do sudeste e sul do país, visando a busca por potenciais agentes de controle biológico destas importantes invasoras. A seleção dos locais a serem visitados para coleta foi feita com base nos registros de ocorrência das plantas-alvo nos principais herbários nacionais e nos dados de clima de cada região. Quando possível, as coletas foram feitas nos diversos tipos climáticos onde a planta-alvo ocorria. Trinta espécies fúngicas, associadas às essas quatro plantas-alvo, foram identificadas. Dentre essas as seguintes novidades taxonômicas: um novo gênero, 15 novas espécies e uma nova variedade. Além disto. dentre os demais fungos coletados, 11representaram novos registros geográfico para o Brasil ou registros de novo hospedeiro para o taxon. Em M. Hirtus, duas novas espécies fúngicas, Cercospora mitracarpi-hirti e Puccinia mitracarpii , destacaram-se como possíveis agentes de biocontrole desta espécie invasora em ambiente exóticos. Somente uma nova espécie de pseudocercospora e uma espécie de ferrugem foram encontradas atacando P. Marcgravii. Nenhum destes parece ter potencial para utilização no controle biológico. Para P. Aculeata, a ferrugem Uromyces pereskiae e uma nova espécie de Pseudocercospora, destacaram-se como potenciais agentes de biocontrole. No entanto, o ciclo de vida de U. Pereskiae necessita de mais estudos para a sua utilização como agente de controle biológico clássico. Para P. Cattleianum, dentre as 9 espécies encontradas, as duas Mycosphaerellaceae, Stenella sp. e Mycosphaerella sp., destacaram-se para o controle biológico dessa planta, reconhecida como responsável por alguns dos piores problemas de invasões biológicas no mundo, particularmente em ilhas oceânicas. A survey of the pathogenic mycobiota of the following weed species native to Brazil was performed: Mitracarpus hirtus (Rubiaceae), Palicourea marcgravii (Rubiaceae). Pereskia aculeata, (Cactaceae), Psidium catleianum (Myrtaceae) e Tradescantia fluminensis (Commelinaceae). This survey was conducted in all states in South and Southeastern Brazil and the principal aim was the discovery of potential biocontrol agents to be used against these weeds. Selection of localities to be visited was made after a compilation of records of occurrences of the target-plants in the main Brazilian herbaria and a study of climatic maps of Brazil. Based on this iinformation it was then attempted to select areas representing the various kinds of climate where the target-plants occur in nature. Thirty fungal species were collected in association with the four target-plant species. Among these the following taxonomic novelties were found: One new genus, 15 new species and one new variety. Moreover, among the other fungi that were collected 11 represented new geographic records for Brazil or new host-pathogen associations. Two new fungal species werw found on M hirtus: Cercospora mitracarpi-hirti and Puccinia mitracarpii. Both are recognized as having potential interest as classical biocontrol agents. Only two fungal species were found attacking P. Marcgravii: a new species of Pseudocercospora and an already known rust species. None seem to have biocontrol potential. Pereskia aculeata, had two fungal pathogens associated whith it that appeared to have potential as biocontrol agents: Uromyces pereskiae and a new species of Pseudocercospora. Nevertheless, before U. Pereskiae ais further considered as a potential biocontrol agent, its life-cycle needs further clarification as only the uredinial and telial stages of this rust seem to be known, contrary to what has been published by other authors. Nine new fungal species were found to have P. Cattleianum as a host. Among these two members of the Mycosphaerellaceae – Stenella sp. and Mycosphaerella sp. - appeared to have good potential as biocontrol agents for this very important weed, which causes some of the worst known biological invasions in the world, particularly in oceanic islands

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico Sete fungos micorrízicos foram isolados de “pelotons” das orquídeas Epidendrum rigidum , Isochillus lineares , Maxillaria marginata , Oncidium flexuosum, Oncidium varicosum, Oceoclades maculata e Polystachia concreta. Todas essas orquídeas são nativas do Brasil, sendo O. maculata de habitat terrestre e as demais epífitas. Três isolados fúngicos foram classificados como Epulorhiza e quatro como Ceratorhiza, ambos pertencentes ao grupo Mycelia sterilia, basidiomicetos similares a Rhizoctonia. O fungo isolado de O. maculata foi classificado como sendo E. repens e os dois outros isolados classificados como Epulorhiza são idênticos entre si e diferenciaram-se das espécies já relatadas para esse gênero, podendo ser considerados como uma nova espécie. Dois isolados classificados como Ceratorhiza são idênticos e provavelmente pertencentes a uma mesma espécie, enquanto os outros dois diferem desses e também entre eles. Assim, esses isolados parecem pertencer a três espécies distintas de Ceratorhiza. Os agrupamentos efetuados após a caracterização morfológica e pelas técnicas moleculares de PCR-RFLP da região ITS do rDNA e de RAPD, foram condizentes. Este é o primeiro relato taxonômico da caracterização morfológica e molecular de fungos micorrízicos isolados de orquídeas brasileiras. Seven mycorrhizal fungi were isolated from pelotons of the orchids Epidendrum rigidum, Isochillus lineares, Maxillaria marginata, Oncidium flexuosum, Oncidium varicosum, Oceoclades maculata and Polystachia concreta. All of these species are Brazilian native orchids. Only O. maculata is a terrestrial species while the others are all epiphytic. These isolates were morphologically classified as Epulorhiza or Ceratorhiza (Mycelia sterilia: anamorphic basidiomycetes) known as Rhizoctonia-like. The isolate from O. maculata was classified as E. repens and the two others isolates belonging to this genus were morphologically identical but distinct from known species of Epulorhiza, and are describing as representing a new species. Two isolates classified as Ceratorhiza are identical and may belong to the same species, while two others appear to belong to two different taxa. So, they can belong to three distinct species of Ceratorhiza. The results of PCR-RFLP from ITS region of rDNA and RAPD analysis are in accordance to the morphological taxonomy. This is the first report of the morphological and molecular characterization of mycorrhizal fungi isolated from Brazilian orchids.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico A Serra do Espinhaço Meridional (SEM) é representada por uma faixa orogênica, pré- cambriana extensa e contínua do território brasileiro. Faixa orogênica é caracterizada por grandes estruturas formadas por rochas magmáticas e sedimentares pouco resistentes. A SEM possui um acervo geoespeleológico rico em formações rochosas diversas e inexplorado em termos microbiológicos. No Brasil, trabalhos sistemáticos de organismos cavernícolas começaram a ser realizados a partir da década de 1980. As cavernas são caracterizadas por temperaturas baixas a moderadas, alta umidade e disponibilidade de matéria orgânica. As características desse ambiente auxiliam no desenvolvimento microbiano, porém os microrganismos que ocorrem nas cavernas são pouco estudados. Esses microrganismos podem habitar transitoriamente ou ser residentes das cavernas. Quando habitam transitoriamente, os microrganismos desenvolvem em função da disponibilidade de matéria orgânica que adentra a caverna por meio de correntes de ar, fluxo de água, fluxo de sedimentos em insetos, morcegos ou trazidos pelo próprio homem. Enquanto aqueles residentes sobrevivem exclusivamente dos nutrientes que estão distribuídos por toda extensão da caverna. Este trabalho teve como objetivo efetuar um levantamento de fungos filamentosos em uma caverna da Serra do Espinhaço Meridional de Minas Gerais, a caverna Monte Cristo. Com base em análises filogenéticas combinadas das regiões gênicas ITS, ACT, TEF-1α, GAPDH e RPB2 e por meio da caracterização morfológica um novo gênero de fungo pertencente à família Chaetomiaceae foi identificado e será proposto de acordo com o Código Internacional de Nomenclatura para Algas, Fungos e Plantas. Adicionalmente, duas novas espécies pertencentes aos gêneros Cladosporium e Curvularia e três primeiros relatos, C. anthropophilium, Cu. warrabererensis e Mucor variicolumellatus, foram identificados nesse estudo. O presente trabalho corrobora com o conhecimento sobre a diversidade de espécies de fúngicas em cavernas no Brasil. Palavras-chave: Micologia. Biodiversidade. Fungos cavernícolas. Sistemática. The “Serra do Espinhaço Meridional” (SEM) is represented by an extensive and continuous pre-Cambrian orogenic band of the Brazilian territory. Orogenic band is characterized by large structures formed by magmatic and sedimentary rocks with little resistance. The SEM has a geospeleological collection rich in diverse rock formations and unexplored in terms of microbiology. In Brazil, systematic studies with cave organisms began to be carried out in the 1980s. Caves are characterized by low to moderate temperatures, high humidity and availability of organic matter. The characteristics of this environment supports microbiological development, however, microorganisms that occur in the caves have been little studied. These microorganisms can inhabit temporarily or be residents of the caves. When living temporarily, microorganisms develop according to the availability of organic matter that enters the cave through air currents, water flow, sediment flow in insects, bats or brought by the man himself. While cave dwellers survive exclusively on nutrients that are distributed throughout the length of the cave. Therefore, the caves are unique environments and host a high diversity of fungi unknown to science and with potential for biotechnological application. This study aimed to carry out a survey of filamentous fungi in caves of the Serra do Espinhaço Meridional in Minas Gerais state, the “Monte Cristo” cave. Based on combined phylogenetic analyses of the ITS, ACT, TEF-1α, GAPDH and RPB2 gene regions and through morphological characterization a new genus of fungus belonging to the Chaetomiaceae family has been identified and will be proposed according to the International Nomenclature Code for Algae, Fungi and Plants. Additionally two new species belonging to the genera Cladosporium and Curvularia and three first reports, C. anthropophilium, Cu. warrabererensis and Mucor variicolumellatus, were also identified in this study. The present study corroborates with the knowledge of the diversity of fungal species in caves in Brazil. Keywords: Mycology. Biodiversity. Cave fungi. Systematic.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPQ As orquídeas são dependentes de uma fonte externa de carbono, devido à ausência de tecido de reserva em suas sementes. Dessa forma, para obter carbono e outros nutrientes, associam-se com fungos mutualistas em seu sistema radicular, os quais são conhecidos como fungos micorrízicos orquidoides. Estes fungos são caracterizados por formar pelotons, um conjunto de enovelados de hifas no interior das raízes. Além disso, são capazes de colonizar as células do embrião das sementes de orquídeas e podem permanecer até a fase adulta da planta. As orquídeas podem associar-se com outros microrganismos como bactérias endofíticas, que podem trazer diversos benefícios como promoção de crescimento, devido a produção de fitohormônios, fixação biológica de nitrogênio, solubilização de fosfato, produção de sideróforos, entre outros. Este trabalho teve como objetivos (1) estudar a diversidade taxonômica de fungos micorrízicos associados a Gomesa recurva (2) identificar e caracterizar bactérias endofíticas associadas à Gomesa recurva R. Br. e Zygopetalum maxillare Lodd. Pelas análises filogenéticas e morfológicas, todos os isolados de G. recurva pertencem à uma nova espécie de Ceratobasidium. Foram obtidos cinco isolados de bactérias para cada espécie de orquídea. Pelo sequenciamento da região 16S rRNA, verificou-se que pertenciam aos gêneros Pseudomonas e Paraburkholderia, os quais, pelos testes in vitro, mostraram que possuem capacidade de realizar a fixação biológica de nitrogênio, de produzir fitohormônio ácido indol- 3-acético (AIA) e solubilizar de fosfato de cálcio. Os isolados de fungos e bactérias obtidos apresentam potencial para serem utilizados para a produção de mudas de orquídeas. Palavras-chave: Filogenia. Fungos. Bactérias. Fitohormônios. Orchids are dependent on an external source of carbon, due to the absence of reserve tissue in their seeds. Thus, in order to obtain carbon and other nutrients, they associate with mutualistic fungi in their root system, which are known as orchidoid mycorrhizal fungi. These fungi are characterized by forming pellets, a set of entwined hyphae inside the roots. In addition, they are able to colonize the embryo cells of the orchid seeds and can remain until the adult stage of the plant. Orchids can associate with other microorganisms such as endophytic bacteria, which can bring several benefits such as growth promotion, due to the production of phytohormones, biological nitrogen fixation, phosphate solubilization, production of siderophores, among others. The objective of this work was (1) to study the taxonomic diversity of mycorrhizal fungi associated with Gomesa recurva (2) to identify and characterize endophytic bacteria associated with Gomesa recurva R. Br. And Zygopetalum maxillare Lodd. By phylogenetic and morphological analyzes, all isolates of G. recurva belong to a new species of Ceratobasidium. Five bacterial isolates were obtained for each species of orchid. By sequencing the 16S rRNA region, it was found that they belonged to the genera Pseudomonas and Paraburkholderia, which, by in vitro tests, showed that they have the capacity to perform biological nitrogen fixation, to produce indole-3-acetic acid phytohormone (AIA) and solubilizing calcium phosphate. The isolates of fungi and bacteria obtained have the potential to be used for the production of orchid seedlings. Keywords: Phylogeny. Fungi. Bacteria. Phytohormones.

A podridão azeda representa um problema sério no campo e na pós-colheita de frutas e hortaliças, limitando a produção e a comercialização. Geotrichum candidum tem sido relatado como a principal espécie causando esta doença. Neste estudo, 165 isolados causadores de podridão pós-colheita em diferentes estados do Brasil foram caracterizados com base na filogenia molecular e morfologia. Para caracterização molecular, o DNA genômico foi extraído, e o domínio D1/D2 do gene rRNA da subunidade maior (LSU) foi amplificado e sequenciado. As análises filogenéticas baseadas no domínio D1/D2 revelaram que 129 isolados pertencem a espécie Geotrichum candidum, enquanto outros isolados não agruparam com nenhuma espécie conhecida, provavelmente representando novas espécies. Além disso, outros gêneros, isto é, Hyphopichia, Magnusiomyces, Saccharomycopsis, Trichosporon e Zygoascus, foram identificados associados a podridão azeda em frutas e hortaliças no Brasil. Todas as espécies testadas, incluindo as possíveis espécies novas, foram patogênicas quando inoculadas artificialmente em frutos sadios de tomate do tipo longa vida, italiano e sweet grape, bem como em tubérculos de batata e frutos de seriguela. Em conclusão, embora Geotrichum candidum tenha sido relatado como a única espécie a causar podridão azeda, outras espécies de Geotrichum e outros gêneros estão associados à podridão azeda em frutas e hortaliças no Brasil, o que demonstra uma diversidade de fungos associados a essa doença. Palavras-chave: Dipodascaceae. Geotrichum. Patologia pós-colheita. Podridões. Sour rot represents a serious problem in the field and postharvest of fruits and vegetables by limiting production and marketing. Geotrichum candidum has been reported as the main species causing this disease. In this study, 165 fungal isolates causing postharvest rot in different states of Brazil were characterized on the basis of molecular phylogeny and morphology. For molecular characterization, the genomic DNA was extracted, the D1/D2 domain of large subunit rRNA (LSU) gene was amplified and sequenced. The phylogenetic analyses revealed that 129 isolates of this study grouped with the species Geotrichum candidum, while other isolates did not cluster to any known species, probably representing new species. Moreover, other fungal genera, i.e. Hyphopichia, Magnusiomyces, Saccharomycopsis, Trichosporon and Zygoascus were identified associated with the sour rot disease on fruits and vegetables in Brazil. All species tested, including the putative new species, were pathogenic when artificially inoculated on healthy tomato fruit types, Long-self life, Italian tomato and sweet grape, as well as potato tubers and red mombin fruits. In conclusion, although Geotrichum candidum has been related as the only species causing sour rot, other species of Geotrichum and other genera are associated with sour rot on fruits and vegetables in Brazil, which demonstrates a diversity of fungi associated with this disease. Keywords: Dipodascaceae. Geotrichum . Postharvest disease. Rot disease.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior O Brasil é o maior produtor de maracujá do mundo, sendo seus pomares formados principalmente por sementes, o que propicia grande variabilidade genética e desuniformidade. Visando maior uniformidade, assim como a manutenção do material e uso de espécies silvestres e híbridos como fonte de resistência e/ou rusticidade, o uso de propagação vegetativa como estaquia e enxertia pode ser constantemente visto na literatura em diferentes estudos. As espécies de Passiflora e seus híbridos são atraentes por suas características exóticas, adaptabilidade natural, potencial de resistência de algumas espécies silvestres e variabilidade genética inter e intraespecífica; existindo espécies de Passiflora que se demonstram resistentes a doenças que ocorrem no maracujazeiro tornando-se necessário estudos sobre o uso da enxertia nessas espécies para o uso de tais características. Assim, este trabalho teve como objetivo: realizar a confirmação de híbridos interespecíficos de Passiflora edulis x Passiflora mucronata; selecionar os genótipos de maracujazeiro quanto à resistência a Fusariose; avaliar a influência do número de folhas e da aplicação de AIB (Ácido Indolbutírico) na estaquia caulinar dos híbridos; e analisar o potencial uso do maracujazeiro e do híbrido interespecífico como porta- enxerto. O presente trabalho visou avaliar as progênies oriundas de cruzamentos interespecíficos entre P. edulis x P. mucronata, bem como seu potencial uso como porta- enxerto resistente a Fusariose. O trabalho é constituído de quatro capítulos, com o primeiro abordando a caracterização morfológica, mensuração do conteúdo de DNA nuclear, confirmação da hibridação por meio de marcadores microssatélites (SSR) e confirmação da alopoliploidia por meio da hibridização genômica in situ (GISH). O segundo capítulo abrange a avaliação quanto à resistência a Fusariose. O terceiro capítulo trata dos testes de enraizamento de estacas caulinares dos híbridos com estacas com uma e duas folhas reduzidas à metade, ambas submetidas à aplicação de diferentes concentrações de ácido indolbutírico (0, 500, 1000, 1500 e 2000 mg L -1 AIB). E o quarto capítulo versa sobre a viabilidade da enxertia e o desenvolvimento inicial de maracujazeiro-azedo (P. edulis) enxertado sobre espécie silvestre P. mucronata, híbridos e P. edulis UFV-M7. Os resultados obtidos demonstram que os cromossomos dos possíveis híbridos apresentam apenas material paterno. O que é confirmado por meio dos marcadores SSR. Por meio destes, é possível inferir que não houve duplicação do material genético dos pais, pois em alguns primers os híbridos se apresentam em heterozigose. As plantas avaliadas não sofreram alterações em sua ploidia, segundo a análise do conteúdo de DNA. Por fim, morfologicamente, os híbridos apresentam as mesmas características dos genitores paternos (P. mucronata) e apresentam esterilidade. Apresentando dissomia uniparental com eliminação seletiva dos cromossomos maternos. As plantas inoculadas com F. oxysporum f. sp. passiflorae apresentaram um mecanismo de defesa dos genótipos P. mucronata e M7-UFV, por meio da formação de géis e novas raízes adventícias que podem auxiliar em sua sobrevivência. Além disso, constatou-se que os possíveis híbridos foram suscetíveis, fato esse dado pela baixa produção de raízes das estacas. Os resultados obtidos pelas inoculações de F. solani não permitiram identificar fatores de resistência ou suscetibilidade, pois os tratamentos inoculados não diferiram das testemunhas. O uso de AIB foi significativo apenas nas variáveis número de raízes e percentagem de estacas vivas sem raiz. As estacas com uma folha e com a aplicação de AIB na concentração de 2000 mg L -1 promoveram a maior percentagem de enraizamento. Assim, nas condições estudadas, o uso de AIB foi indispensável para produção de estacas. A percentagem de pegamento da enxertia foi de 100% para as combinações P. edulis/UFV-M7 e P. edulis/BRS Sol do Cerrado, já as combinações P. edulis/P. mucronata e P. edulis/Híbrido apresentaram menor pegamento. O maior diâmetro do enxerto foi apresentado por P. edulis/UFV-M7 e P. edulis/BRS Sol do Cerrado, indicando maior compatibilidade de enxertia dentro da mesma espécie. Brazil is the largest producer of passion fruit in the world, with its orchards mainly composed of seeds, which provides great genetic variability and unevenness. Aiming for greater uniformity, as well as the maintenance of the material and use of wild and hybrid species as a source of resistance and/or rusticity, the use of vegetative propagation such as cutting and grafting can be constantly seen in the literature in different studies. Passiflora species and their hybrids are attractive because of their exotic characteristics, natural adaptability, resistance potential of some wild species and inter and intraspecific genetic variability; there are Passiflora species that are resistant to diseases that occur in passion fruit, making it necessary to study the use of grafting in these species for the use of such characteristics. Thus, this work had as objective: to carry out the confirmation of interspecific hybrids of Passiflora edulis x Passiflora mucronata; to select the passion fruit genotypes for resistance to Fusarium; to evaluate the influence of the number of leaves and the application of IBA (Indolbutyric Acid) on the stem cutting of the hybrids; and to analyze the potential use of passion fruit and interspecific hybrid as rootstock. The present work aimed to evaluate the progenies from interspecific crosses between P. edulis and P. mucronata, as well as their potential use as rootstock resistant to Fusariosis. The work consists of four chapters, the first one dealing with morphological characterization, measurement of nuclear DNA content, confirmation of hybridization by microsatellite markers (SSR) and confirmation of allopolyploidy by genomic in situ hybridization (GISH). The second chapter covers the evaluation of Fusarium resistance. The third chapter deals with the tests of rooting stem cuttings of the hybrids with cuttings with one and two leaves reduced by half, both submitted to the application of different concentrations of indolebutyric acid (0, 500, 1000, 1500 and 2000 mg L-1 AIB). And the fourth chapter deals with the viability of grafting and the initial development of passion fruit sour (P. edulis) grafted on wild species P. mucronata, hybrids and P. edulis UFV-M7. The results obtained show that the chromosomes of the possible hybrids present only paternal material. This is confirmed through the SSR markers. By means of these, it is possible to infer that there was no duplication of the genetic material of the parents, because in some primers hybrids present in heterozygosis. The evaluated plants did not undergo changes in their ploidy, according to the analysis of the DNA content. Finally, morphologically, the hybrids have the same characteristics of the paternal parents (P. mucronata) and present sterility. Presenting uniparental disomy with selective elimination of the maternal chromosomes. Plants inoculated with F. oxysporum f. sp. passiflorae presented a mechanism of defense of the genotypes P. mucronata and M7-UFV, through the formation of gels and new adventitious roots that can aid in its survival. In addition, it was verified that the possible hybrids were susceptible, fact given by the low production of roots of the cuttings. The results obtained by the inoculations of F. solani did not allow the identification of resistance or susceptibility factors, since the treatments inoculated did not differ from the controls. The use of AIB was significant only in the number of roots and percentage of live cuttings without roots. The cuttings with a leaf and with the application of AIB in the concentration of 2000 mg L-1 promoted the greater percentage of rooting. Thus, under the conditions studied, the use of AIB was indispensable for the production of cuttings. The percentage of grafting glue was 100% for the combinations P. edulis/UFV-M7 and P. edulis/BRS Sol do Cerrado, already the combinations P. edulis/P. mucronata and P. edulis/Hybrid presented smaller glue. The largest diameter of the graft was presented by P. edulis/UFV-M7 and P. edulis/BRS Sol do Cerrado, indicating greater compatibility of grafting within the same species.

Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais A germinação e desenvolvimento de protocormos em sementes de orquídeas está condicionada a diversos fatores, dentre eles a especificidade na associação com fungos micorrízicos rizoctonioides. O presente estudo objetivou isolar e identificar espécies de fungos rizoctonioides associados ao sistema radicular de plântulas de Arundina graminifolia, uma espécie de orquídea terrícola asiática, estabelecida espontaneamente em Itabirito-MG, e avaliar o seu potencial de aplicação na germinação simbiótica da espécie também asiática e terrícola de interesse comercial Phaius tankervilleae. Foram obtidos 21 isolados de fungos rizoctonioides, sendo 15 identificados filogeneticamente com base na sequência da região ITS, 12 pertencentes à família Tulasnellaceae e 03 à família Ceratobasidiaceae, constituindo 04 possíveis espécies novas de Tulasnella spp. e 01 de Ceratobasidium sp.. Três isolados de Tulasnella spp. e dois de Ceratobasidium spp. foram selecionados para o teste de germinação. Apenas os isolados K12, K18 e K20 pertencentes ao gênero Tulasnella, promoveram a germinação de sementes de A. graminifolia, em diferentes níveis de desenvolvimento. O isolado K12 favoreceu o desenvolvimento mais rápido do protocormo. No teste com P. tankervilleae apenas o isolado K9 (Ceratobasidium sp.) promoveu o desenvolvimento do embrião dentro do envoltório com formação de rizoides, mas sem o desenvolvimento do protocormo. Diante dos resultados foi possível concluir que há uma variedade de fungos micorrízicos rizoctonioides associados ao sistema radicular de A. graminifolia e os isolados possuem capacidade diferenciada de germinação de sementes e estabelecimento de protocormos de A. graminifolia e P. tankervilleae. The germination and development of protocorms in orchid seeds is conditioned by several factors, among them the rhizoctonioid fungi specificity. The present study aimed to isolate and identify species of rhizoctonioid fungi species associated with the root system of Arundina graminifolia, a species of Asian terrestrial orchid, established spontaneously in Itabirito-MG and to evaluate its potential for application in the symbiotic germination of the Asian terrestrial species of commercial interest, Phaius tankervilleae. Twenty-one isolates of rhizoctonioid fungi were obtained, being 15 phylogenetically identified based on the sequence of the ITS region, 12 belonging to the Tulasnellaceae family and 03 to the Ceratobasidiaceae family, constituting 04 possible new species of Tulasnella spp. and 01 from Ceratobasidium sp.. Three isolates of Tulasnella spp. and two from Ceratobasidium spp. were selected for the germination test. Only isolates K12, K18 and K20 belonging to the genus Tulasnella promoted the germination of A. graminifolia seeds at different levels of development. The K12 isolate favored the faster development of the protocorm. In the P. tankervilleae test only the K9 isolate (Ceratobasidium sp.) promoted the development of the embryo inside the wrapping with rhizoid formation, but without the development of the protocorm. From the results it was possible to conclude that there are a variety of rhizoctonioid mycorrhizal fungi associated with the A. graminifolia root system and the isolates have different seed germination capacity and establishment of A. graminifolia and P. tankervilleae protocorms.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico Jatropha curcas L. é uma oleaginosa de múltiplos propósitos, por apresentar, além da importância do seu óleo para produção de biodiesel, uma grande diversidade de compostos bioativos com atributos medicinais e ação biocida no controle de pragas e doenças de diversos cultivos. Esta revisão aborda o estado da arte da ação biocida dos metabólitos secundários dessa espécie. Dentre esses compostos, os ésteres diterpênicos derivados do forbol são as moléculas mais estudadas, devido a toxicidade aos seres humanos e animais, e pela alta atividade fungicida e inseticida. Tais metabólitos, possivelmente, atuam na destruição do retículo endoplasmático e da parede celular das hifas. Nos insetos-praga, estes compostos, provavelmente, atuam sobre o metabolismo, ocasionando inibição alimentar, repelência, inibição do ato do acasalamento, ação inibitória ou supressora da oviposição e/ou indução da produção de ovos inférteis, além da inibição do desenvolvimento de larvas, ninfas e pupas. Vários estudos demonstram que embora todas as partes da planta sejam tóxicas, o grau de toxicidade pode variar de acordo com a forma de obtenção do extrato, dose e modo de administração, e sensibilidade do indivíduo. Sendo assim, J. curcas é destaque como espécie promissora por atender tanto o aspecto agroenergético, quanto o fitossanitário no controle de pragas e doenças que afetam a agricultura. Dessa forma, o presente estudo avaliou, no capítulo 2, a atividade fungicida e bactericida de extratos foliares e caulinares de 12 acessos, pré- selecionados em teste de progênies, sobre os fungos Hemileia vastatrix e Cercospora coffeicola, causadores de duas das mais importantes doenças do cafeeiro: ferrugem e cercosporiose, respectivamente, e sobre a bactéria Pseudomonas syringaepv. garcae, causadora da mancha aureolada. Amostras de folhas e caules de J. curcas foram submetidas a secagem e moagem e seus extratos clorofórmicos e etanólicos preparados com auxílio do aparato Soxhlet. As atividades fungicidas e bactericidas foram avaliadas, in vitro, a partir da inibição da germinação de esporos de H. vastatrix, da redução percentual do crescimento micelial de C. coffeicola e da diminuição da zona de crescimento de P. syringae pv. garcae. Todos os extratos foram capazes de inibir, em 100%, a germinação dos esporos de H. vastatrix. Todos os extratos reduziram significativamente o crescimento micelial de C. coffeicola, sendo as reduções mais expressivas de 16, 17, 12 e 20%, dos extratos EC04, EF04-clorofórmico e os EC08, EF08-etanólico, respectivamente. Alterações morfológicas também foram observadas nos micélios, indicando a possível variação na produção de melanina, metabólito secundário de importância no desenvolvimento fúngico. Os extratos não agiram sobre P. syringae pv. garcae. Esses resultados demonstram a importância dos estudos sobre as propriedades fungicidas dos extratos de J. curcas, bem como, na caracterização e identificação de seus componentes bioativos. Jatropha curcas L., a multipurpose oilseed plant, is very important for biodiesel production, also for a wide range of bioactive compounds with medicinal activity and biocidal action for control of pests and diseases in crops. This review presents the state- of-the-art of biocidal action of the secondary metabolites of this species. Among these compounds, phorbol esters diterpenes are the most studied molecules due to the toxicity to humans and animals, and to high fungicidal and insecticidal activity. Such metabolites activity possibly is on destruction of endoplasmatic reticulum and on hyphae cell wall. It’s well known the activity of, these compounds of insect pests on metabolism, leading to antifeedant effect; repellency; mating inhibition inhibitory action or oviposition suppression and/or induction mating; infertile eggs production; and inhibition of larvae development , nymphs, and pupae. Several studies have shown that although all plant parts are toxic, the degree of toxicity varies in accordance with extract formulation, with nature of the active substance, the rate and administration procedure, and the individual sensitivity. Thus, J. curcas stands out as a promising species for to agroenergetic purposes as well as for control of pests and diseases that affect agriculture. Thus, the present study evaluated, in the second chapter, the fungicidal and bactericidal activity of foliar and stem extracts of 12 accessions, pre- selected in a progeny test, on the fungi Hemileia vastatrix and Cercospora coffeicola, causing two of the most important diseases of coffee: rust and cercosporiosis, respectively, and on the bacterium Pseudomonas syringae pv. garcae. Leaf and stems samples of J. curcas were submitted to drying and milling and their chloroform and ethanolic extracts prepared with the aid of the Soxhlet apparatus. The fungicidal and bactericidal activities were evaluated, in vitro, from the inhibition of spore germination of H. vastatrix, the percentage reduction of the mycelial growth of C. coffeicola and the decrease of the growth zone of P. syringae pv. garcae. All extracts were able to inhibit the germination of H. vastatrix spores in 100%. In agreement, all the extracts significantly reduced the mycelial growth of C. coffeicola, being the most expressive reductions of 16%, 17%, 12%, and 20%, for extracts EC04, EF04-chloroform, and EC08, EF08-ethanolic, respectively. Morphological changes were also observed in the mycelia, indicating a possible variation in the production of melanin, a secondary metabolite of importance for the fungal development. The extracts were not able to act on the growth zone of P. aeruginosa pv. garcae These results demonstrate the importance of advancing the studies on the fungicidal properties of extracts of J. curcas, as well as the characterization and identification of their bioactive components.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior A produção de alimentos orgânicos vem crescendo nos últimos anos, entretanto, estes sistemas requerem insumos isentos de pesticidas químicos e que possibilitem benefícios ambientais, sociais e econômicos. A obtenção de sementes orgânicas no Brasil é um dos principais entraves desse setor e são necessárias pesquisas que apontem insumos adequados a este sistema de cultivo. Entre as ferramentas para a busca de sistemas mais sustentáveis estão os microrganismos eficientes (EM). Entretanto, são escassas literaturas sobre os mecanismos de ação deste produto e sua utilização para o tratamento de sementes. Considerando a hipótese de que os EM podem ser utilizados para a produção orgânica do milho (Zea mays L.), este trabalho teve como objetivo estudar os efeitos das formulações de EM no tratamento de sementes de milho visando sua melhoria da qualidade sanitária e fisiológica. Foram testadas EM de três origens distintas, sendo um comercial (EMCOM) e dois de agricultores familiares, um de Montes Claros – MG (EMCE) e outro de Viçosa – MG (EMMA). Os EM foram filtrados, de forma a excluir os microrganismos, fazendo-se o uso apenas dos metabólitos secundários produzidos no processo fermentativo. No primeiro experimento os EM foram testados separadamente, onde sementes de milho foram embebidas por 30 min em quatro concentrações (1%, 2%, 5%, 100%) de EM em duas versões (filtrado e não filtrado), além da testemunha embebidas em água destilada, totalizando nove tratamentos dispostos em delineamento inteiramente casualizado. Após cinco dias de incubação, foi quantificada a presença de fungos fitopatogênicos nas sementes. No segundo experimento as sementes de milho foram embebidas por 30 min nos três EM e suas versões filtradas, sem diluição, além do tratamento adicional fungicida Derosal Plus e a testemunha, totalizando oito tratamentos em delineamento inteiramente casualizado. As sementes seguiram para teste de sanidade “blotter test”, teste de germinação e primeira contagem, teste de emergência em areia e índice de velocidade de emergência, peso de massa fresca e seca de plântulas. No terceiro experimento, 42 fungos isolados de sementes de milho tratadas com EM foram avaliados em teste de cultura pareada com Fusarium verticillioides, avaliando-se o diâmetros das colônias. O experimento foi conduzido em delineamento inteiramente casualizado, com em três repetições. Menores incidências de fungos fitopatogênicos foram observadas nas concentrações sem diluição dos EM, demonstrando que o mecanismo de ação dos microrganismos da cultura mista advém também da produção dos metabólitos secundários que contém substancias antimicrobianas. Nos experimentos comparativos ao fungicida, todos os EM demonstraram eficiência equivalente ao Derosal Plus, sem prejudicar a qualidade fisiológica das sementes, não interferindo na germinação ou emergência do milho. Entretanto, as sementes tratadas com EM apresentaram plântulas com maiores massa fresca e seca, comparadas à testemunha e ao fungicida. Dos 42 isolados obtidos das sementes de milho, 21 mostraram capacidade de inibir do crescimento micelial do F. verticillioides com porcentagens de inibição entre 46 e quatro por cento. Foram observados diferentes mecanismos de antagonismo, mas principalmente por competição e antibiose. De forma geral, todos os EM testados foram eficientes no controle de patógenos de sementes de milho, sem prejudicar sua qualidade fisiológica. O EM tem mecanismo de ação intimamente ligado aos metabolitos secundários produzidos via fermentação anaeróbica e pode potencialmente substituir produtos químicos no tratamento de sementes de milho. Organic food production has been growing in recent years; however, these systems require inputs that are free of chemical pesticides and provide environmental, social and economic benefits. Obtaining organic seeds in Brazil is one of the main obstacles in this sector, and research is needed that points out suitable inputs to this cropping system. Among the tools for the search for more sustainable systems are Effective Microorganisms (EM). However, there are few literature about mechanisms of action of this product and its use for the treatment of seeds. Considering the hypothesis that EM can be used for the organic production of maize (Zea mays L.), this work had the objective of studying the effects of EM formulations in the treatment of maize seeds with a view to improving sanitary and physiological quality. Three different sources were tested: one commercial (EMCOM) and two from family farmers, one from Montes Claros - MG (EMCE) and another from Viçosa - MG (EMMA). EM were filtered in order to exclude the microorganisms, using only the secondary metabolites produced in the fermentation process. In the first assay the EM were tested separately, where corn seeds were soaked for 30 min in four concentrations (1%, 2%, 5%, 100%) of EM in two versions (filtered and unfiltered), besides the embedded control in distilled water, totaling nine treatments arranged in a completely randomized design. After five days of incubation, the presence of phytopathogenic fungi in the seeds was quantified. In the second experiment the maize seeds were soaked for 30 min in the three EM and their filtered versions, without dilution, besides the additional fungicide treatment Derosal Plus and the control, totaling eight treatments in a completely randomized design. Seeds were followed for blotter test, germination test and first count, emergency sand test and emergency speed index, fresh and dry weight of seedlings. In the third treatment, 42 fungi isolated from corn seeds treated with EM were evaluated in a culture test paired with Fusarium verticillioides, evaluating the diameters of the colonies. The experiment was conducted in a completely randomized design, with three replications. Corn seeds with lower incidences of phytopathogenic fungi were observed at concentrations without dilution of EM, demonstrating that the mechanism of action of mixed - culture microorganisms also results from the production of secondary metabolites containing antimicrobial substances. In the comparative experiments to the fungicide, all EM showed efficiency equivalent to Derosal Plus, without affecting the physiological quality of the seeds, without interfering in the germination nor the emergence of the corn. However, the seeds treated with EM presented seedlings with higher fresh and dry mass, compared to the control and the fungicide. Of the 42 isolates obtained from corn seeds, 21 showed the ability to inhibit the mycelial growth of F. verticillioides with percentages of inhibition between 46 and four percent. Different mechanisms of antagonism were observed, but mainly by competition and antibiosis. In general, all EM tested were efficient in the control of maize seed pathogens and without impairing their physiological quality. EM has a mechanism of action closely linked to secondary metabolites produced via anaerobic fermentation and may potentially replace chemicals in the treatment of maize.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico Os fungos são reconhecidamente cosmopolitas e desenvolvem diversas funções ecológicas no ecossistema, entre elas a decomposição da matéria orgânica. Eles reciclam a serapilheira presente no solo, contribuindo para mineralização de nutrientes. Nos ambientes aquáticos, esse papel saprofítico, contribui para aumentar a palatabilidade do material vegetal utilizado por organismos de outros níveis tróficos. Diversos representantes do reino Fungi estão presentes nos ambientes aquáticos e, dentre esses, os fungos conidiais. No bioma da Mata Atlântica os estudos sobre fungos no ambiente aquático ainda são escassos. Assim, o presente trabalho teve como objetivo realizar um estudo taxonômico e filogenético das espécies de fungos conidiais associadas a substratos vegetais em decomposição submersos em corpos d’água de três fragmentos florestais localizados na Serra do Brigadeiro, Minas Gerais. As amostras coletadas foram levadas ao Laboratório de Micologia e Etiologia de Doenças Fúngicas de Plantas da Universidade Federal de Viçosa onde foram feitos os isolamentos e identificação dos fungos associados. O gênero Cladosporium foi o grupo de fungos mais abundante. Por meio da morfologia das estruturas vegetativas e reprodutivas desse fungo, do crescimento das culturas in vitro e de análises filogenéticas, concluiu-se que todos os isolados pertencem ao complexo Cladosporium cladosporioides, sendo dois deles relatados pela primeira vez no Brasil e uma espécie nova a ser proposta. Este estudo contribui para ampliar o conhecimento da diversidade de fungos conidiais em ambientes aquáticos na Mata Atlântica Brasileira e ressalta a importância de se explorar novos habitats em pesquisas micológicas. Fungi are recognized as cosmopolitan and carry out various ecological functions in the ecosystem, including the decomposition of organic matter. They recycle the litter present in the soil, contributing to mineralization of nutrients. In aquatic environments, this saprophytic role contributes to increase the palatability of plant material used by organisms of other trophic levels. Several representatives of the Fungi kingdom are present in the aquatic environments and, among these, the conidial fungi. In the Atlantic Forest biome, studies on fungi in the aquatic environment are still scarce. The aim of this work was to carry out a taxonomic and phylogenetic study of the conidial fungi species associated with decomposed plant substrates submerged in water bodies of three forest fragments located in the Serra do Brigadeiro, Minas Gerais. The collected samples were taken to the Laboratório de Micologia e Etiologia de Doenças Fúngicas de Plantas of Universidade Federal de Viçosa, where the isolations and identification of associated fungi were made. The genus Cladosporium was the most abundant fungal group. By means of the morphology of vegetative and reproductive structures of this fungus, the growth of in vitro cultures and phylogenetic analyzes, it was concluded that all the isolates belong to the Cladosporium cladosporioides complex, two species reported for the first time in Brazil and a new species be proposed. This study contributes to increasing the knowledge of the diversity of conidial fungi in aquatic environments in the Brazilian Atlantic Forest and emphasizes the importance of exploring new habitats in mycological researches.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Jatropha curcas L. pertence à família Euphorbiaceae e é conhecida popularmente como pinhão-manso, cujo centro de origem e domesticação é o México. A toxicidade da espécie têm impulsionado pesquisas na produção de extratos para o controle de doenças de plantas. Logo, o objetivo deste trabalho foi desenvolver um novo biocida botânico, extraído de folhas e cascas do caule de J. curcas, para o controle dos fungos Hemileia vastatrix e Cercospora coffeicola, causadores de duas das principais doenças do cafeeiro, ferrugem e cercosporiose, respectivamente. Foram coletadas amostras de folhas e cascas de caule referentes a 10 acessos de J. curcas, as amostras foram secas, trituradas e para a preparação dos extratos foram utilizados 20 g de folha e 40 g caule e dois solventes, etanol e clorofórmio. A extração exaustiva foi feita pelo método de Soxhlet, por um período de 4 horas para cada solvente. Para o teste com H. vastatrix depositou-se, sobre lâminas, 15 μL de suspensão de esporos e 15 μL do extrato. Para o teste com C. coffeicola foram adicionados nas placas de Petri 15 mL de meio BDA e 1 mL de extrato de casca de caule, após a solidificação do meio, foi colocado um disco 5 mm de BDA contendo micélio de C. coffeicola sobre ele. Os extratos de folhas e cascas de caule não permitiram a germinação dos uredósporos de H. vastatrix. Em C. coffeicola os extratos promoveram inibição no desenvolvimento do fungo. Concluiu-se que os 10 extratos de casca de caule e folha de J. curcas L. extraídos em solventes etanólico e clorofórmico se mostraram eficientes no controle do fungo H. vastatrix; nos testes com C. coffeicola, os extratos caulinares do acesso 3 em etanol e do acesso 8 em clorofórmio se mostraram mais eficientes que os demais na inibição do desenvolvimento do fungo e o extrato caulinar etanólico se mostrou mais tóxico que o clorofórmico nos ensaios com o fungo C. coffeicola. Jatropha curcas L. belongs to the family Euphorbiaceae and is popularly known as physic nut, whose center of origin and domestication is Mexico. The toxicity of the species has driven research into the production of extracts for the control of plant diseases. Therefore, the aim of this study was to develop a new biocide botanical extracted from leaf and stem bark of J. curcas, to control the fungi Hemileia vastatrix Cercospora coffeicola, causing two of the main diseases of coffee, rust and cercosporiosis, respectively. Leaf and stem bark samples were collected from 10 accessions. Such samples were dried, ground and 20 g of leaf and 40 g of bark and two solvents, ethanol and chloroform, were used to prepare the extracts. Exhaustive extraction was done by the Soxhlet method, for a period of 4 hours for each solvent. For the test with H. vastatrix, 15 μL of spore suspension and 15 μL of the extract were deposited on slides. For the C. coffeicola test, 15 mL of BDA medium and 1 mL of stem bark extract were added to the petri dishes, after solidification of the medium, a 5 mm BDA disc containing C. coffeicola mycelium was placed on it. Leaf extracts and stem bark did not allow the germination of H. vastatrix uredospores. In C. coffeicola the extracts promoted inhibition in the development of the fungus. It was concluded that the 10 extracts of stem bark and leaf of J. curcas extracted in ethanolic and chloroformic solvents were efficient in controlling the H. vastatrix fungus; in the tests with the C. coffeicola the stem extracts in ethanol of accession 3, and accession 8 in chloroform, were more effective than others in inhibiting fungal growth and stem ethanolic extract was more toxic than chloroform in tests with C. coffeicola.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Colletotrichum é um gênero que apresenta dez complexos de espécies, bem como uma série de pequenos grupos e espécies únicas. Esse gênero inclui importantes patógenos causadores de doenças em plantas. Entretanto, espécies de Colletotrichum são também descritas como endofíticas em plantas lenhosas e herbáceas, e têm demonstrado produzir compostos bioativos. A seringueira (Hevea spp.) tem como seu centro de origem a região Amazônica e a espécie H. brasiliensis apresenta a mais alta produtividade de borracha natural (látex). No Brasil, até hoje, nenhum estudo foi feito para determinar as espécies de Colletotrichum endofíticas associadas à seringueira. Diante disso, foram estudados 176 isolados de Colletotrichum spp. obtidos de folhas, caule e raízes de H. brasiliensis e H. guianensis. Para isso, foram sequenciadas quatro regiões gênicas que permitiram compreender os relacionamentos filogenéticos dos isolados estudados. Somado a isso, foi utilizado o marcador IRAP para avaliar a diversidade genética e, finalmente, foi analisada a concordância entre os agrupamentos feitos pelos dois métodos moleculares utilizados. Há diferentes espécies que pertencem aos complexos C. boninense e C. gloeosporioides e a espécie C. cliviae como endofíticas em Hevea spp. A análise utilizando o marcador molecular IRAP revelou uma alta variabilidade genética, formando diferentes clusters na análise de agrupamentos. Esses resultados foram condizentes em alguns casos com os agrupamentos observados nas análises filogenéticas. Neste trabalho se descreve pela primeira vez a presença de isolados do complexo C. gloesporioides em caule e raiz de Hevea spp. Colletotrichum is a genus that features ten species complex, as well as a number of small groups and singletons. This genus includes important pathogens causing diseases in plants. However, Colletotrichum spp. are also described as endophytic in woody and herbaceous plants, and have been shown to produce bioactive compounds. Amazon forest is the center of origin of the rubber tree (Hevea spp.) and H. brasiliensis specie has the highest productivity of natural rubber (latex). In Brazil, until now, no researches about Colletotrichum endophytic species associated with rubber tree were done. Therefore, 176 isolates of Colletotrichum spp. obtained from leaves, stems and roots of H. brasiliensis and H. guianensis were studied. For this, in order to understand phylogenetic relationships four gene regions were sequenced. Additionally, to assess the genetic variability the IRAP marker was used and the correlation between the groupings made by two molecular methods were analyzed. There are different species belonging to C. boninense and C. gloeosporioides species complex and C. cliviae as endophytic in Hevea spp. The analysis using molecular marker IRAP revealed a high genetic variability, forming different clusters. These results were consistent in some cases with clusters observed in phylogenetic analyzes. Here was described for the first time the presence of the complex isolated in C. gloesporioides stem and roots of Hevea spp.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico A podridão azeda causada pelo fungo Geotrichum é uma doença pós- colheita que ocorre em frutas e hortaliças. Visando caracterizar a diversidade genética de Geotrichum sp. para a escolha de estratégias de controle eficientes, este trabalho tem o objetivo de avaliar diferentes marcadores ISSRs e IRAPs para determinação da diversidade intra específica de Geotrichum. No total, 62 isolados de locais geograficamente distintos e diferentes hospedeiros foram utilizados neste estudo. Para a análise de diversidade genética, o DNA genômico foi extraído a partir do micélio. A região parcial dos genes que compreende o ISSR e transposon foram amplificadas usando sete oligonucleotídeos. A partir dos perfis de bandas foi construída uma matriz binária a qual foi adicionada ao software PAST3 onde o índice de similaridade de Jaccard foi calculado para cada combinação de duas amostras. Os dendrogramas foram construídos com base na matriz de similaridade de acordo com o método das médias aritméticas de grupos não ponderados (UPGMA- unweighted pair group method with arithmetic averages). Em todos marcadores moleculares analisados foram encontrados pelo menos um clado representado por dois ou mais isolados que apresentaram perfis idênticos. Existe uma tendência de isolados de um mesmo hospedeiro ou região geográfica serem semelhantes quando foi utilizado diferentes marcadores moleculares. Não houve semelhança entre os isolados quando os oligonucleotídeos IRAPs e microssatélites foram comparados pois o número de clados formados pelos marcadores IRAPS foram menores. Geotrichum possui grande diversidade genética e, portanto, pode permitir a este patógeno uma melhor adaptabilidade às condições ambientais e a diferentes hospedeiros. The sour rot caused by fungus Geotrichum genus is a disease that occurs in fruits and vegetables. In order to characterize the genetic diversity of Geotrichum sp. for the choice of efficient control strategies, this study aims to evaluate different ISSRs and IRAPs markers for determination of intraspecific diversity of Geotrichum. A total of 62 isolates from geographically different locations and different hosts were used in this study. For the analysis of genetic diversity, genomic DNA was extracted from the mycelium. The partial region of the genes comprising the ISSR and transposon were amplified using seven primers. From the bands profiles was built a binary matrix which were added to PAST3 software where the Jaccard similarity index was calculated for each combination of two samples. The dendrograms were constructed based on the similarity matrix according to the method of arithmetic averages of unweighted groups (UPGMA- unweighted pair group method with arithmetic averages). In all molecular markers analyzed were found at least one clade represented by two or more isolates that showed identical profiles. Strains not grouped according to the town which were isolated. There is a tendency of isolates from the same host or geographic region are similar when we used different molecular markers. There were not similarities between the isolated when IRAPs and microsatellite primer were compared because the number of clades formed by IRAPS markers were lower. Geotrichum has high genetic diversity and therefore may allow the pathogen better adaptability to environmental conditions and the different hosts.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico No Brasil, alguns estudos evolvendo Botryosphaeriales vêm sendo realizados. Mas, diante da enorme diversidade de plantas cultivadas e nativas que são potenciais hospedeiros desse grupo de fungos, torna-se evidente que esses estudos ainda são incipientes. A mandioca é uma cultura de grande importância econômica no Brasil e é afetada por uma doença conhecida como podridão negra das raízes da mandioca, que é um dos principais fatores limitantes a rentabilidade dessa cultura. Contudo, até recentemente nenhum estudo etiológico mais acurado envolvendo essa doença tinha sido realizado. No passado, a podridão negra das raízes da mandioca era associada à espécie Scytalidium lignicola. Entretanto, no primeiro capítulo desse trabalho, foram identificados com base em análises morfológicas, apoiada por análises filogenéticas multilocus, as espécies de Botryosphaeriaceae, Lasiodiplodia euphorbicola, Lasiodiplodia pseudotheobromae e Neoscytalidium hyalinum associados a essa doença. Após a reprodução dos sintomas nos testes de patogenicidade, concluiu-se que a podridão negra das raízes da mandioca no Brasil é causada por várias espécies de Botryosphaeriaceae. A podridão de carvão é uma conhecida doença causada por Macrophomina em vários hospedeiros, e essa tem causado sérios problemas para a cultura da mamoneira no Brasil. Assim diante da inexistência de estudos etiológicos mais acurados para essa doença, o segundo capítulo desse trabalho buscou identificar com auxílio de ferramentas moleculares, espécies de Macrophomina associadas a diferentes culturas oleaginosas no Brasil. Foram identificadas três espécies, Macrophomina phaseolina, M. pseudophaseolina e uma nova espécie filogenética a ser proposta nesse trabalho, associadas a diversas culturas. Assim, concluiu-se que a podridão de carvão no Brasil é causada por várias espécies de Macrophomina. Outro grupo de culturas de grande importância no Brasil pertence à família Annonaceae, sendo que as principais espécies cultivadas são Annona muricata, Annona squamosa e um híbrido conhecido como atemoya. Essas culturas são afetadas por uma doença que causa seca descendente e em casos mais severos, provoca a morte de plantas. Até o momento, apenas a espécie Lasiodiplodia theobromae tem sido associada a essa doença. Porém, diante da ausência de estudos etiológicos mais acurados para essa doença, o terceiro capítulo desse trabalho buscou identificar com auxílio de ferramentas moleculares, espécies de Botryosphaeriaceae associadas a seca descendente em plantas da família Annonaceae no Brasil. Baseando-se em análises filogenéticas de ITS e TEF1-α combinados, dez espécies de Botryosphaeriaceae foram identificados, sendo uma destas proposta como uma nova espécie de Lasiodiplodia. Das dez espécies encontradas, oito foram patogênicas e reproduziram os sintomas de seca descendente. Assim, a seca descendente em Annonaceae no Brasil é causada por várias espécies de Lasiodiplodia. Nos últimos anos, vários trabalhos têm mostrado que a maioria das regiões gênicas comumente utilizadas em filogenia de fungos, não são apropriadas. Assim o quarto capítulo deste trabalho buscou avaliar o desempenho de regiões gênicas de cópia única para estudos filogenéticos de Botryosphaeriales, seu potencial em estudos taxonômicos e como possível marcador para reconhecimento de espécies. A região gênica TEF1-α, muito utilizada em estudos filogenéticos de Botryosphaeriales, juntamente com as regiões gênicas de cópia única RPB2 e MS204, tanto isoladas como concatenadas, obtiveram os melhores resultados, uma vez que discriminaram a maioria de espécies avaliadas. Porém, uma condição para que nós possamos determinar as regiões gênicas de cópia única como apropriadas para futuros estudos, será o desenvolvimento de banco de dados de referência com sequências de RPB2 e MS204 para todas as espécies possíveis de Botryosphaeriales. In Brazil, some few works involving Botryosphaeriales have been made. However, given the huge diversity of cultivated and native plants in Brazil that are potential hosts of this group of fungi, it becomes clear that these studies are still incipient. The cassava is a crop of great economic importance in Brazil and it is affected by a disease known as black root rot, which represents one of the main limiting factor for this crop rentability, however, until recently, no suitable etiologic studies involving this disease had been performed. In the past, this disease was associated with Scytalidium lignicola. However, in the first chapter of this work, it were identified based on morphological analysis allied to multilocus phylogenetic analysis, the species of Botryosphaeriaceae Lasiodiplodia euphorbicola, L. pseudotheobromae and Neoscytalidium hyalinum associated with this disease. Upon the pathogenicity tests and reproduction of the symptoms, we could conclude that the black root rot of cassava is caused by several species of Botryosphaeriaceae. The charcoal rot is a known disease caused by Macrophomina in several hosts, and it has caused serious problems in castor crop in Brazil. Thus, given the lack of suitable etiologic studies to this disease, the second chapter of this work aimed to identify with molecular tools, Macrophomina species associated with different oil crops in Brazil. It were identified three species, Macrophomina phaseolina, M. pseudophaseolina, and a new species to be proposed here, associated with several crops. Thus, the charcoal rot in Brazil is caused by several species of Macrophomina. Other group of crops of great economic importance in Brazil belong to Annonaceae family, and the main cultivated species are Annona muricata, Annona squamosa and a hybrid knows as atemoya. These crops are affected by a disease, which causes dieback and in more severe cases, causes the death of the plants. Until now, only the species Lasiodiplodia theobromae has been associated with this disease. However, given the lack of suitable etiologic studies to this disease, the third chapter of this study aimed to identify with molecular tools, Botryosphaeriaceae species associated with dieback of Annonaceae plants in Brazil. Based on phylogenetic analyses of ITS and TEF1-α combined, ten species of Botryosphaeriaceae were identified, once one of these is proposed in this work as a new species of Lasiodiplodia. From ten species found, eight were pathogenic and reproduced the dieback symptoms observed in the field. Thus, the results showed that the dieback of Annonaceae in Brazil is caused by several species of Lasiodiplodia. In the last years, several works have shown that most of gene regions commonly used in phylogenetic studies of fungi, are not appropriate. Thus, the fourth chapter of this work aimed to investigate the performance of single-copy gene regions in phylogenetic studies of Botryosphaeriales, its potential in taxonomic studies and as a possible marker for the species recognition. The gene region TEF1-α, commonly used in phylogenetic studies of Botryosphaeriales, in addition to the gene regions RPB2 and MS204, alone or in combination, obtained the better results, once resolved most of species evaluated. However, a condition for that we can determine the single copy gene regions as appropriate for future studies, would be the development of reference datasets with RPB2 and MS204 sequences for all species of Botryosphaeriales.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Os fungos endofíticos são micro-organismos que vivem no interior das plantas, colonizando os espaços intercelulares de todos os órgãos e tecidos, sem causar aparentemente qualquer dano ao hospedeiro. Alguns fungos endofíticos apresentam atividade antagonista a fitopatógenos, por meio da competição por nutrientes e espaço ou pela produção de antimicrobianos. Além de poderem exercer diversas funções importantes em benefício do hospedeiro, os fungos endofíticos são potencialmente úteis na agricultura e indústria como fonte de substâncias de interesse econômico, como enzimas, substâncias antimicrobianas entre outros compostos bioativos relacionados com o metabolismo fúngico. Estudos vêm demostrando que a planta Glycine max representa um reservatório para espécies fúngicas endofíticas, incluindo decompositoras, produtoras de compostos bioativos, biocontroladoras de patógenos e espécies fitopatogênicas. O presente trabalho teve como objetivos: (I) isolar fungos endofíticos de folhas e raízes de G. max, identificá-los por meio do ITS-PCR, que correspondente ao sequenciamento dos espaçadores de transcrito interno (ITS) e por taxonomia morfológica; (II) estudar a diversidade dos fungos isolados em meio de cultura e por meio de eletroforese em gel de gradiente desnaturante (DGGE); (III) avaliar a atividade de fungos biocontroladores isolados de G. max contra fitopatógenos selecionados (Phomopsis sp., Sclerotinia sclerotorium, Fusarium oxysporium, Fusarium solani e Colletotrichum trucatum); (IV) extrair os metabólitos de um fungo endofítico selecionado no teste de biocontrole de fitopatógenos (Guignardia mangiferae) e analisar os compostos antimicrobianos por meio de fracionamento em coluna de sílica gel; (V) avaliar as diferenças existentes entre isolados do fungo endofítico G. mangiferae coletados de dois diferentes hospedeiros (G. max e Vaccinium virgatum) e regiões geográficas (Brasil e Nova Zelandia) em relação ao perfil metabólico e metaboloma. O trabalho foi iniciado com o isolamento de fungos endofíticos de G. max, que foram caracterizados com base em características morfológicas e moleculares (regiões ribossomais ITS1, 5.8 e ITS2). Foram isolados 229 fungos de G. max, sendo 187 isolados nas folhas e 42 nas raízes. Fungos como Ampelomyces sp., Cladosporium cladosporioides, Colletotricum gloeosporioides, Diaporthe helianthi, G. mangiferae, Phoma sp. foram isolados mais frequentemente das folhas, enquanto que nas raízes houve predominância dos fungos F. oxysporum, F. solani e Fusarium sp. Na análise dos fungos isolados, os índices de riqueza correspondentes ao índice de Simpson, Shannon e equitabilidade apresentaram os maiores valores para as folhas em relação às raízes, enquanto o índice de dominância foi maior nas raízes. Entretanto, a avaliação por meio do perfil de bandas gerados por meio da técnica PCR-DGGE, indicou que a riqueza era maior nas raízes do que nas folhas. Por meio dos testes de cultura pareada entre os fungos endofíticos isolados de G. max e fungos fitopatogênicos, foi observado que 38, 20% dos isolados inibiram o crescimento de um ou mais fitopatógenos, sendo um isolado da espécie G. mangiferae capaz de inibir o crescimento de S. sclerotorium e Phomopsis sp. O Fungo G. mangiferae foi então selecionado para a análise de seus metabólitos e após a extração metabólica, a atividade antifúngica de G. mangiferae foi perdida. Entretanto foi constatada atividade antibacteriana contra Staphylococcus aureus e Lactococcus lactis. Essa fração contendo atividade antibacteriana foi analisada por LC-MS e não foram detectadas massas moleculares específicas para compostos antibacterianos já descritos e isolados de G. mangiferae (ácido guignárdico e guignardone I). Na análise de perfil metabólico e metaboloma por meio de GC-MS e LC-MS entre os dois isolados de G. mangiferae, isolados de diferentes hospedeiros e regiões geográficas, variações metabólicas foram verificadas entre os dois isolados, tanto pela análise dos cromatogramas de íons quanto nos compostos detectados e por meio da análise dos componentes principais. Por meio do perfil metabólico e intensidade relativa de cada íon específico detectado entre os dois isolados da espécie G. mangiferae, foi possível verificar que o fungo F75 (G. max, Brasil) produziu em maior quantidade o hormônio vegetal GABA e 2,3-butanodiol (composto usado na produção de borracha sintética, solventes e drogas farmacêuticas), enquanto o isolado ICMP 15453(V. virgatum, Nova Zelândia) apresentou uma maior produção para o antifúngico benzofurano. Além disso, foi detectado uma grande quantidade de ácido fumárico e málico em ambos os isolados. Esses resultados demonstram que existe uma grande diversidade na comunidade fúngica endofítica associada a G. max e que alguns dentre os fungos endofíticos são potencialmente promissores como controladores de fungos fitopatógenos e produtores de compostos antimicrobianos, bioativos e de interesse industrial. Além disso, foi verificado que a mesma espécie isolada de hospedeiros e regiões diferentes apresenta variações em seus metabolismos. The endophytic fungi are microorganisms that live inside the plants, colonizing the intercellular spaces of all organs and tissues, without apparently causing any damage to the host. Some endophytic fungi show activity as phytopathogens controller, through competition for nutrients and space or for the production of antibiotics. In addition fungi perform several important functions to the host, the endophytic fungi are potentially useful in agriculture and industry to become a viable alternative for obtaining substances of economic interest, such as enzymes, antibiotics, and other bioactive compounds related to the fungal metabolism. Studies have demonstrated that plant Glycine max is a reservoir for endophytic fungal species and between these species there are decomposers, producers of bioactive compounds, biocontrollers of pathogens and phytopathogenic species. This study aimed to (I) isolate endophytic fungi G. max leaves and roots, identify them by ITS-PCR, which corresponds to the internal transcribed spaces (ITS) and morphological taxonomy; (II) to study the diversity of fungi isolated in culture medium and by denaturing gradient gel elecrophoresis (DGGE); (III) to evaluate the activity of G. max isolated biocontrollers fungi against phytopathogens (Phomopsis sp., Sclerotinia sclerotorium, Fusarium oxysporium, Fusarium solani and Colletotrichum trucatum); (IV) to extract metabolites of the endophytic fungus selected in biocontrol of phytopathogens test (Guignardia mangiferae) and to analyze the antimicrobial compounds by fractionation on silica gel column; (V) to evaluate the differences between isolates of endophytic fungus G. mangiferae collected from different hosts (G. max and Vaccinium virgatum) and geographical regions (Brazil and New Zealand) in relation to the metabolic profile and metabolome. The study was initiated with the isolation of endophytic fungi from G. max, which were characterized based on morphological and molecular characteristics (ribosomal regions ITS1, 5.8 and ITS2). 229 fungi were isolated from G. max, 187 being isolated in leaves and 42 in roots. Fungi as Ampelomyces sp., Cladosporium cladosporioides, Colletotricum gloeosporioides, Diaporthe helianthi, G.mangiferae and Phoma sp. were more frequently isolated from the leaves while the roots predominated fungi like F. oxysporum, F. solani and Fusarium sp. In the analysis of fungi isolated, the richness, Simpson, Shannon and equitability indeces showed the highest values for the leaves in relation to the roots, while the dominance indices were higher in the roots. However, the evaluation through band profile generated by PCR-DGGE technique showed that the richness has been higher in roots than in leaves. Through the paired culture tests between endophytic fungi isolated from G. max and phytopathogenic fungi it was observed that 38.20% were able to inhibit the growth of phytopathogens, one isolated from the species G. mangiferae was able to inhibit the growth of S. sclerotorium and Phomopsis sp. The fungus G. mangiferae was selected for the analysis of metabolites and after the metabolic extraction, the antifungal activity of G. mangiferae was lost. However it was detected antibacterial activity against Staphylococcus aureus and Lactococcus lactis. This fraction containing antibacterial activity was analyzed by LC-MS and specific compounds described and isolated from G. mangiferae (guignardic acid and guignardone I) have not been detected in antibacterial fraction. In the metabolic profile and metabolome analysis by GC-MS and LC-MS between the two isolates of G. mangiferae isolated from different hosts and geographic regions, metabolic changes were observed between the two isolated both through the ion chromatograms and the principal components analysis. Through the metabolic profile and relative intensity of each specific ions detected between two isolates species of the G. mangiferae, the fungus F75 (G. max, Brazil) produced the largest amount of plant hormone GABA and 2,3-butanediol (compound used in synthetic rubber production, solvents and pharmaceutical drugs) while ICMP 15453 (V. virgatum, New Zealand) isolate had a higher production for the antifungal benzofuran. In addition, has been detected a large production of fumaric and malic acid in both isolates. These results demonstrate that there is a great diversity in fungal community associated with G. max and that these endophytic fungi are potentially promising as biocontrollers of phytopathogens and producers of antimicrobial and bioactive compounds. In addition, we find that the same species isolated from different hosts and regions have variations in their metabolisms.

