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Orientador: Maro R. Sondahl Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: O ciclo reprodutivo de plantas de Cffea arabbica pertencentes aos cultivares Catuai Vermelho e Bourbon Amarelo, foi estudado no Centro Experimental de Campinas do Instituto Agronômico, São Paulo (latitude 22'GRAUS¿ 53¿S), nos anos de 1980, 1981 e 1982. Realizaram-se medidas de crescimento e caracterização morfológica de gemas axilares, situadas em ramos plagiotrópicos de '1 POT. a¿ produção, em intervalos quinzenais. Ramos foram coletados para as observações de laboratório com o auxílio de uma lupa estereoscópica. Parte deste material coletado foi fixado em FAA 50% para posterior preparo de cortes histológicos. As avaliações de crescimento foram feitas no campo, de abril até a época da florada principal (setembro-outubro). Durante as floradas, realizaram-se observações sobro o número das gemas florais, flores abertas, chumbinhos e anormalidades florais (¿perdas¿). Avaliou-se a maturação dos frutos das quatro floradas de 1980 (cv. Catuai Vermelho), das floradas principais de 1981 (Catuai Vermelho, Bourbon Amarelo, Arábica e Munco Novo) e de 1982 (plantas do cultivar Catuai Vermelho de 9 anos e 5 anos de idade). Estudou-se o efeito da aplicação de fitorreguladores sobre a diferenciação e antese das gemas florais em 1981 e 1982. A análise histológica das gemas axilares indicou que as condições indutivas já estavam presentes no início de janeiro de 1981 e que quase todas as gemas já estavam induzidas na primeira semana de março em dois anos consecutivos deste estudo (1980 e 1981) ...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital Abstract: Not informed. Mestrado Biologia Vegetal Mestre em Ciências Biológicas

Orientador : Anete Pereira de Souza Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Mestrado Genética Vegetal e Melhoramento Mestre em Genética e Biologia Molecular

Orientador: Aldo Focesi Jr Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A caracterização das hemoglobinas do anuro Bufo paracnemis mostrou a existencia de dois componentes que por cromatografia em CM-celulose são eluidos em ph 6,8 e /,/ usando-se, para a eluição, tampão fosfato 0,01M. Esses componentes, corresponden a 30 e 70% do hemolisado total, respectivamente. O efeito Bohr encontrado para o hemolisado total dessas hemoglobinas foi de -0,08 para a isenta de íons e 0,07 quando na presença de ATP 10-3M ¿Observação: O resumo, na íntegra poderá ser visualizado no texto completo da tese digital Abstract: Bufo paracnemis haemoglobins analysed by CM-cellulose chromatography presented two components which were eluted in ph 6.0 and 7.7 in the proportion of 30% and 70% of the total hemolisate respectively...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations Mestrado Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Marcelo Brocchi Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: O resumo poderá ser visualizado no texto completo da tese digital quando for liberada Abstract: The abstract is available with the full electronic document when available Mestrado Genética de Microorganismos Mestra em Genética e Biologia Molecular

Orientador: Sonia Machado de Campos Dietrich Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A espécie Xanthosoma sagittifolium (L.) Schott, planta de origem americana conhecida popularmente no Brasil por taioba, é tida como uma arácea comestível, utilizada em vários países, principalmente na alimentação humana e animal tanto pelas suas folhas como pelos seus orgãos subterrâneos. No entanto, isto não implica que a espécie seja conhecida satisfatoriamente quanto à sua composição. Em função disto, o trabalho teve com objetivo conhecer os compostos de reserva nas diferentes regiões do sistema subterrâneo da taioba, a variação destes compostos durante o desenvolvimento da planta e suas influências na brotação das estacas, representadas por segmentos retirados de três regiões do sistema subterrâneo. Foram analisados os conteúdos de açúcar solúvel total, açucares redutores, proteínas solúveis e amido, sendo este ultimo componente caracterizado quanto à porcentagem de amilose e à forma e tamanho de seus grânulos. AS plantas de X. sagittifolium, obtidas através da estaquia, apresentam um crecimento rápido, caracterizado por estádios de desenvolvimento bem definidos. Logo após a brotação, há um crescimento acentuado da parte aérea e inicia a formação dos cormilhos, dado pelo inchamento dos pecíolos foliares. Com a entrada dos meses mais frios, a planta entra num processo de maturação, caracterizado pela paralização do crescimento da parte aérea e formação do sistema subterrâneo, através do aumento do tamanho dos cormilhos e aparecimento dos estolões, um pouco mais tardio. ...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital Abstract: Xanthosoma sagittifolium (L.) Schott (taioba), an americam species of Araceae family, is used in many countries as human and animal food, both leaves and underground organs are edible. Plant compositon of this species and its varieties, however, is not well known. For this reason, the present study intendede to determine the storage compounds in different portions of the taioba underground system, the variation of these compounds during plant development and its influence on sprouting of cuttings represented by pieces taken from three portions of the underground system. Total soluble sugrar, reducing sugars, soluble proteins and starch were analysed, being the last one characterized as to amilose pecentage and as to grain shape and size. X.sagittifolium plants obtained from cuttings present a rapid growth with well defined development satages. Just after sprouting, there is a marked growth of aerial part and cormels begin to be formed through a swelling of leaf petiole. With the coming of winter, plant enters in a maturation process characterized by paralyzation of aerial party growth and by formation of the underground system through an increase of cormels size and the appearing of stolons a few later. ...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations Doutorado Doutor em Ciências Biológicas

Orientador: Maria Cristina Cintra Gomes Marcondes Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Caquexia, presente na maioria dos hospedeiros com câncer, é um estado caracterizado pela perda involuntária de peso. Pacientes com caquexia apresentam expectativa de vida muito reduzida e menor qualidade de vida. Nos pacientes com câncer-caquexia há intensa mobilização de substratos dos tecidos da carcaça do organismo hospedeiro ocorrendo, preferencialmente, depleção de proteína muscular em função da redução da síntese e/ou aumento da degradação protéica no músculo. Este aumento da taxa de proteólise muscular tem como função prover aminoácidos para síntese de glutamina, bem como para a demanda de síntese das células neoplásicas. Trabalhos da literatura mostram que o desenvolvimento de câncer dá-se de forma mais agressiva e severa quanto mais jovem for o paciente. Pacientes acometidos pelo crescimento de neoplasia maligna concomitante à gravidez sofrem da mesma agressividade desta doença, com um agravante maior tratam se de dois pacientes: mãe e feto. Neste trabalho analisamos os efeitos de uma dieta rica em leucina sobre o metabolismo protéico em animais jovens prenhes portadores ou não do carcinossarcoma de Walker 256. Ratas Wistar foram distribuídas em grupos experimentais de acordo com a inoculação ou não do carcinossarcoma de Walker 256 e submetidas ou não a dieta rica em leucina. Após 20 dias de experimento foi realizado ensaios com o músculo esquelético (gastrocnêmio) a fim de elucidar o mecanismo de catabolismo tecidual que ocorre durante o processo de câncer-caquexia. Os grupos apresentaram aumento da taxa de proteólise muscular e redução da taxa de síntese protéica muscular. Porém, o grupo inoculado com tumor e tratado com dieta rica em leucina apresentou aumento da síntese protéica e menor espoliação de proteína muscular quando comparado com o grupo inoculado com tumor e não tratado com leucina na dieta. A suplementação de leucina na dieta, uma vez que este aminoácido é utilizado como fonte energética pelo músculo esquelético pode prevenir a depleção da carcaça, preservar a massa protéica corpórea e impedir o estado caquético do animal Doutorado Fisiologia Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientador : Hermogenes de Freitas Leitão Filho Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: O presente trabalho consiste no levantamento das espécies de gramíneas que ocorrem em diferentes ambientes naturais do município de Poços de Caldas - MG. Trata-se de parte de um projeto mais abrangente, em execução pelo Departamento de Morfologia e Sistemática Vegetais da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP), resultante de convênio firmado entre a Fundação de Desenvolvimento da UNICAMP e a Companhia Geral de Minas Gerais (ALCOMINAS). Tal projeto tem, entre seus objetivos, fornecer sugestões para a recomposição da paisagem do município de Poços de Caldas, pelo uso de espécies nativas da região, tendo em vista as modificações drásticas que são causadas pela mineração de bauxita. Após 17 viagens de coletas realizadas periodicamente durante 15 meses, obteve-se, corno resultado, as descrições ilustradas de 67 espécies de gramíneas que ocorrem nos diversos ambientes naturais do município e chaves analíticas que permitem separá-las. São fornecidos dados sobre a distribuição destas espécies e informações referentes à aspectos ecológicos e agronômicos, resultantes de observações feitas no campo, consultas à bibliografia e exame de cerca de 2100 exsicatas depositadas nos 10 herbários visitados. Anthaenantiopsis fiebrigii Mez é citado pela primeira vez para o Brasil. Os gêneros que apresentam maior número de espécies são: Paspalum L., Axonopus Beauv., e Panicum L., com respectivamente 9, 8 e 7 espécies... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital Abstract: The present work consists of a survey of grass species occurring in different natural environments in Poços de Caldas, Minas Gerais State, Brazil. It is part of a project, originating from the linkage between the Fundação de Desenvolvimento da UNICAMP and the Companhia Geral de Minas Gerais (ALCOMINAS) being carried out by the Departamento de Morfologia e Sistemática Vegetais da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Among other objectives, this project aims to make suggestions for landscape reconstitution in Poços de Caldas, using species native to the region, taking into account the drastic modifications that are being caused by bauxite mining. After 17 périodic trips (during 15 months) for sample collection, a total of 67 grass species have been encourtered, occurring indifferent natural environments of the municipio. Analytical keys for identification, and illustrated descriptions are given. Based on field observations, bibliographic search and study of about 2100 exsicatas from 10 herbaria, data on distribution, and information relative to ecological and agronomic aspectos, are given for each species. The genera with the highest numbers of species were Paspalum L., Axonopus Beauv., Anthaenantiopsis fiebrigii and Panicum L., with 9, 8 and 7 species respectively, is cited for the first time for Brazil... Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations Doutorado Biologia Vegetal Doutor em Ciências Biológicas

Orientadores: Sonia Nair Bao, Bergamann Morais Ribeiro Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A família Baculoviridae é constituída por vírus de fita-dupla de DNA que infectam artrópodes, larvas de lepidópteros em sua maioria. No início da década de 90, descobriu-se que baculovírus possuem genes (p35 e iap) capazes de inibir a apoptose em células hospedeiras, uma estratégia para garantir a replicação viral. O mutante vApAg, derivado de Anticarsia gemmatalis multiple nucleopolyhedrovirus (AgMNPV) e que possui um transposon interposto no gene iap3, induz apoptose em uma linhagem celular derivada de Anticarsia gemmatalis, havendo produção de progênie viral. Já o vírus vP35del, derivado de Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus (AcMNPV) e que possui o gene p35 deletado, também induz apoptose na mesma linhagem celular, porém sem sinais de produção de progênie. Neste trabalho, investigou-se a ocorrência de apoptose in vivo induzida por vApAg e pelo recombinante p35- derivado de AcMNPV ¿ vHSGFP/P35del em larvas de A. gemmatalis. Utilizou-se como modelo de estudo hemócitos infectados via injeção intrahemocélica de vírus extracelulares. Os hemócitos de A. gemmatalis foram caracterizados e o processo infeccioso de AgMNPV, vApAg, vHSGFP e vHSGFP/P35del nestas células foi estudado com base em técnicas morfológicas, tendo sido, ainda, observadas a mortalidade e alterações no desenvolvimento larval induzidas pelos vírus. Foram observados seis tipos de hemócitos: prohemócitos (pr), plasmatócitos (pl), granulócitos tipo 1 (gh1), granulócitos tipo 2 (gh2), oenocitóides (oe) e esferulócitos (sph), os quais apresentam semelhança geral com o conjunto de hemócitos de outros lepidópteros, inclusive com relação ao seu número total (CTH), às proporções dos diferentes tipos ao longo do desenvolvimento (CDH) e à atividade de fenoloxidase. A inativação do gene iap-3 de AgMNPV resulta em apoptose para um número considerável de hemócitos em até 72 horas pós-infecção, com a produção de vírus extracelulares e ocluídos. O tempo médio de morte para larvas infectadas com 100 e 1000 PFU de vApAg é cerca de 2,5 dias maior que para as mesmas doses de AgMNPV. A deleção do gene p35 de AcMNPV resulta em uma apoptose de hemócitos discreta, entre 24 e 72 horas pós-infecção, com alguma produção de vírus extracelulares, havendo redução na proporção de hemócitos infectados ao longo do tempo e redução na infectividade das larvas. Para vHSGFP, uma dose da ordem de 105 vezes maior que de AgMNPV foi necessária para causar uma mortalide próxima a 100%. Desta forma, A. gemmatalis consiste em um hospedeiro semi-permissivo a AcMNPV. Ao contrário de AgMNPV e vApAg, vHSGFP e vHSGFP/P35del, em geral, não causam liquefação dos insetos. Algumas larvas sobreviventes à infecção por vHSGFP e, principalmente, por vHSGFP/P35del, originam pupas anômalas inviáveis. Todos os tipos de hemócitos de A. gemmatalis são susceptíveis à infecção pelos quatro vírus. Pl e gh1 são mais susceptíveis enquanto gh2 raramente são infectados. Sph são especialmente tolerantes aos vírus derivados de AcMNPV, podendo constituir um dos fatores determinantes da baixa infectividade destes vírus em A. gemmatalis. Gh1 e pl fagocitam células, fragmentos celulares, corpos apoptóticos, vírus extracelulares e ocluídos. Hemócitos infectados parecem ser alvos de uma resposta citotóxica causadora de necrose. Os resultados deste trabalho reforçam a hipótese de que a apoptose constitui uma estratégia anti-viral importante em insetos, tendo em vista que os mesmos não possuem imunidade adquirida. A compreensão de aspectos da relação patógeno-hospedeiro, especialmente no que diz respeito aos mecanismos de imunidade de insetos contra vírus, pode contribuir para a otimização dos baculovírus como agentes de controle biológico de pragas e como vetores de expressão de genes heterólogos, bem como colaborar para a descoberta de novos antivirais e para o controle da transmissão de vírus por insetos Abstract: The Baculoviridae family is composed by double-strand DNA viruses that infect arthropods, generally lepidoptera larvae. In the beginning of the 90's, it was shown that baculoviruses possess genes (p35 e iap) that inhibit apoptosis in host cells - a strategy to guarantee viral replication. The mutant vApAg, derived from Anticarsia gemmatalis multiple nucleopolyhedrovirus (AgMNPV), which has the iap-3 gene interrupted by a transposon, induces apoptosis in a cell line derived from Anticarsia gemmatalis, with progeny production. The virus vP35del, derived from Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus (AcMNPV), which has a deletion in the gene p35, also induces apoptosis in the same cell line, however there is no progeny production. In this work, we have investigated apoptosis in vivo induced by vApAg and by a p35- recombinant derived from AcMNPV - vHSGFP/P35del in A. gemmatalis larvae. Hemocytes were the model chosen for study and the infection occurred by intrahaemocoelic injection of budded viruses. The hemocytes were characterized and the infective processes of AgMNPV, vApAg, vHSGFP and vHSGFP/P35del in these cells were studied based on morphological approaches. It was also observed larval mortality and the effects on larval development caused by these viruses. Six types of hemocytes were observed: prohemocytes (pr), plasmatocytes (pl), granular hemocytes type 1 (gh1), granular hemocytes type 2 (gh2), oenocytoids (oe) and spherulocytes (sph). They presented great similarity to the hemocytes pool from other lepidoptera, including the total number of these cells in circulation (THC), the proportions of each type during larval development (DHC) and phenoloxidase activity. xix The inactivation of the iap-3 gene in AgMNPV resulted in apoptosis induction for a great number of hemocytes until 72 hours post infection, with the production of budded and occluded viruses. The mean time to death was delayed in 2.5 days in average for insects inoculated with 100 and 1000 PFU of vApAg, when compared to the same doses of AgMNPV. The deletion of p35 in AcMNPV resulted in a milder apoptosis, between 24 and 72 hours post infection, with some production of budded viruses. It caused a reduction in the proportion of infected hemocytes along the time of infection and reduced larval infectivity. For vHSGFP, a viral dose in the order of 105 times higher than for AgMNPV is needed to cause a mortality ratio around 100%. Therefore, we consider A. gemmatalis as a semi-permissive host to AcMNPV. The recombinants vHSGFP and vHSGFP/P35del generally do not cause melting of insects, what normally occurs for insects infected by AgMNPV and vApAg. Some surviving larvae infected by vHSGFP and, mainly by vHSGFP/P35del, originate anomalous pupae. All hemocytes types from A. gemmatalis were susceptible to infection by the viruses studied. Pl and gh1 are the most susceptible cells, while gh2 are rarely infected. Sph are especially resistant to AcMNPV-derived viruses. This can constitute one of the factors that determine the low infectivity of AcMNPV in A. gemmatalis larvae. Gh1 and pl phagocytose cells, cell fragments, apoptotic bodies, budded viruses and occluded viruses. Infected hemocytes appear to be targets for a cytotoxic response that causes necrosis. These results reinforce the hypothesis of apoptosis is an important anti-viral strategy in insects, which do not present acquired immunity. A better comprehension of host-pathogen relationships, specially the ones related to insect immunity against viruses, may contribute to an optimization of baculoviruses as biological control agents and heterologous expression vectors, as well as to the iscovery of new antiviral drugs and to the control of virus transmission by insect Doutorado Biologia Celular Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Maria Juana Escribano Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A carcinogênese experimental em hamster, induzida por nitrosaminas, é um processo multifásico dando origem a adenocarcinomas na fase terminal, semelhante à doença humana. A resposta humoral e celular neste modelo, levou aos seguintes resultados: Quando os tecidos são tratados com antissoro específico aos linfócitos "T" de hamster, observamos uma migração de células "T" através do tecido exócrino em paralelo a neo-vascularização intensa (angiogênese). Esta migração foi observada precocemente, antes que pudesse constatar lesões nas análises por histologia convencional. Parece que as células em possível cooperação com outras células imunocompetentes, foram capazes de atacar ou destruir as acinares sem alterações morfológicas evidentes, ao lado de canais hiperplásicos correspondentes às lesões pré-neoplásicas. Entretanto, não foi observado linfócitos "T" em contacto direto com os canais em hiperplasia epitelial. Ao longo da carcinogênese observamos um aumento progressivo da síntese de imunoglobulinas circulantes. Esta foi medida pelo método semi-quantitativo "dot-blot", utilizando antissoro anti-lgG total de hamster. O método da imunoperoxidase indireta nos cortes histológicos, mostrou a presença de auto-anticorpos dirigidos provavelmente contra neoantígenos , que surgiram em consequência das lesões induzidas. ... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital Abstract: Experimental carcinogenesis in hamster, induced by nitrosamines, is a multiphasic processus ultimatly leading to adenocarcinomas closely ressembling the human illness.A follow-up of hUl11oral and cellular immuncrcsponscs in this modcl allowcd thc following results: When tissues were processed with an antiserum specifc for hamster T-lymphocytes, we observed a migration of T-cells througth the exocrine tissue concomitant with abundant neovascularitation (angiogenis). Migration occurred far before lesiolls could be Iloticed by conventional histology. Apparently, these cells, in possible cooperatin with other immunocompetent cells, were able to attack or destroy acini with no signifíant morphological alterations as well as hyperplasic ducts which are preneoplasic lesions. T-Iynphocytes in neoplasic ducts were, on the contraty, not observed. Along the carcinogenesis there also was an increase in immunoglobuline synthesis in blood-circulation This was evaluated by semiquantitative nitrocellulose immuno "dot blot" using anti-whole Ig antiserum. Indirect immunoperoxidase in the tissue sections showed presence of autoantibodies directed against neoantigens appearing as a consequence of theinduced lesions. ... Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations Doutorado Doutor em Imunologia

Orientador : Woodruff W. Benson Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Estudos populacionais desenvolvidos em São Paulo e no Panamá mostraram diferenças marcantes nos principais fatores reguladores da borboleta tropical Anaea ryphea. Anaea ryphea é uma borboleta que ocorre desde o Sul do Brasil até o México, e utiliza diferentes hospedeiras primárias em diferentes regiões: Croton floribundus em Campinas, São Paulo, Brasil e Croton billbergianus em La Galeta, Colón, Panamá. Para avaliar a mortalidade larval, foram marcadas todas as plantas hospedeiras encontradas nos dois locais. Um censo de larvas e ovos existentes sobre as mesmas foi realizado em intervalos variados. Os dados foram analisados buscando fatores relacionados com as flutuações populacionais observadas. Três anos de dados do sudeste do Brasil mostram que: a) As populações de imaturos são altamente sazonais, com altas densidades, ocorrendo aproximadamente de novembro a maio, com um pico dentro deste período e uma pausa reprodutiva durante o inverno (estação seca). No local de estudo do Panamá a espécie ocorreu em baixas densidades de agosto a dezembro, porém sem pico distinto. b) A época e a amplitude do pico populacional em Campinas variam de ano para ano. c) A chuva parece ser o principal fator promovendo diferenças sazonais em mortalidade de larvas de primeiro e segundo estádios, e juntamente com a sazonalidade afeta a qualidade das plantas hospedeiras. Os valores de k obtidos a partir das tabelas de vida sugerem que predação (não observada de fato) e parasitismo (de ovos por tricogramatídeos e de larvas de quarto estádio por braconídeos) têm importância na variação da densidade dentro de cada estação. No Panamá os valores de k são altos e similares para todos os estádios, talvez devido a um aumento de predação. Também fortes chuvas durante a estação úmida podem ajudar a manter a população baixa, devido à mortalidade mecânica. Uma diminuição na chuva permite que a população aumente em outubro. d) Um alto percentual de ovos desaparece em ambos os locais, mas no Panamá ele é 50% mais alto. O percentual de ovos não férteis e parasitados, por outro lado, é maior em Campinas. A proporção de ovos eclodidos, como conseqüência, é 50% do valor do Panamá. Não foi observado parasitismo por braconídeos no Panamá, enquanto no Brasil este é o principal responsável pela mortalidade de larvas de quarto estádio. e) Os fatores de mortalidade agem de forma independente da densidade, pelo menos com os dados disponíveis até o momento. O ciclo de vida de Anaea ryphea tem as mesmas características em ambos os locais, diferindo basicamente na duração dos estádios devido à temperatura e nos padrões de coloração das asas dos machos Abstract: Population studies developed in São Paulo and Panama showed striking differences in the main regulating factors of the continuously breeding tropical butterfly Anaea ryphea. The butterfly occurs from southern Brazil to Mexico, and uses different primary larval food plants in different regions: Croton floribundus at Campinas, São Paulo, Brazil and Croton billbergianus at La Galeta, Colón, Panama. To evaluate larval mortality, I marked individual food plants, censused mapped eggs and larvae at intervals and analyzed mortality data for factors correlated with duration of life cycle, feeding behavior and known sources of mortality. Three years of data from southeastern Brazil showed that: a) The populations of immatures are highly seasonal, with high densities, occurring from approximately November to May (late spring to mid-autumn), with a peak within this period and a reproductive hiatus during winter (dry season). At the Panama site, the species occurred at low densities from approximately August to December, but with no clear peak. b) The time and amplitude of the peak at Campinas vary from year to year. c) Rainfall seems to act as the main factor promoting seasonal differences in mortality of first and second instar larvae, and together with seasonality it influences host plant quality. Life-table k-values suggest that predation (not actually observed) and parasitism (of eggs by trichogrammatid wasps and of fourth instar larvae by braconid wasps) play important roles in the density variation within the seasons. In Panama the k-values are high and similar for all instars, perhaps due to increased predation. Also severe rain storms during the rainy season may help keep densities low (because of mechanical mortality). Diminishing rainfall allows the increase of the population in October. d) A high percentage of eggs disappear at both places, but in Panama it is 50% higher. The percentage of non-fertile and parasitized eggs, on the other hand, is higher in Campinas. The proportion of hatched eggs, as a consequence, is 50% the value of Panama. No parasitism of larvae by Braconidae wasps was observed in Panama, while at Campinas it is the main mortality factor for 4th instar larvae. e) The mortality factors acting on the populations did not show any density-dependence with the present data. The life cycle of the butterfly has the same characteristics in each locality, differing mainly in the duration of the stages, due to low temperatures, and in the wing patterns of the males Doutorado Doutor em Ciências Biológicas

