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Introduction: dengue is a most common mosquito-borne viral disease in the Americas and tropical countries. Objective: in this work, mice were hyperimmunized with DENV 4 antigen to produce monoclonal antibodies (mAbs). Methodology: DENV 4 (GenBank KC806069) was inoculated in C6/36 cell monolayers cultivated in Leibovitz’s 15 medium supplemented with 5% fetal bovine serum and incubated at 28 C. The virus stock was submitted to concentration and ultracentrifugation and stored at -80 C until use (VC DENV 4). Balb/c mice were injected intraperitoneally with 50μg of DENV-4 and successive intraperitoneal injections of 25 μg of VC DENV 4 with Freund’s incomplete adjuvant were performed. The spleen cells were fused to SP2/0 myeloma cells with PEG 1540 and distributed in 96-well microplates with Iscove’s modified medium with Hipoxantina–Aminopterina–Timidina. Hybridoma screening by indirect ELISA showed positive results for six mAbs, and their characterization was performed by Western blotting and Indirect Immunofluorescence (IFI) techniques. Results: the six mAbs showed strong recognition of prM (24/29 kDa), and minor reaction to E protein (66 kDa), E/E protein dimer (105 kDa), and NS1 (49 kDa) protein in two mAbs. The use of mAbs anti-prM as a diagnostic tool using IFI has been demonstrated to detect DENV-4 antigen in infected cells or tissues. Conclusion: DENV 4 generate mAbs with strong reactivity to prM with potential use to confirm the presence of DENV 4 antigen in tissues or infected cells.

p.124-131, Artigo original Submitted by ROBERTO PAULO CORREIA DE ARAÚJO (ppgorgsistem@ufba.br) on 2016-09-14T14:41:51Z No. of bitstreams: 1 4_v.5_2.pdf: 62550 bytes, checksum: 5464aa4379b76ed886afcb388b4b9fe7 (MD5) Made available in DSpace on 2016-09-14T14:41:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 4_v.5_2.pdf: 62550 bytes, checksum: 5464aa4379b76ed886afcb388b4b9fe7 (MD5) Previous issue date: 2006-05 O vírus da Artrite encefalite caprina é o agente causal de uma doença progressiva e debilitante em caprinos, em que as células da linhagem monócito/macrófago são as principais hospedeiras do vírus in vivo. Essas células estão presentes no colostro, no leite ou no sangue. Estudos demonstram que a replicação viral é dependente do nível de maturação ou diferenciação da célula monocítica, influenciando na sensibilidade de detecção do vírus. Neste estudo, utilizamos o cocultivo de monócitos/macrófagos com células de membrana sinovial de cabras, para o isolamento do vírus circulante no campo; a técnica de double nested PCR (dn PCR) dos co-cultivos e sangue, viabilizou a confirmação do isolamento viral, e a detecção direta do vírus no sangue. Através dessa técnica, detectou-se a presença do DNA proviral em animais soronegativos por Imunodifusão em Gel de Agarose (IDGA); esses achados confirmam que o tempo entre o inicio da infecção e o aparecimento de anticorpos no sangue é variável, facilitando a permanência de animais falsos-negativos no rebanho. Nas amostras processadas, tivemos uma divergência de resultados entre amostras sorologicamente positivas, entretanto, negativas por dn PCR, quando se utilizou a amplificação direta do sangue. Quanto ao cultivo de monócitos/ macrófagos in vitro e posterior co-cultivo com células de MSC obteve-se êxito pelo isolamento do vírus em quatro animais, havendo sido um deles soronegativo. O presente estudo demonstra o primeiro isolamento do vírus nos rebanhos do estado da Bahia, além da implementação da técnica de dn PCR, em co-cultivo de células. Salvador

Submitted by ROBERTO PAULO CORREIA DE ARAÚJO (ppgorgsistem@ufba.br) on 2016-09-15T18:52:39Z No. of bitstreams: 1 1_v.8_2.pdf: 135252 bytes, checksum: 8062141cc5ee2c2922191dac165b36a9 (MD5) Made available in DSpace on 2016-09-15T18:52:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 1_v.8_2.pdf: 135252 bytes, checksum: 8062141cc5ee2c2922191dac165b36a9 (MD5) Previous issue date: 2009-05 O vírus da Artrite-encefalite caprina (CAEV) é um Lentivírus de pequenos ruminantes, que causa uma doença crônica e progressiva, caracterizada por encefalomielite, mastite, pneumonia e artrite. O diagnóstico é baseado na detecção de anticorpos contra o vírus através da Imunodifusão em Gel de Agarose (IDGA), técnica sorológica de referência para CAEV, porém de baixa sensibilidade. O objetivo deste trabalho foi produzir um antígeno a partir da cultura de células de membrana sinovial caprina (MSC) infectadas com a CAEV, para ser utilizado em um teste diagnóstico (ELISA indireto). O antígeno foi obtido de culturas de células de MSC infectadas e posterior tratamento com SDS 0,1%. Amostras de soros caprinos (n=343) foram utilizadas para detectar a presença de anticorpos para CAEV pelo teste ELISA indireto e a técnica IDGA. Nessas amostras, o teste ELISA detectou 72 ( 21%) amostras positivas. Entretanto, o teste IDGA detectou 30 (8%) amostras positivas. O ELISA indireto também detectou precocemente uma soroconversão em 5 animais de um total de 13 controlados periodicamente durante 2 anos. A sensibilidade e a especificidade do teste ELISA com relação a IDGA foi de 73,3% e 84% respectivamente. Esse ELISA com o antígeno viral assim produzido mostrou-se efetivo, de baixo custo e sensível para o diagnóstico sorológico de anticorpos para CAEV. Salvador

Acute infantile diarrhea is an important problem in public healthcare and Rotaviruses are responsible for about 20-40% of the cases of severe dehydrating diarrhea in children at 0-5 years old. In this work, we have analyzed diarrheic feces from children at 0-4 years old hospitalized between October 1998 and December 1999, in Salvador, Bahia, Brazil. In order to detect rotavirus, the samples were analyzed by ELISA (Test-Pack Abbot) and SDS-PAGE tests. The results demonstrated that from the 217 samples tested, 76 (35%) were positive, 127 (58,5 %) were negative and 14 (6,5%) diverged in both tests. The positive samples analyzed by SDS-PAGE test revealed the group A rotavirus and they were classified as short eletropherotypes (Subgroup I) and long eletropherotypes (Subgroup II).