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O objetivo desse estudo in vivo foi avaliar a intensidade de expressão de moléculas indicadoras da diferenciação celular com fenótipo mineralizador em dentes de cães com rizogênese incompleta e lesão periapical induzida experimentalmente submetidos à irrigação dos canais radiculares por pressão apical negativa (EndoVac®) e à irrigação por pressão apical positiva (irrigação convencional). Foram utilizados 30 dentes (60 raízes), divididos em 3 grupos: Grupo EndoVac® Irrigação com pressão apical negativa (n=20), Grupo Convencional Irrigação com pressão apical positiva (n=20); e Grupo Controle com Lesão Periapical (n=20). Após indução de lesões periapicais, os canais radiculares dos grupos Endovac e Convencional foram instrumentados com limas manuais, empregando o sistema de irrigação correspondente. Decorridos 90 dias, os animais foram eutanasiados e os espécimes submetidos ao processamento histotécnico. Cortes representativos de cada grupo foram corados com hematoxilina e eosina (HE), para descrição histopatológica das regiões apical e periapical. Os cortes foram submetidos à para marcação de osteopontina (OPN), fosfatase alcalina (ALP) e fator de transcrição RUNX2 nas regiões apical e periapical das raízes. Para avaliação da intensidade da expressão desses marcadores foi realizada uma análise semi-quantitativa por meio de um sistema de escores. Os dados foram analisados estatisticamente pelo teste não-paramétrico de Kruskal-Wallis e pós-teste de Dunn e o nível de significância adotado foi de 5%. Com relação à descrição histopatológica, achados distintos foram observados em cada grupo. Resumidamente, o grupo Endovac demonstrou um tecido conjuntivo bem organizado, invaginando-se para o interior do canal radicular, e exibiu um processo de reparo mais avançado, com relação aos demais grupos. A avaliação das imunomarcações para RUNX2 revelou que no grupo Endovac® houve marcação significantemente mais intensa (p=0,03), em comparação ao grupo controle. Com relação à expressão de OPN, não foi possível encontrar diferença estatisticamente significante entre os grupos (p=0,15). Após análise das imunomarcações para ALP, observou-se diferença estatisticamente significante entre os grupos (p=0,0021), sendo que o grupo Endovac® apresentou marcação significantemente mais intensa com relação ao grupo controle. Os resultados do presente estudo in vivo permitiram concluir que a irrigação por pressão apical negativa (EndoVac®) apresentou potencial mineralizador, indicando ser o melhor sistema de irrigação para dentes com ápice incompleto e lesão periapical The objective of this in vivo study was to evaluate the expression intensity of molecules indicating cell differentiation with mineralizing phenotype in immature dogs teeth with experimentally induced apical periodontitis subjected to irrigation of root canals using negative apical pressure (EndoVac®) and positive apical pressure (conventional irrigation). Thirty teeth (60 roots) were divided into 3 groups: EndoVac® Group - negative apical pressure irrigation (n=20), Conventional Group - positive apical pressure irrigation (n=20); and Control Group with apical periodontitis (n=20). After induction of periapical lesions, the root canals of the EndoVac ® and Conventional groups were instrumented with hand files, using the corresponding irrigation system. After 90 days, the animals were euthanized and the specimens were submitted to histotechnical processing. Representative sections of each group were stained with hematoxylin and eosin (HE) for histopathological description of the apical and periapical regions. The sections were submitted to osteopontin (OPN), alkaline phosphatase (ALP) and RUNX2 transcription factor Immunostaining in the apical and periapical regions of the roots. A semi-quantitative analysis was performed to evaluate the expression intensity of these markers, using a score system. Data were statistically analyzed by the Kruskal-Wallis non-parametric test and Dunn post-test, and the significance level was set at 5%. Regarding the histopathological description, different findings were observed in each group. Briefly, the EndoVac® group demonstrated a well-organized connective tissue, invaginating into the root canal, and exhibited a more advanced repair process in relation to the other groups. RUNX2 immunostaining revealed that in the EndoVac® group there was a significantly stronger (p=0.03) immunostaining in comparison to the control group. Regarding the OPN expression, it was not possible to find a statistically significant difference between the groups (p=0.15). After analyzing ALP immunostaining, a statistically significant difference was observed between the groups (p=0.0021), and the EndoVac® group showed a markedly stronger mark immunostaining than the control group. The results of the present in vivo study allowed concluding that negative apical pressure irrigation (EndoVac®) presented mineralizing potential, indicating that it is the best irrigation system for teeth with an open apex and apical periodontitis

Novas soluções a base de compostos naturais podem ser utilizadas no substrato dental antes do procedimento restaurador a fim de inibir a atividade das metaloproteinases (MMPs) e melhorar da estabilidade da interface adesiva, especialmente em dentes submetidos à biocorrosão endógena ou exógena. Este estudo avaliou o efeito do pré-tratamento com a solução experimental de chá verde encapsulada com nanoquitosana (NanoQ) na resistência adesiva da interface e na inibição de metaloproteinases (MMPs) em dentina submetida à biocorrosão in vitro. Setenta e oito molares humanos hígidos foram seccionados e divididos aleatoriamente de acordo com o substrato: hígido (controle) e biocorroído (ácido cítrico 0,3% por 2h). Os espécimes foram subdivididos de acordo com o pré-tratamento da dentina: água destilada (controle), CHX (digluconato de clorexidina) a 2%, e solução de chá verde + NanoQ. As soluções foram aplicadas de modo ativo (10 mL, 1 min) e secas com papel absorvente. Em seguida, aplicou-se o adesivo Single Bond Universal (3M), os espécimes foram restaurados (FilTek Z350, 3M) e termociclados (2000 ciclos). Sessenta molares (10 dentes por grupo) foram seccionados em palitos (0,8 ± 0,2 mm²), obtendo-se no mínimo 6 palitos por dente. Realizou-se o teste de resistência à microtração (µTBS) em Máquina Universal de Ensaios (0,5 mm/min, 50 kgf), e as falhas foram análisadas em microscopia confocal a laser (n=10 dentes, 4 palitos por dente). O ensaio de zimografia foi realizado (n=10 dentes, 1 palito por dente) para avaliar a atividade das MMPs por microscopia de fluorescência (Leica DMI 6000). Para a quantificação das MMPs, determinou-se a área de fluorescência da interface (software Image J). A expressão da MMP-20 e MMP-9 foram avaliadas por imunofluorescência (n=10 dentes, 1 palito por dente). Os 18 dentes restantes restaurados foram seccionados ao meio, polidos e a interface foi analisada em microscopia confocal a laser (n=3 dentes). Os dados de µTBS (MPa) foram analisados por ANOVA a dois critérios e teste de Tukey HSD. As áreas aferidas (µm2) em zimografia foram analisadas por ANOVA e Holm-Sidak (α = 0,05). As imagens de imunofluorescência e microscopia confocal foram analisadas qualitativamente. A dentina hígida (24,26 ± 9,96) apresentou maior resistência adesiva que biocorroída (13,62 ± 7,56). O tratamento da dentina promoveu diferença significante entre os grupos (p = 0,011). Os maiores valores foram encontrados na dentina tratada com chá verde + NanoQ e os menores, na tratada apenas com água. O pré-tratamento da superfície antes da aplicação do adesivo com CHX 2% ou chá verde + NanoQ inibiu a atividade enzimática da MMPs (p < 0,0001) em dentina biocorroída. A imunofluorescência revelou a expressão de MMP-20 em maior intensidade que a MMP-9, independentemente do substrato ou tratamento. Conclui-se que a aplicação da solução de chá verde + NanoQ previamente ao adesivo aumentou a resistência de união da resina nas dentinas hígida e biocorroída, e que essa solução experimental reduziu a atividade das MMPs em dentina biocorroída de modo semelhante à clorexidina. New natural composite-based solutions are used in dentin before the restorative procedure to inhibit the activity of metalloproteinases (MMPs) and improve the stability of the adhesive interface, especially in teeth for endogenous or exogenous biocorrosion. This study was to assess the effect of pretreated with experimental assay green tea-loaded chitosan nanoparticles (Gt + Nchi) on bond strength (µTBS) and inhibition activity of MMPs on biocorrosion in vitro study. Seventy-eight caries-free human molars were sectioned, and randomly divided according to the substrate: sound (control) and biocorroded (0.3% citric acid for 2h). Samples were subdivided according to dentin pretreatment: distilled water (control), 2% CHX (chlorhexidine digluconate), and Gt + Nchi. The solutions were actively applied (10 mL, 1 min) and dried with absorbent paper. After, Single Bond Universal (3M) adhesive was applied, the samples were restored (FilTek Z350, 3M) and thermocycled (2000 cycles). Sixty molars (10 teeth per group) were sectioned into sticks (0.8 ± 0.2 mm²), obtaining 6 sticks per tooth. The microtensile strength test (µTBS) was performed in the Universal Testing Machine (0.5 mm/min, 50 kgf), and failures were analyzed in confocal laser microscopy (n=10 teeth, 4 toothpicks per tooth). The zymography assay was performed (n=10 teeth, 1 toothpick per tooth) to evaluate the activity of MMPs by fluorescence microscopy (Leica DMI 6000). For the quantification of MMPs, the fluorescence area of the interface was determined (Image J software). The expression of MMP-20 and MMP-9 were evaluated by immunofluorescence (n=10 teeth, 1 toothpick per tooth). The remaining 18 restored teeth were sectioned in half, polished and the interfaces were analyzed on confocal laser microscopy (n=3 teeth). µTBS (MPa) data were analyzed by two-way ANOVA and Tukey\'s HSD test. The measured areas (µm2 ) in situ zymography were analyzed by ANOVA and Holm-Sidak (α = 0.05). Immunofluorescence and confocal microscopy images were qualitatively analyzed. Sound dentin (24.26 ± 9.96) showed greater bond strength than biocorroded (13.62 ± 7.56). The dentin pretreatment promoted a significant difference between the groups (p = 0.011). The highest values were found in dentin treated with Gt + Nchi and the lowest in dentin treated with water only. Pretreatment of the surface before application of the adhesive with CHX 2% or Gt + Nchi inhibited the enzymatic activity of MMPs (p < 0.0001) in biocorroded dentin. Immunofluorescence revealed the expression of MMP-20 at a higher intensity than MMP-9, regardless of the substrate or treatment. It was concluded that applying Gt + Nchi prior to the adhesive increased the bond strength of the resin in sound and biocorroded dentin, and that this experimental solution reduced the activity of MMPs in biocorroded dentin in a similar way to chlorhexidine.

