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Cooling and freezing processes cause physical and chemical damage to sperm by cold shock and oxidative stress. This study aimed to evaluate the effect of two antioxidants on sperm parameters of cooled and frozen-thawed ram semen diluted in an egg yolk-based extender. Semen was collected from 30 rams and processed in two consecutive experiments to test the inclusion of different concentrations of quercetin and butylated hydroxytoluene (BHT) in an egg yolk-based semen extender. Dimethyl sulfoxide (DMSO) was added as a solvent to the semen extender in a ratio of 1 mL DMSO for 90 mg of quercetin and 1 mL DMSO for 880 mg of BHT. After collection, semen was diluted at 200 × 106 motile sperm/mL (control) and split into different groups in each experiment. In experiment 1, semen was diluted with the extender containing quercetin (Q5, 5 µg/mL; Q10, 10 ug/mL; Q15, 15 ug/mL) or DMSO alone (DMSO1, 0.055 uL DMSO per mL; DMSO2, 0.165 uL DMSO per mL). In experiment 2, semen was diluted with the extender with BHT (BHT1, 0.5 ug/mL; BHT2, 1 ug/mL; BHT3, 1.5 ug/mL) or DMSO alone (DMSO3, 0.375 uL DMSO per mL; DMSO4, 1.125 uL DMSO per mL). After dilution, the semen was divided into two aliquots. Treated ram sperm samples were also subjected to different storage methods. The first set of samples was cooled at 5 °C for 24 h, whereas the second set of samples was frozen-thawed. Sperm motility parameters and plasma membrane integrity (PMI) were evaluated immediately after dilution (0h) and 24 h after cooling and in the frozen-thawed samples via computer-assisted sperm analysis and epifluorescence microscopy, respectively. The inclusion of quercetin or BHT did not affect sperm motility parameters or PMI of fresh, cooled, or frozen-thawed sperm in this study (P < 0.05). However, further studies are needed to test the effects of these antioxidants on the fertility of cryopreserved ram semen.

O uso de sêmen resfriado em operações de inseminação artificial resulta em taxas de prenhez mais altas do que o uso de sêmen congelado. Esse resultado parece estar relacionado aos danos mais severos desencadeados pelo processo de congelação, quando comparado com o de refrigeração. Devido à sua capacidade de se ligar às proteínas ligadoras de espermatozoides e íons cálcio, o caseinato de sódio foi estudado quanto a sua capacidade de prevenir a capacitação espermática precoce, uma causa significativa de diminuição da taxa de prenhez com o uso de sêmen congelado. O primeiro objetivo deste estudo foi avaliar se um diluidor comercial a base de gema de ovo, destinado à congelação de sêmen bovino, poderia ser usado para a criopreservação de sêmen bubalino; o segundo objetivo foi investigar o efeito da adição do caseinato de sódio ao diluidor estudado durante os procedimentos de criopreservação de espermatozoides bubalinos. Foram empregadas a citometria de fluxo e a análise computadorizada do movimento espermático como métodos de avaliação seminal. Na primeira fase do estudo, comparando-se os resultados da cinética espermática e da integridade das membranas plasmática e acrossomal, observou-se que o processo de congelação promoveu mais danos celulares que o processo de resfriamento. Na segunda fase do estudo, não foram observados efeitos benéficos da adição de caseinato de sódio ao diluente empregado. A partir dos resultados do presente estudo, foi possível concluir que o diluente à base de gema de ovo foi adequado para a criopreservação do sêmen de bubalino e que a adição do caseinato de sódio não diminuiu os efeitos deletérios desencadeados pelo processo de criopreservação seminal.

Sperm cryopreservation success depends upon the maintenance of spermatozoa fertility potential. Sperm cells must preserve both integrity and functionality of several cell structures. The stabilization phase must allow the exit of water from the sperm cells via osmosis. This study aimed to compare the effect of refrigeration in the commercial refrigerator (CR) and the transport/refrigeration box (TRB) upon the viability of frozen bull sperm diluted in three different extenders (A, B and C). Ten Nellore bulls, Bos taurus indicus maintained in Artificial Insemination Center were used and the spermatozoa samples was assessed for Plasma Membrane Integrity and CASA evaluation. The stabilization phase (5°C/4 hours) was performed in the CR as well as in the TRB, and then samples were exposed to nitrogen vapor during 20 minutes and then plunged into nitrogen. The statistical analysis was done using the variance analysis and the significance level was set at 5%. In the CR the post-thawing parameters for PM and ALH were higher (p < 0.05) in the extender A (glicine egg-yolk) and extender B (glicine egg-free) when compared with extender C (TRIS egg-yolk). As for BCF, STR and LIN, the parameters were higher (p < 0.05) in extender B than in C. Samples that were stabilized in the TRB presented higher post-thawing parameters (p < 0.05) for PM and LIN in extender A and extender B when compared with C. BCF and STR parameters were higher (p < 0.05) in extemder B when compared with C. Extender B samples had higher (p < 0.05) PMI when stabilized in CR. The findings in this experiment enable us to say that both CR and TRB were effective in keeping the viability of post-thawing bull semen.O sucesso da criopreservação do sêmen depende da manutenção do potencial de fertilidade dos espermatozoides. Nos espermatozoides deve haver a preservação da integridade e funcionalidade de várias das suas estruturas. A fase de estabilização permite a saída de água dos espermatozoides por osmose. Este estudo tem o objetivo de comparar o efeito da refrigeração em refrigerador comercial (RC) e em caixa de transporte refrigerada (CTR) na viabilidade do sêmen congelado bovino diluído em três diferentes meios (A, B e C). Dez touros Nelore, Bos taurus indicus mantidos em central de inseminação artificial foram utilizados e as amostras de sêmen analisadas para checar a integridade das membranas plasmáticas e por meio da análise computadorizada (CASA). A fase de estabilização (5°C/4 horas) foi realizada em RC e em CTR, sendo as amostras expostas ao vapor de nitrogênio durante 20 minutos e após mergulhadas no nitrogênio. A estatística foi feita com a análise de variância com nível de significância a 5%. No RC os parâmetros pós-descongelação para PM e ALH foram superiores (p < 0,05) no meio B em relação ao C. Amostras que foram estabilizadas na CTR apresentaram parâmetros superiores (p < 0,05) para PM e LIN nos meios A e B, em relação ao C. Os parâmetros BCF e STR foram superiores (p < 0,05) no meio B em relação ao C. As amostras do meio B tiveram maior (p < 0,05) PMI quando estabilizadas no RC. No presente estudo, conclui-se que o RC e a CTR foram efetivos na manutenção da viabilidade pós-descongelação do sêmen bovino.