Search

Mestrado em Biologia Molecular e Celular Iron is an essential element for cell viability since it is a component of several metalloproteins, containing iron-sulfur clusters and heme centers. The ability to gain and lose electrons, switching between the ferrous (Fe2+) and ferric (Fe3+) states, renders the involvement of iron in many cellular processes. Iron acquisition systems have to be highly regulated to assure a continuous supply of iron but simultaneously prevent its toxicity associated with the formation of hydroxyl radicals by the Fenton reaction. Loss of iron homeostasis is behind many pathologies, highlighting the importance of understanding the mechanisms involved in iron homeostasis. The Saccharomyces cerevisiae inositolphosphosphingolipid phospholipase C (Isc1p) hydrolyses complex sphingolipids to produce ceramide, a bioactive sphingolipid. ISC1 deletion is characterized by premature aging, oxidative stress sensitivity and mitochondrial dysfunction. This mutant also exhibits an up regulation of genes involved in iron uptake leading to increased levels of iron. However the growth phase in which iron accumulation occurs, the specific site of accumulation or even the oxidation state of the accumulated iron in isc1Δ cells remains uncharacterized. Futhermore, the molecular mechanisms behind the iron overload in isc1Δ cells are not known. By monitoring iron levels and oxidation state along growth, it was possible to observe that deletion of ISC1 caused iron accumulation in all phases of growth in both the ferric and ferrous forms. Additionally to the increased iron levels, isc1Δ cells also exhibited an altered distribution of iron within the cell. Unlike wild type, isc1Δ cells did not accumulate ferric iron in the vacuole, but instead, iron seemed to be distributed throughout the cell. Furthermore, iron accumulation in isc1Δ cells was associated with the activation of Aft1p, the low iron-sensing transcriptional activator. Cells lacking Isc1p exhibed higher levels of Aft1p retained in the nucleus, and AFT1 deletion abolished iron accumulation in the isc1Δ mutant. It was also found that dephosphorylation of Aft1p in isc1Δ cells is associated with its activation. Additionally the activation of the phosphatase Sit4p in isc1Δ cells was discarded as a potential mechanism behind Aft1p dephosphorylation and activation, since isc1Δsit4Δ cells still exhibit iron overload. Overall, these results indicate that the dephosphorylation and activation of Aft1p is the factor behind the accumulation of iron in the isc1Δ mutant and reinforce the role of Isc1p in the regulation of iron homeostasis. O Ferro é um elemento essencial para a viabilidade celular, sendo um componente de diversas metaloproteínas, contendo grupos de ferro e enxofre e centros heme. A capacidade de ganhar e perder eletrões, alterando entre os estados ferroso (Fe2+) e férrico (Fe3+), faz com que o ferro esteja envolvido em diversos processos celulares. Os sistemas de aquisição de ferro têm de ser altamente regulados para assegurar um fornecimento contínuo de ferro e simultaneamente prevenir a sua toxicidade associada à formação de radicais hidroxilo pela reação de Fenton. A perda da homeostasia do ferro está associada a muitas patologias, o que enfatiza a importância do estudo dos mecanismos envolvidos na homeostasia do ferro. A proteína inositolfosfoesfingolípido fosfolipase C (Isc1p) presente em Saccharomyces cerevisiae hidrolisa esfingolípidos complexos para produzir ceramida, um esfingolípido bioativo. A deleção do ISC1 é caracterizada pelo envelhecimento celular prematuro, sensibilidade ao stresse oxidativo e disfunção mitocondrial. Este mutante também exibe uma sobreexpressão dos genes envolvidos na captação de ferro, resultando em níveis elevados de ferro. No entanto, a fase do crescimento em que a acumulação do ferro ocorre, o compartimento específico de acumulação ou mesmo o estado de oxidação do ferro acumulado nas células isc1Δ permanece por caracterizar. Além disso, os mecanismos moleculares subjacentes à acumulação de ferro nas células isc1Δ não são conhecidos. Monitorizando os níveis de ferro e o estado de oxidação ao longo do crescimento, foi possível observar que a deleção do ISC1 causou uma acumulação de ferro em todas as fases de crescimento em ambas as formas ferrosa e férrica. Além dos níveis de ferro elevados, as células