A indoleamina 2,3-dioxigenase (IDO) é uma enzima com propriedades imunossupressoras, a qual também parece regular a angiogênese. A expressão de IDO em lesões periapicais crônicas (LPCs) afetando dentes decíduos (DDs) e permanentes (DPs), é desconhecida. 22 LPCs (7 granulomas periapicais [GPs] e 15 cistos radiculares [CRs]) e 30 LPCs (15 GPs e 15 CRs) decorrentes de DDs e DPs, respetivamente, foram avaliados por imuno-histoquímica através dos anticorpos IDO; CD1a e CD207 para células de Langerhans (CLs); CD123 para células dendríticas plasmocitoides (CDp); FOXP3 para linfócitos T regulatórios (LTregs); CD8 para linfócitos T citotóxicos (LTCs); e CD34 para angiogênese. No geral, os LTCs, seguidos por CDp, foram as células mais frequentemente detectadas em ambas as dentições. CLs foram prevalentes em CRs do que GPs, em ambas as dentições. Exceto LTCs nos GPs afetando DPs, a distribuição de CDp e LTCs foi semelhante em ambas as dentições. LTregs foram significativamente maiores em CRs do que GPs afetando DPs. CRs do que GPs, e preferencialmente nos DPs do que DDs, apresentaram maior expressão de IDO. Nesses casos, a expressão de IDO foi observada preferencialmente em neutrófilos e no epitélio cístico em cerca de um terço dos CRs em ambas as dentições. O perfil de angiogênese foi semelhante em ambas as dentições. Não houve uma correlação estatísticamente significativa entre IDO e todos os outros marcadores; no entanto, houve uma correlação positiva entre IDO e angiogênese. Nossos resultados mostram discretas variações no perfil de distribuição de células imunes em LPCs afetando ambas as dentições, sugerindo que a expressão de IDO esteja modulando respostas inflamatórias, provavelmente através da regulação de LTregs e angiogênese, preferencialmente em CRs provenientes de DPs. Indoleamine 2,3-dioxygenase (IDO) is an enzyme with immunosuppressive properties, which also appears to regulate angiogenesis. The expression of IDO in chronic periapical lesions (CPLs) affecting deciduous (DTs) and permanent (PTs) teeth is unknown. 22 LPCs (7 periapical granulomas [PGs] and 15 radicular cysts [RCs]) and 30 CPLs (15 PGs and 15 RCs) arising from DTs and PTs, respectively, were evaluated by immunohistochemistry using the antibodies IDO; CD1a and CD207 for Langerhans cells (LCs); CD123 for plasmacytoid dendritic cells (pDCs); FOXP3 for regulatory T cells (Tregs); CD8 for cytotoxic T lymphocytes (CTLs); and CD34 for angiogenesis. Overall, CTLs, followed by pDCs, were the most frequently detected cells in both dentitions. LCs were more prevalent in CRs than GPs, in both dentitions. Except CTLs in GPs affecting PTs, the distribution of pDCs and CTLs was similar in both dentitions. Tregs were significantly higher in RCs than PGs affecting PTs. RCs than PGs, and preferably in PTs than DTs, showed greater expression of IDO. In these cases, IDO expression was observed preferentially in neutrophils and in the cystic epithelium in about one third of RCs in both dentitions. The angiogenesis profile was similar in both dentitions. There was no statistically significant correlation between IDO and all other markers; however, there was a positive correlation between IDO and angiogenesis. Our results show slight variations in the distribution profile of immune cells in CPLs affecting both dentitions, suggesting that IDO expression is modulating inflammatory responses, probably through the regulation of Tregs and angiogenesis, preferentially in RCs arising from PTs.

Pulpotomia consiste na remoção da porção coronal de uma polpa vital como forma de preservar a vitalidade da porção radicular restante. Após esse procedimento, diversos materiais têm sido utilizados para o recobrimento da polpa radicular. Desses materiais, destacam-se o agregado trióxido mineral (MTA) e a BiodentineTM. Estudos têm avaliado e comparado a resposta inflamatória de ambos os materiais, a fim de identificarem um material capaz de promover um adequado processo de reparo, sem ação citotóxica ou irritante ao organismo. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar a resposta tecidual, resposta imune e participação de citocinas pró- e anti-inflamatórias induzidas pelos materiais BiodentineTM e MTA em tecido conjuntivo subcutâneo de camundongos isogênicos. Para isso, foram utilizados 120 camundongos isogênicos da linhagem BALB/c divididos em 4 grupos, sendo 2 experimentais (BiodentineTM e MTA nos períodos de 7, 21 e 63 dias) e 2 controles (Óxido de Zinco e Eugenol e sham, nos mesmos períodos). Decorridos os períodos experimentais, os blocos de tecido conjuntivo contendo o corpo de prova com o material foram removidos. A parte superior do tecido foi removido, fixado em formol e enviado para o processamento histotécnico de rotina para posterior análise microscópica com H&E. Já a parte inferior do bloco foi mergulhada em solução de RNAlater® para posterior análise da expressão gênica pela técnica de qRT-PCR. Foi realizada a descrição da reação tecidual em contato com cada material, análise semi-quantitativa do fibrosamento e do infiltrado inflamatório e análise quantitativa da espessura do tecido reacional granulomatoso em contato com o material testado ou o tecido conjuntivo do grupo sham. Foi realizado, também, o qRT-PCR para análise de expressão gênica de Il10, Infg, Il6, Tnf e receptor Il1r1. Os resultados foram comparados por meio do teste de KruskalWallis seguido do Pós-teste de Dunn ou pela análise de variância (ANOVA) de duas vias seguido pelo pós-teste de Bonferroni (α=5). Inicialmente os materiais BiodentineTM, MTA induziram um discreto fibrosamento do tecido conjuntivo, mas aos 21 dias ele tornou-se maior ao redor do MTA. Finalmente, no período final, todos os grupos apresentaram um fibrosamento discreto. Em relação ao infiltrado inflamatório, aos 7 dias, BiodentineTM e MTA induziram o recrutamento de células inflamatórias de intensidade moderada a intensa, e nos tempos seguintes a maioria dos espécimes mantiveram-se com infiltrado discreto. A espessura da cápsula fibrosa apresentou-se aumentada ao redor dos espécimes de BiodentineTM aos 7 dias, mas aos 21 e 63 dias, o tecido ao redor dos materiais não apresentou aumento de espessura. Ainda, observou-se que a BiodentineTM e o MTA foram capazes de inibir, ao longo dos períodos experimentais, a expressão dos marcadores pró-inflamatórios Tnf e Infg. Tanto a BiodentineTM quanto o MTA estimularam a expressão de Il6 nos períodos iniciais, mas aos 63 dias, o MTA inibiu a expressão dessa citocina, o que não aconteceu com a Biodentine. Para a Il1r1, a BiodentineTM e MTA não apresentaram efeito aos 7 dias. Aos 21 dias nenhum material modulou a expressão gênica, diferentemente do período de 63 dias quando BiodentineTM, MTA e ZOE induziram Il1r1. Observou-se ainda que a Il-10 teve sua expressão diminuída após estímulo com MTA e ZOE no período de 7 dias. Já aos 21 dias, a Biodentine foi capaz de estimular a expressão de Il-10 e no período final de avaliação apenas o ZOE foi capaz de modular a inibição dessa interleucina. Após análise dos dados, conclui-se que de maneira geral os materiais avaliados, MTA e BiodentineTM, mediaram a inflamação, com aumento do fibrosamento e produção de citocinas pró- e anti-inflamatórias. Pulpotomy consists of the vital pulp from coronal portion remoting so as to preserve the vitality of the remaining root portion. After this procedure, several materials have been used to cover the root pulp. Of these materials, the mineral trioxide aggregate (MTA) and BiodentineTM stand out. Studies have evaluated and compared the inflammatory response induced by both materials, in order to identify a material capable of promoting an adequate repair process, without cytotoxic or irritating action to the body. Thus, the aim of this study was to evaluate the tissue response, immune response and participation of pro- and antiinflammatory cytokines induced by BiodentineTM and MTA materials in subcutaneous connective tissue of isogenic mice. For this purpose, 120 isogenic mice of the BALB/c were divided into 4 groups, being 2 experimental (BiodentineTM and MTA in the experimental periods of 7, 21 and 63 days) and 2 controls (Zinc Oxide and Eugenol and sham, using the same periods). After the experimental periods, the blocks containing connective tissue and the used material were removed. The upper part of the tissue was removed, fixed in formaldehyde and sent for routine histotechnical processing for further microscopic analysis with H&E. The lower part of the block was immersed in RNAlater® solution for further analysis of gene expression using the qRT-PCR technique. Were carried out the description of the tissue reaction in contact with each material; semi-quantitative analysis of the collagen fibber formation and inflammatory infiltrate; and quantitative analysis of the connective tissue in contact with the tested material or the sham group. QRT-PCR was also performed for analysis of gene expression of Il10, Infg, Il6, Tnf and Il1r1 receptor. The results were compared using the Kruskal-Wallis test followed by the Dunn post-test or by the two-way ANOVA followed by the Bonferroni post-test (α=5%). Initially, BiodentineTM and MTA induced a slight collagen fibber formation, but at 21 days it became larger around the MTA. Finally, in the final period, all groups had a slight collagen fibber formation. Regarding the inflammatory infiltrate, at 7 days, BiodentineTM and MTA induced the inflammatory cells recruitment from moderate to intense, and in the following times most specimens remained with discrete inflammatory infiltration. The fibrous capsule thickness was increased around the BiodentineTM specimens at 7 days, but at 21 and 63 days, the tissue around the materials did not increase. Furthermore, it was observed that BiodentineTM and MTA were able to inhibit, over the experimental periods, the pro-inflammatory markers, Tnf and Infg, expression. Both, BiodentineTM and MTA, stimulated Il6 expression in the initial periods, but at 63 days, MTA inhibited the expression of this cytokine, which did not happen with Biodentine. For Il1r1, BiodentineTM and MTA had no effect at 7 days. At 21 days, no material modulated gene expression, unlike the 63-day period when BiodentineTM, MTA and ZOE induced Il1r1. It was also observed that IL-10 had its expression decreased after stimulation with MTA and ZOE in the period of 7 days. At 21 days, BiodentineTM was able to stimulate the expression of Il-10 and in the final evaluation period only ZOE was able to modulate the inhibition of this interleukin. After analyzing the data, it was concluded that, in general, the evaluated materials, MTA and BiodentineTM, mediated inflammation, with increased fibrous tissue and production of pro- and anti-inflammatory cytokines.

