The Heptapteridae family is endemic to the Neotropics, but their phylogenetic relationships are still not well established, and cytogenetic studies are still scarce. In this work, cytogenetic studies were made on specimens of Pimelodella sp and Pimelodella taenioptera from Cuiabá river basin, MT and Imparfinis schubarti from Ivaí river basin, PR. The diploid number of Pimelodella sp individuals was 46 chromosomes, with a karyotype composed of 26m+10sm+10st and NF=92. This specie presented a secondary constriction in the 14th pair (submetacentric) coinciding with the nucleolar organization region. A heteromorphism in NOR size between homologous chromosomes was also observed. FISH using 18S rDNA probes showed marks equivalent to those obtained by silver nitrate. The constitutive heterochromatin pattern of this specie showed weak telomeric and centromeric markings. However, this specie presented a well-defined interstitial heterochromatin block on the short arms of the 14th pair (submetacentric). The cytogenetic analysis of Pimelodella taenioptera showed a diploid number of 2n = 52 chromosomes with a karyotype composed of 26m+22sm+4st and NF=104. Pimelodella taenioptera had a simple NOR system in the terminal position of the short arm of a submetacentric pair number 14, as evidenced by FISH using 18S rDNA probes. This species presents a heterochromatin pattern with telomeric, pericentromeric and interstitial labeling; however the interstitial labeling were more frequently. All Imparfinis schubarti specimens analyzed had a 2n=58 chromosome number and a karyotype of 28m+28sm+2st, with a fundamental number of 116. A conspicuous secondary constriction was seen in the long arm of the first metacentric chromosome pair. The Ag-NORs were observed in the same region. C-banding of I. schubarti was less evident, showing a well-defined pericentromeric mark in the first metacentric pair, that is the NOR-bearing. In situ hybridization with 18S rDNA probe confirmed the NOR location in the secondary constriction of the first metacentric chromosome. There are few cytogenetic studies in species of the Heptapteridae family, especially when it xii comes to the Midwest region of Brazil. This work brings a contribution to the cytogenetic knowledge of species of the Heptapteridae family in the Midwest region of Brazil. A família Heptapteridae é endêmica da região neotropical, porém suas relações filogenéticas não estão bem estabelecidas e os estudos citogenéticos são ainda escassos. Neste trabalho, foram realizados estudos cariotípicos em exemplares de Pimelodella sp. e Pimelodella taenioptera da sub-bacia do rio Cuiabá, no Mato Grosso, e Imparfinis schubarti da sub-bacia do rio Ivaí, no Paraná. O número diplóide de Pimelodella sp. foi de 46 cromossomos, com um cariótipo composto por 26m+10sm+10st e NF = 92. Esta espécie apresentou uma constrição secundária no braço curto do par 14 (submetacêntrico), coincidindo com a região organizadora de nucléolo. Um heteromorfismo no tamanho da NOR entre os cromossomos homólogos também foi observado. A técnica de FISH, utilizando sondas de DNAr 18S, mostrou marcações equivalentes às obtidas por meio de nitrato de prata. O padrão de heterocromatina constitutiva desta espécie consistiu de marcações teloméricas e centroméricas discretas. Foi observado um bloco intersticial heterocromático bem definido no braço longo do par 14 (submetacêntrico). A análise citogenética de Pimelodella taenioptera mostrou um número diplóide de 2n=52 cromossomos, com um cariótipo composto por 26m+22sm+4st e NF=104. Pimelodella taenioptera possui um sistema de NORs simples, localizado no braço curto, em posição terminal do par submetacêntrico 14, conforme evidenciado pelo FISH, utilizando sondas de DNAr 18S. Esta espécie apresentou um padrão de heterocromatina com marcações teloméricas, pericentroméricas e intersticiais, no entanto, as marcações intersticiais foram mais freqüentes. Todos os espécimes analisados de Imparfinis schubarti possuem número cromossômico de 2n=58 e um cariótipo composto por 28m+28sm+2st, com número fundamental 116. Foi observada uma constrição secundária intersticial no braço longo do primeiro par de cromossomos metacêntricos e foram observadas Ag-NORs na mesma região. O padrão de banda C de I. schubarti é menos evidente, mostrando uma marcação x pericentromérica bem definida no primeiro par metacêntrico, coincidente com a NOR. A hibridização in situ com sonda de DNAr 18S confirmou a localização da NOR na constrição secundária do primeiro par metacêntrico. Existem poucos estudos citogenéticos em espécies da família Heptapteridae, principalmente sobre a região Centro-Oeste do Brasil, fato que justifica a importância deste trabalho como contribuição ao conhecimento citogenético de espécies da família Heptapteridae da citada região. xii, 33 f