isc1Δ também exibiram uma alteração na distribuição de ferro no interior da célula. Ao contrário das células wt, as células isc1Δ não acumularam ferro férrico no vacúolo, mas em vez disso, o ferro pareceu estar distribuído por toda a célula. Adicionalmente, a acumulação de ferro nas células isc1Δ foi associada à ativação do Aft1p, o ativador transcricional sensível a níveis baixos de ferro. Células sem a proteína Isc1p exibiram níveis mais elevados de Aft1p retido no núcleo e a delecção do AFT1 suprimiu a acumulação de ferro observada no mutante isc1Δ. Também se observou que a defosforilação do Aft1p nas células isc1Δ está associada à sua ativação. Adicionalmente, a ativação da fosfatase Sit4p nas células isc1Δ como um potencial mecanismo responsável pela defosforilação e ativação do Aft1p foi descartada, uma vez que as células isc1Δsit4Δ continuam a apresentar acumulação de ferro. Em conclusão, estes resultados indicam que a defosforilação e ativação do Aft1p é o fator responsável pela acumulação de ferro no mutante isc1Δ e reforça o papel do Isc1p na regulação da homeostasia do ferro.

Mestrado em Biologia Molecular e Celular Submitted by Alexandra Bastos (alexandrabastos@ua.pt) on 2016-04-15T17:46:48Z No. of bitstreams: 1 tese.pdf: 2359543 bytes, checksum: ecd8a6d32bce02730fc58a2a0a528b75 (MD5) Made available in DSpace on 2016-04-15T17:46:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese.pdf: 2359543 bytes, checksum: ecd8a6d32bce02730fc58a2a0a528b75 (MD5) Previous issue date: 2015-12-22

Mestrado em Biologia Molecular e Celular Spinal cord injury (SCI) is a devastating neurological disorder that affects thousands of people each year. Although in recent decades significant progress has been made in relation to understanding the molecular and cellular events underlying the nervous damage, spinal cord injury is still a highly disabling condition for which there is no curative therapy. People affected by spinal cord injuries manifested dysfunction or loss, temporary or permanent, of motor, sensory and / or autonomic functions depending on the spinal lesion damaged. Currently, the incidence rate of this type of injury is approximately 15-40 cases per million people worldwide. At the origin of these lesions are: road accidents, falls, interpersonal violence and the practice of sports. In this work we placed the hypothesis that HA is one of the component of the scar tissue formed after a compressive SCI, that it is likely synthetised by the perilesional glial cells and that it might support the permeation of the glial scar during the late phase of SCI. Nowadays, much focus is drawn on the recovery of CNS function, made impossible after SCI due to the high content of sulfated proteoglycans in the extracellular matrix. Counterbalancing the ratio between these proteoglycans and hyaluronic acid could be one of the experimental therapy to re-permeate the glial scar tissue formed after SCI, making possible axonal regrowth and functional recovery. Therefore, we established a model of spinal cord compression in mice and studied the glial scar tissue, particularly through the characterization of the expression of enzymes related to the metabolism of HA and the subsequent concentration thereof at different distances of the lesion epicenter. Our results show that the lesion induced in mice shows results similar to those produced in human lesions, in terms of histologic similarities and behavioral results. but these animals demonstrate an impressive spontaneous reorganization mechanism of the spinal cord tissue that occurs after injury and allows for partial recovery of the functions of the CNS. As regards the study of the glial scar, changes were recorded at the level of mRNA expression of enzymes metabolizing HA i.e., after injury there was a decreased expression of HA synthases 1-2 (HAS 1-2) and an increase of the expression HAS3 synthase mRNA, as well as the enzymes responsible for the HA catabolism, HYAL 1-2. But the amount of HA measured through the ELISA test was found unchanged after injury, it is not possible to explain this fact only with the change of expression of enzymes. At two weeks and in response to SCI, we found synthesized HA by reactive astrocytes and probably by others like microglial cells as it was advanced by the HA/GFAP+ and HA/IBA1+ cells co-location. A lesão medular é uma desordem neurológica