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Submitted by NATÁLIA CAROLINA VIEIRA null (vieira_naty@hotmail.com) on 2020-06-24T20:01:58Z No. of bitstreams: 1 Tese - Natalia Vieira.pdf: 11134334 bytes, checksum: 13dc9b40b97c051409ccd8df2482cb9f (MD5) Approved for entry into archive by Ana Carolina Gonçalves Bet null (abet@iq.unesp.br) on 2020-06-26T18:03:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 vieira_nc_dr_araiq_par.pdf: 1515215 bytes, checksum: 9e075a592987c14fafb9e46db167e06b (MD5) Made available in DSpace on 2020-06-26T18:03:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 vieira_nc_dr_araiq_par.pdf: 1515215 bytes, checksum: 9e075a592987c14fafb9e46db167e06b (MD5) Previous issue date: 2020-05-29 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) A utilização de produtos naturais pela humanidade, como agentes terapêuticos, é descrita desde primórdios da antiguidade e representam um importante aliado no tratamento de doenças. Com isso a busca por novas ferramentas analíticas mais robustas, com abordagem metabolômica se faz necessária, de forma a otimizar e acelerar a busca por novas moléculas e substâncias com atividade biológica promissora. Nesse contexto, esse trabalho tem como alvo de estudo, os fungos Fusarium solani e Purpureocillium lilacinum isolados da rizosfera de Senna spectabilis. Essas espécies de microrganismos apresentam muitos estudos químicos relatados na literatura, o que influenciou o interesse em realizar os estudos de OSMAC (One Strain Many Compounds). Para, assim, verificar a variação metabólica que acontece com esses fungos em diferentes tipos de cultivo (variando meio de cultura e agitação) incluindo o co-cultivo. Para os extratos obtidos também foram realizados os ensaios biológicos citotóxico e antibacteriano. Foram utilizadas ferramentas analíticas do estado da arte como GC-MS (Cromatografia Gasosa acoplada a Espectrometria de Massas) e LC-MS (Cromatografia Líquida acoplada a Espectrometria de Massas) fazendo uso das ferramentas de bioinformática Molecular Networking (ou Rede Molecular) com a plataforma GNPS (Global Natural Product Social Molecular Networking) e o UNIFI (Sistema de informação científica – Waters Corporation). A espectrometria de massas (MS) foi uma grande aliada que ajudou a demonstrar a variação do perfil de metabólitos desses microrganismos em diferentes cultivos, no qual foi possível anotar 101 metabólitos nos diferentes extratos avaliados. As substâncias presentes nos extratos que não puderam ser anotadas, foram purificadas levando à caracterização 5 substâncias inéditas, sendo elas γ-pironas, α-pironas e um dipeptídeo. Uma das substâncias isoladas, 6-(11-(hidroxmietil)-9-metiloct-7-en-7-il)-2-metóxi-4H-piran-4-ona, foi evidenciada nos extratos de co-cultivo e de F. solani. Essa substância apresentou maior concentração nos extratos de co-cultivo de acordo com os resultados de quantificação, mostrando um outro tipo de evidência da OSMAC, que aumenta a produção de substâncias ao variar o tipo de cultivo. Portanto, a utilização de abordagens metabolômicas conseguiu guiar o estudo para caracterização de metabólitos inéditos, mostrando uma alternativa para abordagens reducionistas. The use of natural products by mankind, as therapeutic agents, has been described since ancient times and represents an important ally in the treatment of diseases. Thus, the search for new more robust analytical tools, with a metabolomic approach is necessary, in order to optimize and accelerate the search for new molecules and substances with promising biological activity. In this context, this study is aimed at studying Fusarium solani and Purpureocillium lilacinum fungi isolated from the rhizosphere of Senna spectabilis. These species of microorganisms have many chemical studies reported in the literature, which influenced the interest in carrying out the studies of OSMAC (One Strain Many Compounds). Thus, to verify the metabolic variation that happens with these fungi in different types of cultivation (varying culture medium and agitation) including co-culture. For the extracts obtained, cytotoxic and antibacterial biological tests were also performed. State-of-the-art analytical tools such as GCMS (Gas Chromatography coupled to Mass Spectrometry) and LC-MS (Liquid Chromatography coupled to Mass Spectrometry) were used alongside the bioinformatics tools Molecular