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CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior A Doença de Alzheimer (DA), principal causa de demência, desperta crescente interesse científico, uma vez que a sua fisiopatologia está, em grande parte, ainda por ser desvendada. O sistema-renina angiotensina (SRA) é um dos sistemas fisiológicos mais importantes para a homeostase. À medida que o conhecimento sobre as funções do SRA foi se acumulando, constatou-se a sua participação também em variados processos fisiopatológicos, incluindo as doenças psiquiátricas e neurodegenerativas. O envolvimento do SRA na fisiopatologia da DA, especificamente, ainda é pouco explorado. Este trabalho teve como principais objetivos: (1) realizar uma ampla revisão da literatura sobre o SRA, a DA e os possíveis pontos de interação entre ambos; (2) conduzir um estudo-piloto explorando o status do SRA em pacientes com DA e em indivíduos cognitivamente saudáveis, visando à geração de hipóteses fisiopatológicas. Para atender ao primeiro objetivo, realizamos pesquisa não sistemática nas bases PubMed/Medline e Google Acadêmico. Foram encontrados estudos originais pré-clínicos e clínicos que investigaram diretamente o papel do SRA na DA. Produzimos, então, um artigo de revisão narrativa com um sumário da evidência direta, acompanhada de uma discussão ampla sobre potenciais mecanismos. Para satisfazer ao segundo objetivo, conduzimos um estudo transversal, exploratório, de caso-controle, em que foram recrutados 14 pacientes com DA e 14 voluntários cognitivamente saudáveis da mesma faixa etária. De todos os participantes, obtivemos dados clínicos e neuropsicológicos, além de amostras de sangue e imagens por ressonância nuclear magnética (RNM) do encéfalo. Foram dosadas, no plasma, angiotensina II (Ang II) e angiotensina-(1-7) [Ang-(1-7)], as moléculas efetoras dos eixos clássico e alternativo do SRA, respectivamente. Constatou-se que a Ang-(1-7) está significativamente reduzida no plasma de indivíduos com DA. Nesse grupo, houve uma correlação positiva entre a Ang-(1-7) circulante e marcadores de lesão cerebrovascular na RNM. Nossos achados favorecem a tese de que o eixo alternativo do SRA está alterado na DA e indicam um possível mecanismo de interação. Os resultados fornecem subsídio para que estudos maiores, com poder estatístico adequado, testem essa hipótese. Alzheimer’s Disease (AD), the leading cause of dementia worldwide, is the subject of growing scientific interest, given that part of its pathophysiology is yet to be unveiled. The renin-angiotensin system (RAS) is one of the most important physiological systems for homeostasis. As the knowledge about the RAS and its functions has accumulated, the system has been implicated in many pathological processes as well, including psychiatric and neurodegenerative diseases. However, the RAS role in AD pathophysiology, in particular, remains largely unexplored. This study addressed this gap in knowledge by targeting two main objectives: (1) to perform a comprehensive literature review about the RAS, AD and their possible intersection points; (2) to conduct a pilot-study to explore the RAS status in AD patients compared to cognitively healthy individuals, so as to generate hypotheses. To accomplish the first goal, we have non-systematically searched throughout PubMed/Medline and Google Scholar databases. We have found pre-clinical and clinical primary studies which directly addressed RAS participation in AD. As a result, we have written a narrative review article that summarizes all direct pieces of evidence and discusses at length the potential mechanisms behind them. In order to achieve the second objective, we have conducted a cross-sectional, case-control exploratory study which recruited 14 patients with AD and 14 cognitively healthy age-matched volunteers. Clinical data, neuropsychological test results, blood samples and magnetic resonance imaging (MRI) were obtained from all participants. We have measured plasma levels of angiotensin II (Ang II) and angiotensin-(1-7) [Ang-(1-7)], the effector peptides of RAS classical and alternative axis, respectively. Ang-(1-7) was found to be significantly reduced in AD patients. In the AD group, there was a positive correlation between circulating Ang-(1-7) and MRI markers of cerebrovascular lesions. Our findings strengthen the hypothesis that RAS alternative axis is downregulated in AD and points to a potential interaction mechanism. Moreover, these results provide a basis for conducting larger properly powered studies willing to test this hypothesis.

CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior O aumento da quantidade de glutamato por vesícula em Drosofila é compensado pela diminuição do número de vesículas liberadas por estimulação nervosa. Este mecanismo compensatório capaz de reestabelecer a homeostasia sináptica é chamado de depressão homeostática pré-sináptica (DHP). Nós hipotetizamos que o aumento crônico da liberação de acetilcolina (ACh) por vesícula na junção neuromuscular de camundongos (JNM) pode resultar em uma diminuição compensatória na liberação vesicular evocada. Para testar isto, nos utilizamos a linhagem de camundongos ChAT-ChR2-EYFP (Hyper VAChT) com 3 e 24 meses de idade que possuem um aumento dos níveis de expressão de VAChT, e seus controles selvagens (WT). Foram avaliados potenciais de placa espontâneos (MEPPs) e evocados (EPPs), em baixa (0.2 e 0.3Hz) e alta (20 e 30Hz) frequência de estimulação na junção neuromuscular do músculo diafragma. Nós também registramos, em Voltage Clamp, as correntes de placa em miniatura (MEPCs). Aos 3 meses de idade, os camundongos Hyper VAChT apresentaram aumento no tamanho e frequência dos quanta. O conteúdo quântico dos camundongos Hyper VAChT (29±2,5, média±EPM, n= 4 animais) não apresentou diferença significativa (p=0,44) em relação aos WT (32±2.2, média±EPM, n= 4 animais). A depressão sináptica foi 19% maior nos camundongos Hyper VAChT, e a PTP não foi estatisticamente diferente. Durante a estimulação tetânica, a área dos MEPPs dos camundongos Hyper VAChT foi menor que antes do trem de estimulação, enquanto que este parâmetro não foi alterado nos animais WT. Isto sugere que o aumento da depressão nos animais Hyper VAChT é devido ao menor efeito da liberação vesicular. Aos 24 meses de idade, os camundongos Hyper VAChT apresentaram uma diminuição significativa no CQ (WT= 41±3.5, média±EPM, n= 5 animais; HyperVAChT= 29±4.1, média±EPM, n= 3 animais; p=0.07). A depressão sináptica e a potenciação pós tetânica (PTP) não foram estatisticamente diferentes. Estes resultados mostram que os camundongos Hyper VAChT compensaram o aumento no tamanho dos quanta de duas maneiras diferentes: aos 3 meses, os EPPs em altas frequências de estimulação reduziram por aumento de dessensibilização ou diminuição da quantidade de ACh por vesícula. Enquanto que aos 24 meses observamos diminuição do CQ. Nossos dados mostram que o aumento crônico da liberação de ACh por vesícula sináptica aciona o mecanismo pré-sináptico de DHP, que se instala durante o envelhecimento dos animais, diminuindo o número de vesículas liberadas. Este mecanismo não é visto em camundongos jovens, que mantem as taxas de disparo pós-sináptico através de outros mecanismos. The increased amount of glutamate per vesicle in Drosophila is compensated by a decrease in the number of vesicles released by nerve stimulation. This compensatory mechanism capable of restoring synaptic homeostasis is called presynaptic homeostatic depression (PHD). We hypothesized that chronic increase in vesicular acetylcholine (ACh) release at the mouse neuromuscular junction (NMJ) may result in a compensatory decrease in evoked vesicular release. To test this, we used 3 and 24 months old ChAT-ChR2-EYFP (Hyper VAChT) mice that have increased levels of VAChT expression, and their wild-type controls (WT). All experimental procedures were approved by the Animal Ethics Committee (protocol number 106/2015 - CEUA). Spontaneous and evoked endplate potentials (EPPs) were evaluated at low (0.2 and 0.3Hz) and high (20 and 30Hz) frequency of stimulation at the NMJ of the diaphragm muscle. We also recorded, in voltage clamp, miniature plate currents (MEPCs). At 3 months of age, Hyper VAChT mice presented increased quantal size and frequency. The quantal content (QC) of Hyper VAChT mice (29 ± 2.5, mean ± SEM, n = 4 animals) showed no significant difference (p = 0.44) from the WT controls (31.5 ± 2.2, mean ± SEM, n = 4 animals). Synaptic depression was 19% higher in Hyper VAChT mice, and PTP was not statistically different. During tetanic stimulation, Hyper VAChT MEPPs areas were smaller than before the train of stimuli, while in the WT mice there was no change during high frequency stimulation. This suggests that the increased depression observed in Hyper VAChT mice is due a decrease effect of vesicular release. At 24 months of age, Hyper VAChT mice showed a significant decrease in QC (WT = 41 ± 3.5, mean ± SEM, n= 5 animals; Hyper VAChT = 29 ± 4.1, mean ± SEM, n = 3 animals; p = 0.07). Synaptic depression and postetanic potentiation (PTP) were not statistically different. These results show that Hyper VAChT mice compensated for the increase in quanta size in two different ways: at 3 months, EPPs at high frequency stimulation decreased by increased desensitization or decreased ACh per vesicle. While at 24 months, we observed a decreased in QC. Our data show that longterm increase in ACh per quantum triggers the pre-synaptic mechanism of DHP seeing as a decrease in the number of vesicles released. This mechanism is not seeing in young animals, which keep the same postsynaptic output through other mechanism.