Orientador: Eliana Maria Zanotti-Magalhães Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Experimentalmente, Biomphalaria glabrata pode ser utilizada como hospedeiro intermediário do nematódeo Angiostrongylus costaricensis, responsável pela angiostrongilíase abdominal. Esta zoonose, descrita no Brasil principalmente nos estados sulinos, pode acometer acidentalmente o homem, sendo que a infecção ocorre através da ingestão de moluscos parasitados ou água e alimentos contaminados com larvas de 3° estágio, eliminadas no muco dos moluscos hospedeiros. O objetivo deste trabalho foi estudar o desenvolvimento dos estágios larvais e o comportamento dos hemócitos na hemolinfa de B. glabrata infectada.Um total de 168 moluscos foi infectado com 120 larvas LI de A. costaricensis extraídas das fezes de camundongos Swiss albinos previamente infectados via oral sob tubagem esofágica com 6 larvas L3. Larvas de A. costaricensis foram recuperadas de 45 moluscos B. glabrata após 15, 22 e 29 dias de exposição ao parasita, através do método de Baermann, utilizando tecidos digeridos dos moluscos com solução de pepsina e ácido clorídrico. Constatou-se maior recuperação de larvas de A. costaricensis dos moluscos aos 29 dias de infecção. Para o estudo do desenvolvimento de Ao costaricensis, 60 moluscos infectados foram destinados a recuperação larval durante 30 dias consecutivos. Foi observada a mudança larval de LI para L2 aos 13 dias de infecção e L2 para L3 aos 18 dias de infecção. Hemolinfa de 45 moluscos infectados e não infectados com A. costaricensis foi coletada para verificação da resposta hemocitária durante 4 semanas. Os hemócitos foram distinguidos em hialinócitos e granulócitos. Enquanto nos moluscos não infectados predominaram os hialinócitos, naqueles infectados os granulócitos foram mais evidentes, principalmente entre o 18° ao 25° dia de infecção. Foi confirmada a ocorrência tanto da infecção percutânea como por via oral. Os locais mais parasitados foram: região cefalopodal, a preferida pelo nematódeo, seguida do intestino, rim e pulmão. Todas as larvas encontradas estavam viáveis e rodeadas por reação do tipo granulomatosa, independentes de sua localização Abstract: Biomphalaria glabrata can be experimentally used as an intermediate host of the nematode Angiostrongylus costaricensis, responsible for abdominal angiostrongyliasis. This zoonosis, found in Brazil mainly in the southem states, can accidentally infect man through the ingestion of parasitized mollusks or contaminated water and food containing third-stage larvae, eliminated in the mucous secretion of the mollusks. The objective of this work was to study the development of larval stages and the behavior of hemocytes in the hemolymph of infected B. glabrata. A total of 168 mollusks were infected with 120 LI larvae of A. costaricensis, extracted ftom excrement of albino Swiss mice previously infected via the oral route by esophageal tube with 6 L3 larvae. The A. costaricensis larvae had been recovered from 45 B. glabrata mollusks at 15, 22 and 29 days after exposure to the parasite, by means of the method of Baermann, using molluscan tissues digested with pepsin and hydrochloric acid solution. A larger recovery of A. costaricensis larvae from the mollusk was found at 29 days after infection. For the study of the development of A. costaricensis, 60 infected mollusks were allocated for larval recovery during a period of 30 consecutive days. It was observed that there was a larval stage change, from L1 to L2, at the 13th day after infection and from L2 to L3 on the 18th day after infection.The hemolymph of 45 mollusks, both infected and not infected with A. costaricensis, was collected for verification of the hemocyte response during 4 weeks. The hemocytes were differentiated into hyalinocytes and granulocytes. While in the non infected mollusks the hyalinocytes had predominated, in those infected granulocytes were more evident, mainly between the 18th and the 25th day after infection. The occurence of infection, both via percutaneous and via oral routes, was confirmed. The most parasitized sites were the cephalopodan mass, preferred by the nematodes, folIowed by the intestines, kidneys and lungs. AlI the larvae found were viable and surrounded by reaction of the granulomatous type, independent of their situation Doutorado Mestre em Parasitologia

Orientador : Gil Martins Felippe Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Este trabalho teve como objetivos, investigar o crescimento inicial, germinação, enraizamento e o nível de diosgenina na parte aérea de plantas de D. composita. O crescimento inicial é lento. O desenvolvimento da parte aérea é afetado pelo crescimento do tubérculo nos primeiros 3 meses. A partir de então, aumentam as taxas de aparecimento, crescimento e os tamanhos máximos alcançados pelas folhas, assim como o acúmulo de matéria seca. As sementes de D. composita reagem ao sal de tetrazólio depois de 6-8 dias de embebição. Há necessidade de um período de pós amadurecimento de aproximadamente 5 meses para que taxas máximas de germinação sejam obtidas no menor tempo. Oi período de pós amadurecimento modifica a necessidade de luz e as sementes passam a ser indiferentes 11 meses após a colheita. As sementes germinam nas temperaturas de 20, 25,30 e 35ºC. as temperaturas que promovem a germinação variam de acordo com o período de armazenamento, mas a de 25ºC, em todos os casos, parece ser a mais adequada. Os regimes de temperaturas alternadas de 5-25, 10-25, 20-25, 30-25 e 35-25ºC possibilitam a germinação, sendo que o de 20-25ºC é o mais apropriado. Há a interação entre luz e temperaturas e 20, 25 e 15-25°. ...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital Abstract: Not informed. Doutorado Doutor em Ciências

Orientador: Edson Rosa Pimentel Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Os tendões são estruturas que transmitem a força muscular ao osso. São formados por células imersas em uma matriz extracelular rica em fibras de colágeno paralelas. Tendões, como o calcanear, são resistentes, contudo podem ser acometidos por lesões. Esse tecido lesado não se regenera totalmente e a organização, estrutura e propriedades mecânicas do tendão reparado são inferiores ao tendão saudável. Além disso, há formação de adesão entre o tendão e o tecido conjuntivo adjacente, o que constitui um problema clínico. Tem sido reportado que o oxido nítrico (NO) tem influência na regeneração do tecido e que a inibição da síntese de NO poderia estar diretamente relacionada a uma não recuperação do tecido lesado. Dessa forma, este trabalho teve como objetivo analisar o dano estrutural e o acúmulo de células inflamatórias após a injúria em tendão calcanear de ratos adultos não tratados e tratados com o inibidor da oxido nítrico sintetase (NOS), L-NAME (N?-nitro-L-arginina metil éster). Para tanto, os animais tiveram seus tendões parcialmente seccionados. Os animais tratados com L-NAME receberam a droga na água de beber quatro dias antes da secção e isto se manteve durante todo o período experimental. Os tendões de animais não tratados e tratados com L-NAME foram removidos aos 7, 14 e 21 dias pós-injúria, e processados para rotina em parafina (Histosec). Foram realizados cortes longitudinais de 7 µm de espessura, corados com Hematoxilina-Eosina (HE), Azul de Toluidina (AT) e Xilidine Ponceau (XP) e analisados em microscopia de luz comum e de polarização. Analisando o material não tratado com L-NAME, foi observada grande quantidade de fibroblastos, hemácias e células inflamatórias, principalmente macrófagos e mastócitos nos tendões de 7 dias pós-injúria, com diminuição progressiva para 14 e 21 dias. Com relação às fibras de colágeno, observou-se o início da reorganização das fibras em 14 dias após a lesão. Em 21 dias o grau de reorganização das fibras é maior, embora se mostre inferior se comparado a um tendão normal. Em contraste, os tendões dos animais tratados com L-NAME, em todos os três tempos, mostraram-se mais acentuadamente infiltrados por células inflamatórias. Em 21 dias pós-injúria essas células inflamatórias persistem, a matriz ainda mostra-se desorganizada e há formação de adesão entre o tendão e o tecido conjuntivo adjacente. Para as análises bioquímicas, os tendões foram divididos em regiões de compressão, de secção e de tensão. A análise em SDS-PAGE dos tendões seccionados normal mostrou uma maior quantidade de colágeno neste, e uma presença marcante de proteínas com Mr entre 14 e 67 kDa nos tendões seccionados de 7 e 14 dias pós-injúria de animais não tratados com L-NAME. O tendão de 21 dias pós-injúria apresenta um padrão de bandas eletroforéticas muito similar ao normal. Nos animais tratados, todos os três tempos apresentaram presença marcante daquelas proteínas. A dosagem de proteínas e quantificação de hidroxiprolina mostrou uma maior quantidade desses componentes nos animais tratados com L-NAME. Entretanto, foi observada uma maior concentração de glicosaminoglicanos (GAGs) nos animais não tratados. Com relação ao tipo de GAG presente nos tendões seccionados foi possível identificar a presença de dermatan sulfato. Os tendões também foram submetidos ao ensaio mecânico sobre tração a fim de avaliar suas propriedades biomecânicas. Durante este ensaio foi constatado que os tendões dos animais tratados com L-NAME são menos resistentes à ruptura. Nossos resultados mostram que o reparo do tendão é complexo e que a presença de NO é fundamental para a recuperação do tecido, visto que nos tendões de animais tratados com L-NAME, o tecido mostrou uma inflamação persistente Abstract: The tendons are sctructures capable of transmiting force from the muscle to bone. They are formed by cells immersed into a extracellular matrix (ECM) rich in collagen fibres. Tendons, as the calcanear tendons, are capable of supporting high tension force, may also undergoes damages. The damaged tissue does not regenerate completely, and the organization, structure and mechanical properties of a repaired tendon are usually inferior to the healthy tendon. Adhesion between the tendon and the adjacent connective tissue occurs, resulting in a clinical problem. Nitric oxide (NO) influences tissue regeneration, and this inhibition may be correlated a non recuperation of the injured tissue. The aim of this work was to analyze the structural damage and the presence of inflammatory cells after the injury of rats calcaneal tendons non-treated and treated with L-NAME (N?-nitro-L-arginine methyl ester), a nitric oxide sinthase (NOS) inhibitor. The animals had its tendons partially transected. In the NO synthase inhibition experiments animals received L-NAME in their drinking water, ad libitum, for four days prior to surgical lesion of the calcaneal tendon and throughout the post-operative experimental period. The tendons non-treated and treated L-NAME animals were removed at 7, 14 and 21 days post-injury, and processed for paraffin inclusion (Histosec). Longitudinal sections with 7 µm were stained with Hematoxilin-Eosin (HE), Toluidine Blue (TB) and Xylidine Ponceau (XP). The non-treated tendons exhibited large amount of fibroblasts, blood cells and inflammatory cells as macrophages and mast cells, mainly in 7 days post-injury, with progressive decrease at 14 and 21 days. The reorganization of collagen fibers was observed since the 14 days after injury. At day 21 the organization of the collagen fibers, was higher compared to 14 days, but lesser than in the normal tendon. The tendons of L-NAME treated rats, in all periods, exhibited great infiltration of inflammatory cells. In 21 days post-injury of L-NAME treated rats, these inflammatory cells were still present, the ECM disorganization was observed and also adhesion between the tendon and adjacent adhesions tissue. For biochemical analysis, the tendons were divided in compression, section and tension regious. SDS-PAGE analysis of transected and normal tendons, showed a more expressive presence of collagen in normal rats and a remarkable presence of proteins with Mr between 14 and 67 kDa in transected tendons of non treated animals at 7 and 14 days post-injury. The rats, at 21 days post-injury, exhibited protein profile similar to the normal tendon. In L-NAME treated animals, in all tree-points, it was found a significative amount of these proteins. The analysis of protein and hydroxyproline content showed a larger amount of both components larger than in treated animals. On the other hand, a larger concentration of glycosaminoglycans (GAGs) was observed in non-treated animals. The analysis of GAGs in agarose gel showed a proeminent presence of dermatan-sulfate in the section region of both non-treated and treated animals. The biomechanical tests indicated that the L-NAME treated tendons were lesser resistents to rupture than the non-treated tendons. Our results revealed that the repair in tendons is a complex process and that NO is essential for the healing and complete recovering of the tissue, as in tendon of L-NAME treated animals, the tissue exhibited a persistent inflammatory process Doutorado Biologia Celular Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientadores: Gonçalo Amarante Guimarães Pereira, Francisco Javier Medrano Martin Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Os genes que codificam para a 6-oxopurina fosforribosiltransferase (HPRT, EC2.4.2.8) dos organismos Pyrococcus horikoshii e Schistosoma mansoni foram clonados em vetores de expressão. As proteínas foram expressas e purificadas em larga escala no sistema de expressão de Escherichia coli. Estudos cinéticos mostraram que a enzima de P. horikoshii é capaz de usar hipoxantina, guanina e xantina. Os dois primeiros substratos apresentam uma eficiência catalítica semelhante. A xantina apresenta um valor menor (ao redor de 20 vezes mais baixo), mas a constante catalítica é comparável com a da hipoxantina. A proteína não foi capaz de se ligar a GMP-agarose, mas sim pode ligar o outro substrato da reação reversa, pirofosfato inorgânico, com baixa afinidade (Kd = 4,7 ± 0,1 mM). Os dados de espalhamento dinâmico de luz, gel filtração e espalhamento de raios X a baixo ângulo mostram que esta proteína é um homohexâmero em solução. Este hexâmero é compacto e resistente à ação limitada de enzimas proteolíticas. Estudos de estabilidade frente a agentes químicos mostraram que a proteína é bastante estável resistindo os efeitos da uréia sem desenovelar completamente com a maior concentração do agente (8,0 M). Os dados obtidos com cloreto de guanidina mostraram que a proteína possui, no mínimo, um estado intermediário de desnaturação, como mostram os diferentes perfis obtidos com as diferentes técnicas usadas nos estudos de desnaturação. Os dados preliminares obtidos com a HPRT de S. mansoni mostraram que, na presença da cauda de histidinas, a proteína está presente como um octâmero alongado. Mas, muito provavelmente ela deve ser um tetrâmero. A presença de caudas fusionadas nas proteínas recombinantes pode afetar a estrutura e função das proteínas Abstract: The genes that code for the 6-oxopurine phosphoribosyltransferase (HPRT, EC2.4.2.8) from the organisms Pyrococcus horikoshii and Schistosoma mansoni were cloned in expression vectors. The proteins were expressed and purified in large scale in the de Escherichia coli expression system. Kinetic studies showed that the enzyme from P. horikoshii is able to use hypoxanthine, guanine and xanthine. The first two substrates show a similar catalytic efficiency. Xanthine show a lower value (around 20 times), but the catalytic constant is comparable to that of hypoxanthine. The protein was unable to bind to GMP-agarose, but was able to bind the other substrate of the reverse reaction, inorganic pyrophosphate, with low affinity (Kd = 4.7 ± 0.1 mM). Dynamic light scattering, gel filtration and small angle X-ray scattering data show that the protein is a homohexamer in solution. This hexamer is compact and resistant to the limited action of proteolytic enzymes. Stability studies with chemical agents showed that the protein is very stable being able to stand the effects of urea without unfolding completely at the highest agent concentration (8.0 M). Data obtained with guanidine hydrochloride showed that the protein presents, at least, one unfolding intermediate state, as can be seen with the different profiles obtained with different techniques used in the unfolding studies. Preliminary data obtained from HPRT from S. mansoni showed that in the presence of the histidine tag, is present as a long octamer. But, most likely it should be a tetramer. The presence of histidine tag fused to the recombinant proteins could affect the structure and function of proteins Doutorado Bioquímica Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Sergio Marangoni Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Os inibidores foram isolados de TOI em sementes de Copaifera langsorffii, conhecida vulgarmente por Copaíba, uma árvore nativa do Brasil da subfamília Caesalpinoideae da família Leguminosae. A fração TOI foi purificada a partir de precipitação com sulfato de amônio, cromatografia em uma coluna de troca-iônica em OEAE-Sepharose e coluna de afinidade em Sepharose- Trypsina. TOI apresentou-se homogêneo em gel de poliacrilamida-SOS 12,5%, com uma massa molecular aparente de 24 kOa em condições não reduzidas, e 12 kOa em condições reduzidas com OIT. A massa molecular relativa estimada por filtração em gel em uma coluna Superdex-75, sistema FPLC, confirmou os resultados obtidos em PAGE-SOS. TOI tem um Ki de 1,2nM para a enzima tripsina bovina mostrando uma alta afinidade. No entanto, TOI não mostrou atividade inibitória para quimotripsina. O estudo da estequiometria do complexo TOI-tripsina revelou que este inibe tripsina na razão molar de 1: 1. O complexo TripsinaTOI foi eluído na cromatografia de filtração em gel com um tempo de retenção equivalente a uma massa molecular relativa de 39 kOa. Evidenciou-se também que TOI é ativo na sua forma monomérica e não na sua forma dimérica. A Focalização Isoelétrica de TOI revelou a presença de duas bandas de proteínas, ambas coradas para inibidor de tripsina com pls de 6,45 e 7,35, indicando dois inibidores em TO!. Os inibidores de TOI, designadas por TOI-I e TOI-II, foram isoladas em coluna de fase reversa C18 /lBondapack, em Sistema HPLC Walters. Foi observado em gel de Tricina 16,5% uma diferença mínima na massa molecular aparente, sendo aproximadamente 12 e 10 kOa para TOI-I e TOI-1I respectivamente. O sequenciamento N-terminal dos inibidores de TOI revelou a presença da sequência consenso observada nos inibidores de tripsina tipo Kunitz para TOI-I, contudo, pesquisas nos banco de dados de proteínas não revelou nenhuma homologia para TOI-II. TOI mostrou alta estabilidade para diferentes condições de pH, temperatura e concentração de OTT, indicando um possível número elevado de pontes de dissulfeto na estrutura molecular. TOI não foi degradado proteoliticamente na digestibilidade in vitro pelas proteases encontradas no intestino médio do gorgulho Callosobruchus maculatus, e demonstrou um efeito deletério no desenvolvimento dos insetos, sugerindo que TOI atua como um fator antinutritivo e prejudica o desenvolvimento de Callosobruchus maculatus Abstract: Two inhibitors have been isolated de TOI fraction in seeds of Copaifera langsorffii, ordinarily known as Copaíba, one Brazilian native tree of the Caesalpinoideae subfamily of Leguminosae family. The fraction TOI was purified by ammonium sulfate preeipitation, ion-exehange ehromatography on OEAE-Sepharose and affinity ehromatography on trypsin-Sepharose. TOI presented homogeneity in PAGE-SOS geI12,5%, with apparent moleeular mass of 24 and 12 kOa in non-and reduetion condition, respeetively. The relative moleeular mass determined by FPLC gel filtration on a Superdex 75 eolumn, eonfirmed on the results in PAGE-SOS. TOI have Ki of 1,2nM to bovine trypsin enzyme showing high affinity. However, no inhibition was found for quimotrypsin. The stoiehiometrie study of the trypsin-TOI eomplex evideneed that inhibitor is aetive for trypsin at 1: 1 molar ratio. The trypsin- TOI eomplex was eluted on a gel filtration ehromatography with retention time equivalent a relative moleeular mass of the 39kOa. Evidenced too, that TOI is active on enzyme trypsin on its monomerie form and not dimerie one. The isoelectrie foeusing of TOI demonstrated the presenee of two proteie bands, with isoelectrie point between 6.45 e 7,35, indicating two inhibitors in TOI. These inhibitors of TOI, designated for TOI-I and TOI-II, was isolated by reversed - phase HPLC on a J.L-Bondapaek column (Waters System) and was observed in Trieine-gel 16,5% one minimal differenee on apparent moleeular mass, of approximately 12 and 10 kOa for TOI-I and TOI-1I respectively. N-terminal sequeneing of the inhibitors of TOI, demonstrated the presenee of the eonsensus sequenee present in the soybean Kunitz-Type trypsin inhibitor for TOI-I, however, protein database searehes did not reveal any homology to TOI-II. The TOI showed high stability to pH different eonditions, temperature and amount of OTT, indicating one elevated number of disulfides bonds in a moleeular strueture. The TOI was not proteolytically degraded on a in vitro digestibility by midgut proteinases of the gorgulho Callosobruchus maculatus and demonstrated one deleterious effect on a insect's development, suggesting that TOI acts like toxie factor and deereased survival of Callosobruchus maculatus Mestrado Bioquímica Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Sebastião Roberto Taboga Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: O câncer de próstata atualmente é o tumor mais comum em homens com mais de 50 anos de idade. Entre os fatores de risco que contribuem para o aumento dessa doença destaca-se o envelhecimento, período em que ocorrem acentuados desequiliorios hormonais. Há muitas dificuldades na obtenção de material humano para estudos do desenvolvimento de tumores prostáticos, pois esta questão esbarra na ética médica. Vários grupos de pesquisa vêm tentando desenvolver, caracterizar e validar modelos roedores para análise do câncer de próstata. Modelos autóctones, nos quais são estudadas as lesões prostáticas espontâneas, têm desempenhado papel relevante nas pesquisas dessa neoplasia. Além disso, inúmeras investigações têm sido feitas sobre a indução experimental de tumores na próstata de roedores de laboratório: ratos, camundongos e cobaias. Em uma primeira etapa deste trabalho, foram realizadas análises morfológicas (estruturais e ultra-estruturais), quantitativas e funcionais dos componentes celulares dos compartimentos epitelial e estromal do lobo ventral da próstata do gerbilo" velho (Meliones unguiculatus). A morfologia prostática nesses animais revelou que em uma mesma glândula puderam ser observadas regiões funcionais com epitélio secretor normal e outras áreas com alterações histopatológicas atípicas. Nesses, o declínio de testosterona esteve associado a alterações proliferativas na glândula, levando ao entendimento da importância desse andrógeno na homeostase e funcionalidade prostática. Devido a essas constatações, em uma segunda etapa, foi feita a indução experimental de tumores na próstata do gerbilo adulto, após tratamento conjugado de N-metil-N-rutrosouréia com propionato de testosterona. Depois de estabelecidos os tumores, as próstatas foram processadas para estudos rustológico, imunocitoquímico e ultra-estrutural. Os resultados mostraram que em gerbilos o surgimento de lesões prostáticas ocorreu em períodos experimentais de até 9 meses e que tanto o cancerígeno como a testosterona, associados ou não, foram indutores de neoplasias. Sugere-se que as células atípicas possam apresentar potencial invasivo pela observação da ruptura da membrana basal pelos métodos de imunocitoquímica para laminina e análise ultra-estrutural. Detectou-se também no gerbilo a expressão da proteína citoplasmática Alfa-Metilacil-CoARacemase (PS04S) em células prostáticas neoplásicas, bem como é observado no câncer prostático do homem. Assim, este trabalho é pioneiro na demonstração da expressão de P504S em roedores. A partir dos resultados apresentados constatou-se que o gerbilo é um modelo animal para estudos de carcinogênese química prostática, que somados aos dados da literatura, levarão ao melhor entendimento da biologia de lesões da próstata Abstract: The prostate cancer is the most common tumor that attacks men from the 50's decade. Among the risk factors that contribute to this disease's increase stand out the aging process, when hormonal unbalances happen frequendy. Developmental studies of prostatic tumors have been complicated because of difficult in obtaining human material, once this question lies on medical ethics. Researchers group have had tried to develop, characterize and validate some rodent models to analyze the prostate cancer. Autoctone models used to study spontaneous prostatic lesions have performed important role to these kind of neoplasia. ln addition, lots of innstigations have been done about experimental induction of prostatic tumors in rats, mice and guinea pig. ln a first phase of the present work, it was realized in the ventral lobe of old gerbil's prostate veriones unguiculatllm) structural and ultra-structural morphological, quantitative and functional analyzes of the cellular compounds of epithelial and stromal compartments. The prostatic features of theses animaIs revealed that in a same gland could be noted functional regions containing normal secretof)' epithelium and regions completely altered, showing histopathological lesions. A testosterone concentration decrease associated to these prolifera tive sites confmns the importam role of this androgen to the prostatic homeostasis. Because of these data, in the second phase of this. work, it was done a prostatic tumors experimental induction in the adult gerbil, after conjugate treatment of N-metil-N-nitrosourea with testosterone propionate. Once the tumors were established, prostate fragments were processed for histological, immunocytocl)emical and ultra-structural studies. The results showed that in gerbils, the emergence of prostatic lesions happened in experimental periods of until 9 months and both the carcinogen and testosterone, associated or not, was able to induce these adenocarcinomas. The invase potencial of anomalus cells could be proved by ultra-structural analyz~s and by the immunocytochemical test for laminima, noted in the basal membrane disruption. On the other hand, it was observed that gerbil is one of the pioneers in expression of the citoplasmatic protein Alfa-lvletilacilCoARacemase (P504S), which is found in the neoplastic cells, likely in prostatic human cancer. Concluding, this study is pioneer in the demonstration of the P504S expression in rodents. Based on these presented data, it was verified that gerbil is a good experimental model to chemical carcinogenesis research of the prostate, which taken together with previous literature will give a better and profounder understanding of prostatic lesions Doutorado Biologia Celular Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Alvaro Santos Costa Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Foram detectados dois fortes inibidores da transmissão mecânica do vírus do mosaico do mamoeiro em uma triagem efetuada entre diferentes substâncias químicas e sucos de diferentes espécies de plantas. Foram eles o detergente comercial ODD, utilizado na limpeza doméstica, e o suco de Turnera ulmifolia L. Foi estudado o mecanismo de ação desses inibidores sobre a transmissão do vírus do mosaico do mamoeiro e do fumo, porém alguns outros testes realizados mostraram que eles foram capazes de inibir a transmissão mecânica de outros vírus como o do mosaico da alfafa, Y de Piracicaba e acro-necrose. A inibição pela aplicação previa do suco de T. ulmifolia em mamoeiro mostrou efeito positivo quando feita um dia antes, mas não 4 ou mais dias antes da inoculação mecânica. O ODD mostrou boa inibição quando aplicado 8 dias antes (76,6%) e mesmo aplicado 12 dias antes induziu inibição de 40%. Com o vírus do mosaico do fumo (TMV) o inibidor de T. ulmifolia exerceu algum efeito positivo aplicado até 8 dias antes da inoculação (35,9%); o ODD teve efeito inibidor razoável mesmo quando aplicado 12 dias antes (60,7%). Quando esses inibidores foram misturados com o inoculo ou aplicados imediatamente após a inoculação do TMV em plandas de fumo TNN, houve bom efeito inibidor. ...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital Abstract: Exploratory screening of a number of chemical substances and of plant juices from many species permitted the detection of two effective plant virus inhibitors; ODD, a comercial household detergent sold in Brasil, and the leaf juice of the Turneraceae, Turnera ulmifolia L. Both inhibitors were tried against tobacco mosaic and papaya ring spot viruses in the majority of tests, but they were also active against two potyviruses that infect bean and alfafa mosaic virus. Seedlings of papaya (Carica papaya L.), Turkish necrotic tobacco (Nicotiana tabacum L.), and bean (Phaseolus vulgaris L.) were used as test plants. The inhibitory present in the leaf juice of T.ulmifolia, as well as that in ODD, are inhibitors of virus infections and not of virus replication. Both were effective when applied prior or immediaately after inoculation, although ODD was still effective when treatment was 4 hr afterwards. These results were interpreted as indicating the leaf juice inhibitor was an impediment in the initial interaction virus-host cell, whereas that in the detergent could act likewise or after it had occurred. The virus inhibitory effect of ODD is attributed to its main constituint, sodium alkylbenzenesulfonate, a component of most commercial brands of detergents. ...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations Doutorado Doutor em Ciências Biológicas

