Search

Algumas hemoglobinas (Hb) variantes apresentam mobilidade eletroforética semelhante à da Hb S, o que pode levar ao falso diagnóstico de traço ou doença falciforme. A maioria dos indivíduos possuidores das Hbs variantes é assintomática, mas em vários casos aHb está associada à alfa-talassemia, o que pode resultar em alterações hematológicas. A associação de Hb variante com a Hb S ou Hb C pode determinar quadros clínicos e/ou laboratoriais complexos. Objetivo e Métodos: O objetivo deste estudo foi determinar a frequência das variantes de hemoglobina detectadas no Programa de Triagem Neonatal de Minas Gerais com mobilidade elétrica similar à da Hb S. O DNA de 118 crianças foi utilizado para verificar a presença do alelo bS. O diagnóstico de alfa-talassemia do tipo 3.7 ou 4.2 foi realizado por meio da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) multiplex do tipo gap (gap- PCR multiplex). Os produtos dessa PCR foram então digeridos com endonucleases de restrição para detectar as mutações correspondentes à Stanleyville-II e Hasharon, já descritasno Brasil. Nos casos negativos para essas Hbs fez-se sequenciamento dos genes HBA ou HBB. Dados clínicos foram obtidos das crianças que compareceram à consulta clínica na Fundação Hemominas. Resultados: Das 118, apenas 6 crianças apresentaram a Hb S. Dentre as 112 foram encontradas duas crianças, (1,8%) com Hb Stanleyville-II em homozigose (-3.7;Stanleyville/-3.7;Stanleyville) e outras 94 (84%) com Stanleyville-II em heterozigose (84 têm genótipo /- 3.7;Stanleyville, cinco -a3.7/-a3.7;Stanleyville e cinco aStanleyvillea/aa) Dentre os 112 casos, seis apresentavam Hb Hasharon em heterozigose (todas aa/-a3.7Hasharon-). Detectaramse ainda cinco casos com Hb Ottawa, um com Hb St Lukes e um com Hb Etobicoke, todasvariantes de cadeia , em heterozigose e genótipo /. Hb G-Ferrara foi encontrada em duas crianças (uma /-a3.7 e outra aa/aa) e Hb Maputo (/-a3.7)em uma, ambas variantes b e em heterozigose. Dentre as hemoglobinas citadas acima, foram encontradas cincoassociações com a Hb S: em três crianças com Hb Stanleyville-II, uma Ottawa e uma St Luke's. A Hb Etobicoke foi encontrada em uma criança que possui o alelo híbrido 212. Não foi observada nenhuma alteração clínica decorrente dessas associações. Em várias crianças com Hb Stanleyville-II, todas com ancestralidade africana, foram observadas microcitose e hipocromia, devido a associação com a alfa talassemia do tipo 3.7. Foi estabelecida PCRRFLP (Polimorfismo de Fragmento de Restrição) para a identificação de todas as hemoglobinas, com exceção da hemoglobina G-Ferrara. Conclusões: 1. Hemoglobina Stanleyville-II é relativamente comum em Minas Gerais (incidência de 1:11.500); 2. Apresença das Hbs Stanleyville-II, Ottawa, Maputo, G-Ferrara, Hasharon, Etobicoke e St Luke's pode levar a falso diagnóstico de traço ou doença falciforme, necessitando-se de testes adicionais para o diagnóstico diferencial correto; 3. A presença dessas Hbs parece não possuirrelevância clínica, mesmo nos casos encontrados neste estudo quando se detectou associação das Hbs variantes St Luke's, Stanleyville-II e Ottawa com a Hb S; 4. Hipocromia e microcitose, observadas em várias crianças, são devidas à co-herança de -talassemia e não à presença da Hb Stanleyville-II; 5. Foram encontrados casos assintomáticos de Hb Maputo e G- Ferrara em heterozigose com a Hb A. Os pais dessas crianças receberam orientação genética sobre a possibilidade das crianças terem filhos com doença falciforme se houver coherançacom a Hb S; 6. A PCR-RFLP pode ser utilizada como método diagnóstico para todas as Hbs variantes identificadas neste estudo, com