RESUMEN: El artículo presenta un análisis del tratamiento de termorregulación en la literatura sobre didáctica de las ciencias naturales, en algunos libros de texto de Colombia y en los documentos oficiales que reúnen orientaciones para la enseñanza y evaluación en ciencias de este mismo país. A partir de ello pone de manifiesto que termorregulación no constituye una temática central en la enseñanza de la biología y es citado sin conexión con otras temáticas. Discute algunos fundamentos para una enseñanza integrada y explícita de termorregulación en conexión con otras temáticas centrales en la enseñanza de la biología y propone un diagrama que constituye un modelo didáctico para abordar termorregulación como un mecanismo homeostático. RESUMO: O artigo apresenta uma análise do tratamento da termorregulação na literatura sobre didática das ciências naturais, em alguns livros didáticos da Colômbia e nos documentos oficiais que reúnem diretrizes para o ensino e a avaliação em ciências desse mesmo país. A partir disso, mostra que a termorregulação não é tratada como uma questão central no ensino da biologia, sendo citada sem conexão com outros tópicos. São discutidos alguns fundamentos para um ensino integrado e explícito sobre termorregulação, em conexão com outros tópicos centrais no ensino de biologia, e propõe-se um diagrama que constitui um modelo didático para abordar a termorregulação como um mecanismo homeostático. ABSTRACT: The article presents an analysis of the treatment of thermoregulation in the literature on natural sciences teaching, in some textbooks from Colombia and in official documents that present guidelines for science teaching and assessment in this country. This analysis shows that thermoregulation is not taken as a central issue in biology teaching and is cited without connection with other topics. We discuss some grounds for an integrated and explicit teaching on thermoregulation, in connection with other central topics in biology teaching, and propose a diagram that constitutes a didactics model to address thermoregulation in the classroom, as a homeostatic mechanism.

Sports performance and the work environment are presented as an environment focused on performance and task-oriented behavior. Faced with a stressful situation, in an attempt to ensure physical and psychological well-being, the literature shows that resilience that can positively influence the behavior of individuals. Considering the literature on sports resilience, two theoretical models stand out: The Conceptual Resilience Model and The Grounded Theory of Psychological Resilience and Optimal Sports Performance. The aim of this paper is to analyze the central points of each theory, as well the relationship between resilience and high-performance athletes. As an analysis, we discuss personal, social factors and the relationship between resilience and coping strategies. It is considered that the grounded theory of psychological resilience and ideal sports performance seems to better explain the resilience process in high performance athletes.

CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico O tecido linfoide associado à mucosa intestinal enfrenta o desafio de tolerar antígenos da dieta e da microbiota enquanto exclui ou elimina os patógenos gastrointestinais. Interações não reguladas entre os antígenos luminais e essas células imunes no intestino podem levar a doenças graves, como alergia alimentar, doença celíaca e doenças inflamatórias intestinais (IBD). Este estudo abordou como as respostas imunes nos diferentes microambientes do intestino bem como os seus sensores afetam a homeostase intestinal. Descrevemos aqui duas maneiras distintas pelas quais o sistema imune mantém a homeostase intestinal: através da compartimentalização das respostas imunes específicas em microambiente intestinais distintos, e por sensores imunológicos capazes de detectar componentes presentes no ambiente intestinal. Demonstramos que os linfonodos mesentéricos (mLNs) são imunologicamente únicos de acordo com o segmento intestinal funcional que eles drenam. As assinaturas gênicas de células estromais e dendríticas, bem como a polarização de células T contra o mesmo antígeno luminal diferiram entre mLNs ao longo do intestino, sendo os mLNs que drenam do intestino delgado proximal mais tolerogênicos e os mLNs distais ambientes mais pró-inflamatórios. Essa dicotomia compartimentalizada pode ser perturbada por infecção duodenal, remoção cirúrgica de mLNs distais selecionados ou liberação de antígeno ectópico, impactando as respostas imunes. Com relação à percepção dos ambientes intestinais, mostramos que o STING, sensor de dinucleotídeos cíclicos e adaptador de receptores de DNA intracelular, é ativado também por produtos liberados pela microbiota. A ausência de STING leva a defeitos em mecanismos de proteção da mucosa intestinal, como menor produção de muco e níveis de IgA secretória, frequências alteradas de IELs e ILCs além de impactar a composição da microbiota intestinal para um perfil mais pró-inflamatório. O STING é ainda importante para desenvolvimento e função de células Treg, sendo os camundongos STING-/- mais susceptíveis à colite e infeção bacteriana entérica. Dessa forma, distúrbios dos microambientes intestinais bem como a ausência de sensores desses ambientes, como o STING, influenciam as respostas imunes nesses locais e podem levar a condições inflamatórias e susceptibilidades a doenças. The gut-associated lymphoid tissue faces the challenge of tolerating foreign nutrients and the symbiotic microbiome while excluding or eliminating gastrointestinal pathogens. Unregulated interactions between luminal antigens and the immune cells at the intestinal mucosa can lead to severe diseases such as food allergy, Celiac disease and inflammatory bowel diseases. This study addressed how immune responses in different gut microenvironments as well as their sensors affect intestinal homeostasis. We observed that the maintenance of intestinal homeostasis can be achieved in at least two different ways: through the compartmentalization of the specific immune responses to each distinct intestinal microenvironment, and by the immunological sensors of the components present in the intestinal environment. Herein we report that mesenteric lymph nodes (mLNs) are immunologically unique according to the functional gut segment they drain. Stromal and dendritic cell gene signatures as well as adaptive T cell polarization against the same luminal antigen differed between mLNs along the intestine, the proximal small intestine–draining mLNs preferentially giving rise to tolerogenic and the distal mLNs to pro-inflammatory T cell responses. This compartmentalized dichotomy could be perturbed by duodenal infection, surgical removal of select distal mLNs or ectopic antigen delivery, impacting immune responses. Regarding the perception of the intestinal environment, we show that STING, a cyclic dinucleotide sensor and adaptor molecule for intracellular DNA receptors, is also activated by microbiota products. The absence of STING leads to defective protective mechanisms of intestinal mucosa, such as lower mucus production and secretory IgA levels, altered frequencies of IELs and ILCs, besides impacting the composition of the intestinal microbiota toward a more pro-inflammatory profile. STING is also important for the development and function of Treg cells, being STING-/- mice more susceptible to colitis and enteric bacterial infection. Therefore, disorders of the intestinal microenvironments as well as the absence of these environments’ sensors, in this case of STING, influence the immune responses in these places and can lead to inflammatory conditions and higher susceptibility to diseases.

CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico O gene ciuA codifica uma proteína de superfície associada a um sistema de captação de ferro dependente de sideróforos, porém seu papel na aquisição de ferro nessa bactéria ainda é pouco conhecido. O ferro é crucial no crescimento e desenvolvimento de bactérias, porém no hospedeiro as frações livres disponíveis de ferro são inferiores às necessárias para o crescimento bacteriano. Em bactérias intracelulares como C. pseudotuberculosis, a homeostase de ferro no interior do hospedeiro é controlada transcricionalmente pela concentração de ferro no meio e envolve a regulação de genes voltados para a subversão dos sistemas de restrição nutricional imposto pelo hospedeiro. Trabalhos anteriores realizados por nosso grupo, levaram a construção de uma linhagem mutante (Cp13) para o gene ciuA, através de mutagênese aleatória utilizando o transposon TnFuZ na linhagem T1 selvagem de Corynebacterium pseudotuberculosis. A interrupção deste gene, contribuiu para a redução da virulência e viabilidade intracelular da linhagem, além de induzir níveis significativos de anticorpos e alta taxa de sobrevivência em camundongos imunizados. Diante do exposto, este trabalho teve como objetivo principal avaliar o crescimento e a resposta transcricional de C. pseudotuberculosis em resposta à restrição de ferro, bem como a caracterização funcional de genes associados a virulência, entre linhagem T1 e mutante Cp13. Assim, a análise de expressão diferencial de ambas as linhagens, foi realizada a partir de culturas incubadas em meio com baixa disponibilidade de ferro (low iron – LI), obtido pelo agente quelante 2,2-bipiridina (BIP), e meio com alta disponibilidade de ferro (high iron – HI). Neste contexto, os dados aqui apresentados demonstraram uma redução significativa na densidade celular e na taxa de crescimento da linhagem mutante em comparação a linhagem parental em culturas LI. No total, 120 e 86 genes diferencialmente expressos (GDEs) foram identificados nas cepas T1 e Cp13 em resposta à restrição de ferro, respectivamente. Dentre esses genes, 36 GDEs foram compartilhados entre as duas linhagens, sendo que 26 apresentaram um perfil de expressão semelhante entre as linhagens. Dois fatores transcricionais ripA e hrrA, regulados por DtxR, foram identificados entre os GDEs compartilhados, demonstrando uma complexa rede regulatória controlada pela disponibilidade de ferro. Sete dos 36 GDEs codificam proteínas de superfície e transportadores de hemina, sendo quatro genes localizados em ilhas genômicas associados a fatores de virulência. Nossos resultados demonstraram que a restrição intracelular da utilização de ferro é fundamental para a resposta de C. pseudotuberculosis à disponibilidade do metal. Alterações significativas também foram observadas em relação aos GDEs identificados exclusivamente entre as linhagens, indicando divergência entre a resposta adaptativa da linhagem mutante em relação a linhagem parental. Em conjunto, os resultados do presente trabalho fornecem uma análise abrangente da rede regulatória e da resposta transcricional da linhagem T1 selvagem e Cp13 mutante de C. pseudotuberculosis, acrescentando informações importantes envolvendo o processo de adaptação desse importante patógeno à restrição de ferro. The ciuA gene codes for a surface protein which is associated to a siderophore-base iron acquisition system; however, its role in the acquisition of iron in C. pseudotuberculosis is still largely unknown. Iron is crucial for the growth and development of many bacterial pathogens; however, within the host, the concentration that is freely accessible is much lower than the concentration required for bacterial growth. In intracellular bacteria, like C. pseudotuberculosis, iron homeostasis is transcriptionally controlled by the availability of iron in the environment, which allows the bacteria to counteract the limitation of the metal imposed by the host. In a previous work conducted by our group, we described the construction of a ciuA gene mutant strain (Cp13), generated by using the in vivo insertional mutagenesis of the reporter transposon-based system TnFuZ in the T1 strain of C. pseudotuberculosis. The disruption of the ciuA gene led to a decrease in virulence and intracellular viability of the mutant strain. In addition, immunization of mice with the Cp13 strain elicited significantly IgG titers and higher survival rate (80%). The ciuA gene codes for a surface protein which is associated to a siderophore-base iron acquisition system; however, its role in the acquisition of iron in C. pseudotuberculosis is still largely unknown. Iron is crucial for the growth and development of many bacterial pathogens; however, within the host, the concentration that is freely accessible is much lower than the concentration required for bacterial growth. In intracellular bacteria, like C. pseudotuberculosis, iron homeostasis is transcriptionally controlled by the availability of iron in the environment, which allows the bacteria to counteract the limitation of the metal imposed by the host. Herein, our primary goal was to comprehensively characterize the transcriptional response of C. pseudotuberculosis under iron restriction. Differential gene expression analyses of the wild-type strain (T1 strain) and the (ciuA) Cp13 mutant strain (Cp13 strain) were conducted in low iron (LI) cultures, supplemented with the iron-chelator 2,2’-dipyridyl-DIP, in relation to high iron (HI) cultures in both strains. In this context, the data presented here shows a significant reduction in cellular density and the growth rate of the Cp13 mutant strain in relation to the parental strain under iron restriction. In total, 120 and 86 differentially expressed genes (DEGs) were identified in the T1 and Cp13 strains in response to iron restriction, respectively. 36 of these genes were identified in both strains and 26 of these genes had a similar expression pattern in both strains. Two transcription factors, known to be regulated by DtxR, were also identified between the overlapped DEGs of both strains, indicating a complex regulatory network controlled by the availability of iron in C. pseudotuberculosis. Out of the 26 genes, 7 DEGs encode high-affinity hemin-binding proteins. Interestingly, 4 hemin-binding genes were identified located within genomic islands harboring known virulence factors, corroborating with the association of iron acquisition and virulence in pathogenic bacteria. We have also observed that the intracellular restriction of iron usage is key to the iron starvation response of C. pseudotuberculosis. Significant differences between mutant and parental strains were also observed in relation to the strain-specific DEGs, indicating divergence in the adaptive responses of the mutant and parental strains in response to iron restriction. Altogether, these findings provide a comprehensive analysis of the regulatory network and transcriptional response of the Cp13 mutant and T1 parental strain of C. pseudotuberculosis, adding relevant insights into the transcriptional adaptation of this important pathogen within an iron-restricted environment.

CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Outra Agência Atrazina é um potente desregulador endócrino que afeta a esteroidogênese testicular e causa aumento transitório do peso do testículo seguido de atrofia, além de redução de 3β-HSD, redução nos níveis de testosterona e aumento de estradiol, sendo postulado que aromatase possa ser alvo desse herbicida. Ainda não se sabe se os efeitos observados nos testículos são reversíveis ou permanentes, nem se esses efeitos são primários ou secundários a alterações em segmentos pós-testiculares, como os dúctulos eferentes, o que objetivamos esclarecer nesse estudo. Para fins de comparação analisamos também a próstata ventral. Foram utilizados ratos Wistar machos, adultos, que receberam dose diária de atrazina 200/mg/Kg durante 7, 15 e 40 dias. Adicionalmente, nós avaliamos se os efeitos de atrazina, poderiam ser reversíveis após interrupção da exposição por 75 dias, período esse maior que o ciclo espermatogênico de ratos (58 dias). A exposição ao atrazina resultou em aumento transitório de peso testicular, dilatação luminal, seguida de atrofia dos túbulos seminíferos, bem como redução de 3β- HSD e aumento de aromatase em células de Leydig. A atrofia testicular e redução de 3β-HSD foram mais pronunciadas após o período de recuperação, em contraste com a expressão de aromatase que retornou ao nível do controle. Além disso, houve aumento de 89%, 76% e 42% nas subpopulações de macrófagos ED1-/ED2+ residentes, ED1+/ED2+ transitórios e ED1+/ ED2- induzidos, respectivamente, os quais foram positivos para 3β-HSD, indicando a possibilidade do envolvimento destas células na esteroidogênese. A exposição ao atrazina resultou ainda em efeitos discretos na próstata ventral, mas com alterações morfológicas marcantes nos dúctulos eferentes e desequilíbrio da homeostase tecidual, coincidente com aumento da expressão da aromatase. Esses achados enfatizam que os danos testiculares provocados por atrazina podem ser irreversíveis mesmo após um período de recuperação maior que o ciclo espermatogênico, e sugerem que pelo menos parte dos efeitos testiculares provocados por atrazina podem ser secundários a alterações nos dúctulos eferentes. Palavras-chave: Atrazina, Esteroidogênese, Homeostase tecidual, Testículos, Dúctulos eferentes, Prostata ventral, Rato Wistar Atrazine is a potent endocrine disruptor that affects testicular steroidogenesis, and causes transient increase in testicular weight followed by atrophy, besides reduction of 3β-HSD, decrease in testosterone and increase in estradiol levels, being postulated that aromatase may be a target of atrazine. It is not known whether the effects observed on the testis are reversible or permanent, nor whether these effects are primary or secondary to changes in postesticular segments, as the efferent ductules, what we aim to clarify in this study. For comparison purposes, we also evaluated the ventral prostate. Adult male Wistar rats receiving atrazine at the dosage of 200/mg/Kg for 7, 15, or 40 days were used. Additionally, we evaluated if the effects of atrazine in these target organs could be reversible after discontinuation of the exposure for a period of 75 days, period longer than the spermatogenic cycle of rats (58 days). The exposure to atrazine resulted in transient increased in testicular weight, luminal dilation, followed by seminiferous tubule atrophy, as well as 3β-HSD reduction and increase in aromatase in the Leydig cells. The testicular atrophy and 3β-HSD reduction were more pronounced after the recovery period, in contrast with aromatase that returned to control levels. Moreover, there was increase of 89%, 76%, and 42% in macrophages subpopulations ED1- /ED2+ resident, ED1+/ED2+ transitory and ED1+/ ED2- induced, respectively, which were positive for 3β-HSD, raising the possibility of their involvement on steroidogenesis. The exposure to atrazine resulted in mild effects on the ventral prostate, but remarkable morphological alterations on the efferent ductules and disruption on tissue homeostasis, coincident with increase in aromatase expression. These findings further emphasize that the testicular damages caused by atrazine may be irreversible even after a recovery period longer than the spermatogenic cycle, and suggest that at least part of the testicular effects of atrazine may be secondary to the alterations in the efferent ductules.

Perturbações da homeostase do retículo endoplasmático (RE) levam à ativação do estresse do retículo endoplasmático, que é mediada por três proteínas transmembrana, denominadas PERK, ATF6 e IRE1. Diversas evidências indicam que fármacos antiinflamatórios não-esteróides de diversas classes, como os salicilatos Aspirina e salicilato de sódio (NaSal) podem afetar a atividade de genes e proteínas relacionadas ao estresse do RE. O tratamento de células com NaSal leva à ativação de PERK, porém não de IRE1, resultando na fosforilação de eIF2. Uma vez que o papel de ATF6 nas respostas celulares induzidas pelos salicilatos não foi ainda elucidado, nosso objetivo foi caracterizar a expressão e a atividade de ATF6 em fibroblastos embrionários murinos (MEFs) tratados com salicilato de sódio. Através de experimentos de RT-qPCR e western blot, a expressão de ATF6 foi investigada após o tratamento das células. Adicionalmente, os níveis de mRNA e de proteína foram avaliados em células deficientes da eIF2 cinase PERK. Ensaios de gene repórter de luciferase foram empregados para avaliar a atividade transcricional de ATF6 em células tratadas somente com salicilato ou pré-tratadas com salicilato e posteriormente com tunicamicina. Nós observamos que o NaSal induz um aumento na expressão do mRNA e da proteína de ATF6 em células selvagens. Ainda, uma expressão robusta do mRNA de ATF6 foi observada em células deficientes de PERK, apesar de não ter sido observado acúmulo da proteína nessas células. Curiosamente, o aumento dos níveis de mRNA e de proteína não foi acompanhado do aumento da atividade transcricional de ATF6 em células tratadas com NaSal. Ademais, o pré-tratamento com NaSal levou à inibição da atividade transcricional induzida pela tunicamicina. A avaliação da expressão de genes alvo de ATF6 indica que CHOP e GADD34 têm sua expressão induzida pelo NaSal, porém a expressão dessas moléculas não é dependente de ATF6. Esses resultados fornecem evidências adicionais que os salicilatos exercem efeitos significativos sobre a expressão e ativação de componentes do estresse do RE e nos permitem ainda definir ATF6 como um novo alvo para a ação biológica dos salicilatos. Perturbation of the homeostasis of endoplasmic reticulum (ER) triggers the ER stress response, which is mediated by three ER transmembrane proteins: PKR-like ER kinase (PERK), activation transcription factor (ATF6), and inositol-requiring kinase (IRE1). Accumulating evidence indicates that non-steroidal anti-inflammatory drugs salicylates, such as Aspirin and sodium salicylate (NaSal), affect the activity of genes and proteins implicated in ER stress. NaSal treatment of cells leads to activation of PERK, but not IRE-1, resulting in eIF2alpha phosphorylation. Because the role of ATF6 in the cellular responses induced by salicylates remains elusive, we aimed to characterize the expression and activity of ATF6 after NaSal treatment of mouse embryonic fibroblasts (MEFs). Through RT-qPCR and western-blot studies, the expression of ATF6 was determined upon treatment of cells. In addition, mRNA and protein levels of ATF6 were evaluated in cells lacking eIF2alpha kinase PERK. Luciferase reporter gene assay was used to measure ATF6-dependent gene transcriptional activation in cells that were exposed only to NaSal or pre-treated with NaSal and further treated with tunicamycin. We found that NaSal induced an increase in ATF6 mRNA and protein expression in wild type cells. Interestingly, a robust expression of ATF6 mRNA was observed in PERK-deficient cells, although the protein did not accumulate in these cells. Intriguingly, an increase in ATF6 mRNA and protein levels was not accompanied by ATF6-mediated transcriptional activation, which was otherwise inhibited by NaSal in tunicamycin-treated cells. The analysis of the expression of ATF6 target genes revealed that only CHOP and GADD34 are induced by NaSal, but also that this expression is not ATF6-dependent. These results provide additional evidence of the effects of salicylates in ER stress components, and allow us to define ATF6 as a target for the biological actions of salicylates.

