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Orientadores: Jose Wilson Magalhães Bassani, Rosana Almada Bassani Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Eletrica e de Computação Resumo: Embora haja demonstração de que a estimulação simpática tenha efeito facilitatório sobre a indução de atividade espontânea em miocárdio há controvérsia sobre a participação dos tipos de adrenoceptores na mediação deste efeito. No presente trabalho, descrevemos um método desenvolvido para determinação, em átrio esquerdo isolado (AE) de rato, da relação concentração-efeito para agentes que exercem efeito arritmogênico por aumento da mobilização celular de 'Ca POT. 2+¿. O método baseou-se na interposição de pausas estimulatórias, durante as quais registraram-se contrações espontâneas (CE), precedidas ou não por trens estimulatórios de alta freqüência (5 Hz). O protocolo estimulatório foi repetido na presença de diferentes concentrações de agonistas. Para cada concentração de agonista, a resposta arrítmica foi considerada como a soma dos números de CE/min, no total de preparações. Foi analisada também a resposta inotrópica, como sendo o incremento de força ou encurtamento de pico, desenvolvidos em AE e miócitos ventriculares (MV), respectivamente. A relação foi ajustada por uma função sigmóide para cálculo de Min (i.e., valor da variável na ausência do agonista), Rmax (resposta máxima) e pD2 (-log da concentração do agonista que produziu uma resposta igual a 50% de Rmax). Este método foi aplicado no estudo dos tipos de adrenoceptores envolvidos na resposta arrítmica a catecolaminas em AE e MV. A Rmax inotrópica à ativação de adrenoceptores 'alfa IND. 1¿ + 'beta IND. 1¿ foi comparável àquela por ativação de apenas receptores 'beta IND. 1¿, em ambos AE e MV. Já a ativação de adrenoceptores 'alfa IND. 1¿ produziu uma Rmax inotrópica de apenas metade daquela observada pela estimulação 'alfa IND. 1¿ + 'beta IND. 1¿. Da mesma forma, a resposta arrítmica foi semelhante para estimulação de adrenoceptores a1+ß1 e de apenas receptores 'beta IND. 1¿. Entretanto, nenhuma resposta foi obtida pela estimulação de receptores adrenérgico do tipo 'alfa IND. 1¿. Estes resultados indicam que a estimulação de adrenoceptores 'alfa IND. 1¿, apesar de evocar uma resposta inotrópica positiva em ambos AE e MV, não é arritmogênica. A ativação do tipo 'beta¿, por outro lado, parece ser a principal via para estimulação inotrópica simpática e na indução de arritmias. Além disso, concluímos que parece existir antagonismo funcional entre os subtipos de adrenoceptores 'beta¿, manifestado por ações pró- e anti-arrítmicas dos subtipos 'beta IND. 1¿ e 'beta IND. 2¿, respectivamente, em miocárdio (tanto atrial, quanto ventricular) de rato Abstract: Although it has been shown that sympathetic stimulation facilitates the appearance of myocardial spontaneous activity, it is still not clear which types of adrenoceptors mediate this effect. In this study, we describe a method developed for determination, in isolated rat atria (AE), of the concentration-effect relationship for arrhythmogenic agents that act via promotion of cell 'Ca POT. 2+¿ overload. The method was based on the interposition of stimulatory rest periods, during which spontaneous contractions (CE) were recorded, preceded or not by high frequency (5 Hz) stimulus trains. The stimulation protocol was applied at each agonist concentration, and the arrhythmic response was taken as the sum of the number of CE/min in all preparations. The positive inotropic response was considered as the agonist-dependent increment of developed force or peak shortening in AE and isolated ventricular myocytes (MV), respectively. Concentration-effect curves were determined by fitting a sigmoid function, from which the following parameters were estimated: Min (i.e., value of the variable in the absence of the agonist), Rmax (maximal response) e 'pD IND. 2¿ (-log of the molar agonist concentration that evokes a response equal to 50% of Rmax). This method was applied to investigate the adrenoceptor types involved in the mediation of catecholamine-induced arrhythmogenesis in AE and MV. Inotropic Rmax to activation of 'alfa IND. 1¿ + 'beta IND. 1¿ adrenoceptors was comparable to that of activation of solely 'beta IND. 1¿ adrenoceptors in both AE and MV. However, Rmax to selective 'alfa IND. 1¿ adrenoceptor activation was only half of that produced by 'alfa IND. 1¿ + 'beta IND. 1¿ adrenoceptor stimulation. The arrhythmic responses to 'alfa IND. 1¿ + 'beta IND. 1¿ and 'beta IND.1¿ receptor stimulation were similar, but selective a1 adrenoceptor activation was unable to evoke any spontaneous activity. The results indicate that a1 adrenoceptors, although able to mediate stimulation in both AE and MV, are not involved in arrhythmogenesis. 