Orientador: Alba Regina Monteiro Souza Brito Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Onodorpicrina, uma sesquiterpeno lactona, presente nas folhas de Arctium Lapa L. demonstrou através dos estudos de Barbosa et at (1993) erficaz atividade farmacológica. Com base nesses resultados e, devido ao fato, de nosso laboratório possuir estudos em relação à atividade antiulcerogênica de outras sesquiterpeno lactonas (desidrocrotonina e crotonina) obtidas das cascas de Croton cajucara Benth, decidimos estudar a atividade antiulcerogênica e antiinflamtória intestinal da fração semi-purificada (ONP), cujo composto majoritário é a onopordopicrina. Primeiramente estudamos o efeito da citotoxicidade da ONP avaliado através da viabilidade celular em fibroblastos (V79) de pulmão de Hamster chinês. A ONP apresentou IC50 aproximadamente de 15µM nos ensaios de MTT, vermelho neutro e conteúdo de ácido nucléico. Por ser uma substância com uma toxicidade relativa resolvemos estudar o efeito antitumoral dessa substância em linhagem celular de leucemia promielocítica (HL60) usada como modelo para estudos antitumorais. Da mesma forma que nos ensaios de citotoxidade, a ONP apresentou IC50 aproximadamente de 15 µM em ensaios de MTT e PTP. Para avaliar a atividade antiulcerogênica da ONP, foram utilizadas diferentes doses em modelos clássicos de indução de úlcera: etanol/HCl, estresse por imobilização e frio, indometacina e ligadura de piloro. Em todos os modelos a ONP apresentou atividade antiulcerogênica significativa. Nos procedimentos seguintes, avaliamos a atividade antisecretora da ONP através de ensaios de somatostatina e gastrina, nos quais a substância apresentou aumento da liberação e/ou produção de somatostatina e diminuição da produção e/ou liberação de gastrina. Em relação ao estudo da ONP em experimentos de muco e óxido nítrico, essa não apresentou diferença significativa. No entanto, promoveu diferença significativa no modelo de avaliação do envolvimento de radicais sulfidrila, indicando uma possível atividade antioxidante. Quando avaliada em modelo de colite ulcerativa induzida por TNBS, a ONP apresentou significativa proteção provavelmente pelo envolvimento da mieloperoxidase (MPO) e fator de necrose tumoral (TNF-alfa). Visto a atividade obtida com a ONP, resolvemos analisar a atividade do chá de Arctium lappa, o qual apresentou significativa envolvimento com óxido nítrico e grupamento sulfidrila para a obtenção da atividade antiulcerogência promovida pelo chá. Os resultados obtidos com a Arctium lappa são promissores, por causa de sua significativa proteção contra úlceras induzidas por diferentes agentes, sugerindo um efeito antisecretor mediado por sua ação na secreção de Somatostatina e Gastrina e um efeito protetor proporcionado pela propriedade antioxidante presente na ONP. Os dados também revelaram que o pré-tratamento com ONP é capaz de reduzir a inflamação intestinal produzida através do modelo de indução de colite ulcerativa por TNBS em ratos. O efeito agudo antiinflamatório provavelmente está relacionado com a diminuição de neutrófilos e diminuição da produção de TNF-a na mucosa intestinal. Nossos resultados sugerem um significativo potencial terapêutico da ONP na area gastrointestinal Abstract: Onodorpicrin, a sesquiterpene lactone, present in the leaves of Arctium lappa L., showed through the studies of Barbosa et al (1993) effective pharmacological activity. Based on those results and due to the fact that our laboratory has studies in relation to the antiulcerogenic activity of other sesquiterpene lactone (dehydrocrotonin and crotonin) obtained by barks of Croton cajucara Benth, we decided to study the antiulcerogenic activity and bowel antiinflamatory of the semi-purified fraction (ONP), which majority compound is the onopordopicrin. Firstly we studied the effect of the citotoxicity of appraised ONP through the cellular viability in fibroblast (V79) of lung of Chinese Hamster. ONP presented IC50 approximately of 15µM in the MTT, red neutral and content of nucleic acid experiments. For being a substance with a relative toxicity we decided to study the effect antitumoral of that substance in cellular lineage of promyelocytic leukemia (HL60) used as model for antitumoral studies. In the same way that in the citotoxicity experiments, ONP presented IC50 approximately of 15 µM in experiments of MTT and PTP. To evaluate the antiulcerogenic activity of ONP, different doses were used in classic models of ulcer induction: ethanol/HCl, stress for immobilization and cold, indometacin and pylorus ligature. In all of the models ONP presented significant antiulcerogenic activity. In the following procedures, we evaluated the activity antisecretory of ONP through somatostatin and gastrin experiments, in which the substance presented increase of the liberation and/or somatostatin production and decrease of the liberation and/or gastrin production. In relation to the study of ONP in mucus experiments and nitric oxide, that one didn't present significant difference. However, it showed significant difference in the model of evaluation of the involvement of radicals sulphydryl, indicating a possible antioxidant activity. When evaluated in model of colitis ulcerative induced by TNBS, ONP presented significant protection probably for the involvement of the mieloperoxidase (MPO) and factor of necrosis tumoral (TNF-alpha). Checked the activity obtained with ONP, we decided to analyze the activity of the tea of Arctium lappa, which presented significant involvement with nitric oxide and sulphydryl group for the obtaining of the antiulcerogenic activity promoted by the tea. The results obtained with Arctium lappa are promising, because the significant protection against ulcers induced by different agents suggesting a effect antisecretory mediated through somatostatin and gastrin secretion and protective effect by the antioxidant properties present in ONP. The data also reveals that pre-treatment with ONP is able to reduce intestinal inflammation in theTNBS model of colitis in rats.The acute antiinflamatory effects seem to be related to impairment of neutrophil function and absence of up-regulation of TNF-a production in intestinal mucosa. Our findings suggest that ONP shows an excellent potential for therapy in the gastrointestinal area Doutorado Fisiologia Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Fernando Roberto Martins Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Um estudo da dinâmica de populações da palmeira acaulescente Attalea humilis Mart. ex. Spreng foi conduzido em três fragmentos (1,6; 6,4 e 9,9 ha) da Floresta Atlântica, no sudeste do Brasil, entre 1996 e 1999. Durante o período de estudo, os fragmentos foram atingidos por um incêndio antrópico que devastou parte da reserva na qual estão incluídos. o número de folhas e o comprimento da raquis da folha mais recentemente expandida foram medidos para todas as palmeiras encontradas em duas transecções perpendiculares de 10m de largura cruzando os fragmentos de borda a borda. Os seguintes aspectos da ecologia de populações da espécie foram estudados: 1) Caracterização de estádios ontogenéticos. Cinco estádios ontogenéticos foram distinguidos: Plântulas encontravam-se ligadas a restos seminais geralmente enterrados e apresentavam folhas inteiras; Juvenis apresentavam segmentação incompleta do limbo foliar. Indivíduos não reprodutivos com folhas pinatissectas foram divididos morfometricamente em dois grupos: os hnaturos, com menor número de folhas e comprimento da folha mais jovem menor e altamente variável, e os Virgens, com mais e maiores folhas, mas com comprimento da folha mais jovem mais constante. O tamanho crítico de copa para o qual imaturos e virgens puderam ser identificados variaram de acordo com o fragmento e o ano. Palmeiras Reprodutivas apresentavam estruturas reprodutivas. 2) Dinâmica da hierarquia de tamanhos. Não foram encontradas evidências consistentes de dependência da densidade no tamanho dos indivíduos das populações estudadas, avaliados através de analises de regressão entre variáveis ligadas ao tamanho da copa e a densidade das parcelas. Tanto para o número de folhas quanto para o comprimento da raquis da folha mais nova em todas as populações, diferenças de tamanho entre palmeiras em uma mesma categoria ontogenética tenderam a diminuir ao longo do processo de maturação da espécie. Palmeiras jovens foram danificadas heterogeneamente pelo fogo, enquanto a maioria das palmeiras imaturas tiveram 50 - 75% de sua copa destruída, e os adultos mostraram uma grande proporção de plantas sem nenhum sinal de destruição da copa. Dezoito meses após o incêndio os indivíduos tenderam a apresentar uma menor desigualdade em relação ao número de folhas entre categorias ontogenéticas em todos os fragmentos. Sugerimos que a heterogeneidade ambienta!, poderia agir como filtros ambientais selecionando os indivíduos que são recrutados para a categoria imatura. Estes indivíduos apresentariam crescimento e sobrevivência maiores e tamanhos menos desiguais: 3) Distribuirão espacial de estádios ontogenéticos. As palmeiras estavam significativamente agregadas em várias escalas, mas uma redução no grau de agregação ocorreu de plântulas para adultos em todos os fragmentos. o fogo aumentou temporariamente o grau de agregação dos jovens. Estádios ontogenéticos não foram encontrados nas mesmas parcelas com maior freqüência do que esperado ao acaso na maioria dos casos, mas uma associação positiva significativa de reprodutivos em diferentes anos foi encontrada em dois fragmentos. A distribuirão das palmeiras entre setores dos fragmentos variou de acordo com o estádio, fragmento e o ano, mas foi consistente no tempo sendo pouco afetado pelo fogo. Não foi encontrada uma relação geral entre a densidade de palmeiras e a distância da borda do fragmento, mas sim uma resposta complexa e esporádica. Sugerimos que a dispersão de sementes a curta distância por roedores pode resultar em agregados discretos e de baixa densidade de palmeiras jovens dissociados de plantas reprodutivas e que estádios posteriores ficam restritos a sítios mais abertos, perturbados e sujeitos ao fogo: 4) Demografia. Em todos os anos a densidade de palmeiras no fragmento de tamanho intermediário (750 - 900 palmeiras ha-l) foi significativamente maior e apresentou maio amplitude do que nos outros fragmentos (130 - 200 palmeiras ha-l e 120 - 150 palmeiras ha l).A estrutura de estádios das populações variou com o fragmento e o ano, mas em geral os estádios posteriores foram mais abundantes do que os iniciais. A população no fragmento mais denso estava concentrada em seu setor mais perturbado. Tanto a taxa de crescimento populacional (I..) projetada quanto a observada foram significativamente maiores do que a unidade no menor fragmento mas similar á unidade no fragmento maior. Taxas de crescimento populacional baseadas em modelos matriciais foram mais sensíveis a mudanças na sobrevivência de plântulas, virgens e imaturos, e relativamente insensíveis a mudanças no crescimento e fecundidade. Depois do fogo, as populações permaneceram estáveis em todos os fragmentos exceto no de tamanho intermediário, onde uma tendência decrescente foi observada. A estrutura de estádios de todas as populações foi marcadamente alterada pelo fogo através da concentração da maioria dos indivíduos no estádio imaturo, de tamanho intermediário, mas esta tendência foi parcialmente revertida no segundo ano após o incêndio. Estes resultados poderiam indicar que a habilidade de rebrota de A. humilis, juntamente com sua tendência de persistir e crescer em áreas perturbadas promovem o crescimento populacional em fragmentos florestais pequenos e impactados, mas este crescimento pode ser revertido pelo crescimento secundário denso que tem lugar após incêndios ocasionais Abstract: A study of the population dynamics of the acauIescent palm Attalea humilis Mart. ex. Spreng was conducted in three fragments (1.6, 6.4 and 9.9ha) of the AtIantic Forest, in southeastern Brazil, fiom 1996 to 1999. In late 1997, the fragments were damaged by a wildfire that burned part of the reserve they are part of. Leaf number and Ieaf rachis 1ength of the newest expanded Ieaf were measured for palms in two 10 m-wide transects which eut aeross eaeh fragment. The following aspeets ofthe popu1ation eco10gy ofthe species were studied: 1) Characterisation olontogenetic stages. Five ontogenetie stages were distinguished: Seedlings were attached fruit remains that were buried and presented entire Ieaves; Juveniles possessed incomp1ete segmentation of the bIade. Pinnatifid-Ieafed, pre reproduetive individuaIs were morphometrically divided in two groups: the Immature, with fewer Ieaves and smaller but highIy variable youngest leaf1ength, and Virginile, with more and Iarger Ieaves, but more constant youngest Ieaf Iength; the critic crown size by which immature and virginile could be identified varied with fragment and yearo Reproduetive palms presented reproductive structures. 2) Size hierarchy dynamicso We found scant evidence of density-dependent size in the populations studied, as measured by regression analysis between crown size variabIes and pIot densityo For both Ieaf number and newest Ieaf rachis Iength and alI populations, size differences among palms in the same ontogenetic category tended to diminish along the species' maturation processo Young palms were heterogeneously damaged by fire, while most immature palms had 50 - 75% of their crown destroyed, and aduIts showed a high proportion of pIants without any sign of crown destruction. Eighteen months after fire individuaIs tended to show reduced inequality in regard to the number of Ieaves among ontogenetic categories in alI fragments. We suggest that environmental heterogeneity could act as environmental sieves selecting individuals that are recruited to the immature category. These individuaIs would show enhanced growth and survival and less unequal slzes; 3) Spatial distribution of ontogenetic stages. Palms were significantly clumped in a range of scales, but a marked reduction in clumping degree occurred from seedling to the adult stage in alI fragments. Fire increased temporarily the clumping degree of the young. Ontogenetic stages were not found in the same plots more often than expected by chance in the majority of cases, but a significant positive association of reproductive palms between years was found in two of the :fragments. Palm distribution among fragments sectors varied with stage, :fragment and year, but was consistent between years, being little affected by tire. No general relationship between palm density and distance from fragment edge could be detected, bu a complex and sporadic response was found instead. We suggest that short distance seed dispersal by scatterhoarding rodents results in discrete, low-density clumps of young palms dissociated from reproductive plants and that later stages are mostly restricted to more open, disturbed and fire-prone sites; 4) Demography. For alI years, palm density in the medium-sized fragment (750 ¿ 900 palms ha-1) was significantly higher and varied in a broader range than in the two other fragments (130 - 200 palms ha-l and 120 - 150 palms ha-l). The stage structure of the populations was dependent on :fragment and year, but later stages were genera11y more abundant than initial ones. The population in the denser :fragment was concentrated within its disturbed sector. Both observed and projected population growth rates (Â.) were greater than one in the smallest fragment but similar to one in the largest fragment. Population growth rates based on matrix models were most sensitive to changes in survivaI of seedlings, virgins and the immature, and relatively insensitive to changes in growth and fecundity. After tire, populations remained stabIe in aII fragments but the medium-sized one, where a declining tendency took place. After tire, most individuaIs were concentrated in the medium-sized, immature stage, but by the second year after tire most popuIations had retumed to pre-fire stage structure. These results could indicate that the _esprouting ability of A. humilis, coupled with its tendency to persist and thrive in disturbed areas promote popuIation growth in disturbed small forest fragments, but this growth may be hindered by dense secondary regrowth following occasional tires Mestrado Mestre em Ecologia

Orientador: Wanderley Dias da Silveira Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Bactérias do ¿gênero¿ Shigella spp. apresentam-se como bacilos gram-negativos, anaeróbios facultativos, imóveis, não formam esporos e pertencem à família Enterobacteriaceae. De acordo com testes de aglutinação com anti-soros específicos, estas bactérias são classificadas em quatro sorogrupos: Sorogrupo A (Shigella dysenteriae), Sorogrupo B (Shigella flexneri), Sorogrupo C (Shigella boydii) e Sorogrupo D (Shigella sonnei). Estas bactérias são responsáveis pela Shiguelose ou Disenteria Bacilar enfermidade endêmica que anualmente acomete milhões de pessoas em todo o mundo, sendo que mais de 70% de todos os casos ocorrem em crianças de 1 até 5 anos de idade, possuindo grande importância epidemiológica devido à alta morbi-mortalidade. Os principais determinantes de patogenicidade neste grupo bacteriano são: o plasmídio de alto peso molecular, que determina o fenótipo invasivo desta espécie; genes cromossômicos, que regulam a expressão dos genes de virulência no plasmídio e a produção de uma exotoxina que atua destruindo a barreira de células epiteliais. No Brasil, até então, não foram encontrados trabalhos publicados que comparem as diferentes amostras bacterianas de Shigella spp. isoladas de casos de Shiguelose, relacionando suas características biológicas e estrutura clonal. Sendo assim, neste trabalho, estudamos as características biológicas (sorotipagem, perfil de resistência a antimicrobianos, adesão e invasão, análise do perfil de DNA plasmidial) de diferentes amostras de Shigella spp. relacionando-as através de técnicas de Biologia Molecular (ERIC-PCR, REPPCR e DRE-PCR) permitindo, assim, determinar a clonalidade epidemiológica destas. As amostras de Shigella spp. foram isoladas de diferentes surtos, de diversas cidades das regiões de Campinas e de São João da Boa Vista, e pertencem à coleção do Instituto Adolfo Lutz de Campinas Abstract: Shigella spp are gram-negative, anaerobic facultative, non-motile, and non-sporulated bacilli of the Enterobacteriaceae family, responsible for ¿Shigellosis¿ or the Bacillary Dysentery (BD) disease, an important cause of worldwide morbidity and mortality. The pathogenic determinants of Shigella spp include high molecular weight plasmids responsible for the bacterial invasive capacity, as well as chromosomal genes encoding for different pathogenic, factors such as exotoxins that destroy epithelial host cells. Little is known about the antibiotic resistance profiles and the population structure of Shigella species isolated from humans in Brazil. In this work, we have studied the antibiotic resistance profiles and the clonal structure of Shigella strains isolated from humans in different cities located in the region of Campinas, a city in the state of São Paulo, Brazil. We have also related the antibiotic resistance of these strains with the bacterial clonal groups determined by the molecular techniques ERIC, REP, and DRE-PCR. Our data indicate that many strains of S. flexneri and S. sonnei are multiresistant, and our results also support the circulation of specific clones among the cities. These data indicate that the human sanitary conditions in the cities analyzed herein should be improved. Doutorado Microbiologia Doutor em Genética e Biologia Molecular