exceção da Hb G-Ferrara. Some hemoglobin (Hb) variants have similar electrophoretic mobility to that of Hb S (S-like), which can lead to false diagnosis of sickle cell trait or disease. Most individuals with Hb variants are asymptomatic, but in several cases the Hb is associated with alpha-thalassemia and may result in hematological changes. The association of a Hb variantwith the Hb S or Hb C may result in complex clinical and/or laboratory features. Objective and Methods: The aim of this study was to determine the frequency of S-like Hb variants detected in the Newborn Screening Program in Minas Gerais and to assess the clinical relevance of these Hbs. The DNA from 118 children was tested for the bS allele. Alphathalassemia types 3.7 or 4.2 were tested in 112 children in 56 cities in Minas Gerais by mutiplex gap-PCR. The products of this PCR were then digested with restriction endonucleases to detect the mutations corresponding to Hb Stanleyville-II and Hb Hasharon, both already reported in Brazil. In the remaining cases sequencing of HBB or HBA genes was necessary to identify the Hb variant. Clinical data were obtained from children who attended medical consultations at Hemominas Foundation. Results: Of the 118 children, only six werepositive for the bS allele without any other variant. Among the remaining 112 children there were two children (1.8%) with homozygous Hb Stanleyville-II (-3.7; Stanleyville/-3.7; Stanleyville), 94 (84%) with heterozygous Stanleyville-II (genotypes: 84 / - a3.7; Stanleyville, five - a3.7 / - a3.7; Stanleyville and five aStanleyvillea/aa), and six heterozygous Hb Hasharon (all aa / -a 3.7; Hasharon). Five cases with Hb Ottawa, one with Hb St. Luke's and one with Hb Etobicoke, all - chain variants in heterozygosis and genotype /, were also identified. Hb G-Ferrara was identified in two children (one /-3.7 and the other aa/aa) and Maputo Hb ( / -a3.7) in one, both b variants in heterozygosis. Among the above mentioned Hbs, there were five associations with the bS allele: three children with Hb Stanleyville-II, one with Hb Ottawa and one with Hb St Luke's. Hb Etobicoke was found in a child who has a hybrid 212 gene. There was no clinical change due to these associations. In several children with Hb Stanleyville-II, all from African ancestry, microcytosis and hypochromia were observed because of the association with a 3.7 alpha thalassemia gene. PCR-RFLP (Restriction Fragment LengthPolymorphism) with specific endonucleases confirmed all mutations underlying the variant Hbs, with the exception of Hb G-Ferrara, for which no diagnostic endonuclease was found. Conclusions: 1. Hemoglobin Stanleyville-II is relatively common in Minas Gerais (incidenceof 1:11,500); 2. Hbs Stanleyville-II, Ottawa, Maputo, G-Ferrara, Hasharon, Etobicoke and St. Luke's can lead to false diagnosis of sickle cell trait or disease in newborn screening, unless additional tests for a correct diagnosis are used; 3. These Hbs seem to have no clinical relevance, even when found in combination with the bS allele, as happened in this study with the Hb St Luke's, Stanleyville-II, and Ottawa; 4. Hypochromia and microcytosis detected in several children are due to the co-inheritance of -thalassemia and not to the presence of HbStanleyville-II; 5. Asymptomatic cases of heterozygous Hb Maputo and Hb G-Ferrara were identified. Genetic counseling about the possibility of having children or grandchildren with sickle cell disease if the bS allele is co-inherited was given to these families; 6. Specific PCRRFLPmay be used as a diagnostic tool for all variant Hbs identified in the present study, except for Hb G-Ferrara.