O sistema imune inato representa a primeira de linha de defesa do nosso organismo. Receptores de Reconhecimento de Padrões (PRRs) são expressos pelas células desse sistema, como os macrófagos, reconhecendo os micro-organismos e apresentando os antígenos ao sistema imune adaptativo. Dentre os PRRs destaca-se o IFI16 (Proteína induzível por interferon gama 16), uma proteína multifuncional com ação anti-inflamatória. No entanto, o papel da IFI16 na Odontologia ainda é pouco conhecido. Assim, o primeiro o objetivo desse trabalho foi caracterizar a fonte celular da IFI16 na progressão da periodontite induzida experimentalmente em camundongos, a fim de verificar se as células derivadas da medula óssea poderiam ser a fonte da expressão da IFI16 na periodontitite. Inicialmente foi realizada a depleção da medula óssea de animais wild-type (WT) e de animais Ifi204-/- (ortólogo para IFI16). Em seguida, foi realizado o transplante de medula óssea entre animais Ifi204-/- e WT. Após 21 dias do transplante, a periodontite foi induzida em ambos os grupos experimentais pelo modelo de ligadura. Decorridos 9 dias, foi realizada citometria de fluxo da medula óssea utilizando o CD45 como um marcador hematopoiético para determinar o sucesso do transplante. A perda óssea alveolar foi medida pela análise de µCT. Os dados foram analisados pelo teste \"t\" usando o software GraphPad Prism 7.0a (a=5%). Trinta dias após o transplante, a eficiência de reconstituição encontrada foi de cerca de 80% com base no CD45.1/2. Camundongos com as células transplantadas do animal Ifi204-/-, não mostraram diferença significativa de perda óssea média em comparação com camundongos com as células transferidas de animal WT [0,35mm (DP=0,058mm) vs. 0,43mm (DP=0,104mm) respectivamente, p>0,05]. Assim, o transplante de medula óssea demonstrou que a origem das células que expressam IFI16 durante a progressão da periodontite não são de origem hematopoiética. O segundo objetivo desse estudo foi avaliar, por meio de imunohistoquímica, a participação da IFI16 e IFN-α/β na gênese e no desenvolvimento da lesão periapical induzida em dentes de camundongos. De um total de 45 camundongos C57BL/6, foi realizada a indução da lesão periapical nos primeiros molares inferiores em 40 animais divididos nos períodos experimentais de 2, 7, 14, 21 e 42 dias. Oito animais de cada período experimental e 5 animais do grupo controle foram eutanasiados e os espécimes submetidos ao processamento histotécnico para imunomarcação para a descrição da presença/ausência e localização da IFI16 e IFN-α/β (análise qualitativa). Após análise dos resultados, concluiu-se que a IFI16 e os IFN-α/β participaram da progressão da lesão periapical induzida experimentalmente em dentes de camundongos. Paralelamente, os macrófagos são células fagocíticas, conhecidas por apresentarem uma considerável heterogeneidade em termos morfológicos, funcionais e expressão de marcadores. Dependendo do microambiente ao qual os monócitos, suas células progenitoras, estão expostos, há a definição do seu fenótipo em \"classicamente ativado\" (M1) ou \"alternativamente ativado\" (M2). Os macrófagos M1 promovem um ambiente altamente microbicida e têm papel na mediação da destruição de patógenos e células tumorais. Já os macrófagos M2 desempenham um papel central nas respostas frente às infestações parasitárias, remodelação tecidual, angiogênese e doenças alérgicas. Assim, o terceiro objetivo desse trabalho foi a caracterização fenotípica de macrófagos M1 e M2 no desenvolvimento da lesão periapical induzida em dentes de camundongos. Um total de 130 camundongos C57BL/6 foram divididos em grupos controle (dentes hígidos; n=50 animais) e experimental (dentes com lesão periapical experimentalmente induzida; n=80 animais). Decorridos os períodos de 2, 7, 14, 21 e 42 dias, animais controles e experimentais foram eutanasiados e os espécimes submetidos ao processamento histotécnico, para a descrição das características dos tecidos apicais e periapicais em cortes corados com HE, sob microscopia convencional. Além dissa, sob microscopia de fluorescência foi realizada a morfometria para medir a área das lesões periapicais. Foi realizado, também, o qRT-PCR para análise de expressão gênica de Cxcl10, CxCL9, iNos2, Arg1, Ym1, Fizz1 e MRC1 e ensaio Luminex®, para a marcadores de macrófagos M1 e M2 (GM-CSF, IFN-g, IL-4, IL-13, IL- 10, IL-6, IL-1β e TNF-α). Para os dados da morfometria realizou-se o teste ANOVA, seguido pelo pósteste de Tukey. Para os valores obtidos de qRT-PCR e Luminex®, realizou-se o teste de Kruskal-Wallis seguido do pós-teste de Dunn. Todos os dados foram analisados usando o software GraphPad Prism 7.0a (a=5%). Os resultados permitiram concluir que no decorrer dos períodos, a lesão periapical progrediu. Além disso, com base nos resultados de expressão gênica e quantificação das citocinas, observou-se que a progressão da lesão periapical ocorreu de maneira dinâmica. Além disso, houve predomínio do fenótipo M1 nos períodos iniciais da lesão periapical, passando pela tentativa de reparo com o fenótipo M2 aos 14 e 21 dias e voltando ao fenótipo M1 quando a lesão está estabelecida e é caracterizada como crônica. Por fim, o quarto objetivo desse estudo foi avaliar a capacidade de diferentes materiais utilizados no tratamento endodôntico de dentes portadores de necrose pulpar e lesão periapical em modular o fenótipo de macrófagos M1 e M2. Em cultura de células de macrófagos derivados da medula óssea de animais, foi realizada a análise da expressão gênica de marcadores de macrófagos M1 e M2 por meio do qRT-PCR (Cxcl10, CxCL9, iNos2, Arg1 , Ym1, Fizz1 e MRC1) e quantificação de citocinas pelo Luminex® (GM-CSF, IFN-γ, IL-4, IL-13, IL- 10, IL-6, IL-1β e TNF-α), após exposição aos cinco cimentos endodônticos AH PlusTM, Sealapex XpressTM, EndosequenceTM, BioRootTM, EndomethasoneTM e a pasta Calen®. Para os valores normais utilizou-se ANOVA, seguido pelo pós-teste de Tukey. Para os valores não normais, utilizou-se o teste de Kruskall-Wallis. Todos os dados foram analisados usando o software GraphPad Prism 7.0a (α=5%). Conclui-se que os materiais avaliados foram capazes de induzir a produção de citocinas pró e anti-inflamatórias, além de estimularem um padrão misto de macrófagos (M1/M2). The innate immune system represents the first defense line of our body. Pattern Recognition Receptors (PRR) are expressed by cells in this system, such as macrophages. They recognize microorganisms and present the antigens to the adaptive immune system. Among the PRRs, IFI16 (interferon gamma inducible protein 16) stands out. It is a multifunctional protein with anti-inflammatory function. However, the role of IFI16 in dentistry is still poorly understood. Thus, the first aim of this study was to characterize the cellular source of IFI16 in the progression of periodontitis experimentally induced in mice. In order to verify if bone marrow-derived cells were the source of IFI16 expression in the periodontitis, was initially performed the bone marrow depletion of animals wild-type (WT) and Ifi204-/- (ortolog to IFI16). Then, bone marrow transplant (BMT) was performed between Ifi204-/- and WT animals. After 21 days of BMT, periodontitis was induced in both groups using the ligature model. In order to determine BMT success, after 9 days was performed flow cytometry using cells from bone marrow. CD45 was used as a hematopoietic marker. Alveolar bone loss was measured by µCT analysis. Data were analyzed using t-test with GraphPad Prism 7.0a software (α=5%). Thirty days after BMT, based on CD45.1/2, the reconstitution efficiency was about 80%. Mice with transplanted cells from animal Ifi204-/- showed no significant difference in mean bone loss compared to mice with animal transferred cells from WT [0.35mm (SD=0.058mm) vs. 0.43mm (SD=0.104mm), respectively p>0.05]. Thus, BMT experiment demonstrated that the source of the cells expressing IFI16 during the progression of periodontitis are not from hematopoietic origin. The second aim of this study was to evaluate, by immunohistochemistry, the participation of IFI16 and IFN-α/β in the genesis and development of apical periodontitis induced in mice teeth. From a total of 45 mice C57BL/6, in 40 animals the apical periodontitis was induced in the lower first molars. They were divided in experimental periods of 2, 7, 14, 21 and 42 days. Eight animals from each experimental period and 5 animals from the control group were euthanized and the specimens submitted to histological process and submitted to immunostaining. After was performed the description of the presence/absence and localization of IFI16 and IFN-α/β (qualitative analysis). After the results analysis, it was concluded that IFI16 and IFN-α/β participated in the progression of apical periodontitis experimentally induced mice teeth. At the same time, macrophages are phagocytic cells, known to have considerable morphological, functional and marker expression heterogeneity. Depending on the microenvironment to which the monocytes, their progenitor cells, are exposed, their phenotype is defined as \"classically activated\" (M1) or \"alternatively activated\" (M2). M1 macrophages promote a highly microbicidal environment and play a role in mediating the destruction of pathogens and tumor cells. M2 macrophages play a central role in responses to parasitic infestations, tissue remodeling, angiogenesis and allergic diseases.Thus, the third aim of this work was the phenotypic characterization of M1 and M2 macrophages in the development of apical periodontitis induced in mice teeth. A total of 130 mice C57BL/6 were separated into control (healthy teeth; n=50 animals) and experimental (teeth with experimentally induced apical periodontitis; n=80 animals) groups. After the periods of 2, 7, 14, 21 and 42 days, control and experimental animals were euthanized and the specimens submitted to histotechnical process in order to describe the apical and periapical tissue characteristics in HE stained sections under conventional microscopy. Besides that, under fluorescence microscopy, morphometry was performed to measure the area of the apical periodontitis. Also, were performed qRT-PCR for Cxcl10, CxCL9, iNos2, Arg1, Ym1, Fizz1 and MRC1 gene expression analysis and Luminex® assay for M1 and M2 macrophage markers (GM-CSF, IFN-g, IL-4, IL-13, IL-10, IL-6, IL-1β and TNF-α). For morphometry data, the ANOVA test was performed, followed by Tukey post-test. For the values obtained for qRT-PCR and Luminex®, the Kruskal-Wallis test was performed followed by the Dunn post-test. All data were analyzed using GraphPad Prism 7.0a software (a=5%). The results allowed to conclude that during the experimental periods, the apical periodontitis progressed. In addition, based on the results of gene expression and cytokine quantification, it was observed that the progression of the apical periodontitis occurred dynamically. Besides that, there was a predominance of the M1 phenotype in the early periods of the apical periodontitis, attempting to repair the M2 phenotype at 14 and 21 days and returning to the M1 phenotype when the lesion is established and characterized as chronic process. Finally, the fourth aim of this study was to evaluate the ability of different materials used during endodontic treatment of teeth with pulp necrosis and apical periodontitis in modulate the M1 and M2 macrophage phenotype. In bone marrow-derived macrophage cell culture, gene expression analysis of markers to M1 and M2 macrophages was performed by qRT-PCR (Cxcl10, CxCL9, iNos2, Arg1, Ym1, Fizz1 and MRC1) and cytokine quantification by Luminex® (GM-CSF, IFN-g, IL-4, IL-13, IL-10, IL-6, IL-1β and TNF-α) after exposure to the five endodontic sealers AH PlusTM Sealapex XpressTM, EndosequenceTM, BioRootTM, EndomethasoneTM; and the Calen® paste. For normal values, ANOVA test was used, followed by Tukey post-test. For non-normal values, the Kruskall-Wallis test was used. All data were analyzed using GraphPad Prism 7.0a software (a=5%). It was concluded that the evaluated materials were able to induce the expression of pro and anti-inflammatory cytokines, besides stimulating a mixed macrophage pattern (M1/M2).

