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Diabetes Mellitus is considered a disease in ascension worldwide. In Brazil, the rate of diabetes increased by 40% in the last six years. The use of medicinal plants in the treatment of diabetes has great relevance, as a chronic treatment, by seem harmless and be easily accessible for the population. The literature highlights the presence of drugs in herbal formulations used in the treatment of diabetes, which can lead to serious consequences such as metabolic acidosis and severe hypoglycemia. In the last decade, the ANVISA has intensified the control and concern with the market for herbal medicines in Brazil. As a consequence, it is demanded the development of methodologies for detection of the hypoglycemic drugs added as contaminants in vegetable-based formulations used in the treatment of diabetes. In this sense the present study developed and validated a method by high performance liquid chromatography with ultraviolet detection for determination of some hypoglycemic adulterants. Mobile phase was composed of 0.1% phosphoric acid (pH 2.0) (90%:0%) and acetonitrile (10%:100%) The following conditions were defined; column C18; 230 nm; and flow rate of 0.5 mL. min-1 to 0.9 ml. min-1, 20 minutes of analysis. Another method based on capillary electrophoresis, MEKC UV, was tested to analyse the same hypoglycemic agents. However, the conditions studied did not present acceptable results. The method based on HPLC UV proved to be suitable for the simultaneous determination of metformin, glipizide, chlorpropamide, gliclazide, glibenclamide and glimepririda and it showed low limits of detection and quantification, besides to be specific, precise, exact and linear (p < 0.01), within the determined range (2.5 - 15mg L-1). After validation, the HPLC UV method was applied in the analysis of twenty samples acquired in the national market. Among the samples analyzed were not detected the presence of adulterants validated in this work. Diabetes Mellitus (tipo II) é considerada uma doença em ascensão no mundo inteiro. No Brasil, o índice de diabéticos cresceu 40% em seis anos. O uso de plantas medicinais no tratamento desta patologia crônica tem grande relevância, por parecer inofensivo e ser de fácil acesso à população. A literatura destaca que é possível encontrar a presença de fármacos em formulações fitoterápicas utilizadas no tratamento do diabetes, podendo trazer consequências graves, como acidose metabólica e hipoglicemia grave. Na última década a Anvisa tem intensificado a fiscalização e a preocupação com o mercado de fitoterápicos no Brasil. Para tanto, se torna grande a procura por metodologias capazes de detectar fármacos hipoglicemiantes adicionados de forma ilegal em formulações de base vegetal utilizadas no tratamento do Diabetes Mellitus (tipo II). Neste sentido no presente trabalho foi desenvolvido e validado um método por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência com detecção ultravioleta (HPLC-UV) para determinação de adulterantes hipoglicemiantes. Foram definidas as seguintes condições: fase móvel ácido fosfórico 0,1% (pH 2,0) (90% a 0%) acetonitrila (10% a 100%); coluna C18; 230 nm; e fluxo de 0,5 mL. min-1 a 0,9 mL. min-1, com menos de 20 minutos de análise. Outro método, através de Cromatografia Capilar de Eletrocinética Micelar (MEKC-UV) foi utilizado para análise destes hipoglicemiantes, porém não se obteve resultados aceitáveis. O método por HPLC-UV mostrou-se adequado para a determinação simultânea dos fármacos metformina, glipizida, clorpropamida, glicazida, glibenclamida e glimepririda, visto que apresentou baixos limites de detecção e quantificação, além de mostrar-se específico, preciso, exato e linear (p< 0,01), dentro do intervalo testado (2,5 15 mg. L-1). Após a validação, o método HPLC-UV foi aplicado na análise de vinte amostras adquiridas no mercado nacional, dentre estas não foram detectados a presença dos adulterantes pesquisados.