'beta¿-adrenoceptor activation, thus, seems the main type involved in both inotropic and arrhythmic responses to catecholamines. In addition, our results point out a functional antagonism between 'beta¿-adrenoceptor subtypes: i.e., pro- and anti-arrhythmic effects mediated by 'beta IND. 1¿ and 'beta IND. 2¿-adrenoceptors, respectively in both atrial and ventricular rat myocardium Mestrado Engenharia Biomédica Mestre em Engenharia Elétrica

Orientador: Rosana Almada Bassani Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Tem sido descrita supersensibilidade ao efeito cronotrópico do isoproterenol (ISO) em átrios direitos de ratos submetidos a choque nas patas, mas há pouca informação com relação à resposta inotrópica, principalmente ventricular. O objetivo deste trabalho foi estudar os efeitos inotrópico e pró-arrítmico de catecolaminas em miócitos ventriculares esquerdos de ratos nesta condição de estresse, em comparação a animais controles. Ratos Wistar machos adultos foram submetidos a sessões diárias de choque nas patas (30 min de duração) por 3 dias. Foram medidos o encurtamento celular de pico e a freqüência de contrações espontâneas das células. Obteve-se curvas concentração-efeito para noradrenalina (NA), ISO, 3-isobutil-1-metilxantina (IBMX) e CaCl2, com a determinação dos parâmetros Rmax (resposta máxima) e pD2 (-log da concentração do agonista que produz uma resposta= 0,5 Rmax). A população de receptores adrenérgicos (RA) _ foi analisada pelo método de Schild. Observamos, em células de animais do grupo choque, redução da Rmax inotrópica à NA e ao ISO. Estas diferenças permaneceram durante bloqueio de RA_1, mas foram abolidas pelo bloqueio de RA_1 (aumento da Rmax ao ISO apenas no grupo choque) ou _2 (redução da Rmax no apenas no grupo controle). O valor pA2 do metoprolol e a resposta inotrópica a IBMX e CaCl2 foram equivalentes entre os grupos. As células de ratos do grupo choque se mostraram mais reativas à ação pró-arrítmica da NA e do ISO, mas não aos demais agonistas. Todos os procedimentos que aboliram a redução de Rmax inotrópica a catecolaminas em miócitos de animais estressados também atenuaram as diferenças na resposta arrítmica a estes agonistas, o que pode indicar que a resposta inotrópica anormal no grupo choque seja conseqüência da maior atividade espontânea induzida pelas catecolaminas. Em conclusão, os resultados indicam que o estresse por choque nas patas causa aumento da reatividade de miócitos ventriculares de rato ao efeito pró-arrítmico de catecolaminas e reduz a eficácia aparente destes agonistas em estimular o inotropismo Abstract: Supersensitivity to isoproterenol (ISO) chronotropic effect has been described in right atria from footshock-stressed rats, but information on inotropic responsiveness, particularly of the ventricles, is scarce. The goal of this study was to analyze the inotropic and pro-arrhythmic effect of catecholamines on left ventricular myocytes from footshockstressed rats, in comparison with cells from control animals. Adult male Wistar rats were submitted to 30-min long daily footshock sessions for 3 days. Peak cell shortening and the rate of spontaneous contractions during rest were measured in myocytes at 23 oC. Concentration-effect curves were obtained for noradrenaline (NA), ISO, 3-isobutyl-1- methylxanthine (IBMX) e CaCl2, for estimation of the following parameters Rmax (maximum response) and pD2 (-log of the agonist molar concentration that evokes halfmaximum response). The _ adrenoceptor (AR) population was analyzed by the Schild¿s method. In the footshock group, Rmax values to NA and ISO were decreased. This difference was unaffected by _1AR blockade, but was abolished by blockade of _1AR (which increased Rmax to ISO in the footshock group only) or _2-AR (which decreased Rmax to ISO solely in the control group). Metoprolol pA2 value and the inotropic responsiveness to IBMX and CaCl2 were similar in both groups. Cells from footshockstressed rats were more responsive to NA and ISO pro-arrhythmic action. All procedures that abolished the difference in inotropic response between footshock and control groups also diminished the differences in arrhythmic responses. These results indicate that the inotropic hyporesponsiveness to catecholamines in the footshock group may be the result of