Os objetivos desse estudo foram avaliar: o efeito do ALN no desenvolvimento de lesões periapicais (LP) induzidas em ratas ovariectomizadas (Capítulo 1); a influência da redução dos níveis de estrógeno na composição microbiana da cavidade bucal e consequentemente no desenvolvimento da lesão periapical (Capítulo 2). Para a realização do estudo do Capítulo 1, 25 ratas foram divididas em 3 grupos: sham (controle), ovariectomia (OVX), e OVX+ALN. Um dia após a realização da OVX, os animais do grupo OVX+ALN começaram a receber a medicação, via gavagem. Decorridas 9 semanas, os primeiros molares de todos os animais foram submetidos à indução de LP. Após 21 dias, foi realizada a eutanásia dos animais. Fêmures foram analisados para registro da densidade mineral óssea (BMD) e os blocos de tecido ósseo contendo os primeiros molares inferiores foram submetidos ao processamento histotécnico e à coloração com hematoxilina e eosina (HE) para análise da LP em microscopia convencional. Paralelamente, foi realizada a análise morfométrica da área das LP por imunofluorescência, histoenzimologia para a quantificação de osteoclastos e coloração de DAPI para quantificação de osteócitos apoptóticos. Além disso, os primeiros molares superiores foram utilizados para a análise da expressão gênica de citocinas pró-inflamatórias (IL-1β, IL-6 e TNF-α) e marcadores da osteoclastogênese (RANKL/OPG). Já para a realização do estudo do Capítulo 2, 36 ratas foram divididas em 4 grupos: sham (controle), ovariectomia (OVX), sham + lesão periapical (Sham+LP) e ovariectomia + lesão periapical (OVX+LP). A indução da LP também ocorreu após 9 semanas seguindo o mesmo protocolo descrito acima. Após o período experimental de 21 dias, foi realizada a colheita microbiológica da cavidade bucal dos animais, por meio de esfregaço com microbrush nas regiões de bochechas, assoalho bucal e língua e posteriormente os animais foram submetidos à eutanásia. As amostras foram analisadas pelo método Checkerboard DNA-DNA Hybridization, para verificar a presença de 40 espécies bacterianas as quais foram divididas em complexos microbianos de Socransky. A análise da área das lesões periapicais foi realizada por microscopia de flourescência. Os resultados foram submetidos aos testes ANOVA e Kruskal-Wallis e aos pós-testes de Tukey e Dunn, com nível de significância de 5%. A análise dos resultados do Capítulo 1 permitiu evidenciar que a OVX reduziu a BMD do fêmur e o tratamento com ALN foi capaz de prevenir a perda óssea (p0,05). Já a análise dos resultados do Capítulo 2 permitiu evidenciar que a microbiota bucal foi alterada em condições de deficiência de estrógeno. Os grupos OVX apresentaram maior quantidade de bactérias, em comparação ao grupo SHAM, na maioria dos complexos microbianos (p0,05). Os animais do grupo controle (com ou sem lesão), sem considerar a influência da deficiência de estrógeno, não apresentaram diferença estatisticamente significante (p>0,001) em nenhum dos complexos microbianos. As lesões periapicais nos animais OVX apresentaram-se significativamente maiores em comparação aos animais SHAM (p 0.05). The analysis of the results of Chapter 2 showed that the oral microbiota was altered under conditions of estrogen deficiency. The OVX groups had a higher amount of bacteria compared to the SHAM group in most of the microbial complexes (p 0,05). The animals in the control group (with or without lesion), disregarding the influence of estrogen deficiency, did not present a statistically significant difference (p> 0.001) in any of the microbial complexes. The periapical lesions in OVX animals were significantly higher compared to SHAM animals (p

