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Se han evaluado algunos indicadores de calidad del fruto en líneas transgénicas de fresa con los genes de poligalacturonasa FaPG1 (líneas PG) o pectato liasa FaplC (líneas APEL) silenciados. Se analizaron dos líneas independientes por genotipo transgénico. No se observaron diferencias en el contenido de sólidos solubles entre las líneas transgénicas y el control. De igual forma, la acidez total y el pH fueron similares en las líneas PG29, APEL21 y el control; sin embargo, la acidez de los frutos de las líneas PG62 y APEL39 fue superior al control. Los parámetros de color L*, a* y b* fueron similares en todos los genotipos; sin embargo, el contenido en antocianos fue menor en la línea APEL21. Los valores más altos de firmeza de fruto, estimada mediante un ensayo de extrusión, se observaron en las dos líneas transgénicas PG y en la línea APEL39. En cuanto a las pérdidas por goteo (drip loss), la línea APEL39 presentó un valor mayor que el control, pero la línea APEL21 registró valores menores. El contenido de compuestos fenólicos se analizó en la línea PG29, no encontrándose diferencias estadísticas con respecto al control. Finalmente, la capacidad del fruto para captar radicales libres fue ligeramente menor en la línea PG29 que en el control. Los resultados indican que el silenciamiento de los genes de pectinasas incrementa significativamente la firmeza de la fresa sin modificar sustancialmente parámetros de calidad del fruto maduro como color, acidez, sólidos solubles o contenido en antocianos.

Título en inglés: New method for rapid selection of banana (Musa spp. AAA cv. Grande naine) plants with bar gene in the field using ammonium gluphosinate Resumen Los genes marcadores de la selección son ampliamente utilizados para la transformación eficiente de diferentes cultivos, sin embargo, existen muy pocas referencias sobre el desarrollo de métodos de selección temprana en campo de plantas supuestamente transformadas con marcador de selección tipo herbicidas. La presente investigación tuvo como objetivo evaluar el efecto del glufosinato de amonio a partir del herbicida Finale en los fragmentos de hojas de plantas de campo cultivados in vitro, para la selección de líneas transformadas de banano cv. Grande naine (Musa spp. AAA), con una construcción que porta como marcador de selección el gen bar. A partir del método desarrollado con el empleo de fragmentos de hojas de plantas procedentes de campo, cultivados in vitro en el medio de cultivo agar al 1% más agua y 30,0 g/l-1 de glufosinato de amonio se logró diferenciar las dos líneas transformadas del control no transformado, a partir de la expresión del gen bar. Ambas líneas fueron positivas en el análisis molecular de PCR. Estos resultados permiten disponer de una herramienta útil y simple como parte de un protocolo de transformación genética para el cultivo del banano, siendo el primer informe de este resultado a nivel internacional. Palabras clave: Musa; transformación genética; gen bar; glufosinato de amonio. Abstract Selector marker genes are widely used for the efficient transformation of different crops; however, there are very few references on the development of early selection methods in the fields of potentially transformed plants for herbicides. The objective of this research was to evaluate the effect of ammonium gluphosinate from the herbicide Finale in leaf fragments from in vitro plants grown in the fields for the selection of putative transformed lines of banana cv. Grande naine (Musa spp. AAA), with a construction that has the bar gene as the selector marker gene. Since the method developed with the use of leaf fragments from field plants culture in vitro in the agar at 1% more water and 30.0 gl-1 ammonium gluphosinate did differentiate the two transformed lines untransformed control, from the bar gene expression. Both lines were positive in the PCR molecular analysis. These results were a useful tool and form a part of a protocol of genetic transformation for banana, being the first reported result. Key words: Musa; genetic transformation; bar gene; ammonium gluphosinate.