increased spontaneous activity induced by these agonists. We conclude that footshock stress enhances catecholamine pro-arrhythmic effect in rat ventricular myocytes, while simultaneously decreases the inotropic apparent efficacy of these agonists Mestrado Fisiologia Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientadores: Tatiana de Sousa da Cunha, Fernanda Klein Marcondes Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba Resumo: O estresse crônico é um fator de risco para o desenvolvimento de hipertensão, aterosclerose e diabetes, e já demonstramos que o protocolo experimental de estresse crônico moderado e imprevisível (ECMI) é capaz de induzir resistência à insulina, dislipidemia, diminuição na produção de óxido nítrico, aumento da atividade do sistema renina-angiotensina e disfunção endotelial em ratos. Por outro lado, é vasta a literatura demonstrando que a prática regular de exercício físico é uma ferramenta não farmacológica eficaz para o tratamento das disfunções induzidas pelo estresse, incluindo os prejuízos cardiovasculares e metabólicos. Dentre os modelos de treinamento mais utilizados em pesquisas experimentais, estão a natação e a esteira rolante. Uma das vantagens do uso da esteira rolante refere-se à facilidade no ajuste da intensidade do exercício. Além disto, o exercício em esteira pode promover menor ativação de biomarcadores do estresse, quando comparado à natação. Apesar destas vantagens, sabe-se que nesta condição os animais são submetidos ao treinamento de forma "forçada" e ainda não está claro qual o impacto deste estímulo sobre o sistema cardiovascular e sobre o metabolismo, principalmente em animais estressados cronicamente. Sendo assim, o objetivo do presente estudo foi avaliar o papel do treinamento físico de intensidade moderada, em esteira rolante, sobre os prejuízos hormonais, metabólicos e cardiovasculares desencadeados pelo ECMI. Foram utilizados 40 ratos machos Sprague-Dawley, divididos em 4 grupos experimentais: Controle, Estresse, Exercício e Exercício + Estresse. Os animais do grupo Exercício foram submetidos a 8 semanas de treinamento físico em esteira ergométrica adaptada (intensidade moderada, 50-70% do teste de esforço), 5x / semana, 1 hora por dia. Na 4ª, 5ª e 6ª semanas, os animais foram também submetidos ao protocolo de ECMI, ao longo de 7 dias, repetindo-se os procedimentos por 3 semanas consecutivas. Durante a 7ª e 8ª semanas, os animais foram submetidos apenas ao treinamento físico; portanto duas semanas após a aplicação do último estímulo estressor os animais foram mortos por decapitação para coleta de sangue e do ventrículo esquerdo, e as amostras foram armazenadas para posteriores dosagens. Os resultados foram analisados pela Análise de Variância bifatorial, seguidos do Teste de Tukey. A aptidão física dos animais submetidos ao ECMI foi menor do que a dos animais controle, e o treinamento físico não foi capaz de atenuar este prejuízo. O exercício físico preveniu o desenvolvimento de alterações metabólicas induzidas pelo ECMI, reduzindo a hiperinsulinemia, o índice de resistência à insulina e a dislipidemia, Além disto, também foi capaz de reduzir a concentração cardíaca de serotonina e a atividade circulante da Enzima Conversora de Angiotensina (ECA), aumentadas em resposta ao ECMI. Entretanto, o treinamento físico não foi capaz de reduzir a concentração circulante de noradrenalina, dopamina, serotonina, e o estresse oxidativo, que mantiveram-se elevados nos grupos submetidos ao ECMI. Assim, os resultados do presente estudo sugerem que o exercício físico melhora os prejuízos metabólicos desencadeados pelo ECMI, bem como a modulação sobre o sistema serotoninérgico cardíaco. Entretanto, pela primeira vez os resultados do presente estudo mostram que alguns dos efeitos maléficos induzidos pelo ECMI não são atenuados em resposta ao treinamento, e podem inclusive ser potencializados por este Abstract: Chronic stress is a risk factor for the development of hypertension, atherosclerosis and diabetes. The protocol of chronic mild and unpredictable stress (CMS) is an animal model of chronic stress. Previously, it has been shown that CMS induced insulin resistance, dyslipidemia, oxidative stress, and increase in renin angiotensin system and endothelial dysfunction in rats. On the other hand, the literature is in? vast demonstrating that regular physical exercise is an effective non-pharmacological tool for the treatment of disorders induced by stress, including cardiovascular and metabolic damage. Among the training models most used in