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais A goiabeira (Psidium guajava) é uma cultura de grande importância, destacando-se como uma atividade econômica e social de grande expressão. Nativa da América Tropical, a goiabeira, é amplamente cultivada em todas as regiões do Brasil. A produção da goiabeira tem sido limitada por vários fatores, dentre eles, destacam-se as doenças, com especial ênfase às que ocorrem em pós-colheita. A pinta-preta da goiaba é a doença pós-colheita de maior incidência. As goiabas acometidas pela doença apresentam sintomas que constituem-se, inicialmente, de pontos deprimidos, os quais evoluem rapidamente na superfície dos frutos, de forma concêntrica e tornam-se lesões de coloração escura com diversos pontos negros correspondendo aos sinais do patógeno. Vários trabalhos associam a pinta-preta da goiaba ao fungo Phyllosticta psidiicola entretanto, ainda não existem trabalhos mais abrangentes com estudos taxonômicos mais apurados que investiguem qual o real agente etiológico dessa doença. Além da pinta-preta da goiaba, existem outras doenças de pós-colheita muito comuns causadas por fungos da ordem Botryosphaeriales como a podridão parda associada ao fungo Dothiorella dominicana e a podridão de Lasiodiplodia associada à Lasiodiplodia theobromae. Entretanto, também existe uma carência de estudos mais abrangentes associados a essas doenças. Nos últimos anos novas espécies têm sido propostas a partir de estudos moleculares, evidenciando a existência de um complexo de espécies. Assim, os objetivos deste trabalho foram estudar a etiologia da pinta-preta da goiaba baseada na combinação de características morfológicas e moleculares, verificar o relacionamento das espécies causadoras dessa doença com as espécies endofíticas, estabelecer o posicionamento filogenético das espécies encontradas, bem como comprovar a patogenicidade das espécies associadas. Foram realizadas coletas de goiabas com sintomas de podridões pós- colheita, frutos secos e mumificados nos mercados do município de Viçosa – Minas Gerais e em uma área de cultivo no município de Piraúba – Minas Gerais. Folhas, ramos e frutos sadios foram coletados nesta mesma área, a fim de obter os isolados endofíticos correspondentes a área com elevada ocorrência da doença na pós- colheita. Isolados monospóricos foram obtidos e armazenados. Estes tiveram o DNA extraído e a região TEF1-α amplificada e sequenciada. A partir dos resultados das análises filogenéticas, um isolado representativo de cada espécie foi selecionado para a caracterização morfológica e testes de patogenicidade. Seis espécies de Botryosphaeriales foram identificadas, entre elas, três pertencentes ao gênero Neofusicoccum, uma pertencente ao gênero Phyllosticta e duas espécies de Lasiodiplodia. Entre estas espécies, duas serão propostas como novas (Neofusicoccum sp. e Lasiodiplodia sp.). Todas as espécies foram comparadas morfológica e filogeneticamente, com exceção de Lasiodiplodia sp. que não esporulou em meio de cultura. Todas as espécies tiveram patogenicidade comprovada. Os resultados deste trabalho serão fundamentais para futuros estudos envolvendo medidas de manejo da doença, programas de quarentena e especialmente, para o desenvolvimento de variedades de goiabas resistentes à pinta- preta e outras podridões de frutos. The guava (Psidium guajava) is an fruit crop of great importance, standing out as an economic and social activity of great expression. Native to tropical America, the guava, is widely cultivated in all regions of Brazil. The production of guava has been limited by several factors, specially the diseases, with special emphasis to those that occur in post-harvest. The guava black spot is a post-harvest higher incidence disease. Diseased guavas presents symptoms that are initially depressed points, which are changing rapidly on the surface of the fruit, concentrically and become dark-colored with many black spots corresponding to the signs of the pathogens in the lesions. Several studies associate the black guava spot with the fungus Phyllosticta psidiicola however, there are no more comprehensive work with more accurate taxonomic studies investigating the real causative agent of this disease. Besides the black guava spot, there are other very common post-harvest fungal diseases caused by the order Botryosphaeriales as the brown fruit rot disease associated with Dothiorella dominicana and the Lasiodiplodia rot associated with Lasiodiplodia theobromae. However there is also a lack of more comprehensive studies associated with these diseases. In recent years new species have been proposed based specially on molecular studies, showing the existence of a complex of species. The objectives of this study were to study the etiology of black spot of guava based on a combination of morphological and molecular characteristics, verify the relationship of the species that cause this disease with the endophytic species, establish the phylogenetic position of the species found, as well as prove the pathogenicity of the associated species. Guavas samples were collected with symptoms of post-harvest decay as also dried and mummified fruit disease in Viçosa local markets - Minas Gerais and in a farming area with a high occurrence of the disease after harvesting in the city of Piraúba - Minas Gerais. Healthy leaves, branches and fruits were collected in the same area, in order to get the endophytic isolates from this high incidence area. Single spore isolates were obtained and stored. These has the DNA extracted and TEF1-α region amplified and sequenced. Based on the results of the phylogenetic analysis one isolate of each species was selected for morphological characterization and pathogenicity test. Six species belonging to the Botryosphaeriales were identified, in which three belongs to Neofusicoccum genera, one belongs to the genera Phyllosticta and two species of Lasiodiplodia. Among these species, two will be proposed as new (Neofusicoccum sp. and Lasiodiplodia sp.). All species were compared morphologically and phylogenetically except Lasiodiplodia sp. since it was not sporulating in culture. All species proved to be pathogenic. Despite its importance, the etiology of black spot and other post-harvest fruit rot diseases has been neglected and remained obscure for a long time. The results of this work will be critical for future studies involving disease management, quarantine programs and especially for the development of guava varieties resistant to the black spot and others post-harvest fruit rot diseases.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior A atividade fúngica, principalmente durante o armazenamento, pode levar a rápida deterioração na qualidade nutricional dos grãos, e reduzir seu aproveitamento industrial. No Brasil, não há fungicidas registrados pelo MAPA para o tratamento pós-colheita de grãos de arroz. Deste modo, é de fundamental importância o controle dos fungos nas unidades armazenadoras, com a finalidade de resolver os problemas associados à qualidade final deste produto. Dentre as tecnologias apontadas como promissoras no controle desses microrganismos, destaca-se a ozonização. O ozônio é um poderoso agente oxidante que promove efeitos de oxidação e destruição da membrana citoplasmática e parede celular. Objetivou-se com este trabalho determinar a concentração e o tempo de saturação do gás ozônio na massa de grãos de arroz, definir o tempo de ozonização eficaz para a desinfecção microbiológica dos grãos, bem como avaliar o efeito do processo de ozonização nas características qualitativas do produto. Foram utilizados grãos de arroz, com teor de água de 14,3% b.u., que foram previamente inoculados com uma suspensão de conídios dos gêneros Penicillium spp e Aspergillus spp. O processo de ozonização foi feito utilizando-se 500 g de grãos, que foram acondicionados em recipientes cilíndricos de PVC (15 x 25 cm), com conexões para injeção e exaustão do gás. O mesmo foi aplicado na concentração de 10,13 mg L-1, em fluxo contínuo de 1,0 L min -1. Foram estabelecidos cinco períodos de exposição (12, 24, 36, 48 e 60 h) para avaliar o efeito do gás na desinfecção microbiológica e na qualidade dos grãos de arroz. Para o controle, os grãos de arroz foram submetidos ao tratamento com ar atmosférico, nas mesmas condições que o tratamento com ozônio. Com a finalidade de reduzir o ressecamento dos grãos, fez-se necessário a passagem do gás por uma solução saturada de Cloreto de Sódio (NaCl, 75% de UR). A quantificação de fungos filamentosos e leveduras em meio de cultura e o índice de ocorrência dos gêneros Aspergillus e Penicillium nos grãos foram avaliadas por dois métodos. O primeiro método foi o da contagem em placas para fungos filamentosos e leveduras, em que 25 g de grão foram homogeneizados em 225 mL de solução salina peptonada a 0,1% e após diluições em série (10-1, 10-2, 10-3 e 10-4), foram plaqueados em meio de cultura BDA acidificado. O segundo, o plaqueamento direto sobre papel de filtro (Blotter test) foi realizado utilizando-se 400 grãos dispostos individualmente sobre uma camada de papel filtro umedecido no interior de gerbox. Ao final de cada período de exposição, os grãos de arroz foram avaliados quanto ao teor de água, à condutividade elétrica e à porcentagem de germinação. Observou-se que a concentração e o tempo de saturação do gás ozônio nos grãos de arroz foi de 5,0075 mg L-1 e 13,97 min, respectivamente. Ocorreu redução em 3,8127 ciclos log na contagem de fungos filamentosos e leveduras nos grãos ozonizados. Quanto ao índice de ocorrência de Aspergillus spp e Penicillium spp, o ozônio foi eficiente, pois não houve crescimento de fungos nos grãos, no período de exposição de 60 h. Com relação às características qualitativas, verificou-se que o ozônio reduziu o teor de água e a porcentagem de germinação e elevou a condutividade elétrica. Houve o efeito fungicida do gás ozônio em grãos de arroz. Fungal activity, especially during storage, can lead to rapid deterioration in the nutritional quality of grains, and reduce its industrial use. In Brazil, there are no fungicides registered in MAPA for post-harvest treatment of rice grains. Thus, this has a fundamental importance in the control of fungi storage units, in order to solve the problems associated with the quality of the final product. Among the technologies identified as promising for the control of microorganisms, there is ozonation. Ozone is a powerful oxidizing agent that promotes effects of oxidation and destruction of cytoplasmic membrane and cell wall. The objective of this work to determine the concentration and the ozone gas saturation time in the mass of grains of rice, set the time effectively ozonation for microbiological disinfection of grains as well as assess the effect of ozonation process in the qualitative characteristics of product. Rice grains were used, with a water content of 14.3% wb, which were previously inoculated with a spore suspension of Penicillium spp and Aspergillus spp. The ozonation process was done by using 500 g of grains, which were packed in cylindrical PVC containers (15 x 25 cm) with connections for gas injection and exhaust. The same was applied to the concentration of 10.13 mg L-1 bitstream of 1.0 L min-1. Five periods of exposure have been established (12, 24, 36, 48 and 60 h) to assess the effect of gas on the microbiological disinfection and in the quality of rice grains. For the control, rice grains were subjected to treatment with atmospheric air, the same conditions as treatment with ozone. In order to reduce the drying of the grain, it was necessary to pass the gas through a saturated solution of Sodium Chloride (NaCl, 75% RH). Quantification of filamentous fungi and yeasts in the culture medium and the rate of occurrence of the genera Aspergillus and Penicillium the grains were evaluated by two methods. The first method was the plate count for filamentous fungi and yeasts, in which 25 g of grain were homogenized in 225 mL of saline peptone and 0.1% after serial dilutions (10-1, 10-2, 10-3 and 10-4) were plated in medium acidified PDA culture. The second, direct plating on filter paper (Blotter test) was conducted using 400 grit individually arranged on the moistened filter paper layer inside seedling. At the end of each exposure period, rice grains were evaluated for water content, electrical conductivity and germination percentage. It was observed that ozone concentration and gas saturation time in the rice grains was 5.0075 mg L-1 and 13.97 min, respectively. There was reduction of 3.8127 log cycles in th count of filamentous fungi and yeasts in ozonized grains. As for the rate of occurrence of Aspergillus spp and Penicillium spp, ozone was very efficient because there was no growth of fungi in grains, in the exposure period of 60 h. Regarding qualitative characteristics, it was found that ozone reduced the water content and the percentage of germination and increased electrical conductivity. There was the fungicidal effect of ozone gas in rice grains.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico A mangueira (Mangifera indica L.) ‘Ubá’, bastante conhecida na região da Zona da Mata mineira, possui grande importância econômica e social para a região e excelentes características organolépticas. Contudo, os trabalhos de pesquisa com a manga ‘Ubá’ são ainda escassos, em todas as áreas do conhecimento. Com este trabalho, objetivou-se estudar o desenvolvimento natural das inflorescências e do fruto; determinar o número de unidades de calor necessário para o completo desenvolvimento do fruto, o ponto ideal de colheita do fruto, o melhor tempo de exposição ao etileno exógeno e ao acetileno visando à indução do amadurecimento e a temperatura ideal de amadurecimento; e avaliar o efeito de produtos alternativos aos agrotóxicos convencionais no controle da antracnose (Colletrotrichum gloeosporioides) na pós- colheita do fruto. Para atingir esses objetivos, foram conduzidos cinco experimentos a partir de julho de 2010. O período da antese até o completo amadurecimento foi de 161 dias, com acúmulo de 2.629 unidades de calor. As inflorescências apresentaram, em média, 77,21 flores hermafroditas e 1.557,15 masculinas. Frutos colhidos a partir da 17a semana após a antese completaram o amadurecimento de forma aceitável, mas a melhor qualidade foi obtida com frutos colhidos a partir da 19a semana depois da antese. Frutos expostos ao etileno e ao acetileno por períodos de 12 ou 24 horas completaram seu amadurecimento de forma satisfatória em cerca de nove dias. Entretanto, o período de exposição de 48 horas fez com que os frutos adquirissem características indesejáveis do ponto de vista nutricional e comercial. Em temperaturas de 19 e 22 oC, o amadurecimento da manga ‘Ubá’ ocorre de forma mais rápida, porém há perda de qualidade e os frutos são mais sensíveis a podridões. A 16 oC, o amadurecimento ocorre de forma mais lenta e os frutos apresentam melhor qualidade para comercialização e consumo. Produtos alternativos, como óleo de amêndoa de macaúba com LPI (leite em pó integral) ou com Tween (agente dispersante), retardam a incidência e são mais eficientes em conter a colonização do fungo causador da antracnose em manga ‘Ubá’. The mango tree (Mangifera indica L.) ‘Ubá , well known in the Zona da Mata region, has great economic and social importance for the region and excellent organoleptic characteristics. However, research studies on ‘Ubá’ mangoes are still scarce in all areas of knowledge. This work aimed to study natural flowering and fruit development; determine the number of heat units required for full fruit development, optimal harvest time, best exposure time to ethylene and acetylene for induction of ripening, and optimal ripening temperature. Another objective was to evaluate the effect of alternatives to conventional pesticides on the control of anthracnose (Colletrotrichum gloeosporioides) at post-harvest. To achieve these goals, five experiments were conducted starting in July 2010. The period from anthesis to full ripening was 161 days, with accumulation of 2,629 heat units. On average, the inflorescences showed 77.21 hermaphrodite and 1557.15 male flowers. Fruit whose harvest started on the 17th week after anthesis ripened adequately, but fruits had the best quality when picked on the 19th week after anthesis or later. Fruits exposed to ethylene and acetylene for periods of 12 or 24 hours ripened satisfactorily in about nine days. However, the 48 hour exposure period caused the fruits to acquire undesired characteristics from a nutritional and commercial point of view. At 19 and 22 oC, ‘Ubá’ mangoes ripen more quickly; however, there is loss of quality and the fruits are more sensitive to rots. At 16 oC, ripening is slower and the fruits have better quality for commercialization and consumption. Alternative products, such as macaúba almond oil with WMP (whole milk powder) or Tween (dispersing agent), delay the incidence and refrain the colonization of the fungus that causes anthracnose in 'Uba' mangoes more effectively.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior A presença de arsênio (As) e a elevada salinidade de alguns rejeitos oriundos do processo de mineração de ouro dificultam as ações de revegetação dos locais de deposição desses materiais. Assim, o objetivo deste trabalho foi o de isolar e caracterizar fungos rizosféricos que contribuam para o crescimento de Crotalaria spectabilis Roth. em condições de elevada salinidade e disponibilidade de As, comuns nos rejeitos da mineração do ouro. Os isolados foram obtidos a partir da rizosfera de gramíneas cultivadas em bacias com diferentes tipos de rejeitos denominados ‘rejeito B1’ ‘rejeito B2’ e ‘Blend’, no Município de Paracatu, MG. O rejeito B1 corresponde a um substrato mais intemperizado, com menor teor de sulfetos; o rejeito B2 é substrato pouco intemperizado, com maior teor de sulfetos; e o Blend é oriundo do processamento dos dois substratos juntos. Foram obtidos 227 isolados fúngicos a partir da rizosfera de plantas cultivadas nesses substratos, dos quais 57 foram selecionados segundo características morfológicas distintas. Em um primeiro experimento, quando inoculados no sistema radicular de C. spectabilis, cultivada em mistura de solo e areia, 7:3 (v/v), os isolados 8, 27, 31, 33, 44, 45, 49, 50, 54 e 57 promoveram incrementos de até 65,8 % da matéria seca total das plantas em comparação ao controle, sem inoculação. Esses dez isolados fúngicos expressaram mecanismos de promoção de crescimento vegetal in vitro, tais como a produção de ácido indol-3-acético (AIA) e de giberelinas (GAs) e a solubilização de fosfatos. A produção máxima de AIA foi de 23 mg L -1 , obtida pelo isolado 27. O isolado 44 teve produção de 45,4 mg L -1 de GAs. A fonte de fosfato inorgânico mais solubilizada foi o fosfato de cálcio, com valores entre 47 e 655 mg L -1 de P solubilizado. Em um segundo experimento, foi testada a capacidade de promoção de crescimento de C. spectabilis dos isolados inoculados no sistema radicular da planta cultivada em solo (Latossolo) e nos rejeitos B1, B2, Blend e Mix (mistura de areia com B2 na proporção 8:2, v/v). Os dez isolados fúngico selecionados promoveram diferenças significativas na produção de matéria seca das plantas, a depender do substrato utilizado para o cultivo. No Latossolo, o isolado 57 teve o melhor desempenho. No rejeito B1 e B2, os isolados 31, 33 e 49 proporcionaram maior aumento da produção de matéria seca total. No substrato Blend, os melhores isolados foram o 27, 44 e 57. Já no substrato denominado Mix, os isolados que demonstraram maior capacidade de promoção do crescimento de C. spectabilis foram o 33, 49 e 57. Esses resultados indicam a necessidade de seleção prévia dos microrganismos com maior potencial para um dado local ou substrato. O uso de fungos promotores de crescimento de planta é uma estratégia promissora para a revegetação de áreas de deposição dos rejeitos da mineração do ouro. The presence of arsenic (As) and the high salinity of gold mine tailings make it difficult to reclaim mined sites and tailing deposits. Thus, the objective of this work was to isolate and characterize rhizospheric fungi capable of promoting Crotalaria spectabilis Roth. growth under high salinity and As availability prevalent in the gold mine tailings. The fungal isolates were obtained from the rhizosphere of plants grown in different tailings, namely B1, B2, and Blend, at Paracatu, MG, Brazil. The B1 tailing corresponds to a weathered substrate, with low sulfite content; the B2 tailing is a less weathered substrate than B1 and contains high sulfite levels; the Blend results from the processing of B1 and B2 simultaneously. A total of 227 fungal isolates were obtained, from which 57 were selected based on distinct morphological traits. In a first experiment, when the selected isolates were inoculated onto the roots of C. spectabilis, grown in a soil:sand mixture, 7:3 (v/v), the isolates 8, 27, 31, 33, 44, 45, 49, 50, 54, and 57 promoted increases in total dry matter of up to 65.8% in comparison to the control, without inoculation. These isolates were also capable of expressing plant growth promoting mechanisms in vitro, such as indol-3-acetic acid (IAA) and gibberellin (GAs) production and phosphate solubilization activity. The maximum production of AIA was 23 mg L -1 by the isolate 27. The isolate 44 produced 45.4 mg L -1 of GAs. The solubilization of calcium phosphate varied from 47 to 655 mg L -1 soluble P. In a second experiment, the inoculation of C. spectabilis roots, grown in a soil substrate (Oxysol), B1, B2, Blend or Mix (sand and B2 at 8:2, v/v), with the ten selected isolates promoted significant differences in total dry matter production that varied according to the substrate used for plant growth. In the Oxysol, isolate 57 had the best performance. In B1 and B2, the isolates 31, 33, and 49 promoted the highest increases in total dry matter. In the Blend substrate, the best isolates were 27, 44, and 57. In the Mix, the isolates that showed the highest growth promoting capacity were 33, 49, and 57. Our results indicate the need to previously select the adequate microorganisms with the highest potential of use for a given location or substrate. The use of plant growth promoting fungi is a promising strategy for the reclamation mined sites and tailing deposits.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior O coqueiro (Cocos nucifera L.) é uma das mais importantes culturas tropicais perenes, por possibilitar a geração de um sistema sustentável de exploração comercial. O Brasil é o quarto maior produtor mundial de coco, atrás da Indonésia, Filipinas e da Índia. A produção do coqueiro é limitada por vários fatores, dentre eles, destacam-se as doenças. A podridão-peduncular é a principal doença em pós-colheita a atingir a cultura, causando grandes perdas em todas as regiões produtoras do país. Essa doença ocorre em frutos após a colheita e caracteriza-se como uma podridão negra no pedúnculo, progredindo para todo o fruto. O fungo Lasiodiplodia theobromae é a única espécie relatada associada a essa doença. Entretanto, um estudo acurado desse patógeno como o único agente causal nunca foi realizado. Nos últimos anos novas espécies de Lasiodiplodia têm sido propostas a partir de estudos moleculares, evidenciando a existência de um complexo de espécies. Assim, os objetivos deste trabalho foram estudar a etiologia da podridão-peduncular do coco baseada na combinação de características morfológicas e moleculares, estabelecer o posicionamento filogenético das espécies encontradas, bem como comprovar a patogenicidade dos isolados. Foram realizadas coletas de cocos verdes com sintomas da doença em mercados no município de Viçosa/MG. Em adição a esses, foram obtidos isolados dos estados da Bahia, Ceará e Paraíba. Isolados monospóricos foram obtidos e armazenados. Esses tiveram o DNA extraído e a região TEF1-α sequenciada. A partir dos resultados das análises filogenéticas, foi separado um isolado de cada espécie para a caracterização morfológica e teste de patogenicidade. Seis espécies de Lasiodiplodia foram identificadas, sendo elas L. egyptiacae, L. pseudotheobromae, L. theobromae, L. viticola e duas a serem propostas como novas (Lasiodiplodia sp. 1 e Lasiodiplodia sp. 2). Todas as espécies distinguiram-se morfologicamente e filogeneticamente das demais e tiveram a patogenicidade comprovada. Apesar da sua importância, a etiologia da podridão- peduncular do coco foi tradicionalmente negligenciada pela ciência e permaneceu obscura por muito tempo. Neste trabalho são relatadas três espécies diferentes de Lasiodiplodia associadas à podridão-peduncular do coco e também relata-se a ocorrência de outras duas espécies que são aqui descritas e serão posteriormente propostas como novas. Os resultados deste trabalho serão fundamentais para futuros estudos envolvendo medidas de manejo da doença, programas de quarentena e especialmente, para o desenvolvimento de variedades de coco resistentes à podridão- peduncular. The coconut palm (Cocos nucifera L.) is one of the most important perennial tropical crops. Brazil is the fourth largest producer of coconut, after Indonesia, Philippines and India. Coconut production is limited by several factors, including diseases. Stem-end rot is the major postharvest disease of coconut in Brazil, causing great losses in all producing regions. This disease occurs in fruits after harvest and starts as a black rot in the peduncle that progresses to the entire fruit. The fungus Lasiodiplodia theobromae is the only species reported associated with this disease. However, an accurate study of this pathogen as the sole causal agent has never been carried out. In recent years, new species of Lasiodiplodia have been proposed after molecular studies, have demonstrated the existence of a species complex behind L. theobromae. Here the etiology of stem-end rot of C. nucifera was studied based on a combination of morphological characteristics with TEF1-α sequence data, aimed at re-evaluating the phylogenetic position of Lasiodiplodia involved in this disease and to assess the pathogenicity of the taxa found. Green coconuts with stem-end rot symptoms and signs of the pathogen were collected in Viçosa, state of Minas Gerais. In addition, isolates were obtained from Bahia, Ceará and Paraíba states. Single-spore cultures were obtained and stored. These had their DNA extracted and their TEF1-α region was sequenced. From the results of the phylogenetic analyses, one isolate of each species was separated for the morphological characterization and pathogenicity tests. Six species were identified: Lasiodiplodia egyptiacae, L. pseudotheobromae, L. theobromae, L. viticola and two will be proposed as new species (Lasiodiplodia sp. 1 and Lasiodiplodia sp. 2). All species were distinguished morphologically and phylogenetically and were proven to be pathogenic to coconut. Despite its importance, the etiology of stem-end rot of coconut has been traditionally neglected by science and remained somewhat obscure. This work resulted the first reports worldwide of the presence of three different species of Lasiodiplodia as causal agents of stem-end rot of coconut. Additionally, two previously undescribed species, which will be proposed as new, were found. Little has been investigated about the Lasiodiplodia complex in Brazil. The results of this study may be helpful for further studies on management measures, quarantine programs or on development of stem-end rot resistant coconut varieties.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Fungi belonging to the genus Gibellula are found parasitizing spiders and have wide distribution in tropical and subtropical regions of the planet. This genus is spider specific and it is believed that this specificity is related to infection mechanism that probably acts at the level of the exoskeleton. Although many reports and descriptions of Gibellula spp. in the literature, there is no approach to the ecology of these natural enemies of spiders. Moreover, the knowledge of this kind in Brazil is extremely scarce. Therefore the aim of this study was to conduct a survey of the species of Gibellula in Research, Training and Environmental Education Mata do Paraiso, Viçosa - MG station, and to make a study of classical taxonomy, and establish relationships between host-pathogen interaction. Were performed collections in different areas of the forest in order to favor the detection of greater quantity and diversity of these fungi. The mummified spiders were identified to better understand the host-pathogen relationship. Were collected a total of 79 parasitized spiders that were distributed in ten families (Anyphaenidae, Araneidae, Corinnidae, Linyphiidae, Pholcidae, Salticidae, Sparassidae, Theridiidae, Thomisidae, Zodariidae), the most frequent Anyphaenidae (25.3%) and Pholcidae (26.6 %). Of the 79 fungi specimens collected, 20 ( 25.3%) were isolated and kept in pure culture. Among them nine species of Gibellula were identified, including Gibellula dimorpha was first reported in Brazil , and five new species will be proposed. Fungos pertencentes ao gênero Gibellula são encontrados parasitando aranhas e possuem ampla distribuição pelas regiões tropicais e subtropicais do planeta. Este gênero é específico de aranhas e acredita-se que essa especificidade esteja relacionada ao mecanismo de infecção que provavelmente atua em nível de exoesqueleto. Apesar de diversos relatos e descrições de Gibellula spp. na literatura, não há nenhuma abordagem relativa a ecologia desses inimigos naturais em aranhas. Além disso, o conhecimento a respeito desse gênero no Brasil é extremamente escasso. Portanto o objetivo deste trabalho foi conduzir um levantamento das espécies de Gibellula na Estação de Pesquisas, Treinamento e Educação Ambiental Mata do Paraíso, Viçosa-MG, bem como efetuar um estudo de taxonomia clássica, e estabelecer relações de interação entre patógeno-hospedeiro. Foram realizadas coletas em diferentes áreas da mata de forma a favorecer a detecção de maior quantidade e diversidade desses fungos. As aranhas mumificadas foram identificadas para melhor compreensão da relação patógeno-hospedeiro. Foram coletadas um total de 79 aranhas parasitadas que se distribuíram em dez famílias (Anyphaenidae, Araneidae, Corinnidae, Linyphiidae, Pholcidae, Salticidae, Sparassidae, Theridiidae, Thomisidae, Zodariidae), sendo as mais frequentes Anyphaenidae (25,3%) e Pholcidae (26,6%). Dos 79 espécimes de fungos coletados, 20 (25,3%) foram isolados e mantidos em cultura pura. Dentre eles, nove espécies de Gibellula foram identificadas, entre as quais Gibellula dimorpha foi relatada pela primeira vez no Brasil, e cinco espécies novas serão propostas.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Endophytic fungi are those living at least a part of their life cycle within plant tissue, apparently without causing any damage to their hosts. These microorganisms have been studied for their capacity to produce secondary metabolites of biotechnological interest, and also for their ability for biological control of phytopathogens. Endophytic fungi have been isolated from a wide variety of plant species, including crops such as common bean (Phaseolus vulgaris L.). Fungi from the genus Diaporthe were abundant in the endophytic community of this legume. The objectives of this study were to evaluate the antimicrobial activity and the potential use of endophytic fungi of P. vulgaris in the control of phytopathogens of bean, and to analyze phylogenetic relationships and genetic variability of endophytic fungi of the genus Diaporthe isolated from P. vulgaris. Dual culture assays were performed between ninety endophytic fungi and four phytopathogenic fungi (Colletotrichum lindemuthianum, Fusarium oxysporum, Rhizoctonia solani and Sclerotinia sclerotiorum) to assess for the ability of endophytic fungi inhibit the growth of phytopathogens. The isolates that were able to inhibit the four phytopathogens tested were selected for cultivation and obtention of metabolites crude extracts. These extracts were evaluated for antibacterial and antifungal activity. The sequences of the ITS region of rDNA of the isolates of the genus Diaporthe from common bean, along with the partial sequences of the genes encoding translation elongation factor 1-α, β-tubulin and calmodulin were used for the study of the phylogenetic relationships of these isolates. Molecular markers based on sequences of retrotransposons, IRAP (Inter-Retrotransposon Amplified Polymorphism) and REMAP (Retrotransposon-Microsatellite Amplified Polymorphism), were used for the analysis of genetic variability. It was found that endophytic fungi of common bean are able to inhibit the in vitro growth of phytopathogenic fungi and that metabolites crude extracts of endophytic exhibit significant antimicrobial activity especially regarding the inhibitory activity against Gram-positive bacteria (Listeria monocytogenes, Bacillus cereus, B. subtilis and Staphylococcus aureus). Diaporthe sp., D. infecunda, D. melonis and D. phaseolorum are members of the endophytic fungal community in the common bean as verified by multilocus phylogenetic analysis. Cluster analysis, conducted with pooled data from IRAP and REMAP markers, was consistent regarding what was observed in multilocus phylogeny and revealed the existence of high genetic variability, particularly among isolates of D. infecunda. It was concluded that the metabolites crude extracts of endophytic fungi of common bean exhibit promising antimicrobial activity; that endophytic fungi used in this study have the potential to control phytopathogens that affect the bean crop; the multilocus phylogenetic approach was more effective than individual analysis of ITS sequences in the study of phylogenetic relationships of endophytic fungi of the genus Diaporthe from common bean and that IRAP and REMAP markers can be employed in the study of genetic variability of this genus of fungi. Fungos endofíticos são aqueles que vivem, em pelo menos uma parte de seu ciclo de vida, no interior de tecidos vegetais, sem causar aparentemente qualquer dano a seus hospedeiros. Esses micro-organismos têm sido estudados em relação à capacidade de produzirem metabólitos secundários de interesse biotecnológico e quanto ao potencial de controle biológico de fitopatógenos. Fungos endofíticos já foram isolados de uma ampla variedade de espécies vegetais, incluindo culturas agrícolas como o feijoeiro comum (Phaseolus vulgaris L.). O gênero Diaporthe foi um dos mais abundantes na comunidade endofítica dessa leguminosa. Os objetivos do presente estudo foram avaliar a atividade antimicrobiana e o potencial de uso de fungos endofíticos de P. vulgaris no controle de fitopatógenos da cultura do feijoeiro e analisar as relações filogenéticas e a variabilidade genética de fungos endofíticos do gênero Diaporthe isolados de P. vulgaris. Ensaios de cultura dupla entre 90 isolados endofíticos e quatro fungos fitopatogênicos (Colletotrichum lindemuthianum, Fusarium oxysporum, Rhizoctonia solani e Sclerotinia sclerotiorum) foram realizados para verificar a capacidade dos isolados endofíticos inibirem o crescimento dos fitopatógenos. Os isolados que foram capazes de inibir os quatro fitopatógenos testados foram selecionados para cultivo e obtenção de extratos brutos de metabólitos. Esses extratos foram avaliados quanto à atividade antibacteriana e antifúngica. As sequências da região ITS do rDNA dos isolados do gênero Diaporthe do feijoeiro, juntamente com as sequências parciais dos genes codificam o fator de elongação da tradução 1-α, β-tubulina e calmodulina, foram utilizadas para o estudo das relações filogenéticas desses isolados. Marcadores moleculares baseados em sequências de retrotransposons, IRAP (Inter-Retrotransposon Amplified Polymorphism) e REMAP (Retrotransposon-Microsatellite Amplified Polymorphism), foram utilizados para a análise de variabilidade genética. Foi constatado que os fungos endofíticos do feijoeiro comum são capazes de inibir o crescimento in vitro de fungos fitopatogênicos e, que extratos brutos de metabólitos de isolados endofíticos exibem atividade antimicrobiana significativa, principalmente em relação à atividade inibitória sobre bactérias Gram-positivas (Listeria monocytogenes, Bacillus cereus, B. subtilis e Staphylococcus aureus). Por meio de análise filogenética multilocus, verificou-se que Diaporthe sp., D. infecunda, D. melonis e D. phaseolorum são integrantes da comunidade fúngica endofítica do feijoeiro comum. A análise de agrupamento, realizada com os dados dos marcadores IRAP e REMAP em conjunto, foi coerente em relação ao que foi verificado na filogenia multilocus e, revelou a existência de grande variabilidade genética, sobretudo entre os isolados de D. infecunda. Concluiu-se que extratos brutos de metabólitos de fungos endofíticos do feijoeiro exibem atividade antimicrobiana promissora; que fungos endofíticos utilizados neste estudo apresentam potencial para controle de fitopatógenos que acometem a cultura do feijoeiro; que a abordagem filogenética multilocus foi mais efetiva que análise individual de sequências de ITS no estudo das relações filogenéticas de fungos endofíticos do gênero Diaporthe do feijoeiro e que marcadores IRAP e REMAP podem ser empregados no estudo de variabilidade genética de fungos desse gênero.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Maize (Zea mays L.) is an important crop in world agriculture, but its production is limited by several factors, including diseases. Anthracnose stalk rot caused by Colletotrichum graminicola is one of the widely distributed diseases in corn, causing plant lodging or premature death and reduced quality and grain weight. Estimate the intensity of this disease is very important to evaluate the different control measures, such as genetic resistance. With this, were validated a diagrammatic scale, containing illustrations of stalk internode with eight severity levels. With the scale, the assessments perfomed by all raters were closer to the actual value and most deviations in errors were concentrated in the range of 10%. Moreover, when checking the reliability of the estimate of disease severity, 100% of the comparisons resulted in R2 > 0.90. The scale proposed improved accuracy, precision and reproducibility of the estimates of anthracnose stalk rot severity and may be recommended for plant breeding for resistance, epidemiological studies, characterization of isolates of C. graminicola and other studies involving this pathosystem. To identify molecular markers SNP (Single Nucleotide Polymorphism) associated with resistance to anthracnose stalk rot, F2:3 progenies were phenotyped in the field, where were selected 20 resistant and 20 susceptible progenies to disease. At greenhouse, plants with severity ≤ 18.8% (within the 19 resistant progenies) and severity ≥ 56.3 % (within the 20 susceptible progenies), in addition hybrid, were selected for DNA extraction and genotyping. Linear regression analysis was performed to identify markers significantly associated with resistance to anthracnose stalk rot. Eight SNP markers with additive genetic effect and four with dominance genetic effect were detected associated with resistance to anthracnose stalk rot. The additive effects explained between 18 and 23% of the phenotypic variation and the dominance effects explained between 18 and 35%. Future studies should be conducted to validate these markers, checking the potential in use marker- assisted selection in maize breeding programs. Aiming to compare the reaction of the leaf and stalk of maize to anthracnose, five experiments were conducted at greenhouse to evaluate anthracnose leaf blight and five to anthracnose stalk rot. The correlation was positive and significant only for the most susceptible hybrids BRS1010 and P3862, however, for the most resistant hybrids 2B710, 2B707 and P30F35, there were no correlation. The results indicated that the genotypes more resistant to anthracnose have no correlation between reaction in the leaf and stalk, evidencing the lack of relationship in resistance mechanisms between these two organs. With this, it is recommended to first verify the reaction of leaf and stalk for adoption of maize cultivars in regions and seasons where the disease occurs. Based on the results, verify that studies of resistance inheritance to anthracnose and about physiological races of C. graminicola should be conducted to leaf and stalk separately. Furthermore, verify that per genetic breeding, cultivars with resistance to anthracnose leaf blight and anthracnose stalk rot can be developed. O milho (Zea mays L.) é uma das principais culturas da agricultura mundial, mas sua produção é limitada por vários fatores, dentre estes, as doenças. A antracnose do colmo causada por Colletotrichum graminicola é uma das doenças amplamente distribuídas em cultivos de milho, causando o acamamento ou morte prematura das plantas e redução na qualidade e peso dos grãos. Estimar a intensidade dessa doença é muito importante para avaliar as diferentes medidas de controle, como a resistência genética. Com isso, foi validada uma escala diagramática, contendo ilustrações de entrenó de colmo com oito níveis de severidade. Com a escala, as avaliações realizadas por todos os avaliadores foram mais próximas para o valor real e a maioria dos desvios em erros foi concentrada no intervalo de 10%. Além disso, ao verificar a confiabilidade da estimativa da severidade da doença, 100% das comparações resultaram em R2 > 0,90. A escala proposta melhorou a acurácia, precisão e reprodutibilidade das estimativas de severidade da antracnose do colmo, podendo ser recomendada para o melhoramento de plantas visando à resistência, estudos epidemiológicos, caracterização de isolados de C. graminicola e outros estudos envolvendo esse patossistema. Para identificar marcadores moleculares SNP (Single Nucleotide Polymorphism) associados com resistência à antracnose do colmo, progênies F2:3 foram fenotipadas em campo, onde foram selecionadas 20 progênies resistentes e 20 suscetíveis à doença. Em casa-de-vegetação, plantas com severidade ≤ 18,8 % (dentro de 19 progênies resistentes) e com severidade ≥ 56,3 % (dentro de 20 progênies suscetíveis), além do híbrido, foram selecionadas para a extração de DNA e genotipagem. Análise de regressão linear foi realizada para identificar os marcadores significativamente associados com resistência à antracnose do colmo. Oito marcadores SNP com efeito genético aditivo e quatro com efeito genético de dominância foram detectados associados com resistência a antracnose do colmo. Os efeitos aditivos explicaram entre 18 e 23% da variação fenotípica e os efeitos de dominância explicaram entre 18 e 35%. Estudos futuros devem ser realizados para validação desses marcadores, verificando o potencial na utilização em seleção assistida em programas de melhoramento de milho. Objetivando comparar a reação da folha e do colmo de milho à antracnose, cinco experimentos foram conduzidos em casa-de-vegetação para avaliar a antracnose foliar e cinco para antracnose do colmo. A correlação foi positiva e significativa somente para os híbridos mais suscetíveis BRS1010 e P3862, entretanto, para os híbridos mais resistentes 2B710, 2B707 e P30F35, não existiu correlação. Os resultados indicaram que os genótipos mais resistentes à antracnose não possuem correlação entre reação na folha e no colmo, evidenciando a não existência de relação nos mecanismos de resistência entre esses dois órgãos. Com isso, é recomendável verificar primeiro a reação da folha e do colmo para adoção de cultivares de milho em regiões e épocas onde essa doença ocorre. Com base nos resultados, verifica-se que estudos de herança da resistência à antracnose e sobre raças fisiológicas de C. graminicola devem ser conduzidos para folhas e colmo, separadamente. Além disso, verifica-se que por meio de melhoramento genético, podem ser desenvolvidos cultivares com resistência à antracnose foliar e de colmo.