Se evaluó y seleccionó una metodología para la transformación genética de la variedad de tomate UNAPAL-Arreboles con el gen cry1Ab para la incorporación de resistencia al cogollero (Tuta absoluta), utilizando el sistema de Agrobacterium. Se regeneraron 59 plantas transgénicas a partir de 3.200 explantes (1.84%). La integración estable, expresión y herencia de los genes nptII y gus-intrón, se demostraron mediante análisis histoquímico y molecular en los clones To28, To33 y To47 y en la correspondiente generación T1. Sin embargo, los análisis molecular e inmunológico indicaron ausencia del gen cry1Ab sugiriendo que la secuencia de este gen se puede haber modificado.

Se evaluó y seleccionó una metodología para la transformación genética de la variedad de tomate UNAPAL-Arreboles con el gen cry1Ab para la incorporación de resistencia al cogollero (Tuta absoluta), utilizando el sistema de Agrobacterium. Se regeneraron 59 plantas transgénicas a partir de 3.200 explantes (1.84%). La integración estable, expresión y herencia de los genes nptII y gus-intrón, se demostraron mediante análisis histoquímico y molecular en los clones To28, To33 y To47 y en la correspondiente generación T1. Sin embargo, los análisis molecular e inmunológico indicaron ausencia del gen cry1Ab sugiriendo que la secuencia de este gen se puede haber modificado.A plant transformation methodology was selected and evaluated to incorporate the cry1Ab gene by Agrobacterium-mediate genetic transformation into tomato variety UNAPAL-Arreboles for resistance to budworm (Tuta absoluta). A total of 59 transgenic plants were regenerated from 3.200 explants (1.84%). Histochemical gus assay and molecular analysis of three independent events To28, To33 and To47 and corresponding T1 derived generations, demonstrate the stable integration, expression and inheritance of the nptII and gus-intron genes. However, the molecular and immunological analysis of these same clones, indicate that the cry1Ab gene is not present in the transformed plants, suggesting that the sequence of this gene may be modified as result of possible recombinant events.

En el estudio se desarrolló una metodología de transformación genética mediante Agrobacterium tumefaciens en cultivares colombianos de caña de azúcar. La transformación se evaluó mediante la expresión del gen GUS. Callos embriogénicos y explantes meristemáticos de los genotipos CC85-92, CC84-75 y CC87-505 se transformaron usando tres cepas (AGL-1, LBA4404 y EHA105) con el plásmido pCambia 1305.2 y dos (EHA105 y LBA4404) con pCambia 2301. Se usó el medio de infiltración (IM) con acetosiringona y se evaluó el tiempo de cocultivo y la densidad óptica de la bacteria al momento de la inducción. Los genotipos mostraron respuesta diferencial con las combinaciones cepa-plásmido: obtuvieron mayor expresión del gen GUS cuando el genotipo CC85-92 se transformó con la cepa AGL-1-pCambia 1305.2. CC84-75 y CC87-505 mostraron mayor expresión cuando se transformaron con la cepa EHA105-pCambia 1305.2. Mayor eficiencia en la expresión se obtuvo cuando la bacteria se indujo en IM después de siete días de cocultivo y cuando la densidad óptica de la bacteria fue de 0.2(600nm) al momento de la inducción. Se demostró superioridad de los explantes en la eficiencia de transformación.The aim of the present study was to develop a transformation method mediated by Agrobacterium in Colombian cultivars of sugarcane. Transformation was evaluated in each step through transient GUS expression. Embryogenic calli and meristematic explants of CC85-92, CC84-75 y CC87-505 cultivars, were transformed using Agrobacterium tumefaciens AGL-1, LBA 4404 and EHA 105 strains, harboring pCambia 1305.2 plasmid. Furthermore, strains LBA 4404 and EHA 105 harboring pCambia 2301 were also tested. Bacterian activator medium, named infiltration media (IM) with acetosyringone was used. Co-cultivation time and bacteria optical density before induction were tested. Sugarcane cultivars evaluated showed differential response to different strain-plasmid combinations, obtaining higher GUS expression when CC85-92 was transformed using AGL-1 strain harboring the vector pCambia 1305.2. CC84-75 and CC87-505 cultivars showed higher GUS expression using EHA 105 strain harboring pCambia 1305.2 vector. The most efficient expression was evident after 7 days of co-cultivation and when bacteria optical density was 0.2(600nm) before induction in IM medium. This study demonstrated that meristematic explant is more suitable than embryogenic callus as a target to be transformed by Agrobacterium tumefaciens.