devastadora que afeta milhares de pessoas a cada ano. E apesar de nas últimas décadas ter sido feito um enorme progresso relativamente à compreensão dos eventos moleculares e celulares que este dano desencadeia, a lesão medular ainda é uma condição altamente incapacitante e mortal para a qual ainda não há cura. Os indivíduos que apresentam lesões medulares, manifestam disfunção ou perda, temporária ou permanente, das funções motoras, sensoriais e/ou autonómicas. Atualmente a taxa de incidência desta tipologia de lesões é de aproximadamente, 15-40 casos por milhão de pessoas em todo o mundo. Na origem destas lesões estão: acidentes rodoviários, quedas, violência interpessoal e a prática de desportos. Neste trabalho foi colocada a hipótese de que o ácido hialurónico (HA) seja um dos componentes do tecido cicatricial formado após a compressão medular e que provavelmente seja sintetizado pelas células gliais situadas à volta da lesão, podendo ajudar na penetração da cicatriz glial, por parte das células nervosas, durante uma fase mais tardia da lesão da espinal medula. Atualmente tem sido dada muita atenção ao restabelecimento da função do SNC, impossibilitado pelo elevado teor de proteoglicanos sulfatados na matriz extracelular. O contrabalanço do rácio entre o teor de proteoglicanos e de HA pode ser uma terapia experimental para a re-permeabilização do tecido da cicatriz glial formada após a lesão medular, possibilitando o crescimento axonal e a recuperação funcional. Por isso, estabeleceu-se um modelo de compressão da espinal medula em ratinhos e estudou-se o tecido da cicatriz glial, em particular, a caracterização da expressão de enzimas relacionadas com o metabolismo do HA e a sua posterior concentração a diferentes distâncias do epicentro da lesão. Os nossos resultados mostram que a lesão induzida em ratinhos produziu resultados semelhantes às lesões encontradas em humanos, tanto do ponto de vista histológico como funcional. No entanto, após traumatismo, estes animais demonstraram um mecanismo de recuperação espontânea impressionante na espinal medula resultando numa recuperação parcial da função do SNC. Quanto ao estudo da cicatriz glial, as alterações foram detetadas na expressão do mRNA das enzimas metabolizadoras de HA, isto é, após a lesão houve uma diminuição na expressão das HAS1-2 e um aumento na expressão de mRNA da sintase HAS3 assim como das enzimas ligadas à degradação do HA, HYAL 1-2. Porém, duas semanas após LM a concentração de HA medida através do teste ELISA encontrou-se inalterada. É impossível explicar este facto apenas com a mudança na expressão das enzimas ligadas ao HA. A duas semanas pós-trauma, em resposta à LM, encontrámos HA sintetizado por astrócitos reativos e, provavelmente, por outras células, como a microglia tal como foi avançado pela co-localização de HA/IBA1+ e HA/GFAP+. Le traumatisme médullaire est une affection neurologique dévastatrice qui affecte des milliers de personnes chaque année. Bien que ces dernières décennies d'énormes progrès ont été fait par rapport à la compréhension des événements moléculaires et cellulaires qui déclenchent les dommages au sein du tissu nerveux, les dommages de la moelle épinière sont encore irréversibles et rendent les personnes atteintes très invalidées. Aucun traitement visant à remédier aux pertes fonctionnelles n’est disponible. Les gens atteints de traumatismes de la moelle épinière, manifestent un dysfonctionnement ou une perte, temporaire ou permanente, des fonctions motrice, sensorielle et / ou autonome. Actuellement, l’incidence de ce type de blessure est d'environ 15-40 cas par million de personnes dans le monde. L'origine de ces lésions sont: accidents de la route, chutes, violence interpersonnelle et pratique de sports. Dans ce travail, nous avons placé l'hypothèse que l'acide hyaluronique (HA) est l'un des composants du tissu cicatriciel formé après une compression de la moelle épinière, qu'il est probablement synthétisé par les cellules gliales péri lésionnelles et qu'il pourrait soutenir la pénétration de la cicatrice gliale pendant la phase tardive de la LM. Actuellement beaucoup d'attention est attirée sur le rétablissement de la fonction du système SNC, rendue impossible après la LM en raison de la contenu élevé en protéoglycanes sulfatés dans la matrice extracellulaire. Contrebalançant le rapport entre ces protéoglycanes