Networking with the platform GNPS (Global Natural Product Social Molecular Networking) and UNIFI (Scientific Information System - Waters Corporation). Mass spectrometry (MS) was a great ally that helped to demonstrate the variation of the metabolites profile of these microorganisms in different cultures, in which it was possible to note 101 metabolites in the different extracts evaluated. The substances present in the extracts that could not be annotated, were purified, leading to the characterization of 5 new substances, namely γpyrones, α-pyrones and a dipeptide. One of the isolated substances, 6-(11-(hydroxymethyl)-9- methyloct-7-en-7-yl)-2-methoxy-4H-pyran-4-one, was evidenced in the co-culture and F. solani extracts. This substance showed a higher concentration in co-culture extracts according to the quantification results, showing another type of evidence from OSMAC, which increases the production of substances by varying the type of cultivation. Therefore, the use of metabolomic approaches managed to guide the study to characterize unpublished metabolites, showing an alternative to reductionist approaches. 001

Submitted by NATÁLIA CAROLINA VIEIRA null (vieira_naty@hotmail.com) on 2016-03-21T18:33:32Z No. of bitstreams: 1 Dissertação de Mestrado - Natália Carolina Vieira.pdf: 4489683 bytes, checksum: bb278e0db97defa0e9b2982e4b2a0703 (MD5) Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-03-22T18:08:55Z (GMT) No. of bitstreams: 1 vieira_nc_me_araiq.pdf: 4489683 bytes, checksum: bb278e0db97defa0e9b2982e4b2a0703 (MD5) Made available in DSpace on 2016-03-22T18:08:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 vieira_nc_me_araiq.pdf: 4489683 bytes, checksum: bb278e0db97defa0e9b2982e4b2a0703 (MD5) Previous issue date: 2016-03-01 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) A cada ano vem crescendo a busca por novas fontes de produtos naturais, na qual os micro-organismos recebem uma grande atenção, sendo eles de extrema importância na descoberta de compostos bioativos e promissores a novos fármacos. Esse trabalho teve como foco o estudo de fungos filamentosos da rizosfera de Senna spectabilis. Foram testadas suas viabilidades e após esse processo, dez fungos foram escolhidos para esse trabalho e submetidos aos testes biológicos como citotóxico, anticolinesterásico e antifúngico e também foram obtidos seus perfis cromatográficos e químicos por CLAE-DAD e RMN, além da identificação filogenética. Após esses resultados iniciais, dois fungos foram escolhidos para desenvolver o método de desreplicação, sendo eles Fusarium solani e F. oxysporum. Esses fungos apresentaram atividade antifúngica contra C. cladosporioides e C. sphaerospermun e também apresentaram atividade anticolinesterásica, além disso, F. oxysporum apresentou também atividade antitumoral contra câncer do colorretal. Através das técnicas CG-EM, CLAE-EM, CLAE-EM/EM e RMN foram propostas estruturas moleculares interessantes para substâncias produzidas por esses micro-organismos, sendo que para o extrato de Fusarium solani foram identificados 12 metabólitos: ácido fumárico, ácido málico, tirosol, ácido p-hidroxibenzóico, ácido azelaico, ácido fusárico, (-)-ácido jasmônico/ácido (+)-7-iso-jasmônico, 10-hidroxicaptotecina, C-16-esfinganina, xestoaminol C, armilarina/armilaripina e beauvericina e para o extrato do fungo Fusarium oxysporum foram observados 14 metabólitos: ácido succínico, ácido phidroxibenzóico, ácido hexadecanóico, ácido octadecanóico, ácido fusárico e três de seus derivados, integracídeo C, fusagerina C/D, C-16-esfinganina, xextoaminol C, armilarina/armilaripina e beauvericina. Além desses compostos, outros 5 metabólitos comuns às espécies solani e oxysporum foram observados, mas não puderam ser estruturalmente caracterizados por CLAE-EM/EM, no entanto, suas massas moleculares já foram relatadas para espécies de Fusarium. The search for new sources of natural products has been increasing to the rational exploration of microorganisms as great sources for the discovery of bioactives and promising compounds as well as new drugs. This work focused on the study of filamentous fungi, isolated from Senna spectabilis’s rhizosphere from which were tested its viabilities. Thereon, ten fungi were chosen for this work and were submitted to biological tests, such as cytotoxic, anticholinesterase and antifungal. In addition, their chemical