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The main control strategy for Ascaris lumbricoides is mass drug administration (especially with benzimidazoles), which can select strains of parasites resistant to treatment. Mutations in the beta-tubulin isotype-1 gene at codons 167, 198 and 200 have been linked to benzimid azole resistance in several nematodes. The mutation in codon 200 is the most frequent in different species of parasites, as previously observed in Necator americanus and Trichuris trichiura; however, this mutation has never been found in populations of A. lumbricoides. This study aimed to screen for single nucleotide polymorphisms (SNPs) in the beta-tubulin isotype-1 gene at codon 200 in A. lumbricoides. We developed a technique based on an amplification refractory mutation system (ARMS-PCR) for the analysis of 854 single A. lum bricoides eggs collected from 68 human stool samples from seven Brazilian states. We detected the mutation in codon 200 at a frequency of 0.5% (4/854). This is the first report of this mutation in A. lumbricoides. Although the observed frequency is low, its presence indi cates that these parasite populations have the potential to develop high levels of resistance in the future. The methodology proposed here provides a powerful tool to screen for the emergence of anthelmintic resistance mutations in parasitic nematode populations. A principal estratégia de controle para Ascaris lumbricoides é a administração em massa de medicamentos (especialmente com benzimidazóis), que podem selecionar cepas de parasitas resistentes ao tratamento. Mutações no gene isotipo-1 da beta-tubulina nos códons 167, 198 e 200 foram associados à resistência ao benzimidazólico em vários nematóides. A mutação no códon 200 é a mais frequente em diferentes espécies de parasitas, como observado anteriormente em Necator americanus e Trichuris trichiura; no entanto, esta mutação nunca foi encontrada em populações de A. lumbricoides. Este estudo teve como objetivo rastrear polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) na beta-tubulina gene isotype-1 no códon 200 em A. lumbricoides. Desenvolvemos uma técnica baseada em um sistema de mutação refratária à amplificação (ARMS-PCR) para a análise de 854 ovos únicos de A. lumbricoides coletados de 68 amostras de fezes humanas de sete estados brasileiros. Nós detectaram a mutação no códon 200 com uma frequência de 0,5% (4/854). Este é o primeiro relato de esta mutação em A. lumbricoides. Embora a frequência observada seja baixa, sua presença indica que essas populações parasitárias têm potencial para desenvolver altos níveis de resistência no futuro. A metodologia aqui proposta fornece uma ferramenta poderosa para a triagem de surgimento de mutações de resistência a anti-helmínticos em populações de nematóides parasitas.

O objetivo deste trabalho foi subsidiar um programa sustentável de controle parasitário em um rebanho caprino em São Francisco do Sul, SC, aplicando o Sistema Integrado de Controle Parasitário (SICOPA). Foram utilizados 63 caprinos, distribuídos em nove grupos para teste de eficácia de anti-helmínticos, exames de contagem de ovos por grama de fezes (OPG), coprocultura, grau Famacha, micro-hematócrito, escore corporal e contagem de larvas no pasto. A redução da OPG 15 dias pós-tratamento com closantel, albendazole, nitroxinil, levamisole, ivermectina+levamisole+albendazol, moxidectina, ivermectina, abamectina e sulfóxido de albendazol foi de 89, 83, 65, 63, 57, 37, 31, 0 e 0%, respectivamente. A média de graus Famacha 1 e 2 no estudo foi de 81%, e de graus 3, 4 e 5 foi de 19%, e não se observou correlação com os valores do micro-hematócrito em razão da prevalência de Trichostrongylus sp. (92%). A contagem de larvas infectantes (L3) na pastagem apresentou valores abaixo de 1000 L3/kg/MS, predominando Trichostrongylus sp. Nenhuma das drogas testadas foi considerada eficaz, evidenciando resistência parasitária múltipla. A aplicação de ferramentas do SICOPA e a adoção de estratégias de manejo e nutrição adequados são fundamentais para estabelecer um programa sanitário sustentável. The objective of this study was to subsidize a sustainable parasite control program in a flock of goats in São Francisco do Sul, SC, Brazil, applying the integrated system for parasite control. Sixty three adult animals were used in nine groups to perform an anthelmintic efficacy test, faecal egg count (FEC), Famacha method, haematocrit, body condition score, coproculture, and the presence of larvae on pasture. Drug efficacy measured by FEC 15 days post-treatment with closantel, ivermectin + Levamisole + albendazole, albendazole, nitroxinyl, levamisol, abamectin, ivermectin, moxidectin and albendazole was 85, 57, 83, 65, 63, 31, 28, 24 and 0%, respectively. The Famacha score 1 or 2 was given to 81% and scores 3, 4 or 5 were given to 19%, without significant correlation with haematocrit values since the predominant was Trichostrongylus sp. (92%). The count of infective larvae levels on pasture revealed values below 1000 L3/kg/DM predominantly Trichostrongylus sp. None of the tested drugs was effective, showing multiple parasitic resistance. The correct application of the SICOPA and adoption of management strategies and proper nutrition are essential to establish a sustainable health program.