A regulação da homeostase energética, refletida no conteúdo de gordura, envolve uma complexa integração, por circuitos neuronais, de informações internas e externas sobre a demanda energética e a disponibilidade de alimentos. Evidências sugerem o neurotransmissor dopamina como importante componente na regulação do peso corporal. No geral, o sistema dopaminérgico tem sido associado a alterações no comportamento de busca pelo alimento e integração dos fatores relacionados à saciedade. Entretanto, lacunas ainda existem sobre os mecanismos através dos quais a dopamina regula a homeostase energética. Este trabalho mostrou que a sinalização dopaminérgica regula as reservas lipídicas no verme Caenorhabditis elegans. As análises revelaram que a regulação não é secundária a modificações no comportamento alimentar, movimento ou reprodução. Observou-se que o efeito de redução da reserva energética induzida pela dopamina foi dependente dos receptores dopaminérgicos e de algumas enzimas catalisadoras da oxidação lipídica. Em congruência com este fato, verificou-se que a dopamina aumenta o fluxo através das vias de oxidação lipídica. Os achados indicam uma função primária do sistema dopaminérgico na regulação do conteúdo lipídico, sugerindo que a dopamina ativa cascatas de sinalização que, no final, mobilizam os estoques periféricos de gordura. The regulation of energy balance, as reflected in fat content, involves an intricate interplay between neural mechanisms that respond to internal and external cues of energy demand and food availability. Compelling data have implicated the neurotransmitter dopamine as an important component of body weight regulation. Overall, the dopaminergic system has been linked to alteration in food seeking and satiety behaviors. However, the precise mechanisms through which dopamine regulates energy homeostasis remain poorly understood. Here, we show that dopamine signaling regulates fat reservoirs in Caenorhabditis elegans. Our analyses revealed that the metabolic modulation could not be accounted for by changes in animal feeding behavior, movement or reproductive rate. Instead, we found that the fat reducing effects of dopamine were dependent on dopaminergic receptors and a set of fat oxidation enzymes. Accordingly, we show that excess dopamine signaling causes increased rates of fat oxidation. Together, our findings reveal an ancient role for dopaminergic regulation of fat and suggest that dopamine signaling elicits this outcome through cascades that, ultimately, mobilizes peripheral fat storage depots.

O baço age como um filtro, na medida em que remove do sangue células sanguíneas e microrganismos, bem como células cobertas por anticorpos, em condições fisiológicas ou patológicas. Por sua anatomia e localização, o baço é o principal órgão envolvido no início da resposta imune a antígenos presentes na circulação. Apesar da remoção cirúrgica do baço estar associada ao risco de infecção subseqüente, as indicações para a esplenectomia total, para determinadas patologias, continuam existindo. Apesar disto, as conseqüências da ausência do baço sobre os órgãos e sítios linfóides têm sido pouco avaliadas. Assim, o objetivo deste trabalho foi investigar como o sistema imune se reorganiza na ausência do baço, através do estudo dos efeitos da esplenectomia em vários órgãos e sítios linfóides 30 dias após a esplenectomia. Nossos resultados sugerem que a retirada do baço afeta o sistema imune de maneira global. A análise do número de células das principais populações linfóides não demonstrou aumento do número de linfócitos no sangue tampouco no somatório dos órgãos avaliados em camundongos esplenectomizados (SB). No entanto, quando esses órgãos foram analisados individualmente, apresentaram alterações no número de linfócitos, principalmente na MO, timo, LnM e LPe. O estudo da migração de linfócitos em camundongos SB revelou uma preferência de células TCD4+ e TCD8+ pela MO. Apesar de também migrarem para a MO, os linfócitos B se distribuíram de uma maneira mais ampla pelos outros órgãos. O número de células expressando moléculas de ativação também estava modificado nos órgãos analisados: observamos uma diminuição no número de células B1a e B2 ativadas no LPe. As células B2 presentes na MO apresentaram um perfil ativado. Além disso, camundongos SB apresentaram níveis reduzidos de imunoglobulinas IgA, IgM e IgG, sendo que nesta última, os subtipos alterados encontrados foram IgG2b e IgG3. Camundongos SB apresentaram níveis basais alterados de citocinas em extratos de tecidos da MO, timo e LnM. De uma maneira geral camundongos SB produziram níveis reduzidos de IL-4, IL-10 e TGF-, porém, células dos LnM desses camundongos apresentaram uma produção mais elevada de IFN-. Ao investigarmos o número de células produtoras de anticorpos também observamos modificações importantes na MO, timo e LnM. Algumas dessas alterações podem ser interpretadas como mecanismos compensatórios ou de adaptação às perturbações causadas pela ausência do baço, órgão envolvido em funções imunológicas centrais. Esses animais de fato se adaptam à ausência do baço já que eles sobrevivem e são capazes de produzir vários tipos de respostas imunes. The spleen acts as a filter, as it removes the blood cells and micro-organisms and cells covered by antibodies in physiological or pathological conditions. For its location and anatomy, the spleen is the main organ involved in early immune responses to blood-borne antigens. Despite the fact that removal of the spleen is associated with risk of subsequent infection, recommendation for total splenectomy still exists as a therapeutic aid for certain conditions. However, the impact of spleen removal on other lymphoid organs has been poorly evaluated. Herein we evaluate how the immune system reorganize its components in the absence of the spleen by studying the splenectomy in various lymphoid organs and sites 30 days thereafter. Spleen removal affected the immune system as a whole. There was no increase in the number of lymphocytes, either in blood or in the sum of the evaluated organs in splenectomized (SP) mice. However, when organs and sites were analyzed individually, changes in the number of lymphocytes were noticed in bone marrow (BM), thymus, mesenteric lymph nodes (MLn) and peritoneal cavity (PC). Migration studies of injected lymphocytes in SP mice showed a trend of TCD4+ and TCD8+ towards BM. B lymphocytes were more widely spread to other organs. The number of cells expressing activation molecules was also changed in SP mice: we observed a decrease in the number of activated B1a and B2 cells in PC, and an increase in activated B2 cells in BM. Moreover, SP mice showed reduced levels of IgA, IgM and IgG, IgG2b and IgG3. SP mice showed altered basal levels of cytokines in tissue extracts of BM, thymus and MLn. In general, SP mice produced low levels of IL-4, IL-10 and TGF-. However, MLn cells of these mice showed a higher production of IFN-. Finally, the number of antibody-producing cells in BM, thymus and MLn were also altered in SP mice. Our hypothesis is that some of these changes can be interpreted as compensatory mechanisms needed for adapting to the disturbances caused by the absence of the spleen. Adaptation does occur since splenectomized mice survive and are able to activate several types of immune responses.