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico The adulteration of natural pharmaceutical formulations using synthetic drugs has increased in the last years.Adulterations have been reported in the literature, which proves the increasing concern regarding this issue, and thus raising the development of analytic methodologies that are able to detect adulterations. This study describes the development of three methodologies for the determination of five synthetic drugs classes (anorexics, antidepressants, anxiolytics, diuretic, and laxatives) in natural formulations.Two methods were developed for screening samples using voltammetry of immobilized microparticles (VIM), and cathodic stripping voltammetry (AdCSV). Another method wasdeveloped for the separation and identification of 16 drugs of 5 different classes - anorexics (amfepramone, sibutramine, and femproporex), antidepressants (bupropion, fluoxetine, paroxetine, and sertraline), anxiolytics (alprazolam, bromazepam, flurazepam, lorazepam, chlordiazepoxide, diazepam, midazolam, and clonazepam), diuretic (furosemide), and laxatives (phenolphthalein and bisacodyl) - using ion-pair chromatography (IPC). The optimized conditions for the separation were as follows, eluent: tetrahydrofuran/acetronitrile/water (5/10/85) with 0.14 mol L-1 of dodecyl sodium sulfate, in pH 4, initial flow of 1.2 mL min-1, using a C18 column. The eluent s concentration and flow varied during the application of the gradient. The IMV method was applied in the screening of 49 pharmaceutical formulation samples, and 15 presented adulterations with anorectic, anxiolytic, and diuretic drugs. The CSV method was used in the screening of 99 samples, and 5 presented adulterations with anxiolytic and laxative drugs. The separation method was applied in 18 samples, and 3 presented adulterations with phenolphthalein (laxative).Both screening methods developed here were efficient in tracking samples, presenting advantages, such as speed and low reagent consumption. The separation method was validated according to linearity, detection limit, quantification limit, selectivity, precision, and analytic accuracy. Therefore, this method can be used to determine the adulterations presented here in natural pharmaceutical formulations. A adulteração de formulações farmacêuticas naturais com fármacos sintéticos tem aumentado muito nos últimos anos. Os casos de adulteração têm sido relatados na literatura, comprovando que existe uma maior preocupação com relação a este problema, o que implica no desenvolvimento de métodos analíticos capazes de detectá-los. Este trabalho descreve o desenvolvimento de três metodos para a determinação de fármacos sintéticos da classe dos anorexígenos, antidepressivos, ansiolíticos, diuréticos e laxantes em formulações naturais. Foram desenvolvidos dois métodos para os screening de amostras, usando voltametria de micropartículas imobilizadas (VIM) e voltametria de redissolução catódica (AdCSV). E um método de separação para identificação a quantificação de 16 fármacos de cinco classes diferentes, anorexígenos (anfepramona e sibutramina e femproporex), antidepressivos (bupropiona, fluoxetina, paroxetina e sertralina), ansiolíticos (alprazolam, bromazepam, flurazepam, lorazepam, clordiazepóxido, diazepam, midazolam e clonazepam), diurético (furosemida) e laxantes (fenolftaleína e bisacodil), usando cromatografia de par iônico (IPC). As condições otimizadas para a separação, eluente: tetrahidrofurano/acetonitrila/água, (5/10/85), contendo 0,14 mol L-1 de dodecil sulfato de sódio, em pH 4,0, fluxo incial de 1,2 mL/minuto, usando coluna C18. A concentração do eluente e o fluxo variaram durante a aplicação do gradiente. O método VIM foi aplicado no screening de 49 amostras de formulações farmacêuticas e dentre estas, 15 apresentaram adulteração por fármacos da classe dos anorexígenos, ansiolitios e diuréticos. O método AdCSV foi aplicado no screening de 99 amostras e destas, 5 apresentaram adulteração por fármacos da classe dos ansiolíticos e laxantes. O método de separação foi aplicado em 18 amostras e destas, 3 apresentaram adulteração pela fenolftaleína da classe dos laxantes. Os dois métodos de screening desenvolvidos mostram-se eficientes para o rastreio de amostras, apresentando vantagens como, rapidez e baixo consumo de reagentes. O método de separação foi validado nos parâmetros de linearidade, limite de detecção, limite de quantificação, seletividade, precisão e exatidão analítica, podendo ser empregado na determinação destas substâncias como adulterantes em formulações farmacêuticas naturais.