Orientador: Hiroshi Aoyama Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Atualmente, muito tem sido descoberto acerca dos mecanismos de controle do crescimento e coordenação celular, principalmente em células eucarióticas. Dentre tais mecanismos, o balanço entre a fosforilação e a desfosforilação de proteínas é a base para o controle de diversos eventos biológicos. As fosfatases são hidrolases que utilizam como substrato fosfatomonoésteres, e são amplamente distribuídas na natureza. As fosfatases ácidas (FAcs) são enzimas que apresentam melhor atividade em meio ácido. O objetivo do presente trabalho é estudar o efeito de peróxido de hidrogênio em duas fosfatases ácidas cujos sítios ativos contêm cisteína. Para tanto, FAc de sementes de mamona e FAc de rim bovino, ambas obtidas previamente em nosso laboratório, foram utilizadas no estudo. A primeira é uma glicoproteína, ao passo que a segunda não contém carboidrato em sua estrutura. Ensaios enzimáticos utilizando o substrato sintético p-nitrofenilfosfato (pNPP) foram realizados, em diferentes condições de incubação e exposição das enzimas. A FAc de mamona apresentou grande resistência ao peróxido de hidrogênio (H2O2), fato que se mostrou independente da presença de carboidrato em sua estrutura. Ensaios na presença de ditiotreitol (DTT) ou glutationa reduzida (GSH) provocaram inibição da enzima, porém a combinação de DTT ou GSH a H2O2 foi capaz de recuperar completamente a atividade enzimática. A exposição da FAc de mamona a DTT ou GSH não protegeu totalmente o sítio catalítico contra a oxidação por H2O2, apesar de acarretar em menores taxas de inibição por esse composto. A exposição da enzima a H2O2 elevou a sua inibição. A FAc de rim bovino apresentou grande susceptibilidade ao H2O2. Os compostos DTT e GSH provocaram inibição de sua atividade, assim como observado para a FAc de mamona. A combinação de DTT ou GSH a H2O2 não restabeleceu a atividade enzimática, sugerindo que há diferenças no processo de oxidação por esse composto entre as duas FAcs utilizadas nesse trabalho. A exposição da FAc de rim bovino a DTT ou GSH não foi eficaz na proteção do sítio catalítico, e a exposição dessa enzima a H2O2 elevou a inibição da atividade enzimática. Nossos resultados sugerem que as FAcs, independentemente da presença de carboidrato na estrutura, sofreram oxidação de maneiras diferentes, apresentando comportamentos bastante divergentes entre si. Hipotetizamos que a Fac de mamona atingiu um estado reversível de oxidação, sendo que a cisteína tornou-se ácido sulfênico. Já a FAc de rim bovino deve ter alcançado um estado irreversível de oxidação, com a cisteína na forma de ácido sulfínico ou sulfônico Abstract: Currently, much has been discovered about the mechanisms of control of cell growth and coordination, especially in eukaryotic cells. Among such mechanisms, the balance between the phosphorylation and dephosphorylation of proteins is the basis for the control of various biological events. The phosphatases are hydrolases using as substrate phosphate monoesters, and are widely distributed in nature. The acid phosphatases are enzymes that have better activity under acidic conditions. The goal of this work is to study the effect of hydrogen peroxide (H2O2) in two acid phosphatases which contains cysteine in their active site. Therefore, castor bean and bovine kidney acid phosphatases, both previously obtained in our laboratory, were used in this study. The first is a glycoprotein, whereas the second contains no carbohydrate in its structure. Enzyme assays using the synthetic substrate p-nitrophenylphosphate (pNPP) were performed at different incubation conditions and exposure of the enzymes. The castor bean acid phosphatase showed great resistance to H2O2, a fact that was independent of the presence of carbohydrate in their structure. Assays in the presence of dithiothreitol (DTT) or reduced glutathione (GSH) caused enzyme inhibition, but the combination of the GSH or DTT and H2O2 was able to completely recover enzyme activity. Exposure of castor bean acid phosphatase to DTT or GSH did not fully protect the catalytic site against oxidation by H2O2, although result in lower rates of inhibition by this compound. Exposure of the enzyme to H2O2 increased its inhibition. Acid phosphatase from bovine kidney showed high susceptibility to H2O2. The compounds DTT and GSH caused inhibition of its activity, as was observed for castor bean acid phosphatase. For this enzyme, the combination of DTT or GSH to H2O2 not reestablished enzyme activity, suggesting that there are differences in the oxidation process for this compound between the two phosphatases used in this work. Exposure of bovine kidney acid phosphatase to DTT or GSH was not effective in protecting the catalytic site, and the exposure of the enzyme to H2O2 increased the inhibition of enzyme activity. Our results suggest that the acid phosphatases, regardless of the presence of carbohydrate in the structure, underwent oxidation by different ways, presenting quite divergent behaviors. We hypothesize that the castor bean acid phosphatase reached a state of reversible oxidation, and cysteine became sulfenic acid. As for acid phosphatase bovine kidney must have reached a state of irreversible oxidation with cysteine as sulfonic or sulfinic acid Mestrado Bioquímica Mestra em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Vera Nisaka Solferini Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Mestrado

Orientador: Marcos Silveira Buckeridge Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Sementes de Sesbania virgata (Cav.) Pers. acumulam suas reservas de carbono no endosperma na forma de um polissacarídeo de parede celular, o galactomanano. A mobilização deste ocorre após a germinação e envolve três enzimas hidrolíticas, dentre elas a a-galactosidase. Além da reserva de carbono, há uma grande quantidade de corpos protéicos, no citoplasma das células endospérmicas, que constituem a principal reserva de nitrogênio nestas sementes. Para que ocorra a correta distribuição dos produtos de degradação das reservas deve haver sincronização entre os processos de degradação das reservas de carbono e nitrogênio, porém para compreender tais mecanismos, é necessário estudar aspectos do controle da produção e ação das enzimas responsáveis pela hidrólise das reservas. Buscando determinar em que ponto do metabolismo a semente de S. virgata se encontra em relação à produção destas enzimas hidrolíticas, durante e após a germinação, e supostamente os tecidos envolvidos nesta produção, sementes desta espécie foram embebidas em actinomicina-D (inibidor de transcrição) e cicloheximida (inibidor de tradução) e os efeitos destes inibidores verificados através da atividade e detecção da a-galactosidase no tegumento e endosperma destas sementes. Além disso, buscando verificar e relacionar o efeito do ácido abscísico, do etileno e dos açúcares na degradação das reservas após a germinação de S. virgata, sementes desta espécie foram embebidas em ABA, etileno, glucose e sacarose, e os efeitos destes foram verificados através dos teores protéicos, da atividade da a-galactosidase e da produção endógena de ABA e etileno nestas sementes. Como a presença de actinomicina-D e cicloheximida não inibiram a produção e a atividade da a-galactosidase no endosperma durante e após a germinação, sugere-se que a produção desta enzima ocorra principalmente durante a maturação da semente. Aparentemente, a partir do período pós-germinativo, a enzima pré-formada seria processada e ativada, para conseqüente degradação dos galactomananos, através de um processo proteolítico. Em contrapartida, como a presença deactinomicina-D e cicloheximida inibiram a degradação das proteínas de reserva no tegumento e endosperma e, inclusive, induziram a atividade da a-galactosidase nestes tecidos no final do processo de degradação dos galactomananos, sugerese a síntese de novo de proteases durante e após a germinação e a relação íntima destas enzimas com a degradação das proteínas de reserva e da a-galactosidase no final do processo de degradação dos galactomananos. Quanto aos hormônios, a presença de ABA exógeno retardou o início da degradação das proteínas de reserva no endosperma, assim como diminuiu a atividade da a-galactosidase no mesmo tecido no final do processo de degradação do galactomanano, sugerindo um efeito modulador deste hormônio durante a degradação das reservas, reprimindo a ação das enzimas hidrolíticas. A presença de etileno exógeno, entretanto, aumentou a atividade da a-galactosidase no endosperma e, inclusive, no tegumento no final do processo de degradação do galactomanano, sugerindo um efeito indutor deste hormônio na ativação e ação das enzimas hidrolíticas. De fato, analisando a produção endógena de ABA e etileno, observou-se um aumento brusco dos hormônios no período de mobilização das reservas, que pode estar relacionado à influência destes hormônios na atividade das enzimas hidrolíticas em sementes de S. virgata. Ainda, como ocorreram mudanças na produção de ABA e etileno endógeno na presença de glucose e sacarose, sugere-se uma relação íntima entre a via de sinalização destes hormônios e a dos açúcares, a fim de controlar o processo de degradação das reservas. Desta forma, estas evidências sugerem que o ABA e o etileno controlariam antagonicamente a mobilização de reservas em sementes de S. virgata, juntamente com os açúcares, através da ativação e ação das enzimas hidrolíticas, a fim de controlar o processo de degradação das proteínas e dos galactomananos, evitando a produção dos açúcares redutores e de sacarose em excesso durante o período pós-germinativo e garantindo o afluxo eficiente de carbono e nitrogênio para o desenvolvimento da plântula. Abstract: Seeds of Sesbania virgata (Cav.) Pers. have an endosperm which accumulates galactomannan as a storage polysaccharide in the cell walls that is hydrolysed after germination by three enzymes (a-galactosidase, endo-ß-mannanase and exo-ß-mannosidase). Besides the storage of carbon, there is a great amount of protein bodies in the cytoplasm of endospermic cells, which play the major role as a nitrogen reserve in this seed. It is likely that a synchronization between the process of galactomannan and protein degradation occurs for a more efficient distribution and use of the storage degradation products. However, to understand these mechanisms, it is necessary to study aspects of the production and action control of the hydrolytic enzymes responsible for the mobilisation of these reserves. Aiming to determine in which point of the metabolism the seed of S. virgata is in relation to the production of the hydrolytic enzymes, during and after germination, and the supposed tissues involved in this production, seeds of this specie were imbibed in actinomycin-D (transcription inhibitor) and cycloheximide (translation inhibitor), and the effects of these inhibitors verified thought the a-galactosidase activity and detection in the testa and endosperm of these seeds. Besides of this, for to verify and relate the effects of abscisic acid, ethylene and sugars on the reserves degradation after germination of the S. virgata, seeds of this specie were imbibed in ABA, ethylene, glucose and sucrose, and the effects of these were verified through the protein content, a-galactosidase activity and endogenous production of ABA and ethylene in this seeds. In the presence of actinomycin-D and cycloheximide, the production and activity of the a- galactosidase were not inhibited during and after germination, suggesting that the production of this enzyme occurs principally during the maturation of the seed. Apparently, after the germination, this enzyme is processed by proteolysis, so that it becomes activated to perform galactomannan degradation. On the other hand, the presence of actinomycin-D and cycloheximide inhibited the protein degradation in the testa and endosperm and at the same time induced the a-galactosidaseactivity in the same tissues at the final steps of the galactomannan degradation process. This suggests the existence of synthesis de novo of the proteases during and after germination and a possible relationship between the storage protein and galactomannan mobilisation. Regarding the hormones, the presence of exogenous ABA retarded the beginning of the storage protein degradation in the endosperm and also decreased a-galactosidase activity in the same tissue at the end of galactomannan degradation. This suggests that there is a regulator effect of this hormone during the storage degradation, repressing the enzymes action. In the presence of exogenous ethylene an increase in the a-galactosidase activity in the endosperm and in the testa were observed at the end of galactomannan degradation, suggesting an inducing effect of this hormone on the hydrolytic enzymes. The finding of endogenous ABA and ethylene production, observed during the period of the storage mobilisation, give support to the above raised hypothesis that the two hormones participate in the control of the hydrolytic enzyme activities in seeds of S. virgata. Furthermore, the changes observed in the endogenous ABA and ethylene production in the presence of glucose and sucrose, suggested a relation between the signaling pathway of these hormones and the sugars signaling, controlling the process of storage degradation. Thus, our results add evidence to suggest that ABA and ethylene antagonistically control the storage mobilisation in seeds of S. virgata, together with the sugars, through the hydrolytic enzymes activation, controlling the process of storage protein and galactomannan degradation, in other to avoiding the excess production of reductor sugars and sucrose during the post-germinative period and assuring the efficient afflux of the carbon and nitrogen to the seedling development. Doutorado Biologia Celular Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Hernandes Faustino de Carvalho Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: O hialuronam (ou ácido hialurônico, AR) é um importante componente do espaço matrice1ular, estando presente tanto na matriz extracelular, como na superficie das células. Suas funções são variadas, mas estão sempre associadas à criação de um espaço pouco denso e extremamente hidratado, permitindo a proliferação e migração celular, típicas de processos como a embriogênese, cicatrização e invasão tumoral. Neste trabalho foi desenvolvido um estudo do metabolismo do ácido hialurônico na próstata ventral de ratos. Numa primeira etapa foi verificado o efeito da castração por 7, 14 e 21 dias sobre. o conteúdo e distribuição do AR, assim como uma avaliação do papel da HA. sintase 2 (HAS2) e da hialuronidase 1 (Hyall). Para tanto, foram empregados ensaios de marcação tecidual de AH com a utilização de sonda marcada com fluoresceína, quantificação deAH por ensaio competitivo, determinação dos tamanhos das cadeias de AH por cromatografia em gel filtração, determinação dos níveis de expressão das enzimas HAS2 e Hyall por Real Time PCR, localização desta expressão por hibridação in situ e localização do receptor CD44 por imunohistoquímica. Na segunda etapa, foram estudadas células musculares lisas (CML) isoladas de ratos e mantidas em cultura, quanto à expressão de marcadores da diferenciação deste tipo celular e quanto à produção de AH, utilizando. imunocitoquímica e RT-PCR para marcadores de CML, imunocitoquímica para o receptor CD44, quantificação de AH por ensaio competitivo e por medida de área de coat. Os resultados demonstram que o AR é encontrado tanto no epitélio quanto no estroma prostático e que há uma redução no conteúdo total de AR na próstata ventral, com um predomínio de cadeias curtas. Além disto, foi verificado que estas modificações são, ao menos em parte, devidas à manutenção da expressão da HAS2 e um aumento na expressão da Hyall. Foi observado também, por outro lado, que ocorre uma diminuição na atividade da hialuronidase lisossomal. Experimentos de hibridação in situ demonstraram a presença da HAS2 no epitélio e em diversas células do estroma, com exceção das células musculares lisas e endoteliais. Com a castração, a expressão da HAS2 e da Hyall aumenta no estroma. Foi demonstrado também que as células musculares lisas prostáticas de rato em cultura mantêm a expressão de marcadores da diferenciação (smoothelin, SM22 e calponina) e que esta expressão não foi dependente de insulina-nemtestosterotta. A concentração de ácido hialurônico no meio de cultura variou nas diferentes passagens (0-8), assim como variou o tamanho do coa! ao redor das células. Surpreendentemente, nas passagens 3 e 4 houve uma queda brusca na síntese de HA Os- resultados demonstram uma modificação no padrão expressão e de distribuição do ácido hialurônico na próstata ventral de ratos, com o comprometimento de diversos tipos celulares, que resultam na diminuição do conteúdo total. Conclui-se também que células musculares lisas em cultura mantêm-se diferenciadas e que são capazes de sintetizar e formar um coa! na sua superficie Abstract: Hyaluronan (or hyaluronic acid, HA) is an important component ofthe matricellularspace. It is found in both extracelular matrix and at the cell surface. It has many functions, but is always associated with the establishment of a looser and hydrated space, allowing the cells to proliferate and migrate, in processes such as embryogenesis, healing and tumor invasion. In this work, we have studied some aspects ofHA metabolism in the rat ventral prostate. In a firt series of experiments, the effect of castration for 7, 14 and 21 days on the content and distribution of HA, as well as an evaluation of the function of HA synthase 2 (HAS2) and hyaluronidase 1 (Hyall). For this, were done tecidual HA localization with fluorescein probe, measurement of HA content in a competitive binding assay, determination of HA chain size variation using gel filtration cromatography, determination of expression levels ofHAS2 and Hyall enzymes by Real Time PCR, localization ofthese expression by in situ hybridization and CD44 localization by immunohistochemistry. In a second series of experiments, the rat prostatic smooth musc1e cells (SMC) were isolated and maintainedin vitro for the study of the expression of molecular markers of the differentiated state and of the production of HA, using immunohistochemistry e RT-PCR for SMC markers, immunocitochemistry for CD44 receptor, HA quantification by competitive bindingassay and measurement of coat area. The results demonstrate that HA is found in both epitheJium and stroma and that there is a decrease in the total amount of HA in the organ afier castration, with a predominance of short chains. Besides, it was observed that these modifications are, at least in part, due to a sustained expression of HAS2 and an increased expression of Hyall. On the other hand, a reduction in lysosomal hyaluronidase activity was also observed. In situ hybridization showed the presence of HAS2 mRNA in both epithelium and stroma. Different stromal cells, with the exception of SMC and endothelial cells, expressed HAS2. Castration resulted in increased expression of HAS2 and Hyall in the stroma. It was also demonstrated that SMC kept inculture express the differentiation markers smoothelin, SM22 and calponin and that this expression pattern was not dependent on either insulin or testosterone. The concentration of HA in the culture medium and the size of the cell coat varied as cells were subcultured through passages 0-8. Surprisingly; a severe drop in HA synthesis was observed at passages 3 and 4. The results demonstrate a modification in the pattem of expression and distribution of HA in the rat ventral prostate in response to castration, and the involvement of different cell types in the decreasing amount ofHA. lt is also concluded that SMC preserve the differentiated state in culture and that they are able to assemble a HA coat Doutorado Biologia Celular Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientador : Ivany Ferraz Marques Valio Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: O presente trabalho teve como objetivos principais .estudar os efeitos térmicos e fotoperiódicos sobre o desenvolvimento, produção e..alguns aspectos bioquímicos do Jacatupé. No estudo de épocas de plantio, as plantas apresentaram melhora comportamento no plantio de primavera, onde se obteve um bom rendimento de sementes e raízes ruberosas, ao contrário do plantio de outono, cujos rendimentos de vagens e sementes foram insignificantes, muito embora a produção de raízes tenha sido superior em relação ao plantio de primavera. As práticas da desfolha em 33% e a remoção de gemas ou ramos laterais não influenciaram as produções de vagens e sementes, ao contrário do desfolhamento em 66% que reduziu acentuadamente o rendimento destes componentes de produção, sobretudo no plantio de primavera. No plantio de outono, 33% de desfolha combinada com a remoção de inflorescência proporcionaram maior peso de raízes, o mesmo ocorrendo com o desfolhamento em 33% no plantio de primavera. Os acúmulos de açúcares solúveis totais e redutores nas sementes e raízes foram maiores no plantio de primavera, enquanto o acúmulo de amido nas raízes permaneceu estável nas duas épocas de plantio. Em relação aos compostos nitrogenados, constataram-se maiores níveis de proteínas e aminoácidos no plantio de outono, à excessão das sementes no ponto de maturidade fisio1ógica, cujo nível proteico foi maior no plantio de primavera... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital Abstract: Not informed. Doutorado Doutor em Ciências Biológicas

Orientador: Thomas Michael Lewinsohn Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas. Instituto de Biologia Resumo: Esta tese foi dividida em dois capítulos. No capítulo I, foram analisados os fatores responsáveis pela variação da densidade de insetos por planta nas populações de Senecio brasiliensis (Asteraceae), bem como a relação entre densidade local dos insetos e sua distribuição geográfica (fteqüência de ocorrência nas populações de plantas). No capítulo n, foram analisados os fatores responsáveis pela variação da riqueza de insetos por planta. Estudou-se também o efeito da distância entre populações de plantas e do tamanho das populações de hospedeiras sobre a similaridade na composição de insetos. O trabalho foi realizado em duas regiões no Sudeste do Brasil. Na região denominada Norte (Estado de Minas Gerais), foram amostradas 4 localidades e na região denominada Sul (Estados de São Paulo e Paraná), 5 localidades. Em cada localidade, foi amostrado um par de manchas (populações discretas) de Senecio brasiliensis, sendo uma grande e uma pequena. Em cada mancha, foram amostradas 30 plantas e, de cada uma destas, 30 capítulos, que foram dissecados. Foram encontradas dez espécies de insetos, sendo oito endófagos, um galhador e um predador. As espécies pertencem às famílias Cecidomyiidae, Agromyzidae (Diptera), Pyralidae, Tortricidae e Pterophoridae (Lepidoptera). A variação da densidade e riqueza de insetos por planta foi estudada em relação às variáveis região, localidade, complexi~e da vegetação no entorno da mancha, tamanho da mancha, densidade de plantas na mancha e tamanho das plantas. Os fatores mais importantes na variação da densidade de insetos foram a complexidade da vegetação no entorno das manchas e a variável localidade, que reflete particularidades históricas e ecológicas de cada área. As variáveis que medem a concentração de recursos das plantas (tamanho da mancha, densidade de plantas e tamanho das plantas) não afetaram as densidades da maioria das espécies, poss~velmente devido ao hábito generalista destas e à saturação da capacidade reprodutiva. Somente Melanagromyza erechtitidis (Agromyzidae), o inseto mais especialista encontrado, softeu efeito significativo da densidade e do tamanho das pl~tas. Foi observada cada espécie de inseto. A riqueaza de insetos por planta também softeu efeito significativo das variáveis vegetação no entorno e localidade. Existe uma maior riqueza de espécies em plantas com maior complexidade de vegetação ao seu redor. Este resultado pode estar relacionado ao hábito generalista das espécies. A variável localidade reflete variações em particularidades e no histórico de colonização de cada área. As variáveis que medem a concentração de recursos das plantas também não afetaram a riqueza de insetos por planta. Foi encontrado um efeito significativo da distância entre manchas sobre a similaridade faunística destas, mostrando que manchas mais distantes apresentavam menor similaridade. Manchas de tamanhos semelhantes apresentaram maior similaridade faunística do que manchas de diferentestamanhos. Os resultados mostram que, tanto variáveis locais das manchas, quanto fatores de grande escala, relacionados à distribuição espacial da planta hospedeira e dos insetos, são importantes na determinação da densidade local, da riqueza e da composição de espécies de insetos de capítulos nas manchas de Senecio brasiliensis Abstract: This thesis was divided in two chapters. In chapter I, I investigated the factors responsible for the variation of insects density per plant in Senecio brasiliensis populations. I also related the insects local density and its geographic distribution. In chapter 11,I ana1yzedthe factors responsible for the variation of insect richness per plantoI also investigatedthe effect of the distance among patches and the patches size on the similarity of the insects composition. The field work was carried out in two regions in Southem Brazil. I sampled four sites in the region named North (Minas Gerais state), and five in the region named South (São Paulo and Paraná states). In each locality I sampled a pair of patches (discrete populations) of Senecio brasiliensis, one large and one sma1l.In each patch I sampled 30 plants and ftom each one 30 flowerheads were dissected. Ten species of insects were obtained: eight endophagous, one galler and one predator species. The species belong to the families Cecidomyiidae, Agromyzidae (Diptera), Pyralidae, Tortricidae and Pterophoridae (Lepidoptera). I analyzed the variation of insect density and richness per plant in relation to region, locality, vegetation complexity surrounding the patch, patch size, plant density in the patches, and plant size. The two main factors explaining the insects density variability were the complexity of the vegetation surrounding the p~tches and loca1ity,which reflects characteristics of each area. The variables that estimate the plant resource concentration (patch size, plant density and plant size) did not interfere in most of the insect species densities, probably because of their generalist habit and the saturation on the reproductive capacity. OnlyMelanagromyza erechtitidis (Agromyzidae),the most specialist insect species, was significantly influencedby plants density and size. I detected a significant positive relationship between the average density of insects per plant, per patch and its geographic distribution (number of localities in whiçh they occurred) for each insect species. Both the complexity of vegetation surrounding the patches and locality also presented a significant effect on the insects richness per planto There !S a higher insect richness in plants surrounded by more complex vegetation. This result may be related to the generalist habit of these species. The loca1ityvariable reflects, for each arca, its particularities variations and colonization history. The variables reflecting resource concentration in the host plant (patch size,plant density and plant size) did not interfere with the insects richness per planto I found a significant effect of the distance among patches on their faunistic similarity, with more distant patches showing less similarity. Similar sized patches showed a higher faunistic similarity than different sized patches. The results show that both plants local characteristics and large scale factors related to the spatial distribution of the host plant and insects are important in determining the local density, richness and composition of insects inhabiting Senecio brasiliensis flowerheads Mestrado Mestre em Ecologia