experimental research, there are swimming and treadmill. One of the advantages of using treadmill refers to the ease of adjusting the intensity of the exercise. In addition, the treadmill exercise can promote lower activation of stress biomarkers when compared to swimming. Despite these advantages, it is known that in this condition the animals are undergoing to "forced" training and it is not yet clear the impact of this stimulus on the cardiovascular system and metabolism, especially in chronically stressed animals. Thus, the aim of this study was to evaluate the role of physical training of moderate intensity on a treadmill, on the hormonal, metabolic and cardiovascular damage triggered by CMS. Forty male Sprague-Dawley rats were randomized in 4 experimental groups: Control, Stress, Exercise, Exercise + Stress, submitted to CMS protocol or to 8-week treadmill training (50-70% of the maximal exercise test). In the 4th, 5th and 6th wk, the animals were submitted to CMS protocol over seven days, repeating the procedures for 3 consecutive weeks. During the 7 th and 8 th wk, the animals were subjected only to physical training; Two weeks after application of the last stressor stimulus, the animals were killed by decapitation and blood and left ventricle were collected. The samples were stored for future analyzes. The results were analyzed by two-way analysis of variance followed by Tukey test. Physical performance of the animals submitted to the CMS was lower than that of the control animals, and physical training has not been able to alleviate this loss. The exercise prevented the development of metabolic changes induced by CMS, reducing the hyperinsulinemia, insulin resistance index and dyslipidemia. In addition, it was also capable of reducing the cardiac concentration of serotonin and systemic activity of the Angiotensin Converting Enzyme (ACE) increased in response to CMS. However, physical training was not able to reduce the circulating concentration of noradrenaline, dopamine, serotonin, and oxidative stress, which remained high in the groups submitted to the CMS. Thus, the results of this study suggest that exercise improves metabolic losses triggered by CMS and modulation on cardiac serotonergic system. However, for the first time the results of this study show that some of the harmful effects induced by CMS are not attenuated in response to training, which may even be enhanced by this Doutorado Fisiologia Oral Doutora em Odontologia CNPQ 140926/2012-7 Funcamp FAEPEX

Orientador: Gilberto de Nucci Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: Trabalhos de fisiologia comparada são fundamentais para o entendimento das relações evolutivas entre grupos, como os processos fisiológicos e funcionais e as diferentes adaptações de diversas espécies, ou seja, ganhos e perdas evolutivas. Estudos anteriores realizados por nosso grupo envolvendo espécies evolutivamente antigas como Chelonoidis carbonaria (jabuti-piranga) e Pantherophis guttatus (cobra-do-milharal) demonstraram que a contração induzida por estímulo elétrico de campo (EFS) das aortas isoladas desses animais é mediada por catecolaminas liberadas pelo endotélio, sem a influência de nervos adrenérgicos; tal mecanismo difere do mecanismo clássico de liberação de catecolaminas no sistema vascular de mamíferos, onde a inibição dos nervos adrenérgicos leva a diminuição ou abolição da resposta contrátil. Este trabalho por sua vez, teve como objetivo i) investigar o mecanismo envolvido na contração induzida por EFS de aortas isoladas de espécies evolutivamente mais recentes, cobras peçonhentas Crotalus durissus terrificus (cascavel) e Bothrops jararaca (jararaca), ii) comparar tais resultados com os obtidos anteriormente em jabuti-piranga e cobra-do-milharal, e iii) investigar o papel do endotélio diante desse estímulo. Adicionalmente, uma vez que nosso grupo também vem realizando ensaios envolvendo alguns mamíferos, este trabalho buscou por evidências acerca da produção de catecolaminas em endotélio humano em tecido de paraganglioma humano. Os anéis isolados de aorta de cascavéis e jararacas foram contraídos por meio de EFS utilizando diferentes frequências de estímulo (4, 8 e 16 Hz) na presença e ausência de agentes simpatolíticos (fentolamina e guanetidina) e o bloqueador de canais de sódio voltagem dependente tetrodotoxina (TTX), assim como em anéis aórticos com endotélio intacto ou removido. Foram também realizadas análises de imuno-histoquímica na aorta dessas espécies e no endotélio humano a fim de investigar a expressão da