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior The use of herbal medicines as an alternative treatment has increased by the belief that natural products do not cause damage to health. However cases in which natural products are added of synthetic drugs not declared, presumably to enhance the effectiveness them have been reported in the literature. In the case of weight loss formulations the main adulterants found are appetite suppressants, antidepressants, benzodiazepines, diuretics and laxatives. The identification of these frauds is only possible by applying the analytical methods able to detect the presence of adulterants in the formulations. This paper describes the development of two methods employing separation techniques with electrochemical detection for the determination of diuretics and laxatives as adulterants in herbal products. The method employing capillary zone electrophoresis (CZE) with contactless conductivity detection (C4D) allows the simultaneous determination of amiloride, chlorthalidone, hydrochlorothiazide, furosemide and phenolphthalein in the following optimized conditions: working electrolyte phosphate buffer 20 mmol L-1 (pH 9.2) containing 30% methanol (v/v) separation potential -15 kV, temperature 25 °C, injection hydrodynamic by gravity in 20 cm for 60 seconds. The method employing ion pair chromatography (IPC) with pulsed amperometric detection (PAD) allows the determination of hydrochlorothiazide, chlorthalidone and furosemide on the following conditions: mobile phase phosphate buffer 5 mmol L-1 (pH 4.5) containing SDS 0.3 mmol L-1 and 50% methanol (v/v), sample potential of +0.8 V, the cleaning potential of -0.2 V and +1.0 V, and flow rate of 1.0 mL/min. Both methods were validated in the parameters of linearity, limit of detection limit of quantification, precision, accuracy and selectivity, and were applied in the analysis of 26 samples of natural weight loss products purchased from pharmacies in nine Brazilian states. In three of 26 samples were identified the presence of illegal diuretic hydrochlorothiazide in concentrations ranging from 0.6 to 7.0 mg/capsule. In addition, five other samples called naturals contained declared on the label of the packaging the presence of synthetic diuretics hydrochlorothiazide or furosemide. Both methods were able to identify the adulterants present in samples with high selectivity and sensitivity. Furthermore, they presented very approximate results in the concentration of adulterants found in the formulations. There is still no unified regulation established by the government for control of herbal products. Each country has its laws, but the marketing is global. Maybe this is the reason why the adulteration of natural products has been a recurring practice in various parts of the world. Therefore, effective regulation for the natural products can result in the reduction of these offenses, and punishment of offenders, thus ensuring the rights of consumers to make quality treatment, safe and effective, without prejudice to health. Keywords: Pharmaceutical formulations, adulterants, diuretics, laxatives, methods of separation, electrochemical detection. O uso de ervas medicinais como tratamento alternativo tem crescido por se acreditar que produtos naturais não causam danos à saúde. No entanto casos de adulteração de produtos naturais com adição não declarada de fármacos sintéticos, presumidamente para aumentar a eficácia dos mesmos, têm sido relatados na literatura. No caso de formulações emagrecedoras os principais adulterantes já encontrados são anorexígenos, antidepressivos, benzodiazepínicos, diuréticos e laxantes. A identificação destas fraudes só é possível com a aplicação de metodologias analíticas capazes de detectar a presença destes adulterantes nas formulações. Este trabalho descreve o desenvolvimento de duas metodologias empregando técnicas de separação com detecção eletroquímica para a determinação de diuréticos e laxantes como adulterantes em produtos naturais. O método empregando eletroforese capilar de zona (CZE) com detecção por condutividade sem contato (C4D) permite a determinação simultânea de amilorida, clortalidona, hidroclorotiazida, furosemida e fenolftaleína nas condições otimizadas: eletrólito de trabalho tampão fosfato 20 mmol L-1 (pH 9,2) contendo metanol 30% (v/v), potencial de separação -15 Kv, temperatura 25 °C; injeção hidrodinâmica por gravidade em 20 cm durante 60 s. O método empregando cromatografia de par iônico (IPC) com detecção por amperometria pulsada (PAD) permite a determinação de hidroclorotiazida, clortalidona e furosemida nas seguintes condições: fase móvel tampão fosfato 5 mmol L-1 (pH 4,5) contendo SDS 0,3 mmol L-1 e metanol 50% (v/v); potencial de amostragem de +0,8 V; potenciais de limpeza de -0,2 V e +1,0 V; e fluxo de 1,0 mL/min. Os dois métodos foram validados nos parâmetros de linearidade, limite de detecção, limite de quantificação, precisão, exatidão e seletividade e, foram aplicados na análise de 26 amostras de produtos naturais emagrecedores adquiridos de