Orientador: Eleonore Zulnara Freire Setz Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A fragmentação e a perda de hábitats são as principais ameaças à conservação da diversidade biológica, especialmente em países megadiversos, para onde as previsões apontam um grande número de extinções. A fauna de médio e grande porte, dada as suas inerentes necessidades de área e de recursos, torna-se particularmente vulnerável a estes eventos de extinção. No entanto, o grupo preenche uma importante parcela na dinâmica dos ecossistemas. Animais realizam importantes papéis, como por exemplo, a dispersão, a escarificação e a predação de sementes; a polinização, a herbivoria, a regulação de populações, dentre outros. Logo, o empobrecimento da fauna, em termos de sua riqueza e abundância, em uma floresta, desencadeia mudanças em sua estrutura e composição florística, podendo inclusive levar espécies vegetais ao desaparecimento. Inúmeros trabalhos no campo da Biologia da Conservação vêm sendo desenvolvidos com o objetivo de compreender como a fragmentação age sobre as espécies e os ecossistemas e como estes efeitos poderiam ser minimizados. No presente estudo, três situações em diferentes contextos envolvidos na conservação da fauna de médio e grande porte são abordadas: (1) a conservação desta parcela da comunidade em uma Área Protegida sob intenso uso humano, no caso, uma Terra Indígena; (2) as respostas desta comunidade frente a uma paisagem parcialmente construída em uma Floresta Nacional; e por fim, (3) a efetividade de diferentes modelos de Áreas Protegidas na conservação de mamíferos de médio e grande porte, tendo sempre como parâmetros, a riqueza e a abundância da comunidade. Como resultados, a Terra Indígena apresentou a riqueza e a abundância da fauna de médio e grande porte inferior à esperada. Na Floresta Nacional, possivelmente devido às características particulares da paisagem que proporcionam certo grau de heterogeneidade e existência de corredores, não foi possível detectar um uso diferencial da fauna entre os ecossistemas naturais e construídos. E todas as Áreas Protegidas, ainda que de diferentes modelos, apresentaram pelo menos um evento de extinção. As unidades sujeitas ao uso humano direto, a Terra Indígena e a Floresta Nacional, apresentaram 4/5 e 3/4 da riqueza de espécies esperada Abstract: Fragmentation and loss of habitats are the main threats to biological diversity conservation, especially in the "megadiverse¿ countries, where forecasts signal a great number of extinctions. Medium and large fauna, given their inherent needs in terms of area and resources, become particularly vulnerable to extinction events. However, the group is vital in the ecosystems¿ functionality. Animals play important roles in forests, for example, in dispersion, scarification and predation of seeds; pollination, herbivory, and population regulation, among others. Therefore the impoverishment of forest fauna, in terms of richness and abundance, triggers changes in its structure and flora composition, possibly even leading to the disappearance of plant species. Countless works in the field of conservation biology have been developed with the objective of understanding how fragmentation acts on the species and the ecosystems and how these effects could be minimized. The present study approaches three situations in different contexts, yet directly involved in the conservation of medium and large fauna, namely: (1) the conservation of this community in a Protected Area, but under intense use by humans, i.e. indigenous territory or land; (2) this community's in a landscape partially built in a National Forest; and, finally, (3) the effectiveness of different models of Protected Areas in the conservation of medium and large mammals, always maintaining as parameters the richness and abundance of the community. In the indigenous land, richness and abundance of the medium and large fauna were lower than expected. In the National Forest, due to the peculiar characteristics of the landscape, which provides a certain degree of heterogeneity and the existence of corridors, it was not possible to detect a diferential fauna use between the natural and constructed ecosystems. Furthermore, all the Protected Areas, although different models, presented at least one extinction event. The other two units, subject to direct human use, Indigenous Land and National Forest, presented 4/5 and 3/4 of the expected species richness Doutorado Ecologia Doutor em Ecologia

Orientador : Mundayatan Haridasan Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Compararam-se os teores de nutrientes nos solos e nas folhas de espécies arbóreas de duas matas mesófilas semidecíduas, no Município de Uberlândia, MG, a fim de determinar a influência da fertilidade do solo sobre a nutrição mineral dessas comunidades. Foi realizado um levantamento fitossociológico de espécies arbóreas (circunferência a altura do peito igualou maior do que 10 cm) , em 50 parcelas de 10 m x 10 m, em cada mata. Uma na Estação Ecológica do Panga e outra na Fazenda Experimental do Glória, ambas pertencendo à Universidade Federal de Uberlândia. Foram analisadas amostras de solo dos horizontes A~ e As, de cada parcela, quanto à textura, ao teor de matéria orgânica, ao pH e às disponibilidades de nutrientes. Foram analisadas amostras de folhas de todas as espécies arbóreas encontradas nas duas áreas para determinar as concentrações de N, P, K, Ca, Mg, Fe, Mn, Zn, Cu e Al. Solos e folhas foram coletados simultaneamente no final da estação chuvosa. Foram encontradas 151 espécies, 104 gêneros e 53 famílias nas duas matas. Na mata do Panga, foram encontradas 93 espécies, 73 gêneros e 42 famílias, com uma densidade de 2202 árvores ha-~ e área basal de 23,8 m2 ha-1. Na mata do Glória, levantaram-se 96 espécies, 78 gêneros e 44 famílias, com 1632 árvores e área basal de 28 m2 ha-1. Foram comuns às duas matas 38 espécies, 47 gêneros e 36 famílias. o índice de diversidade de Shannon para espécies foi de 3,7 na mata do Panga e 4,1, na do Glória. As cinco espécies mais importantes na mata do Panga foram: Lithraea molleoides, Chrysophyllum marginatum, Campomanesia velutina, Alibertia sessilis e Terminalia brasiliensis, representando 30% do total do índice de valor de importância (IVI). Ocotea corymbosa, Cryptocarya moscat, Machaerium villosum, Copaifera langsdorfii e Casearia grandiflora, as cinco espécies mais importantes da mata do Glória representaram apenas 20% do total de IVI. o solo sob a mata do Panga apresentou textura franco arenosa, enquanto o do Glória, argilosa. o pH do solo, a disponibilidade de Ca e de Mn , e a saturação de bases no horizonte AJ. foram maiores na mata do Panga do que na do Glória. o teor de matéria orgânica, a saturação de AI e a disponibilidadede Fe, Mn, Zn, Cu e AI foram maiores no solo do Glória. Os solos das duas áreas não apresentaram diferenças significativas nos teores de K e Mg, no horizonte AJ.. O único nutriente em que ocorreu uma inversão nas disponibilidades entre os horizontes AJ. e As, nos solos das duas matas, foi o Mn. O solo do Glória apresentou maiores teores de Mn no horizonte As do que o solo do Panga. As espécies exclusivas e de maior IVI do Panga tiveram maiores teores de Ca e de K, e menores de Mg do que as do Glória. Foram encontrados teores foliares de 15,7 a 59,5 mg/g de Ca em 42 espécies do Panga, enquanto a maioria das espécies da mata do Glória teve menos de 10,8 mg/g. As espécies comuns às duas matas mantiveram um melhor equilíbrio nas concentrações foliares de macronutrientes catiônicos. K. Ca e Mg, do que as espécies exclusivas e de maior IV!. Não foram observadas diferenças significativas entre as duas comunidades nas concentrações foliares de N e P. A relação P/N foi muito baixa na maioria das espécies nas duas matas, parecendo indicar que o P é, talvez, o macronutriente mais limitante nos solos dessas duas fitocenoses. Situadas em solo com pH mais elevado, as espécies exclusivas e de maior IVI do Panga, apresentaram menores teores de Mn do que as espécies da mata do Glória. Em comparação com outras fitocenoses de cerrado e cerradões brasileiros, encontrou-se um número maior de acumuladoras de Mn com concentrações foliares maiores que 300 mg/kg nas duas matas estudadas: 31 espécies no Glória e 11 no Panga. Ao contrário, encontrou-se um número menor de espécies acumuladoras de AI nas duas matas: 5 espécies no Panga e 7 no Glória Abstract: The soil availability and foliar concentrations of nutrients in the tree species of two mesophytic semideciduous forests in Triângulo Mineiro, Minas Gerais, were compared to determine the influence of soil fertility on the mineral nutrition of these two communities. Phytosociological surveys of tree especies (circunference at breast height greater than or egual to 10 cm) were carried out in fifty 10 m x 10 m plots in each forest, one at Estação Ecológica do Panga and the other at Fazenda Experimental do Glória, both properties belonging to the Universidade Federal de Uberlândia. Soil samples from the A1 and A3 horizons from each plot were analyzed to determine soil texture, pH, organic matter content and the availability of plant nutrients. Leaf samples from alI tree species in the two areas were analyzed to determine their concentrations of N, P, K, Ca, Mg, Fe, Mn, Zn, Cu and AI. The soil and leaf samples were collected at the end of the rainy season. A total of 151 species belonging to 104 genera and 53 families were present in the two forests. Ninety-three species belonging to 73 genera and 42 families, with a tree density of 2202 individual ha-1 and a basal area of 23.8 m2 h-1, were encountered in the forest community at Panga and ninety-six species belonging to 78 genera and 44 families, with a tree density of 1632 individuaIs ha-1 and a basal area of 28 m2 ha-1 , in the forest community at Glória. Thirty-eight species belonging to 47 genera and 36 familias were common to both communities. The Shannon diversity index for species was 3.7 at Panga and 4.1 at Glória. The five most important species at Panga were Lithraea molleoides, Chrysophyllum marginatum, Campomanesia velutina, Alibertia sessilis and Terminalia brasiliensis, accounting for 30% of the total of the importance value index. Ocotea corymboBa, Cryptocarya moschata ta, Machaerium villosum, Copaifera langsdorfii and Casearia grandiflora, the five most important species at Glória accounted for only 20% of the total of the importance value index. The soil at Panga was sandy loam and the soil at Glória was clayey. Soil pH, available Ca and Mn, and base saturation were higher in the A~ horizon at Panga than at Glória. Organic matter content, saturation of AI and availabiity of Fe, Zn, Cu and AI were higher at Glória. There was no significant difference between the two soils in the availability of K and Mg in the A1 horizon. The only inversion in these differences at lower depths occurred in Mn availability. The soil at Glória showed significantly higher concentrations of Mn in the As horizon than the soil at Panga. Species with the highest importance values at Panga and those exclusive to Panga had higher foliar concentrations of Ca and K and lower concentrations of Mg than those at Glória. The Ca concentrations in the 42 tree species at Panga varied from 15.7 to 59.5 mg/g while most of the species at Glória had concentrations lower than 10.8 mg/g. Species common to both areas showed a better equilibrium among the foliar concentrations of the major nutrient cations K, Ca and Mg, than the exclusive ones and those with the highest importance values. There were no significant differences between the two communities in the foliar concentrations of N and P. The P/N ratio was very low in most of the species in both areas, which indicates that P was probably the most limiting major nutrient in these two ecosystems. The species exclusive to Panga and those with highest importance values showed lower Mn concentrations than those at Glória, as would be expected from the higher pH of the soil at the former site. As compared to cerrado sensu stricto and cerradão commun ities of central Brazil, a larger number of manganese-accumulating species with foliar concentrations above 300 mg!kg (31 at Glória and 11 at Panga) was detected in the two areas. On the contrary, ony a few Al-accumulating species (five at Panga e 7 at Glória) were present in the two communities Doutorado Ecologia Doutor em Ciências

Orientador: Alexandra Christine Helena Frankland Sawaya Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: No Brasil, as espécies Mikania glomerata e Mikania laevigata, conhecidas popularmente como guaco, são muito utilizadas na forma de xarope devido ao seu efeito broncodilatador. A comercialização de medicamentos fitoterápicos no Brasil é regida por diversas legislações que primam pela qualidade destes, porém a qualidade da matéria-prima pode interferir de forma fundamental na segurança e eficácia do medicamento. Diante disso, este trabalho realizou um estudo de estabilidade do extrato hidroalcoólico das espécies citadas, conforme preconiza o "Guia para a realização de estudos de estabilidade de medicamentos" publicado pela ANVISA na RE 01, de 29 de julho de 2005. Folhas das duas espécies de Mikania foram secas em estufa a 40 °C e em liofilizador, foram preparados extratos hidroalcoólicos por maceração, que foram submetidos a estudo de estabilidade acelerado por 6 meses, e estudo de estabilidade de longa duração por 12 meses. As amostras ficaram armazenadas em diferentes temperaturas (22°C, 30°C e 40°C), com e sem incidência de luz, e a cada 3 meses foram analisadas por UHPLC-MS, para acompanhar seu perfil químico, quantificar a cumarina e ácido clorogênico. Em todas as condições do estudo, observou-se uma redução do teor do marcador químico desta espécie, a cumarina, maior que 5 %, sendo assim, não é possível atribuir o prazo de validade de 2 anos para extratos hidroalcoólicos desta espécie Abstract: In Brazil, the species Mikania glomerata and Mikania laevigata, known popularly as guaco, are widely used in syrup form due to its bronchodilator effect. The marketing of herbal medicines in Brazil is governed by various laws that guarantee the quality of these, but the quality of the raw material can interfere, fundamental safety and efficacy. Therefore, a stability study of the hydro alcoholic extract of the species mentioned was conducted as recommended by the "Guidelines for conducting stability studies of drugs" published by ANVISA in RE 01 of July 29, 2005. Leaves of both species of Mikania were dried in an oven at 40 ° C and by freeze drying, hydro alcoholic extracts prepared by maceration, which underwent accelerated stability study of 6 months, and long term stability study for 12 months. Samples were stored in different temperatures (22 ° C, 30 ° C and 40 ° C) with and without incident light, and every 3 months were analyzed by UHPLC-MS to monitor their chemical profile, quantifying coumarin and chlorogenic acid. At all conditions of the study, we observed a reduction of the content of the chemical marker of this species, coumarin, greater than 5%, so a shelf life of 2 years cannot be assigned to the hydro alcoholic extracts of these species Mestrado Fármacos, Medicamentos e Insumos para Saúde Mestra em Biociências e Tecnologia de Produtos Bioativos

Orientadores: Aureo Tatsumi Yamada, Wirla Maria da Silva Cunha Tamashiro Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Durante a gestação de roedores é observado, na região mesometria! de cada sítio de desenvolvimento embrionário, um acúmulo transitório de células linfocitárias da Hnhagem natural killer (NK). Estas células Natural Ki!ler de ambiente uterino (NK-u) apesar de expressarem antígenos de superfície semelhante as demais Nk, não desencadeiam a atividade cito!ítica como as Nk de sangue circulante. Este comportamento peculiar não foi ainda explicado o que vem dificultando a compreensão das possíveis participações destas células na imunoiogia da reprodução. A citoquímica de lectina OSA (Dofichos bíflorus aggfutin), tem sido utilizada para a marcação se!etiva das células NK-u de camundongos. Uma vez que esta lectina não reage com outros linfócitos, os glicoconjugados reativos a [ectina OBA, localizados na superfície das NK-u, poderiam ser moléculas especificas desta Hnhagem celular. Porém estes glicoconjugados não foram ainda isolados ou caracterizados. Neste trabalho, propôs-se a obtenção de anticorpos específicos para o reconhecimento de céiulas Nku de camundongos além de procurar identificar moléculas de expressão específica destas células. Para tanto as cé!ulas NK-u, isoladas de úteros de camundongos prenhes foram utilizadas como inócu!o antigênico em machos da mesma espécie. Apenas um dentre os seis camundongos imunizados produziu anticorpos que reagiram com as células NK_u, por meio de testes imunocitoquímícos. Do animal receptor que apresentou resposta imune, produzindo anticorpos reativos às células NK-u, foram obtidos os linfócitos espJênicos empregados na obtenção de hibridomas através da fusão com céluJas tumorais. Quatro hibridomas foram selecionados para a obtenção de líquido ascítico contendo anticorpos monoclonais. A especifiddade dos antícorpos obtidos foi avaliada por métodos imunocitoquímicos e imunoquímicos (westem b/otting). Entre os quatro clones selecionados (2C6.289, 2C6.2E4 2C4.1C10 e 2C4.5A10), dois apresentaram marcação tanto na superfície quanto no conteúdo citoplasmátíco das NK-u (2C4.1C10. 2C4.5A10), enquanto os outros dois marcaram apenas o conteúdo citoplasmático (2C6.2S9, 2C6.2E4). Pelos testes imunoquímícos realizados, os antícorpos produzidos pelos dones 2C4.1C10 e 2C4.5A 10 identificaram bandas de 52,0 KDa e 53,8 KOa e os anticorpos dos dones 2C6.289 e 2C6.2E4 identificaram uma banda de 41,4 KDa, que apresentam correspondência com bandas positivas à lectina DBA. o fato da imunização intraespécíe, com o uso de células NK-u inteiras ter resultado na produção de anticorpos contra estas células, toma-se a primeira evidência direta de que as células NK-u fazem parte de uma linhagem específica da gestação, as quais expressam moléculas exclusivas, reconhecidas como "non-self' pelos machos da mesma espécie. Dentre os c!ones de hibridomas produtores de anticorpos monoclonais aqueles que reconhecem estruturas de superfície das células NK-u podem ser utilizados como potenciais marca dores dessas células em camundongos, uma vez que reconhecem giicoconjugados também reativos à Jectina DBA, que seriam expressos exclusivamente por estas células Abstract: During the pregnancy in the rodents a transient accumulation of natural killer (NK) cells 1s seen In the uterus. These cells found in the uterine environment express the surface antigen common to drculating NK (cNK) cells, but they do not show some cytokine receptors and do not trigger the cytoJytíc activity during normal pregnancy. Such a peculiar behavior of uNK ceH has not beeo fuUy explained aod their role io the immunoiogy of reproduction 1s stH! unc!ear. It has been reported the use of OBA (Dofichos bifJorus) lectin cytochernistry for selective staining of mouse uNK cel!. Since thís lectin does not react with othar !ymphocytes, the g!ycoconjugates reactive to OBA iectin localized on uNK cel! surface could be specific mo!ecules of such a cal! lineage. However, the glycoconjugates reactive to OBA lectin have no! been isolated ar characterized yet. The present work was proposed to obtain antibodies specific agaínst mouse uNK cel! and iooking identify mo!ecules of specific expression for. In this aim, the whole uNK ce!ls isolated from pregnant mice uterus were used as antigen and male mice of sarne strain, as host. From the animal producing antibodies against mouse uNK cell were collected the spleen and further processed to isolate the Iymphoeytes dones producing the monoclonal antibody (mAb) and the hybridomas of four clones were producad the ascites. The specificities of antibodies were evaluated by immunocytochemistry and immunoblotting. Only one among six immunized miee produced antibody against mouse uNK eells evaluated by immunocytochemistry. Four dones showing two different JabeJing pattern by immunocytochemistry were chosen to obtain ascites. The two (2C6.2B9, 2C6.2E4) clones producing mAS against uNK ceU cytop!asm eontents showed one positive band (41,4 KDa) in the westem blot matched to the DBA lectin positive bands. The other two ciones (2C4.1C10 e 2C4.5A 10) producJng mAb reacting on ceil surface and cytoplasm contents showed two positive bands (52,0 KDa and 53,8 KDa) corresponding to OBA lectin positive bands. Therefore, the antibody production against uNK cells afier intra-specie inoculation is the first direct evidence showíng uNK cells as being a cel! !ineage specific of pregnancy, which express specific molecules recognízed as non-self by male of the sarne strains. Among the mAb obtained, those reactive to antigen localized on call surface could be used as specific ceH marker of uNK once recognize the same glycoconjugates reactive to DBA lectin tha! seems to be expressed only by this cell Mestrado Histologia Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientadores: Fernando Roberto Martins, Roque Cielo Filho Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: O padrão de utilização de recursos e a teoria de nichos ecológicos constituem elementos importantes na compreensão de como comunidades ecológicas são estruturadas. A maneira como os recursos são partilhados entre as espécies é refletida na sua distribuição de abundância. Abundância e diversidade de espécie são resultantes de processos que determinam as comunidades. Um padrão frequentemente observado é a relação unimodal entre diversidade e produtividade. Processos competitivos são inferidos na determinação da diversidade ao longo do gradiente de produtividade. Devido à abundância das espécies serem resultantes de interações biológicas, os modelos de distribuição de abundância de espécies (DAE) permitem inferir na maneira como o espaço de nicho é partilhado. Utilizamos os modelos de DAE proposto por Tokeshi e índices de concentração de dominância e equabilidade para testar por meio de regressões como a riqueza, biomassa e equabilidade variam ao longo de um gradiente de estresse nutricional definido pela concentração de alumínio no solo. Verificamos um padrão linear negativo entre a riqueza e gradiente de estresse nutricional com fragmentos de floresta estacional semidecídua no extremo de menor estresse e cerradão no extremo oposto do gradiente. A biomassa apresentou um padrão em forma de "U" quando relacionado ao mesmo gradiente. Os índices e os modelos foram condizentes na verificação da concentração de dominância por poucas espécies nos extremos do gradiente, porém somente o índice Evar verificou a maior equabilidade nos valores intermediários do gradiente. Nossos resultados permitiram inferir que tal gradiente foi importante na determinação da riqueza e biomassa das comunidades. Os modelos e índices permitiram verificar o padrão de partilha de nicho, porém não foi possível afirmar o processo que resultou tal partilha Abstract: The resource utilization patterns and ecological niche theory are important in understand how communities are assembled. The way how resources are apportioned between species are showed in its abundance distribution. Abundance and diversity are outcome of process that structure communities. The pattern frequently found is a "hump-back" relationship between diversity and productivity. Competitive processes are inferred in determination of diversity along productivity gradient. Due to species abundance are outcome of biological interaction, models of species abundance distribution (SAD) allow us to infer how niche are apportioned. We use Tokeshi's SADs models and dominance and evenness index to test, using regression, how richness, biomass and evenness change along stress nutrition gradient defined by aluminium concentration in soil. We verified a negative linear pattern between richness and nutrition stress gradient with semideciduous forest fragment at extreme of lesser stress gradient and cerradão at opposite extreme gradient. The biomass showed a "U" shape pattern along the same gradient. The index and SADs models showed similar result measuring dominance of few species at extremes of gradient, however only Evar index measured more evenness between extremes of gradient. Our results allow inferring that such gradient war important to define community richness and biomass. The models and index allowed testing the patterns of niche apportionment, however its do not allowed us confirm the process of niche apportionment Mestrado Ecologia Mestre em Ecologia