et l'HA peut être une thérapie expérimentale de la re-pénétration dans le tissu de cicatrice gliale formé après la LM, ce qui rend possible le repousse axonale et la récupération fonctionnelle. Par conséquent, nous avons établi un modèle de compression de la moelle épinière chez des souris et étudié le tissu de la cicatrice gliale, en particulier par la caractérisation de l'expression des enzymes liées au métabolisme de l'HA et la concentration ultérieure de celui-ci à des distances différentes de l'épicentre de la lésion. Les résultats montrent que la lésion induite chez la souris produit des résultats similaires à ceux trouvés dans les lésions humaines, d'un point de vue fonctionnel et histologique. Toutefois, après un traumatisme, ces animaux ont démontré un mécanisme de récupération spontanée impressionnante dans la moelle épinière entraînant une reprise partielle de la fonction du système nerveux central. De manière surprenante, la quantité d'HA vérifiée par le test ELISA s’est trouvé inchangée deux semaines après traumatisme médullaire. Il est impossible d'expliquer ce fait uniquement avec le changement de l'expression d'enzymes liées à l'HA. Nous avons constaté que deux semaines après traumatisme, il ya l' HA synthétisé par les astrocytes réactifs et probablement par d'autres comme les cellules microgliales comme il a été avancé par les résultats de colocalisation de l' HA et cellules GFAP+ ainsi que l'HA et cellules IBA1+.

Mestrado em Biologia Molecular e Celular Microglial cells are the resident immune cells of central nervous system (CNS) and the major players in neuroinflammation. These cells are also responsible for surveilling the neuronal microenvironment, and upon injury to the CNS they change their morphology and molecular profile and become activated. Activated status is associated with microglia proliferation, migration to injury foci, increased phagocytic capacity, production and release of reactive oxygen species (ROS), cytokines (pro- or anti-inflammatory) and reactive nitrogen species. Microglia activation is crucial for tissue repair in the healthy brain. However, their chronic activation or deregulation might contribute for the pathophysiology of neurodegenerative diseases. A better understanding of the mechanisms underlying microglial cell activation is important for defining targets and develop appropriate therapeutic strategies to control the chronic activation of microglia. It has been observed an increase in profilin (Pfn) mRNA in microglial cells in the rat hippocampus after unilateral ablation of its major extrinsic input, the entorhinal cortex. This observation suggested that Pfn might be involved in microglia activation. Pfn1 is an actin binding protein that controls assembly and disassembly of actin filaments and is important for several cellular processes, including, motility, cell proliferation and survival. Here, we studied the role of Pfn1 in microglial cell function. For that, we used primary cortical microglial cell cultures and microglial cell lines in which we knocked down Pfn1 expression and assessed the activation status of microglia, based on classical activation markers, such as: phagocytosis, glutamate release, reactive oxygen species (ROS), pro- and anti-inflammatory cytokines. We demonstrated that Pfn1 (i) is more active in hypoxia-challenged microglia, (ii) modulates microglia pro- and anti-inflammatory signatures and (iii) plays a critical role in ROS generation in microglia. Altogether, we conclude that Pfn1 is a key protein for microglia homeostasis, playing an essential role in their activation, regardless the polarization into a pro or anti-inflammatory signature. As células da microglia são células imunes residentes no sistema nervoso central (SNC) e desempenham um papel importante em processos neuroinflamatórios. Estas células são responsáveis por monitorizar o parênquima neuronal, sendo capazes de responder rapidamente a danos no SNC. Após ativação, a microglia altera a sua morfologia e o seu perfil de expressão de proteínas. O processo de ativação induz a proliferação, migração para a foco da lesão, aumento da capacidade fagocítica, bem como produção e libertação de espécies reativas de oxigénio (EROs), espécies reativas de azoto e citocinas (pro- e anti-inflamatórias). A ativação da microglia é essencial para a reparação de tecidos e a manutenção