farmácias de manipulação de nove estados brasileiros. Em três das 26 amostras foi identificada a presença ilegal do diurético hidroclorotiazida em concentrações que variaram de 0,6 a 7,0 mg/cápsula. Além disso, outras cinco amostras ditas naturais continham declarado no rótulo das embalagens a presença dos diuréticos sintéticos hidroclorotiazida ou furosemida. Os dois métodos foram capazes de identificar os adulterantes presentes nas amostras com alta seletividade e sensibilidade. Além disso, apresentaram resultados bastante aproximados com relação às concentrações encontradas dos adulterantes nas formulações. Ainda não existe uma regulamentação unificada estabelecida pelos órgãos governamentais para o controle de produtos fitoterápicos. Cada país tem a sua legislação, porém a comercialização destes produtos é globalizada. Talvez por isso a adulteração de produtos naturais vem sendo uma prática recorrente em diversas partes do mundo. Logo, uma regulamentação efetiva para os produtos de origem natural, pode resultar na redução destas infrações, ou punição dos infratores, garantindo assim os direitos dos consumidores de realizar um tratamento de qualidade, seguro e eficaz, sem prejuízo à saúde.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Rimonabant is a selective antagonist of the cannabinoid type 1 (CB1) receptor indicated as an adjunct to diet and exercise for the treatment of obese patients (BMI ≥ 30 kg/m2), or overweight patients (BMI > 27 kg/m2) with associated risk factors, such as type 2 diabetes or dyslipidaemia. In the present study, a reversed phase liquid chromatographic method was developed and validated for quantitative analysis of rimonabant in pharmaceutical products, and also a dissolution testing has been developed for coated tablets and capsules. The chromatographic method for determination of rimonabant in pharmaceutical formulations was performed on a Gemini C18 (150 × 4.6 mm i.d., 5 μm) column, with a mobile phase composed of acetonitrile: water (75:25, v/v), which was pumped at a flow-rate of 1 mL min-1 and ultraviolet detection at 215 nm. The analytical assay was validated by evaluating the parameters specificity, linearity, precision, accuracy, robustness, limit of detection and quantification, giving results within the acceptable range as defined by international validation guidelines. The selected conditions for the dissolution testing were 900 mL of 0.15% sodium lauryl sulfate in water as dissolution medium, USP apparatus 2 (paddle), stirring speed of 50 rpm and drug analysis by liquid chromatography. A study was assessed to compare some commercially available drug products, such as film-coated tablets (brand name Acomplia®) and compounded capsules from different suppliers. The physicalchemical tests applied to samples were average weight, content uniformity, active substance assay and dissolution profile, which have showed distinct results. In addition, rimonabant capsules containing different excipients were prepared for evaluation of formulation parameters on in vitro release profile of the drug. O rimonabanto é um fármaco pertencente à classe dos antagonistas dos receptores canabinóides tipo 1 (CB1) utilizado para o tratamento adjuvante à dieta e aos exercícios físicos de pacientes obesos ou com sobrepeso com fatores de risco associados, tais como diabetes tipo 2 ou dislipidemia. No presente trabalho desenvolveu-se e validou-se método por cromatografia líquida em fase reversa para análise quantitativa de rimonabanto em produtos farmacêuticos, bem como foi desenvolvido ensaio de dissolução para comprimidos revestidos e cápsulas do fármaco. O método cromatográfico para determinação de rimonabanto em formulações farmacêuticas empregou coluna Gemini C18 (150 × 4.6 mm d.i., 5 μm), fase móvel composta de acetonitrila: água (75:25, v/v), eluída na vazão de 1 mL min-1 e detecção no ultravioleta em 215 nm. Foi realizada a validação do procedimento através da avaliação dos parâmetros especificidade, linearidade, precisão, exatidão, robustez, limite de detecção e quantificação, cujos resultados cumpriram os requisitos preconizados internacionalmente. As condições selecionados para o ensaio de dissolução foram 900 mL de lauril sulfato de sódio 0,15% em água como meio, aparato 2 (pá), velocidade de agitação de 50 rpm e quantificação do fármaco por cromatografia líquida. Foi realizado estudo comparativo entre alguns produtos disponíveis comercialmente, entre eles o medicamento de referência (Acomplia®) e cápsulas manipuladas por três farmácias diferentes. Os testes físico-químicos realizados nas amostras foram peso médio, uniformidade de doses unitárias, teor e perfil de dissolução, os quais demonstraram resultados bastante distintos entre os produtos. Paralelamente, cinco formulações contendo diferentes tipos de excipientes foram preparadas para avaliar o efeito desse parâmetro na velocidade de liberação do fármaco in vitro.