Orientador : Maria Luiza Silveira Mello Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Alterações fenotípicas nucleares, encontradas nas células dos túbulos de Malpighi de T. infestans, após tratamento com metais poluentes, cobre e mercúrio, foram detectadas em preparados citológicos, obtidos a partir de dois procedimentos experimentais básicos: incubação dos órgãos em soluções contendo os íons metálicos ou injeção de soluções aquosas destes íons nos indivíduos, com posterior remoção dos túbulos. A análise destes preparados, revelou oito tipos nucleares distintos. Destes, principalmente 4 fenótipos ("descompactado", "homogêneo", "vacuolizado" e "picnótico") parecem estar relacionados com a ação tóxica dos metais pesados, enquanto que os de mais são também encontrados em túbulos de Malpighi de insetos sadios ou submetidos ao jejum prolongado ("stress" fisiológico). Ao mesmo tempo, a frequência percentual dos tipos núcleares considerados normais, decresce sensivelmente nos insetos tratados com os metais. Os fenótipos nucleares ocasionados pela ação de cobre e mercúrio, representariam alterações na fisiologia cromatínica e/ou refletiriam etapas de um processo de necrose celular. Neste trabalho, o tipo "vacuolizado" foi opadrão alterado mais frequente. Também buscou-se detectar alterações no funcionamento de alguns sistemas enzimáticos _omesmo material exposto aos metais, com procedimentos citoquímicos. Não foi observada ainibição enzimática esperada, nas ATPases por influência dos metais pesados, comprovando o comportamento destes como inibidores enzimáticos do tipo não-competitivo. Apenas o cobre aparentemente exerceu influência na reação, estimulando-a, possivelmente por ser cofator enzimático. A atividade enzimática das fosfatases ácidas também não foi inibida pelos metais poluentes, observando-se até, um aumento no teor e/ou disponibilidade delas no material tratado com o mercúrio. Nas SDH, a esperada inibição de sua ação enzimática, especialmente mercúrio também não foi constatada; novamente tendo sido pelo de monstrado o mportamento destes metais como inibidores enzi máticos do tipo não-competitivo. No entanto, houve altera ção na forma celular, evidenciada pela modificação do padrão preferencial da distribuição das mitocôndrias, por ação do cobre e do mercúrio Abstract: Changes in nuclear phenotypes were found in the Malpighian tubule cells of T. infestans after treatment with pollutant metaIs, (copper and mercury). They were detected in cytological preparations, obtained from incubation of the tubules in solutions containing the metallic ions or from injection of aqueous solutions of the metallic ions in the specimens, with further removal of the tubules. The morphological analysis of the cytological preparations, revealed eight distinct nuclear phenotypes. Specially four of them ("unpacked", "homogeneous", "vacuolated" and "pyknotic" types) appear to be related to the toxic action of the heavy metaIs. On the other hand, the other types were also found in Malpighian tubules of normally healthy insects and in Malpighian tubules of insects under starvation (a physiological stress). Furthermore, the relative frequency of the normal nuclear phenotypes decreases remarkably in the treated insects. The nuclear phenotypes promoted by the action of copper and mercury would represent physiological chromatinic changes and/or they would reflect steps in the process of cellular necrosis. The nuclear phenotype "vacuolated" was the most frequent changed patter found in this work. AIso changes in functioning of some enzymic systems were studied with cytochemical procedures in the same material exposed to the heavy metaIs. The enzymic inhibition expected for the ATPases by action of heavy metaIs was not demonstrated. This supports the hypothesis of copper and mercury ions functioning ,as non-competitive enzymic inhibitors. Only copper apparently stimulated the enzymic reaction, possibly because it is an enzymic cofactor. The enzymic activity of the acid phosphatases was not either inhibited by the pollutant metaIs. An increase in content and/or availability of these enzymes was even found in the mercury-treated material. The expected inhibition promoted by metaIs in the SDH system, specially mercury, was not either demonstrated. Again, the non-competitive enzymic inhibiting behavior was suggested for copper and mercury. However, some changes in the cell shapes as demonstrated by modified patterns of mitochondria distribution was promoted by the heavy metaIs in the Malpighian tubules of T. infestans Mestrado Biologia Celular Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Ivanhoe Rodrigues Baracho Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: No presente trabalho estudou-se os efeitos dos fungicidas Benlate, Demosan 65W e Dithane M22, em linhagens de fusarium moniliforme e F. moniliforme var. subglutinans. Organizou-se um grupo de seis tabelas que permitem determinar com facilidades e rapidez as doses letais 'DL IND. 50¿, 'DL IND. 70¿ e 'DL IND. 95¿ e seus respectivos intervalos de confiança. Seis conjuntos de dados de pesquisadores diferentes foram testados com essas tabelas e os resultados comparados com os obtidos por outros métodos de determinação de doses letais, tais como: próbite, lógite, Reed & muench, Thompson, Piedrabuena e de Baracho & Piedrabuena. Examinando-se os resultados de determinação dos níveis de resistência através da técnica de ¿inoculação por picada¿, para os três tóxicos ensaiados, observa-se que F. moniliforme var. subglutinans comporta-se de maneira diferente da de F. moniliforme. Com relação a Dithane M-22, os experimentos mostraram uma resposta atípica nas diferentes dosagens. Essas respostas atípicas talvez se relacionem com um possível efeito mutagênico do Dithane M-22. Quanto ao uso das tabelas aqui apresentadas, podemos concluir que, apesar das restrições discutidas no trabalho, sua aplicação a doses letais em microorganismos parece aceitável, não apenas pela simplificação e rapidez dos cálculos, mas também porque o grau de precisão parece ser compatível com a natureza destes tipos de experimentos em microrganismos Abstract: A study was carried out to analyse the effects of the three fungicides Benlate, Demosan 65W and Dithane M-22 in strains of Fusarium moniliforme and F. moniliforme var. subglutinans. A group of six tables was prepaired allowing rapid determination of the lethal doses 'LD IND. 50¿, 'LD IND. 70¿ and 'LD IND. 95¿ and their respective confidence intervals, with a minimum of time-consuming calculations. These were used on six sets of data from different authors and the results were compared with data of other methods of determining lethal doses such as: proibit, logit, Reed & Muench, Thompson, Piedrabuena and Barachos & Piedrabuena. The results of the resistance levels determined by measuring radial growth on PDA media for the three toxicants assyed, indicated that F. moniliforme behaves different by from F. moniliforme var. subglutinans. In relation to Dithane M-22, the experiments showed an atypical response to the different dosages. This response could be attributed to a possible mutagenic effect of Dithane M-22. from the proposed tables, it can be concluded that, in spite of some restrictions which are discussed in the paper, their application to lethal doses for microorganism seems acceptable, the simplification of the analysis, as well as the degrees of precision obtained appear to be compatible with the nature of this type of experiment in microorganisms Mestrado Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Gil Lucio Almeida Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A síndrome da dor fêmoro-patelar (SDFP) acomete uma em cada quatro pessoas da população em geral, e é composta por várias lesões que acometem a articulação fêmoro-patelar. O tratamento fisioterapêutico é fundamental na reabilitação dos portadores dessa síndrome, e que tem como uma de suas principais ferramentas o treinamento em cadeia cinética fechada. Dentre as várias formas de realizar esse treinamento, o agachamento é uma das mais utilizadas. Contudo, quando realizado o agachamento, a pessoa nem sempre tem o controle adequado da posição do tronco e dos membros, o que pode favorecer diferentes padrões cinemáticos, cinéticos e eletromiográficos. Portanto o presente estudo teve por objetivo identificar e descrever a estratégia cinética e eletromiográfica usada para realizar o agachamento nas fases ascendente e descendente em sujeitos saudáveis e portadores da SDFP, quando os movimentos são restritos no plano sagital, com padrão cinemático similar na maioria das articulações envolvidas. Oito sujeitos saudáveis e oito portadores da SDFP participaram deste estudo e realizaram o agachamento mantendo os braços flexionados à frente do corpo em duas distâncias, semi-agachamento (de 30º a 50º) e meio-agachamento (de 60º a 80º) na fase descendente. Para a fase ascendente eles realizaram a subida a partir do meio-agachamento. A atividade eletromiográfica dos músculos vasto medial oblíquo, vasto medial longo, reto femoral, vasto lateral, bíceps femoral, semitendinoso, gastrocnêmio lateral e tibial anterior foi registrada. A cinemática das articulações do membro inferior foi reconstruída utilizando-se um sistema óptico de análise de movimento. O centro de pressão (COP) foi obtido utilizando-se dados de uma plataforma de força, e os torques no tornozelo e joelho foram calculados por meio da dinâmica inversa. As tarefas foram eficazes em restringir o movimento no sentido céfalo-caudal em ambos os grupos. Também foi possível identificar e descrever uma estratégia clara para ambas as fases ascendente e descendente do agachamento. O músculo tibial anterior foi o responsável por iniciar o agachamento na fase descendente e se manteve coativado com o gastrocnêmio durante todo o movimento. O quadríceps foi o principal responsável em desacelerar o movimento e não houve grande atividade dos isquiotibiais. Comparado com o grupo controle, o grupo SDFP apresentou menor torque no joelho e menor atividade eletromiográfica do quadríceps, mas o torque no tornozelo e o deslocamento anterior do COP foram maiores durante as duas distâncias, na fase descendente do agachamento. Para a fase ascendente do agachamento, o grupo SDFP apresentou diferença na posição inicial, revelando uma estratégia protetora da articulação fêmoro-patelar. Antes de iniciar o movimento, houve forte ativação do quadríceps, isquiotibiais e gastrocnêmio para vencer a ação gravitacional em ambos os grupos. Comparado com o grupo controle, o grupo SDFP apresentou menor torque no joelho e menor atividade eletromiográfica do quadríceps, mas o torque no tornozelo e o deslocamento anterior do COP foram maiores. As fases de cada tarefa foram descritas e as implicações clínicas discutidas. Palavras chave: torque, centro de pressão, eletromiografia, patela, agachamento Abstract: The patellofemoral pain syndrome (PFPS) affects one in four people in the general population, and is composed of several lesions of the patellofemoral joint. The physical therapy is essential for the rehabilitation of the population with this syndrome, and one of its main tools is the training in closed kinetic chain. Among the several ways of performing that training, the squat is one of the most used. However, when performing it, a person does not always have a proper control of the position of the trunk and of the limbs, what can produce different kinematic, kinetic and electromyographic patterns. Therefore, the present study had as an objective identifying and describing the kinetic and electromyographic strategy used to perform the squat in the ascending and descending phases by people with and without PFPS, when the movements are restricted in the sagittal plane, with a similar kinematic pattern in most of the involved joints. Eight healthy subjects and eight with PFPS participated in this study and they performed the squat keeping the upper arm elevated at 90º at the shoulder joint, just in front of the body in two distances, semisquatting (30º to 50º) and half squatting (60º to 80º) in the descending phase. For the ascending phase they performed the ascent from the half squatting. The electromyographic activity of the vastus medialis oblique, vastus medialis longus, rectus femoris, vastus lateralis, biceps femoris, semitendineous, gastrocnemius lateralis and tibialis anterior muscles was registered. The joint kinematics of the inferior limbs was reconstructed using an optical system for movement analysis. The center of the pressure (COP) was obtained using data from a force plate and the joint torques in the ankle and knee were calculated using inverse dynamics. The tasks were effective in restricting the movement in the cefalo-caudal direction for both groups. Moreover, it was possible to identify and to describe a clear strategy for both the ascending and the descending phases of the squat. The anterior tibialis muscle was the responsible for beginning the squatting in the descending phase, and kept co-activated with the gastrocnemius during the whole movement. The quadriceps was mainly responsible for decelerating the movement and there was not great activity of the hamstrings. Compared to the control group, the PFPS group presented smaller knee torque and smaller quadriceps electromyographic activity, but the ankle torque and the COP displacement to the anterior direction were larger in the two distances, in the descending phase of the squatting. For the ascending phase of the squatting the PFPS group presented difference in the initial position, revealing a protecting strategy for the patellofemoral joint. Before beginning the movement, there was a strong activation of the quadriceps, hamstrings and gastrocnemius. This was necessary for the motor control system to generate the forces that overcome the inertia of the limb and resist the flexion force acting on the knee due to gravity in both groups. Compared to the control group, the PFPS group presented smaller torque in the knee and smaller electromyographic activity of the quadriceps, but the ankle torque and the COP displacement to the anterior direction were larger. The phases of each task were described and clinical implications were discussed. Key words: torque, center of the pressure, electromyographic activity, patella, squat Doutorado Fisiologia Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Christine Hackel Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A região de Passo Fundo no Planalto Médio do Rio Grande do Sul caracteriza-se pela produção de grãos (trigo, soja) e também hortigranjeiros. No combate as pragas destas culturas, os agricultores fazem uso de grandes quantidades de agroquímicos (fungicidas, inseticidas e herbicidas). Para testar a possível atividade genotóxica destes produtos, utilizou-se a técnica de micronúcleos, que consiste na identificação de pequenos núcleos visíveis em células binucleadas, resultantes da perda de parte ou de cromossomos inteiros pela célula, durante a divisão celular. Para a análise dos micronúcleos, foram coletados 2 mL de sangue periférico heparinizado de trinta trabalhadores expostos, relacionados diretamente com a aplicação e manuseio destes produtos e trinta indivíduos não expostos. Dados relativos ao hábito de fumar, consumo de bebida alcoólica, sexo, idade e tempo de exposição foram também identificados. Culturas de linfócitos de sangue periférico foram tratadas com citocalasina B por um período de 24 horas antes de completar o tempo total de cultura. Após a contagem de 1000 células binucleadas a freqüência de micronúcleos de ambos os grupos foi avaliada e aplicado o teste de "t" Student, indicando diferença altamente significativa entre expostos (14,4/1000) e não expostos (7,211000). Outros fatores relacionados com a instabilidade cromossômica como tabagismo, sexo, idade e tempo de exposição, não influenciaram de modo significativo em ambos os grupos. Finalmente, podemos concluir que o teste do micronúcleo mostrou-se eficiente como ensaio biológico para monitorar populações expostas a misturas de agroquímicos Abstract: Much of grain cultivation (wheat and soybean) in the Rio Grande do Sul state is carried out in the region of Passo Fundo. For crop pest control, great amounts of agrochemicals (fungicides, insecticides, herbicides ) are used. To evaluate the genotoxicity of these products, the micronucleus test was applied in the study of rural workers directly exposed to these chemicals. The micronuclei are small nuclei resulting from the loss of whole chromosomes or a centric fragments during cell division that can be identified in binucleated cells. Heparinized blood samples were drawn by venepuncture from 30 exposed workers and 30 non-exposed controls. To perform micronuclei analysis on Lymphocyte cultures , Cytochalasin B was added to block cytokines is after 44h incubation at 3-,0 C, resulting in t!1e formation of multinucleated cells. Data about smoking and drinking habits, sex, age and exposure duration were also identified. Micronuclei frequency was evaluated by counting 1000 binucleated cells in both groups. Statistical analysis showed significantly higher mean number levels of binucleated cells with micronuclei in exposed individuals (14,4/1000) than in controls (7,2/1000). Other factors related to chromosome instability, such as smoking habits, age and exposure duration, showed no effect on the frequency of micronuclei in both groups. Finally, we can conclude that the micronuclei test is an efficient biological assay for monitoring population exposure to mixtures of agrochemicals Mestrado Biologia Celular Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador : Sonia Machado de Campos Dietrich Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Hyptis brevipes Poit. (Labiatae) é uma planta anual, herbácea, invasora de lavouras perenes e encontrada da facilmente em lugares úmidos, como pastagens de várzea e beira de canais, lagoas e riachos. Os efeitos de tratamentos fotoperiódicos, aplicados ou não a temperaturas controladas, foram analisados no crescimento vegetativo, na floração e na variação dos teores de carboidratos de plantas originárias de sementes, coletadas na região de Campinas, SP. Quanto ao crescimento vegetativo, foi observado que, em fotoperiodos mais curtos,as plantas apresentaram maior crescimento em altura e maior número de nós, especialmente a '25 º'. O número de dias em que as plantas permaneceram em condições de dias curtos influenciou significativamente esses parâmetros de crescimento. Os ramos laterais localizados no '5 º e 6 º nós mostraram maior sensibilidade ao tratamento fotoperiódico e à temperatura do que os ramos situados abaixo e acima destes no eixo caulinar. Temperatura de 30 º reduziu fortemente a área foliar. A intercalação de dias longos numa série de dias curtos provocou diminuição na altura das plantas e no comprimento dos ramos laterais, sendo que essa inibição de crescimento foi aumentada à medida que mais dias longos foram inseridos. H. brevipes é uma especie quantitativa de dias curtos para floração, com fotoperiodo critico entre 12 e 13 horas Abstract: Not informed. Doutorado Doutor em Ciências Biológicas

Orientador: Maria Ligia Rodrigues Macedo Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Os inibidores de proteinases desempenham as mais variadas funções biológicas. Em plantas, eles podem estar envolvidos no mecanismo de defesa vegetal contra predadores e doenças. Devido à habilidade dessas moléculas protéicas bloquearem enzimas, os inibidores também podem ser usados como ferramentas no estudo de processos bioquímicos relacionados a patologias, tais como a inflamação, hemorragia e até mesmo o câncer. Neste trabalho, a caracterização físico-química e o estudo dos papéis biológicos de dois inibidores isolados e purificados de sementes de Dimorphandra mollis, DMTI (Mace do et ai., 2000) e DMTI-II (Mello et aI., 2001) foram realizadas com o objetivo de melhor conhecer essas moléculas. DMTI (20 kDa) e DMTI-II (23kDa) são inibidores de tripsina pertencentes à família de Kunitz. A estabilidade da atividade inibitória de DMTI e DMTI-II foi analisada e comparada. DMTI e DMTI-II perde, respectivamente, cerca de 20% e 40% da atividade quando incubados a 60 °e por 20 minutos. Entretanto, a atividade de ambos não foi afetada por diferentes condições de pH, concentrações crescentes dos agentes redutores DTT e uréia. No entanto, a atividade DMTI-II sofreu um descréscimo de 50% quando incubado com cloreto de guanidina. A diferença da estabilidade dos inibidores levou a investigação da estrutura protéica de ambos; DMTI e DMTI-II foram submetidos a análises de dicroísmo circular e calorimetria. A ação inseticida de DMTI-II e DMTI sobre os lepidópteros Anagasta kuehniella e Corcyra cephalonica, foram analisadas através de ensaios in vitro e in vivo. Tanto DMTI-II quanto DMTI, quando incorporados ao nível de 2% na dieta artificial dos insetos, não se mostraram agentes inseticidas potenciais contra essas duas espécies. Estes resultados não descartam a utilização dos inibi dores de D. mollis na biotecnologia vegetal contra outras espécies de insetos, apenas ajudam a esclarecer as características como agentes inseticidas biológicos. Quando estudado o envolvimento de DMTI-II e DMTI na resposta inflamatória utilizando o edema de pata em ratos como modelo experimental, os resultados mostraram que doses crescentes de DMTI-II geram uma curva dose-dependente sendo que a resposta máxima ocorre 30 minutos após a sua injeção subplantar, o que sugeriu a ação do inibidor na liberação de histamina e serotonina, que são responsáveis pelo aumento da penneabilidade vascular. A elucidação do mecanismo de ação de DMTI-Il foi estudada através da utilização de drogas antiinflamatórias, como a mepiramina e ciproheptadina; sendo esta última a que melhor inibiu a ação de DMTI-Il na indução do edema. Concomitantemente, a sua ação na liberação de bradicinina também pode estar ocorrendo, pois o pré-tratamento com o antagonista de receptores B 2, HOE 140, reduziu cerca de 79% do edema induzido por DMTI-II Abstract: Proteinase inhibitors have a wide range of biological functions. In plants, they¿re part of the defense mechanism against predators and diseases. As they can block enzymes, inhibitors are useful tools in the study of biochemical processes related to pathologies, such as inflammation, hemorrhage and even cancer. This paper aims at assessing the physical-chemical features and the biological functions of two inhibitors isolated and purified trom Dimorphandra mollis seeds, DMTI (Macedo et al., 2000) and DMTI-II (Mello et aI., 2001). DMTI (20 kDa) and DMTI-TI (23 kDa) are trypsin inhibitors ITom the Kunitz family. The stability of the inhibitory activity of DMTI and that ofDMTI-II were analyzed and compared to each other. DMTI and DMTI-II lost 20% and 40%, respectively, oftheir activities when incubated at 60°C for 20 minutes. However, neither inhibitory activity was sensitive to pH above the 2.0-10.0 range, reducing DTT agents and urea. On the other hand, DMTI-II activity was reduced by 50% when incubated with guanidine hydrochloride. The difference of stability between the inhibitors led to further investigation of their protein structure; DMTI and DMTI-II structures were analyzed by circular dichroism (CD) and differential scanning calorimetry (DSC). The effectiveness of DMTI-II and DMTI as insecticide in Lepidoptera insects, Anagasta kuehniella and Corcyra cephalonica, was analyzed in vitro and in vivo assays. Neither DMTI-II nor DMTI, when incorporated into artificial diet at 2%, were active as insecticide agents against these two species. Nevertheless, these results do not discard the use of inhibitors trom D. mollis in plant biotechnology against other species of insects; they just help us to understand how they work as biological agents. When studying DMTI and DMTI-II participation in inflammatory response in the rat paw edema experimental model, the results showed that increased doses of DMTI-II induced a dose dependent curve, and maximum response occurred 30 min after sub-plantar injection, which indicated that the inhibitor is active in the release of histamine and serotonin, which are responsible for the increase of vascular permeability. The elucidation of DMTI-II action mechanism was studied by using anti-inflammatory drugs, such as mepyramine and cyproheptadine, the latter the most effective against DMTI-II effects in edema induction. At the same time, it may also be active in bradykinin release as the pretreatment with B2 receptor antagonist HOE 140 reduced the DMTI-II induced edema by near1y 79% Doutorado Bioquímica Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Angelo Pires do Prado Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Entre os ectoparasitos dos animais bovinos, o carrapato ¿ Boophilus microplus (Acari: Ixodidae) - continua sendo uma das principais causas das perdas econômicas na pecuária do Estado de São Paulo. A situação atual do controle do carrapato caracteriza-se por uma crise na produção de novas moléculas de parasiticidas e o desenvolvimento acelerado da resistência dos parasitas aos produtos usados. O presente trabalho teve por objetivo verificar o perfil de sensibilidade do carrapato B. microplus nas fazendas localizadas em alguns municípios do Vale do Ribeira e no município de Pindamonhangaba e propor um sistema de tratamento carrapaticida com base na infestação de paternóginas. Foram realizados testes de larvas - LPT (larval packet test) adotado pela FAO - teste de imersão com a fêmea adulta e o levantamento sobre as práticas de controle adotadas nas duas regiões. Os resultados de resistência para as fazendas de Pindamonhangaba mostraram que, para cipermetrina 15,4% das fazendas foram classificadas como sensível; 7,7% com resistência nível I; 69,2% com resistência nível II e 7,7% com resistência nível III. Para a deltametrina 23% sensível; 38,5% com resistência nível II e 38,5% com resistência nível III. Para o organofosforado clorpirifós 54% mostraram-se sensível; 38,4% com resistência nível I e 7,6% com resistência nível II. A região do Vale do Ribeira apresenta uma média de eficácia inferior a 20% para os piretróides; eficácia entre 49% e 72% para as associações piretróides e organofosforados; 66,83% para o amitraz e acima de 90% para as associações entre os organosfosforados. Para o teste de larvas a cipermetrina apresentou uma porcentagem de 42,85% de amostras sensível; 14,3% com resistência nível I e 42,85% com resistência nível II. Deltametrina, 50% sensível; 25% com resistência nível II e 25% com resistência nível III. O organofosforado clorpirifós mostrou uma porcentagem de 50% de amostras sensível; 25% com resistência nível I e 25% com resistência nível II. Constatouse, para as duas regiões estudadas, a falta de conhecimento dos principais grupos químicos usados no controle dos carrapatos. O produto amitraz é o mais usado e a maioria das fazendas usam o método de pulverização na aplicação dos carrapaticidas. Experimento realizado no ano de 2001 a 2003 num sítio localizado no município de Ibiúna mostrou que a avaliação de infestação de paternóginas do carrapato B. microplus na área do úbere ou escroto e baixo períneo é um critério que pode ser empregado para se determinar a aplicação de carrapaticidas. Quando se realiza a aplicação de carrapaticidas nos animais infestados com bastante paternóginas diminui a infestação de larvas no campo. Testes de bioensaios, usando fêmeas adultas, realizados num intervalo de três meses, e teste de larvas no período de seis meses servem como orientação para o proprietário na avaliação da sensibilidade dos carrapatos aos produtos químicos Abstract: The cattle tick - Boophilus microplus (Acari: Ixodidae) ¿ is one of the principal causes of economic losses in the cattle farms in São Paulo state. The current situation of the tick control is characterized by a crisis in the production of new molecules with acaricidal properties and by an increasing in the parasites resistance to the products used to control them. The current study aimed to verifying the sensibility profile of tick B. microplus in farms located in the municipalities of Vale do Ribeira and in the region of Pindamonhangaba, and propose a tick control treatment system based on nymph infestation. The resistance diagnosis tests have been carried by the larval bioassay (Larval packet test), adult immersion test and the survey of the tick control practices applied in both regions. The results for the farms at Pindamonhangaba show that to Cypermethrin 15,4% of the farms were classified as sensible, 7,7% resistance level I, 69,2% resistance level II and 7,7% resistance level III. To deltamethrin 23% were considered sensible, 38,5% Resistance level II, and 38,5% resistance level III. To organophosphate chlorpyriphos 54% presented a sensible frame, 38,4% resistance level I and 7,6% resistance level II. The Vale do Ribeira region presents an average efficacy lower than 20% for all pyrethroids; efficacy between 49% and 72% to associations with pyrethroids and organophosphates; 66,83% to amitraz, and over 90% to organophosphates associations. For the larval test, the cypermethrin presented a percentage of 42,85% from samples sensible; 14,3% resistance level I and 42,85% resistance level II. Deltamethrin, 50% sensible; 25% resistance level II and 25% resistance level III. The organophosphate chlorpyriphos presented a percentage of 50% from samples sensible; 25% resistance level I and 25% resistance level II. It has been proved, that for both regions under this study, there is a lack of knowledge concerning the main chemical groups used in the tick control. The amitraz is the most used and most farms apply the pulverization method when performing the tick control. An experiment taken from 2001 to 2003 in a little farm located in the municipality of Ibiúna has shown the evaluation in the infestation of tick B. microplus in the udder area or escrotum and low perineum is a good criteria to be applied in order to determine the application of anti-ticks. When the application of anti-ticks is undertaken on infested animals full of pathenogens, the field larvae infestation is diminished. Bioassay, using engorged female ticks, undertaken at three months intervals and larval packet test undertaken at six months intervals serve as orientation for the owners for the evaluation of ticks¿ sensibility to the chemical products Doutorado Entomologia Doutor em Parasitologia