The foliar anthracnose of rubber tree causes necrotic lesions and wrinkling of the leaflets, which can lead to premature defoliation, reducing leaf area. Since the first reports of occurrence of anthracnose, several species of Colletotrichum have been listed as its purported causal agent. However, in Brazil, no study has been conducted for this purpose. For this reason, the objectives of the present study were: to generate information about the identity of the causal agent of foliar anthracnose of rubber tree by morphological and molecular phylogenetic analyses; and to develop procedures for the molecular diagnosis of Colletotrichum spp. associated with the disease. Isolates belonging to three complexes of Colletotrichum species were found: C. acutatum complex; C. gloeosporioides complex; and C. boninense complex. Primers were designed based on the glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) region which allowed the amplification of specific bands for Colletotrichum associated with each of the three species complexes. Os sintomas da antracnose foliar da seringueira são tipicamente lesões necróticas que podem causar o enrugamento dos folíolos e, em etapas avançadas, a desfolha prematura, reduzindo a área foliar. Desde o relato inicial da doença, várias espécies de Colletotrichum são mencionadas como sendo o agente etiológico. No Brasil, até o momento, nenhum estudo foi realizado com o propósito de identificar as espécies associadas à antracnose foliar da seringueira. Por essa razão, estabeleceu-se como objetivo gerar informações acerca da natureza do agente etiológico da antracnose da seringueira, mediante caracterização morfológica e análises filogenéticas moleculares. Outro objetivo foi desenvolver procedimento para o diagnóstico molecular de Colletotrichum spp. associadas à seringueira. Isolados de Colletotrichum spp. foram obtidos de folhas de seringueira, diferentes regiões genômicas foram sequenciadas e as principais características morfológicas de relevância taxonômica foram estudadas. Isolados pertencentes a três complexos de espécies de Colletotrichum foram identificados: complexo C. acutatum; complexo C. gloeosporioides; e complexo C. boninense. Primers desenhados com base na região que codifica para a gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase (GAPDH) permitiram a amplificação de bandas específicas para os isolados de Colletotrichum associados a cada um dos três complexos de espécies mencionados.

Os fungos do gênero Chaetomium colonizam diversos substratos, e muitas espécies apresentam potencial como agente de controlo biológico. Até o momento, a identificação das espécies é baseada em dados morfológicos. O objetivo do presente trabalho é prospecção de isolados de várias espécies do gênero Chaetomium com potencial utilização no controle biológico de sete agentes patogênicos transmissíveis por sementes de soja e trigo. Quarenta e um isolados de Chaetomium foram isolados de solo, sementes e palha no Brasil. Após a caracterização morfológica, o DNA genômico foi extraído para a amplificação do gene ITS. As sequências foram comparadas com sequências no Genbank e outras foram selecionadas para a construção da árvore filogenética. Foram identificadas seis espécies: Chaetomium aureum, C. bostrychodes, C. cupreum, C. funicola, C. globosum, C. reflexum. Este é o primeiro relato de C. reflexum no Brasil e uma espécie é nova para ciência. Mais de uma espécie de Chaetomium podem ocorrer no mesmo substrato, incluindo as espécies de grande interesse no controle biológico de doenças de plantas. Os testes in vitro foram realizados com isolados de Chaetomium para avaliar a inibição de sete importantes agentes patogênicos transmitidos por sementes de soja e trigo: Bipolaris sorokiniana, Colletotrichum truncatum, Diaporthe phaseolorum var. meridionalis, Drechslera tritici-repentis, Fusarium solani, Magnaporthe grisea e Sclerotinia sclerotiorum. Os isolados de C. cupreum foram mais eficientes nos testes in vitro na inibição do crescimento micelial dos patógenos, os quais foram então submetidos a seis meios de cultura diferentes para testar o meio de cultura mais adequado para a produção de ascósporos. O meio de cultura de aveia demonstrou o melhor resultado para a produção de ascósporos. Os outros ensaios foram realizados em casa de vegetação com dois isolados de C. cupreum inoculados em sementes de soja e trigo para avaliação do vigor e a germinação. Foi comprovado que a C. cupreum é endófito em raízes de trigo e inibem o crescimento de agentes patogênicos. As espécies Chaetomium serão utilizadas em futuros programas de controle biológico de fungos transmissíveis por sementes. The fungi of the genus Chaetomium colonize various substrates, and many species have potential as a biological control agent. By the time, the identification of the species is based on morphological data. The aim of this work is prospecting of isolates from several species of the genus Chaetomium with potential use in biological control of seven pathogens transmitted by soybeans and wheat seeds. Forty-one isolates of Chaetomium were isolated from soil, seed and straw in Brazil. After the morphological analyses, genomic DNA was extracted for amplification of the ITS gene. Sequences were compared with sequences in the Genbank and others were selected for the construction of the phylogenetic tree. We identified six species: Chaetomium aureum, C. bostrychodes, C. cupreum, C. funicola, C. globosum and C. reflexum. This is the first report of C. reflexum in Brazil and one species is new to science. More than one species of Chaetomium can occur on the same substrate, including the species of great interest in biological control of plant diseases. In vitro tests were performed with isolates of Chaetomium to evaluate the inhibition of seven important pathogens transmitted by soybean and wheat seeds: Bipolaris sorokiniana, Colletotrichum truncatum, Diaporthe phaseolorum var. meridionalis, Drechslera tritici-repentis, Fusarium solani, Magnaporthe grisea and Sclerotinia sclerotiorum. Isolates of C. cupreum were more effective in vitro tests of inhibition of mycelial growth of pathogens, which were subjected to six different culture media to test the culture medium most suitable for the production of ascospores. The culture medium oats has shown the best results to produce ascospores. The other tests were performed in a greenhouse with two isolates of C. cupreum inoculated in soybean and wheat seeds for evaluation of germination and vigor. C. cupreum demonstrated is endophytic in wheat roots and inhibit the growth of pathogens. The Chaetomium isolates will be used in future programs of biological control of fungi transmitted by seeds.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Coffee is a major export product from Brazil having high importance for the country's economy. Thus, it becomes necessary to develop technologies to improve the Brazilian coffee farming. The main disease problem affecting coffee production is the coffee rust, a disease caused by the biotrophic fungus Hemileia vastratrix. The use of resistant varieties has been one of the main measures used to control the disease. One of the most used sources to obtain resistant varieties is the Híbrido Timor. Hence, the characterization the and understanding of the resistance of available accessions of Híbrido Timor to H. vastratrix are essential for the comprehension of the genetic basis of the resistance to this disease and to assist in the choice of genotypes to be used in breeding programs aimed at obtaining cultivars with durable resistance to rust. In this work, the germplasm bank of the Federal University of Viçosa, containing 152 accessions of Híbrido Timor and 6 genotypes from the EPAMIG breeding program were molecularly characterized and analyzed for resistance to two races of H. vastratrix, namely II and XXXIII. For the molecular characterization, 29 microsatellite primers were used and 92 bands were obtained with an average of 3.17 bands per primer. Of the 92 total bands obtained, 75 were polymorphic. Five primer combinations of AFLP were utilized by which 126 polymorphic bands were obtained with an average of 25.2 bands per combination of primer. Using only the data from microsatellite markers and the grouping based on the arithmetical complements of Jaccard and the UPGMA method, it was possible to separate 151 genotypes. Seven accessions did not differ, namely UFV 450-06, UFV450-12, UFV 428-01, UFV 428-02, UFV427-15, UFV427-90 and UFV428-04. By adding the data from the dominant markers AFLP, it was possible to separate these individuals, not only discriminating the accessions 427-90 and 428-04. It was possible to determine a unique molecular pattern (fingerprinting) for each individual using 58 marks. For the phenotypic characterization, the races II and XXXIII were inoculated in the152 accessions Híbrido Timor and 6 genotypes improving EPAMIG. All accessions were resistant to race II, which shows that the accessions may have either only one resistance gene, but not SH5, or more than one gene which may be any combination of SH 5, 6, 7, 8 e 9. With the race XXXIII, 14 accessions were susceptible. The race XXXIII presents more than one virulence gene which was able to overcome he resistance of the accessions UFV376-01, UFV376-02, UFV 376-08, UFV 376-09, UFV 376-14, UFV 376-37, UFV 377-51, UFV 408-10,UFV 408-18, UFV 432-30, UFV 445- 70, 2 II P6, 12 III P6 and 22 IV P6. This accessions contain the genes SH5,7 or SH 5,7 e 9. We conclude that 140 accessions of Híbrido Timor remain a good source of resistance to the races II and XXXIII and three materials from the EPAMIG/UFV program were susceptible the race XXXIII. O café representa um dos principais produtos de exportação do Brasil possuindo elevada importância para a economia do país. Dessa forma, torna-se necessário o desenvolvimento de tecnologias que visam melhorar a cafeicultura brasileira. O principal problema fitossanitário que afeta a produção do café é a ferrugem, doença causada pelo fungo biotrófico Hemileia vastatrix. O uso de variedades resistentes tem sido uma das principais medidas utilizadas para controle da doença. Uma das fontes de resistência mais utilizada para obtenção das variedades resistentes é o Híbrido de Timor. Dessa forma, a caracterização e o conhecimento da resistência dos acessos de Híbrido de Timor a H. vastatrix disponíveis é essencial para o entendimento da base genética da resistência a essa doença e para auxiliar na escolha de genótipos para serem usados nos programas de melhoramento que visam a obtenção de cultivares com resistência durável à ferrugem. Neste trabalho, o banco de germoplasma da Universidade Federal de Viçosa, contendo 152 acessos de Híbridos de Timor e 6 genótipos do programa de melhoramento da EPAMIG foram caracterizados molecularmente e analisados quanto a resistência a duas raças de H. vastatrix raça II e XXXIII. Na caracterização molecular foram utilizados 29 primers microssatélites sendo obtidas 92 bandas com média de 3,17 bandas por primer. Das 92 bandas totais obtidas 75 foram polimórficas, foram utilizadas 5 combinações de primers AFLP onde foram obtidos 126 bandas polimórficas com média de 25,2 bandas por combinação de primer. Utilizando apenas os dados dos marcadores microssatélites e o agrupamento baseado nos complementos aritméticos de Jaccard e o método UPGMA foi possível separar 151 genótipos. Sete acessos não diferiram, sendo eles UFV450-06, UFV450-12, UFV428-01, UFV428-02, UFV427,15, UFV427-90 e UFV428-04. Ao acrescentar os dados dos marcadores dominantes AFLP foi possível separar estes indivíduos, não discriminando apenas os acessos UFV427-90 e UFV428-04. Foi possível determinar um padrão molecular único (fingerpinting) para cada indivíduo utilizando 58 marcas. Na caracterização fenotípica foram inoculadas às raças II e XXXIII nos 152 acessos Híbrido de Timor e 6 genótipos do melhoramento EPAMIG. Todos os acessos apresentaram resistência à raça II, o que mostra que os acessos podem ter apenas um gene de resistência que não o SH 5 ou mais de um gene, sendo estes qualquer combinação dos genes SH 5, 6, 7, 8 e 9. Com a raça XXXIII, 14 acessos apresentaram suscetibilidade, sendo a raça XXXIII com mais de um gene de virulência que foi capaz de suplantar a resistência dos acessos UFV376-01, UFV376-02, UFV 376-08, UFV 376-09, UFV 376-14, UFV 376-37, UFV 377-51, UFV 408-10,UFV 408-18, UFV 432-30, UFV 445-70, 2 II P6, 12 III P6 e 22 IV P6, estes acessos contém os genes SH 5, 7 ou SH 5,7 e 9. Conclui-se que 140 acessos de Híbridos de Timor continuam sendo uma boa fonte de resistência às raças II e XXXIII e três material do programa de melhoramento EPAMIG/UFV foram suscetível a raça XXXIII.

Gray mold (MC), caused by the fungus Botrytis cinerea, is one of the most important diseases that occurs in Eucalyptus nurseries worldwide. Therefore, a better understanding of the interaction between B. cinerea and Eucalyptus sp., including the conditions that favor pathogen growth, is key to the development of effective strategies for disease management. All experiments were carried on detached leaves on detached leaves of eucalyptus urograndis clone CNB011, inoculated with a suspension of 105 conidia of B. cinerea/mL. Prior to the evaluations to assess the effect of leaf side, age and luminosity the development of infective structures of the fungus, inoculated leaves were bleached with etanol and chloral hydrate and analyzed under an optical microscope. Disease severity was assessed 10 days after inoculation. SEM analyses were performed on leaf tissue collected 2, 4, 6, 12, 24 and 48 hours after inoculation (hai). There were significant effects of leaf side and luminosity on conidia germination. The highest germination percentage (92%) and severity (21%) were observed on the adaxial surface of leaves when incubated in the dark. Although the percentage of conidia germation on the surface of young and old leaves did not differ statistically, disease severity on young leaves was 34-fold higher when compared to old leaves (17.3% and 0,5% repectively). SEM analyses showed conidia germinated producing 1-4 germ tubes, but did not form appressorium. The germ tubes penetrated directly only the surface of intact leaves (but not stomata). Inter and intracellular colonization of the mesophyll by pathogen s hyphae could be observed at 120 hai. The fungus reproduces by producing macronematous conidiophores (on the leaf surface of both sides) and micronematous conidiophores (in the subepidermal region). Although the infectious process B. cinerea in different hosts are well described, this is the first study of this pathogen in eucalyptus leaves. O mofo cinzento (MC), causado por Botrytis cinerea, é uma importante doença que ocorre na produção de mudas de eucalipto. Assim, uma melhor compreensão da interação B. cinerea - eucalipto e as condições que favorecem o desenvolvimento do patógeno são a chave para a definição de estratégias eficazes para o controle da doença. Este trabalho objetivou estudar alguns aspectos do processo infeccioso de B. cinerea em folhas de eucalipto urograndis: avaliar a influência da face foliar (adaxial ou abaxial), idade da folha e luminosidade (claro ou escuro), no desenvolvimento de estruturas infectivas (tubo germinativo e apressórios) e severidade do mofo cinzento; elucidar o processo infeccioso: pré-penetração e penetração, colonização e reprodução de B. cinerea em folhas de eucalipto através de imagens de microscopia eletrônica de varredura (MEV). Em todos os experimentos foram utilizadas folhas destacadas de eucalipto urograndis (clone CNB011) e suspensão de 10 5 conídios de B. cinerea/mL para inoculação. Os estudos para avaliar o efeito da face foliar inoculada, luminosidade e da idade da folha no desenvolvimento de estruturas infectivas do fungo foram realizados na superfície de fragmentos de folhas inoculadas, coletadas 6 horas após a inoculação (hai), clareadas com álcool e cloral hidratado e observadas sob um microscópio óptico. A severidade do MC foi avaliada 10 dias após a inoculação. Para análises de microscopia eletrônica de varredura, fragmentos de folhas foram coletadas com 2, 4, 6, 12, 24 e 48 hai. Houve efeito significativo da face foliar e da luz na a germinação de conídios. Maior porcentagem de germinação (92%) e severidade (21%) foram observadas na superfície adaxial de folhas incubadas no escuro. Embora a porcentagem de germinação de conídios sobre a superfície das folhas jovens e velhas não diferiu estatisticamente, a severidade da doença em folhas jovens foi 34 vezes superior quando comparada com as folhas velhas (17,3% e 0,5%, respectivamente). Foram observadas por microscopia eletrônica de varredura conídios germinando produzindo de 1 a 4 tubos germinativos, mas não foi observada a formação de apressórios. Os tubos germinativos penetraram diretamente na superfície de folhas intactas (nunca por estômatos). às 120 hai houve intensa colonização extra e intracelular do mesófilo por hifas do patógeno. O fungo reproduziu-se produzindo conidioforos do tipo macronematosos (na superfície foliar de ambas as faces) e micronematosos (na região subepidérmica). Embora o processo infeccioso de B. cinerea em diversos hospedeiros esteja bem descrito, este é o primeiro estudo envolvendo este patógeno e folhas de eucalipto.