profiles were obtained for HPLC and NMR, besides phylogenetic identification. Finally, two fungi were chosen to develop dereplication method, being them Fusarium solani and F. oxysporum.These fungi howed anticholinesterase activity and antifungal activity against C. cladosporioides and C. sphaerospermun. Additionally, F. oxysporum showed antitumor activity against colorectal cancer. Through the GC-MS, HPLC-MS, HPLC-MS/MS and NMR, we were able to obtained interesting molecular chemotypes for these microorganisms; for F. solani we identified 12 metabolites, fumaric acid, malic acid, tyrosol, p-hydroxybenzoic acid, azelaic acid, fusaric acid, (+)-7-iso-jasmonic acid/(-)-jasmonic acid, 10- hydroxycamptotecin, C16-sphinganine, xestoaminol C, armillarin/armillaripin and beauvericin and for F. oxysporum was observed 14 metabolites, succinic acid, phydroxybenzoic acid, hexadecanoic acid, octadecanoic acid, fusaric acid and its three derivatives, integracide C, fusagerin C/D, C-16-sphinganine, xestoaminol C, armillarin/armillaripin and beauvericin. Besides these compounds, others 5 metabolites common to both species (solani and oxysporum) couldn’t be structurally characterized thorough LC-MS/MS, but they were accounted in several Fusarium species.

Submitted by ROBERTH NASCIMENTO DA TRINDADE null (octuberman@gmail.com) on 2016-02-02T12:22:18Z No. of bitstreams: 1 ROBERTH TRINDADE - Exploração racional da rizosfera de Senna spectabilis - interações entre as bactérias Pseudoxanthomonas indica e Shigella sp..pdf: 2399531 bytes, checksum: 1d992c19e1d2db2f229774b0f45cc074 (MD5) Approved for entry into archive by Sandra Manzano de Almeida (smanzano@marilia.unesp.br) on 2016-02-03T17:44:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 trindade_rn_me_araiq_par.pdf: 740045 bytes, checksum: 46f1e680a7415dd924948bb180d6dfc7 (MD5) Made available in DSpace on 2016-02-03T17:44:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 trindade_rn_me_araiq_par.pdf: 740045 bytes, checksum: 46f1e680a7415dd924948bb180d6dfc7 (MD5) Previous issue date: 2016-01-22 O descobrimento de novas moléculas bioativas tem sido o grande alvo ao decorrer dos anos da química dos produtos naturais, particularmente, micro-organismos tem se evidenciado como uma importante fonte do descobrimento de novos fármacos. Uma ampla gama de compostos provenientes de organismos microbianos são relatados na literatura, porém, recentes pesquisas demonstram que tais micro-organismos podem sofrer indução por determinados agentes externos, químicos ou físicos, através de mecanismos de defesa ou até mesmo o mutualismo existente em determinado meio, produzindo novas estruturas químicas, que até então, tinham sua rota biosintética silenciada devido a metodologias padrões de cultivo isolado. Através de utilização de culturas mistas de bactérias, o presente trabalho proporciona o conhecimento da relação existente entre Pseudoxanthomonas indica e Shigella sp., ambas provenientes da rizosfera de Senna spectabilis. Para isso, as bactérias foram cultivadas em meio de cultivo líquido czapek broth, sendo realizado o estudo do crescimento das bactérias e produção de metabolitos frente ao tempo, tendo em vista uma maximização de resultados e maior indução de compostos químicos. A utilização de ferramentas analíticas de análise rápida e eficiente como a cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) associada à espectrometria de massas de alta resolução (HRMS) propiciaram a obtenção do perfil cromatográfico dos micro-organismos estudados em cultura mista e simples, sendo possível observar a existência de compostos químicos produzidos apenas em co-cultura, evidenciado o potencial existente da abordagem utilizada. The discovery of new bioactive molecules has been the big target to over the years the chemistry of natural products, particularly micro-organisms has been shown to be an important source of discovery of new drugs. A wide range of compounds from microbial organisms are reported in the literature, however, recent research shows that these micro-organisms can undergo induction by certain external, chemical or physical agents, through defense mechanisms or even the existing mutualism on a particular medium, producing new chemical structures, which until then had silenced their biosynthetic route due to methodologies patterns of isolated farming. Through use of mixed cultures of