A reabilitação por meio de implantes osseointegrados vem tornando-se uma atividade crescente na odontologia. Hoje em dia a taxa de sucesso vem aumentando devido às novas técnicas e tecnologias, porém a perda do implante dentário decorrente das doenças periimplantares tem se tornado um problema frequente na prática clínica. Contudo não há relação direta com os fatores de risco, até o momento relatado na literatura. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a associação dos genes RANK, RANKL E OPG no desenvolvimento das doenças peri-implantares na Clínica de Especialização em Implantodontia na Faculdade do Amazonas IAES. Cento e quatorze pacientes submetidos a instalação de implantes ossointegráveis foram incluídos na pesquisa. A avaliação clínica incluiu a análise das condições de saúde do paciente e do tecido peri-implantar através de mensuração da profundidade clínica de sondagem, presença de sangramento espontâneo, fenótipo periimplantar, supuração, placa bacteriana e coloração gengival. Radiografias padronizadas avaliaram a altura do osso peri-implantar. A amostra (n=114) foi dividida em 3 grupos: A (saúde peri-implantar), B (mucosite) e C (peri-implantite). Amostras de saliva foram coletadas para avaliação da presença de polimorfismo nas regiões promotoras dos genes das osteoprotegerina (OPG), ligante do receptor ativador do fator nuclear Kappa β (RANKL) e receptor ativador do fator nuclear kappa β (RANK) por meio da técnica de PCR em tempo real. Os resultados mostraram que dos 114 indivíduos incluídos no presente estudo, 71 apresentavam uma condição periimplantar saudável e 43 uma doença (30 com mucosite e 13 com peri-implantite). Idade, biótipo peri-implantar, diabetes e presença de placa periimplantar foram associados à mucosite, enquanto idade, biótipo peri-implantar, tabagismo e etilismo, doença periodontal e placa peri-implantar foram associados à presença de periimplantite (P 0,05). Não houve associação entre a condição perimplantar e qualquer polimorfismo avaliado nos genes RANK, RANKL ou OPG (P> 0,05). Conclui-se que os genes RANK, RANKL e OPG não apresentaram relação com o desenvolvimento das doenças peri-implantares Rehabilitation through osseointegrated implants has become a growing activity in dentistry. Nowadays, a success rate due to new techniques and technologies, however, the loss of dental implants due to peri-implant diseases has become a frequent problem in clinical practice. There is no direct connection with the risk factors, until now reported. The present work makes an evaluation of the RANK, RANKL and OPG genes in the development of the periimplant clinics at the Implantology Specialization Clinic at the Faculty of Amazonas - IAES. One hundred and fourteen patients with an implant installation were included in the study. The clinical evaluation included the analysis of the peri-implant patient and non-tissue health conditions by measuring the clinical depth of survey, presence of spontaneous bleeding, periimplant phenotype, suppuration, plaque and gingival staining. Standardized radiographs assessed the height of the peri-implant bone. A sample (n = 114) was divided into 3 groups: A (peri-implant health), B (mucositis) and C (peri-implantite). Saliva samples were collected for the presence of polymorphism in the promoter regions of the osteoprotegerin (OPG) genes, the Kappa nuclear factor activator receptor (RANKL) and the nuclear kappa factor activator receptor (RANK) by the PCR technique in real time.The results showed that of the 114 individuals in the study, 71 had a healthy peri-implant condition and 43 a diseased condition (30 with mucosites and 13 with peri implantite). Age, peri-implant biotype, diabetes and presence of peri-implant plaques were associated with mucositis, while age, peri-implant biotype, smoking and alcoholism, periodontal and peri-implant plaques were associated with the presence of peri-implantitis (P 0.05). There was no association between the perimplant condition and any polymorphism evaluated in the genes: RANK, RANKL or OPG (P> 0.05). It is concluded that the RANK, RANKL and OPG genes are not related to the development of peri-implant diseases

Objetivo: Avaliar, in vivo, o efeito do tratamento endodôntico em sessão única utilizando a Terapia Fotodinâmica Antimicrobiana (aPDT) no reparo de lesões periapicais induzidas em dentes de cães, por meio da avaliação histopatológica e imunohistoquímica da angiogênese e de marcadores de formação óssea. O tratamento endodôntico em duas sessões com curativo de demora à base de hidróxido de cálcio (CH) foi utilizado como controle. Métodos: Lesões periapicais foram induzidas em 48 pré-molares superiores e inferiores de 6 cães, com 12 meses de idade. Após instrumentação dos canais radiculares, os dentes foram divididos, aleatoriamente, em 4 grupos: CH/120dias (d) e CH/180dias (d): canais radiculares preenchidos com curativo à base de CH; aPDT/120d e aPDT/180d: canais radiculares condicionados com fotossensibilizador à base de fenotiazina (10 mg/mL), por 1 minuto e irradiados com laser de diodo em toda a extensão dos canais, conforme as recomendações do fabricante. Em seguida, todos os canais radiculares foram obturados com cimento AH Plus e, após 120 ou 180 dias, os animais foram eutanasiados e os blocos contendo dentes e tecido ósseo foram submetidos ao processamento histotécnico e à coloração de hematoxilina e eosina (HE) para a análise descritiva da região periapical e mensuração das lesões periapicais, em microscopia convencional, e contagem de vasos sanguíneos sob luz convencional e no modo fluorescente. A análise imunohistoquímica foi realizada para avaliação dos marcadores da formação óssea osteopontina (OPN) e fosfatase alcalina (ALP). Os dados obtidos foram analisados estatisticamente utilizando os testes two-way ANOVA e qui-quadrado, com nível de significância de 5%. Resultados: Aos 120 dias, os dentes do grupo CH/120d apresentaram processo de reparo avançado, com ligamento periodontal apenas ligeiramente aumentado, presença abundante de fibras colágenas e escassas células inflamatórias. Os dentes do grupo aPDT/120d apresentaram o ligamento periodontal moderadamente aumentado e o infiltrado inflamatório era moderado. Poucas fibras colágenas foram observadas. Aos 180 dias, o mesmo padrão foi observado. As lesões periapicais nos grupos tratados com curativo à base de hidróxido de cálcio foram menores que as lesões nos grupos tratados com aPDT (p

Em dentes com lesão periapical, o tratamento endodôntico em duas sessões, com aplicação de curativo de demora, apresenta maior sucesso no combate à infecção intra e extrarradicular, proporcionando reparo dos tecidos apicais e periapicais. No entanto, o tratamento em sessão única vem sendo recomendado em função de reduzir custos e sessões de tratamento, apesar da sua comprovada ineficácia na erradicação dos micro-organismos e taxa de sucesso inferior. Diante da necessidade de reduzir o tempo clínico e favorecer a reparação tecidual, a aplicação de medicação com pasta à base de hidróxido de cálcio apenas na região apical e periapical, obtida por meio de seu extravasamento via canal radicular, seguida pela obturação na mesma sessão poderia constituir uma nova opção de tratamento. Com este objetivo, um total de 60 raízes de pré-molares de cão com rizogênese completa e lesões periapicais experimentalmente induzidas, foram aleatoriamente divididos em 3 grupos submetidos a diferentes protocolos de tratamento endodôntico: 1) novo protocolo em sessão única, com aplicação de pasta à base de hidróxido de cálcio na região apical e periapical antes da obturação; 2) tratamento convencional em duas sessões, com utilização de curativo de demora com pasta à base de hidróxido de cálcio durante 14 dias; 3) tratamento convencional em sessão única. Para avaliação da resposta tecidual, os dentes foram avaliados radiograficamente e histopatologicamente, 120 dias após o tratamento endodôntico com a eutanásia dos animais. Os espécimes foram processados histotecnicamente, corados com HE e avaliados com microscopia de luz convencional e de fluorescência. Os resultados obtidos foram analisados estatisticamente utilizando os testes qui-quadrado, Fisher, Anova e pós teste de Tukey, com nível de significância de 5% em todos os testes. De acordo com os resultados radiográficos, os dentes tratados com o novo protocolo apresentaram redução na área radiolúcida periapical semelhante aos dentes tratados em duas sessões (p

O objetivo do presente estudo foi avaliar a associação entre lesões de cárie dentária e defeitos do desenvolvimento do esmalte (DDEs) com o índice de massa corporal e com polimorfismos nos genes que codificam as metaloproteinases 8, 13 e 20, em uma população de crianças amazônicas. A amostra foi constituída de 221 crianças, com idade entre 9 e 12 anos, de ambos os gêneros, matriculadas em quatro escolas públicas da cidade de Manaus - Amazonas. Durante o exame clínico foram obtidos os índices CPO-D e/ou ceo-d, dados referentes aos DDEs e dados antropométricos (peso e altura). Os responsáveis responderam a um questionário sobre hábitos de higiene bucal e dieta. Amostras de saliva foram coletadas como fonte de DNA genômico e, por meio do método Taqman, por PCR em tempo real, realizou-se a genotipagem das regiões rs17099443 e rs3765620 no gene que codifica a MMP8; rs478927 e rs2252070 no gene que codifica a MMP13; e rs1784418 no gene que codifica a MMP20. Os dados foram submetidos à análise estatística empregando os testes de Shapiro-Wilk, ANOVA, Tukey, Qui-quadrado, Exato de Fisher e a razão de chance, com nível de significância de 5%. De acordo com os resultados obtidos verificou-se que, nas crianças com baixo peso, a média de lesões de cárie dental foi 1,00 (DMP 1,00), nas eutróficas a média de lesões de cárie dental foi de 1,57 (DMP 2,00), nas com sobrepeso, a média foi de 1,44 (DMP 1,86) e nas crianças obesas foi de 3,12 (DMP 2,63). Crianças obesas apresentaram mais lesões de cárie que as crianças eutróficas e com sobrepeso (p