da homeostasia do SNC. No entanto, a ativação crónica ou a sua desregulação podem contribuir para a patofisiologia de doenças neurodegenerativas. Assim sendo, o estudo dos mecanismos subjacentes à ativação das células da microglia é importante para ajudar a definir e desenvolver estratégias terapêuticas apropriadas para prevenir a sua ativação crónica. Um estudo anterior reportou o aumento dos níveis de RNAm da profilina (Pfn) em células da microglia no hipocampus de ratos após lesão unilateral no córtex entorrinal, sugerindo que a Pfn poderá estar envolvida no processo de ativação da microglia. A Pfn1 é uma proteína de ligação à actina que regula a polimerização do citoesqueleto de actina, sendo importante em diversos processos celulares, incluindo motilidade, proliferação e sobrevivência. Neste trabalho, nós estudamos o papel da Pfn1 na função da microglia. Para tal, utilizamos linhas celulares e células primárias de microglias corticais de rato nas quais reduzimos a expressão da Pfn1 e avaliamos o seu estado de ativação com base em marcadores clássicos de ativação, tais como: fagocitose, libertação de glutamato, produção e libertação de EROs e citocinas pro- e anti-inflamatórias. Nós demonstramos que a Pfn1 (i) se encontra mais ativa após estímulo da microglia por hipoxia, (ii) modula as assinaturas pro- e anti-inflamatória da microglia e (iii) desempenha um papel importante na produção de EROs pela microglia. Nesse estudo concluímos que a Pfn1 é uma proteína importante para o funcionamento da microglia, desempenhando um papel essencial na ativação da microglia, independentemente da polarização pró ou anti-inflamatória.

Mestrado em Biologia Molecular e Celular Submitted by Alexandra Bastos (alexandrabastos@ua.pt) on 2016-05-31T10:09:08Z No. of bitstreams: 1 tese.pdf: 3668217 bytes, checksum: 4ff28c6c5599a46f168532f4c0c78195 (MD5) Made available in DSpace on 2016-05-31T10:09:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese.pdf: 3668217 bytes, checksum: 4ff28c6c5599a46f168532f4c0c78195 (MD5) Previous issue date: 2015-07-31

Mestrado em Biologia Molecular e Celular Submitted by Daisy Tavares (daisytavares@ua.pt) on 2015-01-29T16:23:21Z No. of bitstreams: 1 Tese.pdf: 2372062 bytes, checksum: 61f4bdf1a001d4fdce3ba6c31cb09b34 (MD5) Made available in DSpace on 2015-01-29T16:23:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese.pdf: 2372062 bytes, checksum: 61f4bdf1a001d4fdce3ba6c31cb09b34 (MD5) Previous issue date: 2014

Mestrado em Biologia Molecular e Celular Obesity is one of the leading causes of health care issues all over the world. A large slice of the worldwide population develops co-morbidities as a consequence of this condition, such as type 2 diabetes mellitus (T2DM), atherosclerosis, fatty liver, cardiovascular diseases and even some cancers, conditions that are associated with reduced life expectancy. The inefficiency of current therapies that aim to treat obesity leads to further investigation on novel therapeutic targets for this condition, including modulation of white adipose tissue (WAT). In WAT, glucose and lipid metabolism converge into triglyceride/ glycerol + free fatty acid (TG/ (GL + FFA)) cycle, which is considered a futile cycle since it doesn’t generate products while consuming energy substrates. The decreased activity of this cycle in obesity, decreases substrates oxidation and increases free fatty acids (FFA) storage in WAT. If coupled to increased mitochondrial β-oxidation, modulation of TG/ (GL+FFA) cycling provides an attractive therapeutic target to stimulate fat mobilization and prevent WAT dysfunction. Currently there are no known strategies that simultaneously stimulate both these processes. Chenodeoxycholic acid (CDCA) is a bile acid known for its anti-obesity effects; however the mechanism of action is still controversial. CDCA activates both peroxisome proliferator activating receptor (PPAR) α and PPARγ, regulators of the transcription of key metabolic genes involved in the TG/ ( GL+FFA) cycle, mitochondrial oxidative capacity and FFA oxidation. As such, we hypothesized that CDCA mediates the coupling of futile cycles with energy expenditure in WAT, increasing simultaneously futile acid activity and mitochondrial substrates oxidation. This work focused on evaluating the metabolic alterations of TG/ (GL+FFA) cycle, in culture 3T3-L1 cells exposed to