Orientador: Gil Lucio Almeida Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: O objetivo deste estudo foi investigar as estratégias de ajustes posturais utilizadas durante o balanço em gangorra, assim como o efeito do. treino. Sujeitos. Seis indivíduos neUI'OIogicamente normais (NN) e seis portadores da síndrome de Down (SD) participaram deste estudo. Métodos. Os indivíduos foram treinados a ba_iÇar em uma gangorra e foram testados antes e após o treino em gangorras com nove índices de dificuldade diferentes. Os _ou1os das articulações do quadril, joelho e tornozelo, a atividade eletromiográfica de alguns músculos da perna e do tronco, e o deslocamento do centro de pressão foram registrados. Resultados. Os indivíduos NN mantiveram o equilíbrio na gangorra devido principalmente a movimentos da articulação do tornozelo, sendo estes movimentos correlacionados com o deslocamento do centro de pressão. Eles utilizaram um padrão alternado de atividade dos músculos gastrocnêmico medial e tibial anterior e foram capazes de modular a quantidade de oscilação postural baseado na demanda mecânica da tarefa. A ordem desta alternância muscular foi em direção oposta ao estiramento. Por exemplo, quando o tornozelo moveu em flexão dorsal, o músculo gastrocnêmico foi estirado, mas o tibial anterior foi o músculo ativado. O treino não afetou o balanço na gangorra. Os Indivíduos portadores da síndrome de Down demostraram uma dificuldade em correlacionar os movimentos das três articulações estudadas. com o deslocamento do centro de pressão. Ao contrário dos NN, os indivíduos SD não alternaram a atividade dos músculos agonistas e antagonistas responsáveis pelo movimento do tornozelo. Eles apresentaram um padrão de co-ativação generalizada mesmo para as condições mais estáveis, e foram incapazes de modular as respostas de acordo com a demanda mecânica da tarefa. O 1reino aumentou as possibilidades destes indivíduos balançarem na gangorra, mas não alterou a estratégia de manutenção do equníbrio. Conclusão e Discussão. Este estudo confirma a idéia de que o balanço na gangorra é possível principalmente devido a movimentos do tornozelo (Ivanenko et aL, 1997) e mostra o uso de uma estratégia semelhante a do pêndulo invertido. Primeiro, observamos que os indivíduos NN inibiram o músculo estirado devido talvez a uma projeção supra-segmentar. Segundo, o treino não afetou a estratégia de manutenção do equilíbrio. Terceiro, os indivíduos portadores da síndrome de Do-wn utilizaram um estratégia diferente da utilizada pelos NN, mas esta estratégia foi suficiente para garantir o balanço. Ao contrário do que tem sido mostrado na literatura (Almeida, et aI., 1994), eles não alcançaram um nível de performance motora semelhante ao nível dos indivíduos NN após o treino. Esta estratégia adotada pelos indivíduos portadores da síndrome de Down parece ser uma resposta adaptativa a possíveis déficits no sistema de controle postural. Sendo esta resposta uma adaptação deveria o fisioterapeuta intervir na tentativa de mudar esta estratégia? Nossos dados suportam a idéia de que a reabilitação deve enfatizar a função e não o modelo de movimento. No entanto, antes de embarcarmos em um novo tratamento, novos estudos são necessários para mostrar se estas respostas adaptativas podem ou não ser mudadas sem detrimento da função Abstract: The purpose of this study was to investigate the postural adjustments and the effects of practice during balance on seesaw. Subjects. Six individuals with Down syndrome and six neurological normal individuals (NN) took part of this study. Methods. The individuals were trained to balance on one seesaw and were tested before and after practice on nine different seesaws. We recorded the LED marks that were placed on the center or hip, knee and ankle joints and the EMG activities of the some leg and trunk muscles. Results. Neurological Normal individuals maintained balance mainly using ankle movements, and these movements were correlated with the displacement of the center of pressure. They demonstrated an alternated pattern of ankle agonist and antagonist muscles activities and were able to moduIate the amount of balance based on the mechanical dernand of each io, tenns or degree of stability. The order of this alternation was io the opposite direction of the stretched muscle. For cxample, when the. ankle was moved into dorsal fIexion the gastrocnemium was stretched but the anterior tibialis was activated. Training did not affect t.he balance on seesaw. Individuals with Down syndrome demonstrated a difficulty to corre1ate the joints movements with center of pressure displacement. Contrary to NN, the Down syndrome individuals did not alternated the EMG activities. They co-activated the agonist and antagonist ankle muscles even for easy conditions and were unable to modulated the answer with mechanical demand of the task. Training increased the ,possibilities of these individuals balance on seesaw, but clid not change their postural strategy. Conclusion and Discussion. This study confirm the idea that the balance on seesaw i8 achieved mainly by changing the ankle joint (Ivanenko et aL, 1997) and show that the NN individuals use a strategy similar to the inverted pendulum. First,. we observed that these individuals inhibited the stretching muscle using perhaps a suprao ó segmental projection. Second, the training did not affect the balance strategy for both groups. Third, too Down syndrome used a different strategy compared with normal individuals and their strategy was enough to assure balance. Contrary to the others studies (A1meida, et al., 1994) they- did not change their muscle and cinematic strategy of balance after training. it¿s seems that the strategy that they use is an adaptive response to deficits on postural control If this is an adaptive response the Physical Therapist should try changing these strategy? Our study supports the idea that the rehabilitation should emphasize the motor function and not the movement patter However, before embarking in a new therapeutic tractate; new studies are need to show if the adaptive response used by the individuals with Down syndrome balance on seesaw can be changed 'without any detriment of their ability to balance on seesaw Mestrado Fisiologia Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Jorg Kobarg Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A infecção crônica pelo vírus da hepatite B (HBV) é uma das causas do desenvolvimento do câncer de fígado. O genoma do HBV codifica a onco-proteína HBx, uma proteína multi-funcional de 17 kDa que possui 10 resíduos de cisteína, e que está relacionada com a indução do câncer de fígado em camundongos transgênicos para HBx. Apesar de não ter uma função definida, sabe-se que a proteína HBx é um potente trans-ativador transcricional, ativando a transcrição de muitos promotores virais e celulares através de interações proteína-proteína, uma vez que HBx não interage diretamente com o DNA de fita dupla. Desta forma, HBx pode afetar a replicação e proliferação virais, e interferir nos processos celulares de apoptose e carcinogênese. Neste trabalho, a proteína HBx foi expressa em E. coli, em fusão com a proteína GST ou com a cauda de poli-histidina, e utilizada em ensaios funcionais e estruturais. Através de ensaios de retardamento da mobilidade eletroforética e UV cross-linking, observou-se que a proteína HBx possui uma afinidade maior pelos oligonucleotídeos de RNA ricos em bases "A", "V" e "AV", com tamanho superior a 21-mer, e que os resíduos de cisteína não interferiram na ligação da HBx com o oligonucleotídeo de RNA AV-38. A ausência dos resíduos de eisteína da proteína HBx também não interferiu na ativação do promotor alvo para a proteína p53, em sistema de mono-híbrido em levedura, nem tampouco na interação in vitro da HBx com a proteína humana p53, o que foi confirmado através de um ensaio de co-precipitação. Em cultura de células HeLa, a proteína HBx causou um aumento do crescimento celular e uma leve uma estabilização dos mRNAs dos proto-oncogenes c-fos e c-myc, como mostraram os ensaios de cinética de degradação de mRNAs, e esta estabilização poderia contribuir para o fenótipo transformador da onco-proteína HBx. Os experimentos de dicroísmo circular e de fluorescência mostraram que a proteína HBx encontrava-se parcialmente estruturada em solução aquosa, mas apresentou uma tendência à estruturação sob determinadas condições experimentais, o que poderia ser uma conseqüência de uma provável flexibilidade conformacional inerente à proteína HBx. Vma estrutura flexível poderia explicar as interações observadas entre a HBx e uma variedade de proteínas celulares e ácidos nucléicos de fita simples, de modo que a proteína HBx poderia interferir nos processos de sinalização, transcrição, apoptose e nos mecanismos de reparo de DNA, que levariam ao desenvolvimento do câncer de fígado Abstract: Chronic infection of the hepatitis B virus (HBV) is one of the causes leading to liver cancer. The HBV genome encodes the 17 kDa onco-protein HBx, a multi-functional protein that contains 10 cysteine residues and is related to induce liver cancer in transgenic mice. The exact function of HBx is still unknown. However, it has been shown that HBx is a potent trans-activator, which activates transcription of many cellular and viral promoters indirecdy through protein-protein interactions, although it does not bind to double-stranded DNA direcdy. Besides, the HBx protein can affect viral replication and proliferation, and it interferes with cellular apoptosis and carcinogenesis. In this work, the recombinant HBx protein was expressed in E. coli as a GST or 6xHis fusion protein, and used in functional and structural assays. By Electrophoretic Mobility Shift Assay and UV cross-linking assays, it was observed that the HBx protein was able to bind to the "A", "V" and "AV" rich RNA oligonucleotides, and that the cysteine residues of the HBx protein were not required for its binding to the AV-rich RNA oligonucleotide (AV-38). The lack of cysteine residues in the HBx protein did not interfere with the pS3 promoter activation in the yeast one-hybrid system, or neither in the in vitro interaction through a co-precipitation assay of the HBx and human p53 protein. In HeLa cells, the HBx protein increased the cellular growth and caused a slight c-fos and c-myc mRNA stabilization. This mRNA stabilization could contribute for the transforming character of the onco-protein HBx. Both the circular dichroism and fluorescence spectroscopic assays had shown that the HBx protein was partially structured in aqueous solution, but the protein presented a propensity to gain secondary structure under specific experimental conditions. The HBx inherent conformational flexibility might explain its interaction with a wide array of cellular proteins and single-stranded nucleic acids, in a way that the HBx protein interferes with signaling cellular processes, modulates transcription, apoptosis and DNA repair, and contributes to the development of the liver cancer Doutorado Bioquímica Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Armando Freitas da Rocha Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Não informado Abstract: Not informed. Mestrado Fisiologia e Biofísica Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: William J. da Silva Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Um estudo comparativo envolvendo diferentes mutantes de endosperma de milho e seus correspondentes endospermas normais, foi realizado para analisar o efeito de genes do endosperma na patogenicidade do F. moniliformee. . Os mutantes estudados foram: Shrunken (sh), shrunken-2 (sh2), floury (fl) brittle (bt), brittle-2 (bt2) waxy (wx), dull (du), sugary (su),sugary-2 (su2), apaque-2 (o2) e amylose extender (ae). Os efeitos desses genes foram ava1iados em linhagens homozigotas, obtidas de várias popu1ações sintéticas de milho. Os genes mutantes de endosperma foram introduzidos nessas populações através de um esquema de retrocruzamento. Numa primeira fase analisou-se a ocorrência de variantes em diferentes culturas do fungo, isoladas de sementes de milho. Nesse estudo, com 197 culturas, ficou evidenciado que o patógeno ocorre na natureza sob a forma de tipos diferentes, onde predominou o tipo roxo com freqüência de 55%. É provável que esses tipos ocorram na natureza sob a forma de heterocários. Realizou-se um ensaio de campo com delineamento em blocos ao acaso com 4 repetições onde as onze linhagens portadoras dos genes mutantes de endosperma foram autofecundadas,e em seguida suas espigas inoculadas com F. moniliforme . As sementes colhidas nesse ensaio foram utilizadas para os estudos do presente trabalho Abstract: A comparative study involving 11 different endosperm mutants of maize and their correspondent normal counterparts was carried out to study the effect of endosperm mutant genes on pathogenicity of F. moniliforme. The following mutants were studied: Shrunken (sh), shrunken-2 (sh2), floury (fl), brittle (bt) brittle-2 (bt2), waxy (wx), dull (du), sugary (su), sugary-2 (su2), opaque-2 (o2) and amylose extender (ae). Those genes were introduced in several synthetic varieties through a backcross procedure and were studied in S5 inbred lines derived from them. In a preliminary step it was studied the presence of variants among cultures of F. moniliforme isolated from corn seeds. It was found that the pathogen occur in nature with different types being predominant the purple type. Apparently the types occur in nature by heterocaryosis. A randomized complete block experiment involving 11 inbred lines segregating only for the endosperm gene, with 5 replications, was planted at the experimental field. At flowering the 10 m long plots were selfed and the segregating ears were artificially inoculated with spores from a purple colony of F. moniliforme. The study of seed pathogenicity was carried out by the isolation of the fungus from 11 endosperm and their normal kernels of the segregating ears. Mutants and their normal kernels of the segregating ears. Two tests were made. One, with deep-freezing treatment at -19ºC and the other with intact seeds Doutorado Biologia Vegetal Doutor em Ciências Biológicas

Orientador: Marta Helena Krieger Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: O óxido nítrico (NO) é um multifuncional agente biológico que nas últimas décadas tem sido alvo de uma infinidade de estudos e constitui hoje um dos mais importantes mediadores de processos intra e extracelulares. Diversos estudos demonstram sua capacidade de prevenção da ativação e adesão plaquetária ou leucocitária e inibição da proliferação e migração de células musculares lisas vasculares (VSMCs), entretanto, em condições de baixa disponibilidade do NO esses processos são prejudicados. Atualmente há o grande interesse no desenvolvimento de compostos capazes de liberar NO de forma modulada e estável, e, nesse sentido, os complexos nitrosilos de rutênio têm se destacado por suas características excepcionais. É amplamente reconhecido que a modulação fenotípica de VSMCs tem papel crítico na progressão de diversas doenças vasculares proeminentes. Sabe-se que o fator de crescimento derivado de plaquetas (PDGF-BB) é um dos principais estimulantes desse processo. Este estudo se propôs a caracterizar os efeitos inibitórios do complexo de rutênio trans-[Ru(NO)Cl(cyclam)](PF6)2, nomeado Ru(cyclam)NO, na modulação fenotípica, resposta proliferativa e migratória de VSMCs induzidas por PDGF-BB. VSMCs foram obtidas por técnica de cultura primária. A citotoxicidade do complexo, na faixa de concentração de 100 ?M a 1500 ?M, foi determinada em ensaios de redução do MTT e incorporação neutral red (NR), e comparadas a do nitroprussiato de sódio (SNP). A concentração 100 ?M foi definida para os demais protocolos experimentais. Western blotting, ensaios transwell e wound healing, e incorporação de timidina triciada foram utilizados para determinação da modulação fenotípica, migração e proliferação celular, respectivamente, e níveis de nitrato no meio foram determinados por quimiluminescência para avaliação do perfil de liberação de NO. O complexo demonstrou baixa citotoxicidade, mesmo na maior concentração e após 48 horas de exposição, reduzindo ao máximo em 30% a porcentagem de células viáveis em ambos os ensaios, demonstrando ser menos tóxico que o SNP. Níveis de nitrato no meio atigiram a concentração máxima após 30 minutos (11 ?M ± 4,8), de maneira mais lenta em relação ao SNP, cuja concentração máxima foi após 5 minutos (13 ?M ± 3,7). A proliferação das VSMCs induzida por PDGF-BB foi inibida, reduzindo à metade a radioatividade incorporada, bem como a expressão do marcador de proliferação PCNA. Observou-se redução de 45% na migração induzida por PDGF-BB nos ensaios transwell, e no wound-healing, embora qualitativo, a redução é notável. A modulação fenotípica da VSMC foi observada pela redução em 60% da expressão da proteína alfa-actina, característica do fenótipo maduro, e foi quase totalmente prevenida pelo tratamento com o complexo. Tal prevenção pode ser mediada pelo fator de transcrição ELK-1, que favorece a expressão de genes de diferenciação, e cuja fosforilação foi estimulada pelo PDGF-BB, porém inibida em quase 50% pelo pré-tratamento com Ru(cyclam)NO. As respostas observadas nos tratamentos com Ru(cyclam)NO foram promissoras, e, embora seu mecanismo de ação x ainda não esteja completamente esclarecido, este complexo demonstrou atividade biológica singular, e sua aplicação em condições clínicas onde há descontrole de processos de proliferação e migração de VSMCs, como a reestenose, apresenta-se como uma proposta interessante Abstract: Nitric oxide (NO) is a multifuctional biological agent that in the recent decades has been the subject of a plethora of studies and today is one of the most important intracellular and extracellular processes mediators. Several studies have demonstrated its ability to prevent leukocyte or platelet adhesion and activation, and inhibition of vascular smooth muscle cells (VSMCs) proliferation and migration. However, low availability of NO conditions determines impairement of these processes. There is a keen interest in the development of compounds capable of releasing NO modulated so stable, and the nitrosyl ruthenium complexes have gained prominence for its exceptional features. It is widely recognized that the phenotypic modulation of VSMCs, and its uncontrolled proliferation and migration, plays a critical role in the progression of several prominent vascular diseases. It is known that the platelet-derived growth factor (PDGF) is a primary stimulant of the process. This study aimed to determine the inhibitory effects of the ruthenium complex NO donor trans-[Ru(NO)Cl(cyclam)](PF6)2, named Ru(cyclam)NO, in the phenotypic switching, on migratory and proliferative responses of VSMCs induced by PDGF-BB, and its biological response. VSMCs were obtained from primary culture methodology. The complex cytotoxicity were determined by MTT reduction and incorporation of neutral red (NR) assays, in the range of concentration from 100 ?M to 1500 ?M, and compared to sodium nitroprusside (SNP). For the following experimental protocols the concentration of the 100 ?M was set. Western blotting, transwell and wound healing assays, and incorporation of tritiated thymidine were used for determination of phenotypic switching, cell migration and proliferation, respectively. Evaluation of the NO profile release was determined as nitrate levels in the culture medium by chemiluminescence. The complex Ru(cyclam)NO showed low cytotoxicity even at the highest concentration evaluated and after 48 hours of exposition, reducing only 30% the percentage of viable cells in both trials, showing be less toxic than the SNP. Medium nitrate levels exibhited the highest concentration after 30 min (11 ?M ± 4.8), slower when compared to SNP, which reached the maximum concentration after 5 minutes (13 ?M ± 3.7). The proliferation of VSMCs induced by PDGF-BB was inhibited by half of the radioactivity incorporated counting, as well as the reduction on the expression of the proliferation marker PCNA. Observed a reduction by 45% in the migration induced by PDGF-BB determined in transwell assays, and on the wound-healing, although a qualitative result, the reduction of migration induced by PDGF-BB. The 60% reduction by PDGF-BB treatment of the contractile protein expression ?-SMA, characteristic of mature phenotype, revealed the modulation of VSMCs phenotype, and it was almost completely prevented by treatment with the complex. Such prevention was associated with inhibition by almost 50% of phosphorylation of the transcription factor ELK-1 stimulated by PDGF-BB. The responses determined with complex treatments revealed promising for future development of cardiovascular devices. Although its xii mechanism of action is not completely understood, this complex showed singular biological activity, and its application in some clinical conditions where there is uncontrolled proliferation and migration of VSMCs presents as a substancial proposal Mestrado Fisiologia Mestra em Biologia Funcional e Molecular

Orientador : Regina Celia Spadari-Bratfisch Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Considerando que tecidos isolados de ratos submetidos a estresse apresentam alterações de sensibilidade às catecolaminas, os objetivos deste trabalho foram verificar se tecidos isolados de cobaias submetidas aos mesmos protocolos experimentais também apresentam alterações similares, levando-se em conta que a proporção de subtipos de adrenoceptores difere entre átrios direitos das duas espécies. Nossos resultados mostraram que o estresse por natação ou por choque nas patas induziu alterações na sensibilidade aos efeitos cronotrópicos das catecolaminas, cujas características dependem da intensidade do agente estressor. Átrios direitos de cobaias e de ratos submetidos a estresse por natação apresentaram supersensibilidade à isoprenalina, o que poderia ser causado por redução na captação extraneuronal do agonista. No entanto, cobaias mostraram subsensibilidade à noradrenalina, após uma sessão de natação, o que só ocorre em ratos após a terceira sessão. Nós sugerimos que os mecanismos envolvidos neste processo poderiam ser similares àqueles descritos em ratos, ou seja, diminuição da resposta mediada por adrenoceptores do subtipo b1 e/ou aumento da eficiência da captação neuronal do agonista. Estresse por choques nas patas determinou alterações semelhantes em átrios direitos de ratos e de cobaias, com supersensibilidade à isoprenalina e subsensibilidade à noradrenalina, sugerindo dessensibilização dos adrenoceptores do subtipo b1, acompanhado de aumento da participação do subtipo b2 na resposta. A análise computacional dos dados e o uso de agonista seletivo para o subtipo b2 de adrenoceptores não confirmaram esta hipótese Abstract: Considering that isolated tissues of stressed rats show alterations on sensitivity to catecholamines, the objectives of this work was to verify whether isolated tissues from guinea-pigs submitted to the same experimental protocols also show similar alterations. Our results show that the swimming or footshock stress induce sensitivity alterations of the chronotropic response to catecholamines, which features depend on the intensity of the stressor agent. Right atria from guinea-pigs and rats submitted to swimming stress shows supersensitivity to isoproterenol, probably due to a reduction of the extraneuronal uptake of the agonist. However, atria from guinea pigs show subsensitivity to norepinephrine after one swimming session, whereas atria from rats only shows subsensitivity to noradrenaline after the third swimming session. We suggest that the mechanisms involved in this process could be similar to those described in rats, i.e., increase in the agonist neuronal uptake efficiency. Footshock stress induced similar alterations in rats and guinea-pigs right atria; supersensitivity to isoproterenol and subsensitivity to norepinephrine, suggesting b1-adrenoceptor desensitization and increase in the b2-adrenoceptor participation in the response. The analysis of data performed by Graph Pad Prism on the response to TA2005 did not confirm this hypothesis Mestrado Fisiologia Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Benedito de Oliveira Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: De paciente (JJO) da Faculdade de Medicina da Unicamp com quadro clínico característico de mieloma múltiplo foi obtido plasma com alta concentração de paraproteina M. A presença uma banda compacta indicativa de homogeneidade molecular característica de plasma patológico mielomatoso e de mobilidade eletroforetica tipo gamaglobulina lenta, foi detectada através de análise eletroforetica seguida de densitometria. O fracionamento do plasma JJO em DEAE celulose, levou a obtenção da fração A, cujo controle eletroforético evidenciou a purificação do componente M mielomatoso, livre de contaminações de outras proteinas plasmáticas. A fração A foi tipificada sorologicamente como uma imunoglobulina IgG do tipo IgGl com cadeias leves do isotipo lambda. O grau de pureza da proteina (JJO) (fração A) foi confirmado em eletroforese em gel de poliacrilamida na presença de SDS. A amostra, analisada na forma reduzida, mostrou a presença de bandas eletroforéticas com peso molecular em torno de 50000 e 25000 daltons em relação aos marcadores e que correspondem as cadeias pesada (H) e leve (L) respectivamente. A proteina M(JJO) foi caracterizada quimicamente como uma imunoglobulina IgGl com cadeias leves do isotipo lambda,através de autoradiografia da eletroforese em pH 3.5 do digesto péptico-tríptico da proteina JJO,reduzida e carboximetilada.Deste tratamento químico foram obtidas as bandas radioativas Jl, J2 e J3 de mobilidade eletroforética dos peptideos H-L, H-H e L respectivamente, e que caracterizam o padrão IgGl lambda Abstract: Plasma from a patient (JJO) with multiple myeloma showing high levels of M paraprotein was obtained from the faculdade de Medicina, Universidade Estadual de Campinas.The results of electrophoretic analysis followed by densitometry showed a compact band indicative of molecular homogeneity characteristic of patient presenting monoclonal gamopathy. Fraction A containing myeloma protein was isolated from the pathologyc serum JJO by ion exchange chomatografy in DEAE celulose. Electrophoretic control of this fraction indicates the purification of the M component, without contamination with other plasma proteins. Fraction A was typed serologicaly as an IgGl immunoglobulin with lambda light chains. The purity of JJO protein (fraction A) was confirmed in SDS-polyacrylamide gel electroforesis. The reduced JJO protein showed two bands of 50 and 25K corresponding to heavy and light chains respectively. The M (JJO) paraprotein in was chemically typed as an IgGl protein with lambda light chains by autoradiography of high voltage electrophoresis of a pepsin-trypsin digests of myeloma protein partially reduced and alkylated with iodoacetate-C14. This material produces a consistent autoradiographic pattern. Which shows radioactives bands Jl, J2 andJ3 of electrophoretic mobility characteristic the H-L, H-H and L. peptides respectively Doutorado Biologia Celular Doutor em Ciências Biológicas