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Fluticasone propionate (FP) is a synthetic glucocorticoid with potent anti-inflammatory activity that has been effectively used for the treatment of seasonal and allergic perennial rhinitis, minimizing systemic activity. In the present study, the methods were developed and validaded for assessment of FP in pharmaceutical products. The analysis by reversed-phase liquid chromatography were performed using Shim-pack CLC-ODS column (150 x 4.6 mm), maintained at 35 °C. The mobile phase was consisted of acetonitrile/ methanol/ 0.01M phosphate buffer pH 4 (35:35:30), run at flow rate of 1 mL/min and using photodiode array detection at 240 nm. The chromatographic separation was obtained within 8 minutes and it was linear in the concentration range of 0.05-150 μg/mL (r2 = 0,9999). The method was successfully applied for the determination of FP in creams and nasal sprays pharmaceutical formulations. The micellar electrokinetic chromatography was also developed and validaded. The analyses were performed on a fused-silica capillary (50 μm i.d.; effective length, 40 cm) and background electrolyte consisted of 25 mM borate and 25mM SDS solution at pH 9. The capillary temperature was maintained at 35 °C and the applied voltage was 20 kV. The injection was performed using the hydrodynamic mode at 50 mbar for 6 s, with detection at 238 nm. The electrophoretic separation was obtained with migration time of 5.6 and 5.1 minutes for the FP and prednisolone acetate (internal standard), respectively, and with run time of 7 minutes. The method was linear in the concentration range of 2-80 μg/mL (r2 = 0.9956). The procedures were validated evaluating parameters such as the specificity, linearity, precision, accuracy, and robustness, limit of detection and limit of quantitation, whose results have met the requirements recommended. The proposed methods were used for the analysis of pharmaceutical products, demonstrating nonsignificative difference of the results (P > 0.05). Then, the procedures contribute to improve the quality control, assuring the safety and therapeutic efficacy of pharmaceutical formulations. O propionato de fluticasona (PF) é um glicocorticóide sintético com potente atividade antiinflamatória utilizado efetivamente no tratamento de rinites alérgicas sazonais e perenes, minimizando a atividade sistêmica. No presente trabalho foram desenvolvidos e validados métodos para avaliação de PF em produtos farmacêuticos. As análises por cromatografia líquida em fase reversa foram realizadas utilizando coluna Shim-pack CLC-ODS (150 x 4,6 mm), mantida à 35ºC. A fase móvel foi composta de acetonitrila/ metanol/ tampão fosfato 0,01M pH 4 (35:35:30), eluída na vazão de 1 mL/min e detecção no ultravioleta a 240 nm. A separação cromatográfica foi obtida no tempo de 8 minutos, sendo linear na faixa de concentração de 0,05-150 μg/mL (r2 = 0,9999). O método foi aplicado para análise de PF em cremes e sprays nasais. Paralelamente, desenvolveu-se e validou-se método por cromatografia eletrocinética micelar. Executaram-se as análises utilizando capilar de sílica (comprimento efetivo de 40 cm e diâmetro de 50 μm) e solução eletrolítica composta de borato 25 mM e SDS 25 mM, pH 9. O capilar foi mantido a temperatura de 35ºC, e aplicada voltagem de 20 kV. O tempo de injeção foi de 6 s com pressão de 50 mbar e detecção no UV a 238 nm. Realizou-se a separação eletroforética com tempo de migração de 5,6 e 5,1 minutos para o PF e acetato de prednisolona (padrão interno), respectivamente, com tempo de corrida de 7 minutos. O método foi linear na faixa de 2-80 μg/mL (r2 = 0,9956). Os procedimentos foram validados, avaliando-se os parâmetros de especificidade, linearidade, precisão, exatidão, robustez, limite de detecção e quantificação, cujos resultados cumpriram os requisitos preconizados. Os métodos propostos foram utilizados para análise de produtos farmacêuticos, demonstrando que não há diferenças significativas dos resultados (P > 0,05). Assim, os procedimentos pesquisados contribuem para aprimorar o controle da qualidade, garantindo a segurança e eficácia terapêutica das formulações farmacêuticas.