O gênero Begomovirus (família Geminiviridae) inclui vírus com genoma de DNA de fita simples, que infectam espécies de plantas dicotiledôneas e são transmitidas pela moscabranca Bemisia tabaci. Doenças causadas por begomovírus são economicamente importantes por causarem grandes perdas em culturas relevantes em regiões tropicais e subtropicais. No Equador, apesar de relatos de infestação por B. tabaci desde a década de 1990, apenas recentemente ocorreu o primeiro relato de um begomovírus, Tomato leaf deformation virus (ToLDeV, também presente no Peru) em tomateiro. O ToLDeV é o primeiro begomovírus monossegmentado originário das Américas, e sua presença no Equador ressalta a necessidade de um levantamento da ocorrência de begomovírus em tomateiro nesse país. O estudo de populações do ToLDeV pode fornecer informações relevantes sobre a evolução desse begomovírus monossegmentado e sobre o processo de adaptação desse vírus a um novo hospedeiro. Amostras de tomateiro e de plantas daninhas foram coletadas em 2010 e 2011 em seis províncias do Equador, e genomas completos de begomovírus foram clonados e sequenciados utilizando-se uma estratégia baseada em amplificação por círculo rolante. Nenhuma amostra positiva para begomovírus foi detectada nas províncias de Chimborazo e Galápagos. A absoluta maioria das amostras positivas coletadas nas províncias de Guayas, Loja, Manabíe Santa Elena estavam infectadas com o ToLDeV. Uma amostra de Manabí apresentava infecção tripla com ToLDeV, Rhynchosia golden mosaic Yucatan virus (RhGMYuV) e um isolado recombinante entre os dois. Um novo begomovírus foi detectado em uma outra amostra de tomateiro de Manabí. Amostras de Rhynchosia sp. das províncias de Guayas e Manabí estavam infectadas pelo RhGMYuV. Sequências de 67 isolados de ToLDeV obtidos de tomateiro foram utilizadas para identificação de haplótipos e para inferir relacionamento com isolados do Peru. Duas subpopulações claramente estruturadas foram identificadas (Equador e Peru) com evidência de migração entre elas. A menor diversidade haplotípica foi encontrada para o gene C4, em ambas as subpopulações. Os índices de variabilidade genética da subpopulação do Peru foram muito maiores do que os da subpopulação do Equador. O gene C4 apresentou a maior frequência de mutação em ambas as subpopulações. Encontrou-se evidência de seleção negativa ou purificadora atuando sobre todos os genes virais. Testes de neutralidade foram significativos e negativos para os genes CP, Rep, TrAP e C4 da subpopulação do Equador, indicando uma expansão recente. Todos os isolados do Equador apresentam um evento de recombinação incluindo os genes Rep, TrAP, REn e a região intergênica. Em conjunto, os resultados indicam um efeito fundador atuando na subpopulação do Equador, que está sofrendo um rápido processo de expansão e diferenciação. The genus Begomovirus (family Geminiviridae) contains viral species with ssDNA genomes, affecting dicotyledonous plants and transmitted by the whitefly Bemisia tabaci. Viral diseases caused by begomoviruses are of economic importance due to their adverse effects on the production of tropical and subtropical crops. In Ecuador, despite reports of significant infestations of Bemisia tabaci in the late 1990's, only very recently has a begomovirus, Tomato leaf deformation virus (ToLDeV, also present in Peru), been reported in tomato. ToLDeV is the first monopartite begomovirus originated in the Americas, and its presence in Ecuador highlights the need for a wider survey of tomatoinfecting begomoviruses in this country. The study of ToLDeV populations may provide insights into the evolution of this monopartite virus and its ongoing adaptation to a new host. Tomato and weed samples were collected in 2010 and 2011 in six provinces of Ecuador, and begomovirus genomes were cloned and sequenced using a rolling-circle amplification-based approach. No begomovirus-positive samples were detected in the provinces of Chimborazo and Galapagos. Most begomovirus-positive tomato samples from the provinces of Guayas, Loja, Manabi and Santa Elena were infected with ToLDeV. One sample from Manabí had a triple infection with ToLDeV, Rhynchosia golden mosaic Yucatan virus (RhGMYuV) and a recombinant isolate between the two. A new begomovirus species was detected in another tomato sample from Manabí. Samples of Rhynchosia sp. from the provinces of Guayas and Manabi were infected by RhGMYuV. Sequences of 67 ToLDeV isolates from tomato were used to identify haplotypes and infer genetic relationships with Peruvian isolates. Two ToLDeV subpopulations (Ecuador and Peru) were well structured and presented minor allelic migration. The lowest haplotype diversity was displayed by the C4 gene for both subpopulations. Genetic variability indices were generally much higher for the Peruvian subpopulation in comparison with the Ecuadorian subpopulation. The C4 gene had the highest mutation frequency in both subpopulations. There was evidence of negative or purifying selection acting on each of the viral genes, thus preserving protein function. Tests of neutrality were significant and negative for the CP, Rep, TrAP and C4 genes of the subpopulation from Ecuador, indicating that it is undergoing expansion. All isolates from Ecuador and one isolate from Peru showed a recombination event encompassing the Rep, TrAP and REn genes and the intergenic region. Together, the results indicate a founder effect acting upon the Ecuadorian ToLDeV subpopulation, which is undergoing rapid expansion and differentiation.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Espécies do gênero Calonectria (= Cylindrocladium) são importantes patógenos em uma ampla gama de plantas hospedeiras, principalmente em regiões de climas tropical e subtropical. A maioria das doenças causadas por espécies de Calonectria ocorre em plantas das famílias Fabaceae (Acacia spp.), Myrtaceae (Eucalyptus spp.) e Pinaceae (Pinus spp.). Atualmente, 76 espécies de Calonectria são reconhecidas com base, principalmente, em morfologia e inferência filogenética. Estudos filogenéticos com este grupo de fungos foram baseados em sequências do gene β-tubulina (TUB2). Entretanto fragmentos da região gênica calmodulina (CAL) e fator de elongação 1-alpha (TEF-1α) tem apresentado melhor resolução para a identificação de novas espécies em Calonectria. Baseado em análise filogenética de sequências de TEF-1α de 1017 isolados obtidos de amostras de plantas e solo em diferentes regiões do Brasil, demonstrou-se que as espécies de Calonectria estudadas pertencem a seis complexos. Dentre esses, C. pteridis, C. brassicae, C. morganii, C. scoparia e C. naviculata contem espécies novas, sendo que o primeiro (87%) predomina nas plantações de eucalipto no Brasil. De acordo com as análises filogenéticas multigênicas de β-tubulina (TUB), histona H3 (HIS3), calmodulina (CAL) e fator de elongação (TEF-1α) e com características morfológicas foram descritas 28 novas espécies de Calonectria. Além disso, 17 espécies de eucalipto (Eucalyptus e Corymbia) foram avaliadas quanto à resistência à mancha de calonectria. Eucalyptus aglomerata, E. brassiana, E. saligna e E. scias foram as mais resistentes, e as espécies E. tereticornis, E. pilularis, C. maculata, E. grandis, E. dunii e C. citriodora foram as mais suscetíveis. Species of the genus Calonectria (= Cylindrocladium) are important pathogens in a wide range of host plants, particularly in tropical and subtropical climates. Most of the diseases caused by species of Calonectria are associated mainly with plants of Fabaceae (Acacia spp.), Myrtaceae (Eucalyptus spp.) and Pinaceae (Pinus spp.). Nowadays there are about 76 species of Calonectria that are recognized based mainly on morphology and phylogenetic inference. Taxonomic studies on these fungi have chiefly relied on DNA sequences comparisons of the β- tubulin gene region. However calmodulin (CAL) and translation elongation factor 1- alpha (TEF-1α) gene regions have been shown best resolution for the identification of new species in Calonectria. Based on TEF-1α sequence analysis of 1017 isolates collected from samples of plants and soils in different regions of Brazil, it was demonstrated that Calonectria spp. studied belong to six complexes. Among these C. pteridis, C. brassicae, C. morganii, C. scoparia, and C. naviculata complexes contain 28 new species here described. Calonectria pteridis complex predominates (87%) on eucalypt plantations in Brazil. According to morphological features and multigenic phylogenetic analysis of β-tubulin (TUB2), histone H3 (HIS3), calmodulin (CAL) and the elongation factor (TEF-1α) genes 28 new Calonectria species were described. Moreover, in this study 17 species of eucalypt (Eucalyptus and Corymbia) were evaluated for resistance to calonectria leaf blight (CLB). Eucalyptus aglomerata, E. brassiana, E. saligna, and E. scias were the most resistant and E. tereticornis, E. pilularis, C. maculata, E. grandis, E. dunii, and C. citriodora the most susceptible species.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico The goal of this work to evaluate the poslharvest onion bulbs cured 'Bola Precoce', stored in silos masonry using the technique of artificial ventilation and cooling. To achieve the objective were evaluated in separate experiments: experiment 1 (Chapter 1 and 2) - 400 kg of cured bulbs were stored in polypropylene bags shed being accommodated in the control treatment (Tl) and the other 400 kg were stored in a silo vertical cylinder with a diameter of 1 m and l.5 m in length, perforated bottom plate with a fan coupled to the input (T2). The aeration rate used was 0.5 m³.min.m-³ determined at the outlet of th silo. The fan was turned on for 12 hours daily at night, the average temperature inside the silo of 23 °C was measured daily at 12:00; experiment 2 (Chapter 3) - 400 Kg / silo onion bulbs were stored in silos vertical cylinder l m diameter and 1.5 m high, with bottom plate pierced with an equipment air cooler coupled at its output COOLSSED developed by reducing the temperature to 10 °C ambient temperature, staying connected to every other day in the morning for 3 hours until the internal temperature reaches the silo average 15 °C, and the silo closed to control the temperature. The experimental design was completely randomized with two treatments and four periods of analysis (experiment l) and two seasons (experiment 2), with six replicates. and used a bulb by repetition. The characteristics valuated were: alliinase, poignancy, weight loss, loss of dry mass, relative water content of intemal and external carbohydrates, phenolic compounds, visual index of dormancy, staining and identification of decay caused the bulbs in both experiments. In all treatments, both in experiment I and in experiment 2, there was increased activity of alliinase during storage, thus occurring, increased pungency, the bulbs become hot at the end of slorage. The increment of weighl loss, visual index of dormancy during storage in all treatments. However phenolic compound, there was a decrease during storage in trealments of experiments l and 2, and in bulbs colds (experiment 2) after 21 days of storage, there was an increase, it must be due to the presence of fungal spores in samples. We conclude that treatment can be a silo ventilated lowcost altemative to extending the shelf life of onions. O objetivo foi avaliar a conservação pós-colheita de bulbos curados de cebola 'Bola Precoce', armazenados em silos de alvenaria utilizando a técnica de ventilação e resfriamento artificial. Para se atingir o objetivo foram avaliados, em experimentos distintos: experimento l (Capítulo l e 2) - 400 kg de bulbos curados foram armazenados em sacos de polípropileno acomodados em galpão sendo o tratamento controle (Tl) e, os outros 400 kg foram armazenados em silo cilindro vertical, com l m de diâmetro e 1,5 m de comprimento, com fundo de chapa perfurada com um ventilador acoplado à entrada (T2). A taxa de aeração utilizada foi de 0,5 m3.min.m-3 determinado na saída do silo. O ventilador ficou ligado diariamente durante 12 horas no período noturno, a temperatura média dentro do silo foi de 23 °C medida todos os dias às 12:00 h; experimento 2 (Capítulo 3)- 400 Kg/silo de bulbos de cebola foram armazenados em silos cilindro vertical com l m de diâmetro e 1,5 m de altura, apresentando fundo de chapa perfurado com um equipamento refrigerador de ar acoplado na sua saída, desenvolvido pela empresa COOLSSED, reduzindo a temperatura em até 10 °C a temperatura ambiente, permanecendo ligado a cada dois dias pela manhã por 3 horas até a temperatura interna do silo atingir em média 15°C, sendo o controle o silo fechado à temperatura ambiente. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado, sendo dois tratamentos e quatro épocas de análises (experimento l) e, duas épocas (experimento 2), com seis repelições, sendo utilizado um bulbo por repetição. As características avaliadas foram: alinase, pungência, perda de massa fresca, perda de massa seca, teor relativo de água interno e externo, carboidratos, compostos fenólicos, índice visual de dormência, coloração e identificação das podridões ocasionadas nos bulbos em ambos os experimentos. Em todos os tratamentos testados, tanto no expcrimento l quanto no experimento 2, houve aumento da atividade da alinase ao longo do armazenamento, ocorrendo assim, aumento da pungência, os bulbos se tomaram picantes ao final do armazenamento. Houve incremento da perda de massa fresca, índice visual de dormência ao longo do armazenamento em todos os tratamentos. Entretanto para compostos fenólicos, ocorreu decréscimo ao longo do armazenamento nos tratamentos dos experimentos l e 2, sendo que, nos bulbos resfriados (experimento 2) aos 21 dias de armazenamento, houve um aumento, isso deve ter ocorrido devido a presença de esporos fúngicos nas amostras analisadas. Conclui-se que o tratamento silo ventilado pode ser uma altemativa de baixo custo para o prolongamento da vida pós-colheita da cebola.

Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais The maintenance of coffee seed quality during the storage is a concern of seeds producers. Researches with alternatives products to the fungicides are scarce. The objective of this work was to evaluate the efficiency of alternative products in the presenvation of physiological and sanitary quality of seeds during the storage. A factorial arrangement, 16 x 3 x 5 was used. Sixteen treatments of seeds were performed with medicinal dehydrated and powdered plants (Rosmarinus officinalis, Ocimum basilicum, Allium sativum, Cinnamomum zeylanicum, Equisetum ssp, Syzygium aromaticum, Pimpinella anisum, Zingiber officinale, Ocimum basilicum), biological products (Trichodermil SP, Trichodel, Trichoplus), chemical alternative controls (potassium sorbate and sodium benzoate), chemical fungicide (mancozebe) and control (without any product). Were used three types of packing: polypropylene flasks, multiwall kraft paper bags and plastic bags. The quality of stored seeds were evaluated at 3, 6, 9, 12 and 15 months. Two independent experiments were carried out, one in natural ambient and another in cold chamber. Was used The cultivar of coffee CatuaiVermelho IAC 44. The seeds of this cultivar, were dried at the sun untl reach 42% of water. In each packing type, were conditioned 200 g of seeds. Interaction among factors was significant. In general, in the best treatments, seeds presented good quality until six months in natural ambient and until 15 months in cold chamber. In both environment, the storaged seeds in kraft paper germinated more than those storaged in plastic bag. These, in turn, germinated more than those storaged in flasks. Rosmarinus officinalis, Allium sativum, and products based on Trichoderma were always higher than the control in maintaining germination and in controlling of fungus. These products were soo efficient as the fungicide mancozebe and, in some situations, higher than this fungicide in keeping seed quality. The results of this work indicate that there are alternative products that are equal or more efficient than fungicide in keeping physiological and sanitary quality of coffee seeds quality. A manutenção da qualidade das sementes de café durante o armazenamento é preocupação dos produtores de sementes. As pesquisas com produtos alternativos aos fungicidas são escassas. O objetivo deste trabalho foi avaliar a eficácia de produtos alternativos para a preservação da qualidade fisiológica e sanitária das sementes. Foi utilizado o arranjo fatorial 16 x 3 x 5. Dezesseis tratamentos de sementes constaram de plantas medicinais desidratadas e moídas (alecrim, alfavaca, alho, canela, cavalinha, cravo-da-índia, erva-doce, gengibre e manjericão), produtos biológicos (Trichodermil® SP, Trichodel® e Trichoplus®), compostos químicos (sorbato de potássio e benzoato de sódio), fungicida químico (mancozebe) e controle (sem nenhum produto). Foram usados três tipos de embalagens: frasco de polipropileno, saco de papel kraft multifoliado e embalagem de polietileno. A qualidade das sementes armazenadas foi avaliada aos três, seis, nove, 12 e 15 meses. Foram conduzidos dois ensaios independentes: um em ambiente e outro em câmara fria. Foi utilizado o cultivar de café Catuaí Vermelho IAC 44. As sementes desse cultivar foram secas ao sol até atingir 42 % de água (base úmida). Em cada tipo de embalagem foram acondicionados 200 g de sementes. Houve interação significativa entre os fatores. Em geral, os melhores tratamentos de sementes apresentaram boa qualidade até seis meses em ambiente e até 15 meses em câmara fria. Em ambiente natural, a embalagem de polietileno foi mais eficiente que a de papel na conservação da germinação das sementes de café. Em câmara fria, o papel foi mais eficiente. Alecrim, alho e produtos à base de Trichoderma foram sempre superiores ao controle na conservação das sementes e na redução da população de fungos de armazenamento. Esses produtos foram tão eficientes quanto o mancozebe e, em algumas situações, superior a este fungicida na manutenção da qualidade das sementes. Os resultados indicam que há produtos alternativos que são tão ou mais eficientes que fungicidas na manutenção da qualidade fisiológica e sanitária das sementes de café.

The Asian Soybean Rust is a major disease of soybean causing enormous economic damage to agribusiness. Rust resistance genes have been reported, but the resistance of the cultivars is still partial. The objective of the research was to assess the diversity of the fungus P. pachyrhizi from environmental samples originating from experiments cultivated with susceptible genotypes and genotypes with rust resistance gene. The gene regions of internal transcribed spacer (ITS) and the gene for Factor ADP ribosylation were amplified, cloned and sequenced. The sequences obtained were assembled into databases for both regions under study. The results of the analysis revealed the presence of six haplotypes for the region of ADP and 14 ribotypes for the ITS region, being similarly distributed among soybean genotypes with different tolerance levels. Population structure analysis demonstrate that genetic variability for P. pachyrhizi focuses on populations within the same location, with no significant differences between evaluated locations. The presence of genes which grant resistance to some genotypes did not affect the distribution of ribotypes to the locations under consideration. The similarity between different location samples and different genotypes indicate an intense gene flow than can be result of a long distance spore dispersion by the wind. A Ferrugem Asiática da Soja é uma das principais doenças da cultura da soja causando grandes danos econômicos para o agronegócio. Genes para resistência à ferrugem tem sido relatados, porém a resistência conferida aos cultivares ainda é parcial. O objetivo da pesquisa foi avaliar a diversidade do fungo P. pacyrhizi a partir de amostras ambientais originadas de experimentos cultivados com genótipos suscetíveis e genótipos com gene para resistência à ferrugem. As regiões gênicas do espaçador transcrito interno (ITS) e o gene para o Fator de ribosilação do ADP foram amplificadas, clonadas e sequenciadas. As sequências obtidas foram reunidas em bancos de dados para ambas as regiões em estudo. Os resultados das análises evidenciaram a presença de 6 haplótipos para a região de ADP e 14 ribótipos para a região de ITS, estando distribuídos de modo semelhante entre os genótipos de soja com diferentes níveis de resistência. Análises de estrutura de populações demonstram que a variabilidade genética para P. pachyrhizi concentra-se nas populações dentro de uma mesma localidade, não havendo diferenças significantes entre localidades avaliadas. A presença de genes que conferem resistência à alguns genótipos não influenciou na distribuição de ribótipos para os locais em estudo. A similaridade entre diferentes localidades amostradas, e diferente genótipos indicam um intenso fluxo gênico que pode ser resultado da dispersão de esporos a longa distância pelo vento.

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais Folhas vivas de 18 espécies de plantas de 10 famílias botânicas apresentando colônias escuras suspeitas de pertencerem à ordem Asterinales foram coletadas em áreas de Mata Atlântica do Brasil em várias viagens de campo durante 2009–2012. As viagens de campo foram conduzidas em quatro estados brasileiros e em seis áreas: Minas Gerais (Mata do Paraíso, Mata do Seu Nico, Mata da Biologia e próximo a Nova Lima), Espírito Santo (Reserva Natural da Vale do Rio Doce), Bahia (Reserva Ecológica da Michelin e Serra da Jibóia) e Rio Grande do Sul (próximo a Bento Gonçalves). O exame da morfologia dos fungos nas amostras indicam que havia, 13 prováveis novas espécies, 4 primeiros relatos para o Brasil e 5 novos hospedeiros para espécies conhecidas de Asterinales. Os fungos são descritos e ilustrados. Uma análise filogenética combinada de sequências ribossomais (18S e 28S rDNA) e codificadores de proteínas (TEF e RPB2) confirmaram que Asterinales formam um clado monofilético bem suportado dentro de Dothideomycetes. A relação entre Schizothyriaceae e Mycosphaerellaceae dentro de Capnodiales e a não relação entre Asterinales e Capnodiales foram corroboradas. Infected living leaves of different host plants showing black colonies belonging to Asterinales were collected in areas of Atlantic forest of Brazil in field trips during 2009–2012. The field trips were conducted in four Brazilian states and six areas: Minas Gerais (Mata do Paraíso, Mata do Seu Nico, Mata da Biologia and near Nova Lima), Espírito Santo (Reserva Natural da Vale do Rio Doce), Bahia (Reserva Ecológica da Michelin and Serra da Jibóia) and Rio Grande do Sul (near Bento Gonçalves). Through morphological and biometric data, 13 probably new species, 4 first reported to Brazil and 5 new host records are described and illustrated. A combined phylogenetic analysis of the ribosomal sequences (18S and 28S rDNA) and protein-coding (TEF and RPB2) confirmed that Asterinales form a monophyletic clade well supported within the Dothideomycetes. The sister relationship of Schizothyriaceae and Mycosphaerellaceae within the Capnodiales and the non-relationship between Asterinales and Capnodiales were corroborated. A revision of the genera of the families Asterinaceae and Englerulaceae shows a small divergence in the number of genera when compared with others authors. An index of Asterinales from Brazil containing 151 species distributed in 47 botanical families, including two families: Asterinaceae and Englerulaceae is also provided.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior In this work, the endophytic fungus Fusarium verticillioides was evaluated in relation to its potential to produce cellulases and hemicellulases aiming to its application on biomass saccharification for ethanol production. The culture medium used for cellulase and xylanase production was optimized. Optimum levels of carbon source concentration (corn straw), nitrogen source concentration (sodium nitrate) and time of cultivation were obtained. Endoglucanase and xylanase activities increased from 2.8 U/mL to 8.0 U/mL and from 3.4 U/mL to 114.0 U/mL, respectively. The optimal pH and temperature were determined for endoglucanase (5.6, 80 °C), cellobiase (5.6, 60 °C), FPase (6.0, 55 °C) and xylanase (7.0, 50 °C). The optimized crude extract was applied in saccharification and fermentation of sugarcane bagasse from which 9.7 g/L of ethanol was produced at an ethanol/biomass (g/g) yield of 0.19. A second cultivation medium containing different nitrogen sources (urea, yeast extract, peptone and ammonium sulfate) and forage as carbon source was established throught Plackett Burman design for cellulases production. Two contrasting media, M1 and M2 were defined for higher endoglucanase and cellobiase production, respectively. Mixtures of these two extracts were tested on a sugarcane bagasse saccharification and extract M1 presented the best performance, yielding 26.6 % of glucan conversion and 40.4 % of xylan conversion. Different dosages of protein (10 mg/g, 20 mg/g and 40 mg/g of dry biomass) were tested intending to improve the hydrolysis performance of M1 extract. Saccharification rates of 43.4 % and 73.1 % were observed for glucan and xylan fractions respectively when 40 mg/g was used. A high protein adsorption on substrate was observed during saccharification assays employing M1 extract and that can explain de lower sugar productivity in the saccharification process along the time. The fungus F. verticillioides and the fungus Acremonium zeae were evaluated in relation to its abilities to ferment simple sugars and lignocellulosic biomass. The fungus Fusarium verticillioides produced ethanol from glucose, xylose and a mixture of these two sugars in limited oxygen conditions with yields of 0.47 g/g, 0.46 g/g and 0.50 g/g of ethanol per sugar utilized. The fungus Acremonium zeae produced ethanol from glucose, xylose and mixture of these two sugars with yields of 0.37 g/g, 0.39 g/g and 0.48 g/g of ethanol per sugar utilized. Both fungi were able to co-ferment glucose and xylose. Fusarium verticillioides and A. zeae produced high endoglucanase and xylanase activities using sugarcane bagasse as substrate. Ethanol production from 40 g/L of pre-treated sugarcane bagasse was 4.6 g/L and 3.9 g/L for Fusarium verticillioides and A. zeae, respectively. Both fungi showed features suitable for consolidated bioprocessing. Great interest was generated by the biochemical characteristics of the endoglucanase activity, as activity in high temperatures and stability in various pHs. Then it was developed a purification and characterization study of endoglucanase activity from the fungus F. verticillioides. A multienzyme complex, E1C, and a free endoglucanase, E2 were purified. The E1C contained two endoglucanases (GH6 and GH10), one cellobiohydrolase (GH7) and one xylanase (GH10). The temperature of maximal activity was 80 °C for both E1C and E2. The free enzyme and the complex were very thermostable at 50 °C and 60 °C. The activation energies for E1C and E2 were 21.3 KJ/mol and 27.5 KJ/mol, respectively. Maximum activity of E1C was encountered at pH 4.5 and of E2 was at pH 5.5; E1C presented high stability after 24 h of pre-incubation at pH ranging from 2.6 to 8.0. The KM value for E1C was 10.25 g/L while for E2 was 6.58 g/L using carboxymethylcellulose as substrate. Both E1C and E2 were significantly activated by Mn2+, CoCl2, furfural, hydroxymethylfurfural and dithiothreitol while they were inhibited by SDS, CuSO4, FeCl3, AgNO4, ZnSO4 and HgCl2. Both E1C and E2 presented higher activity towards barley-β-glucan than carboxymethylcellulose (CMC), indicating endo-β-1,3-1,4-glucanase activity. The enzymes were able to hydrolyze cellopentaose, cellotetraose and cellotriose, however, in different mode of action. In all the assays evaluating stability and efficiency E1C showed better performance than E2, suggesting advantages generated by the physical interaction between proteins. Neste trabalho o fungo endofítico Fusarium verticillioides foi avaliado quanto ao seu potencial para produção de enzimas celulases e hemicelulases visando sua aplicação no processo de sacarificação da biomassa para produção de etanol. O meio de cultivo utilizado para produção de celulases e xilanase por F. verticillioides foi otimizado. Níveis ótimos de fonte de carbono (palha de milho), fonte de nitrogênio (nitrato de sódio) e tempo de cultivo foram determinados. As atividades de endoglicanase e xilanase aumentaram de 2,8 U/mL para 8,0 U/mL e de 3,4 U/mL para 114,0 U/mL, respectivamente. Temperatura e pH ótimos foram determinados para endoglicanse (5,6; 80 °C), celobiase (5,6; 60 °C), FPase (6,0; 55 °C) e xilanase (7,0; 50 °C). O extrato enzimático otimizado foi usado na sacarificação e fermentação simultâneas de bagaço de cana. Neste processo 9,7 g/L de etanol foram obtidos com um rendimento de etanol/ biomassa (g/g) de 0,19. Um segundo meio de cultivo contendo diferentes fontes de nitrogênio (ureia, extrato de levedura, peptona e sulfato de amônio) e forrageira como fonte de carbono foi estabelecido por meio de delineamento de Plackett Burman para produção de celulases. Dois meios contrastantes, M1 e M2, foram definidos para maior produção de endoglicanase e celobiase, respectivamente. Misturas destes dois extratos foram testadas para a sacarificação do bagaço de cana e o extrato M1 apresentou o maior rendimento para conversão de glicanas 26,6 %, e de xilanases 40,4 %. Dosagens diferentes de proteína (10 mg/g, 20 mg/g e 40 mg/g de biomassa seca) do extrato M1 foram avaliadas em relação à sacarificação de bagaço de cana. Rendimentos de 43,4 % e 73,1 % foram observados para conversão de glicanas e xilanas, respectivamente quando 40 mg/g foi utilizado. Adsorção de proteína foi observada durante a sacarificação o que pode explicar a observada diminuição da produtividade durante o processo de sacarificação. O fungo F. verticillioides e o fungo Acremonium zeae foram avaliados em relação as suas capacidades de fermentação de açúcares simples e de biomassa lignocelulósica. Fusarium verticillioides produziu etanol a partir de glicose, xilose e de uma mistura dos destes dois açúcares com rendimentos de 0,47 g/g, 0,46 g/g e 0,50 g/g de etanol por açúcar utilizado. O fungo Acremonium zeae produziu etanol a partir de glicose, xilose e da mistura com rendimento de 0,37 g/g, 0,39 g/g e 0,48 g/g de açúcar utilizado. Os dois fungos foram capazes de co-fermentar glicose e xilose. Fusarium verticillioides e A. zeae produziram altas atividades de endoglicanase e de xilanase utilizando bagaço de cana como fonte de carbono. A produção de etanol a partir de 40 g/L de bagaço de cana foi de 4,6 g/L e 3,9 g/L para F. verticillioides e A. zeae, respectivamente. Grande interesse foi gerado pelas características bioquímicas da atividade de endoglicanase, como atividade em temperaturas elevadas e estabilidade em diversos pHs. Assim, foi desenvolvido um estudo de purificação e caracterização da atividade de endoglicanase do fungo F. verticillioides. Um complexo multienzimático, E1C, e uma endoglicanase livre, E2, foram purificados. O complexo E1C contém duas endoglicanases (GH3 e GH10), uma celobiohidrolase (GH7) e uma xilanase (GH10). A temperatura de máxima atividade foi 80 °C para E1C e para E2. A enzima livre e o complexo foram termoestáveis a 50 °C e 60 °C. A energia de ativação para E1C e E2 foram 21,3 KJ/mol e 27,5 KJ/mol, respectivamente. Atividade máxima de E1C foi em pH 4,5 e de E2 foi em pH 5,5; E1C apresentou alta estabilidade após 24 h de préincubação em pHs variando de 2,6 a 8,0. O valor de KM para E1C foi 10,25 g/L enquanto para E2 foi 6,58 g/L usando carboximetilcelulose como substrato. Tanto E1C quanto E2 foram significativamente ativadas por Mn2+, CoCl2, furfural, hidroximetilfurfural and ditiotreitol enquanto foram inibidas por SDS, CuSO4, FeCl3, AgNO4, ZnSO4 e HgCl2. O complexo E1C e a enzima livre E2 apresentaram atividade mais alta utilizando o substrato glicana de cevada (Barley-β-glucan) do que utilizando o substrato padrão carboxymetilcelulose (CMC), indicando atividade de endo-β-1,3-1,4-glicanase. As enzimas foram capazes de hidrolisar celopentaose, celotetraose e celotriose, entretanto com modos de ação diferentes. Em todos os ensaios que avaliavam estabilidade e eficiência, E1C apresentou melhores resultados do que E2, o que sugere vantagens geradas pela interação física de proteínas presente nos complexos.

Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais The flowers and ornamental market is a promising sector which is expanding in Brazil. The gladiolus is worldwide recognized due to the variety of colors, size and shape of its flowers. Among the diseases reported to gladiolus, the curvularia spot is one of the most destructive. The aims of this study were to identify the pathogen associated with this leaf spot in Brazil; evaluating the susceptibility of the main gladiolus genetic material, grown in this country, to curvularia spot and relating it with the development of pathogen infective structures (rate of germination and appressoria formation); and elucidate the fungus infection process in susceptible and resistant varieties of gladiolus leaves. Plants of Gladiolus grandiflorus varieties T-704 and Amsterdam showing curvularia spot were found in Crop science Department / Division of Floriculture of the Universidade Federal de Viçosa. The pathogen was identified as Curvularia gladioli based on conidia and conidiophores morphometric characteristics and phylogenetic analysis of ITS and 28S rDNA regions. The susceptibility to pathogen was evaluated on genotypes Gladiolus callianthus and G. grandiflorus varieties Amsterdam, Red Beauty, Rose Friendship, T-704, Verônica and Yester Gold. The genetic materials presented different level of susceptibility to C. gladioli. G. grandiflorus varieties T-704 and Red Beauty were the most susceptible followed by Tradehorn variety and Gladiolus callianthus. The remaining genetic materials did not differentiate between them. There was no difference in the germination rate between susceptible and resistant varieties. As for the appressorium, differences were observed between the percentages of formation of this structure between G. callianthus and G. grandiflorus variety Amsterdam and G. grandiflorus variety T-704. The infection process of C. gladioli was studied on G. grandiflorus varieties T-704 and Amsterdam using light and scanning electron microscopy techniques. There was no difference in the germination and appressorium formation rate between these varieties. Regarding the colonization, it was observed a lower hyphae development in the leaf tissues of resistant variety. Conidiophores were observed emerging through trichomes and stomatal openings in both the varieties from seven to eight days after inoculation. C. gladioli showed a similar development during pre-penetration in both varieties. The colonization and sporulation were more abundant in the susceptible variety. These information have a great importance to understand the C. gladioli - gladiolus interaction and contribute to development of strategies for the disease management. O mercado de flores e plantas ornamentais é um segmento promissor e encontra-se em expansão no Brasil. O gladíolo é reconhecido mundialmente devido à variedade de cores, tamanhos e forma das flores. Dentre as doenças relatadas para a cultura, a mancha de curvularia está entre as mais destrutivas. Os objetivos deste trabalho foram identificar o patógeno associado a essa doença no Brasil; avaliar a suscetibilidade dos principais materiais genéticos de gladíolo cultivado no país à mancha de curvularia e relacioná-la com o desenvolvimento de estruturas infectivas (porcentagem de germinação e de formação de apressórios) do patógeno; e elucidar o processo infeccioso do fungo em folhas de variedade suscetível e resistente de gladíolo. Plantas de Gladiolus grandiflorus variedades Amsterdam e T-704 apresentando sintomas de mancha de curvularia foram encontradas no Setor de Floricultura do Departamento de Fitotecnia / Universidade Federal de Viçosa. O patógeno foi identificado como Curvularia gladioli baseado em características morfométricas dos conídos e conidióforos e análises filogenéticas das regiões ITS e 28S do rDNA. Os genótipos Gladiolus callianthus e G. grandiflorus variedades Amsterdam, Red Beauty, Rose Friendship, T-704, Verônica e Yester Gold foram avaliadas quanto à suscetibilidade ao patógeno. Os materiais genéticos apresentaram diferentes níveis de suscetibilidade a C. gladioli, sendo G. grandiflorus variedades T-704 e Red Beauty os mais suscetíveis, seguidos da variedade Tradehorn e da espécie G. callianthus. Os demais materiais genéticos não diferenciaram entre si. Não houve diferença na porcentagem de germinação de conídios entre os materiais genéticos avaliados. Já quanto aos apressórios, foram observadas diferenças entre as porcentagens de formação desta estrutura entre G. callianthus e G. grandiflorus variedade Amsterdam e G. grandiflorus variedade T-704. O processo infeccioso de C. gladioli foi estudado em G. grandiflorus variedades T-704 e Verônica utilizando-se técnicas de microscopia de luz microscopia e de eletrônica de varredura. Não houve diferença na porcentagem de germinação de conídios e de formação de apressórios entre estas variedades. Em relação à colonização, foi observado um menor desenvolvimento de hifas nos tecidos da variedade resistente. Conidióforos foram observados emergindo através de tricomas e de aberturas estomáticas em ambas às variedades entre sete a oito dias após a inoculação. C. gladioli apresentou um desenvolvimento semelhante durante a pré- penetração em ambas as variedades e uma colonização e reprodução mais abundante na variedade suscetível. Essas informações são de grande importância para o entendimento da interação C. gladioli - gladíolo e contribuem para o desenvolvimento de estratégias de manejo da doença.

Doenças pós-colheita causam perdas expressivas de frutas e hortaliças desde o momento da colheita até o consumo, especialmente em países em desenvolvimento. O controle biológico, particularmente por meio de biofumigação, tem sido apontado como alternativa para reduzir esse problema. Entretanto, para o uso no controle de doenças de plantas, o conhecimento prévio sobre a etiologia é essencial. Um levantamento sistemático foi, portanto, conduzido no mercado local de Viçosa e na CEASAMINAS, a fim de gerar informações sobre doenças pós-colheita no Estado de Minas Gerais. Os fungos associados às doenças pós-colheita foram isolados, identificados e posteriormente submetidos a testes in vitro e in vivo visando verificar o potencial de Muscodor albus, fungo endofítico produtor de voláteis antimicrobianos, em controlar doenças pós-colheita de frutas e hortaliças por fumigação biológica. O teste in vitro foi conduzido utilizando-se placas bipartidas contendo meio BDA, nas quais M. albus foi previamente cultivado por seis dias em um dos compartimentos. Os discos contendo micélio de cada patógeno foram dispostos no outro compartimento de cada placa e cultivados por sessenta horas. Os voláteis antimicrobianos de M. albus apresentaram ação fungistática ou fungicida a depender do fungo fitopatogênico testado. Para o teste in vivo de micofumigação em pós-colheita foi selecionado o patossistema Botrytis cinerea - morango em virtude dos resultados in vitro e da importância econômica do mofo cinzento para a cultura. Morangos adquiridos sem a aplicação de agrotóxicos foram inoculados por ferimentos e dispostos em caixas plásticas de 11L contendo culturas de M. albus. As culturas de M. albus foram crescidas em placas de Petri, contendo BDA e os morangos inoculados foram dispostos em bandejas, de forma a não haver contato direto entre o fungo e os frutos. A micofumigação proporcionou um controle efetivo do mofo cinzento e de podridões totais em morango em pós-colheita. Postharvest diseases cause considerable losses of fruits and vegetables, from the harvest to their consumption, especially in developing countries. The biological control, particularly by biofumigation, has been pointed as an alternative to reduce postharvest losses. However, for using in the plant disease control, the previous knowledge regarding etiology is essential. A systematic etiological survey was, therefore, conducted in the local market of Viçosa and CEASAMINAS to generate information about the postharvest diseases in Minas Gerais state. The fungi associated with postharvest diseases were isolated, identified and subsequently submitted to in vitro e in vivo tests to verify the potential of Muscodor albus, an endophytic fungus that produces antimicrobials volatiles, in controlling postharvest diseases of fruits and vegetables by biological fumigation. In vitro test was conducted using bipartite Petri dishes with PDA medium, in which M. albus was previously grown for six days in one of the compartments. The mycelial plugs of each pathogen were placed in the other compartment of each plate and cultivated for sixty hours. The M. albus antimicrobial volatiles presented fungistatic or fungicide action depending on the phytopathogenic fungi tested. For the in vivo postharvest micofumigation test, the pathosystem Botrytis cinerea – strawberry was selected because of the in vitro results and the economic importance of gray mold for the crop. Strawberries produced with no pesticides use were wound-inoculated and placed in 11L plastic boxes containing M. albus cultures. The M. albus cultures were grown in Petri dishes containing PDA and the inoculated strawberries were placed in packaging in a way that had no direct contact between fungi and fruits. The micofumigation effectively controlled gray mold and the total decay in postharvest strawberries.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico A produção de batata (Solanum tuberosum L.) é limitada por vários fatores, dentre estes, as doenças de plantas. A requeima causada por Phytophthora infestans e a pinta preta causada por Alternaria grandis são consideradas de grande importância. Estudos sobre a epidemiologia e resistência da requeima e pinta preta da batateira são muito importantes para melhor entender estes patossistemas. Para avaliar a resistência de cultivares à requeima em folhas de batata e verificar como essa resistência a requeima relaciona como o tipo de maturação foliar e o tipo de pele em cultivares de batata plantadas no Brasil, 2 experimentos de campo foram conduzidos em diferentes condições ambientais na Universidade Federal de Viçosa (UFV). Para o primeiro experimento foi usado 34 cultivares (tratamentos) e para o segundo experimento foi usado 17 cultivares. A maioria dos cultivares de batata foram suscetíveis a requeima. Os cultivares com os maiores níveis de resistência a requeima (resistente e moderadamente resistente) são de ciclo mais tardios (meio tardio e tardio). A maioria dos cultivares que foram classificados como moderadamente suscetível e suscetível foram mais precoces (precoce e meio precoce). No geral, cultivares que foram mais resistentes a requeima possuem pele áspera, enquanto que a pele das cultivares mais suscetíveis foram lisas. Para estimar a severidade da requeima e da pinta preta da batateira em folhas e em plantas de parcelas experimentais é necessário o uso de uma escala diagramática (EDG) e uma escala descritiva (EDS), respectivamente. Atualmente, existem essas duas escalas somente para a requeima. Para a pinta preta há apenas a EDG, que compreende diagramas de folhas de batata com a severidade da pinta preta variando de 0 a 50%, a qual possui limitações. Sendo assim, foi desenvolvida e validada uma EDG e uma EDS. A EDG proposta contem ilustrações de folhas com doze níveis de severidade da doença (0,05; 0,5; 2; 4; 8; 16; 32; 48; 62; 82; 96 e 100%). A EDS foi uma adaptação da EDS desenvolvida para avaliar a severidade da requeima da batateira. Ambas EDG e EDS melhoraram a acurácia, precisão e reprodutibilidade das estimativas de severidade da pinta preta da batateira. Estas escalas podem ser utilizadas para avaliar a severidade para o melhoramento de plantas visando à resistência, screening de fungicida e caracterização de patótipo. Para avaliar a resistência de cultivares à pinta preta em folhas de batata e verificar como essa resistência a requeima relaciona como o tipo de maturação foliar e o tipo de pele em cultivares de batata plantadas no Brasil, 3 experimentos de campo foram conduzidos em diferentes condições ambientais na UFV. Para o primeiro e o segundo experimento foram usadas 26 cultivares (tratamentos) e para o terceiro experimento foi usado 24 cultivares. A maioria dos cultivares de batata foram suscetíveis e moderadamente suscetíveis à pinta preta da batateira. O nível de resistência de alguns cultivares a pinta preta mudou de acordo com as condições ambientais. Os cultivares resistentes a pinta preta são de meia estação, meio tardio e tardio. Não foi observado nenhum cultivar suscetível a pinta preta com ciclo mais tardio (meio tardio e tardio). Na maioria dos casos, os cultivares suscetíveis a pinta preta são de ciclo mais precoce (precoce e meio precoce). Cultivares resistentes a pinta preta tiveram pele áspera, meio áspera e lisa. Cultivares suscetíveis à pinta preta com pele áspera não foram observados. Na maioria dos casos, os cultivares que foram suscetíveis e moderadamente suscetíveis à pinta preta possuem pele lisa. Objetivando comparar epidemias de requeima e pinta preta da batateira sobre diferentes condições ambientais e programas de aplicação de fungicidas, três experimentos foram conduzidos usando a cultivar Ágata. Cada experimento consistiu de dois ensaios lado a lado e cada ensaio foi conduzido no delineamento em blocos casualizados com 5 tratamentos e 5 repetições. Aos 30 dias após o plantio, as plantas de batata do ensaio 1 foram inoculadas artificialmente com um isolado do grupo de compatibilidade A2 de P. infestans (200 esporângios/mL) e as plantas do ensaio 2 foram inoculadas com isolados de A. grandis (200 conídios/mL). As aplicações de fungicidas iniciaram aos 7 dias após a inoculação. A severidade de ambas doenças foram quantificadas a cada dois dias e os dados de severidade foram usados para calcular a área abaixo da curva de progresso (AACPD). A produtividade e os danos foram também obtidos. A requeima foi mais agressiva do que a pinta preta sobre as diferentes condições climáticas, e isso refletiu na produtividade. A requeima causou danos de 82,4%, enquanto que a pinta preta causou danos de 44,9%. A eficiência dos fungicidas mudou sobre as diferentes condições ambientais, mostrando a importância do uso de ferramentas que monitoram o clima, como o uso de sistema de previsão, para o controle eficiente das doenças. Potato (Solanum tuberosum L.) production is limited by several factors, including diseases. Among the diseases that affect potatoes, late blight caused by Phytophthora infestans and early blight caused by Alternaria grandis are considered of great importance. Studies about epidemiology and resistance of potato to late blight and early blight are very important to better understand these pathosystems. To assess the resistance of potato cultivars to foliar late blight and examine how resistance to foliar late blight relates to foliage maturity type and skin type in potato cultivars in Brazil, two field experiments were carried out under different environmental conditions at the Universidade Federal de Viçosa (UFV) in Viçosa- MG. The first experiment used 34 cultivars (treatments). The second experiment used 17 cultivars. The majority of potato cultivars were susceptible to foliar late blight. The cultivars with the highest levels of resistance to foliar late blight (resistant and moderately resistant) were later maturity (mid-late and late maturity). Most cultivars that have been classified as moderately susceptible or susceptible were earlier maturity (early or mid-early maturity). In general, cultivars that are more resistant to foliar late blight had a rougher skin, whereas the skins of the more susceptible cultivars had smoother. To estimate the severity of late blight and early blight of the potato on the leaves and experimental plots, it is necessary to use a standard area diagram (SAD) and a field key (FK), respectively. Currently, there are these two scales to late blight only. For early blight, there is only a SAD, comprising diagrams of potato leaves with early blight severity ranging from 0 to 50%. However, this scale has limitations. For this, were developed and validated a SAD and FK. The proposed SAD contains illustrations of leaves with twelve disease severity levels (0.05, 0.5, 2, 4, 8, 16, 32, 48, 62, 82, 96 and 100%). The proposed FK was an adaptation of a FK developed to assess the severity of potato late blight. Both the SAD and FK improved raters ability to accurately, precisely and reliably estimate potato early blight severity, and as such these scale can be used for assessing severity for many purposes, including plant breeding for resistance, fungicide screening, and pathotype characterization. To assess the resistance of potato cultivars to foliar early blight and examine how resistance to foliar early blight relates to foliage maturity type and skin type in potato cultivars in Brazil, three field experiments were carried out under different environmental conditions at the UFV in Viçosa-MG. The first and second experiments used 26 cultivars (treatments). The third experiment used 24 cultivars. The majority of potato cultivars were susceptible and moderately susceptible to foliar early blight. The resistance levels of some cultivars to foliar early blight changed according to the environmental conditions. The resistant cultivars to foliar early blight had mid-season, mid-late or late maturity. No cultivars susceptible to foliar early blight were observed to have later maturity (mid-late or late maturity). In most cases, the cultivars found to be susceptible to foliar early blight had earlier maturity (early or mid-early maturity). The cultivars found to be resistant had a rough, mid-rough or smooth skin. Cultivars that were susceptible to foliar early blight and had rough skin were not observed. In most cases, the cultivars that were found to be susceptible or moderately susceptible to foliar early blight had smooth skin. Aiming to compare late blight and early blight potato epidemics under different environmental conditions and fungicide applications programs, three experiments were carried out using the Ágata cultivart. Each experiment consisted of two side-by-side trials, and each trial was set in a randomised blo ck design with 5 treatments and 5 replications. At 30 days after inoculation, the potato plants of trial 1 were artificially inoculated with the A2 mating type isolate (200 sporangia/mL) of P. infestans and the potato plants of trial 2 were artificially inoculated with isolates (200 conidia/mL) of A. grandis. Fungicide applications started seven days after inoculation. The late blight severity and the early blight severity were quantified every two days, and the disease severity data were used to calculate the area under the disease progress curve (AUDPC). The yield and its loss were also measured. The late blight was more aggressive than the early blight under different environmental conditions, and this was reflected in the yields. The late blight reached yield losses of 82.4%, while the early blight reached yield losses of 44.9%. Fungicide efficiency changed under the different environmental conditions, showing the importance of using tools that monitor the weather, such as forecast systems, for effective disease control.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico Three species of endangered orchids, Hoffmannseggella caulescens, H. cinnabarina and Hadrolaelia jongheana were selected for this study because they are key species of the current situation one of the most important hotspot in the world, the Atlantic Forest. To start an integrated conservation model of for endangered orchids, the objectives proposed in this work are to characterize morphological and molecular Rhizoctonia-like isolates associated with these orchids, then protocols for propagation in vitro Epulorhiza spp. and acclimatization of inoculated plants in a green house, testing alternative substrates. Through molecular and morphological characterization, 30 Rizocthonia-like were identified as Epulorhiza spp. Isolates of rupicolous Hoffmannseggella species represent two clades very near Tulaneslla calospora. Isolates of H. jongheana are phylogenetically distants between them and to four species close to Tulasnella sp. Our results revealed that tropical orchids, epiphytes and rupicolous are probably generalists in their associations with mycorrhizal fungi of the genus Epulorhiza sp. The molecular tools have provided a more accurate identification than morphological characterization. Four Epulorhiza isolates promoted the germination of seeds, one (M65) promoted germination and growth rates significantly higher than the others. The seeds of all species also germinated in not inoculated treatments (B & G, Knudson and OMA), but for OMA treatment was observed only Stage 2. The GI of Hoffmannseggella species was significantly higher in the M65 treatment, but for H. jongheana in two treatments, HJ21B and Knudson, presented similar results. The epiphyte H. jongheana proved to be less dependent on mycorrhiza for germination and development of protocorms that rupicolous species. Finally, the proposed acclimatization methodology also demonstrates to be effective, obtaining the development of seedlings in all treatments with high percentages of survival for all species, as well as the root colonization still observed over 7 months of acclimatization of the three orchid studied . Três espécies de orquídeas em risco de extinção Hoffmannseggella caulescens, H. cinnabarina e Hadrolaelia jongheana foram selecionadas para o presente trabalho por serem ícones da situação atual de um dos mais importantes hotspot do mundo, a Floresta Atlântica. A fim de criar as bases de um modelo de conservação integrada para orquídeas em risco de extinção, os objetivos propostos neste trabalho são realizar a caracterização morfológica e molecular de isolados de Rhizoctonia-like associados a estas orquídeas, para desta forma elaborar protocolos de propagação in vitro com Epulorhiza spp. e de aclimatização de plântulas micorrizadas em casa-de-vegetação, testando substratos alternativos. Através da caracterização morfológica e molecular, 30 Rizocthonia-like foram identificados como Epulorhiza spp. Isolados das espécies rupícolas Hoffmannseggella representam dois clados muito próximos a Tulaneslla calospora. Isolados H. jongheana são filogeneticamente distantes entre eles e próximos a quatros espécies de Tulasnella sp. Nossos resultados desmontaram que as orquídeas tropicais, epífitas e rupícolas, são provavelmente generalistas em suas associações com fungos micorrízicos do gênero Epulorhiza sp. As ferramentas moleculares proporcionaram uma abordagem mais precisa do que a identificação morfológica. Quatros isolados de Epulorhiza promoveram a germinação de sementes, um deles (M65) proporcionou taxas de germinação e índice de crescimento significativamente mais elevados que os demais. Também houve germinação das sementes nos tratamentos não inoculados (B&G, Knudson e OMA) para todas as espécies, mas no OMA foi observado apenas a Estágio 2. O GI para Hoffmannseggella foi significativamente maior no tratamento de M65 e para o H.jongheana não diferiu em dois tratamentos, HJ21B e Knudson. A epífita H. jongheana mostrou ser menos dependente de micorrizas para a germinação e desenvolvimento de protocormos de que as rupícolas. Enfim, a metodologia de aclimatação proposta também se demonstra eficaz, comprovando o desenvolvimento das plântulas em todos os tratamentos com elevadas porcentagens de sobrevivência para todas as espécies, assim como a permanência da micorrização ao longo de 7 meses de aclimatização das três espécies de orquídeas estudadas.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico The taxonomy of the order Meliolales is historically based on the combination of the supposed specificity in relation to the host species and morphology of fungal species. In the last decades, molecular techniques have been widely utilized for the characterization of fungal species, validation of morphological characters and verification of the supposed importance of specificity in relation to hosts at the delimitation of species. To test the hypothesis that the traditional bases of taxonomy in this order have support from molecular analysis, DNA extraction from specimens belonging to genera Amazonia, Appendiculella, Asteridiella, Irenopsis and Meliola was performed and sequences of the 18S and 28S regions of the rDNA and the second largest subunit of RNA polymerase 2 (RPB2) were obtained. Analyzing the 18S, 28S and RPB2 regions it was possible to distinguish the order Meliolales from the other orders of the class Sordariomycetes and prove that this order belongs to the subclass Sordariomycetidae. The analysis of the 18S and 28S regions of the rDNA indicate that the classification of the Meliolales based on morphological traits and comparison of species within each botanical family should be revise, for although the Amazonia, Appendiculella, Asteridiella, Irenopsis and Meliola species clustered in different clades, Asteridiella species clustered with species of the genus Meliola, probably indicating that the group is polyphyletic. We can also conclude that species identified in the same botanical family are not phylogenetically related. Irenopsis cornuta is not a basal species for most of the representatives of the genus, although this taxon is associated with a pteridophyte (Lygodium volubile). When populations of the model species were collected at different habitats we could observe a clear plasticity within the species, because specimens collected at a) a commercial cultivation of rubber trees (Espirito Santo State); b) a seedling nursery of rubber trees (Para State); and c) rubber trees native of the Amazon forest (Para State) showed great morphological variation. An index of the species of black mildews reported in Brazil was elaborated to subsidize the expansion of knowledge of the diversity of this fungal group in the Brazil. Historicamente a taxonomia da ordem Meliolales é baseada na combinação da suposta especificidade em relação às espécies hospedeiras e na morfologia das estruturas fúngicas. Nas últimas décadas o uso de técnicas moleculares tem sido amplamente utilizado para caracterização de espécies fúngicas, validação de caracteres morfológicos e verificação da suposta importância da especificidade em relação a hospedeiros na delimitação de espécies. Para testar a hipótese de que as bases tradicionais da taxonomia nesta ordem tem amparo das análises moleculares, a extração de DNA de espécimes pertencentes aos gêneros Amazonia, Appendiculella, Asteridiella, Irenopsis e Meliola foi realizada e sequências das regiões 18S e 28S do rDNA e segunda maior subunidade da RNA polimerase 2 (RPBZ) foram obtidas. Por meio de análise das regiões 18S, 28S e RPB2, foi possivel distinguir a ordem Meliolales das demais ordens da classe Sordariomycetes e comprovar que a ordem pertence a subclasse Sordariomycetidae. A análise das regiões 18S e 28S do rDNA indicam que a classificação dos Meliolales baseada em caracteres morfológicos e comparação de espécies dentro de cada família botânica deve ser revisada, pois apesar das espécies de Amazonia, Appendiculella, Asteridiella, Irenopsis e Meliola se agruparem em clados distintos, espécies de Asteridiella se agruparam com espécies do gênero Meliola, provavelmente indicando que o grupo seja polifilético. Também conclui-se que espécies identificadas na mesma família botânica não são relacionadas filogeneticamente. Irenopsis cornuta não é uma espécie basal para os demais representantes do gênero, apesar desse taxon estar associado com uma pteridófita (Lygodium volubile). Quando populações da espécie modelo foram coletadas em diferentes habitats, pode-se observar uma nitida plasticidade morfologica dentro da espécie, pois espécimes coletados em: a) um plantio comercial de seringueira (Espirito Santo); b) viveiro de mudas de seringueira (Pará) e c) plantas de seringueira nativas da floresta Amazônica (Pará) apresentaram uma grande variação morfológica. Um índice das espécies de míldios negros relatadas no Brasil foi elaborado para subsidiar a expansão do conhecimento da diversidade desse grupo fúngico no país.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico A partir da iniciativa do Governo Federal em introduzir o biodiesel na matriz energética brasileira, surgiu a necessidade de se pesquisar plantas oleaginosas potenciais para produção de matéria-prima para este biocombustível. O pinhão manso (Jatropha curcas) tem se destacado por ser uma planta perene, de fácil manejo, além de produzir sementes com alto teor de óleo. A grande expansão das áreas de cultivo tem sido acompanhada pelo surgimento de diversas enfermidades, do qual pouco se conhece sobre os reais agentes etiológicos. Atualmente, em diversas áreas do Brasil, tem-se relatado a ocorrência de uma nova doença que não apenas reduz a produtividade, como tem causado a morte das plantas. Esta doença está associada a uma podridão das raízes e do colo das plantas. Alguns patógenos já foram relatados para essa doença, sendo mais frequente a ocorrência de fungos da família Botryosphaeriaceae, grupo conhecido pela dificuldade de separação das espécies utilizando características morfológicas. Assim, o objetivo deste trabalho foi identificar os possíveis agentes etiológicos, investigar a diversidade de Botryosphaeriaceae associado a essa doença, utilizando características morfológicas aliadas às ferramentas moleculares, bem como provar a potogenicidade dos isolados. Foram realizadas coletas nos estados de Minas Gerais e Espírito Santo. Em adição a estes, foram obtidas amostras dos estados do Piauí e São Paulo. Isolados monospóricos foram obtidos e armazenados. Estes tiveram o DNA extraído e as regiões ITS e TEF1-α sequenciadas. A partir dos resultados das análises filogenéticas, foram separados dois a três isolados de cada espécie para a caracterização morfológica. Nove espécies de Botryosphaeriaceae foram identificadas, sendo Lasiodiplodia theobromae, L. parva, L. pseudotheobromae, L. iraniensis, Neoscytalidium dimidiatum, Macrophomina phaseolina e três a serem propostas como novas espécies (Lasiodiplodia sp.1, Lasiodiplodia sp.2 e Macrophomina sp.1). Todas as espécies distinguiram morfologicamente e filogeneticamente, com exceção de Macrophomina sp.1 que não esporulou em meio de cultura. Até o momento, apenas Lasiodiplodia theobromae, Lasiodiplodia sp.1 e Neoscytalidium dimidiatum tiveram a patogenicidade comprovada. Pelos testes de Blotter foram encontrados associados às sementes: Lasiodiplodia theobromae, Macrophomina phaseolina e Macrophomina sp.1. Espécies de Botryosphaeriaceae ocorrem em uma ampla gama de hospedeiros e ambientes, e são frequentemente referidos como endofíticos, patógenos latentes ou oportunistas, devido a manifestação da doença estar diretamente associada à ocorrência de estresse do hospedeiro. A expansão das áreas de pinhão manso no mundo tem contribuído para o surgimento de várias doenças que até o momento não tinham seus agentes etiológicos conhecidos. Este estudo fornece informações novas para futuros estudos de manejo da doença, programas de quarentena e especialmente para o desenvolvimento de variedades resistentes à podridão do colo e raiz do pinhão-manso. The introduction of biodiesel in the Brazilian energy matrix by initiative of the Federal Government, encouraged the search for potential oleaginous crops to supply raw material for biofuel production. The physic nut (Jatropha curcas) has been highlighted since it is a perennial plant, easy to manage, and produces seeds with a high oil content. The expansion of areas of Jatropha in the world has contributed to the emergence of various diseases. Currently in Brazil, the occurrence of a new disease that not only reduces the productivity, since it causes death of the plants. This disease is associated with a collar and root rot of plants. A number of pathogens have been associates with this disease, the occurrence of Botryosphaeriaceae fungi being the most frequent, which is a group known to be difficult to delimit species based on morphological characters. Thus, the purposes of this work was to investigate the diversity of Botryosphaeriaceae associated with collar and root rot of J. curcas, with the aid of morphology and molecular tools and to asses the pathogenicity of the species involved. Samples were colleted in states of Minas Gerais and the Espirito Santo. In addition, samples were obtained from Piauí and São Paulo states. Single spore cultures were obtained and stored. These had their DNA extracted and the ITS and TEF1-α regions were sequenced. From the results of the phylogenetic analyses, two to three isolates of each species were separated for the morphological characterization and pathogenicity tests. With the purpose of investigating the association of the pathogens in seeds, Blotter tests were performed. Nine Botryosphaeriaceae species were identified: Lasiodiplodia theobromae, L. parva, L. pseudotheobromae, L. iraniensis, Neoscytalidium dimidiatum, Macrophomina phaseolina and three to be proposed as new species (Lasiodiplodia sp.1, Lasiodiplodia sp.2 and Macrophomina sp.1). All species were distinguished morphologically and phylogenetically, except Macrophomina sp.1 that failed sporulate in culture.Currently, only Lasiodiplodia theobromae, Lasiodiplodia sp.1 and Neoscytalidium dimidiatum have proven to be pathogenic. Lasiodiplodia theobromae, Macrophomina phaseolina and Macrophomina sp.1 were associated with seeds. Botryosphaeriaceae species occur in a wide range of hosts and environments, and are often referred to as endophytes and latent or opportunistic pathogens, because manifestation of the disease is directly linked with host stress. The great expansion of Jatropha areas in the world have contributed to the emergence of several diseases, which so far, the etiological agent have remained unknown. This study will provide new information for future studies of disease management, quarantine programs and especially, the development of resistant varieties for collar and root rot of J. curcas.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Cyrtopodium cardiochilum is a native Brazilian orchid that has known potential for the production of extracts of interest for the manufacture of cosmetics and pharmaceuticals. The commercial interest in this orchid species and the absence of published information on crop management and disease managements for this species led to the present study. This work served the purpose of generating the background information necessary for the domestication and management of this orchid. Selected substrates and their combinations were tested, for the cultivation of C. cardiochilum, namely: gneiss gravel, expanded clay pellets, shingles, coconut shells and. All substrates were equivalent for the orchid cultivation, although the mixture of expanded clay pellets and gneiss gravel at 1:1 (v/v) resulted in the highest values of biomass. A multi-nutrient formulation having a composition compatible with the nutrient requirements of C. cardiochilum was prepared and the effect of different doses of this fertilizer on the growth of C. cardiochilum was evaluated. The analysis of the dose-response curves allowed it to be inferred that the dose resulting in maximum biomass production was 100 mg/pot/week. Different compositions of culture media for in vitro seminiferous cultivation of C. cardiochilum various proportions of activated charcoal, sucrose and salts of the Supply medium (S) - were tested in order to determine the best composition for the production of C. cardiochilum plantlets. A composition of 3.0 g L-1 of activated charcoal, 33 g L-1 of sucrose and 3.2 g L-1 of salts of the S medium yielded the highest dry biomass of C. cardiochilum plantlets. A preliminary survey of the pathogenic mycobiota associated to C. cardiochilum was also conducted. Six fungal species were collected: Sphenospora kevorkianii, Colletotrichum fructicola, Fusarium solani, Bionectria ochroleuca, Botrytis cinera and Alternaria sp. The first four fungal species were regarded as the most important and had their morphology examined in detail. Molecular methods were used to further clarify the identity of C. fructicola, F. solani and B. ochroleuca. Finally, fungicides were evaluated for the control of plant rots caused by F. solani and B. ochroleuca in vitro and in vivo. The in vitro essay involved four active ingredients (thiram, thiofanate methyl, captan and metalaxyl- M + mancozeb). Both F. solani and B. ochroleuca had their mycelial growth in culture effectively inhibitted by thiram and thiofanate methyl at concentrations of 0.05 g 100 mL-1 and 0.025 g 100 mL-1, respectively. Prior to the in vivo test aimed at evaluating the chemical control of the plant rots a screening of selected orchid species was performed in search for a surrogate species to be used as a substitute for C. cardiochilum due to the difficulty of obtaining a sufficiently big and homogenous stand of plants for use in the experiments. Such species should be readily available in the potted orchid market and also susceptible to both B. ochroleuca and F. solani. A test was also performed aimed at determining the appropriate inoculum concentration to be used in the in vivo chemical control experiment. Among the nine orchid genera which were tested Cattleya and Laelia proved to be adequate surrogates. All inoculum concentrations which were tested for F. solani and B. ochroleuca (103, 104, 105 e 106 spores⁄mL) were capable of causing necrosis in the stand of surrogate plants - Cattleya hybrid (Laeliacattleya Tropical Sunset x Brassolaeliacattleya Chian T3Y Beauty). An in vivo test aimed at evaluating the efficacy of thiram and thiofanate methyl at concentrations of 0.05 g 100 mL-1 and 0.025 g 100 mL-1 respectively, in the control of rots caused by F. solani and B. ochroleuca was conducted. Nevertheless, the results of this experiment were not conclusive since none of the inoculated plants (including the positive controls without any fungicide treatment) developed disease symptoms. Another round of experiments aimed at evaluating in vivo control of the diseases will be conducted aimed at filling this blank of the work. Cyrtopodium cardiochilum é uma orquídea nativa que apresenta potencial para produção de extratos para uso cosmético e farmacêutico. Devido ao seu interesse comercial e a ausência de informações na literatura a respeito dos aspectos fitotécnicos e fitopatológicos relacionados à mesma, o presente estudo teve como objetivo gerar informações que contribuam para a domesticação dessa orquídea e seu manejo. Avaliaram-se alguns substratos e combinações: brita de gnaisse, argila expandida, seixo rolado, coco em cubos (coxim) e vermiculita para o cultivo de C. cardiochilum. Todos os substratos analisados mostraram-se adequados, destacandose a mistura de argila + brita na proporção de 1:1 (v/v). Buscou-se também um fertilizante multi-nutriente compativél em função da demanda nutricional de C. cardiochilum e testou-se o efeito de diferentes doses desse fertilizante sobre o crescimento de plantas de C. cardiochilum. E por meio da análise de curva de doseresposta inferiu-se que a dose que resultou na máxima produção foi a de 100 mg/vaso/semana. Avaliou-se diferentes combinações de carvão ativado, sacarose e sais do meio Suprimento (S) com a finalidade de se determinar a composição mais favorável para a produção de plântulas de C. cardiochilum in vitro. As concentrações de 3,0 g L-1 de carvão ativado, 33 g L-1 de sacarose e 3,2 g L-1 de sais do meio S respectivamente, proporcionaram as maiores produções de massa de matéria seca de plântulas. Também foi feito um levantamento preliminar da micobiota fitopatogênica associada a C. cardiochilum. Foram encontradas seis espécies fúngicas: Sphenospora kevorkianii, Colletotrichum fructicola, Fusarium solani, Bionectria ochroleuca, Botrytis cinera e Alternaria sp. As quatro primeiras espécies fúngicas foram considearadas as mais importantes tendo sido caracterizadas morfologicamente. Metódos moleculares foram utilizados para esclarecer a identidade de C. fructicola, F. solani e B. ochroleuca. Finalmente, avaliou-se a eficiência de fungicidas no controle de podridões causadas por F. solani e B. ochroleuca em condições in vitro e in vivo. No ensaio in vitro foram analisados 4 ingredientes ativos (tiram, tiofanato metílico, captan e metalaxyl- M + mancozeb). Tanto para F. solani quanto para B. ochroleuca, tiram e tiofanato metílico na concentração de 0,05 g 100 mL-1, 0,025 g 100 mL-1, respectivamente foram eficazes no controle do crescimento micelial. Para o controle químico in vivo realizou-se previamente um teste para escolher um ou mais gêneros de orquídea para servirem de substitutos para C. cardiochilum nos ensaios in vivo, uma vez que há pouca disponibilidade de plantas dessa espécie para uso em experimentos. Realizou-se também um experimento visando avaliar o efeito de inoculações com diferentes concentrações de inóculo, com o objetivo de se determinar qual aquela apropriada para inoculação dos fungos no experimento de controle químico in vivo. Dentre os nove gêneros de orquídeas testados como possíveis substitutos para C. cardiochilum, Cattleya e Laelia foram os gêneros escolhidos como modelos. Todas as concentrações de inóculo de F. solani e B. ochroleuca analisadas (103, 104, 105 e 106 esporos⁄mL) foram capazes de causar necroses nas raízes do híbrido de Cattleya utilizado (Laeliacattleya Tropical Sunset x Brassolaeliacattleya Chian T3Y Beauty). Avaliou-se os ingredientes ativos tiram e tiofanato metílico na concentração de 0,05 g 100 mL-1 e 0,025 g 100 mL-1 respectivamente, no controle de F. solani e B. ochroleuca in vivo (em plantas infectadas). Porém, os resultados deste experimento foram inconclusivos, uma vez que as plantas inoculadas não desenvolveram sintomas de doenças. Portanto, experimentos futuros serão realizados para tentar esclarecer a lacuna deixada por esta parte do trabalho.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico Ceratocystis fimbriata sensu lato (s.l.) is a complex of many species that are important pathogens of a large number of woody and herbaceous plants. One of this hosts is rubber tree (Hevea sp.), that is native to the Amazon and belong to the family Euphorbiacea. Rubber tree is grown in order to produce latex, the main raw material for obtaining natural rubber that is used in many different industries. Ceratocystis fimbriata infects the rubber tree panel, causing gray mold that affects latex production. C. fimbriata is considered now as a "species complex" containing cryptic species, and many of them remain undescribed. Thus, the aim of this work was to determine the morphology and phylogenetic relationships of the fungus that causes gray mold in rubber tree in order to confirm whether it is a new species of fimbriata complex. For this, it was used 20 isolates obtained from rubber tree for analysis of genetic variability. Of these, four isolates were selected for morphological and phylogenetic analysis and of those, two isolates were used for pathogenicity tests. According to the sequences of ITS r-DNA, the isolates of C. fimbriata of rubber tree belong to the Latin American clade, with two ITS genotypes, that is related to their geographical origin. One genotype was originated from the state of Acre and the other one from the state of Bahia, which was also confirmed by microsatellite markers. The inoculations showed no specialization to the host, since they were pathogenic to different host species (mango, crotalaria, acacia, eucalyptus and kiwi). Therefore, according to the results of this work, the isolates of rubber tree belong to the Latin American clade and confirmed as C. fimbriata and not a distinct species. Espécies do complexo Ceratocystis fimbriata sensu lato (s.l.) são importantes patógenos de um grande número de plantas arbóreas e herbáceas, dentre elas a seringueira (Hevea sp.), nativa da região amazônica e pertencente a família Euphorbiaceae. A seringueira é cultivada visando a produção do látex, a principal matéria prima para obtenção da borracha natural que é utilizada em diversos setores. Ceratocystis fimbriata infecta o painel da seringueira, causando uma doença conhecida como mofo cinzento que afeta negativamente a produção de látex. Ceratocystis fimbriata s.l. considerado, atualmente, como um complexo de espécies contendo várias espécies crípticas, muitas das quais ainda não descritas. Deste modo, objetivou-se com este trabalho, determinar a morfologia, o relacionamento filogenético e especificidade de hospedeiro do fungo causador do mofo cinzento em seringueira, de modo a confirmar se é uma nova espécie do complexo fimbriata. Para isso, foram utilizados 20 isolados de seringueira para análise de variabilidade genética. Dentre estes, quatro isolados foram selecionados para análises morfológicas e filogenéticas e destes, dois foram utilizados para testes de patogenicidade. De acordo com as sequências de ITS r-DNA analisadas, os isolados de C. fimbriata de seringueira pertencem ao clado da América Latina, com dois genótipos de ITS, de acordo com a origem geográfica, sendo eles originados do Estado do Acre e o outro do Estado da Bahia, também confirmados por análises de microssatélites. As inoculações mostraram que não há especialização, quanto ao hospedeiro, uma vez que foram patogênicos a diferentes espécies hospedeiras (manga, crotalária, acácia, eucalipto e kiwi). Portanto, de acordo com os resultados deste trabalho, os isolados de seringueira pertencem ao clado da América Latina e são confirmados como C. fimbriata e não uma espécie distinta.