bacteria, this study provides knowledge of the relationship between Pseudoxanthomonas indica and Shigella sp., Both from the rhizosphere of Senna spectabilis. For this, bacteria were grown in liquid Czapek broth cultivation being conducted the study of the growth of bacteria and production of metabolites against time, with a view to maximizing results and greater induction of chemical compounds. The use of analytics quickly and efficiently analyzes such as high-performance liquid chromatography tools (HPLC) associated with high resolution mass spectrometry (HRMS) enabled the obtaining of the chromatographic profile of microorganisms studied in mixed and single culture, and you can to observe the existence of chemical compounds produced only in co-culture demonstrated the potential of the approach used.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-04-23Bitstream added on 2014-06-13T18:46:23Z : No. of bitstreams: 1 pivatto_m_dr_araiq.pdf: 3895401 bytes, checksum: 8f00934510e296fa101a80060a9db12a (MD5) Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) O presente trabalho teve como objetivo o estudo das vias biossintéticas dos alcalóides piperidínicos presentes em Senna spectabilis, motivado pela potente atividade anticolinesterásica e baixa toxicidade observada no derivado (–)-3-O-acetil-espectalina (15), eleito como composto líder para o desenvolvimento de fármacos anti-Alzheimer que estão em fase de estudos pré-clínicos. Por outro lado, o interesse acadêmico no conhecimento das vias metabólicas, pode levar a estudos futuros de engenharia genética para potencializar a produção desses metabólitos uma vez que a síntese é extremamente complexa em função da presença de três centros estereogênicos. Tendo isso em vista, foram selecionadas seis espécies de Senna e Cassia para avaliar a presença dos alcalóides e selecionar aquela que os produz em maior quantidade. Foram estudadas as flores de S. spectabilis, S. multijuga, S. macranthera, S. velutina, C. fistula, C. leptophylla, sendo que só foram detectados alcalóides piperidínicos e piridínicos em S. spectabilis e S. multijuga, respectivamente, utilizando a espectrometria de massas tandem. Embora sejam de classes diferentes, esses metabólitos têm padrão de substituição similar, porém, apresentaram atividade anticolinesterásica diferenciada. De S. spectabilis foram isolados os alcalóides piperidínicos: (–)-cassina (1), (–)-espectalina (9), (–)-3-O-acetil-espectalina (15), (–)-3-O-acetil-cassina (16) e identificados 7-hidroxi-carnavalina (71), 7-hidroxi-cassina (18) e/ou espicigerina (42) utilizando a EM. De S. multijuga foram isolados os alcalóides piridínicos: 7'-multijuguinona (67) e 12'-hidroxi-7'-multijuguinona (69) e identificados 7'-multijuguinol (68) e 12'-hidroxi-7'- multijuguinol (70). Para os estudos biossintéticos dos alcalóides piperidínicos foi inicialmente proposta a biogênese onde lisina e acetato foram eleitos potenciais... The following work encompass as main goal the study of biosynthetic pathways to produce piperidine alkaloids using Senna spectabilis as natural matrix. Such research was instigated due to the high acetylcholinesterase activity and low toxicity showed by the derivative (–)-3-O-acetyl-spectaline (15), selected as a lead compound against Alzheimer’s disease and currently under pre-clinical trials. Still yet, the academic interest on researching metabolic pathways that may lead to further genetic engineering studies to enhance the production of these metabolites is of extremely importance, due to the inability of producing any commercially viable synthetic strategy for their stereogenic centers. We selected six Senna and Cassia species to evaluate the presence of these metabolites aiming to select which matrix will produce them the most. We studied flowers from S. spectabilis, S. multijuga, S. macranthera, S. velutina, C. fistula and C. leptophylla. From those, we were able to detect piperidine and pyridine alkaloids only in S. spectabilis and S. multijuga, respectively, using tandem mass spectrometry. Regardless of the different structural nature towards 15, those metabolites have similar substitution patterns and showed differential acetylcholinesterase activity. From S. spectabilis were isolated the piperidine alkaloids: (–)-cassine (1), (–)-spectaline (9), (–)-3-O-acetyl-spectaline (15), (–)-3-O-acetyl-cassine (16), and identified 7-hidroxy- carnavaline (71), 7-hidroxy-cassine (18) and/or spicigerine (42) by tandem mass spectrometry and from S. multijuga were isolated the pyridine alkaloids: 7'-multijuguinone (67), 12'-hydroxy-7'-multijuguinone (69) and, identified by MS: 7'-multijuguinol (68) and 12'-hydroxy-7'-multijuguinol (70). We initially proposed the incorporation of lysine and acetate as main precursors of the piperidine alkaloids biosynthetic pathway and thus... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005-12-01Bitstream added on 2014-06-13T19:58:51Z : No. of bitstreams: 1 pivatto_m_me_araiq.pdf: 4500291 bytes, checksum: 41c36cab9b65c53f1fe92528b346a70e (MD5) Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) O presente trabalho objetivou o estudo fitoquímico dos frutos de Senna spectabilis e o estudo comparativo do perfil alcaloídico entre S. spectabilis e Cassia leptophylla, outra espécie vegetal relatada como fonte de alcalóides piperidínicos. O estudo fitoquímico dos frutos de S. spectabilis forneceu 4 alcalóides piperidínicos: cassina (1), 3-O-acetil-cassina (20), 3-O-feruloil-cassina (18) e um estereoisômero da cassina (19), cujas configurações, ralativa e absoluta, ainda não foram determinadas. Dentre estes, somente a cassina (1) já era conhecida e foi isolada, em nosso grupo de pesquisa, como o alcalóide majoritário das flores da mesma espécie. Estes alcalóides foram avaliados quanto às atividades seqüestradora de radicais livres (DPPH) e inibidora da enzima acetilcolinesterase. As substâncias 1, 2 e 4 apresentaram forte atividade anticolinesterásica, com concentração inibitória mínima semelhante à galantamina, utilizada como padrão positivo. Quanto à atividade seqüestradora de radicais livres, o único que apresentou leve estabilização do radical foi o derivado feruloil piperidínico (18), quando comparado com a rutina, utilizada como padrão positivo. Entretanto, a maior concentração do alcalóide não atingiu a concentração inibitória de 50% (IC50), observada para a rutina. O estudo do perfil químico entre as espécies S. spectabilis e C. leptophylla foi inicialmente baseado em experimentos comparativos de cromatografia em camada delgada e ressonância magnética nuclear de hidrogênio. Os resultados obtidos demonstraram que somente os extratos das flores e frutos de S. spectabilis apresentavam substâncias alcaloídicas como metabólitos detectáveis. Por outro lado, a análise por espectrometria de massas permitiu evidenciar metabólitos alcaloídicos piperidínicos em ambas as espécies estudadas, levando-nos a concluir sobre a importância desta técnica na bioprospecção de metabólitos minoritários. The present work aimed the phytochemical study of the fruits of Senna spectabilis and a comparative analysis of the alkaloid profile between S. spectabilis and Cassia leptophylla, another species reported as a source of piperidine alkaloids. The phytochemical study of the fruits of S. spectabilis furnished 4 piperidine alkaloids: cassine (1), 3-O-acetyl-cassine (20), 3-O-feruloyl-cassine (18) and a stereoisomer of cassine (19), whose absolute and relative configurations were not stablished yet. Among these, only cassine (1) was already known and it had been previously isolated as the major alkaloid of the flowers in the same species. These alkaloids were evaluated for their potential as free radical scavengers towards DPPH and acetylcholinesterase inhibitors. Substances 1, 2 and 4 showed strong activity in inhibition of acetylcholinesterase, with a minimum inhibitory concentration similar to galantamina, used as a reference compound. In the free radical scavenger assay, compound 18 was the only active, showing a slightly radical stabilization, when compared with the rutina, used as a reference compound. However, the largest concentration of the alkaloid didn't reach the inhibitory concentration for 50% (IC50), obtained by rutina. The chemical profile study between S. spectabilis and C. leptophylla species was initially based on comparative experiments using thin layer chromatography, and proton nuclear magnetic resonance. The results indicated that alkaloidal metabolites were present only in the S.spectabilis extracts. On the other hand, analysis by tandem mass spectrometry revealed the presence of piperidine alkaloids in both species, leading us to conclude the relevance of this technique in bioprospecting of minority metabolites.