O presente estudo teve como objetivo avaliar as propriedades físico-químicas e citotoxicidade quatro cimentos endodônticos, com diferentes bases químicas, utilizados na rotina clínica do Cirurgião-dentista. Foram utilizados os cimentos AH Plus®, BioRoot RCS®, Endomethasone N® e Sealapex®. Foram realizados os testes físico-químicos de tempo de endurecimento, radiopacidade e escoamento, segundo a especificação nº 57 da ANSI/ADA (2012). Para o teste de citotoxicidade, foram coletadas amostras sanguíneas de seis doadores voluntários adultos, com idade entre 18 e 35 anos, de ambos os gêneros. Foi realizada a cultura de células primárias de linfócitos do sangue periférico humano em contato com o eluato dos cimentos obturadores, e a viabilidade celular foi analisada por meio do ensaio de MTT. Cada teste foi realizado em triplicata, tanto para propriedades físico-químicas como para o ensaio do MTT, sendo os resultados analisados empregando o programa GraphPad Prism 5®, por meio do teste Oneway ANOVA e pós-teste de Tukey, com nível de significância de 5%. De acordo com os resultados obtidos, tanto o AH Plus® quanto o BioRoot RCS® apresentaram tempo de endurecimento de 1450 minutos e 255 minutos, respectivamente; Endomethasone N® não tem tempo de endurecimento citado pelo fabricante, e Sealapex® não tomou presa no período do estudo (168 horas). Para o teste de radiopacidade, todos os materiais avaliados apresentaram radiopacidade acima de 3 mm alumínio, como recomendado pela especificação nº 57 da ANSI/ADA (2012). Para o teste de escoamento, segundo a ISO 6876:2012, um cimento endodôntico não deve apresentar um diâmetro inferior a 17 mm. Observamos a maior média para AH Plus® (39,68 mm), seguido em ordem decrescente por Sealapex® (35,73 mm), Endomethasone N® (34,22 mm) e BioRoot RCS® (23,81 mm). Quanto à viabilidade celular, Endomethasone N® foi citotóxico sobre os linfócitos em todas as concentrações (p0,05). Podemos concluir que todos os materiais avaliados atenderam aos parâmetros estabelecidos pela ANSI/ADA para os testes físico-químicos realizados. Além disso, o Endomethasone N® apresentou citotoxicidade sobre os linfócitos humanos, e os demais materiais analisados apresentaram viabilidade celular em níveis aceitáveis The present study had as objective to evaluate the physicochemical properties and cytotoxicity of four root canal sealers with different chemical bases, used in the clinical routine of the Dentistry. The AH Plus®, BioRoot RCS®, Endomethasone N® and Sealapex® cements were used. The physicochemical tests of setting time, radiopacity and flowability were performed according to ANSI/ADA specification (nº 57). For the cytotoxicity test, blood samples were collected from six adult voluntary donors, aged 18-35 years, of both genders. Primary human lymphocyte cell cultures were placed in contact with the eluate from the plug cements, and cell viability was analyzed by the MTT assay. Each test was performed in triplicate, both for physicochemical properties and for the MTT assay. The results were analyzed using the GraphPad Prism 5® program, using the Oneway ANOVA test and Tukey\'s post-test, with a significance level of 5%. According to the results obtained, both AH Plus® and BioRoot RCS® presented setting time of 1450 minutes and 255 minutes, respectively; Endomethasone N® does not have setting time quoted by the manufacturer, and Sealapex® did not set in the study period (168 hours). For the radiopacity test, all evaluated materials had radiopacity above 3 mm aluminum, as recommended by the ANSI/ADA specification (nº 57). For the flow test, according to ISO 6876:2012, an endodontic cement must not have a diameter of less than 17mm. We observed the highest mean for AH Plus® (39.68 mm), followed in descending order by Sealapex® (35.73 mm), Endomethasone N® (34.22 mm) and BioRoot RCS® (23.81 mm). Regarding cell viability, Endomethasone N® was cytotoxic on lymphocytes at all concentrations (p 0.05). We can conclude that all materials evaluated met the parameters established by ANSI/ADA for the physicochemical tests performed. In addition, Endomethasone N® showed cytotoxicity on human lymphocytes, and the other materials analyzed presented cell viability at acceptable levels

O conhecimento dos eventos biológicos que ocorrem no periápice dos dentes com necrose pulpar se torna importante para compreender o desenvolvimento das lesões periapicais. Muitas são as moléculas e mediadores que participam na instalação da lesão periapical, a partir da infecção bacteriana que ocorre no interior dos canais radiculares. Assim, o objetivo do presente trabalho foi avaliar moléculas do sistema imune inato, da osteoclastogênese e metaloproteinases em lesões periapicais (LP) induzidas experimentalmente em camundongos knockout e wild type. Para esse objetivo, o presente estudo foi dividido em dois trabalhos distintos. O primeiro teve como objetivo avaliar a expressão de metaloproteinase 2 (MMP2) e metaloproteinase 9 (MMP9) durante a progressão da LP em camundongos knockout para TLR2 (TLR2 KO) e MyD88 (MyD88 KO), em comparação com camundongos wild type (WT). O segundo estudo avaliou a correlação da expressão gênica e imunomarcação de RANK, RANKL, OPG, TLR2 e MyD88 durante a progressão da LP em camundongos WT. No primeiro estudo lesões periapicais foram induzidas em molares inferiores de 54 camundongos TLR2 KO, MyD88 KO e WT (n=18/grupo). Após 7, 21 e 42 dias, os animais foram eutanaziados e as mandíbulas foram dissecadas e submetidas a processamento histotécnico. Os cortes histológicos foram submetidos a imunohistoquímica e posteriormente foi avaliada presença ou ausência de MMP2 e MMP9 nos diferentes grupos. No segundo estudo, 35 camundongos WT foram utilizados. As lesões periapicais foram induzidas nos primeiros molares inferiores de ambos os lados. Após 0 (G0), 7 (G7), 21 (G21) e 42 (G42) dias, os animais foram anestesiados e eutanasiados para que as mandíbulas fossem dissecadas e divididas ao meio.O lado direito das mandíbulas foi para o processamento histotécnico, para posterior marcação de RANK, RANKL, OPG, TLR2 e MyD88, por meio da imuno-histoquímica do lado esquerdo da mandíbula foi utilizado para a extração de RNA, para a determinação da expressão gênica de RANK (Tnfrsf11a), RANKL (Tnfrsf11), OPG (Tnfrsf11b), TLR2 (Tlr2) e MyD88 (Myd88) utilizando quantificação em Tempo Real da Reação da Polimerase em Cadeia (qRT-PCR). Para ambos os estudos, testes paramétricos e não paramétricos foram realizados com nível de significância de 5%. Foi possível observar, no primeiro estudo, que nos períodos iniciais da progressão da lesão periapical, houve um aumento na imunomarcação de MMP9 nos camundongos TLR2 KO e MyD88 KO, quando comparados aos WT, diferente da MMP2 que não se observou nenhum aumento na imunomarcação. No entanto, aos 42 dias observou-se uma redução da imunomarcação de MMP2 e um aumento da MMP9 nos camundongos TLR2 KO. Adicionalmente, no segundo estudo, foi possível observar um aumento da imunomarcação para RANK, RANKL, OPG, TLR2 e MyD88 durante a progressão da lesão periapical (p

O receptor NLRP12 é um receptor intracelular que está envolvido no reconhecimento de PAMPs e DAMPs durante uma infecção. Foi visto que durante a osteoclastogênese, há uma diminuição da transcrição de NLRP12, e que este receptor inibe a reabsorção óssea através da supressão da via alternativa de NF-κB, exercendo um papel protetor sobre o tecido ósseo. Além disso, foi observado que a deficiência de NLRP12 em monócitos sob o estímulo de RANKL levou a maior estabilização de NIK e maior translocação de RelB para o núcleo, aumentando a formação dos osteoclastos in vitro. Portanto, o objetivo deste estudo foi avaliar o papel de NLRP12 no desenvolvimento e progressão da lesão periapical induzida em camundongos. Para isso, foi induzida a lesão periapical dos primeiros molares inferiores dos camundongos fêmeas C57/Bl6 (WT) e camundongos deficientes para o receptor NLRP12 (Nlrp12-/-). Após 14 e 21 dias, as amostras de mandíbula foram submetidas às análises: determinação da área de lesão periapical em cortes histológicos; expressão gênica de marcadores osteoclastogênicos por qPCR; contagem de osteoclastos submetidos ao ensaio de histoenzimologia (TRAP); avaliação enzimática das MMPs por Zimografia. Os linfonodos cervicais foram submetidos à análise da expressão dos fatores de transcrição T-bet, RORγt, GATA-3 e Foxp-3 por qPCR. Aos 14 dias, na análise histomorfométrica os animais Nlrp12-/- apresentaram uma maior lesão periapical quando comparados aos animais WT, associado com o aumento da expressão de Trap, Catepsina K e MMP-9 em amostras de hemi-mandíbulas com lesão. Além disso, o número de células TRAP positivas foi significantemente maior em Nlrp12-/- com lesão quando comparado com seu controle, enquanto no grupo WT com e sem lesão foram semelhantes. Assim como foi observado o maior aumento dos osteoclastos presentes no local da lesão dos animais Nlrp12-/-, estes também se mostraram com maior atividade gelatinolítica de MMP-9 e MMP-2 em relação ao seu controle, diferente dos animais WT que não apresentaram diferença entre os grupos controle e com lesão. Ainda nesse período, foi observado nas amostras de linfonodos cervicais que, no grupo Nlrp12-/- houve uma tendência à maior expressão de RORγt, seguidos de menor expressão de T-bet quando comparados com o grupo WT. Aos 21 dias, os animais WT e Nlrp12-/- apresentaram lesões periapicais de tamanhos semelhantes. Além disso, somente o grupo Nlrp12-/- com lesão apresentou um aumento significativo da expressão de Trap em relação ao seu controle e a expressão de Catepsina K foi semelhante em ambos os grupos. Neste período houve um aumento na quantidade de células TRAP positivas em ambos os grupos com lesão quando comparados com seus respectivos controles, entretanto também não houve diferença entre os animais WT e Nlrp12-/-. A atividade de MMP-9 e MMP-2 foram semelhantes entre os animais WT e Nlrp12-/- e entre seus respectivos controles aos 21 dias. Nossos dados sugerem que a deficiência de NLRP12 levou a uma maior perda óssea aos 14 dias de lesão periapical e que isso ocorre via modulação da formação e atividade dos osteoclastos. Portanto, o NLRP12 inibe a osteoclastogênese e a atividade dos osteoclastos durante a fase inicial da lesão periapical, retardando o desenvolvimento da doença. NLRP12 is an intracellular sensor that recongnizes PAMPS and DAMPs during infeccion. It was seen that NLRP12 transcription is down-regulated during osteoclastogenesis, and NLRP12 protect bone via suppression of alternative NF-κB-induced osteoclastogenesis. It has been shown that NLRP12 deficiency in monocytes under RANKL stimuli exhibited more stabilization of NIK and nuclear translocation of RelB, increasing osteoclasts formation in vitro. Therefore, the aim of this study was to evaluate the role of NLRP12 in the development and progression of experimentally induced periapical lesions in mice. Periapical lesions were induced in first molars of WT and NLRP12 knockout (KO) mice. Samples were collected at 14 and 21 days of the lesion for the analyses. Jaw samples with lesion and control area were subjected to periapical lesions area determination by histological sections; osteoclastogenic markers expression by q-PCR; count of osteoclasts submitted to the enzyme assay for TRAP; evaluation of MMPs activity by Zymography. The expression of T cells markers´ transcription factors was evaluated in lymph nodes by q-PCR. Fourteen days after periapical lesion induction, histological analysis revealed that NLRP12KO mice exhibited higher area of periapical lesion compared to WT group, which was associated with up-regulated mRNA expression of Trap, Cathepsin K and MMP-9 in the jaw samples. Moreover, the number of multinuclear TRAP-stained cells was significantly higher in the NLRP12KO with lesion group when compared to it control, whereas in the WT the number between the lesion and control groups were similar. Still, NLRP12KO showed higher MMP-9 and -2 gelatinolytic activity than it control, unlike WT mice that showed no difference between control and lesion group. In this period, NLRP12KO mice lymph nodes showed more RORγt expression than WT mice and less T-bet expression. At 21 days, WT and NLRP12KO presented periapical lesions of similar sizes. In addition, NLRP12KO group with lesion showed a significant increase in Trap expression when compared with their control, but the increase in Trap e Cathepsin K was similar in both groups. Additionally, there was an increase of multinuclear TRAP-stained cells in both lesion groups when compared with their respective controls; however, there was also no difference between WT and NLRP12KO mice. MMP-9 and -2 activity was similar between WT and NLRP12KO and with their respective controls at 21 days. Our results suggest that NLRP12 deficiency led to increased bone loss at 14 days of periapical lesion and it occurs due to increased osteoclasts formation and activity. Therefore, NLRP12 inhibits osteoclastogenesis and osteoclasts activity during the early stages of periapical lesion, slowing the development of the disease.