O sistema imune (SI), assim como os outros sistemas orgânicos atuam diretamente na homeostasia do organismo. Durante a fase aguda da infecção pelo Trypanosoma cruzi o SI age intensamente na tentativa de eliminar os parasitos que, no entanto, se evadem do sangue circulante para o meio predominantemente intracelular, favorecendo assim a evolução para a fase crônica. O objetivo do trabalho foi avaliar ahabilidade de células do SI de indivíduos NI ou portadores da doença de Chagas em responder in vitro a antígenos do T. cruzi, através da expressão ou secreção de moléculas responsáveis pelos processos de ativação ou regulação desse estímulo. Células mononucleares do sangue periférico (CMSP) dos indivíduos estudados foram separadas e analisadas antes e após serem cultivadas, na presença e na ausênciade homogenatos antigênicos. As células e os sobrenadantes das culturas foram coletados nos tempos zero (antes do estímulo antigênico), e nos tempos 2h, 6h, 12h e 24 horas após o estímulo para análise da expressão das moléculas CD25, CD28 e CTLA-4 na superfície de linfócitos T CD4+ e CD8+, bem como dos níveis deprostaglandina E2 e das citocinas IL-2, IL-10 e IFNg. Os resultados mostraram que antígenos de T. cruzi são capazes de estimular PBMC de indivíduos do grupo NI a produzirem IL-10 e PGE2, além de induzirem maior intensidade média de fluorescência de CD25 em LT CD4+. IL-10 foi detectada precocemente em culturas de pacientes do grupo IND e mantém seus níveis no período estudado, enquanto a detecção do IFNg ocorreu somente às 12 horas de cultura, ao contrário dos sobrenadantes de cultura do grupo CARD, onde foram detectadas indistintamente as citocinas IL-2, IL-10 e IFNg. A intensidade média de fluorescência de CTLA-4 foi maior em LT CD4+ estimulados no grupo IND, enquanto que no grupo CARD o estímulo antigênico induziu maior IMF de CD25 em LT CD4+ e em LT CD8+. Admitindo-se a possibilidade de que regulação induzida pelo estímulo antigênico no grupo IND seja mediada por IL-10 e pela expressão de CTLA-4, que impede a geração do segundo sinal de ativação celular, a ausência precoce dessa no grupo CARD poderia ser um dos fatores relacionados a uma falha na regulação do sistema imune destes pacientes. Além disso, a produção de moléculas reguladoras IL-10 e PGE2 por células dos indivíduos do grupo NI favorece a interpretação de que o SI é também capaz de promover a manutenção da homeostasia nos organismos isentosde memória imunológica específica. The immune system (IS) as others has physiological functions that works toward the maintenance of homeostasis. During the acute phase of the infection by Trypanosoma cruzi, the IS functions intensively to eliminate the parasites that are able to leave the peripheral blood becoming predominantly intracellular favoring, therefore, the its maintenance and the development of the chronic phase of the disease. The objective of this work was to evaluate the ability of the IS of NI or individuals with Chagas disease to react in vitro to T. cruzi antigens. This was evaluated by the analysis of the expression or secretion of molecules involved on the process of activation or regulation of the response induced by the stimuli. Peripheral blood mononuclear cellsof the individuals included in this study were fractionated and evaluated before and after in vitro culture. Cells and supernatants from these cultures were collected at time zero (before antigenic stimulation) and at 2, 6 and 24 hours after antigenic stimulation for analysis of CD25, CD28 e CTLA-4 expression on the surface of T CD4+ and CD8+ cells as well as the levels of prostaglandins E2 and the cytokines IL-2, IL-10 and IFNg.The results show that T. cruzi antigens stimulate PBMC from NI to secrete IL-10 and PGE2 besides the induction of higher fluorescence intensity of CD25 in CD4+ cells. IL- 10 is detectable early in cell cultures of IND patients and remains high for the time period of the study, while IFNg was detected only at 12 h, in contrast with PBMC from CARD where IL-2, IL-10 and IFNg where detectable at all time points. In stimulated cultures, the mean fluorescence intensity of CTLA-4 was high in CD4+ T cells from theIND group while in the CARD group the antigenic stimuli induced higher CD25 mean fluorescence intensity in CD4+ and in CD8+ cells. Admitting the possibility that regulation induced by the stimuli in the IND is mediated by IL-10 and expression of CTLA-4, impairing the second cell activation signal, the absence of early secretion of this cytokine by cells from CARD may be one of the major factors related to the lack ofimmuno regulatory activity in these patients,. Furthermore, the secretion of regulatory molecules IL-10 and PGE2 by cells from NI individuals favors our interpretation that the IS also induces homeostasis in situations where immune response memory is not specific.