tirosina hidroxilase (TH), uma enzima essencial na síntese de catecolaminas, e da proteína S100, um marcador neural. A contração induzida por EFS dos anéis de aorta isolados de cascavel ou jararaca foi dependente da frequência e da presença de endotélio, uma vez que em anéis ausentes de endotélio a contração se demonstrou reduzida. Na presença de guanetidina e fentolamina essa contração induzida por EFS foi reduzida ou abolida, porém, na presença de TTX, não houve diferença significativa nas contrações em todas as frequências. Análises de imuno-histoquímica revelaram a expressão de TH exclusivamente no endotélio dessas aortas, porém não foi observada a expressão de proteína S100. De forma semelhante, endotélio no tecido de paraganglioma humano revelou TH enquanto as células neoplásicas apresentavam a expressão de ambos TH e S100. Nossos resultados sugerem que, a contração estimulada em anéis de aorta de cascavel e jararaca, apresenta a liberação de catecolamina é mediada pelo endotélio sem envolvimento de nervos simpáticos. Demonstramos também a expressão de TH no endotélio humano, sugerindo uma função de síntese de catecolaminas nesse tecido Abstract: Comparative physiology studies are fundamental for understanding evolutionary relationships between species, such as physiological processes and functions of different species, adaptations, evolutionary gains and losses. Previously, our group have showed that, in isolated ring from aorta of evolutionarily the ancient species Chelonoidis carbonaria (jabuti-piranga) and Pantherophis guttatus (corn snake), the aortae contraction induced by electrical field stimulation (EFS) is mediated by catecholamines released by the endothelium without the influence of adrenergic nerves, unlike the classical mechanism seen in the vascular system of mammals, in which, when adrenergic nerves are inhibited, there is a reduction or a abolishment of the vessel contractile response. This study aimed to i) explore the mechanism involved in EFS evoked contraction of aortae isolated from the venomous snakes Crotalus durissus terrificus (rattlesnake) and Bothrops jararaca (jararaca); ii) compare these results with those obtained in more ancient reptile species as jabuti-piranga and corn snake, and iii) investigate the role of endothelium in EFS-induced aortae contraction. Additionally, as our group has been also studying the endothelium-derivated catecholamine release in some mammals, we evaluated of endothelial catecholamine production in human endothelium of a paraganglioma biopsy. Aortac rings isolated by rattlesnakes and jararacas were contracted by the EFS in a frequency-dependent manner (4, 8 and 16 Hz), in the presence and absence of sympatholytic agents (phentolamine and guanethidine) and the voltage-gated sodium channel blocker tetrodotoxin (TTX), as well as in aortae with intact or removed endothelium. Immunohistochemistry analysis were performed in the aorta of these species and in the human endothelium in order to investigate the expression of tyrosine hydroxylase (TH), an enzyme essential in the detection of catecholamines, and protein S100, a neural marker. The EFS-evoked contractions of rattlesnake and jararaca aortae were frequency-but also endothelium-dependent once the rings contractions were reduced in the absence of endothelium. When incubated with guanethidine and phentolamine, the contractions were reduced or abolished, however, in the presence of TTX, there was no significant difference in aortae contraction. Immunohistochemistry analyses has revealed that the expression of TH was exclusive to the endothelium of the snake's aorta and the S100 protein expression was not observed. Likewise, the endothelium of human paraganglioma tissue only expressed TH, while neoplastic cells expressed both TH and S100 in neoplastic cells. Our results suggest that, the contraction stimulated by EFS in aortic rings from rattlesnake and jararaca, is mediated by release of catecholamine from the without involvement of sympathetic nerves. We also demonstrate the expression of TH in the human endothelium, suggesting a catecholamine synthesis function in this tissue Doutorado Farmacologia Doutor em Farmacologia FAPESP 2015/15583-7, 2016/09539-8