O objetivo deste trabalho é caracterizar geneticamente a resistência ao anti-helmíntico benzimidazol (BZ) em helmintos Haemonchus sp isolados de ruminantes. Para tanto trinta animais pertencentes a um rebanho de bovinos, um rebanho de Caprinos, um rebanho de Ovinos e um rebanho de Bubalinos, tiveram amostras de fezes coletadas e analisadas para a presença de ovos de Tricostrongilídeos. As propriedades foram avaliadas quanto ao histórico de uso de BZ para controle de nematódeos. Nos rebanhos bovinos e ovinos é utilizado BZ a mais de dez anos enquanto que nos rebanhos de bubalinos e caprinos não se utiliza este fármaco a pelo menos cinco anos. Dentre os 120 animais testados, dezoito (~15%) apresentaram ovos de Tricostrongilídeos nas fezes, com contagens de 200 a 33000 ovos por grama de fezes. A presença da mutação Phe200Tyr no gene da -tubulina, que confere a resistência ao BZ foi avaliada em todas as amostras e suas frequências variaram de 0,074 a 0,476 (N= ~20 larvas/hospedeiro). Para a identificação do helminto que infectava os rebanhos foi realizado o sequenciamento do DNA nuclear na região ITS-2 de ovos e larvas. No rebanho de bovinos o principal nematódeo presente foi identificado como Haemonchus placei e nos demais rebanhos foi identificado a espécie Haemonchus contortus. O estudo revelou a presença de alelos resistentes em alta frequência entre espécimes de Haemonchus sp, principalmente nas propriedades que mantêm contínua pressão seletiva por meio do uso de BZ. A identificação da resistência nas subpopulações dos rebanhos de ruminantes foi realizada por genotipagem, os testes estatísticos 2 realizados revelaram não haver diferença significativa entre os isolados de Haemonchus presentes em diferentes animais de um mesmo rebanho. Todavia, foram encontradas diferenças significativas entre rebanhos. Este estudo reforça a necessidade do uso de métodos moleculares para o monitoramento da ocorrência da resistência anti-helmíntica, visando o uso racional de antiparasitários. The purpose of this study is to genetically characterize the resistance to benzimidazole (BZ) anthelmintic in Haemonchus sp helminths isolated from ruminants. With this purpose, thirty animals from herds of cattle, goats, sheep and buffalos, had stool samples collected and analyzed for the presence of trichostrongylus eggs. Properties were evaluated as for the history of using BZ to control nematodes. In herds of cattle and sheep, BZ has been used for over ten years whereas in herds of buffalos and goats, it has not been used for at least five years. Among the 120 animals tested, eighteen (~15%) had trichostrongylus eggs in their feces, with counts from 200 to 33000 eggs per gram of feces. The presence of Phe200Tyr mutation in the -tubulin gene, which confers a resistance to BZ was evaluated in all samples and its frequencies ranged from 0.074 to 0.476 (N= ~20 larvae/host). In order to identify the helminth which infected herds, nuclear DNA was sequenced at the ITS-2 region of eggs and larvae. In the herd of cattle, the main nematode was identified as Haemonchus placei and in the other herds, it was the Haemonchus contortus species. The study has shown the presence of resistant alleles in a high frequency among specimens of Haemonchus sp, particularly in properties which maintain a continuous selective pressure by using BZ. Resistance in isolates of ruminant livestock was identified through genotyping; 2 statistical tests were carried out and have not shown a significant difference among isolates of Haemonchus present in different animals from the same herd. However, significant differences were observed among herds. This study emphasizes the need to use molecular methods for monitoring the occurrence of anthelmintic resistance, encouraging the rational use of anti-parasitic drugs.