O bloqueio colinérgico dos núcleos ventromedias do hipotálamo (VMH) reduz adissipação de calor durante o exercício físico, levando a uma maior taxa de acúmulode calor, antecipando a fadiga em 37% .Embora tenha sido verificado a participaçãodas sinapses colinérgicas dos VMH sobre a termorregulação durante o exercício atéa fadiga, não foi demonstrado o controle desse núcleo em temperatura ambiente emque a produção e a dissipação de calor não são diferentes. Dessa forma, emcondição controle não haveria alterações na taxa de variação de calor e estimulaçãode neurônios sensíveis a temperatura. A fadiga, assim, seria determinada por outrosfatores senão térmicos. Além disso, não se sabe se a atividade termogênica dosVMH é dependente da temperatura ambiente e do aumento da taxa metabólicainduzido pelo exercício. Assim, o objetivo do estudo é definir uma temperaturaambiente na qual a temperatura interna não é alterada durante o exercício físico atéa fadiga e ainda, verificar o efeito do exercício físico e da temperatura ambientesobre a atividade termogênica dos núcleos ventromediais do hipotálamo.Foram utilizados ratos adultos da linhagem Wistar pesando entre 250 e 350 gramas.O estudo foi dividido em dois delineamentos experimentais. No primeirodelineamento experimental, os ratos intactos foram submetidos a corrida em esteirarolante a 20m/min e 5% de inclinação até a fadiga em ambiente de 8ºC, 12ºC e 15ºCe URA de 50%. A temperatura interna, a temperatura da pele da cauda e o tempototal de exercício foram medidos. A temperatura interna dos animais intactos reduziudurante a corrida em ambiente de 8ºC e aumentou a 15ºC. Em ambiente de 12ºC atemperatura interna dos ratos não modificou do início do exercício físico até omomento da fadiga. A temperatura da pele da cauda dos animais reduziu a partir do2º minuto de exercício nas temperaturas ambientes.No delineamento experimental 2, os animais receberam implante de cânulascrônicas bilaterais nos VMH. Os ratos foram submetidos a duas condiçõesexperimentais separadas por um intervalo de pelo menos dois dias. Os ratosreceberam injeção de 0,2µL de solução salina (0,15 M) ou metilatropina (2,5 x 10-2M) nos VMH antes de iniciarem a situação de repouso ou exercício físico. Astemperaturas interna e da pele da cauda e o tempo total de exercício foram medidos.Esse protocolo foi repetido em temperaturas ambientes diferentes, a 5ºC, 12ºC e15ºC e sempre com umidade relativa do ar de 50%. O bloqueio colinérgico nos VMHreduziu o tempo de exercício físico nas três temperaturas ambientes. A temperaturainterna reduziu a 5ºC, aumentou a 15ºC e não apresentou alterações a 12ºC duranteo exercício. A injeção de metilatropina nos VMH não modificou a temperatura internaem comparação ao grupo salina. A temperatura da pele da cauda dos ratos reduziuno grupo salina e no metilatropina nas três temperaturas ambientes, durante oexercício físico. Não houve diferença entre o grupo salina e metilatropina nas trêstemperaturas ambientes.Diante desses dados, concluímos que a temperatura interna dos animais não éalterada durante o exercício físico a 20 m/min, 5% de inclinação até a fadiga sobtemperatura ambiente de 12ºC. E ainda que os receptores colinérgicos muscarínicosdos núcleos ventromediais hipotalâmicos modulam o tempo de exercício até a fadigaindependente da temperatura ambiente na qual a atividade é realizada. Cholinergic blockade in the ventromedial hypothalamic nucleus (VMH) reduces tailheat loss and induces a higher increase in the heat storage rate during physicalexercise, antecipating the onset of fatigue in 37%. Although the evidences indicatingthe involvement of VMH cholinergic receptors on thermoregulation during theexercise until fatigue, the control of these nucleus in an ambiental condition which theheat production is not different from the heat dissipation to the environment has notbeen described. In these conditions, the heat variation rate and the activation oftemperature sensitive neurons would not be altered in control group and, thus, thefatigue would be related to factors other than the thermoregulatory adjustments.Furthermore, it is unclear if the VMH thermogenic activity depends on ambienttemperature and exercise-induced increase in metabolic rate. Therefore, the aim ofthe study was to determine an ambient temperature where the internal bodytemperature is not altered during the physical exercise until fatigue and to verify theeffect of physical exercise and ambient temperature on thermogenic activity of VMH.Adult male Wistar rats weighting 250-350 g were used. The study was divided in twoexperimental protocols. During the first experimental protocol, intact rats weresubmited to treadmill running (20 m/min and 5% inclination) until fatigue at ambienttemperatures of 8ºC, 12ºC and 15ºC and with relative humidity controlled at 50%.Internal body temperature reduced during the exercise at 8ºC and increased at 15ºC.During the exposure to 12ºC, internal body temperature was not modificated from thebeginning of the exercise until the fatigue point. Tail skin temperature decreased twominutes after the exercise had started and remained reduced until the onset offatigue at the three ambient temperatures.During the second experimental protocol, animals were fixed to a stereotaxicapparatus and received a bilateral implant of cannulae in the VMH. The rats weresubmitted to two experimental conditions with an interval of at least two daysbetween the trials. Rats received an injection of either 0,2 µL of 0,15 M salinesolution or 2,5x10-2 M methylatropine in the VMH and, immediately after thisprocedure, the animals were submitted to exercise. Internal body temperature, tailskin temperature and time to fatigue were measured. This protocol was reproducedat different ambients temperatures of 5ºC, 12ºC and 15ºC and with relative humidityalways controlled at 50%. Cholinergic blockade in the VMH reduced the time tofatigue at the three ambients temperatures. Internal body temperature reducedduring the physical exercise at 5ºC increased under 15ºC and was not modified at12ºC. Methylatropine injection in the VMH failed to change internal body temperaturecompared to saline group. Tail skin temperature reduced during the exercise in bothgroups in all environmental conditions. No differences were observed in tail skintemperature between saline and methylatropine groups at the three ambienttemperatures.Taking the above data into account, we concluded that exercising running rats at12ºC represents an experimental protocol where the internal body temperature doesnot alter throughtout the exercise until the onset of fatigue. Furthermore, VMHmuscarinic cholinoceptors determine the time to fatigue regardless of the ambienttemperature in which the physical activity is carried out.