O objetivo do presente estudo foi avaliar ossos maxilares e lesões periapicais induzidas em ratas ovariectomizadas submetidas ou não ao tratamento com bisfosfonato (Alendronato - ALD) ou com inibidor da catepsina K (Odanacatib - ODN). Foram utilizadas 45 ratas, divididas em 6 grupos: I sham (cirurgia de ovariectomia fictícia); II sham e lesão periapical (LP); III - ovariectomia (OVX) sem LP; IV OVX e LP; V OVX, LP e ALD; e Grupo VI - OVX, LP e ODN. Um dia após a realização da OVX ou da cirurgia fictícia, os animais dos grupos V e VI começaram a receber ALD ou ODN, via gavagem. Decorridas 9 semanas da realização da OVX, os primeiros molares dos grupos II, IV, V e VI foram submetidos à indução de LP por 3 semanas. Decorrido este período, foi realizada colheita microbiológica dos canais radiculares para a quantificação de micro-organismos e os animais foram submetidos à eutanásia. Fêmures foram analisados por meio de densitômetro, para registro da densidade mineral óssea (BMD). As maxilas foram analisadas por meio de microtomografia computadorizada (micro-CT) para avaliação da microarquitetura e BMD do osso interradicular e as mandíbulas para avaliação do volume das LP. Os primeiros molares inferiores foram submetidos ao processamento histotécnico, sendo os cortes corados com hematoxilina e eosina (HE) e analisados em microscopia convencional. Paralelamente, foi realizada a análise morfométrica da área das lesões periapicais, em microscopia de fluorescência e histoenzimologia para a atividade da TRAP. Os primeiros molares superiores foram submetidos à detecção da expressão gênica de citocinas, marcadores da osteoclastogênese e de metaloproteinases da matriz. Os resultados obtidos foram submetidos à análise estatística apropriada, com nível de significância de 5%. A OVX afetou a BMD do fêmur e da maxila e a microarquitetura apenas do fêmur. O ALD recuperou a BMD dos ossos avaliados. A OVX não foi capaz de influenciar nos níveis de contaminação microbiana do canal radicular. As LP dos animais do grupo IV apresentaram expressão aumentada de RANK, RANKL, IL-1β, IL-6, TNF-α, MMP-8 e 13, enquanto o tratamento com ALD (grupo V) foi capaz de reduzir a expressão de IL-6 e MMP-8, ao mesmo nível que nas LP do grupo II. Além disso, as LP do grupo IV foram maiores (área e volume), em comparação às dos grupos II e V. O ODN, na dose e frequência de administração aplicada, não foi capaz de promover alterações significantes. A OVX e os tratamentos antirreabsortivos não influenciaram no número de osteoclastos ao redor da LP. Assim, concluiu-se que a condição hipoestrogênica induzida pela OVX foi capaz de diminuir a BMD do fêmur e da maxila e alterou a microarquitetura do fêmur. Apenas o ALD foi capaz de recuperar o fenótipo da BMD, ou seja, retorno aos níveis observados nos animais saudáveis. Ainda, a OVX agravou o processo de reabsorção, a inflamação e a expressão de MMPs, provocando lesões periapicais maiores. O ALD e o ODN proporcionaram uma melhora da resposta periapical. Entretanto, apenas o tratamento com ALD recuperou o fenótipo, fazendo com que as lesões periapicais fossem similares às lesões dos animais saudáveis. The aim of this study was to evaluate maxillary bones and apical periodontitis induced in ovariectomized rats treated or not with bisphosphonate (Alendronate - ALD) or cathepsin K inhibitor (Odanacatib - ODN). Forty-five female rats were divided into 6 groups: I sham surgery; II - sham and apical periodontitis (AP); III - ovariectomy (OVX) without AP; IV - OVX and AP; V - OVX, AP and ALD; and Group VI - OVX, AP and ODN. One day after OVX or sham surgery, the animals in groups V and VI started receiving ALD or ODN, by gavage. After 9 weeks, the first molars of the rats in groups II, IV, V and VI were subjected to induction of AP for 3 weeks. Microbiological root canal sampling was collected for quantification of microorganisms and the animals were euthanized. Bone mineral density (BMD) of the femurs was analyzed by bone densitometry. The maxillas were analyzed by microcomputed tomography (micro-CT) to determine the microarchitecture and BMD of the interradicular bone while the mandibles were analyzed to determined AP volume. The mandibular first molars were subjected to histotechnical processing and hematoxylin and eosin-stained histological sections were examined with conventional microscopy. In addition, a morphometric analysis of AP area was performed using fluorescence microscopy and tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP) histoenzymology. The maxillary first molars were used to evaluate the gene expression of cytokines, osteoclastogenesis markers and matrix metalloproteinases (MMP) using RT-PCR. The results were subjected to appropriate statistical analysis with 5% significance level. OVX affected femoral and maxillary BMD and femoral microarchitecture. ALD recovered the BMD of both types of bones. OVX was not able to influence the microbial levels of the root canal. In group IV, AP showed increased expression of RANK, RANKL, IL-1β, IL-6, TNF-α, MMP-8 and MMP-13, while ALD treatment (group V) reduced IL-6 and MMP-8 expression to the same level as the AP in group II. In group IV, AP area and volume were larger than in groups II and V. ODN, in the dosage and frequency of administration applied, was not able to promote significant changes. OVX and antiresorptive treatments did not influence the number of osteoclasts around the AP region. In conclusion, the hypoestrogenic condition induced by OVX was able to decrease the BMD of femur and maxilla and only the microarchitecture of the femur. ALD was able to recover the BMD phenotype, i.e., return to the levels observed in healthy animals. Furthermore, OVX exacerbated resorption, inflammation and MMP expression, inducing larger lesions. Treatment with ALD and ODN resulted in an improvement of the periapical response. However, only ALD recovered the phenotype, with AP similar to that of healthy animals.

O objetivo deste estudo foi avaliar a prevalência de cárie dentária e sua associação com índice de massa corpórea (IMC), bem como seus fatores de risco demográficos (sexo e idade), socioeconômicos, familiares (escolaridade dos pais, número de filhos) e comportamentais (dieta e práticas de higiene bucal) de crianças e adolescentes. Duzentos e trinta e sete crianças e adolescentes foram inseridos neste estudo. Após a autorização de participação, aplicou-se um questionário, realizou-se exame clínico intrabucal das crianças e a coleta dos dados antropométricos. Os parâmetros analisados neste estudo foram peso, altura, IMC-para-idade e número de dentes cariados, extraídos e obturados para posterior cálculo do ceo-d ou CPO-D para dentes decíduos e permanentes, respectivamente. Teste do Qui-quadrado e o teste T foram usados para analisar a associação entre as variáveis (idade, etnia, gênero, hábitos de higiene bucal e alimentar) e alterações do IMC. A média e desvio padrão do índice ceo-d nos grupos de baixo peso, peso normal, grupos de sobrepeso e obesidade, foram de 9.5 (± 0.70), 5.06 (± 4.54), 7.66 (± 4.41), e 6 (± 5.19), respectivamente (p>0,05). A porcentagem de indivíduos que estavam com a dentição hígida foi de 13,5%. Houve uma associação entre prevalência de cárie e etnia (p0,05). Em relação aos hábitos alimentares na primeira infância, o tempo de aleitamento materno não influenciou na experiência de cárie (p>0,05), por outro lado, o açúcar acrescido na mamadeira esteve associado à doença cáries (p 0.05). The percentage of subjects who were healthy female with the teeth was 13.5%. There was an association between caries prevalence and ethnicity (p 0.05). With regard to eating habits in early childhood, the duration of breastfeeding did not affect the caries experience (p> 0.05), on the other hand, sugar plus the bottle was associated with caries disease (p