Orientadores: Tatiana de Sousa da Cunha, Fernanda Klein Marcondes Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba Resumo: O estresse crônico é um fator de risco para o desenvolvimento de hipertensão, aterosclerose e diabetes. O protocolo de estresse crônico moderado e imprevisível (ECMI) é um modelo animal de estresse crônico. Em estudo prévio, foi observado que o ECMI induziu resistência à insulina, dislipidemia e disfunção endotelial, em ratos. Considerando que o aumento na atividade do sistema renina-angiotensina (SRA) tem sido associado à disfunção endotelial e à resistência à insulina, o objetivo deste estudo foi investigar a participação do SRA sobre os efeitos cardiovasculares e metabólicos induzidos pelo ECMI, em ratos. Foram utilizados 62 ratos machos Sprague-Dawley, com dois meses de idade. A duração do período experimental foi de 7 semanas. No Experimento 1, os animais foram divididos em 2 grupos: controle e estresse. O ECMI foi aplicado nas semanas 3, 4 e 5 e os animais foram eutanasiados 1 e 15 dias após a aplicação do protocolo de ECMI. O ECMI aumentou a atividade sistêmica da renina e da enzima conversora de angiotensina (ECA), da ECA na aorta torácica e as concentrações plasmáticas de angiotensina II e angiotensina (1-7). Com base nestes resultados, que mostraram aumento da atividade do SRA induzido pelo ECMI, o Experimento 2 foi delineado com o objetivo de avaliar a participação da angiotensina II e do seu receptor AT1 nos efeitos desencadeados pelo ECMI sobre a captação de glicose e sobre o sistema cardiovascular. Outros animais foram divididos em 4 grupos experimentais: controle, estresse, controle losartan (antagonista do receptor AT1 - 50 mg/Kg/dia, v.o.) e estresse losartan. O ECMI induziu aumento da área sob a curva, no teste de tolerância à glicose (TTG), diminuição da resposta vasodilatadora à acetilcolina na aorta torácica in vitro e aumento da pressão arterial in vivo, em comparação com o grupo controle, sem haver diferença entre os grupos controle, controle losartan e estresse losartan. Estes resultados mostram que os efeitos do ECMI levaram ao processo de disfunção endotelial em ratos, os quais foram associados positivamente à hiperatividade do SRA, bem como foram cancelados pelo tratamento com losartan. Assim, este estudo esclarece parte dos mecanismos fisiológicos envolvidos nas alterações metabólicas e cardiovasculares decorrentes do estresse crônico, demonstrando que estas alterações são mediadas pelo receptor AT1, provavelmente pela ligação da angiotensina II ao mesmo Abstract: Chronic stress is a risk factor for the development of hypertension, atherosclerosis and diabetes. The protocol of chronic mild and unpredictable stress (CMUS) is an animal model of chronic stress. Previously, it has been shown that CMUS induced insulin resistance, dyslipidemia and endothelial dysfunction in rats. Considering that endothelial dysfunction and insulin resistance have been associated with high activity of renin-angiotensin system (RAS), the aim of this study was to investigate the involvement of RAS components on cardiovascular effects induced by CMUS in rats. Sixty two male Sprague-Dawley rats, (2 months old) were used. The experiment period was 7 weeks. In experiment 1, animals were divided into 2 groups: control and stress. The CMUS was applied on weeks 3, 4 and 5 and animals were euthanized 1 and 15 days after the CMUS. The CMUS increased systemic renin and angiotensin converting enzyme (ACE) activity, ACE activity in the thoracic aorta and plasma angiotensin II and angiotensin (1-7) concentrations. Based on these results, showing increased activity of the RAS induced by ECMI, the second experiment was designed to evaluate the involvement of angiotensin II and its AT1 receptor in the effects triggered by CMUS on glucose uptake and on cardiovascular system. Other animals were divided into 4 experimental groups: control, stress, losartan control (AT1 receptor antagonist, losartan - 50 mg /kg/day, orally) and losartan stress. The CMUS induced an increase in area under the curve in the glucose tolerance test (GTT), decreased the in vitro vasodilator response to acetylcholine in the thoracic aorta and increased blood pressure, compared to control group, without difference among control, losartan control and losartan stress group. These results show that the effects of CMUS led to endothelial dysfunction in rats, which was positively associated with hyperactivity of the RAS and was canceled by the treatment with losartan. Thus, this study explains part of the physiological mechanisms involved in cardiovascular and metabolic changes resulting from chronic stress, demonstrating that these changes are mediated by the AT1 receptor, probably by angiotensin II binding to it Mestrado Fisiologia Oral Mestre em Odontologia