A microbiota indígena desempenha importantes funções na homeostasia, podendo constituir-se em importante reservatório de organismos para infecções tanto da cavidade oral como de outras regiões do organismo. A presença dos periodontopatógenos Agregatibacter actinomycetemcomitans, Eikenella corrodens,Fusobacterium nucleatum, Porphyromonas gingivalis, Prevotella intermedia, Prevotella nigrescens, Tannerella forsythia e Treponema denticola foi avaliada, por PCR, em espécimes gengivais/ subgengivais de 237 indivíduos sem doença periodontal: 14 crianças antes da erupção dos dentes (grupo A), 47 de três a cinco anos (grupo B) e 42 de sete a 10 anos (grupo C), 34 adolescentes (grupo D), 20adultos de 20 a 45 anos (grupo E), 19 com mais de 45 anos (grupo F), 48 edêntulos sem prótese total (grupo G) e 13 indivíduos com implante dental (grupo H). A. actinomycetemcomitans, E. corrodens, F. nucleatum, P. gingivalis, P. intermedia, P. nigrescens, T. forsythia e T. denticola foram observados em 116/48,9%, 79/33,3%, 155/65,4%, 0/0%, 2/0,8%, 21/8,8%, 46/19,4% e 36/15,2% indivíduos, respectivamente. A. actinomycetemcomitans e F. nucleatum foram os únicos microrganismos detectados em todos os grupos. No grupo A, apenas estes microrganismos foram observados. P. intermedia foi identificada apenas nos grupos C e E. Os indivíduos com implante dental apresentaram um perfil de periodontopatógenos semelhante ao dos adultos (grupos E/F) e uma maior proporção de microrganismos quando comparado com os indivíduos edêntulos. Observou-se relações sinergísticas entre F. nucleatum/T. forsythia, F. nucleatum/P. nigrescens, F. nucleatum/E. corrodens e F. nucleatum/A. actinomycetemcomitans.Relações antagonistas mútuas entre T. denticola/P. intermedia/P .nigrescens, T. forsythia/P. intermedia, P. intermedia/F. nucleatum e antagonistas entre T. denticola/F. nucleatum, T. denticola/E. corrodens, T. denticola/A. actinomycetemcomitans, T. forsythia/F. nucleatum, T. forsythia/E. corrodens, T. forsythia/A. actinomycetemcomitans, P. intermedia/E.corrodens; P. intermedia/A. actinomycetemcomitans, P. nigrescens/T. forsythia, P. nigrescens/F. nucleatum, P. nigrescens/ E.corrodens e P. nigrescens/A. actinomycetemcomitans foram observadas. A microbiota oral torna-se mais diversificada com a erupção dos dentes, evento relacionado a mudanças ambientais e alimentares do hospedeiro. As relações sinergísticas observadas entre F. nucleatum e quatro de seis espécies detectadas reforça o importante papel deste microrganismo na formação da microbiota oral. Este é o primeiro trabalho, realizado no Brasil 5 empregando PCR,que avalia a implantação da microbiota periodontal em diferentes fases da vida do indivíduo e a associação entre periodontopatógenos em indivíduos com periodonto saudável. The indigenous microbiota plays an important role in health and disease. The human oral cavity is a complex biological system in which members of a diverse microbial community interact with themselves as well as with host structures and components. Members of this community change along lifetime and are diverse in different parts of the world, due to specific population habits and genetic characteristics. In order to understand better the alterations of the oral microbiotaassociated with age, we investigated the presence of the periodontopathogens Agregatibacter actinomycetemcomitans, Eikenella corrodens, Fusobacterium nucleatum, Porphyromonas gingivalis, Prevotella intermedia, Prevotella nigrescens, Tannerella forsythia and Treponema denticola, by PCR, in gingival/subgingival specimens obtained from 237 subjects with no clinical evidence of gingival/ periodontal lesions: 14 children before teeth eruption/A, 47 children 3-5years old/B, 42 individuals from 7-10 years of age/C, 34 adolescents/D, 20 individuals with age ranging from 20-45 years/E, 19 adults older than 45 years/F, 48 edentulous individuals with no total prosthesis/G and 13 individuals with tooth implant/H. A. actinomycetemcomitans, E. corrodens, F. nucleatum, P. gingivalis, P. intermedia, P. nigrescens, T. forsythia and T. denticola were detected in specimens obtained from 116/48,9%, 79/33,3%, 155/65,4%, 0/0%, 2/0,8%, 21/8,8%, 46/19,4%and 36/15,2% individuals, respectively. A. actinomycetemcomitans and F. nucleatum were the only organisms found in all groups studied. In the group A, only these organisms were observed. P. intermedia was identified in the groups C and E only. Individuals with tooth implant had a periodontopathogen profile similar to that found in adults of the groups E and F and a higher organism diversity when compared with edentulous ones. Synergistic associations were found between F. nucleatum/T.forsythia, F. nucleatum/P. nigrescens, F. nucleatum/E. corrodens and F.nucleatum/A. actinomycetemcomitans. Mutual antagonist relationships were detected among T. denticola/P. intermedia/P.nigrescens, T. forsythia/ P. intermedia, P. intermedia/F. nucleatum. Antagonist associations between T. denticola/F. nucleatum, T. denticola/ E. corrodens, T. denticola/A. actinomycetemcomitans, T. forsythia/F.nucleatum, T. forsythia/E. corrodens, T. forsythia/A. actinomycetemcomitans, P. intermedia/E. corrodens, P. intermedia/A. actinomycetemcomitans, P. nigrescens/T. forsythia, P. nigrescens/F. nucleatum, P. nigrescens/E. corrodens and P. nigrescens/A. actinomycetemcomitans were observed. In conclusion, oral microbiotais more diverse after teeth eruption, probably due to environmental alterations induced by this event and to alimentary changes that occur simultaneously. Synergistic associations observed between F. nucleatum and four out of the six periodontopathogens detected reinforces the hypothesis that this organism plays animportant role in the development and maintenance of the oral microbiota. This investigation is the first study that employs PCR to analyse the oral microbiota constitution in different age groups in a Brazilian population and, also, to study the association between periodontopathogens in individuals with no evident periodontal20 lesions.

O paciente em estado crítico apresenta alterações na síntese e liberação do cortisol, com grandes elevações nos níveis séricos, que são proporcionais à gravidade do quadro. Alguns pacientes, todavia, apresentam resposta adrenal que é inadequada ao estresse pelo qual o organismo está passando, estando o cortisol elevado, porém em um nível insuficiente para exercer efeito benéfico sobre a homeostase, quadro denominado insuficiência adrenal relativa. Estes pacientes evoluem com doença mais grave, e maiores índices de mortalidade. Hoje, a avaliação da glândula adrenal no paciente crítico é realizada pela dosagem do cortisol sérico total, incluindo fração livre e ligada a proteínas. A avaliação pelo cortisol livre sérico parece ser mais fidedigna que a dosagem do cortisol sérico total, por se tratar da fração ativa do hormônio, e por não sofrer influência das variações nos níveis de proteínas, comuns nestes pacientes. A dosagem do cortisol salivar é um excelente índice da fração livre do cortisol. O objetivo deste estudo foi avaliar os valores de cortisol sérico e salivar no paciente em estado crítico, verificando a correlação entre os valores, e a correlação com o prognóstico. Foram selecionados sessenta e seis pacientes divididos em 3 grupos: vinte e sete pacientes com sepse grave em unidade de terapia intensiva, vinte pacientes em pós-operatório estável em unidade de terapia intensiva, e dezenove pacientes sadios como controle. A correlação entre o cortisol sérico e salivar foi forte, com valor de r de Pearson de 0,89, e valores elevados do cortisol sérico e salivar se associaram a maior mortalidade. Os valores de cortisol salivar apresentaram elevações mais muito mais pronunciadas e relação aos níveis basais, por não estar ligado a proteínas, e apresentaram melhor associação com a mortalidade. Critical care patient presents important alterations in synthesis and release of cortisol, with great elevation of its serum levels, proportional to the severity of the case. Some patients, other way, presents adrenal response that is inadequate for the stress which the organism is passing through, with elevated serum cortisol, but in an insufficient level to make benefit to the homeostasis. This state is named relative adrenal insufficiency. These patients present more severe disease, and higher mortality. To date, adrenal evaluation in critical care patients is based on serum levels of total cortisol, including, free fraction plus protein-bonded fraction. Adrenal evaluation by serum free cortisol seems to be more reliable, reflecting active fraction of hormone. Salivary cortisol represents an excellent index of serum free cortisol. The objective of the study was to evaluate values of total serum and salivary cortisol in critical care patients, evaluating correlation among values, and the correlation with patient prognosis. Sixty six patients were divided in 3 groups: twenty seven patients with severe sepsis, from intensive care unit, twenty post-operatory stable patients in intensive care unit, and nineteen healthy controls. We found a strong serum and salivary cortisol correlation, with Pearson r value of 0,89, and serum total and salivary cortisol elevated levels were associated with higher mortality. Salivary cortisol levels presented more significant elevations compared with basal levels, because they are not bond to protein, and were better associated with mortality.