Introdução: A 6-mercaptopurina (6-MP) é o principal componente da maioria dos esquemas de quimioterapia na fase de manutenção do tratamento da leucemia linfocítica aguda (LLA). A tiopurinametiltransferase (TPMT) é uma das enzimas responsáveis pelo metabolismo da 6-MP. Diversos estudos demonstram um polimorfismo genético de caráter autossômico co-dominante para a TPMT em humanos. O metabolismo da 6-MP é intensamente afetado por este polimorfismo. Objetivos: Estimar a freqüência das quatro principais variantes alélicas do gene TPMT: *2 (238G>C), *3A (460G>A e 719A>G) *3B(460G>A) e *3C (719A>G) em uma população de crianças e adolescentes com LLA tratados no Serviço de Hematologia do Hospital das Clínicas UFMG. Correlacionar o genótipo com dados clínicos e laboratoriais obtidos durante a fase de manutenção da quimioterapia e com a concentração intra-eritrocitária dos metabólitos da 6-MP (6-TGN e MMP). Métodos: Amostras de DNA de 116 pacientes foram extraídas sendo 95 a partir de sangue total, 13 a partir de concentrado de hemácias e 8 utilizando esfregaço de medula óssea. A PCR alelo específica foi otimizada separadamente para cada locus, utilizando a estratégia do sistema de amplificação refratário a mutações (ARMS). Posteriormente, a PCR foi realizada em multiplex. Esta PCR foi possível somente com preparado de DNA de sangue total. Os dados clínicos e laboratoriais foram coletados, retrospectivamente, em prontuários médicos. Resultados: Doze dos 116 pacientes (10,34%) apresentaram mutação. Cento e quatro pacientes (89,66%) não apresentaram mutação no gene TPMT. Todas as mutações foram encontradas em heterozigose. O alelo mais freqüente foi o TPMT*3A (9/232 alelos; 3,87%), seguido pelo *3C (2/232; 0,86%), *2 (1/232; 0,43%) e *3B (nenhum alelo; 0%). Não houve diferenças significativas nas medianas da contagem de leucócitos e neutrófilos, quando os grupos de pacientes com e sem mutação foram comparados. Também o tempo de interrupção da quimioterapia de manutenção foi semelhante nos dois grupos. A média das doses prescritas de 6-MP situou-se abaixo da dose preconizada pelo protocolo em ambos os grupos e a mediana da contagem de leucócitos e neutrófilos durante o tratamento de manutenção ficou acima da preconizada pelos protocolos de tratamento. Dos 36 pacientes em que foi realizada a dosagem de metabólitos apenas um apresentou mutação. Neste paciente foi encontrado altas concentrações intra-eritrocitárias de 6-TGN e baixas concentrações de MMP. Portanto, não foi possível a realização de análises estatísticas para avaliação da relação entre o genótipo e a concentração de metabólitos da 6-MP. A sobrevida livre de eventos aos 8,5 anos para todo o grupo foi de 75,1% (IC 95%: 60,8 a 84,8%). Não foi observada diferença na sobrevida livre de eventos quando comparados os grupos com e sem mutação (p = 0,06). Conclusões: Os nossos resultados em pacientes brasileiros coincidem com a literatura, em que o alelo TPMT*3A é o mais freqüente na maioria das populações. Vários indícios encontrados no presente estudo sugerem que a intensidade da quimioterapia pode não ter sido suficiente para se alcançar uma mielossupressão adequada, principalmente no grupo de pacientes com mutação do gene TPMT. Isso explicaria porque não se encontraram diferenças significativas no prognóstico dos grupos com e sem mutação do gene da TPMT. A incorporação da genotipagem à rotina de acompanhamento dos pacientes tratados no Serviço de Hematologia do Hospital das Clínicas da UFMG poderia ser uma ferramenta auxiliar na otimização das doses de 6-MP, minimizando riscos de toxicidade e contribuindo para uma melhor abordagem diagnóstica e terapêutica.