O efeito protetor da caseína fosfopeptídea fosfato de cálcio amorfo (CPP-ACP) contra a erosão dentária é controverso. Este estudo in situ teve como objetivo investigar a capacidade de uma goma de mascar com CPP-ACP em prevenir uma única desmineralização erosiva. Blocos de esmalte bovino (120) selecionados pela dureza superficial inicial foram divididos aleatoriamente entre os grupos: GI - goma de mascar com CPP-ACP, GII - goma de mascar sem CPP-ACP e GIII - controle negativo para avaliação do efeito protetor sem estimulação salivar (sem goma de mascar). Dezenove voluntários participaram do estudo durante três fases cruzadas de 2 h cada. Nas fases de GI e GII os voluntários usaram dispositivos intrabucais palatinos contendo 2 blocos de esmalte, durante 120 minutos e mascaram uma unidade da goma de mascar correspondente ao grupo nos últimos 30 minutos. No grupo controle os voluntários usaram o dispositivo intrabucal por 2h, sem uso de goma de mascar. Em cada fase, imediatamente após a utilização, os dispositivos intrabucais foram imersos em refrigerante tipo cola durante 5 minutos para promover a desmineralização erosiva. A dureza superficial final foi mensurada e os valores foram utilizados para o cálculo do percentual de perda de dureza. Os dados foram analisados por ANOVA de medidas repetidas e teste Tukey (α = 5%). Menor perda de dureza do esmalte foi encontrada após a utilização de goma de mascar com (GI - 32,7%) e sem (GII - 33,5%) CPP-ACP relação ao efeito salivar sem estimulação (GIII - 39,8%) (p 0,05). Os resultados sugerem que a utilização de goma de mascar imediatamente antes de uma desmineralização erosiva é capaz de diminuir a perda de dureza do esmalte. No entanto, a presença de CPP-ACP na goma de mascar não foi capaz de melhorar este efeito. The erosion-protective effect of CPP-ACP is controversial. This in situ study aimed to investigate the ability of CPP-ACP chewing gum to prevent a single event of erosive demineralization. Bovine enamel blocks (120), after selection (initial surface hardness) were randomly assigned to groups: GI-chewing gum with CPP-ACP, GIIchewing gum without CPP-ACP and Control group-salivary effect without stimulation (no gum). Nineteen volunteers participated on this study during 3 crossover phases of 2 h. On GI and GII, the volunteers wore intraoral palatal devices for 120 min and chewed a unit of the corresponding chewing gum on the last 30 min. On Control group the volunteer wore the appliance for 2 h, without chewing gum. On each phase immediately after the intraoral use, devices were extra orally immersed in cola drink for 5 minutes to promote erosive demineralization. The percentage of surface hardness loss was calculated. The data were analyzed by Repeated Measures ANOVA and Turkeys test. Less enamel hardness loss was found after the use of chewing gum with (GI-32.7 %) and without (GII-33.5%) CPP-ACP when compared to salivary effect without stimulation (control- 39.8%) (p0.05). The results suggest that the use of chewing gum immediately before an erosive demineralization is able to diminish the enamel hardness loss. However, the presence of CPP-ACP in the chewing gum cannot enhance this protective effect.

O fundamento do sucesso da terapia endodôntica é baseado no controle da contaminação microbiana presente no sistema de canais radiculares. Com essa finalidade, novos sistemas de irrigação têm sido desenvolvidos, demonstrando maior eficácia e segurança, destacando-se a irrigação por Pressão Apical Negativa (ANP) e a Irrigação Ultrassônica Passiva (PUI). O presente estudo in vivo teve como objetivo comparar a ANP e a PUI no reparo apical e periapical de dentes de cães com lesão periapical crônica, tendo como controle a irrigação convencional por Pressão Positiva (PP). Um total de 60 canais radiculares de pré-molares, com lesões periapicais experimentalmente induzidas, foram submetidos ao tratamento endodôntico em sessão única. Radiografias periapicais foram realizadas após a indução das lesões periapicais. Os dentes foram aleatoriamente divididos em 3 grupos: Grupo I - Irrigação por Pressão Apical Negativa (n=20 canais radiculares); Grupo II - Irrigação Ultrassônica Passiva (n=20 canais radiculares) e Grupo III - Irrigação por Pressão Positiva (controle) (n=20 canais radiculares). Após 180 dias, os animais foram eutanasiados, as peças removidas e submetidas ao processamento histotécnico para a análise histopatológica morfológica e morfométrica, em cortes corados com HE, sob microscopia convencional e de fluorescência. A análise radiográfica do tamanho das lesões periapicais foi realizada através da comparação das medidas das áreas das lesões antes e 180 dias após o tratamento endodôntico. Também foi realizada a histoenzimologia para a Fosfatase Ácida Resistente ao Tartarato (TRAP), para a marcação de osteoclastos, e a coloração de Brown e Brenn, para avaliar a presença de bactérias e sua localização. Os resultados obtidos foram submetidos à análise estatística por meio do teste de Kruskal-Wallis. O nível de significância adotado foi de 5%. Observou-se que não houve diferença estatisticamente significante entre os grupos com relação à resposta radiográfica (p=0,91). Na comparação dos parâmetros histopatológicos, o grupo I apresentou resultados mais homogêneos. Houve diferença estatisticamente significante entre os grupos I e III, com infiltrado inflamatório mais suave no grupo I (p=0,02), enquanto o grupo II foi semelhante aos grupos I e III. Na comparação das variáveis numéricas (morfometria em microscopia de fluorescência e TRAP), não foi possível observar diferença significativa entre os grupos (p>0,05). Os resultados deste estudo in vivo demonstraram que a irrigação por ANP resultou em resposta inflamatória mais suave, em comparação ao grupo controle, porém, semelhante à PUI. Nos demais aspectos, a resposta dos tecidos apicais e periapicais, após irrigação por ANP ou PUI, foi semelhante à irrigação convencional por PP. A successful endodontic therapy relies on the control of microbial contamination of the root canal system. For this purpose, new irrigation systems with greater efficacy and safety have been developed, standing out the apical negative pressure (ANP) and the passive ultrasonic (PUI) irrigation systems. The aim of this in vivo study was to compare apical positive pressure irrigation (PP - conventional irrigation), ANP and PUI in the apical and periapical repair of dogs teeth with chronic periapical lesion. Sixty root canals of premolars with experimentally induced periapical lesions were subjected to a single-session endodontic treatment. Periapical radiographs were taken after inducing the periapical lesions. The teeth were randomly assigned to three groups: Group I: ANP with EndoVac (n=20 root canals); Group II: PUI (n=20 root canals) and Group III: apical positive pressure irrigation (PP - conventional irrigation - control) (n=20 root canals). After 180 days, the animals were euthanized, and the anatomic pieces were removed and subjected to histotechnical processing for histopathological, morphological and morphometric analyses of HE-stained sections under conventional and fluorescence microscopy. The radiographic analysis of the size of periapical lesions was performed by measuring the lesions before and 180 days after the endodontic treatment. Tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP) histoenzymology for identification of osteoclasts and Brown and Brenn staining for identification and localization of bacteria were also performed. Data were analyzed statistically by the Kruskal-Wallis test a significance level of 5%. There were no statistically significant differences among the groups regarding the radiographic response (p=0.91). In the comparison of histopathological parameters, Group I presented more homogeneous results. There was a statistically significant difference between Groups I and III, with milder infiltrate inflammatory in Group I (p=0.02). Group II was similar to Groups I and III. Comparing the numerical variables (morphometric analysis under fluorescence microscopy and TRAP), no statistically significant difference could be found among the groups (p>0.05). The results of this in vivo study revealed that ANP caused milder inflammatory response than PP (control group), but similar to PUI. In the other aspects, the response of apical and periapical to ANP and PUI was similar to tissue response to PP.

A molécula adaptadora myeloid differentiation primary response gene 88 (MyD88) está envolvida na ativação de receptores Toll-like (TLRs), os quais são responsáveis pelo reconhecimento precoce pelas células do hospedeiro de patógenos invasores e pelo desencadeamento da resposta imunológica. O objetivo do presente estudo foi caracterizar o desenvolvimento e a progressão de lesões periapicais induzidas experimentalmente em dentes de camundongos knockout (KO) para a molécula MyD88 (MyD88 KO), comparados a animais wild-type (WT). Lesões periapicais foram induzidas nos primeiros molares inferiores de 30 camundongos WT e de 30 camundongos MyD88 KO. Decorridos 7, 21 e 42 dias, os animais foram submetidos à eutanásia em câmara de CO2 e as mandíbulas foram removidas e submetidas ao processamento histotécnico. A seguir, cortes representativos foram corados com hematoxilina e eosina (HE), para descrição das características do canal radicular e das regiões apical e periapical e para contagem do número de células inflamatórias (neutrófilos), em microscopia de luz, e para mensuração da área das lesões periapicais, em microscopia de fluorescência. Espécimes sequenciais foram analisados por meio de: histoenzimologia para a atividade da TRAP, para contagem de osteoclastos; coloração de Brown & Brenn, para localização de bactérias; e imunohistoquímica, para identificação de marcadores da osteoclastogênese (RANK, RANKL e OPG). Os dados foram submetidos à análise estatística por meio dos testes não-paramétricos de Mann-Whitney, Kruskal-Wallis e pós-teste de Dunn, utilizando o programa SPSS (Statistical Package for the Social Sciences) versão 17.O, com nível de significância de 5%. As demais análises foram expressas de maneira qualitativa. Com relação à extensão das lesões periapicais, o grupo MyD88 KO apresentou valores significantemente maiores do que o grupo WT nos períodos de 7 (p=0,001) e 21 dias (p=0,05), sendo que após 42 dias foi observada tendência de maiores valores, porém sem diferença significante (p=0,09). Foi observada maior quantidade de neutrófilos no grupo MyD88 KO, em comparação aos animais WT (p=0,01 em 7 dias; p=0,004 em 21 dias; e p