CDCA. Specifically, we addressed if CDCA supplementation alters the TG/ (GL+FFA) cycle activity, if this was related to improved metabolic status and if mitochondrial metabolism was involved. Cultured 3T3-L1 cells exposed to CDCA exhibit decreased lipid accumulation and an increase in uncoupling protein-1 (UCP-1) content, which in turn leads to a decrease in reactive oxygen species (ROS) generation. CDCA also leads to an increase in glyceroneogenesis, suggesting an increase activity in TG/ (GL+FFA) cycle activity. Indeed, these results show that administration of CDCA seems to be an attractive therapy to obesity and T2DM. However, a question still remains, what leads to a reduction in triglycerides (TG) accumulation? Based on our results CDCA up-regulates genes involved in β-oxidation and mitochondrial biogenesis, but there are no differences in fatty acid oxidation between control and cell exposed to CDCA. A possible explanation is that lipids are being exported to the medium. However this is an in vitro study, it would be interesting understand the destination of this lipids in vivo. Finally the possible occurrence of metabolic compartmentalization opens new perspectives in futures works. A obesidade é um dos principais problemas de saúde pública a nível mundial. A grande maioria da população obesa desenvolve patologias associadas que consequentemente levam à diminuição da esperança média de vida. Estas incluem diabetes tipo 2 (T2DM), aterosclerose, esteatose hepática, doenças cardiovasculares e ainda alguns tipos de cancro, Dado que as estratégias atuais são ainda pouco eficazes, no que se refere ao tratamento da obesidade, é urgente que se investiguem novas terapias, nomeadamente a modulação do tecido adiposo branco (WAT). No WAT, as vias metabólicas da glicose e dos lípidos convergem no ciclo dos glicerolípidos/ácidos gordos livres (TG/ (GL+FFA)), sendo este considerado um ciclo fútil dado que não gera produtos enquanto consome substratos energéticos. A diminuição da atividade deste ciclo em situações de obesidade e diabetes diminui a oxidação de substratos e aumenta o armazenamento de ácidos gordos (FFA) no WAT. Assim, a estimulação deste ciclo fútil surge como um potencial alvo terapêutico. Porém, a oxidação de substratos implica a estimulação simultânea do ciclo fútil e da função mitocondrial sendo que, até à data, não existe um mecanismo capaz de acoplar estes processos. O ácido quenodesoxicólico (CDCA) é um ácido biliar conhecido pelos seus efeitos anti-obesidade, no entanto, o seu mecanismo de ação é ainda controverso. O CDCA activa dois reguladores da transcrição de genes metabólicos envolvidos no ciclo TG/ (GL+FFA), na capacidade oxidativa mitocondrial e na β-oxidação, o PPARα e o PPARγ. Assim, a nossa hipótese propõe que o CDCA medeia o acoplamento do ciclo fútil com o gasto energético no WAT, aumentando simultaneamente as taxas de atividade do ciclo fútil e de oxidação mitocondrial de substratos. Este trabalho foca-se na avaliação das alterações metabólicas no ciclo TG/ (GL+FFA), na linha celular 3T3-L1, induzidas pelo CDCA. Especificamente, avaliou-se se a exposição ao CDCA altera a atividade deste ciclo, se essa alteração está relacionada com uma melhoria no perfil metabólico e ainda se o metabolismo mitocondrial está envolvido. As células expostas ao CDCA demonstraram uma diminuição na acumulação de lípidos e um aumento no conteúdo de proteína desacopladora-1 (UCP-1), o que por sua vez diminui a produção de espécies reactivas de oxigénio (ROS). Adicionalmente, a exposição ao CDCA induziu um aumento na gliceroneógenese, sugerindo, assim, um aumento na atividade do ciclo TG/ (GL+FFA). Dessa forma, a administração de CDCA parece ser uma estratégia terapêutica atrativa no combate à obesidade e à T2DM. No entanto, uma questão mantém-se, o que leva à redução da acumulação dos triglicerídeos (TG)? Com base nos resultados obtidos, o CDCA aumenta a expressão dos genes envolvidos na β-oxidação e na biogénese mitocondrial, mas não existem diferenças na oxidação dos FFA entre o controlo e as células expostas ao CDCA. Uma possível explicação é que os lípidos estejam a ser exportados para o meio. No entanto, este é um estudo in vitro, logo seria interessante perceber o destino destes lípidos in vivo. Finalmente a possível ocorrência de compartimentalização metabólica abre novas perspectivas para trabalhos futuros.