Orientador: Rosana Almada Bassani Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: Importantes ajustes cardiovasculares dependentes de estimulação adrenérgica do coração ocorrem no período perinatal. O objetivo deste trabalho foi estudar a resposta cronotrópica a catecolaminas em ratos imaturos, com foco em mecanismos intrínsecos e extrínsecos à via de transdução ?-adrenérgica. Foi determinada a resposta cronotrópica a tiramina (TIR), isoproterenol (ISO), noradrenalina (NA), forskolin (FSK) e 3-isobutil-1-metilxantina (IBMX) em átrios direitos de ratos de 0-23 dias de idade e adultos. No mesmo tecido, foram quantificados os níveis de mRNA de diversas proteínas pela técnica de reação em cadeia de polimerase em tempo real (qRT-PCR). Os principais resultados foram: a) a resposta cronotrópica máxima (Rmax) a TIR e NA exógena mostrou-se deprimida em átrios de ratos de 0-2 dias, enquanto a sensibilidade aos agonistas reduziu-se com o amadurecimento; b) o bloqueio do transportador neuronal de catecolaminas por desipramina foi menos efetivo em causar desvio à esquerda na curva concentração-efeito nos átrios de animais imaturos, e aboliu as diferenças de sensibilidade (mas não de Rmax) à NA; c) a inibição do transportador extraneuronal de monoaminas não modificou o pD2 do ISO em átrios de animais imaturos, os níveis de mRNA para este transportador foram ~30% daqueles em adultos; d) apesar da redução da Rmax à NA em neonatos, não houve diferença na Rmax a ISO, FSK e IBMX entre as diferentes idades; e) o bloqueio de adrenoceptores ?2 com ICI118,551 reduziu Rmax e pD2 do ISO apenas nos átrios de ratos imaturos, indicando contribuição deste subtipo de receptores apenas nos primeiros dias após o nascimento; f) a expressão de adrenoceptores ?2, Gi, Gs e adenilato ciclase (isoforma 1) foi maior em átrios de animais imaturos, enquanto aquela de adrenoceptores ?1 foi semelhante em todos os grupos etários. Conclui-se que os componentes pós-receptor desta via de sinalização já estão presentes no neonato, embora tenha sido detectada aparente imaturidade no acoplamento de adrenoceptores ?1. Entretanto, foram identificados mecanismos compensatórios, tais como a participação de adrenoceptores ?2 e menor remoção neuronal e extraneuronal de catecolaminas. Palavras-chave: átrio direito, receptores adrenérgicos beta, catecolaminas, desenvolvimento pós-natal Abstract: Important cardiovascular adjustments that depend on the adrenergic regulation of the cardiac function occur during the perinatal period. The goal of this work was to study the chronotropic responsiveness to catecholamines in immature rats, focusing on mechanisms intrinsic and extrinsic to the ?-adrenergic signaling pathway. The chronotropic response to tyramine (TYR), isoproterenol (ISO), norepinephrine (NE), forskolin (FSK), and 3-isobutyl-1-methylxanthine (IBMX) was determined in right atria isolated from 0-23 day-old and adults rats. In the same tissue, mRNA levels of relevant proteins were quantified by real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR). The main results were: a) the maximum chronotropic response (Rmax) to TYR and to exogenous NE were lower in rigth atria from 0-2day-old rats, while the sensitivity to the agonists decreased during development; b) inhibition of neuronal norepinephrine transporter by desipramine was less effective at shifting the concentration-effect curve to the left in immature animals, and abolished the differences in sensitivity (but not in Rmax) to NE. c) inhibition of the extraneuronal monoamine transporter did not changed the ISO pD2 in atria from immature animals, in which the mRNA levels for this transporter were ~ 30% of those in adults; d) despite the lower Rmax to NE in neonates, the Rmax to ISO, FSK and IBMX was comparable among ages; e) ?2-adrenoceptor blockade with ICI118,551 reduced Rmax and ISO pD2 only in atria from immature rats, indicating contribution of this receptor subtype only in the first days after birth; f) ?2-adrenoceptor, Gi, Gs and adenylate cyclase (isoform 1) transcript levels were greater in the atria of immature animals, while that of ?1-adrenoceptor was similar in all age groups. In conclusion, post-receptor components of this signaling pathway seem to already be mature in newborns, although an apparent immaturity in ?1-adrenoceptor coupling was detected. However, compensatory mechanisms were identified, such as the participation of ?2-adrenoceptor and weaker neuronal and extraneuronal catecholamine removal. Keywords: right atria, ?-adrenoceptor, catecholamines, postnatal development Mestrado Farmacologia Mestra em Farmacologia