En el estudio se desarrolló una metodología de transformación genética mediante Agrobacterium tumefaciens en cultivares colombianos de caña de azúcar. La transformación se evaluó mediante la expresión del gen GUS. Callos embriogénicos y explantes meristemáticos de los genotipos CC85-92, CC84-75 y CC87-505 se transformaron usando tres cepas (AGL-1, LBA4404 y EHA105) con el plásmido pCambia 1305.2 y dos (EHA105 y LBA4404) con pCambia 2301. Se usó el medio de infiltración (IM) con acetosiringona y se evaluó el tiempo de cocultivo y la densidad óptica de la bacteria al momento de la inducción. Los genotipos mostraron respuesta diferencial con las combinaciones cepa-plásmido: obtuvieron mayor expresión del gen GUS cuando el genotipo CC85-92 se transformó con la cepa AGL-1-pCambia 1305.2. CC84-75 y CC87-505 mostraron mayor expresión cuando se transformaron con la cepa EHA105-pCambia 1305.2. Mayor eficiencia en la expresión se obtuvo cuando la bacteria se indujo en IM después de siete días de cocultivo y cuando la densidad óptica de la bacteria fue de 0.2600nm al momento de la inducción. Se demostró superioridad de los explantes en la eficiencia de transformación.

EI síndrome de la hoja amarilla es una enfermedad de la calla de azúcar que fue detectada en Colombia por primera vez en 1998. Cenicaña está tratando de lograr un control eficiente de la enfermedad utilizando diferentes herramientas pertenecientes a diversas áreas como entomología, patología, biología molecular y biotecnología. Dentro de estas dos últimas áreas, está contemplado el producir plantas transgénicas resistentes a la enfermedad. Con este fin se han bombardeado callos de la variedad CC 84-75 con parte del gen que codifica para la capside del virus causante de la enfermedad, el cual confiere resistencia contra el virus como se ha demostrado previamente. Un número total de 69 plantas han sido obtenidas después de bombardeo y selección con 50 mg/L de geneticina. Hasta ahora 12 plantas de un total de 19 plantas evaluadas han resultado positivas mediante la técnica de "Southern" después de hibridización, mostrando un fragmento de 0,45 Kb después de digestión del ADN total con Pst I. Las plantas que den positivas usando "Southern" serán posteriormente evaluadas mediante "Northern", y su resistencia contra el virus será evaluada en invernadero de bioseguridad.

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EI síndrome de la hoja amarilla es una enfermedad de la calla de azúcar que fue detectada en Colombia por primera vez en 1998. Cenicaña está tratando de lograr un control eficiente de la enfermedad utilizando diferentes herramientas pertenecientes a diversas áreas como entomología, patología, biología molecular y biotecnología. Dentro de estas dos últimas áreas, está contemplado el producir plantas transgénicas resistentes a la enfermedad. Con este fin se han bombardeado callos de la variedad CC 84-75 con parte del gen que codifica para la capside del virus causante de la enfermedad, el cual confiere resistencia contra el virus como se ha demostrado previamente. Un número total de 69 plantas han sido obtenidas después de bombardeo y selección con 50 mg/L de geneticina. Hasta ahora 12 plantas de un total de 19 plantas evaluadas han resultado positivas mediante la técnica de "Southern" después de hibridización, mostrando un fragmento de 0,45 Kb después de digestión del ADN total con Pst I. Las plantas que den positivas usando "Southern" serán posteriormente evaluadas mediante "Northern", y su resistencia contra el virus será evaluada en invernadero de bioseguridad.