Orientador: Angelo Luis Cortelazzo Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: No presente trabalho, foram utilizadas sementes de Eugenia uniflora (pitanga) e Campomanesia xanthocarpa (guabiroba), coletadas em matas nativas do município de Carazinho - RS, e armazenadas em vidros a 4°C. As sementes quiescentes foram colocadas para germinar e caracterizadas citoquímica e bioquimicamente quanto as suas principais reservas. A cada quinze dias foram realizados novos testes de germinação, com respectivo processamento do material para análises microscópicas e dosagens das reservas. Sementes de E. uniflora permaneceram viáveis durante todo o período analisado (105 dias), mantendo índices de germinação superiores a 70%. C. xanthocarpa apresentou-se viável apenas nos primeiros quinze dias, indicando característica fortemente recalcitrante. As duas espécies apresentaram-se com mais de 40% de umidade em seus frutos maduros. Para a pitanga elas têm massa 3 vezes maior do que para guabiroba e tem como principal reserva o amido (36%), seguido de proteínas (20%). Nesta última ocorre praticamente o inverso, com proteínas representando mais de 37% da matéria seca e quantidades consideráveis de carboidratos (18%). Os resultados indicaram ainda um elevado teor lipídico nas sementes de guabiroba. Em nível celular, as principais alterações observadas em guabiroba durante a perda de viabilidade foram devidas à fusão do material protéico e aumento do poder redutor do material fenólico presente nas células cotiledonares. Em pitanga, apesar de não ter havido perda de viabilidade, observou-se uma diminuição significativa dos grãos de amido e maior reatividade do material protéico ao longo do tempo de estocagem decorrente de um aumento na disponibilidade de radicais amina. Verificou-se ainda um aumento significativo no conteúdo de açúcares livres e solúveis, provavelmente decorrente da hidrólise do amido presente nas células das sementes de pitanga. Em termos comparativos, além das características apontadas, foi observada uma maior disponibilidade de material péctico nas paredes celulares das sementes de guabiroba Abstract: Seeds of Eugenia uniflora (pitanga) and Campomanesia xanthocarpa (guabiroba) were colected in native forest of district Carazinho - RS, and stored in glass at 4°C. Germination tests of quiescent seeds were carried out every 15 days. The viability of E. uniflora continued for the investigation period of 105 days, with germination index above 70%, while in C. xanthocarpa the viability was 15 days, characteristic of recalcitrant seeds. Moisture content of seeds was mainteinad around 40% in mature fruits. The main storage component of pitanga is starch (36%). Another important reserve is protein (20%), while guabiroba presents more than 37% of their fresh weight in proteins and considerable quantity of carbohydrates (18%). These seeds contain high lipid content. The cellular alterations of guabiroba during the loss of viability were the fusion of protein material and increase the reductibility of phenolic material present in cotyledon cells. Pitanga with continued viability, showed a significant reduction of starch grains and increase of protein reativity during storage.An increase in free and soluble sugar was detected, as a result of the starch hydrolysis of pitanga cells. Wall cells of guabiroba seeds showed more disponibility of pectic material in pitanga Mestrado Biologia Celular Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientadores: Jancarlo Ferreira Gomes, Alexandre Xavier Falcão Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: As parasitoses intestinais são altamente prevalentes no mundo, estando entre as maiores causadoras de doenças e óbitos em seres humanos. Atualmente, o diagnóstico laboratorial destas parasitoses é realizado por meio de procedimentos técnicos manuais, desenvolvidos na sua grande maioria há décadas, o que justifica a aplicabilidade de técnicas mais sensíveis e práticas para esta finalidade, visando obter resultados eficientes, especialmente em programas governamentais direcionados à Saúde Pública. Sendo assim, o objetivo do projeto foi de avaliar e validar uma nova técnica parasitológica, denominada TF-Test Modified, em comparação com três técnicas parasitológicas convencionais consagradas pela literatura: TF-Test Conventional; Rugai, Mattos e Brisola; e Kato-Katz/Helm-Test. As etapas do trabalho consistiram em realizar coleta de material fecal de 457 indivíduos localizados em regiões endêmicas para parasitoses no município de Campinas, SP; no processamento laboratorial de 1.828 exames; no diagnóstico de 14 espécies parasitárias; e na análise estatística qualitativa de resultados de maneira abrangente. Dentre as espécies parasitárias encontradas, helmintos e protozoários intestinais foram detectados em 42,23% de indivíduos pela técnica de TF-Test Modified, ante 36,76% por TF-Test Conventional, 5,03% por Kato-Katz/Helm-Test, e 4,16% por Rugai, Mattos e Brisola. Destes casos, 54,40% de infecção simples dos indivíduos demonstrou serem portadores de monoparasitismo. A nova técnica parasitológica de TF-Test Modified, quando comparada com as demais técnicas, apresentou alto valor de infecção, como exemplo para dupla, tripla e múltipla, de maneira a perfazer um total de 98,37% de infecções. Ademais, a nova técnica apresentou índice Kappa com grau de concordância Quase Perfeito em todos os parâmetros avaliados com estimativa de 95% (P

Orientador : Marcia Regina Braga Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Mestrado

Orientador: Celso Eduardo Benedetti Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A forma mais agressiva de cancro cítrico, cancrose A, é causada pela bactéria Xanthomonas axonopodis pv citri (Xac), que ataca qualquer variedade ou espécie de citros. Além de Xac, Xanthomonas axonopodis pv aurantifolii (Xaa) causa um tipo mais leve da doença, cancrose C, restrita ao limão Galego (Citrus aurantifolii). Na laranja Pêra (Citrus sinensis), Xaa provoca uma resposta de defesa que impede o desenvolvimento dos sintomas do cancro incluindo a ruptura da epiderme que é fundamental à disseminação da bactéria. Neste trabalho, abordamos a patogenicidade diferencial entre Xac e Xaa na laranja Pêra para estudar a expressão gênica na planta associada ao desenvolvimento dos sintomas (hipertrofia e hiperplasia celular) e à resposta de defesa. O projeto apresenta a identificação e caracterização de genes expressos diferencialmente em resposta à infecção por Xac e Xaa responsáveis pelo cancro cítrico. A partir de três estratégias independentes (Display diferencial de PCR, Hibridação subtrativa suprimida e micro arranjos de DNA) detalhou-se o perfil transcricional de folhas de laranja infiltradas com Xaa, Xac ou água como controle. Mais de 120 genes candidatos foram validados através de PCR quantitativo em tempo real ou hibridação Northern. Os genes diferencialmente expressos a 6 ou 48 hs após da infecção (hai) aparecem agrupados em categorias funcionais como: remodelamento de parede celular, divisão e expansão celular, tráfego de vesículas, resposta de defesa, metabolismo de nitrogênio e carbono e sinalização de hormônios como auxina, giberelina e etileno. Inicialmente, tanto Xaa quanto Xac induzem respostas de defesa associadas com ataque de patógenos incluindo a produção de espécies reativas de oxigênio e lignificação da parede celular. Notavelmente, a mudança no perfil transcricional mostra que Xac suprime as defesas da planta entre 6 e 48 hai, ao mesmo tempo em que induz genes relacionados com o metabolismo da parede celular, divisão celular e trafego de vesículas, entre outros. A conseqüência dessa manipulação transcricional no hospedeiro por parte de Xac dá origem à um estado fisiológico típico de expansão celular (hipertrofia). O inibidor de trafego de vesículas, Brefeldina A, atrasou o desenvolvimento dos sintomas do cancro, indicando que essa atividade está mais relacionada com hipertrofia celular do que com respostas de defesa. No perfil transcricional de folhas infectadas com Xaa destaca-se a ativação de uma via de sinalização por proteína quinase ativada por patógeno, envolvendo também fatores de transcrição do tipo WRKY, assim como elementos de resposta a etileno. Tanto Xac quanto Xaa parecem modular a transcrição de genes relacionados com sinalização e transporte de auxinas e biosíntese de giberelina. O tratamento de folhas de laranja com, ácido naftalenoacético (NAA) e ácido giberélico (GA3) demonstrou que esses hormônios induzem a expressão de genes de remodelamento de parede celular, biosíntese de giberelina e sinalização de auxina. Além disso, o inibidor de biosíntese de giberelina (Chlorocoline Chloride) diminuiu significativamente a expressão de genes induzidos por NAA sugerindo que exista uma regulação cruzada entre auxina e giberelina que controla a expressão de genes relacionados com divisão e expansão celular em citros. Finalmente, duas regiões promotoras de genes que codificam proteínas relacionadas com patogenicidade (PR-1 e PR-5) foram isoladas e caracterizadas. Esses genes são fortemente induzidos por Xaa e Xac em 6 e 48 hai. Substancialmente, existem elementos similares com o "upa box" nas regiões promotoras de PR-1 e PR-5. Mediante experimentos de Electrophoretic Mobility Shift Assays (EMSA) demonstrou-se que a proteína PthA4 de Xanthomonas é capaz de ligar-se no "upa box" presente nos promotores de PR-1 e PR-5. Tanto o promotor de PR-1 quanto o de PR-5 dirigem a expressão transitória do gene repórter uidA em N. benthamiana mediante Agro infiltração. Abstract: The most aggressive form of the citrus canker disease is caused by the bacteria Xanthomonas axonopodis pv. citri (Xac), which can infect all commercial varieties or species of citrus. In addition to Xac, Xanthomonas axonopodis pv. aurantifolii (Xaa) causes a weaker form of the disease, known as cancrose C, which is restricted to Mexican Lime (Citrus aurantifolii). In sweet orange (Citrus sinensis), Xaa triggers a defense response that halts the canker-symptoms development including the epidermal rupture, which is essential for bacterial dissemination. In this work, we approached the differential pathogenicity existing between Xac and Xaa in order to survey the host gene expression associated with symptoms development (cellular hypertrophy and hyperplasia) and defense response in sweet orange. The project presents the identification and initial characterization of differentially expressed genes in response to the infection with the citrus canker pathogens, Xac and Xaa. Three independent strategies were conducted in order to have a detailed transcriptional profiling of orange leaves infected with Xaa, Xac or water as mock control (Differential Display PCR, Suppression Subtractive Hybridization and GeneChip Microarrays). More than 120 candidate genes were validated through quantitative real time PCR or Northern blot. The differentially expressed genes at 6 or 48 hours after infection (hai) were grouped into functional categories: cell-wall remodeling, cell division and expansion, vesicle trafficking, carbon and nitrogen metabolism or hormone signaling, auxin, gibberellin and ethylene. Initially, both Xaa and Xac elicit a defense response associated with pathogen attack that includes the production of reactive oxygen species (ROS) and cell-wall lignification. Notably, the changes in the transcriptional profiles show that Xac suppresses the plant defenses between 6 and 48 hai and at the same time it induces genes related to the cell-wall metabolism, cell division and vesicle trafficking among others. The consequence of this host manipulation by Xac originates a physiological state very similar to that of cell expansion (hypertrophy). The vesicle trafficking inhibitor, Brefeldin A, delayed the development of canker symptoms indicating that this activity is more related to the cellular enlargement than to the defense responses. The transcriptional profile of Xaa-infiltrated leaves highlights the activation of amitogen-activated protein kinase (MAPK) signaling pathway related to pathogen attack with the involvement of other components of defense responses like WRKY-transcriptional factors and ethylene-response elements. Both Xac and Xaa appear to modulate the transcription of genes related to auxin signaling and transport and gibberellin biosynthesis. Treatments of orange leaves with 1- naphthylphthalamic acid (NAA) . Resumo: A forma mais agressiva de cancro cítrico, cancrose A, é causada pela bactéria Xanthomonas axonopodis pv citri (Xac), que ataca qualquer variedade ou espécie de citros. Além de Xac, Xanthomonas axonopodis pv aurantifolii (Xaa) causa um tipo mais leve da doença, cancrose C, restrita ao limão Galego (Citrus aurantifolii). Na laranja Pêra (Citrus sinensis), Xaa provoca uma resposta de defesa que impede o desenvolvimento dos sintomas do cancro incluindo a ruptura da epiderme que é fundamental à disseminação da bactéria. Neste trabalho, abordamos a patogenicidade diferencial entre Xac e Xaa na laranja Pêra para estudar a expressão gênica na planta associada ao desenvolvimento dos sintomas (hipertrofia e hiperplasia celular) e à resposta de defesa. O projeto apresenta a identificação e caracterização de genes expressos diferencialmente em resposta à infecção por Xac e Xaa responsáveis pelo cancro cítrico. A partir de três estratégias independentes (Display diferencial de PCR, Hibridação subtrativa suprimida e micro arranjos de DNA) detalhou-se o perfil transcricional de folhas de laranja infiltradas com Xaa, Xac ou água como controle. Mais de 120 genes candidatos foram validados através de PCR quantitativo em tempo real ou hibridação Northern. Os genes diferencialmente expressos a 6 ou 48 hs após da infecção (hai) aparecem agrupados em categorias funcionais como: remodelamento de parede celular, divisão e expansão celular, tráfego de vesículas, resposta de defesa, metabolismo de nitrogênio e carbono e sinalização de hormônios como auxina, giberelina e etileno. Inicialmente, tanto Xaa quanto Xac induzem respostas de defesa associadas com ataque de patógenos incluindo a produção de espécies reativas de oxigênio e lignificação da parede celular. Notavelmente, a mudança no perfil transcricional mostra que Xac suprime as defesas da planta entre 6 e 48 hai, ao mesmo tempo em que induz genes relacionados com o metabolismo da parede celular, divisão celular e trafego de vesículas, entre outros. A conseqüência dessa manipulação transcricional no hospedeiro por parte de Xac dá origem à um estado fisiológico típico de^expansão celular (hipertrofia). O inibidor de trafego de vesículas, Brefeldina A, atrasou o desenvolvimento dos sintomas do cancro, indicando que essa atividade está mais relacionada com hipertrofia celular do que com respostas de defesa.No perfil transcricional de folhas infectadas com Xaa destaca-se a ativação de uma via de sinalização por proteína quinase ativada por patógeno, envolvendo também fatores de transcrição do tipo WRKY, assim como elementos de resposta a etileno. Tanto Xac quanto Xaa parecem modular a transcrição de genes relacionados com sinalização e transporte de auxinas e biosíntese de giberelina. O tratamento de folhas de laranja com, ácido naftalenoacético (NAA) e ácido giberélico (GA3) demonstrou que esses hormônios induzem a expressão de genes de remodelamento de parede celular, biosíntese de giberelina e sinalização de auxína. Além disso, o inibidor de biosíntese de giberelina (Chlorocoline Chloridè) diminuiu significativamente a expressão de genes induzidos por NAA sugerindo que exista uma regulação cruzada entre auxina e giberelina que controla a expressão de genes relacionados com divisão e expansão celular em citros. Finalmente, duas regiões promotoras de genes que codificam proteínas relacionadas com patogenicidade (PR-1 e PR-5) foram isoladas e caracterizadas. Esses genes são fortemente induzidos por Xaa e Xac em 6 e 48 hai. Substancialmente, existem elementos similares com o "upa box" nas regiões promotoras de PR-1 e PR-5. Mediante experimentos de Electrophoretic Mobility Shift Assays (EMSA) demonstrou-se que a proteína PthA4 de Xanthomonas é capaz de ligar-se no "upa box" presente nos promotores de PR-1 e PR-5. Tanto o promotor de PR-1 quanto o de PR-5 dirigem a expressão transitória do gene repórter uidA em N. benthamiana mediante Agro infiltração Abstract: The most aggressive form of the citrus canker disease is caused by the bacteria Xanthomonas axonopodis pv. citri (Xac), which can infect all commercial varieties or species of citrus. In addition to Xac,Xanlhomonas axonopodis pv. aurantifolii (Xaa) causes a weaker form of the disease, known as cancrose C, which is restricted to Mexican Lime {Citrus aurantifolii). In sweet orange {Citrus sinensis), Xaa triggers a defense response that halts the canker-symptoms development including the epidermal rupture, which is essential for bacterial dissemination. In this work, we approached the differential pathogenicity existing between Xac and Xaa in order to survey the host gene expression associated with symptoms development (cellular hypertrophy and hyperplasia) and defense response in sweet orange. The project presents the identification and initial characterization of differentially expressed genes in response to the infection with the citrus canker pathogens, Xac and Xaa. Three independent strategies were conducted in order to have a detailed transcriptional profiling of orange leaves infected with Xaa, Xac or water as mock control (Differential Display PCR, Suppression Subtractive Hybridization and GeneChip Microarrays). More than 120 candidate genes were validated through quantitative real time PCR or Northern blot. The differentially expressed genes at 6 or 48 hours after infection (hai) were grouped into functional categories: cell-wall remodeling, cell division and expansion, vesicle trafficking, carbon and nitrogen metabolism or hormone signaling, auxin, gibberellin and ethylene. Initially, both Xaa and Xac elicit a defense response associated with pathogen attack that includes the production of reactive oxygen species (ROS) and cell-wall lignification. T Notably, the changes in the transcriptional profiles show that Xac suppresses the plant defenses between 6 and 48 hai and at the same time it induces genes related to the cell-wall metabolism, cell division and vesicle trafficking among others. The consequence of this host manipulation by Xac originates a physiological state very similar to that of cell expansion (hypertrophy). The vesicle trafficking inhibitor, Brefeldin A, delayed the development of canker symptoms indicating that this activity is more related to the cellular enlargement than to the defense responses. The transcriptional profile of Xaa-infiltrated leaves highlights the activation of a mitogen-activated protein kinase (MAPK) signaling pathway related to pathogen attack with the involvement of other components of defense responses like WRKY-transcriptional factors and ethylene-response elements. Both Xac and Xaa appear to modulate the transcription of genes related to auxin signaling and transport and gibberellin biosynthesis. Treatments of orange leaves with 1-naphthylphihalamic acid (NAA) e Gihherellic Acid (GKi) demonstrated that these hormones induce the expression of genes related to cell-wall remodeling, gibberellin biosynthesis and auxin signaling. Moreover, the gibberellin-biosynthesis inhibitor (Chlorocoline Chloride) decreased significantly the expression of auxin-induced genes suggesting a cross-talk regulation between auxin and gibberellin controlling the expression of citrus genes associated with cell division and expansion. Finally, two promoter regions of the pathogenesis related (PR) genes, PR-I and PR-5.2, were isolated and characterized. These genes are strongly up-regulated by Xaa and Xac at 6 or 48 hai. Substantially, there are "upd" box-like motifs in the promoter regions of both PR-I and PR-5.2. By means of Electrophoretic Mobility Shift Assays (EMSA) we have demonstrated that PthA4 from Xac is capable of binding the "upd" box-like regions found in PR-1 e PR-5 promoters. Furthermore, both of the isolated promoters (PR-1 and PR-5) address the transient expression of the reporter gene uidA in JV. bethamiana leaves through agro infiltration Doutorado Genética Vegetal e Melhoramento Doutor em Genética e Biologia Molecular

Orientador : William Jose da Silva Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Oito linhagens de milho, quatro tolerantes e quatro sensíveis ao alumínio, previamente selecionadas em solução nutritiva, foram utilizadas para o desenvolvimento de uma técnica para o desenvolvimento de uma técnica de cultura em areia, para discriminar genótipos que conferem tolerância de milho ao alumínio. O método foi estabelecido através da análise do crescimento da radícula, de plântulas cultivadas em potes plásticos contendo areia lavada de rio, irrigados com solução de 0 (zero), 15, 30, 45, 60, 75 ppm de Al. Os valores de pH obtidos com esses tratamentos foram 5,90, 5,65, 5,42, 4,97, e 4,80, respectivamente. Sete dias após o plantio, as plântulas foram coletadas e a toxidade do alumínio. Foi avaliada pelo comprimento da radícula. Os resultados indicam que o tratamento com solução de 45 ppm de alumínio, já foi suficiente para discriminar genótipos tolerantes dos sensíveis. Contudo, e sugerida a concentração de 75 ppm de Al, visto que as reduções no comprimento da radícula das plântulas sensíveis, causadas nesse tratamento, são significativamente maiores que aquelas observadas no tratamento com 45 ppm. Essa elevação no teor de alumínio da solução teste, entretanto, não provocou qualque redução no comprimento das radículas das plântulas tolerantes ...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital Abstract: Four alumínum ' tolerant and four aluminum ' sensitive maize inbred lines, previously selected in nutrient solution, were used as testers for the development of a sand culture technique , to screen Al ' tolerant genotypes. The method was adjusted through the study of seedling root growth in plastic pots with river sand irrigated with solution of 0 (Zero), 15, 30, 45, 60, and 75 ppm of Al. The correspondent pH values were respectively, 5,90, 5,65, 5,42, 5,05, 4,97 and 4,80. Aliminum toxicity was evaluated through its effects on radicle length, seven days after planting. Data indicated on radicle length, seven days after planting. Data indicated that the solution of 45 ppm of Al, is already sufficient to discriminate tolerant from sensitive genotypes in sand culture. It is suggested, however, that the screening be done with a 75 ppm solution of Al, since root length reductions of sensitive plants, were significantly higher than the ones found at 45 ppm. This increase in aluminium, however, did not cause any significant reduction in radicle length of tolerant plants. Sixty six inbred lines were screened using sand culture and 75 ppm solution of Al. The were screened using sand culture and 75 ppm solution of Al. The effect of Al was studied in seedling characteristics as radicle length., root dry weight, top dry weight, number of seminal roots and endosperm dry weight ...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations Mestrado Mestre em Ciências Biológicas