O Brasil possui uma grande biodiversidade de orquídeas, principalmente de espécies epífitas. Dentre essa diversidade ressaltam-se as espécies Hadrolaelia jongheana, Hoffmannseggella cinnabarina, Hoffmannseggella caulescens presentes em diferentes formações vegetacionais da Floresta Atlântica. As espécies pertencentes à família Orchidaceae associam-se com fungos micorrízicos para promover a germinação de sementes e o estabelecimento do protocormo em seu ambiente natural. O conhecimento da diversidade da comunidade microbiana com qual a orquídea mantém essa associação é de extrema relevância para a compreensão da ecologia e complexidade das associações simbióticas. O presente trabalho teve como objetivo estudar a diversidade genética dos fungos associados às orquídeas H. jongheana, H. cinnabarina, H. caulescens, utilizando-se abordagens moleculares, como a contrução de bibliotecas de clones e amplificação do DNA diretamente das raízes. Os valores do índice de diversidade de Shannon-Wiener para H. cinnabarina, coletada em distintas áreas, foram diferentes, sugerindo que os fatores locais influenciam na diversidade. Observamos que as comunidades fúngicas das três espécies de orquídeas analisadas apresentaram alta diversidade, sendo a composição dessas comunidades estruturalmente diferentes entre si de acordo com as análises do LIBSHUFF. A construção de bibliotecas de clones permitiu identificar táxons de fungos basidiomicetos e ascomicetos associados às raízes dessas plantas. Os fungos basidiomicetos encontrados, em sua maioria, são potenciais candidatos a fungos micorrízicos de orquídeas. Ao passo que, os ascomicetos identificados são, possivelmente, fungos endofíticos dessas plantas. Além disso, verificamos que essas orquídeas tropicais são generalistas em suas associações micorrízicas com fungos rizoctonióides sebacinóides e tulasnelóides. Estes resultados são relevantes à medida que são informações importantes para traçar estratégias de conservação para espécies da flora brasileira ameaçadas de extinção e endêmicas de um importante e ameaçado hotspot. Brazil has a huge orchid biodiversity, mostly epiphytic species. Among this we emphasize Hadrolaelia jongheana, Hoffmannseggella cinnabarina, and Hoffmannseggella caulescens species occur in different vegetation formations of the Atlantic Forest. The species belonging to the family Orchidaceae are associated with mycorrhizal fungi to promote seed germination and establishment of protocormo in their natural environment. The knowledge of the microbial community diversity which the orchids maintain association is extremely important for understanding the ecology and complexity of symbiotic associations. The present work aimed to study the genetic diversity of fungi associated with orchids H.jongheana, H. cinnabarina, H. caulescens, using molecular approaches, such as the clone library construction and DNA amplification directly from the roots. The values of diversity index Shannon-Wiener for H. cinnabarina, collected in different areas were different, suggesting that local factors influence the diversity.We observed that the fungal communities of those three orchid species analyzed showed high diversity, and the composition of these communities are structurally different from each other according to the LIBSHUFF analysis. The clones libraries construction allowed to identify Basidiomycetes and Ascomycetes taxa associated with the roots of these plants. Basidiomycete fungi found, mostly, are potential candidates for orchid mycorrhizal fungi. While the identified Ascomycete fungi found are possibly endophytes of these plants. Furthermore, we found that these tropical orchids are generalists in their mycorrhizal associations with sebacnioid and tulasnelloid Rhizoctonia-like fungi. These results are relevant as they are important information to develop conservation strategies to threaten and endemic Brazilian orchid species from an important and threatened hotspot.

Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais The objective of this research was to evaluate in the field and under controlled conditions, the incidence of Pyricularia grisea in wheat genotypes depending on the amount of initial inoculum in the field, through damage assessment quantitative and qualitative as well as detection methods the pathogen in the seeds. In the field were employed treatments arranged in a 4x5 factorial scheme: inoculations of the four wheat genotypes (BRS 264, VI 98053, CD 116 and CD 104) with five intensities of Pyricularia grisea inoculum in field (0, 5, 10, 20 and 30% of plants with inoculum of plot) in randomized block design. The intensity of 0 (uninoculated) matched to application of water and then being conducted chemical control. To evaluate the intensity of the blast in the field were analyzed: incidence of P. grisea in plants, blast severity in the spike wheat and severity in the flag leaf. The effect of the blast was evaluated on yield and seed quality harvested by means of the following determinations: dry mass of 100 plants, seed mass of 100 spike wheat, seed productivity, germination, first count of the germination test, germination speed index, seedling dry matter, seeds hectolitre mass and incidence of P. grisea. It was evaluated the transmission of P. grisea from plant to seed and from seed to seedling, this last being under controlled conditions. In relation to detection methods for P. grisea in seeds, the substrates were evaluated: filter paper with freezing (control treatment), oat culture medium, wheat flour culture medium, PDA culture medium (potato-dextrose-ágar), these last three with and without water restriction (plus mannitol -1,0 MPa); filter paper substrate soaked in water four restrictors (polyethylene glycol (PEG), mannitol, NaCl and sucrose) to -1.5 MPa, a total of 11 treatments. In general, the incidence of P. grisea, blast severity in the spike wheat and blast severity in the flag leaf progressed in over time for each intensity of initial inoculum of P. grisea used. Wheat genotypes BRS 264, CD 104 and VI 98053 show susceptible to blast, but the genotype CD 116 is confirmed as moderately resistant to blast the experimental conditions. There is a reduction of the productivity and of the physiological and sanity quality of seeds of genotypes according to the intensity of initial inoculum of P. grisea in the field. There is the transmission of P. grisea from plant to seed and from seed to seedling with variable rates depending on the amount of initial inoculum in the field and of the wheat genotype studied. Finally, the wheat flour culture medium with water restriction is a good alternative to the method of filter paper with freezing as substrate for testing of health of wheat seeds. Objetivou-se, com esta pesquisa, avaliar, em campo e em condições controladas, a incidência de Pyricularia grisea em genótipos de trigo em função da quantidade de inóculo inicial no campo, por meio da avaliação de danos quantitativos e qualitativos; bem como de métodos de detecção do patógeno nas sementes. Em campo, foram empregados tratamentos arranjados em esquema fatorial 4x5: inoculações de quatro genótipos de trigo (BRS 264, VI 98053, CD 116 e CD 104) com cinco intensidades de inóculo de Pyricularia grisea (inoculação de 0, 5, 10, 20 e 30% de plantas da unidade experimental), em delineamento de blocos casualizados com três repetições. A intensidade 0 (sem inoculação) correspondeu a aplicação de água, e em seguida, realizado o controle químico. Para a avaliação da intensidade da brusone em campo, foram analisadas: incidência de P. grisea nas plantas, severidade da brusone na espiga e a severidade da brusone na folha bandeira. O efeito da brusone foi avaliado na produtividade e na qualidade das sementes colhidas, por meio das seguintes determinações: massa da matéria seca de 100 plantas, massa de sementes de 100 espigas, produtividade de sementes, germinação, primeira contagem da germinação, índice de velocidade de germinação, massa da matéria seca de plântulas, massa do hectolitro das sementes e incidência de P. grisea nas sementes. Foram avaliadas taxas de transmissão de P. grisea planta-semente e semente-plântula, sendo essa última avaliada em condições controladas e em delineamento inteiramente casualizado com 10 repetições. Em relação aos métodos de detecção de P. grisea em sementes, foram avaliados os substratos: papel de filtro com congelamento (testemunha); meio de cultura de aveia; meio de cultura a base de farinha integral de trigo; meio BDA (batata-dextrose-ágar), esses três últimos com e sem restrição hídrica (acrescidos de manitol a -1,0 MPa); papel de filtro embebido em quatro restritores hídricos (polietileno glicol (PEG), manitol, NaCl e sacarose) a -1,5 MPa, totalizando 11 tratamentos em delineamento inteiramente casualizado com quatro repetições. Foram realizadas análises de regressão, análises da variância, comparação de médias pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade e análises de correlação nos diferentes experimentos. Em geral, a incidência de P. grisea, a severidade da brusone na espiga e na folha bandeira progrediram no tempo para cada intensidade de inóculo inicial de P. grisea no campo. Os genótipos de trigo BRS 264, CD 104 e VI 98053 mostram-se suscetíveis à brusone, porém o genótipo CD 116 se confirma como moderadamente resistente a doença nas condições experimentais. Há redução da produtividade e da qualidade fisiológica e sanitária das sementes dos genótipos de trigo avaliados em função da intensidade de inóculo inicial de P. grisea no campo. Ocorre a transmissão de P. grisea da planta para a semente e da semente para a plântula, com taxas variáveis, em função da quantidade de inóculo inicial no campo e do genótipo de trigo estudado. Por fim, o meio de cultura a base de farinha integral de trigo, com restrição hídrica, é uma boa alternativa ao método do congelamento, como substrato para testes de sanidade de sementes de trigo.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico Fungal diseases of postharvest, mainly anthracnose, are one of the causes of papaya depreciation with losses in trading. The process normally used for this disease control in postharvest includes hydrothermal treatment at 49 °C for 20 minutes, followed by cooling for the same period, besides the application of fungicides. Disadvantages linked to conventional treatments lead to search for new methods to control postharvest anthracnose in papaya. One alternative is ozone gas (O3) usage, for being a strong oxidizing and antimicrobial agent, which can be generated on site by an electrical discharge, dismissing the need for handling, storage, or disposal of packaging. This study aimed to evaluate the effectiveness of ozone dissolved in water to control anthracnose in papaya and check the influence of this treatment on these fruits physical and chemical characteristics. Papaya (Carica papaya L.) Golden cultivar was used, harvested at maturity stage 1, with up to 15% yellow color. To evaluate the ozone effect in controlling anthracnose, fruits were inoculated with spore suspension of Colletotrichum gloeosporioides and C. magna at a concentration of 2.3 x 106 CFU mL-1. Subsequently, fruits ozonation was performed in tank with water containing dissolved ozone at a concentration of 0.8 mg L-1 for periods of 40, 80, 120, and 160 minutes. Non-ozonated fruits were used as control. After this process, the fruits were stored in chambers at 11 °C and 80 to 85% RH for 15 days. Analyzes were performed in this period in the first and 15th days. Subsequently, the chamber temperature was changed to 25 °C and analyzes was made on the 17°, 19°, 21°, and 23° days of storage. Data were subjected to variance analysis using SAEG (SAEG, 2007) statistical software. The comparison of analysis mean values of the ozonated or non-ozonated fruit stored for zero and 15 days was performed by the F test at 5% probability. In the second step, fruits stored at 25 °C for eight days were analyzed from the 15th day. Split plot scheme was made and in the parcels there were five periods of exposure (0, 40, 80, 120, and 160 minutes) to Ozone dissolved in water; and in subplots there were five periods of fruits storage (0, 2, 4, 6, and 8 days, except for CO2 production, that in subplot there were four storage periods, from the second day) in a completely randomized design (CRD) with two replicates, except percentage of injured area, with three replicates. Analyzes were of percentage of injured area, CO2 production, fresh mass loss, titratable acidity, soluble solids, skin color, vitamin C content, pulp firmness, and pH. During storage at 11 °C, there was no significant increase in lesioned area by anthracnose. The papayas showed increased respiratory rate with a trend towards smaller increase for those exposed to ozone. The firmness decreased during this period. Values of Hue° decreased and values of Chroma and Color Difference increased. Fruit fresh mass suffered a decrease and parameters suffered titratable acidity, soluble solids, and vitamin C content; pH showed no change during this period. During storage at 25 °C, lowest percentage of lesioned area in fruits treated with ozone was recorded in comparison to untreated fruits. The fruits exposed to ozone dissolved in water also showed less loss of firmness and lower respiration rate during storage. The color parameters (Chroma, Hue°, and Color Difference), pH, soluble solids, and titratable acidity of ozonated papayas did not differ from those observed in fruits exposed to ozone dissolved in water. It can be concluded that the application of ozone dissolved in water at a concentration of 0.8 mg L-1 for up to 160 minutes is efficient in reducing the severity of anthracnose in postharvest of papaya Golden cultivar without, however, adversely affecting fruits quality. As doenças fúngicas de pós-colheita, principalmente a antracnose, constituem uma das causas de depreciação do mamão, com perdas na comercialização. O processo normalmente utilizado para controle dessa doença em pós-colheita inclui tratamento hidrotérmico dos frutos a 49 °C durante 20 min, com posterior resfriamento por igual período, além da aplicação de fungicidas. As desvantagens associadas aos tratamentos convencionais tornam necessária a busca de novos métodos de controle da antracnose na pós-colheita do mamão. Uma das alternativas é a utilização do gás ozônio (O3), por se tratar de forte agente oxidante e antimicrobiano, que pode ser gerado no local por meio de uma descarga elétrica, descartando a necessidade de manipulação, armazenamento ou eliminação de embalagens. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a eficácia do ozônio dissolvido em água para controle de antracnose em mamões, bem como verificar a influência desse tratamento nas características físs e químicas dos frutos. Foram utilizados mamões (Carica papaya L.) Golden , colhidos no estádio de maturação 1, com até 15% de cor da casca amarela. Para a avaliação do efeito do ozônio no controle de antracnose, os frutos foram inoculados com suspensão de conídios de Colletotrichum gloesporioides e C. magna, na concentração de 2,3 x 106 UFC mL-1. Posteriormente procedeu-se à ozonização dos frutos em tanque com água contendo ozônio dissolvido na concentração de 0,8 mg L-1, pelos períodos de 40, 80, 120 e 160 min. Como controle foram utilizados frutos não ozonizados. Após esse processo, os frutos foram armazenados em câmaras climáticas a 11 °C e 80 a 85% UR por 15 dias. Foram feitas análises nesse período no primeiro e no 15° dia. Posteriormente, a temperatura da câmara foi modificada para 25 °C, sendo feitas análises nos 17°, 19°, 21° e 23° dias de armazenamento. Foram analisados o percentual de área lesionada, produção de CO2, perda de massa fresca, acidez titulável, sólidos solúveis, cor da casca, teor de vitamina C, firmeza da polpa e pH. Durante o armazenamento a 11 °C, não houve aumento significativo de área lesionada por antracnose. Os mamões apresentaram aumento da taxa respiratória, com uma tendência de menor aumento para aqueles expostos ao ozônio. A firmeza da polpa apresentou redução nesse período. Os valores do ângulo Hue (h°) apresentaram decréscimo e os valores de Croma e Diferença de cor aumentaram. A massa fresca dos frutos sofreu decréscimo e os parâmetros acidez titulável, sólidos solúveis, teor de vitamina C e pH não apresentaram variação nesse período. Durante o armazenamento a 25 °C, foi verificado menor percentual de área lesionada nos frutos tratados com ozônio, em comparação aos não tratados. Os frutos expostos ao ozônio dissolvido na água também apresentaram menor perda de firmeza da polpa e menor taxa respiratória ao longo do armazenamento. Os parâmetros de cor (Croma, Hue° e diferença de cor), pH, sólidos solúveis e acidez titulável dos mamões ozonizados não diferiram dos observados nos frutos expostos ao ozônio. Pode-se concluir que a aplicação do ozônio dissolvido na água, na concentração de 0,8 mg L-1, por até 160 min, é eficiente na diminuição da severidade de antracnose na pós-colheita de frutos de mamão Golden , sem, entretanto, afetar negativamente a qualidade dos frutos.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico Dimorphandra wilsonii (Fabaceae), commonly known as faveiro de Wilson , is an endemic species of Minas Gerais, which occurs in the transition between the Cerrado and the Atlantic Forest, north of Belo Horizonte. It was included in the list of endangered species in the state of Minas Gerais, in the general list of endangered Brazilian flora, and in the list kept by the International Union for Conservation of Nature (IUCN), where it appears as critically endangered, the level that precedes extinction. In contrast, Dimorphandra mollis Benth., a plant that is taxonomically very close to the faveiro de Wilson , commonly known as faveira and falso barbatimão , is widely distributed in the Brazilian Cerrado mainly in the states of Goiás, Mato Grosso, Minas Gerais and São Paulo. This work represents a continuation of the investigations started some years ago aimed at contributing to the knowledge of the mycobiota associated with endangered Brazilian plants and, therefore, also possibly threatened with extintion. A survey of the foliicolous mycobiota of D. wilsonii was undertaken and parallel to that, also the mycobiota of D. mollis occurring in the same vicinity as D. wilsonii was investigated. Such a kind of mycological study was expected to yield both interesting mycological information and to contribute towards the generation of a preliminary list of fungal species in danger of extinction. The inclusion of the mycobiota of D. mollis in the surveys aimed at excluding the fungi occurring on both plants from such a list with regards to the risk of extinction because of host loss. The surveys were concentrated in the municipality of Caetanópolis and Paraopeba, Juatuba, Fortuna de Minas, Sete lagoas e Pequi. Fifteen fungal species were found, described and illustrated of which ten had the ITS region (Internal Transcribed Spacer) the rDNA and LSU (Large Subunit 28S) partially sequenced and phylogenetically compared with other sequences available in GenBank, in order to generate a more complete understanding of the taxonomic relationships. Thirteen fungal species were found associated with D. wilsonii: Vesiculohyphomyces cerradensis, Johansonia chapadiensis, Trichomatomyces byrsonimae, Piricauda paraguayensis, Geastrumia polystigmatis, Phillipsiella atra, Stomiopeltis suttoniae, Microcalliopsis dipterygis, Janetia sp. 1 (probably new species), Byssogene sp. (probably new species), Pseudocercospora sp. (probably new species), Pseudocercosporella sp. (probably new species), cf. Radulidium sp. (probably new genus). Six species were found associated with D. mollis: Trichomatomyces byrsonimae, Piricauda paraguayensis, Pseudocercospora sp. (probably new species), Pseudocercosporella sp. (probably new species), Janetia sp. 2 (probably new species) and Alveariospora distoseptata (proposed as a new genus and species). The species Vesiculohyphomyces cerradensis, Trichomatomyces byrsonimae, Piricauda paraguayensis, Geastrumia polystigmatis, Phillipsiella atra, Microcalliopsis dipterygis and Stomiopeltis suttoniae are notoriously polyphagous and have been reported on a variety of substrates having a wide distribution and, therefore, have no interest for conservation. Four fungi occurred on both species of Dimorphandra: Pseudocercospora sp., Pseudocercosporella sp., Piricauda paraguayensis and Trichomatomyces byrsonimae. In conclusion, there is a possibility that three of the taxa showed be described as new since they are found strictly in association with D. wilsonii, Janetia sp., Byssogene sp., cf. Radulidium sp. and, are considered to be endangered fungal species. Dimorphandra wilsonii Rizzini, Fabaceae, popularmente conhecida como faveiro de Wilson , é espécie endêmica de Minas Gerais, que ocorre na transição do Cerrado para a Mata-Atlântica, ao norte de Belo Horizonte. Consta do anexo I da lista da Flora Brasileira Ameaçada de Extinção, nas listas da flora ameaçada de Minas Gerais e da International Union for Conservation of Nature (IUCN), onde figura como criticamente ameaçada, o nível que antecede o de extinção. Em contrapartida, Dimorphandra mollis Benth., planta taxonomicamente muito próxima do faveiro de Wilson, popularmente conhecida como faveira e falso barbatimão , é comum e amplamente distribuída pelo Cerrado brasileiro principalmente nos estados de Goiás, Mato Grosso, Minas Gerais e São Paulo. Com o objetivo de contribuir para o conhecimento sobre a micobiota associada a plantas ameaçadas de extinção no Brasil e, por conseguinte, também possivelmente ameaçadas, efetuou-se levantamento da micobiota folícola associada a D. wilsonii, e, paralelamente, de fungos folícolas que colonizam D. mollis, encontrados nas proximidades de indivíduos remanescentes de D. wilsonii. Nesse tipo de estudo micológico visa-se à geração de informação tanto na área micológica quanto na contribuição na geração de uma lista preliminar de espécies fúngicas em risco de extinção. Pretendeu-se excluir da lista de espécies fúngicas em risco de extinção aquelas que, além de ocorrerem sobre D. wilsonii, também ocorrem sobre D. mollis. As coletas foram concentradas nos municípios de Caetanópolis, Paraopeba, Juatuba, Fortuna de Minas, Sete lagoas e Pequi. Quinze espécies fúngicas foram encontradas, descritas e ilustradas, dentre as quais oito tiveram a região ITS (Internal Transcribed Spacer) do rDNA e a região LSU (Large Subunit 28S) parcialmente sequenciadas e comparadas filogeneticamente a outras sequências disponíveis no GenBank a fim de se obter uma compressão mais completa das relações destes gêneros. Treze espécies fúngicas foram encontradas associadas a D. wilsonii: Vesiculohyphomyces cerradensis, Johansonia chapadiensis, Trichomatomyces byrsonimae, Piricauda paraguayensis, Geastrumia polystigmatis, Phillipsiella atra, Stomiopeltis suttoniae, Microcalliopsis dipterygis, Janetia sp. 1 (provável espécie nova), Byssogene sp. (provável espécie nova), Pseudocercospora sp. (provável espécie nova), Pseudocercosporella sp. (provável espécie nova), cf. Radulidium sp. (provável gênero novo). Seis espécies foram encontradas associadas a D. mollis: Trichomatomyces byrsonimae, Piricauda paraguayensis, Pseudocercospora sp. (provável espécie nova), Pseudocercosporella sp. (provável espécie nova), Janetia sp. 2 (provável espécie nova) e Alveariospora distoseptata (proposto como novo gênero e espécie). As espécies Vesiculohyphomyces cerradensis, Trichomatomyces byrsonimae, Piricauda paraguayensis, Geastrumia polystigmatis, Phillipsiella atra, Microcalliopsis dipterygis e Stomiopeltis suttoniae já foram relatadas ocorrendo em outras espécies de plantas tendo ampla distribuição, portanto, não tem interesse conservacionista. Quatro fungos ocorreram em ambas as espécies de Dimorphandra: Pseudocercospora sp. (provável espécie nova), Pseudocercosporella sp. (provável espécie nova), Piricauda paraguayensis e Trichomatomyces byrsonimae. Conclui-se que há possibilidade de que os três novos taxa associados unicamente a D. wilsonii: Janetia sp., Byssogene sp. e cf. Radulidium sp., mereçam o status de espécies possivelmente ameaçadas de extinção.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico The Zona da Mata of Minas Gerais is a region that historically has suffered severe soil degradation and loss of native forest. In this environment, the soils tend to beundernourished and alic, eutrophic soils occurring only in the lower parts of the relief. The deep weathering mantle and associated to topography favors the loss of nutrients. In this region, the fragmentation of the properties is accompanied by a very unequal distribution of resources, where small farmers do not have enough land for reproduction of the family unit. The culture of coffee (Coffea arabica L.) is one of the main productive activities in the region, practiced on hillside soils, mainly by small farmers. In this context, the deployment of the systems based on agroecological principles in an alternative that allows for soil conservation and maintenance of local biodiversity. In 1994 farmers in the municipality of Araponga Forest zone mining chose to combine the production of the coffee with environmental sustainability, giving rise to the idea of coffee production in agroecological, agroforestry or the sun coffee. The agroecological systems are management with low use of chemical fertilizers, no use pesticides, the untilled soil and with an emphasis on nutrient cycling. In agroforestry systems (SAF), unlike the system to sun coffee (PS) the inclusion of the tree component, prioritizing the use of native Atlantic Forest and or fruit. After the consolidation of these agroecosystems (18 years) and several studies have as its theme: carbon stocks organic phosphorus in the soil, indicators of physical, chemical and biological water flow, nutrient cycling and plant species diversity, there is the need to assess the functionality of key organizations such systems, such as mycorrhizal fungi (AMF). These microsymbionts perform several functions that are critical to the perpetuation of these ecosystems. The action of AMF is attributed often to the increase in the volume of soil explored by the host plant, increases the absorption of water and nutrients. However, other benefits are conferred on the mycorrhizal plants, such as protection against root pathogens, tolerance to attack by herbivores, salinity, phytotoxic elements such as aluminium (Al) or heavy metals. Furthermore, the network mycelial fungi is important in the structure and carbon (C) input of the soil (hyphae and glomalin). Glomalin is a hydrophobic glycoprotein produced by the AMF and accumulates in the soil concentrations in mg per g-1. This glycoprotein remains for years or decades in the soil, with stays of 6-42 years. The dynamics of glomalin in the soil is still unclear, however, factors such as management of agricultural areas, the availability of host species, nutrient balance of plants, nutrient availability, levels of CO2 in the atmosphere and the soil physical and chemical attributes of the soil can affect the stocks of this protein, especially those that alter the abundance and diversity of AMF. The aim of this study was to evaluate the dynamics of glomalin in areas of Zona da Mata of Minas Gerais. And yet, the transfer of chemical signals between plants connected by hyphae of AMF. To assess the dynamics of glomalin in the soil were selected three family farms (An, Ro e Fe), which grow coffee (Coffea arabica L.) in the region of Araponga-MG. In each farm was sampled the soil from one an agroforestry system (SAF) and sun coffe system (PS). As a reference, sampled the soil is of a secondary native forest (MN) representative of the region and within the areas of Atlantic Forest. Were taken from four composite samples of soil between the rows of planting and near the basal third of the canopy of coffee at different depths. We analyzed the levels total glomalin (GT) and easily extractable glomalina (GFE), total organic carbon (COT), total nitrogen (NT), carbon glomalin (CG), the nitrogen of glomalin (NG), the levels of glomalin on aggregate classes (4-2, 2-1 and 1 to 0.5 mm in diameter), geometric mean diameter (DMG), mean weight diameter (DMP) of aggregates stability index (ASI), labile carbon (CL) and carbon not labile (CNL), bulk density (Ds), clay content, water-dispersible clay (ADA), mycorrhizal colonization of coffee, pontaneous species, tree species of agroecosystems, and roots extracted from s the ground, number of spores of AMF, weight of roots, pH, available P, sum of bases (SB), total cation exchange capacity (CTCtotal) and effective (CTCefetiva), exchangeable aluminum (Al3+) and potential acidity (H + Al). Finally, to demonstrate the connection between plants of hyphae of an AM signal and the transfer plants built between a double system of vessels connected. The results indicated that agroecosystems with coffee Zone Mata de Minas Gerais have high stocks of glomalin. The AMF they contribute significant amounts of organic C and N in the soil as glomalin. Aggregates of larger diameter have higher levels of glomalin. Some physical, chemical and biological soil affect the levels of glomalin. The agroforestry systems can contribute to increase the restoration of the levels of glomalina, but this will depend on system characteristics, such as age, type and quality of individual trees. In a study of coffee, the introduction of tree component in an area adjacent to an agroecological sun coffee, with the same history of degradation, resulted in higher stocks of glomalin in the soil. In signal transduction, it was found that the technique of double pot proper is connected to note the induction of plant defense indirectly connected via the network mycelial AMF. A Zona da Mata de Minas Gerais é uma região que historicamente tem sofrido intensa degradação de solos e perda da floresta nativa. Nesse ambiente, os solos tendem a ser distróficos e álicos, ocorrendo solos eutróficos apenas nas partes mais baixas do relevo. O profundo manto de intemperismo que associado ao relevo acidentado, favorece a perda de nutrientes. Nessa região, a fragmentação das propriedades é acompanhada de uma distribuição bastante desigual de recursos, onde os pequenos agricultores não têm terra suficiente para a reprodução da unidade familiar. A cultura do café (Coffea arabica L.) é uma das principais atividades produtivas da região, praticada em solos de encosta, principalmente por pequenos agricultores. Nesse contexto, a implantação de sistemas baseados nos princípios agroecológicos é uma alternativa que permite a conservação do solo e a manutenção da biodiversidade local. Em 1994, os agricultores familiares do município de Araponga, Zona da Mata Mineira, optaram por conciliar a produção de café com a sustentabilidade ambiental, surgindo a idéia da produção de café agroecológico, agroflorestal ou a pleno sol. Os sistemas agroecológicos são manejados com o baixo uso de adubos químicos, a não utilização de agrotóxico e o não revolvimento dos solos, tendo como ênfase a ciclagem de nutrientes. Nos sistemas agroflorestais (SAF), ao contrário do sistema a Pleno Sol (PS) houve a incorporação do componente árboreo, priorizando a utilização de espécies nativas da Mata Atlântica e ou frutíferas. Após a consolidação desses agroecossistemas (18 anos) e diversos estudos (estoques de carbono orgânico e fósforo no solo; indicadores físicos, químicos e biológicos; fluxo hídrico; ciclagem de nutrientes e diversidade de espécies vegetais) surge a necessidade de avaliar a funcionalidade de organismos chave desses sistemas, como os fungos micorrízicos arbusculares (FMAs). Esses microssimbiontes desempenham diversas funções que são fundamentais para perpetuação desses agroecossistemas. A ação dos FMAs é atribuída, frequentemente, ao aumento no volume de solo explorado pela planta hospedeira, ocasionando uma maior absorção de água e nutrientes. Entretanto, outros benefícios são conferidos as plantas micorrizadas, como a proteção do sistema radicular contra patógenos; tolerância ao ataque de herbívoros; salinidade e elementos fitotóxicos, como o Alumínio (Al) ou metais pesados. Além disso, a rede micélial desses fungos é importante na estruturação e no aporte de Carbono (C) do solo (hifas e glomalina). A glomalina é uma glicoproteína hidrofóbica produzida pelos FMAs e que se acumula no solo em concentrações de mg por g-1. Essa glicoproteína permanece por anos ou décadas nos solos, com períodos de residência de 6 a 42 anos. A dinâmica da glomalina no solo ainda é pouco compreendida, entretanto, fatores como o manejo agrícola das áreas, a disponibilidade de espécies hospedeiras, balanço nutricional das plantas, disponibilidade de nutrientes, teores de CO2 na atmosfera do solo e os atributos físico-químicos do solo podem afetar os estoques dessa proteína, principalmente aqueles que alteram a abundância e a diversidade dos FMAs. O objetivo do presente estudo foi avaliar a dinâmica da glomalina em áreas da Zona da Mata de Minas Gerais. E, ainda, a transferência de sinais químicos entre plantas conectadas via hifa dos FMAs. Para avaliação da dinâmica da glomalina no solo, foram selecionadas três propriedades de agricultores familiares (An, Ro e Fe) que cultivam café (Coffea arabica L.), na região de Araponga-MG. Em cada propriedade, foi amostrado o solo de um sistema a PS e um SAF. Como referência, amostrou-se o solo de uma mata nativa secundária (MN) representativa da região e dentro dos domínios da Floresta Atlântica. Foram retiradas quatro amostras compostas de solo na entrelinha de plantio e próximo ao terço basal do dossel do cafeeiro, em diferentes profundidades. Analisou-se: os teores glomalina total (GT) e facilmente extraível (GFE); carbono orgânico total (COT); nitrogênio total; carbono da glomalina (CG); nitrogênio da glomalina (NG); teores de glomalina nas classes de agregados (4-2, 2-1 e 1-0,5 mm de diâmetro); diâmetro médio geométrico (DMG); diâmetro médio ponderado (DMP); índice de estabilidade de agregados (IEA); Carbono lábil (CL); Carbono não lábil (CNL); densidade do solo; teor de argila; argila dispersa em água (ADA); colonização micorrízica do cafeeiro; espécies espontâneas; espécies arbóreas dos agroecossistemas e raízes extraídas do solo; número de esporos dos FMAs; peso de raízes; pH; P disponível; soma de bases (SB); capacidade de troca catiônica total (CTCtotal) e efetiva (CTCefetiva); alumínio trocável (Al3+) e acidez potencial (H+Al). Por fim, para demonstrar a conexão entre plantas por hifas de MAs e a transferência de sinal entre plantas, foi construído um sistema de vasos duplos conectados. Os resultados indicaram que os agroecossistemas com cafezais da Zona de Mata de Minas Gerais apresentam elevados estoques de glomalina. Os FMAs aportam quantidades significativas de C e N orgânico no solo, na forma de glomalina. Os agregados de maior diâmetro apresentam maiores teores de glomalina. Alguns atributos físicos, químicos e biológicos do solo interferem nos teores de glomalina. Os sistemas agroflorestais podem contribuir para o aumento da restauração dos teores de glomalina, mas isso dependerá de características dos sistemas, como idade, espécie e quantidade de indivíduos arbóreos. Em um dos cafezais estudados, a introdução do componente arbóreo em área adjacente a um cafezal agroecológico a pleno sol, com o mesmo histórico de degradação, resultou em maiores estoques de glomalina no solo. Na transferência de sinais, verificou-se que a técnica do vaso duplo conectado é adequada para observar a indução de defesa indireta em plantas conectadas, via rede micelial, dos FMAs.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico The ectomycorrhizal association is a mutualistic interaction between plant roots and soil fungi that causes morphophysiological changes in the plant root system. The nutritional benefits result from the capacity of the fungus to increase the uptake of mineral nutrients by the host plant in exchange for photoassimilates. For the ectomycorrhizal association between Scleroderma laeve and Eucalyptus grandis, there is no information on which genes are decisive for the symbiosis and how they relate to the formation of ectomycorrhizas. Transcripts of the genes ras and ef1α were dentified as differentially expressed in many symbiotic associations and are related to signal transduction pathways and protein synthesis, respectively. Thus, the objectives of this work were to establish the ectomycorrhizal association between S. laeve and E. grandis in vitro, to isolate partial sequences of the genes ras and ef1α of S. laeve, and to evaluate the functional expression of these genes during ectomycorrhizal formation. Our works demonstrates the ectomycorrhizal association between S. laeve and E. grandis in vitro for the first time. The typical structures of ectomycorrhizas, such as the mantle and the Hartig net, were observed. At three days of contact between S. laeve and E. grandis roots the beginning of mantle formation could be observed. At 15 days, the mantle was completely formed, the epidermal cells were elongated, and the Hartig net formation was in progress. At 30 days, the ectomycorrhizas presented all the typical morphological structures fully developed. To evaluate gene expression during the association, partial sequences of ras and ef1α were isolated and the transcripts evaluated at the pre-symbiotic phase and at 3, 15 and 30 days after physical contact of the fungus with the plant roots. The transcripts of the gene ef1α were expressed at all evaluated times. Transcripts of ras were only detected in the ectomycorrhizas after three, 15, and 30 days of contact. These results are fundamental for a better understanding of the ectomycorrhizal association between S. laeve and E. grandis and suggest that ras-mediated signal transduction pathways may be functional during the establishment of the symbiosis between the fungus and the host roots. A associação ectomicorrízica é uma interação mutualista entre raízes de plantas e fungos do solo, resultando em mudanças morfofisiológicas do sistema radicular das plantas. Os benefícios nutricionais advêm da capacidade do fungo em aumentar a absorção de nutrientes minerais pelas plantas, recebendo em troca os fotoassimilados. Na associação entre Scleroderma laeve e Eucalyptus grandis ainda não se tem informações de quais genes são decisivos e estão relacionados a este processo. Transcritos dos genes ras e ef1α foram identificados durante a formação da simbiose e sendo diferencialmente expressos na associação ectomicorrízica, e estão relacionados a vias de transdução de sinal e atuando na síntese protéica, respectivamente. Assim, os objetivos deste trabalho foram estabelecer a associação ectomicorrízica in vitro entre S. laeve e E. grandis, isolar sequências parciais dos genes ras e ef1α do fungo ectomicorrízico S. laeve, e avaliar a expressão funcional destes genes durante as fases de formação das ectomicorrizas. Este trabalho comprova a associação in vitro entre S. laeve e E. grandis, sendo registrada pela primeira vez. As estruturas típicas das ectomicorrizas, como a formação do manto fúngico e da rede de Hartig foram observadas. Nos tempos avaliados, em três dias de contato já havia a formação do manto fúngico. Aos 15 dias, o manto fúngico estava completamente formado, as células da epiderme alongadas e a rede de Hartig, em formação. Aos 30 dias, as ectomicorrizas apresentavam todas as estruturas típicas desenvolvidas. Para avaliar a expressão dos genes durante a associação, sequências parciais dos genes ras e ef1α foram isolados, e os transcritos destes genes foram avaliados na fase pré-simbiótica e aos três, 15 e 30 dias após o contato físico. Os transcritos do gene ef1α foram expressos durante todos os tempos avaliados. Os transcritos do gene ras foram detectados nas ectomicorrizas após três, 15 e 30 dias. Estes resultados são fundamentais para uma melhor compreensão da associação ectomicorrízica entre S. laeve e E. grandis e sugerem que as vias de transdução de sinais mediada por ras podem ser funcionais durante o estabelecimento da simbiose entre os fungos e as raízes de plantas.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Conyza canadensis (Asteraceae), popularmente conhecida no Brasil como buva, é uma planta anual ou bienal nativa da América, possivelmente da América do Norte. Trata-se de uma espécie muito prolífica, podendo produzir até 200.000 sementes viáveis por planta, que se adapta bem a ambientes alterados pelo homem sob diversas condições climáticas, tem boa dispersão de sementes pelo vento e ainda inclui populações com resistência a vários tipos de herbicida. Essa combinação de atributos tem feito com que ela se tornasse um sério problema em diversas lavouras no Brasil e pelo mundo. No Brasil, os maiores problemas relativos a essa daninha se concentram em pomares de citrus e nas áreas produtoras de soja, principalmente em cultivos de soja resistente ao glifosato. Depois da introdução destes cultivares o número de aplicações do herbicida cresceu o que resultou ao longo dos anos, na seleção de biótipos de C. canadensis resistentes a este produto. Como conseqüência, houve uma elevação nas falhas de controle, o que tem sido suficiente para limitar a produção em diversas áreas, levando a uma necessidade de se alterar as práticas de manejo e tornando o controle biológico uma ferramenta potencialmente importante para um apropriado manejo da buva. Como ponto de partida para o estudo visando o desenvolvimento de um herbicida biológico para o controle de C. canadensis foi realizado um levantamento sistemático dos fungos associados a essa daninha no Brasil visando à descrição da micobiota fitopatogênica e seleção de potenciais agentes de controle biológico. Desse levantamento resultaram 211 amostras, provenientes das regiões sul, sudeste e parte do centro-oeste do Brasil. Foram encontrados, descritos e ilustrados doze fungos, dentre os quais três são aqui reconhecidos como novos taxa. Compreendem esta micobiota: três hifomicetos - Cercosporella virgaurea , Cercospora sp. nov. e Alternaria tenuissima , um oídio- Podosphaera fusca ; três coelomicetos - Colletotrichum capsici , Phoma canadensis e Septoria erigerontis ; três ascomicetos - Mycosphaerella sp., Sphaerulina sp. nov. e Wentiomyces melioloides ; uma ferrugem - Aecidium sp. nov. e um oomiceto - Basidiophora entospora . Dentre as espécies encontradas, Phoma canadensis parece ter o melhor potencial para o desenvolvimento de um mico-herbicida. Trata-se de fungo de crescimento rápido e esporulação abundante em meio de cultura e capaz de causar a morte da planta hospedeira ou atrasar consideravelmente o seu desenvolvimento do seu hospedeiro. Estudos mais detalhados deverão ser realizados a fim de comprovar a sua viabilidade como mico-herbicida. Conyza canadensis (Asteraceae), commonly known as horseweed (common name in Brazil buva), is an annual or biennial and native to the Americas, possibly from North America. It is well adapted to habitats modified by human activities, very prolific (capable of producing up to 200.000 viable seeds per plant), tolerates a large range of climatic conditions, it is highly effectively dispersed by the wind and includes populations which are naturally resistant to a range of herbicides. Such a combination of features are behind the emergence of C. canadensis as a major weed for several crops in Brazil and in other parts of the world. In Brazil, the biggest problems with C. canadensis infestations are in citrus and soybean, particularly in transgenic glyphosate-resistant soybean areas. After the use of such soybean cultivars became common place in Brazil, the number of herbicide applications increased which resulted over the years in the selection of herbicide-resistant biotypes of C. canadensis . This resulted in increased failure in chemical control and significant losses leading to a need for a change in management practices, including the possible use of biocontrol methods. As the starting point for a study aimed at developing a bioherbicide for C. canadensis a broad survey of the existing pathogens (in the present case pathogenic fungi) associated to this weed in Brazil was performed with the purpose of collecting and describing the mycobiota of this weed and selecting a potential biocontrol agents. The survey yielded 211 samples from south and southeatern Brazil which were described and illustrated, three of which are described herein as new to science. This mycobiota includes: trhee hyphomycetes - Cercosporella virgaureae , Cercospora sp. nov. and Alternaria tenuissima , one powdery mildew - Podosphaera fusca ; three coelomycetes - Colletotrichum capsici , Septoria erigerontis and Phoma canadensis ; three ascomycetes - Mycosphaerella sp., Sphaerulina sp. nov. and Wentiomyces melioloides ; a rust fungus - Aecidium sp. nov. and one oomycetes - Basidiophora entospora . Among the species found, Phoma canadensis appears to have the greatest biocontrol potential. It is fast-growing and sporulates well in culture, it is capable of causing plant death or significantly delay plant growth. Further studies are necessary for confirmation of its viability as a mycoherbicide.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico Three studies covering different area of mycology were developed: 1) A study aiming at exploring the morphological diversity of Trichoderma harzianum sensu latu represented by eighty-one isolates recognized as belonging to this species-complex, seeking for disjunction of morphological characters matching/reflecting the twelve different clades recognized by a previous molecular-phylogeny study in support for the distinction and recognition of these taxa as separate cryptic species within the “T. harzianum complex”; 2) A taxonomic study about the species of fungi found as parasites associated with an Arecaceae native from Brazil Euterpe edulsi (palmito-juçara), and listed as endangered of extinction; 3) An attempt to clarify the host range of the fungi found associated with two species of Brazilian plants endangered of extinction - Coussapoa floccosa (Cecropiaceae) and E. edulis. The elucidation of the “T. harzianum complex” has special relevance for biological control of plant diseases, since isolates belonging to this taxon are widely investigated and used for that purpose. Since its first description, T. harzianum was recognized as a fungal species that has a high degree of morphologically diversity, a broad geographical distribution and the ability to exploit a wide range of niches. More recently molecular phylogenetic studies have further indicated that this species may be a species-complex including several cryptic species. The search for key morphological differentiation that would support the distinction of the twelve clades unraveled by the molecular studies did not yield any consistent character to be used with that purpose. Nevertheless, it appears that there is partial support for clade distinction based on niches and habitats occupied by distinct groups of isolates and based on geographic distribution of clade-members. At the present state of the art for this taxon, it appears more logical to continue to treat the populations that fit into the ”T. harzianumi complex” under the old name until more substantial evidence and consistent characters or well defined clades are found allowing for a precise distinction of the cryptic species (or infra-specific taxa) that are included. Four species of anamorphic fungi were described in association with Euterpe edulis: Bipolaris cynodontis, Distocercospora sp., Melanographium sp. and Passalora eitenii. The host range of these fungi, as well as of the fungi associated with Coussapoa floccosa, were studied through inoculations under controlled conditions (host-specificity tests), by seeking for possible alternative hosts in the field and by means of using sentinel-plants. None of the fungi originally associated with C. floccosa were found in association with other host of Rosales in the field and among the fungi associated originally with E. edulis, Melanographium sp. showed to be specific to the genus Euterpe whereas Distocercospora sp. was only capable to parasite E. edulis. Três estudos cobrindo áreas distintas da micologia foram desenvolvidos: 1) Um estudo visando explorar a diversidade morfológica de oitenta e um isolados reconhecidos como pertencentes à espécie Trichoderma harzianum sensu lato, em busca de descontinuidades em caracteres morfológicos que refletissem os doze diferentes clados reconhecidos pelo estudo filogenético feito previamente e permitissem amparar sua distinção como espécies crípticas compondo o “complexo T. harzianum”; 2) Um estudo taxonômico sobre espécies de fungos encontradas como parasitas associados à Arecaceae nativa do Brasil Euterpe edulis (palmito-juçara), espécie listada como ameaçada de extinção; 3) Uma tentativa de esclarecimento da gama de hospedeiros de fungos associados às plantas nativas ameaçada de extinção Cousssapoa floccosa (Cecropiaceae), descritos em estudo anterior, e E. edulis. A elucidação do “complexo T. harzianum” é de especial importânciapara o controle biológico de doenças de plantas, área em que isolados pertencentes a este táxon encontram grande aplicação. Desde sua primeira descrição, T. harzianum é considerado um fungo morfologicamente diverso e de ampla distribuição geográfica capaz de se estabelecer em diferentes nichos, por esse motivo esse fungo foi alvo de estudos filogenéticos que indicam a existência de um complexo de espécies. Não foi encontrada base morfológica que justifique a distinção dos doze clados reconhecidos com base em estudos moleculares e concluiu-se que, embora exista amparo parcial para distinção baseado em nichos ecológicos e habitats ocupados e distribuição geográfica para os clados. No presente estado da arte para este táxon, conclui-se como mais recomendável a continuidade do tratamento das populações que compõe o “complexo T. harzianum” como uma única espécie até que evidências mais conclusivas sejam obtidas ou clados mais bem definidos sejam reconhecidos permitindo uma distinção mais precisa de espécies crípticas ou de taxa infra-específicos que existam sob este “rótulo”. Quatro espécies de fungos anamórficos foram descritos associados à Euterpe edulis: Bipolaris cynodontis, Distocercospora sp., Melanographium sp. e Passalora eitenii. A gama de hospedeiro desses fungos, assim como a dos fungos associados à Cousssapoa floccosa, foi estudada através de teste de especificidade, busca por hospedeiros alternativos no campo e uso de plantas-sentinela no campo. Nenhum fungo originalmente associado a C. floccosa foi encontrado associado a outros hospedeiros da ordem Rosales no campo e entre os fungos encontrados originalmente associados a E. edulis, Melanographium sp. desmonstrou ser patógeno específico para o gênero Euterpe e Distocercospora sp. foi apenas capaz de parasitar E. edulis.