Mestrado em Biologia Aplicada As células estaminais embrionárias são caracterizadas pela sua capacidade de auto-renovação bem como pelo seu potencial de diferenciação em pluripotência. Estudos recentes demonstraram que as células estaminais pluripotentes possuem um baixo número de mitocôndrias e baixos níveis fosforilação oxidativa, utilizando preferencialmente a glicólise como fonte principal de ATP. Esta característica é partilhada com algumas células cancerígenas. O 3-bromopiruvato é um agente alquililante com efeitos antitumorais em vários modelos de tumores. Assim, o objectivo deste trabalho foi estudar o efeito do 3-bromopiruvato em células estaminais embrionárias de murganho. Para isso, foram usados estudos in vitro em células estaminais embrionárias de murganho (mESCs) para avaliar o efeito deste composto na pluripotência (através de marcadores como o Nanog e o Oct-4 e a fosfatase alcalina), na viabilidade e na actividade metabólica celular. Foi estudada a expressão das enzimas glicolíticas e a detecção do lactato extracelular bem como a actividade mitocondrial através da determinação do potencial membranar mitocondrial. Foram ainda quantificados os conteúdos em nucleótidos de adenosinas. Neste estudo, mostrou-se que o estado indiferenciado das células estaminais foi afectado sem no entanto perderem a viabilidade. Além disso, a glicólise e a mitocôndria pareceram também não ser afectadas com o tratamento de 3-bromopiruvato. Assim, apesar de afectar a pluripotência, o 3-bromopiruvato não afectou o metabolismo destas células pelo menos nos parâmetros analisados. Serão necessárias mais experiências para complementar este estudo de modo a perceber o efeito global do 3-bromopiruvato no metabolismo e pluripotência das células estaminais embrionárias de murganho. Embryonic stem cells are characterized by their ability for self-renewal and their differentiation potential in pluripotency. Recent studies demonstrated that undifferentiated pluripotent stem cells display a low number of mitochondria and lower levels of oxidative phosphorylation, and instead preferentially use glycolysis as a major source of ATP. This feature is shared with some cancer cells. 3-bromopyruvate is an alkylating agent with antitumor effects in several models of animal tumors. Thus, the aim of this work was to study the effect of 3-bromopyruvate in mouse embryonic stem cells. Therefore, in vitro studies using mouse embryonic stem cells (mESCs) were performed to assess the effect of this compound in pluripotency (by markers such as Nanog and Oct-4 and alkaline phosphatase), viability and metabolic activity of the cells. In metabolism it was studied the expression of glycolytic enzymes and the detection of extracellular lactate as well the mitochondrial activity by the detection of mitochondrial membrane potential. It was also studied and quantified the contents of adenosines nucleotides. In this study, it was shown that the undifferentiated state of stem cells decreased without losing viability of the cells. Also, glycolysis and mitochondria were not affected by the treatment. Thus, although it affected pluripotency, 3-bromopyruvate did not affect the metabolism of these cells at least in the parameters analysed. Importantly, many questions remain to be answered, so, additional experiments will be necessary to complement this work to better understand the global effect of 3-bromopyruvate in the metabolism and pluripotency of mouse embryonic stem cells.